Experimentáln navozená anafylaktická reakce u pokusného zví ete
Imunitní systém • Schopnost rozpoznat • Orgány imunitního systému cizí ástice od vlastních a reagovat - centrální (kostní d , proti nim brzlík) - periferní (lymfatické • Základní funkce – Obranyschopnost
(odpov organismu na ohrožení)
– Homeostáza (
odstra ování starých a poškozených bun k udržení strukturální a funk ní integrity)
uzliny, slezina, mimouzlinová lymfatická tká )
Bu ky imunitního systému
Složky imunitního systému • B-lymfocyty
– tvorba protilátek (Ig)- 5 t íd (IgG, IgA, IgE, IgM, IgD)
• T-lymfocyty
– p ímá likvidace bun k napadených mikroorganismy – regulace funkce ostatních bun k
• Fagocyty
– specializované bu ky schopné pohlcovat a ni it cizí ástice - polymorfonukleáry (neutrofilní granulocyty) - monocyty
• Komplement – – – –
kaskáda bílkovin vedoucí k rozpadu bu ky p ivolání dalších bun k ozna ení patogen pro fagocytózu aktivace a degranulace mastocyt
Reakce imunitního systému • Fyziologické - obranná reakce = zán t
(soubor reakcí tkání na patogenní podn t s cílem odstranit p inu, poškozené tkán a obnovení p vodního stavu) Akutní zán t
• Patologické – autoagresivní reakce - chronický zán t - alergie, autoimunitní reakce - odhojení transplantované tkán
Poruchy imunitního systému • Imunodeficity - neschopnost fyziologické imunitní reakce - snížená obranyschopnost - primární (deficit n které ze složek imunitního systému) - sekundární (infekce HIV, chronické infekce, ozá ení, chemoterapie,
nádory,..)
• Reakce p ecitliv losti (hypersenzitivita) - alergie - chronické zán ty - autoimunitní nemoci
Základní pojmy k hypersenzitivním reakcím • Hypersenzitivita
– nadm rná,nep im aktivace imunitního systému
ená
• Alergie –
neadekvátn zvýšená reakce na ur itý antigen (alergen) z prost edí
• Anafylaxe (Anafylaktický šok) – generalizovaná,
život ohrožující reakce se sou asným postižením více orgánových systém .
• Atopie
– vrozená dispozice k rozvoji hypersenzitivní reakce I.typu
Klasifikace hypersenzitivních reakcí (dle Gella a Coombse) • Typ I –
asná/okamžitá reakce, zprost edkovaná protilátkami typu IgE
• Typ II
– cytotoxická reakce, primárn zprost edkovaná IgG nebo IgM a komplementem
• Typ III (IgG/IgM)
• Typ IV
– zprost edkovaná imunokomplexy
– pozdní, bu kami zprost edkovaná
• Typ V – zprost
edkovaná antireceptorovými protilátkami
Hypersenzitivita II. typu •
Cytotoxická, zprost edkovaná protilátkami typu IgG nebo IgM proti antigen m na povrchu bun né membrány destrukce bu ky
1.
Komplementem zprost edkovaná destrukce bun k fagocytóza Imunoglobuliny zprost edkovaná (ADCC)
2.
cytolýza,
- Antigen – p irozená sou ást b.membrány (cizorodá bu ka) x cizorodá bílkovina na povrchu b.membrány (virový protein) - endogenní antigeny i exogenní chemické látky (léky) - reakce po aplikaci n kterých lék (p . hemolytická anemie, trombocytopenie, granulocytopenie)
Hypersenzitivita III.typu • tvorba imunokomplex (Ag-Ig) – IgG n. IgM proti rozpustným antigen m • cirkulace v ob hu • p irozená fagocytóza (makrofágy) • nedostate ná fce imunitního systému – perzistence v cévních st nách a tkáních – aktivace komplementu – lokální zán tlivá reakce • glomerulonefritida, vaskulitida • Generalizovaná forma – akutní sérová nemoc
Hypersenzitivní reakce IV.typu • 1.
