Hagyományos HPLC
Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 1
Elválasztás sík és térbeli ábrázolása
Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 2
Elválasztás elvi megoldásai
3 kromatográfiás technika:
• frontális
• kiszorításos
• elúciós Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 3
Kiszorításos technika minta diszkrét kolonnára •
mennyisége
jut
a
• beáll az egyensúlyi állapot • komponensek fajlagos szerint kötődnek meg
szorpciójuk
• ezután mindennél nagyobb fajlagos szorpciójú kiszorító anyaggal leszorítjuk a komponenseket (növekvő fajl. szorpciójuk szerint) Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 4
Elúciós technika • Mozgófázis pulzálásmentes áramoltatása • Minta felvitele (injektálás) impulzusszerűen • Lamináris eluensáram a mintát dugószerűen felviszi az kolonnára • Szorpciós-deszorpciós folyamatok
Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 5
Szorpció-deszorpció
Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 6
Állófázissal szemben támasztott követelmények • Mechanikai stabilitás • Kis szemcseméret • Kis szemcseméret-eloszlás • Energetikailag homogén felület
Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 7
Mozgófázissal szemben támasztott követelmények • D’Arcy egyenlet:
• • • • • • •
Lu p 2 dp
Kis viszkozitás Jó UV áteresztő képesség Szilárd szennyező-mentes oldószerek Nem túl illékony Nem toxikus Olcsó Polaritás, módszer specifikus Powerpoint Templates
You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 8
Csoportosítás • Normál fázisú (NP-HPLC) • Fordított fázisú (RP-HPLC) • Fordított fázisú ionpár (RP-IP-HPLC) • Ion kromatográfia (IC) • Ion kizárásos kromatográfia (IEC) • Méret kizárásos kromatográfia (SEC) Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 9
NP-HPLC: állófázisok OH
• Szilikagél alapú
Si
H
OH O
H
O
Si
Si
HO
O O
Si
OH Si
• Alumínium-oxid alapú • Módosított szilikagél alapú árnyékoló
Szilárd váz
kölcsönható
távtartó Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 10
NP-HPLC: mozgófázisok • Oldószerelegyek: apoláris, poláris
• Snyder-féle eluenserősség
R e t e n c i ó , s z e l e k ti v it á s
Alkánok Klórozott szénhidrogének Éterek Észterek Alkoholok Nitrilek Aminok Savak
E lu e n se rő ss é g, p ol ar it ás
Víz
Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Hexán, Heptán, Izooktán Dikórmetán, Diklóretán, Kloroform Diizopropil-éter, Diizobutiléter, MTBE, THF, Dioxán Metil-acetát, Etil-acetát Etanol, Izopropanol Acetonitril Trietil-amin, Butil-amin Ecetsav
Víz
Page 11
NP-HPLC: mozgófázisok • Alap oldószerek: – alkánok: hexán, heptán, izooktán
• Oldhatóságot növelő oldószerek: – Diklórmetán, diklóretán, kloroform
• Módosítószerek (modifikátorok) – Lokalizáltan (erős H-hidas) – Nem lokalizáltan adszorbeálódó (gyenge H-híd kölcsönhatás, mintakomponens kiszoríthatja őket a felületről) Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 12
RP-HPLC: állófázisok • Monomer módosítás:
O
O Si OH
Si OH
CH3
O
-HCl Si OH
+
Cl
O
C18H37
Si
O
CH3
Si
O
Si
C18H37
O Si OH
CH3
Si OH
CH3
• Átmeneti módosítás • Polimer módosítás Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 13
RP-HPLC: állófázisok • pH tűrés
H+
szilárd
CH2
Si hidrolízis sebesség
O Si R oldhatóság
CH
alsó pH határ 1
felsõ pH határ 2 ................ 7
8
9 ................ 14
Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 14
RP-HPLC: állófázisok • Egyéb töltetek: – – – – – –
Szén alapú Szerves polimer alapú Alumínium-oxid alapú Kapszulázott töltetek Titán-oxid alapú Cirkónium-oxid alapú
Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 15
RP-HPLC: mozgófázisok víz<metanol
Page 16
RP-HPLC: mozgófázisok Pufferek használata: • Ionos vagy könnyen ionizálható vegyületek vizsgálata esetén az előnytelen erős kölcsönhatások kiküszöbölésére • Pufferelt mozgófázisok alkalmazásának speciális területe az RP-IP-HPLC • Követelmények: – – – – –
Detektálásnál ne legyen probléma, (kis UV cut-off) Adott mérési körülmények között nagy pufferkapacitás Szilárdanyag mentesség (szűrés) Lehető legtisztább puffer Pufferkompatibilitás: nagy szervesanyag-tartalomnál ne váljon ki Powerpoint Templates
You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 17
Műszerezettség
1. Nagynyomású szivattyú 2. Mintaadagoló 3. Kolonna
4. Detektor 5. Vezérlőegység 6. Adatfeldolgozó
Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 18
Műszerezettség: Mozgófázis • • • • • • • •
Kis viszkozitás Jó UV áteresztő képesség Szilárd szennyező-mentes oldószerek Nem túl illékony Nem toxikus Olcsó Oxigén mentes Polaritás, módszer specifikus
Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 19
Műszerezettség: Nagynyomású szivattyú • Kb. 400 bar nyomásesés ellenében 0,0110ml/min pulzálásmentes áramlás biztosítása • Korrózió állóság • Működtetés és szabályozás számítógép által
Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 20
Műszerezettség: 3. mintaadagoló és kolonna
• Mintaadagolás: 6 ágú csappal
• Kolonna: – Analitikai – Preparatív – Sub-2µm
Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 21
Műszerezettség: 4. detektor • UV, UV-VIS, DAD • Fluoreszcens • Elektrokémiai (amperometriás, kulometriás) • Vezetőképességi detektorok • Törésmutató különbség mérésén (RI) • Kapcsolt technikák (MS, ELSD) Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 22
Műszerezettség: 4. detektor UV/VIS
Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 23
Műszerezettség: 4. detektor DAD
Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 24
Műszerezettség: 4. detektor DAD 0.050 0.040 0.030 0.020 0.010
-0.010
AU
0.000
-0.020 -0.030 -0.040 -0.050 -0.060 -0.070
250.00 300.00
0.50
1.00
1.50
2.00
2.50
3.00
3.50
4.00
4.50
5.00
Minutes
Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 25
Műszerezettség: 4. detektor DAD AU
280.00 260.00
0.040
239.7 244.4 239.7
0.030
244.4
0.050
240.00
2.94
2.96
2.98
3.00 Minutes
3.02
3.04
3.06
AU
220.00
0.020
334.8 320.4 339.5 310.9 325.2
0.010
triamcinolone - 2.996
0.04 AU
0.000
0.02
0.00 2.94
2.96
2.98
3.00 Minutes
220.00
3.02
3.04
240.00
260.00
280.00 nm
300.00
320.00
340.00
3.06
Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 26
Műszerezettség: 4. detektor Fluoreszcens
Powerpoint Templates You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)
Page 27
