GYÓGYSZERÁRTALMAK GYÓGYSZERBIZTONSÁG
ELİADÓ DR. LEHEL JÓZSEF
GYÓGYSZERBIZTONSÁG GYÓGYSZERVIZSGÁLATOK GYÓGYSZERFEJLESZTÉS ÚJ ANYAG
MINİSÉG
PREKLINIKAI ÁRTALMATLANSÁG KÖRNYEZETBIZTONSÁG HATÉKONYSÁG KÉMIAI BIZTONSÁG
GYÓGYSZERBIZTONSÁG GYÓGYSZERVIZSGÁLATOK GYÓGYSZERFEJLESZTÉS
KÖLCSÖNÖS ELFOGADÁS Azonos szakmai szabályok toxikológiai, farmakológia, farmakokinetikai, környezetvédelmi GLP, ISO
Azonos vizsgálómódszerek OECD, EU, EPA, CFR, (V)ICH
GYÓGYSZERBIZTONSÁG GYÓGYSZERVIZSGÁLATOK GYÓGYSZERFEJLESZTÉS Azonos szakmai szabályok GLP= Good Laboratory Practice (Helyes Laboratóriumi Gyakorlat) ISO= International Organization for Standardization (Nemzetközi Szabványügyi Szervezet)
GYÓGYSZERBIZTONSÁG GYÓGYSZERVIZSGÁLATOK GYÓGYSZERFEJLESZTÉS Tesztelési irányelvek OECD= Organisation for Economical Cooperation and Development (Gazdasági és Fejlesztési Együttmőködési Szervezet) EU-Eudralex EPA= Environmental Protection Agency (Környezetvédelmi Hivatal) CFR= Code of Federal Regulations (9-Animals and Animal Products) (V)ICH= International Cooperation on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Veterinary Medicinal Products
PREKLINIKAI VIZSGÁLATOK FARMAKOLÓGIAI VIZSGÁLATOK TOXIKOLÓGIAI VIZSGÁLATOK ÁLTALÁNOS TOXIKOLÓGIA SPECIÁLIS TOXIKOLÓGIA Szaporodásbiológiai-toxikológia Mutagenitás Karcinogenitás
BIZTONSÁGFARMAKOLÓGIAI VIZSGÁLATOK GYÓGYSZERBIZTONSÁGI VIZSGÁLATOK CÉLÁLLAT-BIZTONSÁG HUMÁN FOGYASZTÓ ALKALMAZÓ KÖRNYEZET-TOXIKOLÓGIA
PREKLINIKAI VIZSGÁLATOK FARMAKOLÓGIAI VIZSGÁLATOK Fı farmakológiai hatás egyéb szervrendszer KIR (magatartás, motoros aktivitás, görcskészség fájdalomcsillapítás, izomrelaxáns) szív/keringés (vérnyomás, frekvencia, arrythmia, alvadás) légzés (frekvencia, térfogat, köhögéscsillapítás) GI (motilitás, fekélyképzıdés) vese (vizeletmennyiség, ionkiválasztás) Vizsgálat: baktérium, állatmodell, izolált szerv számítógépes modell
Hatásmechanizmus
PREKLINIKAI VIZSGÁLATOK TOXIKOLÓGIAI VIZSGÁLATOK
EGÉSZSÉGKÁROSÍTÓ HATÁSOK akut félheveny (szubakut, szubkrónikus) krónikus (+ mutagenitás, karcinogenitás, reprodukciós)
AKUT TOXICITÁSI VIZSGÁLATOK toxicitás meghatározás, dózisfüggı toxikus hatások/mértéke célszerv azonosítása toxicitás összehasonlítása már ismert toxicitású anyagokkal megbecsülni a legkisebb letális vagy legnagyobb még nem letális dózist veszélyesség becslése célállat/egyéb fajokra adatgyőjtés – kockázat (baleset, környezeti katasztrófa) segítségnyújtás a klinikusoknak (mérgezés felismerése, kezelése) dóziskeresés ismételt adagolású kísérletekhez
AKUT TOXICITÁSI VIZSGÁLATOK Klasszikus akut LD50 meghatározása (OECD 401) Állatfaj/ Állatszám
egér, patkány/ 5-10/ivar/csoport
Beadási mód
p.o./dermális/iv./ip./sc./inhalációs (LC)
Gyakoriság
1x vagy többször-24h
Dózis
logaritmikus (3) + 1, limitteszt
Utómegfigyelés
14 nap
Vizsgált paraméterek
klinikai tünet/elhullás/kórbonctan (+? szövettan)
Akut toxikológiai osztályba sorolási módszer (OECD 423) Állatfaj/ Állatszám
patkány (egér)/ 3/ivar/dózis
Beadási mód
p.o.
