in vitro diagnostika

in vitro

diagnostika

Prof. Ondřej Topolčan převzal Cenu C. R. Jolliffa pro rok 2011 Optima XE a XPN Zrychlení přípravy vzorků pro sekvenátory nové generace Membránové molekuly na buňkách monocytární řady

Informační magazín IN VITRO DIAGNOSTIKA

19 - 2011

Budoucnost nových výzkumných center

P

rof. RNDr. Václav Pačes, DrSc. se narodil 2.  února  1942 v  Praze. Vystudoval Přírodovědeckou fakultu Univerzity Karlovy. V roce 1968 obhájil kandidátskou práci na Ústavu organické chemie a biochemie ČSAV. Rok pak působil na univerzitě v Chicagu a rok na McMasterově univerzitě v kanadském Hamiltonu. Přednášel rovněž na univerzitách v Yale, Seville a v Bristolu, pracoval v Ústavu aplikované biochemie v  Japonsku. Byl činný v mnoha dalších zahraničních institucích. Od roku  1976 pracuje na Ústavu molekulární genetiky (dnes AV ČR). Jeho pracovní skupina v roce 1986 dokončila genomový projekt – přečtení úplné dědičné informace bakteriálního viru. Stala se tak jednou z prvních na světě, které se to podařilo. Prof.  Pačes je objevitelem specifického enzymu zapojeného do katabolismu rostlinného hormonu cytokininu. Je také spoluautorem prvního českého syntetického genu. V roce 1989 získal Václav Pačes Státní cenu za vědu. Zároveň byl vyznamenán cenou ČSAV za popularizaci vědy. V letech 1992  –  1996 byl místopředsedou Akademie, v letech 1999 – 2005 působil jako ředitel Ústavu molekulární genetiky. Předsedá České společnosti pro biochemii a molekulární biologii a je členem prestižní Evropské molekulárně biologické organizace. Podle svých dosavadních prohlášení je zastáncem směru, jenž vidí nejdůležitější roli Akademie věd v  základním vyhledávacím výzkumu. Jaký je v současnosti stav financování vědy a výzkumu ze strany státu v porovnaní s ostatními zeměmi OECD? Je stále nižší. Sice se poslední léta financování výzkumu zvyšovalo, ale peníze tekly mj. do několika „černých děr“. Nyní navíc stagnuje. A vede to k tomu, že se naše projekty jen obtížně prosazují v  soutěži o  evropské granty, protože nedostatečné financování nutně vede k průměrným výsledkům výzkumu.

Myslím, že je třeba veřejné finance soustředit na podporu toho nejlepšího. Mnohé vysoké školy (vysoké jen podle jména) by měly být zrušeny a průmysl by měl být donucen, aby do výzkumu investoval své vlastní peníze. Je předpoklad, že se v budoucnosti změní podíl HDP vynaložený na financování AV? Velmi se obávám, že se změní v neprospěch AV. Přitom vlády neustále opakují, že se výzkumné instituce budou podporovat podle výkonnosti. Všechny objektivní ukazatele, jako je počet a  citovanost prací, udělené patenty apod., jasně ukazují, že je Akademie věd naším zdaleka nejvýkonnějším vědeckým zařízením. Například nezávislý mezinárodní žebříček 2  000  světových vědeckých ústavů řadí naši Akademii věd do první stovky. Univerzita Karlova se umisťuje kolem 200. místa, všechny ostatní české instituce jsou v  pořadí až za místem 700. Jaká jsou Vaše očekávání od nově vznikajících center jako Biocev, ELI, Ceitec a dalších? Víte, když jsou peníze, tak to nejsnazší je postavit nové budovy a vycpat je nákladnými přístroji. Daleko obtížnější je stanovit výzkumný program s  vizí a  vůbec nejtěžší je najít kvalitní lidi, kteří budou tento program formulovat a naplňovat. Když se toto povede, stanou se centra důležitou součástí naší výzkumné infrastruktury. Měly by být navíc silně orientovány na transfer vědeckých výsledků do praxe. To nám hodně chybí. Jsem optimista a věřím, že centra svou úlohu splní. Nejlépe vidím do projektu Biocev. Tam se nám podařilo dobrý program sestavit. Nesmíme však na něm ustrnout a  vlastně ho budeme muset neustále aktualizovat podle vývoje světové vědy. Jaké postavení budou mít na základě očekávání tato centra v konkurenci zahraničních renomovaných institucí?

Musí být konkurenceschopná. Jenom tak bude zájem o to s nimi spolupracovat. Jde zejména o  kooperaci v  rámci Evropy, ale ne pouze zde. Velký zájem o  součinnost s  Biocevem projevili například kolegové z Taiwanu. Kromě akademických institucí chceme spolupracovat i s bio-firmami, a to nejen v České republice. Očekává se, že budou na tyto nově vznikající instituce přicházet zahraniční vědecké kapacity? Jakým způsobem je mohou nová centra „nalákat“? Chtěli bychom, aby byla tato centra co nejvíce mezinárodní. Všechna vědecká místa budou obsazována otevřenými konkurzy. Nenamlouváme si ale, že se k  nám pohrnou kolegové z USA nebo Německa. Tato situace by mohla nastat až později, až se centra prosadí a  až budeme moci nabídnout srovnatelné podmínky platové, životní a  samozřejmě hlavně pracovní. Zpočátku asi budou přicházet kolegové z  východu. Jsou tam velmi schopní vědci, kteří mají podmínky pro práci horší, než je v současnosti u nás. Ti by nám mohli pomoci dostat centra na patřičnou úroveň. Jste velmi úzce zainteresován v projektu Biocev. Jaké bude jeho hlavní poslání a  jaké postavení by Biocev mohl reálně mít v roce 2025? Velmi bych si přál, aby byl Biocev v roce 2025 jednou z  předních evropských institucí orientovaného výzkumu v  oblasti biomedicíny a  biotechnologií. Je to reálné, ale musíme se opravdu snažit. Uvidíme, jak se nám to povede.

PROF. RNDR. VÁCLAV PAČES, DRSC. ÚSTAV MOLEKULÁRNÍ GENETIKY AV ČR VÍDEŇSKÁ 1043, 142 20 PRAHA 4 e-mail: [email protected]

EVA KRÁLOVÁ e-mail: [email protected]

2

OBSAH Úvodník: Rozhovor s Prof. Pačesem E. Králová Prof. Ondřej Topolčan převzal Cenu C. R. Jolliffa pro rok 2011 R. Kučera

2

CESI 8000 J. Smolka

4 6 8 10

Zrychlení přípravy vzorků pro sekvenátory nové generace M. Polčík

11

Nová protilátka v soupravě na stanovení estradiolu T. Tietze, I. Mičíková

13

Optima XE a XPN E. Králová Allegra X-30 E Králová

Nové monoklonální protilátky pro průtokovou cytometrii P. Kružík

Kontrolní materiály pro průtokovou cytometrii P. Kružík

13 14 15

Membránové molekuly na buňkách monocytární řady K. Koubek

17

Prediktivní, preventivní a personalizovaná medicína M. Karlíková, O. Topolčan

21

Nová reagencie pro stanovení fosfoepitopů P. Kružík

IGF1 a nádorové markery ve stádiích nádoru prsu R. Kučera Kongres ESHRE R. Kučera Uživatelské setkání Hluboká nad Vltavou K. Svobodová X. Celostátní sjezd ČSKB K. Svobodová Analytická cytometrie VI. R. Vlček Labhem a V. BHaTD J. Bernátová LaborExpo 2011 M. Máša MUDr. Tomáš Soukup – tak trochu jiný doktor... J. Petera Křížovka Kde se můžeme setkat

23 26 28 30 31 32 33 34 35 36

Informační magazín IN VITRO DIAGNOSTIKA 19 - 2011

Časopis vydává a distribuuje Beckman Coulter Česká republika s.r.o., Radiová 1, 102 27 Praha 10, www.beckman.cz Časopis připravují Ing. Kateřina Kožaná Ing. Eva Králová Ing. Hana Krátká Mgr. Pavel Kružík Ing. Kateřina Lapišová, Ph.D. Ing. Petr Suchan Mgr. Patrik Šaf RNDr. Jozef Smolka Do časopisu přispěli Ing. Eva Králová Mgr. Radek Kučera RNDr. Jozef Smolka RNDr. Martin Polčík, CSc. Mgr. Ing. Tereza Tietze Ing. Mgr. Ivana Mičíková Mgr. Pavel Kružík RNDr. Kristián Koubek, DrSc. - ÚHKT RNDr. Marie Karlíková, Ph.D. - Lékařská fakulta v Plzni Prof. MUDr. Ondřej Topolčan, CSc. - FN Plzeň Ing. Klára Svobodová Ing. Roman Vlček Mgr. Jozefína Bernátová RNDr. Martin Máša, Ph.D. Bc. Jakub Petera Ing. Kateřina Kožaná Ivan Šarkan - autor křížovky Ing. Stanislav Čermák - autor tajenky Grafik Jiří Adámek Náklad čísla 2000 výtisků

3

Prof.  Ondřej Topolčan převzal Cenu C. R. Jolliffa pro rok 2011

P

rof.  MUDr.  Ondřej Topolčan,  CSc. převzal dne  26.7.2011 v  americké Atlantě významnou Cenu C.  R.  Jolliffa pro rok  2011 za svou celoživotní práci v  oboru klinické a  diagnostické imunologie. Tohoto uznání se mu dostalo na výročním zasedání Americká asociace klinické chemie (AACC). Ocenění je udělováno členům AACC za vynikající výsledky v  oboru klinické imunologie a  na poli výuky a  je spojeno s  prémií ve výši 2 000 USD. Uvedenou významnou cenu, založenou v  roce  2006, dosud obdrželo pět amerických a  jeden kanadský profesor. Prof.  Topolčan je prvním mimoamerickým nositelem tohoto ocenění. Prof.  MUDr.  Ondřej Topolčan,  CSc. je absolventem plzeňské lékařské fakulty, na níž také v  roce  1967 odpromoval. Po ukončení vysokoškolského studia nastoupil na Interní kliniku Lékařské fakulty UK a  Fakultní nemocnice v Plzni. V roce 1972 se stal odborným asistentem, v roce 1986 habilitoval a v roce 1993 byl jmenován profesorem vnitřního lékařství. Specializaci 1.  stupně z  vnitřního lékařství získal v roce 1972, specializaci 2. stupně pak v roce 1976. Od roku  1993 pracuje jako vedoucí imunoanalytické laboratoře ve FN v  Plzni. V  letech 1996 – 2000 byl přednostou II.  interní kliniky  LF UK a  FN v  Plzni. Od roku  1994 až do současnosti je členem Vědecké rady LF.

