i
EFEKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK BUAH MAHKOTA DEWA (Phaleria macrocarpa [Scheff.] Boerl)SEBAGAI BAHAN ALTERNATIF STERILISASI SALURAN AKAR GIGI TERHADAP BAKTERI MIX SALURAN AKAR GIGI
PUTU RIA ARTAYANTI NPM :10.8.03.81.41.1.5.006
FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI UNIVERSITAS MAHASARASWATI DENPASAR DENPASAR 2014
EFEKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK BUAH MAHKOTA DEWA (Phaleria macrocarpa [Scheff.] Boerl) SEBAGAI BAHAN ALTERNATIF STERILISASI SALURAN AKAR GIGI TERHADAP BAKTERI MIX SALURAN AKAR GIGI Skripsi ini dibuat sebagai salah satu syarat untuk mendapatkan gelar Sarjana Kedokteran Gigi pada Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Mahasaraswati Denpasar
Oleh : Putu Ria Artayanti NPM :10.8.03.81.41.1.5.006
Menyetujui Dosen Pembimbing
Pembimbing I
Pembimbing II
drg. P.A. Mahendri Kusumawati, M.Kes., FISIDdrg. Putu Rusmiany, M.Biomed NIP. 19590512 198903 2001
NPK. 826795206
ii
Tim Penguji skripsi Sarjana Kedokteran Gigi Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Mahasaraswati Denpasar telah meneliti dan mengetahui cara pembuatan skripsi dengan judul : “EFEKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK BUAH MAHKOTA DEWA (Phaleria macrocarpa [Scheff.] Boerl) SEBAGAI BAHAN ALTERNATIF STERILISASI SALURAN AKAR GIGI TERHADAP BAKTERI MIX SALURAN AKAR GIGIyang telah dipertanggung jawabkan oleh calon sarjana yang bersangkutan pada tanggal 24 Februari 2014. Maka atas nama Tim Penguji skripsi Sarjana Kedokteran Gigi Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Mahasaraswati Denpasar dapat mengesahkan. Denpasar, 24 Februari 2014 Tim Penguji Skripsi FKG Universitas Mahasaraswati Denpasar Ketua,
drg. P.A. Mahendri Kusumawati, M.Kes., FISID NIP. 19590512 198903 2001 Anggota :
Tanda Tangan :
1. drg. Putu Rusmiany, M.Biomed NPK. 826795206
1………………
2. drg. Dewa Made Wedagama, Sp. KG NPK. 826395207
2………………
Mengesahkan, Dekan Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Mahasaraswati Denpasar
drg. P.A. Mahendri Kusumawati, M.Kes., FISID NIP. 19590512 198903 2001
iii
KATA PENGANTAR Dengan memanjatkan puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa, karena atas berkat
rahmat-Nya
penulis
dapat
menyelesaikan
skripsi
yang
berjudul
“EFEKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK BUAH MAHKOTA DEWA (Phaleria macrocarpa [Scheff.]Boerl) SEBAGAI BAHAN ALTERNATIF STERILISASI SALURAN AKAR GIGI TERHADAP BAKTERI MIX SALURAN AKAR GIGI” ini tepat pada waktunya. Skripsi ini disusun untuk memenuhi kewajiban penulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Kedokteran Gigi (SKG) pada Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Mahasaraswati Denpasar. Keberhasilan penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari bantuan banyak pihak. Untuk itu penulis menyampaikan rasa terima kasih yang setulus-tulusnya kepada : 1. drg. P.A. Mahendri Kusumawati, M.Kes., FISID selaku dosen pembimbing I serta selaku Dekan Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Mahasaraswati Denpasar. Atas segala upaya dan bantuan beliau dalam mengarahkan, membimbing dan memberikan petunjuk kepada penulis sehingga skripsi ini dapat terselesaikan dengan baik. 2. drg. Putu Rusmiany, M.Biomed selaku dosen pembimbing II yang telah memberikan bantuan dalam membimbing sehingga skripsi ini terselesaikan. 3. drg. Dewa Made Wedagama, Sp. KGselaku dosen penguji yang telah bersedia menguji serta memberikan koreksi dan masukan kepada penulis. 4. Bapak dan ibu tercinta, Made Artawan dan Nyoman Artini. Adik-adikku Rusti Ramayanti dan Hari Kirtana Dasa, serta keluarga tercinta atas doa, dukungan dan bantuan finansialnya sehingga penyusunan skripsi ini dapat berjalan lancar.
iv
5. Teman-teman seperjuangan skripsi Lab Endodonsia : Iga, Gung Surya, dan Fitri. Giska, Riscapy, Silvia, Ika, Ardy, Yudha, teman-teman Cranter, temanteman di Kesadaran Krishna, ibu Amy, Kak Anggi, serta seluruh Civitas Akademik Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Mahasaraswati Denpasar dan pihak yang tidak bisa penulis sebutkan satu-persatu, atas bantuan dan motivasinya baik secara langsung maupun tidak langsung selama penyusunan skripsi ini hingga selesai. Penulis menyadari sepenuhnya bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna.Oleh karena itu, penulis mengharapkan saran dan kritik yang bersifat membangun untuk kesempurnaan laporan skripsi ini. Penulis berharap semoga laporan skripsi ini dapat bermanfaat, khususnya bagi mahasiswa Fakultas Kedokteran Gigi, umumnya bagi masyarakat dan bidang pelayanan kesehatan.
Denpasar, 24 Februari 2014
Penulis
v
Efektivitas Antibakteri Ekstrak Buah Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa [Scheff.] Boerl) Sebagai Bahan Alternatif Sterilisasi Saluran Akar Gigi Terhadap Bakteri Mix Saluran Akar Gigi Abstrak Bakteri mix saluran akar gigi adalah sejumlah bakteri yang terdapat di dalam saluran akar gigi yang dapat menyebabkan infeksi saluran akar. Perlunya sterilisasi saluran akar dengan suatu bahan medikamenadalah untuk mengurangi atau menghilangkan bakteri mix saluran akar gigi. Tetapi bahan medikamen juga diketahui berpotensi menimbulkan efek samping yang berbahaya karena material ini merupakan agen terapeutik atau kimia yang aktif dan toksik, sehingga perlu dikembangkan bahan medikamen alternatif yang berasal dari bahan alami.Buah mahkota dewa (Phaleria macrocarpa [Scheff.]Boerl)merupakan salah satu alternatif yang dapat dipilih sebagai bahan medikamen saluran akar karena terdapat kandungan senyawa yang berkhasiat sebagai bahan antibakteri, yaitu minyak atsiri, saponin, tannin, flavonoid, fenol, glikosida dan triterpenoid.Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui apakah ekstrak buah mahkota dewa memiliki efektivitas antibakteri sebagai bahan alternatif sterilisasi saluran akar gigi terhadap bakteri mix saluran akar gigi. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan rancangan post test only control group design. Sampel yang digunakan adalah bakteri mix saluran akar gigi yang diperoleh dengan menggunakan paper poin steril nomer 45 yang dimasukan ke dalam saluran akar gigi dengan diagnosa nekrosis pulpa.Penelitian ini dimulai dengan ekstraksi buah mahkota dewa dengan pelarut metanol 96% kemudian skrining fitokimia, pembiakan spesimen dan selanjutnya uji efektivitas antibakteri yang dilakukan dengan metode dilusi (pengenceran ganda) dengan konsentrasi 7%, 8%, 12,5%.Hasil dari penelitian ini menunjukan bahwa konsentrasi 7%, 8%, 12,5% ekstrak buah mahkota dewa memiliki efektivitas antibakteri sebagai bahan alternatif sterilisasi saluran akar gigi terhadap bakteri mix saluran akar gigi. Kata Kunci : Ekstrak buah mahkota dewa, sterilisasi saluran akar gigi, bakteri mix saluran akar gigi.
vi
DAFTAR ISI
Halaman Judul.............................................................................................
i
Halaman Persetujuan Pembimbing .............................................................
ii
Halaman Persetujuan Penguji dan Pengesahan Dekan ...............................
iii
KATA PENGANTAR ................................................................................
iv
ABSTRAK .................................................................................................
vi
DAFTAR ISI ...............................................................................................
vii
DAFTAR TABEL ......................................................................................
x
DAFTAR GAMBAR .................................................................................
xi
DAFTAR SINGKATAN ...........................................................................
xii
BAB 1 PENDAHULUAN 1.1
Latar Belakang ...................................................................................
1
1.2
Rumusan Masalah ..............................................................................
3
1.3
Tujuan Penelitian ...............................................................................
4
1.4
Manfaat Penelitian .............................................................................
4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1
Mikroorganisme Saluran Akar ........................................................
5
2.2
Sterilisasi Saluran Akar ....................................................................
8
2.3
Penggunaan Medikamen Pada Perawatan Saluran Akar ..................
9
2.4
Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa [Scheff.] Boerl) ...................
9
2.5
Nilai Farmakologis Buah Mahkota Dewa ........................................
12
2.6
Peran Tanaman Mahkota Dewa Sebagai Antibakteri ......................
14
BAB III KERANGKA KONSEP PENELITIAN 3.1
Kerangka Konsep .............................................................................
16
3.2
Hipotesis Penelitian ..........................................................................
16
vii
BAB IV METODE PENELITIAN 4.1
Rancangan Penelitian .......................................................................
17
4.2
Sampel Penelitian .............................................................................
18
4.3
Besar Sampel ....................................................................................
18
4.4
Identifikasi Variabel .........................................................................
19
4.5
Definisi Operasional .........................................................................
