heer, Wederom een uitgave van ons huisorgaan. P.S. Heeft U onze nieuwe website al gezien,

www.instruchemie.nl Jaargang 4, Nummer 7

Zomer 2012

Inhoudsopgave

Geachte mevrouw / heer,

Pagina 1 Voorwoord en PAOKC Driebergen

Wederom een uitgave van ons “huisorgaan”.

Pagina 2, 3 Vitamin B1 & B6 – HPLC - Eén mobiele fase - Isocratisch, fluorescentie - Retentietijden: Vit. B6 ca. 3 min Vit. B1 ca. 8 min Pagina 4 G-6PDH & Pyruvate Kinase - Achtergrond - Hemolyse - Methode & Procedure Pagina 5, 6 G-6-PDH - Enzymatisch - Automatiseerbaar - Calibrator en controles Pagina 7, 8 Pyruvate Kinase - Enzymatisch - Automatiseerbaar - Calibrator en controles Pagina 9 , 10 Maine Standards - ISO - 15189 - Lineairiteitscontroles - Automaten

Het accent in dit nummer ligt met name op onze succesvolle Vitamine B1 & B6 HPLC analyse. Een combi bepaling van G-6-PDH / PK blijkt een interessante diagnostische meerwaarde te hebben. FDA, USA verlangt middels rapportages inzake calibratie, lineairiteit en validatie dat het meetbereik van diagnostica wordt bewezen door gebruik te maken van 5 oplopende standaarden. Via ISO-15189 is dit ook nu in Europa vastgelegd. Ondanks dat deze norm nog niet veel in Nederland wordt toegepast, willen wij U onze mogelijkheden niet onthouden. 28 Juni a.s. staan wij met onze stand op de PAOKC ouderengeneeskunde in Driebergen. Als U ook gaat dan bent U bij deze van harte uitgenodigd ons te bezoeken. Wilt U over de vermelde onderwerpen nadere informatie dan horen wij dit graag. Met vriendelijke groet, Managing team Irenus Nieland Fons Nieland P.S. Heeft U onze nieuwe website al gezien, www.instruchemie.nl ?

Pagina 11, 12 Retour: Fax - Formulier.

INstruchemie Stand & Informatie INstruchemie

ISO-9001 / 13485 / CE

Tevens Custom Made Productie & Afvulling

Science without f(r)iction since 1979

Telephone Telefax E-mail Internet

(+31)(0)596 – 634 831 (+31)(0)596 – 634 755 [email protected] www.instruchemie.nl

INstruendum-ZOMER PAOKC EDITIE-2120617-1.FEN

Visiting address Zwet 26 9932 AB Delfzijl The Netherlands

ISO 9001 / 13485 / CE

Postal address P.O. Box 120 9930 AC Delfzijl The Netherlands

Pagina 1 van 8

www.instruchemie.nl VITAMIN B1 & B6 COMBI HPLC ANALYSE IN EDTA en/of HEPARINE VOLBLOED Productnaam

Product nr.

Hoeveelheid

Vitamin B1 & B6 Reagent Set

2996

50 – 70 testen

Vitamin B1 & B6 Direct Calibrator Vitamin B1 & B6 Control Low Level Vitamin B1 & B6 Control Normal Level Vitamin B1 & B6 Control High Level

3006 3018 3019 3020

1 x 2 ml 10 x 2 ml 10 x 2 ml 10 x 2 ml

NOTA BENE ! één mobiele fase één golflengte (Ex, Em)

EDTA of Heparine bloed

isocratische methode fluorescentie detectie primaire directe calibrator géén incubatietijden bij 60oC

Onteiwitting

Oxidatie vitamine B1

Derivatizatie vitamine B6

Mengen

Perfecte terugvinding van opgegeven B1&B6 concentraties in SKML en INstruchemie volbloed controles Uiterst gunstige prijs per test

HPLC injectie 1 x mobile fase

Kostenloze demonstratie inclusief reagentia, controles en kolom in Uw of ons laboratorium

B1 & B6 uitslagen

2500-3000 Vit. B1&B6 bepalingen per kolom Referentieadressen beschikbaar

Vraag meer informatie en/of testverpakking aan. Telephone Telefax E-mail Internet





Pagina 2 van 8

www.instruchemie.nl VITAMIN B1 & B6 COMBI HPLC ANALYSE IN EDTA en/of HEPARINE VOLBLOED MONSTERS: Volbloed patiëntenmonster met EDTA en/of Heparine ANALYTISCHE CONDITIES: Kolom Flow Snelheid Temperatuur Detectie Injectie volume Retentietijden Runtijden

: Gemini NX C18, 5 µm, 110A, 100 x 3 mm : 0.7 ml/min, Mobiele Fase o : 30 C : Fluorescentie (excitatie 370 nm, emissie 455 nm) : 25 µl : : Vitamine B6 (PLP) ca. 3 minuten : Vitamine B1 (TDP) ca. 8 minuten : Patiëntenmonsters ca. 10 minuten : INstruchemie controles ca. 10 minuten : SKML controles ca. 25 minuten Vitamin B1 & B6 Direct Calibrator, 3006 Vit. B1

Vit. B6

PLP-Vit B6 = 189 nmol / liter TDP-Vit B1 = 109 nmol / liter

Vit. B1

Vitamin B1 & B6 Control Normal Level, 3020 PLP-Vit B6 = 100 nmol / liter TDP-Vit B1 = 142 nmol / liter

Vit. B6






Pagina 3 van 8

www.instruchemie.nl G-6-PDH & PYRUVATE KINASE IN ERYTHROCYTES HAEMOLYSATE Productnaam

Product nr.