4

Od roku  1997 působil každé dva roky coby předseda Českých imunoanalytických dnů. Je vlastníkem členské karty v European Group on Tumour Markers. Od roku 2001 je též náměstkem ředitelky FN  v  Plzni pro vědu a  výzkum. V  roce  2006 se stal viceprezidentem konference ISOBM v Praze. Je členem výboru České společnosti nukleární medicíny a  předsedou České společnosti pro imunoanalýzu. Zároveň je držitelem členství ve výboru EPMA (European preventive, predictive and personalized medicine). V souvislosti se získáním Ceny C. R. Jolliffa jsme se Prof. Topolčana zeptali na několik otázek: Pane profesore, můžete říci něco blížšího o  Vašich hlavních výzkumných aktivitách? V  období let  1970 – 1990 jsme prováděli preventivní prohlídky v průmyslových podnicích (vyšetřili jsme na 5 000 tamních zaměstnanců) s  cílem aktivně vyhledávat pomocí vyšetření imunoreaktivního inzulínu a lipidických parametrů osoby především s  patologickou glukózovou tolerancí, eventuálně manifestním diabetem. Jedinci s prokázanými abnormalitami byli dispenzarizováni. Výsledkem výzkumu byl již v 80. letech průkaz vztahu poruch glycidového metabolizmu s  výskytem kardiovaskulárních onemocnění.

V letech 1995 – 2000 jsem působil jako koordinátor fakultního výzkumného projektu zaměřeného na biologickou aktivitu nádorů. Na tomto úkolu se podílelo více než 150  vědeckých pracovníků. Výsledkem byla celá řada publikací, které poukazovaly na možnost optimálního využívání biomarkerů pro monitorování průběhu nádorového onemocnění a optimalizaci léčby. V  rámci tohoto záměru vnikla řada vědeckých spoluprací, z nichž většina trvá dodnes. Kromě své vědecké a  výzkumné činnosti se jistě věnujete i výuce. V jakém rozsahu? Na plzeňské lékařské fakultě přes 30 let vyučuji vnitřní lékařství. V  současné době jsou to především některé vybrané kapitoly z  endokrinologie určené jak českým, tak zahraničním studentům. Kromě toho více než 10  let přednáším o  klinickém využití imunoanalýzy. Aktuálně tvoří hlavní náplň mé pedagogické činnosti výukové kurzy v rámci strukturálních fondů EU – Endokrinologie a v září tohoto roku zahájený projekt Metody molekulární biologie a personalizovaná medicína. Více než dvacet let jsem působil jako pedagog vnitřního lékařství na Vyšší zdravotnické škole. V  zahraničí jsem na univerzitě v  Athénách přednášel o uplatnění biomarkerů v onkologii a jednou ročně rovněž vyučuji v kurzech imunoanalýzy v Berlíně.

Těžištěm Vaší práce je také po dlouhou dobu postgraduální výuka... Ano, v  období let  1990 – 2010 jsem byl školitelem deseti postgraduálních studentů, kteří úspěšně obhájili své disertace. V současné době jsem vedoucím disertačních prací šesti dalších posluchačů. Kromě toho jsem vedl diplomové práce dvou studentů z  Fakulty bioinformatiky Západočeské univerzity a  ti rovněž ukončili svá vysokoškolská studia s úspěchem. A co Vaše publikační činnost? Doposud jsem publikoval přes 250 prací v lékařských časopisech, z  toho 85  s  tzv. impact factorem. Na lékařských konferencích a  kongresech jsem přednesl přes 400  sdělení. Můj vědecký citační index činí 398 a H index 12. Jsem také spoluautorem tří monografií o imunoanalýze.

Ve FN v  Plzni vedete laboratoř imunoanalýzy. Čím se Vaše pracoviště především zabývá? V  naší laboratoři pracuje 20  zaměstnanců. Ročně zde provádíme zhruba 280  000 testů. Přibližně 50  procent z nich tvoří vyšetření endokrinologická, 40  procent vyšetření parametrů biologické aktivity nádorů a 10 procent pak nejrůznější speciální metody, především pro potřeby výzkumu. Jejich spektrum se mění výrazně v závislosti na existujících grantových projektech a  potřebách spolupracujících pracovišť. V  současné době se věnujeme třem aktuálním tématům: 1) změnám hladin vitamínu  D u  zhoubných nádorů u pacientů s neurologickými chorobami 2) významu stanovení HE  4 pro časnou diagnostiku ovariálního karcinomu 3) významu proPSA pro klinickou praxi

Na celostátním biochemickém sjezdu byly prezentovány výsledky naší studie o  tom, jak proPSA (přesněji p2PSA) pomáhá v optimalizaci indikací provádění biopsií prostaty. A co Vaše lékařská praxe? Na interní klinice jste se mnoho let věnoval endokrinologii. Zabýváte se v  současné době stále i ambulantní léčbou? Jednou týdně mě můžete potkat v ambulanci na II. interní klinice, kde se starám především o nemocné s endokrinními chorobami. Beckman Coulter Vám gratuluje k  získání ceny AACC a přeje Vám hodně úspěchů ve Vaší další práci!

RADEK KUČERA e-mail: [email protected]

POMOZTE NÁM S TVORBOU ČASOPISU IN VITRO DIAGNOSTIKA Pojďte nám, prosím, pomoci s tvorbou časopisu In Vitro Diagnostika a odpovězte nám na několik následujících otázek. Přispějete tak k tomu, že budeme moci co nejvíce přiblížit časopis obsahově i vzhledově vašim představám! ►Jak jste spokojeni s obsahovou stránkou časopisu In Vitro Diagnostika? ►Jak jste spokojeni se vzhledem časopisu In Vitro Diagnostika? ► Co se vám na našem časopise nejvíce líbí? ► Co se vám naopak nelíbí? ►Co vám v našem časopise chybí? Jaká témata, informace o produktech, zajímavých osobnostech apod. byste na stránkách IVD rádi uvítali? Své odpovědi na otázky či jakékoliv další připomínky a nápady nám zasílejte na adresu [email protected].

Děkujeme!

Informační magazín IN VITRO DIAGNOSTIKA 19 - 2011

5

Nová generace ultracentrifug Optima

U

ltracentrifugy patří mezi přístroje, které se již řadu let používají pro základní a  aplikovaný výzkum. Společnost Beckman Coulter představila svoji první komerční ultracentrifugu již v roce 1947. Od té doby zaujímá čelní pozici v  oblasti inovace těchto strojů. I  když fyzikální princip zůstává samozřejmě stejný, je stále co vylepšovat a zdokonalovat. Ultracentrifugy jsou často umístěny ve společných prostorách spolu s  jinými dalšími zařízeními, jako jsou vysokokapacitní odstředivky, hlubokomrazící boxy nebo inkubátory a  třepačky. Dohromady mohou tyto přístroje produkovat značný hluk a  spotřebovávat velké množství energie. A právě řešení uvedených problémů se odráží v další generaci ultracentrifug Optima.

Základní řada OptimaTM  XE i  prémiová řada OptimaTM  XPN jsou navrženy a  konstruovány tak, aby došlo jak ke snížení hladiny hluku, tak k poklesu spotřeby energie. Hluk je při centrifugaci způsoben rezonancí pohonné jednotky – motoru. Rezonance se při provozu obvykle projevuje jako ječivý zvuk. Nový design má za následek výrazný úbytek těchto zvukových ozvěn, čímž je eliminována většina hluku spojeného s provozem ultracentrifugy. Zmíněný průlom v inovaci vyústil dokonce v podání patentové přihlášky.

Samotné zdokonalení spočívá ve dvou základních změnách v  konstrukci ultracentrifugy. První je její vyztužení, což by ale samo osobě nestačilo. Druhou důležitou změnu představuje nový design motoru. Motor vytváří při provozu teplo, proto jsou jeho součástí chladící žebra. Ta byla dříve všechna naprosto stejná. Nyní má každé z nich jiný tvar a to jim dává unikátní rezonanční kmitočet. V  praxi to pak znamená, že buď žádné nebo jen velmi malý počet žeber rezonuje v dané provozní rychlosti., nikoliv tedy jako dříve, kdy všechna rezonovala současně. Dalším důležitým úkolem, který stál před konstruktéry, bylo efektivní využití a  snížení spotřeby energie. Inovační pracovníci zkoumali spotřebu energie v každém provozním režimu, to znamená při zrychlování, rovnovážném stavu po dosažení dané rychlosti, brzdění a zej​ména v  případě, kdy je sice přístroj zapnutý, avšak není používán. Nejzajímavějšími se ukázaly být dva režimy. První je režim brzdění, kdy rotor z plné rychlosti zpomaluje až na 0 rpm. Druhý pak v klidovém stavu. Nové ultracentrifugy série Optima byly navrženy tak, aby byla část energie vrácena zpět do sítě pomocí tzv. regenerativního brzdění a zároveň aby minimalizovaly spotře-