20
4.6
Bahan dan Alat Penelitian ................................................................
21
4.6.1 Alat dan Bahan Pembuatan Ekstrak Buah Mahkota Dewa ....
21
4.6.2 Alat dan Bahan Uji Identifikasi Fitokimia .............................
22
4.6.3 Alat dan Bahan Uji Efektivitas Ekstrak Buah Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa [Scheff.]Boerl) Terhadap Bakteri Mix Saluran Akar Gigi ....................................................................
23
4.7Tempat dan Waktu Penelitian ..............................................................
24
4.7.1 Tempat Penelitian .............................................................................
24
4.7.2 Waktu Penelitian ...............................................................................
24
4.8
Alur Penelitian .................................................................................
25
4.9
Prosedur Penelitian ...........................................................................
26
4.9.1 Pembuatan Ekstrak Buah Mahkota Dewa ...............................
26
4.9.2 Skrining Fitokimia Ekstrak Buah Mahkota Dewa ..................
27
4.9.3 Pembiakan Spesimen .......................................................................
29
4.9.4 Penentuan MIC dan MBC Bahan Coba .................................
29
4.10 Analisis Data ...................................................................................
31
BAB V HASIL PENELITIAN 5.1
Ekstraksi Buah Mahkota Dewa ........................................................
32
5.2
Uji Identifikasi Fitokimia ................................................................
33
5.2.1 Pemeriksaan Minyak Atsiri ....................................................
33
5.2.2 Pemeriksaan Flavonoid ....................................................................
33
5.2.3 Pemeriksaan Saponin .......................................................................
34
5.2.4 Pemeriksaan Alkaloid ......................................................................
35
viii
5.2.5 Pemeriksaan Fenol .................................................................
36
5.2.6 Pemeriksaan Tannin .........................................................................
37
5.2.7 Pemeriksaan Steroid dan Triterpenoid ...................................
37
5.2.8 Pemeriksaan Glikosida .....................................................................
38
5.3
Uji Efektivitas Antibakteri ...............................................................
39
BAB VI PEMBAHASAN.........................................................................
44
BAB VII SIMPULAN dan SARAN 7.1
Simpulan ..........................................................................................
49
7.2
Saran ................................................................................................
49
DAFTAR PUSTAKA ...............................................................................
50
LAMPIRAN
ix
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Jenis Bakteri Yang Paling Banyak Ditemukan Pada Infeksi Saluran Akar............................................................................
7
Tabel 5.1 Perhitungan jumlah bakteri untuk bahan coba ekstrak buah Mahkota Dewa .......................................................................
x
42
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Buah Mahkota Dewa ...........................................................
11
Gambar 5.1 Ekstrak Kental Buah Mahkota Dewa ...................................
32
Gambar 5.2 Larutan Flavonoid ................................................................
34
Gambar 5.3 Larutan Saponin ...................................................................
35
Gambar 5.4 Larutan Alkaloid ..................................................................
36
Gambar 5.5 Larutan Fenol .......................................................................
36
Gmabra 5.6 Larutan Tannin .....................................................................
37
Gambar 5.7 Larutan Triterpenoid ............................................................
38
Gambar 5.8 Larutan Glikosida ................................................................
39
Gambar 5.9 Suspensi Bakteri Mix Saluran Akar Gigi Setelah Berkontak Dengan Bahan Coba Pada Berbagai Konsentrasi ................
40
Gambar 5.10 Hasil Biakan Mulai Tampak Jernih Bila Dibandingkan Dengan Kontrol Positif .............................................................................
40
Gambar 5.11 Hasil Pengujian Antibakteri Ekstrak Buah Mahkota Dewa 7%, 8%, 12,5% Pada Media Blood Agar .............................
xi
41
DAFTAR SINGKATAN
CFU
Colony Forming Unit
KHM
Konsentrasi Hambat Minimum
KBM
Konsentrasi Bunuh Minimum
MIC
Minimum Inhibitory Concentration
MBC
Minimum Bactericidal Concentration
TSB
trypic soy broth
xii
BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang Dewasa
ini,
kesehatan
gigi
dan
mulut
pada
masyarakat
perlu
diperhatikan.Angka kesakitan gigi di Indonesia cenderung meningkat dari tahun ke tahun. Kurangnya kesadaran masyarakat dan perekonomian yang kurang menentu, secara tidak langsung akan mempengaruhi tingkat kesehatan masyarakat pada umumnya, serta mempengaruhi kesehatan gigi pada khususnya. Perawatan gigi yang kurang baik dapat menyebabkan masalah kesehatan gigi.Masalah kesehatan gigi yang umum terjadi di Indonesia adalah karies gigi.Karies gigi adalah sebuah penyakit infeksi yang merusak struktur gigi.Penyakit ini menyebabkan gigi berlubang, nyeri dan infeksi.Jika infeksi karena karies sudah mencapai syaraf gigi maka perawatan yang dilakukan adalah perawatan saluran akar (root canal treatment).Perawatan saluran akar adalah tindakan yang dilakukan untuk mempertahankan gigi.Perawatan saluran akar terdiri dari preparasi, sterilisasi, dan pengisian.Dari ketiga tahap perawatan saluran akar tersebut, penulis akan membahas mengenai sterilisasi saluran akar. Tujuan utama perawatan saluran akar ialah menghilangkan bakteri yang invasi di dalam saluran akar dan menciptakan lingkungan yang asepsis sehingga bakteri tidak dapat bertahan hidup.Tetapi mengingat bentuk anatomi pulpa yang kompleks, terkadang bakteri masih dapat dijumpai di dalam tubulus dentin walaupun sudah
1
2
dilakukan pembersihan melalui preparasi saluran akar biomekanikal dan dengan larutan irigasi (Amalia, 2012).Pada penelitian awal ditemukan beberapa spesies diantaranya streptococci, micrococci, dan sejumlah kecil bakteri anaerob pada infeksi saluran akar maupun penyakit periradikular.Bakteri anaerob meliputi 90% dari bakteri penyebab infeksi saluran akar. Berdasarkan temuan tersebut, ternyata penyebab infeksi saluran akar tidak hanya satu macam bakteri tetapi berbagai macam bakteri yang terlibat termasuk organisme anaerob seperti Porphyromonas, Bacterioides gingivalis, Phorphyromonas bacterioides endodontalis, dan Prevotella bacterioides buccae yang dinamakan Bacterioidesspesies (Agustin W, 2005). Bakteri mix saluran akar gigi adalah sejumlah bakteri (aerob dan anaerob) yang terdapat di dalam saluran akar gigi, diperoleh dengan menggunakan paper poin steril nomer 45 yang dimasukan ke dalam saluran akar gigi dengan diagnosa nekrosis pulpa. Perlunya sterilisasi saluran akar adalah untuk memusnahkan atau mengurangi jumlah mikroorganisme secara nyata.Sterilisasi saluran akar dilengkapi dengan medikamen saluran akar (Grossman, 1995).Pemberian medikamen saluran akar bertujuan untuk memperoleh aktivitas antimikroba di saluran akar, menetralkan sisasisa debris di saluran akar, mengontrol dan mencegah nyeri (Agustina, 2011).Diketahui juga bahwa medikamen saluran akar berpotensi menimbulkan efek samping yang berbahaya karena material ini adalah suatu agen terapeutik atau kimia yang aktif dan toksik (Walton dan Torabinejad, 2002). Dengan kelemahan yang dimiliki dari bahan medikamen saluran akar, perlu dikembangkan bahan alami
3
dengan kadar toksisitas rendah tetapi memiliki daya antibakteri yang baik sebagai bahan medikamen saluran akar. Bahan alami khususnya tumbuh-tumbuhan merupakan keanekaragaman hayati
yang
masih
sangat
sedikit
menjadi
subjek
penelitian
ilmiah
di
Indonesia.Tanaman obat Indonesia telah diketahui sebagai sumber yang potensial sebagai agen antibakteria (Beatrice, 2010).Bahan alami yang mungkin bisa dimanfaatkan sebagai bahan alternatif medikamen saluran akar adalah buah mahkota dewa (Phaleria macrocarpa [Scheff.]Boerl).Mahkota dewa merupakan tanaman obat tradisional yang sudah dikenal dan saat ini semakin diminati masyarakat.Pemanfaatan tanaman mahkota dewa ini secara tradisional adalah sebagai tanaman yang sejak lama dikenal dapat memiliki khasiat untuk mengobati luka, diabetes, lever, flu, alergi, sesak nafas, desentri, penyakit kulit, jantung, ginjal, dan kanker.Efek terapeutik buah mahkota dewa erat hubungannya dengan senyawa kimia yang terkandung di dalamnya.Telah diketahui bahwa biji mahkota dewa bersifat toksik sedangkan daging buahnya tidak.Potensi penghambatan daging buah mahkota dewa lebih besar jika dibandingkan dengan akar, kulit batang, maupun daunnya (Kere, 2011).Komposisi aktif buah mahkota dewa adalah tanin, flavonoid, saponin dan alkaloid (Wijoyo, 2012). Dari uraian tersebut timbul pemikiran untuk meneliti efektifitas antibakteri ekstrak buah mahkota dewa (Phaleria macrocarpa [Scheff.]Boerl) sebagai bahan alternatif sterilisasi saluran akar gigi terhadap bakteri mix saluran akar gigi.