Gyakoriság
1x
Dózis
25, 200, 2000
Utómegfigyelés
7-14 nap
Vizsgált paraméterek
klinikai tünet/elhullás/kórbonctan (+? szövettan)
AKUT TOXICITÁSI VIZSGÁLATOK Rögzített dózis módszer (OECD 420) Állatfaj/ Állatszám Beadási mód Gyakoriság Dózis Utómegfigyelés Vizsgált paraméterek
patkány/ 3/ivar/dózis p.o. 1x 5, 50, 500, 2000 7-14 nap klinikai tünet/elhullás/kórbonctan (+? szövettan)
Akut toxikológiai osztályba sorolási módszer (OECD 423) Dózis-lépték módszer (Dose Escalation Method) Fel-le lépcsıs módszer (Up-and-Down Method) Az Angol toxikológiai társaság protokollja (The British Society of Toxicology Protocol) Mennyiségi szerkezet-hatás összefüggés (Quantitative Structure-Activity Relationship - QSAR)
AKUT TOXICITÁSI VIZSGÁLATOK - IRRITÁCIÓ Akut dermális irritáció/korrózió (OECD 404) Állatfaj/ Állatszám
albínó nyúl/ 1-3
Beadási mód
sértetlen bır
Gyakoriság
4 óra
Dózis
0,5 ml/g
Utómegfigyelés
72 óra
Vizsgált paraméterek
erythema, ödéma, varr képzıdés-hegesedés
Akut szem irritáció/korrózió (OECD 405) Állatfaj/ Állatszám
albínó nyúl/ 1-3
Beadási mód
kötıhártyazsák
Gyakoriság
1x, 24 óra hosszan
Dózis
0,1 ml/g
Utómegfigyelés
72 óra
Vizsgált paraméterek
erythema, ödéma, váladékképzıdés
AKUT TOXICITÁS – LOKÁLIS TOLERANCIA Szem - Bır tolerancia vizsgálat Állatfaj/ Állatszám
albínó nyúl/ 1-3
Beadási mód
Kötıhártyazsák, sértetlen/skarifikált bır
Gyakoriság
akut-1x, ismételt-28x
Utómegfigyelés
akut-72 óra
Vizsgált paraméterek
erythema, ödéma, varr képzıdés-hegesedés, váladék
Érkárosító hatás vizsgálata Izomkárosító hatás vizsgálata Bıralatti szövetek károsításának vizsgálata Állatfaj/ Állatszám
patkány, nyúl, egyéb
Beadási mód
iv.-parav.-ia./im./sc.