6

bu energie, pokud je přístroj v  klidovém stavu. Byla provedena série experimentů, a to jak u  našich stávajících ultracentrifug OptimaTM  L-100K, OptimaTM  L-100  XP, ale také u  kon-

kurenční Hitachi  WX100. Pokusy ukázaly, že OptimaTM  XE a  XPN mají o  56  % nižší spotřebu energie v klidovém módu než současná OptimaTM L-100 XP, o 23 % nižší než OptimaTM L-100K a  o  33  % nižší než Hitachi  WX100. Vzhledem k dlouhé životnosti ultracentrifug to znamená výrazné snížení nákladů na provoz a minimální dopad na životní prostředí. To jsou však pouze technické inovace. Nové ultracentrifugy prošly také výraznou změnou designu a  mají řadu důležitých vylepšení pro snadnější obsluhu a  ovládání. Nejzásadnější změnou je velká 17-ti palcová dotyková ob-

razovka, která umožňuje zobrazovat více informací najednou s nejdůležitějšími parametry viditelnými až z  druhého konce místnosti. Ovládací software je velmi intuitivní. V případě potřeby lze zobrazit interaktivní nápovědu ke každému tlačítku. Kromě zobrazení aktuálních hodnot otáček, teploty nebo zbývajícího času separace je možné tyto hodnoty vidět v  přehledné grafické formě, jež zaznamenává celý průběh chodu centrifugy. Prémiové modely XPN nabízí další doplňky. Jedním z nich je připojení centrifugy k internetu. Díky tomu může být vzdáleně ovládá-

na a monitorována z jakéhokoli počítače nebo i  tzv.  chytrého telefonu, a  to nejen na pracovišti, ale rovněž např. z domova. Můžete se tak více soustředit na jinou práci a  nezdržovat se odbíháním a  kontrolováním aktuálního stavu přístroje. Přístup k  ovládání je zabezpečen vytvořením uživatelských účtů s volitelnými úrovněmi správy přístroje. eXpert software u modelů XPN dovoluje uživateli offline simulace průběhu a  modelování optimálních podmínek separace v  gradientech nebo prosté peletace. Obsažena je rovněž databáze všech rotorů a  kompatibilních zkumavek, včetně jejich chemické odolnosti. Dále je možné přepočítávat podmínky separace pro různé rotory a zkumavky nebo zjišťovat sedimentační koeficienty biomolekul. Samozřejmostí je zaznamenávání a export historie užívání přístroje, který je aktuálně rozšířen také o správu rotorů podle sériových čísel. Export může probíhat ve formě souboru na USB flash disk, nebo se může rovnou vytisknout na síťové tiskárně. Pokud by některým uživatelům nevyhovovalo ovládání přes dotykovou obrazovku, může si do USB portu centrifugy připojit klasickou počítačovou myš. Centrifugy byly zkrátka navrženy tak, aby splňovaly každodenní potřeby zákazníků, jež jsme zjišťovali v rámci průzkumu, který vývoji předcházel. Jednoduše řečeno: „Vy jste povídali a my naslouchali…“

EVA KRÁLOVÁ e-mail: [email protected]

Informační magazín IN VITRO DIAGNOSTIKA 19 - 2011

7

Nové stolní centrifugy série Allegra® X-30

S

polečnost Beckman Coulter vyrábí centrifugy nejrůznějších typů již více než 60 let. V jejím portfoliu naleznete také malé stolní centrifugy pro běžnou každodenní laboratorní práci. A právě v této produktové řadě uvádí Beckman Coulter na trh novou sérii centrifug s označením Allegra® X-30, které byly vyvíjeny s myšlenkou maximálně vyhovět potřebám laboratoří. Allegra® X-30 patří k nejuniverzálnějším stolním centrifugám na trhu. Vyniká nejen kapacitou a kompaktním vzhledem, ale také svým výkonem – při použití úhlového rotoru nebo rotoru na mikrotitrační destičky nabízí největší otáčky za minutu (rpm) a tíhové zrychlení (g) ve své třídě. K dispozici je celá řada rotorů, proto není problém najít ten nejvhodnější právě pro vaši aplikaci. Další vlastnost, jež může být v laboratoři důležitá, představuje kompaktní design. Chlazená centrifuga se svojí šířkou 46 cm šetří pracovní plochu. V porovnání s konkurenčními centrifugami stejného typu je tak přibližně o 35 % užší. Centrifugy řady Allegra® X-30 jsou ideální pro aplikace, jako jsou izolace a frakcionace proteinů, práce s nukleovými kyselinami, izolace buněk, peletování nebo klasická příprava krevních vzorků.

Specifikace:

Allegra® X-30

Maximální rychlost

16 000 rpm

18 000 rpm

Maximální tíhové zrychlení (g)

23 511 g

29 756 g

Maximální kapacita

4 x 400 ml Timed pro nastavení času až do 9 hod 59 min Hold pro nespecifikovanou délku točení

Časové módy Právě pro tyto nejpoužívanější aplikace jsme připravili zvýhodněné aplikační balíčky: příprava krevních a klinických vzorků zpracování buněčných a tkáňových kultur buněčná analýza a stáčení mikrotitračních destiček vysokorychlostní separace v mikrozkumavkách

Allegra® X-30R

Pulse pro krátké točení Profily zrychlení/brzdění

10/10

Nastavení teploty

N/A

-20°C – +40°C

Motor

bezúdržbový indukční motor

Rozměry v cm (šířka x hloubka x výška)

46 x 55 x 35,5

46 x 70,7 x 37

Váha

48 kg

78 kg

Blood Sample Preparation Application Package Balíček je určen pro zpracování krve, moči a dalších tělních tekutin předcházející jejich vlastní analýze. Maximalizuje tak výkonnost a kapacitu – je možné stáčet až 64 zkumavek současně. Zároveň lze zvýšit bezpečnost laboratoře dokoupením BioCertified* protiaerosolových víček rotoru. Součástí balíčku jsou: - centrifuga Allegra® X-30 nebo Allegra® X-30R - výkyvný rotor SX 4400 (4 700 rpm, 4 255 g) - adaptéry na Vacutainer /Hemolyse/RIA 10ml, 16 mm zkumavky (2 x balení po 2 kusech) - adaptéry na Vacutainer /Hemolyse/RIA 5 ml, 13 mm zkumavky (2 x balení po 2 kusech)

8

Cell Culture Application Package Ideální pro práci s buněčnými kulturami ve velkých, středních i malých objemech. Opět je možné zvýšit bezpečnost práce dokoupením BioCertified* protiaerosolových víček rotoru. Součástí balíčku jsou: - centrifuga Allegra® X-30 nebo Allegra® X-30R - výkyvný rotor SX 4400 (4 700 rpm, 4 255 g) - adaptéry pro 50 ml konické zkumavky typu Falcon (2 x balení po 2 kusech), kapacita 3 zkumavky na adaptér/12 zkumavek na rotor - adaptéry pro 15 ml konické zkumavky typu Falcon (2 x balení po 2 kusech), kapacita 5 zkumavek na adaptér/20 zkumavek na rotor

Microplate Application Package Ideální pro high-throughput aplikace a aplikace vyžadující centrifugaci mikrotitračních destiček při vysokých otáčkách. Součástí balíčku jsou: - centrifuga Allegra® X-30 nebo Allegra® X-30R - rotor pro mikrotitrační destičky S6096 (4 700 rpm, 2 721 g), kapacita 6 standardních a 2 deep-well destiček

High-speed Application Package Perfektní pro aplikace jako je dělení proteinů, separace nanočástic nebo DNA/RNA izolace. Úhlový BioCertified* rotor, který je součástí balíčku, poskytuje výkon 29 756 g a umožňuje tak získat výsledky rychleji a ušetřit tak drahocenný čas v laboratoři. Součástí balíčku jsou: - centrifuga Allegra® X-30 nebo Allegra® X-30R - úhlový rotor F2402H pro 24 x 1,5 ml zkumavek (18 000 rpm, 29 756 g)

*BioCertified je termín používaný pro produkty testované a  validované nezávislými laboratořemi pro práci s nebezpečným vzorky. Pro více informací navštivte naše stránky www.beckman.com/centrifuge, nebo si vyžádejte naši nabídku.

EVA KRÁLOVÁ e-mail: [email protected]

Informační magazín IN VITRO DIAGNOSTIKA 19 - 2011

9

CESI 8000 – vysokovýkonný separačný ESI modul s OptiMS technológiou

J

edna z primárnych a najrozšírenejších metód na analýzu chemických látok je v  súčasnej dobe hmotnostná spektrometria (MS). Medzi jej najväčšie výhody oproti iným vedeckým postupom patrí napríklad NMR, rýchlosť analýzy, citlivosť a  schopnosť analyzovať minimálne množstvo látky, čo je v biochemických a forenzných

aplikáciách často nevyhnutnou podmienkou. Či už sa teda jedná o charakterizovanie terapeutického proteínu, identifikáciu proteínov, ktoré vytvárajú špecifický proteóm, alebo charakterizáciu posttranslačných modifikácií, vo všetkých týchto prístupoch je zvýšenie citlivosti a  zníženie iónovéj supresie vítaným riešením na získanie nových informácií o analyzovaných látkach. CESI 8000 bol vyvinutý v spolupráci s odborníkmi z oblasti hmotnostnej spektrometrie zastrešujúcich množstvo aplikácií v  danom odvetví. Hl´adali sa možnosti ako rozšíriť sféru detekcie a  zároveň zvýšiť citlivosť metodiky. Pre dosiahnutie tohto ciel´a došlo k  integrácii nízkoprietokovej pre-MS separačnej technológie s  novou ESI technológiou. Tento nový modul je založený na novej predradenej separačno ionizačnej technológii nazývanej

10

CESI, ktorá plnohodnotne integruje vysokú výkonnosť a nízkoprietokové charakteristiky kapilárnej ekktroforézy (CE) s elektrosprejovou ionizáciou (ESI) do jedného dynamického procesu na jednom a  tom istom zariadení. S  CESI je možné vygenerovať stabilný prietok elektrolytu nižší ako 10 nL/min, čo výrazne zvyšuje citlivosť celej metodiky.

CESI-MS ponúka v rámci predradených separačných technológíí tieto hlavné výhody: zvýšená citlivosť – stabilná ESI sa vytvára pri ultranízkych prietokoch v nízkej nL/min oblasti vysokoúčinná separácia – kapacita > 300 znížená doba cyklu – krátke intervaly analýzy a regenerácie presné vzorkovanie – od nanolitrových po mikrolitrové objemy vzoriek širšie analytické pokrytie – ideálne pre vysokonabité a  polárne analyty

Kapilárna elektroforéza (CE) je nízkoprietokovou technológiou, ktorá je známa svojou jedinečnou rozlišovacou schopnosťou. CESI  8000 – vysokovýkonný separačný EI modul je navrhnutý pre aplikácie hmotnostnej spektrometrie, ktoré analyzujú nabité a  polárne molekuly. Vďaka jeho robustnej OptiMS technológii sú výhody kapilárnej elektroforézy priamo poskytnuté do hmotnostného spektrometra bez akéhokol´vek zoslabenia alebo porušenia. Stabilná elektrosprejová ionizácia je vytváraná pri ultra-

teplotu kapilári a  maximalizuje reproducibilitu. Kapilára je umiestnená v ochranej kazete, ktorá umožňuje l´ahkú manipuláciu a znesie aj robustné zaobchádzanie. Cartridge OptiMS je kompatibilná s viacerými hmotnostnými spektrometrami. Pomocou použitia príslušného adaptéra sa napája priamo do nanosprejových zdrojov zariadení od AB-Sciex, Bruker, Thermo a Waters.