Hoeveelheid

G-6-PDH Reagent Set

2958

25 – 300 testen

Pyruvate Kinase Reagent Set

2926

25 – 300 testen

-

Een G-6-PDH deficiëntie komt naar schatting bij meer dan 400 miljoen mensen wereldwijd voor. In veel mindere mate een PK deficiëntie. Het ziektebeeld is wel heviger vanwege een voortdurende hemolyse waarbij een secundaire ijzerstapeling bedreigend is. INstruchemie levert enzymatische reagentia sets plus calibrator voor zowel Glucose-6-Phosphaat Dehyrogenase als Pyruvaat Kinase. De calibrator bevat ook beide parameters. In één hemolysaat kunnen beide bepalingen worden uitgevoerd. Stabiliteit van voorbewerkte patiëntenmonsters bedraagt 8 uur. Procedures voor analyseautomaten zijn beschikbaar. De G-6-PDH / PK ratio blijkt aanvullend een betrouwbare diagnostische parameter om deze deficiënties aan te tonen. EDTA of Heparine bloed

Hemolyse

Pyruvaat Kinase

G-6-PDH

Manuele en/of automatische procedure

Manuele en/of automatische procedure

Resultaten PK en/of G-6-PDH

G-6-PDH Reagent Set

Pyruvate Kinase Reagent Set






Pagina 4 van 8

www.instruchemie.nl G-6-PDH DETERMINATION OF GLUCOSE-6-PHOSPHATE DEHYDROGENASE IN ERYTHROCYTES HAEMOLYSATE - Enzymatic Method - For Manual and/or Automated Procedures - Instrument Application Sheets Available - Use erythrocytes - Also available: G-6-PDH Calibrator & Controls - Wavelength 340, 334, 365 nm - After preparing Haemolysate determine: G-6-PDH and PK in one sample Products

Product no.

G-6-PDH Reagent Set PK / G-6-PDH Calibrator G-6-PDH Control Deficient Level G-6-PDH Control Normal Level G-6-PDH Control High Level PK / G-6-PDH Digitonin Hemolyzing Reagent

2958 2971 2961 2963 2962 3028

Quantity 25 - 300 tests 1 x 500 µl 1 x 500 µl 1 x 500 µl 1 x 500 µl 1 x 60 ml

SUMMARY ASSAY PRINCIPLE

G-6-PDH G - 6 - P + NADP+     → 6 - PG + NADPH + H+ Maleimide, an inhibitor of 6-PGDH, is added to prevent the production of a second molar equivalent of NADPH by erythrocytes 6-PGDH according to the reaction: 6-PGDH 6 - PG + NADP +    → Ribulose - 5 - Phosphate + NADPH + H+ + CO2

SAMPLE MATERIAL Whole Blood, collected with EDTA, heparine or CPD (HAEMOLYSATE METHOD)

EXPECTED VALUES o Haemolysate: 4.2 – 6.9 Units/gram Hb at 30 C o Haemolysate: 6.4 – 10.4 Units/gram Hb at 37 C

LINEARITY Up to 4500 Units/liter. QUALITY CONTROL Products G-6-PDH Control Deficient Level G-6-PDH Control Normal Level G-6-PDH Control HighLevel

Product no. 2961 2963 2962

Quantity 1 x 500 µl 1 x 500 µl 1 x 500 µl

QUANTITY OF DETERMINATIONS According to product insert of G-6-PDH Reagent Set (2958): Procedure - Manual : 25 tests - Automated : 300 tests






Pagina 5 van 8

www.instruchemie.nl G-6-PDH - ACTIVITY MEASUREMENT

SENSITIVITY

The activities of a low, normal and high human hemolysate were measured with a spectrophotometer.

The sensitivity (limit of detection) was determined by measuring human control material (G6PDH activity = 0 U/l) 20 times.

G6PDH kinetic measurements

The formula used to calculate the sensitivity is:

Extinction

ΔExt./min.= 0.0491

Sensitivity = 3 x standard deviation = 3 x 9 = 27 U/l

ΔExt./min.= 0.0255

ΔExt./min.= 0.0040

LINEARITY

Time (min.)