Gyakoriság
akut-1x, ismételt-7x (1x/nap)
Utómegfigyelés
48-96 h
Vizsgált paraméterek
helyi elváltozás
AKUT TOXICITÁS – LOKÁLIS TOLERANCIA Nyálkahártya károsító hatás vizsgálata (végbél, hüvely) Nyálkahártya túlérzékenység vizsgálata (végbél, hüvely) OECD 406 Állatfaj Beadási mód Gyakoriság Vizsgált paraméterek
patkány, nyúl, kutya tengerimalac rektális, intravaginális naponta 1-2x, 7 nap oltás + helyi kezelés (2-22 nap) helyi elváltozás
AKUT TOXICITÁS – ALTERNATÍV MÓDSZEREK SZEMKÁROSÍTÓ HATÁS • • • • •
Bovine isolated cornea test Neutral red cytotoxicity assay Red blood cell lysis and protein denaturation EYTEX HET-CAM test
BİRIRRITÁCIÓ Cytotoxicitás • Neutral red cytotoxicity assay • MTT assay • Sejtmembrán integritás kolorimetriás meghatározása Keratinizáció és rétegzıdı epithelium modell • Keratinizációs szint meghatározása (rhodamin B festék) • Sejtproliferáció-citotoxicitás vizsgálata (níluskék) • Rétegzıdés mértékének meghatározása
ISMÉTELT ADAGOLÁSÚ TOXICITÁSI VIZSGÁLATOK
Dózisfüggı kóros elváltozások terápiai adag ismételt adagolás kumulációs tulajdonság FÉLHEVENY (szubakut, szubkrónikus)
Szubakut – rövid idıtartamú (14/28) (OECD 407) Szubkrónikus – 90 nap (OECD 408, 409) Bırtoxicitás (OECD 410) Bır túlérzékenység (OECD 406)
ISMÉTELT ADAGOLÁSÚ TOXICITÁSI VIZSGÁLATOK KRÓNIKUS (+TMC) Krónikus toxicitás (OECD 452) Kombinált krónikus és karcinogenitás (OECD 453)
Szaporodásbiológiai-toxicitás Egy vagy több generációs (OECD 415, 416) Teratológia (OECD 414) Peri- és posztnatális
Mutagenitás/karcinogenitás Mikroorganizmus Emlıs sejttenyészet Kísérleti állatok
FÉLHEVENY TOXICITÁSI VIZSGÁLATOK Szubakut - Rövid idıtartamú (OECD 407) Állatfaj/ Állatszám
patkány (kutya, nyúl)/ 5-10/ivar/csoport
Beadási mód
p.o./parenterális
Gyakoriság
1x, 14/28 napig
Dózis
3+1
Utómegfigyelés
7/14 nap
Vizsgált paraméterek
klinikai tünet, elhullás, testtömeg, takarmány /ivóvízfogyasztás, hematológia, kórboncolás, kórszövettan
Szubkrónikus (OECD 408-patkány, 409-kutya, nyúl) Állatfaj/ Állatszám
patkány/kutya (nyúl)/ 5-10/ivar/csoport
Gyakoriság
1x, 90 napig
Utómegfigyelés
28 nap
Vizsgált paraméterek
ua
FÉLHEVENY TOXICITÁSI VIZSGÁLATOK Bır toxicitási vizsgálat (OECD 410) Állatfaj/ Állatszám
patkány, nyúl, tengerimalac/ 5/ivar/csoport
Beadási mód
sértetlen bır
Gyakoriság
21/28x, naponta 6 órán át
Dózis
3+1
Utómegfigyelés
14 nap
Vizsgált paraméterek
klinikai tünet, elhullás, testtömeg, takarmány /ivóvízfogyasztás, hematológia, kórboncolás, kórszövettan
Bır túlérzékenységi vizsgálat (OECD 406) Állatfaj
albínó tengerimalac
Gyakoriság
20-22 nap
Utómegfigyelés
28 nap
Vizsgált paraméterek
ua. (helyi reakció)
KRÓNIKUS TOXICITÁSI VIZSGÁLATOK Krónikus toxicitás vizsgálata (OECD 452) Állatfaj/ Állatszám Beadási mód