Jednoduchý a modulárny „plug-and-spray“ dizajn zjednodušuje obsluhu:

nízkom prietoku nL/min, čo má za následok ultravysokú citlivosť. Tieto nízke rýchlosti toku umožňujú zároveň redukovať efekty iónovej supresie.

OptiMS Technológia V  module CESI  8000 sú jednotlivé komponenty vzorky separované elektrickým pol´om, ktoré je aplikované medzi vstupnou skúmav-

kou a  OptiMS sprejom bez použitia nosnej kvapaliny. Kazeta (cartridge) OptiMS pozostáva zo separačnej kapilári, ktorá končí v  poróznom spreji, ďalej z dráhy pre vodivú kvapalinu, cirkulujúcej chladiacej kvapaliny a  samotného spreja. Vodivý roztok je automaticky dodávaný zo systémovej skúmavky za účelom uzavretia okruhu CE. Cirkulujúci chladiaci roztok udržuje

automatizované spracovanie vzoriek z mikroskúmaviek alebo 96-jamkových platničiek jednoduché prepojenie s  automatizovaným spúšťaním zbierania MS dát jednoduché prepínanie medzi kvapalinovou chromatografiou (LC) a CESI-MS znížená iónová supresia – nanoprietok vedie k zvýšenej citlivosti SW je priatel´ský a jednoduchý

JOSEF SMOLKA e-mail: [email protected]

Zrychlení přípravy vzorků pro sekvenátory nové generace Genetická analýza prochází v  poslední době bouřlivým rozvojem. Přístroje nové generace používají tzv. sekvenaci syntézou. Zásluhou vysoké míry paralelizace probíhá sekvenace podstatně rychleji než v  systémech, jež jsou založeny na modifikacích klasické Sangerovy metody. Zvýšení rychlosti samotné sekvenace je obrovské, u těchto přístrojů o více než dva řády. Komplikovaná a  časově náročná je příprava vzorků, která představuje široké pole pro inovace. Společnost Beckman Coulter nabízí celou řadu produktů zjednodušujících a zrychlujících přípravu těchto vzrorků. Pro urychlení přípravy vzorků – knihoven DNA – nabízí Beckman Coulter přístroj SPRIworks Fragment Library Systems. Jedná se o stolní zařízení s jednoduchou obsluhou, jenž automatizuje některé kroky přípravy knihoven. Potřebné chemikálie jsou výrobcem připraveny v  destičkách. Systém umožňuje paralelní přípravu až 30  knihoven za pracovní den, manuálně je možné za stejnou dobu vytvořit jen zhruba 8  knihoven. Lze jej použít pro platformy Illumina, Roche a SOLiD. Pro aplikace s  vysokým výkonem je určen nejnovější produkt SPRIworks  HT, na kterém

Obr. 1: SPRIWorks Fragment Library Systems

lze připravit až 96  knihoven denně. Tento výrobek je v  současné době nejvýkonnějším systémem pro přípravu vzorků pro sekvenátory nové generace. SPRIworks HT je integrované řešení, jehož nejdůležitější součástí je laboratorní automat Biomek®  FXp a  moduly řídícího software, pomocí kterých se provádějí jednotlivé kroky přípravy vzorků. Uživatel pak může snadno volit vstupní parametry, jako je např. počet vzorků nebo rozsah délek úseků DNA. Před startem metody dostává také přehled objemů potřebných látek. Software může být upravován pro podmínky konkrétní laboratoře. Platformu Biomek lze rozšiřovat a upravovat na principu stavebnice, hardware není v tomto případě nijak omezen. Další výhodou SPRIworks HT je možnost modifikovat  metody přípravy vzorků, např. použití vlastních primerů. Chemikálie, jež jsou

Informační magazín IN VITRO DIAGNOSTIKA 19 - 2011

součástí kitu, umožňují přípravu až 48 vzorků. Automatizace zajišťuje vysokou reprodukovatelnost výsledků. Na obrázku  3 je zobrazena série měření, kde je více než  85 % výsledků uvnitř vybrané oblasti krátkých řetězců, tzn. v intervalu 100 – 350 bp. Stejného výsledku bylo dosaženo i pro další dvě možná nastavení délek, tedy 200 – 450  bp a  350 – 700 bp. Kromě dvou výše uvedených kompaktních řešení nabízí v oblasti přípravy vzorků pro sekvenátory nové generace naše společnost celou řadu dalších produktů. Platforma Biomek obsahuje rovněž menší a cenově výhodnější systémy Biomek® 3000 a Biomek® NXp. Ty se dají použít ke zrychlení a zefektivnění jednotlivých kroků přípravy knihoven DNA i v menším měřítku, než které dovoluje SPRIworks HT. Sou-

11

částí přípravy knihoven DNA je přečisťování nukleových kyselin, jež lze provádět pomocí kitů Agencourt pro Biomek® 3000 a NXp. Jednou z funkcí, které automaty Biomek dovolují, je pipetování individuálních objemů předepsaných v  externích excelových souborech. Tyto soubory se dají použít při normalizaci knihoven a  při vytváření reportů o  přenesených objemech. Zároveň jsou užitečné pro pozdější kontroly a verifikace. Beckman Coulter poskytuje místní podporu pro uživatele, kteří tyto metody používají. Automaty Biomek se dají používat i pro další aplikace, a to jak s metodami, jež dodává naše společnost, tak s  produkty jiných výrobců nebo specifickými nástroji vyvinutými přímo zákazníky. Možná je také integrace více těchto typů přístrojů do složitějších celků. Velkou předností laboratorních automatů je jejich flexibilita. Uživatel může systémy v  čase rozšiřovat a  upravovat tak, aby odpovídaly aktuálnímu stavu vývoje, který v  genetice postupuje velmi rychle.

MARTIN POLČÍK e-mail: [email protected]

Obr. 2: SPRIworks HT – chemikálie a pracovní stanice Biomek® FX

Obr. 3: Reprodukovatelnost výsledků pro krátké řetězce (100 – 350 bp). Více než 85 % výsledků je v definované oblasti. Posunutá horní hranice je způsobena přidáním adaptéru o délce asi 100 bp.

12

Nová protilátka v soupravě na stanovení Estradiolu (33540) Společnost Beckman Coulter se rozhodla v  důsledku rozšiřování svých imunoanalytických metod Access nahradit v  reagenčních kazetách Access Estradiol (katalogové č. 33540) v současné době používanou polyklonální protilátku. Nové kazety s  náhradní protilátkou budou k dispozici podle níže uvedené tabulky.

• Výměna polyklonální protilátky zlepšila analytickou specificitu metody Access Estradiol v důsledku snížení zkřížené reaktivity s estriolem. Pokles reaktivity vedl k posunu u komerčních materiálů pro kontrolu jakosti. Seznam revidovaných hodnot komerčních kontrolních materiálů a  porovnání metod u  pacientských vzorků vám zašleme na vyžádání. • Reagenční kazeta Access Estradiol připravená za využití nové polyklonální protilátky splňuje funkční charakteristiky uvedené v návodu k použití reagencie. Specifické informace o  funkčních charakteristikách metody Access Estradiol jsou uvedeny k návodu k této meto-

Výsledky validačních testů naší náhradní polyklonální protilátky prokazují, že: Číslo šarže

Místo výroby

Dostupné od

112900 nebo vyšší

USA

srpen 2011

170077 nebo vyšší

Irsko

srpen 2011

dě. Ujistěte se, že datum revize návodu k použití je červen 2011 nebo pozdější (vytisknuto na poslední straně). Pokud návod datum revize neuvádí, požádejte nás o nejnovější verzi. • Výsledky pacientských vzorků získané za použití stávající protilátky a nové protilátky jsou v  celém rozsahu stanovení srovnatelné. Na základě vnitřních testů pacientských vzorků není ověření metody Access Estradiol s novou polyklonální protilátkou pokládáno za nutné. V  případě jakýchkoli dotazů nás neváhejte kontaktovat.

TEREZA TIETZE e-mail: [email protected] IVANA MIČÍKOVÁ e-mail: [email protected]

Nové monoklonální protilátky pro průtokovou cytometrii V návaznosti na průtokové cytometry Gallios a CyAn a sortery MoFlo XDP a MoFlo Astrios, které jsou určeny pro výzkumné účely, se průběžně rozšiřuje nabídka reagencií pro mnohobarevné cytometrické aplikace pro myší a humánní model. Objednávkové číslo

Znak

Fluorochrom

Druh

Klon

Počet testů

B01175

CD14

Krome Orange™

Anti-human

RMO52

50

B01176

CD15

Krome Orange™

Anti-human

80H5

50

B01177

CD23

Krome Orange™

Anti-human

2E1

50

B00070

HLA DR

Krome Orange™

Anti-human

Immu-357

50

B01680

CD11c

APC

Anti-human

B015

50

B01682

CD49d

APC

Anti-human

HP2/1

50

B08164

CD65

Pacific Blue

Anti-human

88H7

50

A88596

CD3 epsilon

PC5.5

Anti-mouse

C363.29B

0,1 mg

A88602

CD4 (L3T4a)

PC5.5

Anti-mouse

GK1.5

0,1 mg

A88586

CD45 (LCA)

PC5.5

Anti-mouse

I3/2.3

0,1mg

A88536

CD45.1 (Ly-5.1)

PC5.5

Anti-mouse

A20

0,1 mg

A88541

CD45.2 (Ly-5.2)

PC5.5

Anti-mouse

104

0,1 mg

A88607

CD8alpha (CD8alpha/Lyt-2)

PC5.5

Anti-mouse

53-6.7

0,1 mg

Informační magazín IN VITRO DIAGNOSTIKA 19 - 2011

13

Služba Custom Design Service Tato služba nabízí zákazníkům možnost označit monoklonální protilátky fluorochromy v  kombinacích, jež nejsou přímo obsaženy v  našem katalogu. Custom Design Service také poskytuje konjugace dodaných protilátek. Součástí nabídky je široké spektrum fluorochromů, jako jsou Pacific Blue, Krome Orange, Fluorescein, PE, APC, PE tandem dyes: ECD, PC5, PC5.5, PC7, APC tandem dyes: APC-A700, APC-A750 a biotin. Výjimečnou možností je pak optimalizace až desetibarevných koktejlů monoklonálních protilátek. Více informací naleznete na stránkách www.beckmancustomdesign.com.