Pozdní, zprost edkovaná antigen-specifickými Tbu kami Fáze senzibilizace - penetrace antigenu (haptenu) pokožkou p íjem a zpracování antigenu APC (Langerhansovy bu ky) migrace lymfatickými cévami do regionálních uzlin aktivace T- bun k produkce pam ových T-bun k transport do k že
2.
Efektorová fáze (opakovaná expozice antigenu) - zachycení antigenu APC p edložení antigenu senzibilizovaným
pam ovým bu kám (T-bu ky) sekrece cytokin z T-bun k (IFN- , IL-17) aktivace a migrace monocyt do poškozené tkán – p em na v makrofágy lokální tká ová reakce
Charakteristické projevy • kontaktní dermatitida – kosmetické p ípravky, léky, kov (nikl, chrom)
• Koch v fenomén – reakce na tuberkulinový test – po s.c. aplikaci – u senzibilizované osoby projevy lokální reakce (z ervenání)
• farmá ská plíce – pneumonitida – inhalace org.látek – námahová dušnost, kašel, hore ka,..
Hypersenzitivita typu I - Imunopatologická reakce I.typu zprost edkovaná IgE • Anafylaxe – závažná,
systémová, potenciáln život ohrožující reakce (parenterální p ístup alergenu)
• Alergie – lokalizovaná
reakce (slizni ní kontakt s alergenem) - atopická rýma - bronchiální astma - potravinové alergie - atopická dermatitida
Patogeneze alergických reakcí
iny anafylaktické reakce • IgE depend.mechanismy -
Hmyzí jed Potraviny, potravní aditiva Léky Sezónní alergeny - pyl, prach,.. - Latex - Biologické materiály
• Idiopatická anafylaxe
• Anafylaktoidní reakce -
Fyzikální faktory (cvi ení, chlad, teplo, UV,..) Léky (opiáty) Etanol
Klinické projevy • Závisí na: • • •
Stupni senzibilizace pacienta Míst vstupu alergenu do organismu Typu alergenu a jeho potenci
Klinické projevy • Celkové - úzkost, neklid, slabost,
parestézie, sucho, abnormální chu v ústech
• K že, sliznice • • • • •
– sv
ní, zarudnutí, kop ivka, otok okolo o í, jazyka, rt ,.. GIT – nausea, zvracení, pr jem, ovité bolesti b icha Respira ní trakt – otok horních cest dých., bolest na hrudi, dušnost, bronchospasmus, kašel, hypoxemie, centrální cyanóza KVS – hypotenze, tachykardie, arytmie, ob hové selhání, bledost, kardiogenní šok, otok plic, zástava srdce UGT – inkontinence mo i CNS – poruchy zrakového vnímání, bolest hlavy, poruchy v domí
Terapie • Symptomatická - antihistaminika
- kortikosteroidy – orální, lokální - blokátory cyklooxygenázové dráhy - bronchodilatanty - inhala
• Celková - epinefrin (adrenalin) (i.v.) • Prevence
– vylou ení alergenu z prost edí - desenzibilizace, specifická imunoterapie - aplikace epinefrinu (self-injected)
Praktikum
Cíl praktika Opakovaná aplikace antigenu (ko ské sérum) s.c. po 3 dnech Za 3 týdny od za átku senzibilizace
Odb r krve v.auricularis (2ml + heparin) na hematologické vyšet ení Aplikace 3 ml ko ského séra i.v.
1. Odb r krve z v.auricularis, p íp. intrakardiáln (2ml + heparin) na
hematologické vyšet ení. 2. Zhotovení nát ru periferní krve. 3. Stanovení po tu krevních element (leukocyty, trombocyty, eozinofily).