4
1.2 Perumusan Masalah Berdasarkan uraian latar belakang diatas, maka permasalahan yang timbul adalah : Apakah
ekstrak
buah
mahkota
dewa
(Phaleria
macrocarpa
[Scheff.]Boerl)memiliki efektifitas antibakteri sebagai bahan alternatif sterilisasi saluran akar dengan mengetahui konsentrasi minimal yang dapat menghambat dan membunuh bakteri mix saluran akar gigi? 1.3 Tujuan Penelitian Tujuan dari penelitian ini adalah : Untuk mengetahui apakah ekstrak buah mahkota dewa (Phaleria macrocarpa [Scheff.]Boerl) memiliki efektifitas antibakteri sebagai bahan alternatif sterilisasi saluran akar dengan mengetahui konsentrasi minimal yang dapat menghambat dan membunuh bakteri mix. 1.4 Manfaat Penelitian Hasil dari penelitian ini diharapkan dapat memberikan manfaat sebagai berikut : a. Dengan penelitian ini, diharapkan potensi pendayagunaan tanaman obat berkhasiat yang ada di Indonesia dapat dikembangkan. b. Dapat diketahui efektifitas antibakteri ekstrak buah mahkota dewa sebagai bahan alternatif sterilisasi saluran akar gigi.
5
c. Meningkatkan pengembangan material kedokteran gigi yang berasal dari alam mengingat kelemahan bahan kimia dari material yang aktif dan toksik pada jaringan.
BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Mikroorganisme Saluran Akar Sebagian besar patosis jaringan pulpa dan periradikuler secara langsung atau tidak langsung terkait dengan mikroorganisme. Pengetahuan mengenai bakteri yang terkait dengan patosis jaringan pulpa sangat penting agar proses penyakitnya dapat lebih dipahami dan perawatannya dapat lebih tepat. Untuk menginvasi dan menginfeksi pulpa, mikroba bisa melalui berbagai cara. Sumber utama bakteri dalam pulpa adalah dari karies (Walton dan Torabinejad, 2002). Karies merupakan suatu penyakit pada jaringan keras gigi yang ditandai oleh rusaknya enamel, dentin dan sementum oleh aktivitas metabolisme plak dental yang ada dalam suatu karbohidrat yang diragikan. Proses terjadinya karies ditandai dengan demineralisasi jaringan keras gigi yang diikuti dengan kerusakan bahan organiknya (Siregar, 2011). Ketika pulpa terpajan oleh karies, banyak sekali spesies oportunitis dari flora rongga mulut yang menginvasi dan berkoloni di jaringan yang nekrosis. Pulpa yang nekrosis akan dengan cepat terinvasi dan terkolonisasi oleh bakteri (Walton dan Torabinejad, 2002). Pada sebagian besar kasus, dijumpai organisme gram positif dan gram negatif, pada sedikit kasus dijumpai jamur.Organisme-organisme ini sering ditemukan dalam berbagai kombinasi daripada sebagai suatu spesies tunggal.Anaerob yang harus ada (anaerob obligat) sering dihubungkan dengan gigi yang mempunyai lesi periapikal (Grossman, 1995).
6
7
Dari sekitar 500 spesies bakteri yang dikenal sebagai flora normal rongga mulut hanya relatif sedikit saja kelompok yang dapat diisolasi dari ruang pulpa yang terinfeksi.Yang dominan adalah bakteri anaerob obligat, dengan sedikit bakteri anaerob fakultatif, dan jarang sekali ditemukan yang aerob.Contohnya, pada suatu penelitian memeriksa gigi utuh yang saluran akarnya terinfeksi, lebih dari 90% bakterinya adalah anaerob obligat (Walton dan Torabinejad, 2002). Baik mikroorganisme aerob dan anaerob dapat ditemukan pada saluran akar.Sebagian besar mikroorganisme yang diisolasi dari gigi utuh nonvital adalah anaerob, terutama dari genera bakteroid, peptokokus, peptostrepkokus, fusiform, basili, dan korinebakterium (Grossman, 1995). Bakteri anaerob gram negatif sering sekali diisolasi dari gigi dengan infeksi saluran akar, oleh karena itu endotoksin bakteri mungkin menyebabkan iritasi jaringan periapikal dan berperan penting dalam patogenesis lesi inflamasi dan pulpa (Kere, 2011). Contoh bakteri anaerob gram negatif terdapat pada saluran akar diantaranya adalah Bacteroides,Prevotella,Porphyromonas, Fusobacterium, dan Veillonella sedangkan contoh bakteri anaerob gram positif yang terdapat pada saluran akar adalah Actinomyces, Propionibacterium, Peptostreptococcus, dan Eubacterium (Walton dan Torabinejad, 2002).
8
Tabel 2.1 Jenis bakteri yang paling banyak ditemukan pada infeksi saluran akar Genus
Frekuensi isolasi (%)
Bacteroides
70
Prevotella
60
Lactobacillus
51
Oral streptococci
41
Clostridium
36
Fusobacterium
33
Propionibacterium
29
Corynebacterium
25
Bifidobacterium
21
Eubacteria
20
Capnocytophaga
17
Actinomyces
16
Leuconostoc
13
Porphyromonas
10
Candida
10
Veilonella
9
Gamella
8
Staphylococcus
7
Aerococcus
5
Saccharomyces
3
9
Enterococcus
3
(Lamont dkk. 2006 cit Widrayani 2013) 2.2 Sterilisasi Saluran Akar Sterilisasi adalah proses pemusnahan semua mikroorganisme. Disinfeksi adalah menghilangkan organisme vegetatif yang menyebabkan penyakit (Tarigan, 2006).Sterilisasi saluran akar bertujuan untuk mengurangi atau menghilangkan flora mikrobial di dalam saluran akar. Menurut studi Byston dan Sundqvist tahun 1985, apabila tidak dilakukan sterilisasi saluran akar pada setiap kali melakukan perawatan maka jumlah mikroorganisme akan meningkat jumlahnya. Perlunya sterilisasi saluran akar adalah untuk memusnahkan atau mengurangi jumlah mikroorganisme secara nyata.Sterilisasi saluran akar dilengkapi dengan medikamen saluran akar.Medikamen saluran akar adalah suatu tahap yang penting pada perawatan saluran akar (Grossman, 1995). Aplikasi bahan sterilisasi saluran akar antar kunjungan dapat membantu untuk menghilangkan bakteri yang mampu bertahan setelah dilakukan preparasi biomekanis.Delgado dkk. (2010 cit. Dewi 2011) menyatakan bahwa, meskipun preparasi biomekanik merupakan prosedur yang efektif untuk mengurangi mikroorganisme namun prosedur ini tidak dapat menghilangkan bakteri secara sempurna pada saluran akar lateral dan aksesori sehingga sterilisasi intrakanal antar kunjungan direkomendasikan untuk pengurangan bakteri lebih lanjut dalam sistem saluran akar.
10
2.3Penggunaan Medikamen Pada Perawatan Saluran Akar Penggunaan bahan medikamen dalam perawatan endodontik merupakan salah satu langkah yang penting.Suatu bahan medikamen saluran akar yang ideal diharapkan mampu megeliminasi bakteri dalam saluran akar yang tidak tereliminasi pada prosedur eliminasi, mampu mengurangi rasa sakit maupun inflamasi periradikular, mampu mengeliminasi eksudat apikal, serta mencegah resopsi akar dan infeksi ulang (Kere, 2011). Mengingat pentingnya melakukan sterilisasi saluran akar sebelum melakukan pengisian saluran akar, dibutuhkan suatu medikamen atau obat-obatan intrasaluran. Sebelum mempertimbangkan suatu medikamen yang akan digunakan terlebih dahulu menentukan jenis mikroorganisme apa yang akan dimusnahkan (Grossman, 1995). Medikamen saluran akar dikelompokkan atas golongan fenol (eugenol, CMCP (camphorated
monochlorophenol),
cresatin,
kresol),
aldehid
(formokresol,
glutaraldehid), halida (sodium hipoklorit, iodin-kalium iodida), steroid, Ca(OH)2, antibiotik dan kombinasi. Namun yang paling sering digunakan adalah Ca(OH)2, CMCP dan formokresol. Bahan medikamen ini juga diketahui berpotensi menimbulkan efek samping yang berbahaya karena material ini merupakan agen terapeutik atau kimia yang aktif dan toksik (Amalia, 2012). 2.4 Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa [Scheff.] Boerl) Salah satu tumbuhan obat Indonesia yang sangat populer saat ini adalah mahkota dewa (Phaleria macrocarpa [Scheff.]Boerl).Bertahun-tahun yang lalu, tidak
11
banyak orang yang mengenal tanaman mahkota dewa sebagai tanaman yang berkhasiat. Tanaman yang mempunyai nama latin Phaleria macrocarpa karena buahnya yang besar ini, hanya dianggap sebagai sarang ular, apalagi tanaman ini termasuk tanaman perdu dan buahnya pun sangat pahit. Habitat asli tanaman mahkota dewa di Papua sehingga disebut juga Phaleria papuana.Tidak diketahui bagaimana caranya, tetapi, di keraton Mangkunegara Solo dan keraton Yogyakarta tanaman mahkota dewa ternyata sudah dikenal sebagai tanaman yang berkhasiat untuk keperluan pengobatan (Suryani dan Stepriyani, 2007). Menurut Soeksmanto, Hapsari dan Simanjuntak (2007) bahwa tanaman ini mempunyai 1200 spesies yang tersebar dalam 67 negara. Penampilan tanaman ini sangat menarik, terutama saat buahnya mulai tua dengan warna merah marun, sehingga banyak dipelihara sebagai tanaman hias.Daun mahkota dewa, sering direbus untuk menyembuhkan penyakit lemah syahwat, disentri, alergi dan tumor. Mahkota dewa bisa ditemukan ditanam di pekarangan sebagai tanaman hias atau dikebun-kebun sebagai tanaman peneduh. Perdu menahun ini tumbuh tegak dengan tinggi 1-2,5 m. Batangnya bulat, permukannya kasar, warnanya cokelat, berkayu dan bergetah, percabangan simpodial. Daun tunggal, letaknya berhadapan, bertangkai pendek, bentuknya lanset atau lonjong, ujung dan pangkalnya runcing, tepi rata (Manganti, 2011).