Nová reagencie pro stanovení fosfoepitopů B08488 PerFix-p Kit, 50 testů Složení : • Fixation Buffer: 1 lahvička (3,25 ml) s 10% formaldehydem (methanol free) – 65 μl/test • Lysis Buffer: 2 lahvičky (25 ml) s 0,05% Proclin 300 – 1 ml/test • Resuspension Buffer: 1 lahvička (25 ml) s 0,5% formaldehydem – 350 μL/test PerFix-p je souprava reagencií určená pro analýzu buněčné signalizace. Umožňuje monoklonálním protilátkám značeným fluorochromy vstup do buněk a  specifické označení proteinů zapojených v signálních drahách. Souprava PerFix-p poskytuje jednoduchý protokol pro fixaci a  permeabilizaci buněk pro značení a analýzu fosfoepitopů průtokovou cytometrií, včetně kombinace se značením povrchových znaků. Nezapomeňte si přečíst Orozco Aaron F., Lewis Dorothy E.: Flow cytometric analysis of circulating microparticles in plasma, Cytometry Part A 77A: 502_514, 2010. Tento článek naleznete v plném znění na stránce: http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/cyto.a.20886/full.

Monoklonální protilátky proti antigenu CD14, klon RMO52 (IgG2a) z nabídky Beckman Coulter Objednávkové číslo

Fluorochrom

IM0465U

FITC

A07764

PE

IM2707U

ECD

A07765

PC5

A70204

PC5.5

50

A22331

PC7

100

IM2580

APC

A86052

APC-Alexa Fluor® 750

50

B00846

Pacific Blue®

50

B01175

Krome Orange™

50

PAVEL KRUŽÍK e-mail: [email protected]

14

IVD

počet testů 100

CE IVD

100 100

CE IVD

CE IVD

100

100

Kontrolní materiály pro průtokovou cytometrii Vzrůstající nároky na kvalitu práce v  laboratoři průtokové cytometrie vyžadují používání příslušných kontrolních materiálů. pro řízení jakosti. Následující tabulky přináší přehled výrobků, které jsou určeny pro ověření nastavení cytometru, standardizaci fluorescence, nastavení kompenzací a ověření správnosti postupu přípravy vzorků pro analýzu průtokovou cytometrií.

Fluorescenční mikropartikule

Objednací číslo

Název

Popis

6605359

Flow-Check Fluorospheres

fluorescenční mikročástice používané pro denní ověřování seřízení optiky a systému kapalin průtokového cytometru EPICS XL/XL-MCL a FC500

737664

PC7 (770/488) Set-up Kit

pro FC500 (parametr FL5)

737663

APC (675/633) Set-up Kit

pro FC500 s 633 nm laserem (parametr FL4)

A63493

Flow-Check Pro Fluorospheres

fluorescenční mikročástice používané pro denní ověřování seřízení optiky a systému kapalin průtokového cytometru Navios™ nebo FC500

6607007

Flow-Set Fluorospheres

suspenze fluorescenčních mikročástic používaná pro standardizaci intenzity fluorescence průtokového cytometru pro EPICS XL/XL-MCL a FC500

A63492

Flow-Set Pro Fluorospheres

suspenze fluorescenčních mikročástic používaná pro standardizaci intenzity fluorescence průtokového cytometru Navios™ nebo FC500

6603473

IMMUNO-BRITE Fluorospheres

pro stanovení linearity přístroje a standardizaci intenzity fluorescence

7547053

Flow-Count Fluorospheres

pro stanovení absolutních počtů buněk na cytometrech EPICS XL/ XL-MCL, FC500, Gallios/Navios a ekvivalentních analyzátorech

Flow-Check Pro Fluorospheres je suspenze fluorescenčních mikročástic používaná pro denní ověřování seřízení optiky a systému kapalin průtokového cytometru Navios™. Výrobek obsahuje směs 10 μm fluorescenčních částic s fluorescenční emisí od 515 nm do 800 nm při excitaci na 488 nm, 6 μm fluorescenčních částic od 640 nm do 800 nm při excitaci na 635 nm a 3 μm fluorescenčních částic s fluorescenční emisí od 400 nm do 500 nm při excitaci na 405 nm.

Informační magazín IN VITRO DIAGNOSTIKA 19 - 2011

15

Nastavení kompenzace Objednací číslo

Název

Popis

6607023

CYTO-COMP Cell Kit

pro použití s CYTO-COMP Reagent Kit a soupravami QuickCOMP

6607021

CYTO-COMP Reagent Kit

reagencie pro úpravu nastavení kompenzace cytometru EPICS XL/XL-MCL

177018

QuickCOMP 2 Kit

reagencie pro úpravu nastavení kompenzace na průtokových cytometrech v kombinaci FITC/PE

177017

QuickCOMP 4 Kit

reagencie pro úpravu nastavení kompenzace na průtokových cytometrech v kombinaci FITC/PE/ECD/PC5

IM3631

Stem-Comp Reagent

pro použití v kombinaci se Stem-Trol Control Cells

Buněčné kontroly Objednací číslo

Název

Popis

6607023

CYTO-COMP Cell Kit

pro použití s CYTO-COMP Reagent Kit a soupravami QuickCOMP

6607021

CYTO-COMP Reagent Kit

reagencie pro úpravu nastavení kompenzace cytometru EPICS XL/XL-MCL

177018

QuickCOMP 2 Kit

reagencie pro úpravu nastavení kompenzace na průtokových cytometrech v kombinaci FITC/PE

177017

QuickCOMP 4 Kit

reagencie pro úpravu nastavení kompenzace na průtokových cytometrech v kombinaci FITC/PE/ECD/PC5

IM3631

Stem-Comp Reagent

pro použití v kombinaci se Stem-Trol Control Cells

Buňky IMMUNO-TROL™ Cells jsou určeny pro kontrolu kvality analýzy buněk plné krve průtokovou cytometrií. Jsou otestované, schopné lýzy a  používají se k  imunofenotypizační analýze s  použitím reagencií obsahujících monoklonální protilátky. Poskytují pozitivní buněčný kontrolní materiál, který se zpracovává stejným způsobem jako vzorky plné krve. To umožňuje ověření kvality reagencií a metod používaných pro barvení cílových buněk, lýzu erytrocytů a analýzu vzorků průtokovou cytometrií.

PAVEL KRUŽÍK e-mail: [email protected]

16

Membránové molekuly na buňkách monocytární řady Úvod Krvetvorba je velmi složitý komplex dějů probíhající u dospělého člověka převážně v mikroprostředí kostní dřeně, a to v organizovaných ložiscích krvetvorných buněk. Kostní dřeň jako hematopoetický orgán představuje vysoce organizovanou tkáň s difúzní prostorovou strukturou, v  níž z  nediferencovaných kmenových buněk vznikají jednotlivé progenitorové buňky, které dávají vznik různým buňkám v  jednotlivých vývojových řadách. Lokalizace kmenových buněk v  mikroprostředí kostní dřeně a jejich fyziologický kontakt s dalšími buňkami produkující jednotlivé růstové faktory je zřejmě zásadní pro vznik i průběh krvetvorby. Integrita a  homeostáza lidského organizmu je udržována skupinou regulačních molekul rozpustných mediátorů (cytokinů a  chemokinů). Regulace krvetvorby je zprostředkována interakcí cytokinů s  jejich komplementárními membránovými receptory za tvorby tzv.  „cy-

Myeloidní progenitor CFU-GEMM HLA-DR

CD11c CD13 CD14* CD15* CD33 CD34 CD110* CD111* CD112* CD117 CD123 CDw131 CD133* CD173* CD174* CD176 CD227* CD228

Progenitor CFU-GM

Vývoj buněk v monocytární řadě Vývoj buněk v monocytární řadě probíhá od myeloidního progenitoru (CFU-GEMM) přes progenitorovou hemopoetickou buňku (CFU-GM) a  typické buňky monocytární řady  – monoblasty, promonocyty  – až na monocyty. Monocyty se dají prokazovat jak v kostní dřeni, tak v obvodové krvi. Obrázek 1 podává zjednodušenou představu proliferace a  diferenciace buněk v  monocytární řadě z  hlediska výskytu

Prekurzor CFU-GM

HLA-DR

CD11c CD13 CD14* CD45* CD33 CD34 CD111 CD112 CD115 CD116 CDw123 CDw131 GM-CSF M-CSF G-CSF SCF IL3

tokinové sítě“. Ta komplexně pokrývá základní fyziologické projevy hematopoetických buněk (proliferaci, diferenciaci, aktivaci, apoptózu a migraci). Jedná se tak o dokonalou spolupráci vzájemných cytokin/chemokin-receptorových interakcí uplatňujících se v  kaskádách regulačních a  imunoregulačních mechanizmů hematopoézy s  hlavním zaměřením na vyvážení buněk do jednotlivých hematopoetických řad.