1 rágcsáló (patkány) + 1 nem rágcsáló (kutya) 20/ivar/csoport (kutya 4) p.o./parenterálisan
Gyakoriság
1x, 6-12 hónap
Dózis
3+1
Utómegfigyelés
1-2 hónap
Vizsgált paraméterek
klinikai tünet, elhullás, takarmány /ivóvízfogyasztás, testtömeg, hematológia, kórbonctan, kórszövettan
Kombinált krónikus és karcinogenitási vizsgálat Állatfaj/ Állatszám
egér (hörcsög), patkány/ 50/ivar/csoport
Beadási mód
p.o. (tak/víz/szonda), dermális, inhaláció
Gyakoriság
1x, 18 hónap (egér), 24 hónap (patkány)
Dózis
3+1
Vizsgált paraméterek
ua. + daganatos elváltozások
TERATOGENITÁS TERATOLÓGIAI VIZSGÁLATOK RENDSZERE I. EGY (TÖBB) GENERÁCIÓS VIZSGÁLAT
TERATOGENITÁS TERATOLÓGIAI VIZSGÁLATOK RENDSZERE II. TERATOLÓGIAI VIZSGÁLAT
TERATOGENITÁS TERATOLÓGIAI VIZSGÁLATOK RENDSZERE III. PERI- és POSTNATÁLIS VIZSGÁLAT
MUTAGENITÁS VIZSGÁLÓMÓDSZEREK Tesztrendszer
Génmutáció Kromoszóma-károsodás szerkezeti számszerő
MIKROORGANIZMUS
Salmonella typhimurium Escherichia coli
+ +
EMLİS SEJTTENYÉSZET
+
+
KÍSÉRLETI ÁLLATOK
Mikronukleusz teszt Csontvelı citogenetika Domináns letális teszt Drosophila teszt
+
+ +
+
+ +
+ +
PREKLINIKAI VIZSGÁLATOK BIZTONSÁGFARMAKOLÓGIAI VIZSGÁLATOK
nem várt funkcionális mellékhatások MH mentes max. terápiás dózis adag: provokatív (0,1 LD50, min. terápiás dózis 100x, max terápiás dózis 5-10x) beadási mód: végleges tesztrendszer: állat-biológiai modell vizsgált paraméter: általános farmakológia
PREKLINIKAI VIZSGÁLATOK GYÓGYSZERBIZTONSÁGI VIZSGÁLATOK
CÉLÁLLAT-BZTONSÁGI HUMÁN FOGYASZTÓ ALKALMAZÓ SZEMÉLY KÖRNYEZET-TOXIKOLÓGIA
GYÓGYSZERBIZTONSÁGI VIZSGÁLATOK CÉLÁLLAT-BIZTONSÁGI Toxikológiai vizsgálatok laborállat potenciális célszerv funkcionális elváltozások azonos alapelvek több állatfaj – legérzékenyebb célállat faj/fajta végleges, forgalomba hozandó termék + beadási mód
GYÓGYSZERBIZTONSÁGI VIZSGÁLATOK CÉLÁLLAT-BIZTONSÁGI Célállat-tolerancia adag: 3x, 5x, 10x terápiai dózis kezelés: ≤ 14 nap alkalmazás – tervezett max idıtartam ≥ 15 nap alkalmazás – legalább 21 napig
vizsgált paraméter: általános fizikai vizsgálat hematológia, enzimkémia, vizelet, bélsár
GYÓGYSZERBIZTONSÁGI VIZSGÁLATOK CÉLÁLLAT-BIZTONSÁGI Általános toxikológiai vizsgálat adag: 1x, 3x, 5x terápiai dózis kezelés: ≤ 14 nap alkalmazás – 3x idıtartam ≥ 15 nap alkalmazás – min 6 hét
vizsgált paraméter: ua. (tolerancia)
Szaporodásbiológiai toxicitás Szövetirritációs vizsgálat Lokáltolerancia
GYÓGYSZERBIZTONSÁGI VIZSGÁLATOK HUMÁN FOGYASZTÓ „Gyógyszermentes” élelmiszer - MRL 1. végleges MRL-érték 2. MRL Ø 3. ideiglenes MRL-érték 4. élelmiszer-termelı Ø
GYÓGYSZERBIZTONSÁGI VIZSGÁLATOK HUMÁN FOGYASZTÓ Farmakokinetika felszívódás-eloszlás- metabolizmus-kiválasztódás plazmafehérje-szöveti kötıdés, metabolit Maradványanyag legnagyobb adag, gyakoriság, idıtartam minta: máj, vese, izom, bır + zsír (+ tej, tojás) kémiai meghatározás (+ többszöri mintavétel)