12
Gambar 2.1 Buah Mahkota Dewa Berdasarkan taksonominya, tanaman mahkota dewa dapat diklasifikasikan sebagai berikut: Divisi :Spermatopyta Subdivisi :Angiospermae Kelas :Dicotyledonae Bangsa :Thymelaeaceae Suku :Thymelaeceae Marga :Phaleria Spesies :Phaleria macrocarpa [Scheff.] BoerlatauPhaleria papuana
13
Karena ukuran buah yang relatif besar, para ahli botani memberi sebutan macrocarpa (macro=besar) (Beatrice, 2010). 2.5 Nilai Farmakologis Mahkota Dewa Kandungan kimia mahkota dewa adalah alkaloid, saponin, flavonoid, dan polifenol, terutama dibagian daunnya (Sutanto, 2013).Perbedaan kandungan senyawa kimia yang ada menunjukkan perbedaan aktivitas farmakologisnya.Telah diketahui bahwa biji mahkota dewa bersifat toksik sedangkan buahnya tidak, dengan potensi penghambatan yang lebih besar dibandingkan daunnya.Buah mahkota dewa terdiri dari golongan saponin, alkaloid, tanin, flavonoid, fenol, lignan, minyak atsiri.Pada kilitnya mengandung alkaloid, saponin, dan flavonoid (Beatrice, 2010). Ekstrak daging buahnya berkhasiat sebagai antihistamin, antialergi, bersifat sitotosik terhadap sel kanker Rahim, juga menurunkan kadar gula darah, antioksidan, menurunkan kadar asam urat (Wijoyo, 2012). Menurut Harmanto. (2001 cit. Rosyami 2008) buah mahkota dewa mengandung alkaloid, saponin, flavonoid, dan polifenol dan ekstrak daunnya dapat memberikan efek antihistamin (Siswono, 2001). Daging buah mahkota dewa mempunyai efek hipoglikemik (dapat menurunkan kadar gula dalam darah). Berdasarkan hasil penelitian dapat ditunjukkan bahwa daging buah mahkota dewa menghasilkan efek antihipoglikemik dengan dosis 241,35 mg/kg berat badan (Primsa. 2002 cit. Rosyami 2008).
14
Saponin (fitonutrien), sering disebut “deterjen alam”, senyawa ini juga bersifat
antibakteri
dan
antivirus.
Meningkatkan
sistem
kekebalan
tubuh,
meningkatkan daya tahan, mengurangi kadar gula darah, mengurangi penggumpalan darah. Saponin dapat menghambat kerja enzim proteolitik pada sistem pencernaan manusia (Beatrice, 2010). Alkaloid, merupakan senyawa organik yang berfungsi sebagai detoksifikasi, menetralisir racun di dalam tubuh.Mekanisme kerja antimikroba dari alkaloid dihubungkan dengan kemampuan alkaloid untuk berikatan dengan DNA sel, sehingga mengganggu fungsi sel diikuti dengan pecahnya sel dan diakhiri dengan kematian sel (Kere, 2011). Flavonoid termasuk senyawa fenolik alam yang potensial sebagai antioksidan dan mempunyai bioaktifitas sebagai obat (Rohyami, 2008). Flavonoid beperan sebagai antibakteri dengan cara membentuk senyawa kompleks terhadap protein ekstraseluler yang mengganggu integritas membran bakteri. Kandungan polifenol berfungsi sebagai antihistamin.Minyak atsiri juga bersifat antibakteri karena efeknya dapat mengganggu pembentukan membran atau dinding sel sehingga tidak terbentuk atau pembentukannya tidak sempurna (Siregar, 2011). Tanin dapat merusak membran sel bakteri, mengkerutkan dinding sel atau membran sel sehingga mengganggu permeabilitas sel itu sendiri.Akibat terganggunya permeabilitas, sel tidak dapat melakukan aktivitas hidup sehingga pertumbuhannya
15
terhambat bahkan mati. Selain itu tanin juga mempunyai daya antibakteri dengan cara mempresipitasi protein (Masduki. 1966 cit. Siregar 2011). 2.6 Peran Tanaman Mahkota Dewa Sebagai Antibakteri Acuan pustaka yang ada telah menyebutkan bahwa tanaman marga Phaleria umumnya memiliki aktifitas antibakteri (Beatrice, 2010). Berbagai penelitian juga telah dilakukan di Indonesia mengenai efek antibakteri dari mahkota dewa, antara lain pada penelitian Lusiana Beatrice, tahun 2010, bahwa ekstrak etanol buah mahkota dewa memiliki daya antibakteri serta mampu menghambat pertumbuhan Enterococcus faecalis, efek antibakteri dinilai dari nilai MBC (Minimum Bactericidal Concentration). yang terdapat pada ekstrak etanol buah mahkota dewa pada konsentrasi 12,5%. Pada penelitian Carolina Monica Kere, tahun 2011, ekstrak etanol buah mahkota dewa memiliki efek antibakteri terhadap bakteri Fusobacterium nucleatum dengan nilai KHM (kadar hambat minimum) dan KBM (kadar bunuh minimum) 3,125 %. Ekstrak etanol buah mahkota dewa juga memiliki daya antibakteri yang menghambat pertumbuhan Streptococcus mutans. Efek antibakteri dinilai dari nilai KHM dan KBM yang terdapat pada ekstrak etanol buah mahkota dewa pada konsentrasi 6,25% dengan jumlah koloni 0 CFU (Colony Forming Unit) /ml (Siregar, 2011).
16
Pada penelitian lainnya mengenai mahkota dewa, bahwa infusa daun mahkota dewa juga memiliki daya antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dengan KHM 3,125 gram% dan KBM 6,25 gram% (Suryani dan Stepriyani, 2007).
BAB III KERANGKA KONSEP PENELITIAN 3.1 Kerangka Konsep Ekstrak Buah Mahkota Dewa 7%, 8%, 12,5%
-
Bakteri Mix Saluran Akar Gigi
Suhu Media Waktu pH
Sterilisasi saluran akar gigi
3.2 Hipotesis Penelitian Dari skema kerangka konsep di atas maka hipotesis pada penelitian ini adalah ekstrak buah mahkota dewa memiliki efektivitas antibakteri terhadap bakteri mix saluran akar gigi, sehingga dapat menghambat dan membunuh bakteri mix saluran akar gigi.
17
BAB IV METODE PENELITIAN 4.1 Rancangan Penelitian Rancangan penelitian ini bersifat eksperimental dengan Posttest Only Control Group Design.
P
S
Ra
K
O0
P1
O1
P2
O2
P3
O3
Keterangan : P : Populasi S : Sampel Ra : Rendom alokasi K : Suspensi bakteri dengan kekeruhan setara 108CFU/ml yang diinkubasi 24 jam (kontrol positif). P1 : Perlakuan dengan ekstrak buah mahkota dewa dengan konsentrasi 7%
18
19
P2 : Perlakuan dengan ekstrak buah mahkota dewa dengan konsentrasi 8% P3 : Perlakuan dengan ekstrak buah mahkota dewa dengan konsentrasi 12,5% O0 : Pengamatan hasil pada kelompok K O1 : Pengamatan hasil pada kelompok P1 O2 : Pengamatan hasil pada kelompok P2 O3 : Pengamatan hasil pada kelompok P3 4.2 Sampel Penelitian Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah bakteri mix saluran akar gigi yang diperoleh dengan menggunakan paper poin steril nomer 45 yang dimasukan ke dalam saluran akar gigi dengan diagnosa nekrosis pulpa tanpa ada kelainan periapikal pada gigi akar tunggal dan belum pernah dilakukan perawatan saluran akar. 4.3 Besar Sampel Penelitian ini menggunakan bakteri, sehingga penentuan besar sampel ditetapkan sesuai dengan penetapan baku uji bakteri yaitu menggunakan 108 bakteri.
20
Untuk mendapatkan data yang valid dilakukan pengulangan sesuai rumus Federer (1999) : (n - 1) (t - 1) ≥ 15 (n - 1) (4 - 1) = 15 (n - 1) (3) = 15 n – 1 = 15 : 3 n = 5+1 = 6 Keterangan : n : banyaknya ulangan t : banyaknya perlakuan Berdasarkan perhitungan dengan rumus diatas, maka diperoleh n = 6 dan t= 4, maka jumlah sampel keseluruhan adalah 24 sampel. 4.4 Identifikasi Variabel a. Variabel tergantung
: Jumlah bakteri mix saluran akar gigi
b. Variabel bebas
: Ekstrak buah mahkota dewa 7%, 8%, 12,5%
21
c. Variabel kendali
: Waktu inkubasi dan Suhu 37ºC.