Monoblast

HLA-DR

HLA-DR

GM-CSF M-CSF IL3 IL4 IL6

Aby tyto růstové faktory mohly fungovat, musí mít na odpovídajících buňkách příslušné receptory. Monocyty nejsou koncovými buňkami, protože z  nich v  různých tkáních proliferují a  diferencují makrofágy. Zjednodušeným pohledem hematologa lze monocytární řadu uzavírat monocytem, který se dá velmi dobře

Monocyt Makrofág (nìkteré znaky pro (aktivovaný) monocyty také ve tkáních)

HLA-DR

CD13 CD14 (CD15*) CD33 CD111 CD112 CD115 CD116 CDw123 CDw131

CD13 CD14* CD15 CD33 CD111 CD112 CD115 CD116 CDw123 CDw131

CD13 CD15 CD33 CD111 CD112 CD115 CD116 CDw123 CDw131

GM-CSF M-CSF SCF IL3

Promocyt

membránových molekul. Je z  něj zřejmé, že monocyty nesou na svém povrchu celou řadu molekul, které jim dovolují zprostředkovávat různé funkce. Monocyty se uplatňují při obraně proti vzniku nádorů a v různých imunitních reakcích. Monocyty a makrofágy produkují celou řadu faktorů, jež regulují proliferaci a diferenciaci buněk v jednotlivých řadách hemopoézy, včetně monocytární řady. Buňky monocytární řady jsou kontrolovány jednotlivými růstovými faktory, z nichž některé jsou vyznačeny v obrázku 1. Převážně se jedná o GM-CSF, M-CSF, SCF a některé interleukiny.

CSF-1 GM-CSF M-CSF IL3 IL4 IL6

GM-CSF M-CSF IL3 IL4 IL6

HLA-DR

(CD4) CD9 CD11b CD11c CDw12 CD13 CD14 CD15 CDw17 (CD31) CD32 CD33 CD35 CD36 CD38 (CD40) CD43 (CD45RO) (CD45RA) (CD45RB) CD49b,e,f CD63 CD64

CD65s CD68 (CD74) CD84 CD85 CD86 CD87 CD89 CD91 CDw92 CD93 CD98 CD101 CD102 CD111 CD112 CD115 CD116 CD119 CDw121b CDw123 CD127

Monocytární Monocytární řada øada Kostní døeò

CDw128 CDw131 CD142* CD147 CD155 CD156 CD157 CD162 CD163 CD164 CD168 (CD170) CD171 CD172a CD180 CD184 CD195 CD206 CDw210 CD213a1 CD213a2 CD226

(IL1) IL6 IL8 IL10 IL12 IFN PGF TNF TNF GM-CSF M-CSF PDGF CXCL1 CXCL2 CXCL10 CCL3 CCL5 NGF LIF OSM

Krev obr. 17

Informační magazín IN VITRO DIAGNOSTIKA 19 - 2011

Obrázek 1

17

Chemokinové a cytokinové receptory Chemokinové a cytokinové receptory na makrofágách a monocytech na makrofágách a monocytech

IL2 IL9 IL1

CCR8

IL1R

CCR6 CCL17

IFNR IFN-

IL3R

IL2 IL9

IL10 IL1

IL10R IFN- IFN-

IL16R

IL16

IL3

IL9R CCL1

makrofágy

IL17

CD11b, CD14+, CD16+, CD40, CD54, CD64, CD71+, CD84, CD80, CD163+, HLA-DR++, (TLR2, TLR4, 25F9, 27E10)

CCL3 CCL5 CCL7

GM-CSF

CCR2 CCL2 CCL7 CCL8

TNF-IL3 TNF-

IFN-R IL3R CCL3 CCL5 CCL7

IL5

Funkční projevy monocyto-makrofágového systému Obrázek  2 dokumentuje výskyt některých cytokinových a  chemokinových receptorů na monocytech a makrofázích. Z obrázku je zřejmé, že monocytární-makrofágový systém je zastoupen celou řadou receptorů, které dávají tomuto systému specifické funkce. Proto jsou na obrázku vyznačeny také ligandy, s  nimiž příslušné receptory reagují. Membránové receptory pro cytokiny mohou být monomery, dimery, popř. trimery, zatímco membránové receptory pro chemokiny procházejí 7  x buněčnou membránou. U membránových receptorů byly ponechány jejich původní názvy, aby bylo patrné, s kterými ligandy reagují. Reakce jednotlivých chemokinů se svými receptory byla vyznačena červeným kolečkem. Je třeba si uvědomit, že jak kvalitativní, tak kvantitativní zastoupení těchto receptorů může být velmi odlišné v závislosti na profilu makrofágů. Monocyty přecházejí vaskulární endoteliální buněčnou stěnou do různých tkání, kde je nacházíme v  rrozličných formách např. jako dendritické buňky monocytárního původu, mikrogliální buňky v  mozku, alveolární buňky plic, Kupferovy buňky v  játrech, peritoneální a  pleurální makrofágy a  pravděpodobně i  osteoklasty. Monocyty se mění také v aktivnější fagocyty – histiocyty, takže jsou předchůdci

18

IFN R

M-CSF

CCL8 CCL5

CCR5

GM-CSFR

CCR2

GM-CSF

plicních, alveolárních či slezinných makrofágů monocyto-makrofágového systému lymfatických uzlin, kostní dřeně, pleury, peritonea a jater. Tyto makrofágy mají na svém povrchu vyjádřeny různé molekuly zprostředkovávající rozdílné funkce. Kupfferovy buňky v játrech se mohou uplatňovat při absenci odezvy imunitního systému na mikrobiální podněty. Naproti tomu plicní makrofágy jsou schopné likvidovat určité patogenní bakterie. Některé další buňky makrofágového systému se uplatňují v efektorových funkcí a rovněž v regulacích specifické T-lymfocytární imunity. Makrofágy jsou užitečné při nejrůznějších funkčních projevech, což se promítá do poměrně širokého zastoupení jednotlivých CD znaků, kterých je v současné době popsáno až 135. Z těchto znaků, jež jsou schopné vstoupit do reakcí s jednotlivými skupinami patogenů, lze uvést receptory pro komplement, „scavenger“ receptory, „toll-like“ receptory (označené čísly 3, 7, 8, 9), popř. jiné. Těmito receptory jsou některé tkáňové makrofágy schopné rozpoznat celou řadu vysoce konzervovaných specifických molekul, které jsou přítomny na virech, bakteriích a  plících. Tyto mikroorganismy mohou vyjadřovat např. virové proteiny a jejich RNA, bakteriální flagelin, lipoarabinomanan (LAM), lipopolysacharid (LPS), lipoteichoiovou kyselinu (LTA), peptidoglykan (PGN) a  zamosan. Tkáňové makrofágy rozeznávají tyto komponenty pomocí širokého spektra rozpustných cytoplazmatických i  membránově vázaných receptorů a  po setkání s  příslušným patogenem zahajují sérii kroků. Ty lze označit jako detekci, fagocytózu, degradaci, aktivaci, prezentaci antigenů a sekreci cytokinů. Např. bakterie jsou fagocytární kapsou vtaženy do mikrofágů, kde jsou ve vesikulech (fagolysozomech) fagocytovány. Zde se uplatňuje celá řada jevů, při nichž nukleasy štěpí nukleové kyseliny, fosfolipázy, lipidy, cukry (lyzozomální enzymy) a proteiny (proteinázy). Větší komponenty jsou popř. vyvrhovány ven z  buňky a  některé jiné jsou podrobovány antigenní prezentaci. Makrofágy dávají vznik různým buňkám, kde se v  diferenciačních

ERB-1

CCL2 CCL7 CCL8

IL17

IL17

TF  TN-

CD120

IL5R

CSFR-1R CCL3

EGF TNF-

IFN- IFN-

IL10R

CD11b, CD14++, CD16++, CD40, CD54, CD64, CD71+/-, CD84, CD80, CD163++, HLA-DR++, (TLR2, TLR4, 25F9, 27E10)

obr. 18 prokazovat morfologickým stanovením. Tato buňka tak byla zahrnuta do diferenciálu buněk obvodové krve (do 10  %) a  kostní dřeně. U  normálního zdravého dospělého jedince kolísají počty monocytů v  periferní krvi mezi 1,7 – 9,3 %, což v referenčním rozmezí představuje 0,11  –  0,59  x  109  l. Na obrázku  1 je uvedena většina membránových molekul vyskytujících se na buňkách monocytární řady. Tyto molekuly byly postupně odkrývány a poté zahrnuty do CD nomenklatury. Výskyt některých molekul značně kolísá, proto lze říci, že málokterá molekula je vhodný reprezentant pro celkové stanovení monocytárních buněk.

IL10

CCR8

monocyty

IFN-

IL5R

ERB-1

CSFR-1R

CCR5 M-CSF CCL3 CCL8 CCL5 GM-CSFR

CD120

CCL1

IL16

IFN R IL17

IL1R

IL9R

IL5

EGF TNF-

Obrázek 2 a  proliferačních stádiích uplatňují rozličné faktory vázající se na příslušné receptory (např. na vzniku osteoklastu z  osteoblastu se podílí faktory TNF rodiny a RANK, které aktivují příslušné receptory). Naproti tomu fyziologická role TRAIL molekuly je v  blokaci fosforylace p38  mitogen aktivované protein kinázy. U  aktivovaných makrofágů dochází ke změně jejich morfologie (pseudopodie). Rovněž dochází k sekreci cytokinů, chemokinů a různých difusibilních faktorů. Těmito zásadními funkčními projevy se tak makrofágy odlišují od monocytů. Stanovení membránových molekul na buňkách monocytární řady Membránové molekuly na buňkách monocytární řady se běžně prokazují imunoflurescenční metodou, která se vyhodnocuje průtokovou cytometrií. Jednou z prvních molekul nalezenou na monocytech byl vedle HLA-Dr membránový znak označený jako CD14. Postupně byly odkryty i další antigeny jako CD13, CD33, CD15, CD34, CD41, CD61. Monocyty se uplatňují v nejrůznějších funkčních projevech, proto se jejich průkaz vztahuje k  etiopatogenezi a  etiopatofysiologii různých chorob. Zvýšené hodnoty monocytů se nacházejí při EB  infekci a  také při akutních leukémiích. V současné době je k dispozici celá řada údajů týkajících se výskytu membránových molekul (zařazených do CD  nomenklatury) na buňkách monocytátního/makrofágového systému. Tabulka 1 popisuje zastoupení membránových znaků na monocytech, makrofázích a na monocytech/makrofázích. I když se jedná o hrubé údaje, přesto může tato tabulka posloužit k představě antigenního vybavení retikulárních buněk, které plní svoji funkci v imunitních fagocytárních reakcích a  podílí se na následné inaktivaci cizích antigenních materiálů. Z  těchto údajů a  z  údajů na obrázku  2 lze poukázat na velké antigenní vybavení těchto buněk sloužící k  plnění dané funkce. Buňky nejenže vykazují obrovskou antigenní hete-

