Anti-CCP mérése során szerzett tapasztalataink Geider Viola,Piros Alfrédné Baranya Megyei Kórház Klinikai és Mikrobiológiai Laboratórium
MOLSZE Kongresszus Pécs 2009
Bevezetı
A rheumatoid arthritis (RA) korai felismerése döntı jelentısségő a betegség prognózisa szempontjából. Korábban a reumatoid faktort (RF), ma az anticitrullinált peptideket tekintjük a betegség legjobb laboratóriumi indikátorainak. Míg a citrullinált fehérjék számos gyulladásos betegségben megjelenhetnek, az anti-CCP (anticiklikus citrullinált peptid) antitestek szinte kizárólag a rheumatoid arthritisben mutathatók ki. Szérumszintje összefüggést mutat a betegség aktivitásával, és rendkívül nagy specifitású a rheumatoid arthritisre.
Tartalom
Rheumatoid arthritis (RA) Diagnosztika Anti-CCP Módszer, teszt Eredmények Következtetések
A rheumatoid arthritis
Sokizületi gyulladás Izület nehéz mozgathatóságával, fájdalommal jár Jellemzıen a felnıttkor (35-50) megbetegedése, de van fiatalkori is Népesség kb.1 %-t érinti Nıknél 2-3 x gyakoribb
Hét kritérium (1987) a RA diagnosztikájában (klinikum, laboratórium, képalkotó)
Legalább 3 izület érintettsége Szimmetrikus izületi érintettség Kézizületi érintettség Szubkután (reumás) csomó RF pozitivitás Rtg: malignitás és/vagy sávos porózis Reggeli izületi merevség >1 óra
Laboratóriumi diagnosztika • Antitestek: •Rheumatoid faktor (RF): a 7 RA kritérium egyike •Anti-CCP • Gyulladásos aktivitást jelzı markerek: We, CRP • Vérkép: leukocytosis, thrombocytosis normokróm krónikus vashiányos anaemia se Fe: extrém ⇓, ferritin: ⇑, transzferrin-szaturáció: ⇑
Anti-ciklikus-citrullinált peptid (anti-CCP) • Kémiailag: citrullin tartalmú peptidek ellen képzıdı antitestek. • Ide tartozó antitestek (szinonimák): -Anti-Sa: a vimentin citrullinált formája -anti-fillaggrin antitestek (AFA) -anti-perinukleáris faktor (APF) -anti-keratin (AKA) -Anti-CCP
Citrullin keletkezése
Argininból jön létre PAD (peptidil-arginindeimináz) enzim segítségével Egy nitrogén tartalmú csoport leválásával CP=citrullin tartalmú lineáris peptidek CCP=CP ciklikus változása
Pathomechanizmus
Módszer: AxSYM Anti-CCP
Kétlépéses, chemiluminescent microparticle immunoassay (CMIA) IgG típusú, ciklikus citrullinált peptid ellenes auto-At kimutatása Szemikvantitatív teszt Standard (6 pontos) kalibráció Teszt dinamikus range: 0,5 - 200 U/mL, automata higítási módban: 2000 u/mL Javasolt cutoff: 5 U/mL Analitikai szenzitivitás:≥ 1U/mL
Páciens minták
Egy év távlatában, reumatológiai szakrendeléseken megjelent betegek mintáit vizsgáltuk A betegek reumás panaszokkal fordultak orvoshoz, és a szokványos orvosi ellátásban részesültek A páciensek többségénél 3-5 mintavétel is történt a megfigyelés periódusában Mintatípus: szérum, feldolgozásig -20oC-on tárolva
Mérések
63 beteg mintáiból összesen 151 mérést végeztünk 14 férfi és 49 nı Férfiak 33-78 évesek Nık 18-77 évesek A betegek harmadánál ismételt mintavétel történt
Teszt precizitás I. (Irodalmi adatok)
5 U/mL (cutoff) értékő kalibrátor adatai (n=80) „intra-run” CV% = 6,9 „total” CV% = 9,3
Pozitív kontroll (Mean: 25,6 U/mL) n=80 „intra-run” CV% = 6,6 „total” CV% = 8,3
Magas minta (Mean: 149,7 u/ml) n=80 „intra-run” CV% = 7,1 „total” CV% = 8,5
Teszt precizitás (saját adatok)
Negatív kontroll (≤3,0 U/mL) n = 26 Min: Max: Mean: SD:
0,0 0,4 0,2 0,1
Pozitív kontroll (14,0 – 34,0 U/mL, Mean: 24,0) n = 26 Min: 21,1 Max: 25,5 Mean: 23,1 SD: 1,2 CV% = 5,19
Eredmények
Cutoff érték alatt: 26 beteg Cutoff érték felett: 36 beteg Cutoff érték „körül”: 1 beteg Mérési tartományon kívül (higított minták): 13 beteg Változatlan értékek: 10 beteg (többségük 5 U/mL alatt) Csökkenı értékek: 1 beteg Növekvı értékek: 5 beteg Változó értékek: 10 beteg (zömmel 200 U/mL feletti tartományban – higított minták!) Két fiatal nıbeteg (18 és 21 éves) 3-3 mintájában jelentısen emelkedı értékeket mértünk
Következtetések
A 2. generációs ABBOTT anti-CCP teszt megbízható, pontos, jól reprodukálható, kiváló QC eredményekkel Preanalitika: szokásos mintakezelési eljárás Higított minták értékelésénél figyelembe kell venni, hogy egyes minták nem hígulnak lineárisan az autoantitestek élettani-kémiai tulajdonságainak heterogenitása következtében. Általában az immunoassayknél kényes kérdés a mintahígítás!
A teszt diagnosztikai jelentısége
A 2. generációs anti-CCP módszereket tartják jelenleg a legspecifikusabb tesztnek a korai RA kimutatására Specificitásuk 95-99% között van Szenzitivitásuk a korai RA-ban 60%, a már diagnosztizált RA-ban 77% Egyes szerzık szerint az anti-CCP kimutatható évekkel az RA klinikai manifesztációja elıtt (magas prediktiv érték) Anti-CCP szint enyhe emelkedése egyéb klinikai jel nélkül nem bizonyitja az RA-t! Nemzetközi standard még nem áll rendelkezésre, ezért az eredmények interpretálása, más módszerekkel történı összevetése kellı óvatossággal történhet
Köszönöm a figyelmet!