4.5 Definisi Operasional a. Ekstrak buah mahkota dewa adalah ekstrak yang diperoleh dengan melakukan ekstraksi buah mahkota dewa berwarna merah sebanyak 1600 gram yang dipetik dari pohon mahkota dewa yang ditanam di desa Sembung, kecamatan Mengwi, kabupaten Badung, dibersihkan, lalu diiris halus dan dikeringkan. Setelah kering, diblender sampai menjadi serbuk halus sebanyak 540 gram dengan pelarut metanol kemudian diuapkan dengan evaporator sehingga diperoleh ekstrak cair buah mahkota dewa. Pada penelitian ini digunakan ekstrak 7%, 8%, 12,5%. b. Bakteri mix saluran akar gigi adalah sejumlah bakteri yang terdapat di dalam saluran akar gigi yang dapat menyebabkan infeksi saluran akar. Bakteri mix saluran akar ini diperoleh dengan menggunakan paper poin steril nomer 45 yang dimasukan ke dalam saluran akar gigi dengan diagnosa nekrosis pulpa. c. Suhu adalah ukuran panas atau dinginnya suatu benda. Suhu yang digunakan untuk menumbuhkan bakteri mix saluran akar gigi yaitu 37ºC. Digunakan suhu 37ºC karena bakteri mix diambil pada saluran akar gigi pasien dan suhu normal pada tubuh manusia adalah 37ºC. d. Waktu inkubasi adalah waktu yang digunakan untuk mengamati pertumbuhan atau pembiakan bakteri mix saluran akar gigi yaitu 18-24 jam.
22
4.6 Bahan dan Alat Penelitian 4.6.1 Alat dan Bahan Pembuatan Ekstrak Buah Mahkota Dewa A. Alat a. Botol timbang b. Rotary evaporator (eyela n-1200) c. Pisau d. Ayakan 40 mesh (retsch) e. Neraca analitik (adam) f. Oven (binder) g. Moisture analyzer (shimadzu) h. Batang pengaduk i. Spatula j. Alat-alat gelas k. Kertas saring bebas abu (whatmaan ashless) l. Vacum gas (gast) m. Penyaring buchner
B. Bahan a. Simplisia buah mahkota dewa b. Metanol c. N-heksana d. Kloroform
23
4.6.2 Alat dan Bahan Uji Identifikasi Fitokimia A. Alat a. Tabung reaksi b. Rak tabung reaksi c. Penjepit tabung d. Pipet tetes e. Gelas ukur f. Tabung spiritus g. Cawan penguap B. Bahan a. Akuades b. Metanol 10 ml c. Etanol d. Kloroform e. Asam asetat anhidrat f. Asam sulfat g. HCL 2N h. FeCl3
24
4.6.3 Alat dan Bahan Uji Efektifitas Ekstrak Buah Mahkota Dewa Terhadap Bakteri Mix Saluran Akar Gigi A. Alat a. Cawan petri b. Micropipet c. Lampu Bunsen d. Inkubator e. Timer f. Tabung eppendorf 1,8 mm g. Tabung glass B. Bahan a. Blood agar 20 ml b. Glukosa boilon c. TSB (trypic soy broth) d. Paper point yang berisi bakteri mix saluran akar gigi e. Ekstrak buah mahkota dewa f. metanol 96% g. Masker k. Handscoon
25
4.7 Tempat dan Waktu Penelitian 4.7.1 Tempat Penelitian a. Pembuatan ekstrak buah mahkota dewa dan uji identifikasi fitokimia Laboratorium Fitokimia dan Farmakognosi Farmasi Universitas Udayana b. Pengujian efektivitas antibakteri Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Udayana c. Pengambilan bakteri mix saluran akar gigi Rumah Sakit Gigi dan Mulut Universitas Mahasaraswati Denpasar 4.7.2 Waktu Penelitian Waktu penelitian adalah 1 bulan
26
4.8 Alur Penelitian
Ekstrak Buah Mahkota Dewa
Fitokimia
Konsentrasi 7%
Konsentrasi 8%
Konsentrasi 12,5%
Pengambilan Bakteri mix saluran akar gigi
Pengambilan Bakteri mix saluran akar gigi
Pengambilan Bakteri mix saluran akar gigi
Inkubasi
Data
Analisis Data
Hasil
27
4.9 Prosedur Penelitian 4.9.1 Pembuatan Ekstrak Buah Mahkota Dewa Buah mahkota dewa yang segar dan berwarna merah sebanyak 1600 gram yang dipetik dari pohon mahkota dewa yang ditanam di desa Sembung, kecamatan Mengwi, kabupaten Badung, dibersihkan dari kotoran, dicuci bersih, ditimbang, lalu diiris halus dan dikeringkan. Sampel yang telah kering kemudian diblender sampai menjadi serbuk.Serbuk buah mahkota dewa dihaluskan hingga diperoleh serbuk berukuran 80 mesh. Sebanyak 540 gram serbuk buah mahkota dewa dimaserasi menggunakan 2,5 liter nheksana pada suhu kamar selama 1 hari. Disaring (diperoleh ekstrak cair n-heksana), kemudian ampas dikeringkan pada suhu kamar selama 1 hari. Ampas yang telah dikeringkan diremaserasi dengan 2,5 liter kloroform pada suhu kamar selama 1 hari. Disaring (diperoleh ekstrak cair kloroform), kemudian ampas dikeringkan pada suhu kamar selama 1 hari. Ampas yang telah dikeringkan diremaserasi dengan 2,5 liter metanol. Disaring (diperoleh ekstrak cair metanol). Ekstrak cair yang diperoleh pada tahap ekstraksi didiamkan 1 hari dan dilanjutkan ketahap pengentalan ekstrak menggunakan rotary evaporator (80 rpm, 45ºC, 0,62 bar).
28
4.9.2 Skrining Fitokimia Ekstrak Buah Mahkota Dewa Skrining fitokimia terhadap ekstrak buah mahkota dewa meliputi pemeriksaan minyak atsiri, tannin, alkaloid, steroid, terpenoid, saponin, fenol, glikosida, dan flavonoid. a. Pembuatan larutan untuk skrining fitokimia dilakukan dengan melarutkan 500 mg ekstrak dalam 10 ml metanol. b. Pemeriksaan minyak atsiri Ekstrak
yang
diperoleh
ditambah
dengan
etanol,
bila
berbau
enak/aromatik larutan alkoholik tersebut diuapkan kembali hingga kering.Bila residu tetap berbau aromatik, menunjukan ekstrak positif mengandung atsiri. c. Pemeriksaan flavonoid Reaksi Pew : Sebanyak 1 ml larutan ekstrak uji diuapkan, dibasahkan sisanya dengan aseton P, ditambahkan sedikit serbuk halus asam borat P dan serbuk halus asam oksalat P, dipanaskan hati-hati di atas tangas air dan dihindari pemanasan berlebihan. Sisa yang diperoleh dicampur dengan 10 ml eter P. diamati dengan sinar UV366, larutan berflouresensi kuning intensif, menunjukan adanya flavonoid. d. Pemeriksaan saponin Sebanyak 2 ml larutan ekstrak uji dalam tabung reaksi ditambahkan dengan 10 ml aquades kemudian dikocok vertikal selama 10 detik.Pembentukan busa setinggi 1-10 cm yang stabil selama tidak kurang
29
dari 10 menit, menunjukan adanya saponin.Pada penambahan 1 tetes HCL 2N, busa tidak hilang. e. Pemeriksaan alkaloid Sebanyak 2 ml larutan ekstrak uji diuapkan diatas cawan porselin hingga didapat residu.Residu kemudian dilarutkan dengan 5 ml HCL 2N.Larutan yang didapat kemudian dibagi ke dalam 5 tabung reaksi.Tabung pertama ditambahkan dengan asam encer yang berfungsi sebagai blanko.Tabung kedua ditambahkan pereaksi Dragendorf sebanyak 3 tetes.Tabung ketiga ditambahkan
pereaksi
Mayer
ditambahkan
pereaksi
Wagner
sebanyak sebanyak
3
tetes.Tabung 3
tetes.Tabung
keempat kelima
ditambahkan pereaksi Bouchardat sebanyak 3 tetes.Terbentuknya endapan jingga pada tabung kedua dan endapan kuning pada tabung ketiga menunjukan adanya alkaloid. f. Pemeriksaan fenol Sebanyak 2 ml larutan uji ditambahkan 3 tetes FeCl3 10%.Terbentuk warna hitam pekat menunjukan adanya fenol. g. Pemeriksaan tannin Sebanyak 2 ml larutan uji ditambahkan 2 tetes larutan FeCl3 2%.Terbentuk warna biru kehitaman menunjukan adanya tannin. h. Pemeriksaan steroid dan triterpenoid Dilakukan dengan reaksi Liebarmann-Burchard.Sebanyak 2 ml larutan uji diuapkan dalam cawan penguap. Residu dilarutkan dengan 0,5 ml
30
kloroform, kemudian ditambahkan 0,5 ml asam asetat anhidrat. Selanjutnya ditambahkan 2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung.Terbentuknya cincin kecoklatan atau violet pada perbatasan larutan menunjukan adanya triterpenoid, sedangkan bila muncul cincin biru kehijauan menunjukan adanya steroid. i. Pemeriksaan glikosida Sebanyak 2 ml larutan uji 2 ml asam asetat anhidrat, dilanjutkan dengan penambahan asam sulfat pekat.Terbentuk larutan berwarna hijau kebiruan menunjukan adanya glikosida. 4.9.3 Pembiakan spesimen Paper point yang berisi bakteri mix saluran akar gigi dilarutkan ke dalam larutan TSB, diinkubasi pada suhu 37ºC selama 18-24 jam. Kekeruhan yang terjadi setelah diinkubasi disetarakan dengan 108 CFU/ml (0,5Mc Farland). Sebanyak 0,1 ml dimasukan dalam masing-masing seri konsentrasi. 4.9.4 Penentuan MIC dan MBC Bahan Coba Bahan coba ekstrak buah mahkota dewa yang dipakai terdiri dari konsentrasi 7%, 8%, 12,5%. Dari masing-masing konsentrasi tersebut diambil sebanyak 5 ml lalu dimasukan ke dalam tabung reaksi kemudian diberi label sesuai konsentrasinya. Selanjutnya diambil 0,1 ml suspensi bakteri yang telah dipersiapkan sebelumnya dengan menggunakan mikropipet lalu dimasukan ke dalam masing-masing tabung bahan coba yang telah diberi label kemudian homogenkan. Tiap konsentrasi
31
dilakukan 6 kali pengulangan. Tabung-tabung tersebut diinkubasi pada suhu 37ºC selama 18-24 jam. Diamati kekeruhan yang terjadi dengan membandingkan tabungtabung tersebut dengan kontrol untuk menentukan nilai MIC (Minimum Inhibitory Concentration) dan MBC dari masing-masing bahan coba. Tabung dengan kekeruhan yang mulai tampak jernih untuk setiap kelompok perlakuan yang merupakan MIC dan MBC diambil 1ose (10µ) untuk setiap konsentrasi lalu digoreskan pada media blood agar, dilakukan 6 kali pengulangan pada tiap konsentrasi, setelah itu diinkubasi dengan suhu 37ºC selama 18-24 jam. Dilakukan perhitungan jumlah koloni bakteri dengan prinsip 1 sel bakteri hidup dibiakan pada media padat akan tumbuh menjadi 1 koloni bakteri. Perhitungannya adalah bentuk koloni melebar dianggap berasal dari 1 koloni, bentuknya 2 koloni bersinggungan dianggap sebagai 2 koloni.Satuan yang dipakai adalah CFU/ml cairan (suspensi). Setelah dihitung jumlah koloni bakteri pada masing-masing tetesan, kemudian dibuat jumlah rata-ratanya dan dikalikan dengan faktor pengenceran dan faktor pengali. Oleh karena itu, karena pada penelitian konsentrasi yang dilakukan perhitungan jumlah koloni bakteri merupakan konsentrasi awal (sebelum dilakukan dilusi) maka faktor pengenceran x 1, selain itu karena pada penetesan suspensi bahan coba dan bakteri pada media padat sebanyak 50μl, maka hasil perhitungan harus dikali dengan faktor pengali 20 untuk mendapatkan hasil sesuai satuan standard (CFU/ml).