rogenitu, ale mají rovněž určitou plastičnost. Navíc několik dalších molekul přistupuje na aktivovaných buňkách celého systému, jež nejsou uvedeny. Monocyty u  zhoubných onemocnění krvetvorby Akutní leukémie (AL) představují velmi heterogenní skupinu zhoubných onemocnění krvetvorby vznikající maligní transformací hemopoetických buněk. Leukemická transformace postihuje jak buňky řady myeloidní, tak řady lymfoidní, proto je možné z  tohoto hlediska vymezit jak leukémie akutní myeloblastické (myeloidní), tak akutní lymfoblastické (lymfoidní). Akutní myeloblastická leukémie (AML) tvoří velmi různorodou skupinu onemocnění postihující buňky myeloidní a  monocytární řady provázené abnormální proliferací a diferenciací. Klasifikace AML prodělala určitý vývoj, přičemž jeden z přínosů bylo vytvoření tzv. francouzsko-americko-britské klasifikace (FAB) AL..V této klasifikaci lze podle morfologických a  cytochemických kritérií vymezit zhruba 8 typů označovaných jako: M0 M1 M2 M3 M4 M5A M5B ná M6 M7

neklasifikovaná (nediferencovaná) myeloblastická bez vyzrávání (21 %) myeloblastická s vyzráváním (35 %) promyelocytární (s  mikrogranulární variantou, M3v) (9 %) myelomonoblastická (myelomonocytární) (23 %) monoblastická M5A, monoblastická málo diferencovaná (6 %) promonocytární dobře diferencovaakutní erytroleukémie (2 %) megakaryoblastická

Tabulka 2 podává základní charakteristiky pro vymezení myeloblastických leukémií (označují se též jako nelymfoblastické leukémie) dle FAB klasifikace. Buňky AML jsou z  hlediska membránových fenotypů velmi intenzivně studovány. Byly publikovány různé kombinace jejich výskytu. Na buňkách AML (u  M1  – M6) lze nalézt antigeny charakteristické

pro myelomonocytární řadu (CD13, CD14, CD15, CD16, CD33, CD34, CD37, CD39, CD74, CD78). Je zřejmé, že fenotypy AML v  rámci jednotlivých FAB M1  – M5 typů jsou velmi heterogenní, takže je u  nich možné vymezit jednotlivé varianty. AML  M0 je označována jako časná myeloidní leukémie, AML  M1 je akutní myeloidní leukémie bez vyzrávání myelopoézy, AML  M2 je akutní myeloidní leukémie s  vyzráváním myelopoézy (zde je i varianta M2Baso s bazofilními prekurzory, kde se vyskytují chromozomální aberace t  (6;  9) nebo 12p), AML  M3 se rozlišuje na klasickou hypergranulární variantu a  mikrogranulární variantu, u  AML  M4Eo se vyskytují atypické eosinofily, AML M5 má dvě varianty označované M5A a M5B, AML M6 můžeme rozdělit na dva typy M6A (Di  Guglielmův syndrom) a  M6B (Di Guglielmova choroba) a AML M7 je akutní megakaryoblastická leukémie. Z  tohoto důvodu existují nepřesnosti v  jejich třídění, proto je snaha tuto klasifikaci stále zdokonalovat. Vhodné kombinace znaků je možné dosáhnout při dodržování určitých kritérií, charakteristických fenotypů umožňujících zařazení patologických buněk. Při tomto stanovení lze vzít vedle morfologického rozlišování v  potaz také intracelulární průkazy CD znaků, jako jsou cytochemické reakce (myeloperoxidáza, terminální dezoxyiribotransferáza, PAS reakce). Určité rozpaky mohou nastat v rozlišení blastů (myelo versus lymfo).V těchto případech je tak nutné provádět pro stanovení definitivní diagnózy vyšetření z kostní dřeně, kde je pro dg.  ALL zapotřebí nejméně 30 % lymfoblastů, které jsou negativní v reakci s  myeloperoxidázou, ale většinou pozitivní na Tdt. V dalším sledu je možné zvolit vybrané panely směřující k  cílené informaci. Obecně platí, že čím více se testuje, tím více informací můžeme o patologických buňkách získat, a to z hlediska adhezívních, aktivačních, diferenciačních cytokinových a chemokinových profilů. Přesto jsou ale převážně z ekonomického hlediska doporučovány cílené panely MoAbs, jež prokazují vybrané znaky stanovující základní charakter onemocnění. Je nutné si uvědomit, že klasifikace leukémií není zdaleka ukončena, proto se objevují a  doporučují jednotlivá schémata, která nesou různá označení REAL, WHO. Mimoto jsou popisovány i  vzácné typy leukémií s rozdílnými genotypovými a fenotypovými charakteristikami, jež pouze v  detai-

lech dokumentující velkou heterogenitu leukemického procesu. Do těchto vzácných typů leukémií lze zahrnout juvenilní myelomonocytární leukémii, která se projevuje v dětském věku. Můžeme ji vymezit jako promyelocytární leukémii s pravidelnými jádry, která se však od AML M3 odlišuje tím, že má na povrchu patologických buněk CD13, CD15, CD33 a  rovněž CD56 antigeny a nemá translokaci t (15; 17), avšak t (11; 17). Závěrem lze říci, že buňky monocytární řady obsahují na svém povrchu jednotlivé membránové molekuly, jež vtiskují těmto buňkám různé funkce. Buňky tak mohou pomocí svých receptorů zareagovat na celou řadu signálů, které přicházejí z vnějšího prostředí. Z těchto receptorů jsou důležité molekuly pro růstové faktory (chemokiny a cytokiny). Ty pomocí zpětnovazebných mechanizmů udržují podmínky homeostázy. V současné době je možné jednotlivé molekuly v přímé imunoflurescenční metodě označovat a  průtokovou cytometrií vyhodnocovat. To nalezlo velké uplatnění nejen v  klinické medicíně, kde je možné tyto populace na základě výběru vhodných molekul spolehlivě prokazovat a  interpretovat v  jejich patogenezi a patofyziologii, ale i v experimentální sféře. K  dané problematice existuje velké množství literárních zdrojů, proto se autor omezil pouze na základní informace týkající se CD systému, který je knižně zpracován (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9). Zkratky AML = akutní myeloblastická leukémie CFU-GEMM = kolonie granulocytů, erytrocytů, megakaryocytů, monocytů CFU-GM = granulo-monocytární progenitorová buňka CFU-M = progenitorová buňka monocytů (makrofágů) CFUMeg = megakaryocytární progenitorová buňka FAB = francouzsko-americko-britské klasifikace FAB M4 = myelomonocytární leukémie (AMML) FAB M5 = monocytární leukémie (AmoL) LAM = lipoarabinomanan LPS = lipopolysacharid

Tabulka 1: Výskyt membránových znaků na monocytech, makrofázích a monocytech/makrofázích Zastoupení na monocytech

Výskyt na makrofázích

Výskyt na monocytech/makrofázích

CD11b, CD13, CD17, CD23, CD30, CD35, CD44, CD49a-f, CD53, CD62L, CD65, CD85j, CD85k, CD86, CD87, CD88, CD92, CD93, CD101, CD102, CD137, CD142, CD155, CD162, CD168, CD178, CD180, CD185,CD192, CD226, CD232, CD244, CD245, CD253, CD255, CD270, CD276, CD277, CD281, CD282,CD285*, CD286, CD300a, CD301, CD306

CD16a, CD72, CD80, CD84, CD105*, CD106*, CD111, CD116,CD129, CD154, CD169, CD170, CD195, CD204, CD206*, CD209, CD224, CD272, CD280*, CD288

CD11a, CD11c, CD4*, CD14, CD15, CD26, CD33, CD36, CD51/61, CD52, CD63, CD64, CD68, CD85a, CD85d, CD89, CD97, CD112, CD114, CD119, CD121b, CD126,CD136, CD140a, CD157, CD163, CD172a, CD195, CDw210a, CDw210b, CD256, CD257, CD263, CD264, CD275, CD284, CD300c, CD300e, CD313,CD302

Poznámka: CD znaky označené hvězdičkou (*) se vyskytují na populacích, tučně zvýrazněny jsou hlavní znaky uvedených buněk.

Informační magazín IN VITRO DIAGNOSTIKA 19 - 2011

19

Tabulka 2: FAB klasifikace akutních nelymfoblastických leukémií

FAB

Akutní leukémie

Některé charakteristiky

M0

nediferencovaná AML

velké blasty s hojnou cytoplazmou a nápadnými jadérky, MPO±, CD7+, CD13±, CD14±, CD15±, cytochemicky CD33±, CD34±, CD65±, CD117±, HLA-DR±, negativní TdT

M1

nezralá AML

M2

AML s vyzráváním bílé řady akutní promyelocytární leukémie

M3

blasty s kulatým jádrem a menším množstvím cytoplasmy s ojedinělými azurofilními granuly a Auerovými tyčemi, MPO a sudanová čerň pozitivní

Imunofenotyp*

MPO+, CD11b+, CD13+, CD15+, CD33±, CD34+, HLA-DR+

blasty obsahují četná azurofilní granula a Auerovy tyče, MPO a sudanová čerň pozitivní, věk kolem 30 let, častá t (11; 17)

MPO+, CD11b±, CD13+, CD14±, CD15+, CD33+, CD34+, CD64+, CD65+, HLA-DR+

blasty s kulatým jádrem s jadérky, hojné Auerovy tyče a granula, MPO a sudanová čerň silně pozitivní, věk 30 – 40 let, často provázeno DIC, časté t (15; 17) a t (11; 17)

MPO+, CD1a+, CD13+, CD15+, CD33+, CD56+, HLA-DR-

M4

akutní myelomonocytární leukémie

blasty se světle šedou granulovanou cytoplasmou a zprohýbanými jádry, pozitivní nespecifické esterázy