Úkoly a provedení • Sledování pr
hu anafylaktické reakce
• Srovnání po tu krevních element reakci)
(videozáznam)
(p ed a po prob hlé
• P íprava a zhodnocení nát ru periferní krve ed a po anafylaxi)
(ze vzork
Stanovení po tu krevních element I.
Hematologické automaty II. Mikroskopicky (po ítací kom rky)
• • •
Leukocyty Trombocyty Eozinofilní granulocyty
Zp sob po ítání krevních element
Leukocyty
Pot eby:
• • • • •
Krev Türk v roztok Sklen ná bani ka se zátkou Mikropipety Bürkerova kom rka s krycím sklí kem • Mikroskop
Postup:
• Do bani ky p eneseme 475 l Türkova roztoku, p idáme 25 l krve. • Uzav eme zátkou, šet n promícháme a necháme 2-3 min.stát. • Naplníme Bürkerovu kom rku. • Po ítáme 50 tverc a násobíme100x
L= 50…..x 100 (po et Leu/1 l)
Trombocyty Pot eby:
Postup:
• • • • • •
•
Krev Prokain Bani ka se zátkou Mikropipety Bürkerova kom rka mikroskop
• •
Do bani ky s prokainem p idáme 25 l krve, ekáme 20 min. na hemolýzu Ery. Prot epeme, naplníme Bürkerovu kom rku. Po ítáme ve 20 obdélnících.
T= 20…..x 1000 (po et Trb/ 1 l) lov k …. 150-300 tis./ l Králík …..cca 130 tis.-1 mil./ l
Eozinofily Pot eby:
Postup:
• • • • • •
•
Krev Dunger v roztok Mikropipety Bani ka se zátkou Bürkerova kom rka mikroskop
• •
Do bani ky s 475 l Dungerova roztoku p idáme 25 l krve, 15 min. ekáme na obarvení eozinofil . Promícháme a naplníme Bürkerovu kom rku. Po ítáme na celé ploše kom rky.
Eo= 20 x 11,1 (po et x 103/ 1 l)
íprava krevního nát ru
Granulocyty • Eosinofilní -
Dvojlalo natá jádra Specifická granula (barví se eosinem)- obsahují enzymy, cytotoxické proteinycytokiny Vyšší množství ve sliznici st ev, plic a v k ži
Granulocyty • Basofilní -
Lalo naté jádro, p ekryté granuly Specifická granula – obsahují histamin, heparin a další látky
Granulocyty • Neutrofilní -
Jádro -2-5 lalok -spojena filamenty Cytoplazma – sv tlá, specifická i nespecifická granula Azurofilní granula Schopnost fagocytózy
Funk ní vývoj neutrofilních granulocyt
Agranulocyty • Lymfocyty -
B – lymfocyty (15%) T – lymfocyty (80%) Nulové bu ky (5%) jádro – kulaté/oválné Cytoplazma – tenký proužek
Agranulocyty • Monocyty -
Oválné nebo podkovovité jádro Cytoplazma – modrošedá – granula Nezralá forma makrofág (tkán )
Diferenciální rozpo et leukocyt • Stanovení procentuálního zastoupení jednotlivých druh bílých krvinek
• • •
Po et jednotlivých druh se ur uje nejmén na 100 Leu Ur uje se v nát ru obarveném Leuko difem 200 Roložení Leu v nát ru je nerovnom rné prohlížet nát r meandrovit
– V tší Leu – na okrajích
(mono, Eo) – Menší – ve st edu (lymfo)
Procentuální zastoupení jednotlivých druh bílých krvinek
Diferenciální rozpo et u laboratorního králíka • Po et leukocyt …cca 6-12 tis.mm-3 - Neutrofilní granulocyty 8-50% - Eosinofilní granulocyty 1-3% - Bazofilní granulocyty 1-8% - Lymfocyty 20-90% - Monocyty 1-4%
Záv r • Záznam výsledk vyšet ení periferní krve do tabulky • Srovnání hodnot p ed a po anafylaxi
kuji za pozornost