32
4.10 Analisis Data Pada data hasil penelitian tersebut tidak dilakukan uji secara statistik karena bakteri mati seluruhnya (0 CFU/ml), artinya tidak dijumpai pertumbuhan bakteri dalam media perbenihan atau bakteri yang berkontak dengan bahan coba 100% mengalami kematian.
BAB V HASIL PENELITIAN 5.1 Ekstraksi Buah Mahkota Dewa Dalam penelitian ini didapatkan ekstrak kental buah mahkota dewa.Kemudian dilakukan pengenceran dengan menggunakan akuades sehingga didapatkan ekstrak buah mahkota dewa berwarna kecoklatan.Disimpan di dalam botol kaca yang ditutup plastik bening dan disimpan di lemari pendingin dengan suhu 2-8ºC.
Gambar 5.1 : Ekstrak kental buah mahkota dewa
5.2 Uji Identifikasi Fitokimia 33
34
Uji ini dilakukan bertujuan untuk mengetahui apakah di dalam ekstrak buah mahkota dewa terkandung zat yang mengandung antibakteri.Sampel uji dalam penelitian ini adalah ekstrak kental buah mahkota dewa yang belum di encerkan.Pembuatan larutan dilakukan dengan melarutkan 500 mg ekstrak dalam 10 ml metanol.Zat antibakteri yang di uji identifikasi fitokimia adalah minyak atsiri, flavonoid, saponin, tanin, alkaloid, fenol, glikosida, steroid dan triterpenoid. 5.2.1 Pemeriksaan Minyak Atsiri Ekstrak yang diperoleh ditambah dengan etanol, bila berbau enak/aromatik larutan alkoholik tersebut diuapkan kembali hingga kering.Bila residu tetap berbau aromatik, menunjukan ekstrak positif mengandung atsiri. Hasil :terjadi bau aromatik (positif mengandung minyak atsiri). 5.2.2 Pemeriksaan Flavonoid Reaksi Pew : Sebanyak 1 ml larutan ekstrak uji diuapkan, dibasahkan sisanya dengan aseton P, ditambahkan sedikit serbuk halus asam borat P dan serbuk halus asam oksalat P, dipanaskan hati-hati di atas tangas air dan dihindari pemanasan berlebihan. Sisa yang diperoleh dicampur dengan 10 ml eter P. diamati dengan sinar UV366, larutan berflouresensi kuning intensif, menunjukan adanya flavonoid. Hasil : terbentuk warna kuning intensif (positif mengandung flavonoid).
35
Gambar 5.2 : Larutan Flavonoid 5.2.3 Pemeriksaan saponin Sebanyak 2 ml larutan ekstrak uji dalam tabung reaksi ditambahkan dengan 10 ml aquades kemudian dikocok vertikal selama 10 detik.Pembentukan busa setinggi 1-10 cm yang stabil selama tidak kurang dari 10 menit, menunjukan adanya saponin.Pada penambahan 1 tetes HCL 2N, busa tidak hilang. Hasil : terbentuk busa yang stabil (positif mengandung saponin).
36
Gambar 5.3 : Larutan Saponin 5.2.4 Pemeriksaan Alkaloid Sebanyak 2 ml larutan ekstrak uji diuapkan diatas cawan porselin hingga didapat residu.Residu kemudian dilarutkan dengan 5 ml HCL 2N.Larutan yang didapat kemudian dibagi ke dalam 5 tabung reaksi.Tabung pertama ditambahkan dengan asam encer yang berfungsi sebagai blanko.Tabung kedua ditambahkan pereaksi Dragendorf sebanyak 3 tetes.Tabung ketiga ditambahkan pereaksi Mayer sebanyak 3 tetes.Tabung keempat ditambahkan pereaksi Wagner sebanyak 3 tetes.Tabung
kelima
ditambahkan
pereaksi
Bouchardat
sebanyak
3
tetes.Terbentuknya endapan jingga pada tabung kedua dan endapan kuning pada tabung ketiga menunjukan adanya alkaloid. Hasil : tidak terbentuk endapan (negatif alkaloid).
37
Gambar 5.4 : larutan alkaloid 5.2.5 Pemeriksaan fenol Sebanyak 2 ml larutan uji ditambahkan 3 tetes FeCl3 10%.Terbentuk warna hitam pekat menunjukan adanya fenol. Hasil : terbentuk warna hitam pekat (positif mengandung fenol).
Gambar 5.5 : Larutan Fenol
38
5.2.6 Pemeriksaan tanin Sebanyak 2 ml larutan uji ditambahkan 2 tetes larutan FeCl3 2%.Terbentuk warna biru kehitaman menunjukan adanya tanin. Hasil : terbentuk warna biru kehitaman (positif mengandung tanin).
Gambar 5.6 : larutan tannin 5.2.7 Pemeriksaan steroid dan triterpenoid Dilakukan dengan reaksi Liebarmann-Burchard.Sebanyak 2 ml larutan uji diuapkan dalam cawan penguap. Residu dilarutkan dengan 0,5 ml kloroform, kemudian ditambahkan 0,5 ml asam asetat anhidrat. Selanjutnya ditambahkan 2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung.Terbentuknya cincin kecoklatan atau violet pada perbatasan larutan menunjukan adanya triterpenoid, sedangkan bila muncul cincin biru kehijauan menunjukan adanya steroid.
39
Hasil : tidak terbentuk cincin berwarna biru kehijauan (negatif mengandung steroid), dan terbentuk cincin coklat (positif mengandung triterpenoid).
Gambar 5.7 : larutan triterpenoid 5.2.8 Pemeriksaan Glikosida Sebanyak 2 ml larutan uji 2 ml asam asetat anhidrat, dilanjutkan dengan penambahan asam sulfat pekat.Terbentuk larutan berwarna hijau kebiruan menunjukan adanya glikosida. Hasil : terbentuk warna hijau kebiruan (positif mengandung glikosida).
40
Gambar 5.8 : larutan glikosida
5.3 Uji Efektivitas Antibakteri Pengujian daya antibakteri dilakukan dengan mengamati perubahan kekeruhan pada tiap konsentrasi bahan coba (7%, 8%, 12,5%). Metode yang digunakan adalah metode pengenceran ganda (dilusi) untuk mengetahui MIC dan MBC bahan coba.Perubahan yang terjadi ditandai dengan hasil biakan mulai tampak jernih bila dibandingkan dengan kontrol positif (suspensi bakteri dengan kekeruhan setara 108CFU/ml yang diinkubasi 24 jam).Kontrol negatif digunakan untuk mengetahui tingkat kejernihan konsentrasi ekstrak + suspensi bakteri setelah diinkubasi 24 jam.
41
Gambar 5.9 : suspensi bakteri mix saluran akar gigi setelah berkontak dengan bahan coba pada berbagai konsentrasi.
Gambar 5.10 : hasil biakan mulai tampak jernih bila dibandingkan dengan kontrol positif.