Élelmezés-egészségügyi várakozási idı
GYÓGYSZERBIZTONSÁGI VIZSGÁLATOK ALKALMAZÓ SZEMÉLY Gyártás – felhasználás - alkalmazás laborállat inhalációs bır-szemirritációs dermális
GYÓGYSZERBIZTONSÁGI VIZSGÁLATOK KÖRNYEZET-TOXIKOLÓGIA Környezeti expozíció megítélése
állatfaj – használati mód (tömeg/egyedi kezelés) kezelési mód (fürösztı oldat, pour-on, permet) salakanyag hatóanyag tartalma fel nem használt készítmény kezelése (égetés, fertıtlenítés)
GYÓGYSZERBIZTONSÁGI VIZSGÁLATOK KÖRNYEZET-TOXIKOLÓGIA Környezetkárosító hatás Sorsa/viselkedése talajban/vízben/levegıben Speciális környezetvédelmi vizsgálatok (OECD 300) Hatóanyag-koncentráció csökkenése és metabolizmusa talajban Hasznos mikroorganizmusokra gyakorolt hatás Hatóanyag elmozdulása a talajban Hatóanyag adszorpciója, deszorpciója talajon vagy felszíni víz üledékében Koncentráció-csökkenés vízben
GYÓGYSZERBIZTONSÁGI VIZSGÁLATOK KÖRNYEZET-TOXIKOLÓGIA Környezetkárosító hatás Sorsa/viselkedése talajban/vízben/levegıben Ökoszisztéma vizsgálatok (EPA) Növényi: békalencse, hínár (EPA 850.4400) Állat: vízibolha, víziászka, mocsári csiga Ökoszisztémák (EPA 850.1925, 850.1900) édesvízi mikrokozmosz teszt 10 alga, 110 protozoon, 30 phylodina, 16 daphnia 6 kagylós rák, 12 felemáslábú rák metcalf teszt alga, plankton, csiga, szúnyoglárva, hal, hernyó, cirok, homok
GYÓGYSZERBIZTONSÁGI VIZSGÁLATOK KÖRNYEZET-TOXIKOLÓGIA Környezetkárosító hatás Hatás a környezet élılényeire Vadtoxikológia Méhtoxikológia Giliszta toxikológia Vízi élılények toxikológiája
GYÓGYSZERBIZTONSÁGI VIZSGÁLATOK KÖRNYEZET-TOXIKOLÓGIA VADTOXIKOLÓGIA
Orális LD50 japánfürj/fácán és tıkés réce japánfürj/fácán és tıkés réce Etetéses LC50 Elfogadási/elutasítási japánfürj/fácán és tıkés réce Egy generációs reprodukciós japánfürj/fácán és tıkés réce Modellüzemi toxicitási fácán és tıkés réce Szabadföldi toxicitási vizsgált területen élı madarak és emlısök (orális ALD mezei nyúl)
Akut orális toxicitás madáron A kísérlet elrendezése • Legalább 5 dózis + 1 kontroll • 10 madár/dózis A vizsgálat fázisai • Akklimatizáció: 2 hét • Kezelés: egyszer, per os • Utómegfigyelés: 2 hét Vizsgált paraméterek • Tünetek • Mortalitás • Takarmányfogyasztás • Testtömeg • Kórbonclelet Eredmények LD50, NOEL értékek
Etetési teszt madáron A kísérlet elrendezése • Legalább 5 koncentráció + 1 kontroll • 10 madár(fiatalok)/koncentráció A vizsgálat fázisai • Akklimatizáció: 2-3 nap • Expozíció: 5 nap (preparált takarmány) • Utómegfigyelés: 3 nap Vizsgált paraméterek • Tünetek • Mortalitás • Takarmányfogyasztás • Testtömeg • Kórbonclelet Eredmények LC50, NOEC értékek