RECOVERY

The G6PDH assay is linear up to 4500 U/l. G6PDH linearity measurements with an automatic analyzer

The recovery is determined by measuring the G6PDH activity in spiked human hemolysates 10 times using an automatic analyzer. Recovery:

PRECISION

The precision is determined by measuring G6PDH Control Normal Level and a human hemolysate 10 times a day (repeatability) for 5 consecutive days (reproducibility), using an automatic analyzer. Repeatability: Control (U/l)

Added G6PDH (U/l)

Measured (U/l)

Recovery (%)

551

562

102.0

1309

1295

98.9

2067

2026

98.0

CORRELATION

Pearsons’ correlation is determined by measuring the G6PDH activity in multiple human hemolysates with reagent of INstruchemie and reagent from another manufacturer. G6PDH (U/g Hb) Correlation measured with an automatic analyzer

Sample (U/g Hb)

Mean

1169

6.4

Standard deviation

25.6

0.10

Variation coefficient

2.2

1.6

Reproducibility: Control (U/l)

Sample (U/g Hb)

Mean

1115

6.4

Standard deviation

33.0

0.15


3.0

2.3

n = 10 r = 0.991 y = 1.2532x – 1.2707






Pagina 6 van 8

www.instruchemie.nl PYRUVATE KINASE DETERMINATION OF PYRUVATE KINASE IN SERUM / HEPARINIZED PLASMA OR ERYTHROCYTES HAEMOLYSATE - Enzymatic Method - For Manual and/or Automated Procedures - Instrument Application Sheets Available - Use erythrocytes, serum/heparinized plasma - Also available: PK Calibrator & Controls - Wavelength 340, 334, 365 nm - After preparing Haemolysate determine: PK and G-6-PDH in one sample Products

Product no.

Pyruvate Kinase Reagent Set PK / G-6-PDH Calibrator Pyruvate Kinase Control Deficient Level Pyruvate Kinase Control Normal Level Pyruvate Kinase Control HighLevel PK/G-6-PDH Digitonin Hemolyzing Reagent

2926 2971 2931 2932 2964 3028

Quantity 25 - 300 tests 1 x 500 µl 1 x 1 ml 1 x 1 ml 1 x 1 ml 1 x 60 ml

SUMMARY ASSAY PRINCIPLE PK ADP + PEP → ATP + Pyruvate LDH Pyruvate + NADH + H+   → L - Lactate + NAD+ SAMPLE MATERIAL Whole Blood, collected with EDTA, heparine or CPD (HAEMOLYSATE METHOD)

SAMPLE MATERIAL Serum or heparinized plasma.

EXPECTED VALUES o Haemolysate: 7.4 – 16.4 Units/gram Hb at 37 C. LINEARITY Up to 6000 Units/liter QUALITY CONTROL Products Pyruvate Kinase Control Deficient Level Pyruvate Kinase Control Normal Level Pyruvate Kinase Control HighLevel

Product no. 2931 2932 2964

Quantity 1 x 1 ml 1 x 1 ml 1 x 1 ml

QUANTITY OF DETERMINATIONS According to product insert of Pyruvate Kinase Reagent Set (2926): Procedure - Manual : 25 tests - Automated : 300 tests






Pagina 7 van 8

www.instruchemie.nl PK - ACTIVITY MEASUREMENT

SENSITIVITY

The activities of a low, normal and high human hemolysate are measured with a spectrophotometer.

The sensitivity (limit of detection) was determined by measuring human control material (PK activity = 0 U/l) 20 times.

PK kinetic measurements

The formula used to calculate the sensitivity is:

1.6

Sensitivity = 3 x standard deviation = 3 x 7 = 21 U/l

Extinction

1.5 ΔExt./min.= -0.0302

1.4 1.3

ΔExt./min.= -0.0865

1.2

ΔExt./min.= -0.0082

1.1 1.0 0

1

LINEARITY

2

3 Time (min.)

4

5

6

RECOVERY

The PK assay is linear up to 6000 U/l.

The recovery is determined by measuring the PK activity in multiple control materials 10 times using an automatic analyzer.

PK linearity measurements with an automatic analyzer

Recovery:

Measured (U/l) 501

Activity (U/l) 500

Recovery (%) 100

Normal

1587

1599

99

High

3714

3714

100

Deficient

PRECISION

The precision is determined by measuring PK Control Normal Level and a human hemolysate 10 times a day (repeatability) for 8 consecutive days (reproducibility), using an automatic analyzer. Repeatability: Control (U/l)

Sample (U/g Hb)

Mean

1599

17.8

Standard deviation

29.62

0.42


1.85

2.36

CORRELATION

Pearsons’ correlation is determined by measuring the PK activity in multiple human hemolysates with reagent of INstruchemie and reagent from another manufacturer. PK (U/g Hb) Correlation measured with an automatic analyzer

Reproducibility: Control (U/l)

Sample (U/g Hb)

Mean

1598

17.8

Standard deviation

23.32

0.58


1.46

3.26

n = 10 r = 0.984 y = 1.0274x + 0.0161






Pagina 8 van 8

heer, Wederom een uitgave van ons huisorgaan. P.S. Heeft U onze nieuwe website al gezien,

Recommend Documents