Selanjutnya dilakukan penghitungan jumlah koloni bakteri menggunakan media blood agar yang bertujuan untuk membuktikan bahwa tingkat kekeruhan pada
42
setiap konsentrasi menunjukkan kemampuan bahan coba membunuh bakteri sebesar 99% - 100%, yang disebut dengan MBC. Hasil jumlah koloni pada setiap konsentrasi juga dibandingkan dengan jumlah koloni yang terdapat pada kontrol positif.
Gambar 5.11 : Hasil pengujian antibakteri ekstrak buah mahkota dewa 7%, 8%, 12,5% pada media blood agar.
Dari hasil pengujian antibakteri ekstrak buah mahkota dewa, pada konsentrasi 7%, 8%, 12,5 % senilai 0 CFU/ml, dimana tidak terlihat adanya pertumbuhan bakteri dalam media perbenihan yang ditandai dengan tidak terbentuknya lagi koloni bakteri pada media blood agar, seperti terbentuknya koloni bakteri pada kontrol positif. Jadi bakteri mix saluran akar gigi mengalami kematian.
43
Tabel 5.1 Perhitungan jumlah bakteri untuk bahan coba ekstrak buah mahkota dewa NO
PARAMATER
1
Hasil Hitung Bakteri
HASIL UJI
a. Konsentrasi 7%
2
- Ulangan 1
0 CFU/ml (steril)
- Ulangan 2
0 CFU/ml (steril)
- Ulangan 3
0 CFU/ml (steril)
- Ulangan 4
0 CFU/ml (steril)
- Ulangan 5
0 CFU/ml (steril)
- Ulangan 6
0 CFU/ml (steril)
b. Konsentrasi 8%
- Ulangan 1
0 CFU/ml (steril)
- Ulangan 2
0 CFU/ml (steril)
- Ulangan 3
0 CFU/ml (steril)
- Ulangan 4
0 CFU/ml (steril)
- Ulangan 5
0 CFU/ml (steril)
- Ulangan 6
0 CFU/ml (steril)
44
3
c. Konsentrasi 12,5%
- Ulangan 1
0 CFU/ml (steril)
- Ulangan 2
0 CFU/ml (steril)
- Ulangan 3
0 CFU/ml (steril)
- Ulangan 4
0 CFU/ml (steril)
- Ulangan 5
0 CFU/ml (steril)
- Ulangan 6
0 CFU/ml (steril)
Keterangan : dari tabel terlihat bahwa pada konsentrasi 7%, 8%, 12,5% setelah dilakukan 6 kali pengulangan pada tiap konsentrasi hasil nya 0 CFU/ml = steril atau tidak dijumpai pertumbuhan bakteri. Nilai minimum yang ditunjukkan pada bahan coba adalah konsentrasi 7% yaitu 0 CFU/ml. Data hasil penelitian ini tidak dapat dilakukan uji secara statistik karena nilai perhitungan koloni bakteri adalah 0 yang artinya tidak dijumpai pertumbuhan bakteri dalam media perbenihan atau bakteri yang berkontak dengan bahan coba 100% mengalami kematian.
BAB VI PEMBAHASAN Penelitian mengenai ekstrak buah mahkota dewa terhadap bakteri mix saluran akar gigi adalah untuk membuktikan bahwa ekstrak buah mahkota dewa memiliki efek antibakteri dalam hal menghambat pertumbuhan bakteri mix saluran akar gigi. Penelitian ini diawali dengan pembuatan ekstrak buah mahkota dewa dengan konsentrasi 7%, 8%, 12,5%. Penggunaan konsentrasi ekstrak buah mahkota dewa tersebut dikarenakan pada penelitian Lusiana Beatrice, tahun 2010, menggunakan konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5% dan 6,25%. Dari hasil penelitian terbukti bahwa bahan coba ekstrak etanol buah mahkota dewa memiliki efek antibakteri terhadap bakteri E.faecalis dilihat dari konsentrasi MIC dan MBC bahan tersebut yaitu pada konsentrasi 12,5%. Sedangkan pada konsentrasi 6,25% yang telah dilakukan pengenceran akan semakin mengurangi daya hambat terhadap pertumbuhan bakteri dilihat dari terbentuknya koloni bakteri 56x2x109 CFU/ml. Akan tetapi, kemungkinan masih adanya konsentrasi lain diantara 6,25% - 12,5% yang dapat membunuh E.faecalis. padapenelitian ini menggunakan konsentrasi diantara 6,25% 12,5%, yaitu 7%, 8%, 12,5% dilakukan pada bakteri mix saluran akar gigi. Buah mahkota dewa yang dipergunakan sebanyak 1600 gram karena diperkirakan akan dapat menghasilkan ekstrak kental buah mahkota dewa yang cukup untuk melakukan pengujian antibakteri terhadap bakteri mix saluran akar gigi. Ekstraksi
buah
mahkota
dewa
dilakukan
45
dengan
menggunakan
pelarut
46
metanol.Metode ekstraksi yang dipilih adalah maserasi, karena pelaksanaannya sederhana serta untuk mengurangi kemungkinan terjadinya penguraian zat aktif yang terkandung dalam buah mahkota dewa oleh pengaruh suhu, karena dalam maserasi tidak ada proses pemanasan. Tujuan maserasi adalah untuk memberi kesempatan pada simplisia berdifusi ke dalam pelarut (Beatrice, 2010) Berdasarkan penelitian dan acuan pustaka yang ada telah menyebutkan bahwa tanaman marga Phaleria umumnya memiliki aktifitas antibakteri.Senyawa aktif mahkota dewa yang berkhasiat sebagai antibakteri adalah saponin, alkaloid, flavonoid, tannin, fenol, dan minyak atsiri.Untuk membuktikan bahwa adanya senyawa aktif tersebut di dalam buah mahkota dewa, maka dilakukan uji identifikasi fitokimia terhadap ekstrak kental buah mahkota dewa. Hasil uji identifikasi fitokimia menunjukan bahwa senyawa saponin, flavonoid, Minyak atsiri, Fenol, tanin yang positif terdapat pada ekstrak buah mahkota dewa, sedangkan alkaloid negatif.Saponin (fitonutrien), sering disebut “deterjen alam”, senyawa ini juga bersifat antibakteri dan antivirus (Beatrice, 2010).Fenol diketahui memiliki aktivitas antimikroba yang bersifat bakterisida namun tidak bersifat sporisida.Dengan mendenaturasi protein dan merusak membran sel bakteri serta aktif pada pH asam (Pratiwi. 2008 cit. Widya 2013). Flavonoid beperan sebagai antibakteri dengan cara membentuk senyawa kompleks terhadap protein ekstraseluler yang mengganggu integritas membran bakteri. Minyak atsiri bersifat antibakteri karena efeknya dapat mengganggu pembentukan membran atau dinding sel sehingga tidak terbentuk atau pembentukannya tidak sempurna (Siregar,
47
2011). Selain itu tanin juga mempunyai daya antibakteri dengan cara mempresipitasi protein (Masduki. 1966 cit. Siregar 2011). Pada uji identifikasi fitokimia buah mahkota dewa tersebut juga ditemukan hasil positif pada glikosida dan triterpenoid, sedangkan negatif pada steroid.Glikosida merupakan gugus aminoglikosida yang bersifat antibiotik. Senyawa ini akan berdifusi pada dinding sel bakteri dan proses ini berlangsung lama dan terus menerus dalam suasana aerob. Setelah masuk ke dalam sel, kemudian diteruskan pada ribosom yang menghasilkan protein, sehingga akan menimbulkan gangguan pada proses sintesa protein dan selanjutnya akan menyebabkan terjadinya pemecahan ikatan protein sel bakteri (Hayati, 2009). Senyawa steroid dan triterpenoid menghambat pertumbuhan bakteri dengan mekanisme penghambatan terhadap sintesis protein karena terakumulasi dan menyebabkan perubahan komponen-komponen penyusun sel bakteri.Senyawa terpenoid mudah larut dalam lipid, sifat inilah yang mengakibatkan senyawa ini mudah menembus dinding sel bakteri gram positif dan negatif (Ferawaty dkk. 2012 cit Azmi 2013). Uji aktivitas antibakteri pada dasarnya dapat dilakukan melalui dua cara, yaitu metode difusi cakram dan metode dilusi. Pada metode difusi cakram, penilaian aktivitas antibakteri dilihat dari pengukuran zona inhibisi yang dipengaruhi kelarutan dan difusi bahan yang diuji sehingga kurang efektif dalam menginhibisi mikroorganisme. Sedangkan metode dilusi oleh Fereira et al., 2002 telah dilakukan untuk mengamati aktivitas antibakteri, karena bahan coba langsung berkontak dengan mikroorganisme dan langsung diperoleh nilai MIC dengan mengamati perubahan
48
kekeruhan suspensi setelah diinkubasi 37°C selama 24 jam dan MBC dari bahan coba dengan perhitungan jumlah bakteri pada media blood agar sehingga hasil penelitian akan lebih representatif (Kere, 2011). Efek antibakteri bahan coba dilihat dari besar nilai MIC dan MBC bahan coba terhadap pertumbuhan bakteri dengan jumlah bakteri harus sama untuk setiap perlakuan sesuai dengan standar 0,5Mc Farland. Suspensi standar 0,5Mc Farland adalah suspensi yang menunjukkan konsentrasi kekeruhan bakteri sama dengan 108 CFU/ml (Siregar, 2011). Maka suspensi bakteri dibuat terlebih dahulu kemudian disesuaikan kekeruhannya dengan 0,5Mc Farland. Setelah dilakukan pengujian nilai MIC dan MBC dalam berbagai konsentrasi, tidak dijumpai adanya pertumbuhan bakteri (steril atau 0 CFU/ml) pada konsentrasi 7%, 8%, dan 12,5%, yang artinya pada konsentrasi tersebut memberikan daya antibakteri. Nilai minimum yang ditunjukkan pada bahan coba adalah konsentrasi 7% yaitu 0 CFU/ml, maka ditentukan sebagai nilai MIC dan MBC. Berdasarkan penelitian-penelitian sebelumnya dan acuan pustaka yang ada menyebutkan bahwa buah mahkota dewa memiliki kandungan saponin, alkaloid, flavonoid, tannin, fenol, dan minyak atsiri.Dari hasil uji fitokimia didapatkan negatif pada alkaloid dan steroid.Tetapi pada uji identifikasi fitokimia buah mahkota dewa tersebut juga ditemukan hasil positif pada glikosida dan triterpenoid. Jadi pada penelitian ini ekstrak buah mahkota dewa dengan konsentrasi 7% efektif sebagai antibakteri pada bakteri mix saluran akar gigi, walaupun tidak terdapat dua kandungan buah mahkota dewa yaitu alkaloid dan steroid. Glikosida dan triterpenoid
49
merupakan antibakteri. Glikosida bekerja pada dinding sel bakteri dan proses sintesa protein yang menyebabkan terjadinya pemecahan ikatan protein sel bakteri, sedangkan triterpenoid bekerja padapenghambatan sintesis protein dan mudah larut dalam lipidyang mengakibatkan triterpenoid mudah menembus dinding sel bakteri gram positif dan negatif. Ditemukannya dua kandungan zat pada penelitian ini dibandingkan dengan penelitian sebelumnya, sehingga dengan konsentrasi yang lebih rendah pun dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Penelitian lainnya mengenai mahkota dewa, pada penelitian Lusiana Beatrice, tahun 2010, yang menguji daya antibakteri ekstrak etanol buah mahkota dewa terhadap Enterococcus faecalis terdapat MIC dan MBC berada pada konsentrasi yaitu 12,5%. Ekstrak etanol buah mahkota dewa juga memiliki daya antibakteri yang menghambat pertumbuhan Streptococcus mutans. Efek antibakteri dinilai dari nilai KHM dan KBM yang terdapat pada ekstrak etanol buah mahkota dewa pada konsentrasi 6,25% dengan jumlah koloni 0 CFU/ml (Siregar, 2011). Penelitian lain tentang infusa daun mahkota dewa juga memiliki daya antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dengan KHM 3,125 gram% dan KBM 6,25 gram% (Suryani dan Stepriyani, 2007). Maka dari itu dapat menjadi pertimbangan pengembangan ekstrak mahkota dewa tersebut sebagai bahan alternatif sterilisasi saluran akar gigi.