Elkerülési (elutasítás) teszt madáron egyféle takarmány – választásos (etetı edény, kiszórás) expozíció ideje: 1 nap-1 hét éheztetett állat elfogadja-e, választja-e vagy visszautasítja a kontaminálódott takarmányt Vizsgált paraméter: klinikai tünetek takarmányfogyasztás
Egy generációs reprodukciós teszt A kísérlet elrendezése • Legalább 3 koncentráció + 1 kontroll • 36 állat/koncentráció A vizsgálat fázisai • Akklimatizáció: 2 hét • Expozíció: 6 (20) hét (preparált takarmány) • Utómegfigyelés: 2 hét • Utód megfigyelés: 2 hét Vizsgált paraméterek • Tünetek • Mortalitás • Takarmányfogyasztás • Testtömeg • Kórbonclelet • Reprodukciós paraméterek (tojás paraméterek, utódok) Eredmény NOEC érték
Modell üzemi vizsgálat madáron Ketrecenkénti állatszám: • fürj: 8 pár • Fácán: 3 hím és 15 tojó • Tıkés réce: 3 hím és 9 tojó A vizsgálat fázisai • Elımegfigyelés: legalább 14 nap • Kezelés/expozíció: vizsgálati céltól függ • Utómegfigyelés: legalább 21 nap Vizsgált paraméterek • Tünetek és viselkedés • Mortalitás • Testtömeg (heti mérés) • Takarmányfogyasztás, levélcsipkedés • Kórbonclelet • Szövettan vizsgálati céltól függıen Eredmények Félszabadföldi körülmények között, megfigyelhetı letális és/vagy szubletális hatások, repellencia
A vizsgálat kivitelezése Az állatokat szabadban, talajra helyezett ketrecekben tartjuk, a vizsgálati célnak megfelelı növényzeten. A ketrecek száma legkevesebb 3 kezelt + 3 kontroll. A ketrecek alapterülete legkevesebb 50 m2.
Szabadföldi vizsgálat Kísérleti állatok A vizsgálati területen és annak közvetlen közelében élı, a területet rendszeresen, vagy alkalmilag látogató, madarak és emlısök.
GYÓGYSZERBIZTONSÁGI VIZSGÁLATOK KÖRNYEZET-TOXIKOLÓGIA MÉHTOXIKOLÓGIA
Orális és kontakt LD50 Kontakt maradék toxicitási Reprodukciós (méhcsalád) Modellüzemi toxicitási Szabadföldi toxicitási
mézelı méh mézelı méh mézelı méh mézelı méh mézelı méh
Orális és kontakt LD50 Kontakt maradék toxicitási
Reprodukciós (méhcsalád)
Kezelés permetezéssel modell üzemi vizsgálatban
GYÓGYSZERBIZTONSÁGI VIZSGÁLATOK KÖRNYEZET-TOXIKOLÓGIA GILISZTATOXIKOLÓGIA LC50 vizsgálat vörös trágyagiliszta (szőrıpapír, mesterséges talaj) Reprodukciós vörös trágyagiliszta
GYÓGYSZERBIZTONSÁGI VIZSGÁLATOK KÖRNYEZET-TOXIKOLÓGIA VÍZI ÉLİLÉNYEK TOXIKOLÓGIÁJA
Akut halteszt Idült halteszt Krónikus toxicitás fiatal halon Korai életszakasz toxicitás Biokoncentrációs teszt halon Daphnia immobilizációs teszt Daphnia reprodukciós teszt Alga növekedés-gátlási teszt
pisztráng, ponty pisztráng, ponty pisztráng, zebra/rizshal pisztráng, zebra/rizshal ponty Daphnia magna Daphnia magna alga
GYÓGYSZERBIZTONSÁGI VIZSGÁLATOK
KLINIKAI VIZSGÁLATOK gyakorlati kipróbálás – hatályos rendelet NEMKÍVÁNATOS HATÁSOK NYOMONKÖVETÉSE (PHARMACOVIGILANCE)
helyes – helytelen használat (3-5 év) hatályos rendelet - ÁTI