BAB VII SIMPULAN DAN SARAN 7.1 SIMPULAN Dari penelitian eksperimental yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan bahwa ekstrak buah mahkota dewa memiliki daya antibakteri serta mampu menghambat dan membunuh pertumbuhan bakteri mix saluran akar gigi. Konsentrasi 7%, 8%, 12,5% ekstrak buah mahkota dewa memiliki efektivitas antibakteri sebagai bahan alternatif sterilisasi saluran akar gigi terhadap bakteri mix saluran akar gigi.
7.2 SARAN Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk menyempurnakan penelitian ini, yaitu : 1. Hendaknya dapat dilakukan penelitian ekstrak buah mahkota dewa dengan konsentrasi dibawah 7% untuk mengetahui nilai MBC. 2. Hendaknya dapat dilakukan perbandingan ekstrak buah mahkota dewa dengan Ca(OH)2 bahan medikamen yang paling sering digunakan. 3. Hendaknya dapat dilakukan perbandingan ekstrak buah mahkota dewa dengan ekstrak dari bahan alami lainnya.
50
51
DAFTAR PUSTAKA Agustin, D. W. 2005, Perbedaan khasiat antibakteri bahan irigasi antara hydrogen peroksida 3% dan infusum daun sirih 20% terhadap bakteri mix, Majalah Kedokteran Gigi. (Dent. J.), Vol. 38. No. 1. Hal 45-47. Agustina, N. 2011, Efek Antibakteri Ekstrak Etanol Aloe Vera Terhadap Enterococcus Faecalis Secara in Vitro, Skripsi, Universitas Sumatera Utara, Medan. Amalia, S. 2012, Efek Antibakteri Ekstrak Etanol Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban) sebagai Alternatif Medikamen Saluran Akar terhadap Porphyromonas gingivalis (Secara In-Vitro), Skripsi, Universitas Sumatera Utara, Medan. Aswal, D., Beatrice, L. 2010, Efek Antibakteri Ekstrak Buah Mahkota Dewa Terhadap Enterococcus faecalis Sebagai Medikamen Saluran Akar. Dentika Dental Journal, Vol. 15. No. 1. Hal 32-36. Azmi, N. 2013, Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Serta Fraksi-Fraksi Bunga Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.) terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Klebsiella pneumonia, Skripsi, Universitas Sumatera Utara, Medan. Beatrice, L. 2010, Daya Antibakteri Ekstrak Buah Mahkota Dewa (Phaleria Macrocarpa.Scheff ( Boerl.)) Terhadap Enterococcus Faecalis Sebagai Bahan Medikamen Saluran Akar Secara In Vitro, Skripsi, Universitas Sumatera Utara, Medan. Dewi, S. 2011, Pengaruh Bahan Sterilisasi Kalsium Hidroksida Dengan Segmen Pencampur Berbeda Terhadap Perubahan Kekerasan Mikro Dentin Pada Tiga Saluran Akar Yang Berbeda, Tesis, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Grossman, L. I., Oliet, S., dan Rio, C. E. D. 1995, Ilmu Endodontik Dalam Praktek, Ed ke-11, Jakarta, EGC. Hal 248-263. Hayati, K. 2009, Efek Antibakteri Ekstrak Lidah Buaya (Aloe vera) Terhadap Staphylococcus aureus yang Diisolasi dari Denture Stomatitis (Penelitian In Vitro), Skripsi, Universitas Sumatera Utara, Medan. Kere, M. 2011, Daya atibakteri ekstrak etanol buah mahkota dewa (Phaleria Macrocarpa [Scheff.]Boerl.)terhadap Fusobacterium nucleatum sebagai bahan medikamen saluran akar secara in vitro, Skripsi, Universitas Sumatera Utara, Medan. Manganti, I. 2011, 37 Resep Ampuh Tanaman Obat Untuk Menurunkan Kolesterol Dan Mengobati Asam Urat, Araska, Hal 110.
52
Rohyami Y. 2008, Penentuan Kandungan Flavonoid dari Ekstrak Metanol DagingBuah Mahkota Dewa.Jurnal Logika, Vol. 5. No.1. Hal 1-16. Siregar, B. 2011, Daya Antibakteri Ekstrak Buah Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa [Scheff.]Boerl) terhadap Pertumbuhan Streptococcus mutans (in vitro), Skripsi, Universitas Sumatera Utara, Medan. Soeksmanto, A. 2006, Pengaruh Ekstrak Butanol Buah Tua Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa) terhadap Jaringan Ginjal Mencit (Mus musculus).J Biodiversitas, Vol. 7.No. 3. Hal 278-281. Soeksmanto, A., Hapsari, Y., Simanjuntak, P. 2007, Kandungan Antioksidan pada Beberapa Bagian Tanaman Mahkota Dewa, Phaleria macrocarpa (Scheff) Boerl.(Thymelaceae). J Biodiversitas, Vol. 8. No. 2. Hal 92-95. Suryani, L., Stepriyani, S. 2007, Daya Antibakteri Infusa Daun Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa) terhadap Staphylococcus aureus dan Eschericia coli.Jurnal Mutiara Medika, Vol. 5. No. 1. Hal 23-28. Sutanto, T. 2013, Asam Urat Deteksi Pencegahan Pengobatan, Yogyakarta, Buku Pintar, Hal 95-96. Tarigan, R. 2006, Perawatan Pulpa Gigi (Endodonti), Ed ke-2, Jakarta, EGC. Hal 2385. Walton, R. dan Torabinejad, M. 2008, Prinsip dan Praktik Ilmu Endodonsia, Ed. Ke3, Jakarta, EGC. Hal 315-326. Widya, RD. 2013, Aktifitas Antimikroba Ekstrak Biji Teratai (Nymphaea pubescens L) terhadap Bakteri Aeromonas hydrophila, Streptococcus Agalactiae dan Jamur Saprolegnia sp, Skripsi, Universitas Sumatera Utara, Medan. Widrayani, B. 2013, Efektifitas Antibakteri Bahan Sterilisasi Saluran Akar Gigi Ekstrak Lidah Buaya (Aloe Vera) 12,5% Lebih Tinggi Daripada CHKM, Skripsi, Universitas Mahasaraswati, Bali. Wijoyo, M. 2012, Cara Tuntas Menyembuhkan Diabetes Dengan Herbal, Jakarta, Pustaka Agro Indonesia, Hal 90-93.
53
LAMPIRAN
54
(Serbuk Halus Ekstrak Mahkota Dewa) (Penyaringan Ekstrak Mahkota Dewa)
(Rotary Evaporator)
(Hasil Pembiakan Bakteri Mix)
55
(pencampuran ekstrak + suspensi bakteri pada tabung reaksi)
(Penggoresan bahan coba pada media blood agar)
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