MPO+, CD11b+, CD11c, CD13+, CD14+, CD15+, CD33+, CD34±, CD36+, CD41±, CD58, CD61±, HLA-DR+

MEo

akutní myelomonocytární leukémie s eosinofilií

blasty vzhledu myelomonocytární leukémie, eozinofily tvoří 5 –10 buněk dřeně, časté cytogenetické abnormality, v oblasti 16. chromozómu pruh q22

MPO+, CD2±, CD13±, CD14±, CD15±, CD33+, CD34±, CD117±, HLA-DR+

M5

akutní monocytární leukémie

blasty se zprohýbanými jádry s hojnou lehce granulovanou cytoplazmou s Auerovými tyčemi, častěji 50 let, často extramedulární postižení, abnormity v oblasti 11. chromozómu pruh q23

MPO+, CD11b±, CD13+, CD14+, CD15+, CD33+, CD34±, CD41±, CD61±, HLA-DR+

M6

akutní erytroleukémie

bizarní erytroblasty často mnohojaderné, s karyorhexí, PAS pozitivní

CD13+*, CD33±, CD36+, CD71+**, CD235+**, HLA-DR+

M7

akutní megakaryoblastická leukémie

mikromegakaryocyty jedno- či dvoujaderné, PAS a kyselá fosfatáza pozitivní, častá inv. 3. chromozómu

CD3±, CD13±*, CD34±, CD36±, CD41a+, CD42b+, CD61+, HLA-DR±

* = exprimován na myeloblastech, ** = exprimován na erytroblastech, + = přítomen u většiny pacientů, ± = přítomen u více než 50 % pacientů lipoteichoiovou kyselinu myeloperoxidáza peptidoglykan růstový faktor kmenových buněk („stem cell factor“) = terminální dezoxyribonukleotidyltransferáza

3. McMichael A.J., Beverly P., Cotbolt S. et al. Leucocyte typing III. White cell differentiation antigens. Oxford University Press, 1987.

Základní literární odkazy z  hlediska exprese CD molekul

6. Kishimoto T., Kikutani H., von dem Borne A. et al.: Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens, Garland Publishing, Inc., New York, 1 1342, 1997.

LTA MPO PGN SCF Tdt.

= = = =

1. Bernard A., Boumsell L., Dausset J., Milstein C. and Schlossmann S.F. (eds.). Leucocyte typing 1. Human leucocyte differentiation antigens detected by monoclonal antibodies. Berlin, Springer-Verlag, 1984. 2. Reinherz E.L., Hayne E.F., Nadler L.M., Bernstein I.D. Leucocyte Tyliny. Springer-Verlag, 1986.

20

4. Knapp W., Doken B., Riber E.et al.: Leucocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Oxford University Press, 1 - 1182, 1987. 5. Schlossman S., Boumsell L., Gilks W., et al.: Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens. Oxford University Press, 1 - 2044, 1995.

7. Mason D.Y., Bensussan A., André P. et al.: Leucocyte typing VII. Oxford University Press, 1 - 945, 2002. 8. Zola H., Swart B., Nicholson I.: CD molecules 2005: human cell differentiation molecules. Blood. 106:3123-6., 2005

9. Zola H., Swart B., Nicholson I. and Voss. E.: Leukocyte and Stromal cell molecules. The CD markers. John Wiley and sons, Inc., Hoboken, New Jersey, 1 - 581, 2007.

Poděkování Autor vyslovuje poděkování Ing. J. Buriánkové za zpracování obrázků a tabulky. Článek byl podpořen vědeckým záměrem pro ÚHKT. RNDR. KRISTIÁN KOUBEK, DRSC. KLINICKÝ ÚSEK, ÚSTAV HEMATOLOGIE A KREVNÍ TRANSFÚZE, U NEMOCNICE 2, 128 20 PRAHA 2 e-mail: [email protected]

Prediktivní, preventivní a personalizovaná medicína setkání v globálním měřítku

D

říve reprezentativní sídlo německé vlády a parlamentu, nyní příjemně poklidné město Bonn hostilo ve dnech 15. – 18. září 2011 Světový kongres Evropské asociace pro prediktivní, preventivní a personalizovanou medicínu (EPMA). Sešli se zde zástupci univerzit, výzkumných center, nemocnic a klinik, odborných organizací a komerční sféry, ale také reprezentanti Evropské komise a  nadnárodních organizací, jako je Světová zdravotnická organizace (WHO), Organizace spojených národů (OSN), Iniciativa inovativní medicíny (IMI) a  další. Řečníci a  účastníci přijeli z  více než 40  zemí světa. Spojovala je snaha společně zhodnotit dosažené výsledky v  oblasti prediktivní, preventivní a  personalizované medicíny (PPPM), diskutovat stávající i budoucí problémy a nastínit další strategie. Konferenci pořádala EPMA v čele s prezidentem Dr.  Vincenzem Costigliolem a  generální sekretářkou prof.  Olgou Golubnitschou. Dále se na organizaci podílela nadace European Science Foundation (ESF), Univerzita v Bonnu a  národní zástupci EPMA. Českým národním zástupcem EPMA je Prof.  Ondřej Topolčan (Fakultní nemocnice Plzeň). Česká republika byla na kongresu zastoupena těmito pracovišti: Univerzita Karlova v Praze – Lékařská fakulta Plzeň a Fakultní nemocnice Plzeň (8 účastníků, 6 ústních sdělení, 4 postery), IKEM (2 účastníci, 3 postery), Technologické centrum AV ČR (1 účastník, 1 ústní sdělení) a firma GHC Genetics, s.r.o. (1 poster). Důraz na vzdělávání odborníků i široké veřejnosti První den kongresu se konal v  prostorách Lékařské fakulty Univerzity v Bonnu. Hlavním tématem bylo vzdělávání odborníků. Úvodní Edukační sympózium s  několika odbornými přehledovými přednáškami na aktuální témata (autoimunita a  protilátky v  kontextu prediktivní, preventivní a personalizované medicíny) bylo určené především studentům a  mladým vědcům. Následoval workshop EPMA/Springer, kde zástupci vydavatelství Springer prezentovali odborný časopis EPMA Journal. Tento časopis je koncipován jako série 8  monotématických čísel. V roce 2010 vyšla čísla věnovaná diabetes, neurodegenerativním onemocněním, nádorům a  systémům zdravotní péče, v roce 2011 pak čísla zaměřená na kardiovaskulární onemocnění, reproduktivní onemocnění a  pediatrii. V  plánu je sportovní medicína a opět systémy zdravotní péče. Od roku 2012 budou znovu vycházet stejná témata doplněná o nejnovější poznatky. Připravuje se též vydávání přehledových monotématických publikací Advances in PPPM. V  této sekci vystoupili organizátoři inovativních vzdělávacích kurzů pro odborníky z Lékařské fakulty v Plzni pořádaných v rámci

projektů strukturálních fondů EU, konkrétně Operačního programu Vzdělávání pro konkurenceschopnost. Dr. M. Karlíková a prof. O. Topolčan prezentovali kurzy imunoanalýzy (projekt CZ.1.07/2.3.00/09.0142), endokrinologie (CZ.1.07/2.3.00/09.0182) a právě zahájený projekt molekulární genetiky a personalizované medicíny (CZ.1.07/2.3.00/20.0040). Vzdělávání jak odborníků, tak široké veřejnosti bylo na programu i  následující den. Po další přednášce vydavatelství Springer, zaměřené na téma publikace, odborné časopisy a impaktové faktory, proběhla panelová diskuze, na níž se zástupci různých odvětví a  různých zemí mimo jiné podělili o svůj názor, kdy a jak začít s edukací široké veřejnosti. Z debaty vyplynulo, že s osvětou o prevenci je optimální začít již od dětství, v rámci rodiny. Pacient na prvním místě Během kongresu prof. Golubnitschaja několikrát zdůraznila, že hlavním cílem všech aktivit v  rámci PPPM je pacient a  jeho prospěch. Je tedy potřeba, aby myšlenka a  principy personalizované medicíny nezůstaly jen sjezdovou proklamací, nýbrž aby se postupně staly součástí každodenní zdravotní péče i  běžného života. Proto je nutná podpora co nejširší odborné i laické veřejnosti. Právě v duchu tohoto cíle se nesl program druhého dne akce, příhodně situovaný do prostor Parlamentu. Zde byly otázky realizace PPPM v praxi diskutovány s  politickými činiteli, zástupci grantových agentur, národních a nadnárodních organizací, pacientských sdružení, zdravotních pojišťoven a dalšími organizacemi. Témata tohoto dne byla následující: • přehled zdravotní péče ve světě • národní a  nadnárodní grantové strategie (grantové projekty, rámcové programy výzkumu EU, ERASMUS a další) • potřeby pacientů • inovativní centra PPPM • vzdělávání – inovativní programy a didaktické materiály Poznatky z výzkumu a translační medicíny v kontextu PPPM Náplní třetího a  čtvrtého dne konference byly odborné sekce věnované výzkumu a aplikacím výsledků výzkumu do klinické praxe. Mnoho přednášejících zároveň publikovalo či bude publikovat své odborné články v  EPMA Journal, takže zájemce o danou problematiku odkazujeme na uvedený časopis. V  následujících odstavcích jsou uvedeny jen krátké souhrny jednotlivých sekcí. PPPM a nádory V této sekci zazněly prezentace věnované významu sérových i  tkáňových biomarkerů

Informační magazín IN VITRO DIAGNOSTIKA 19 - 2011

pro predikci průběhu a  prognózy nádorových onemocnění. Úvodní přednášky se týkaly významu predikce v  onkologii vzhledem k  riziku kancerogenního efektu u  protinádorové léčby (Dr.  Characiejus, Univerzita Vilnius, Litva) a proteomických variací u klinicky nefunkčních hypofyzárních adenomů a jejich významu pro predikci, prevenci a  personalizovanou léčbu (Dr. Zhan, University of Tenessee, USA). PPPM v pediatrii Přednášky v této sekci se zaměřily na vrozené vývojové vady plodů a  novorozenců a  systém jejich prevence v  různých státech světa. Dále pak na monitoraci léčby dětských endokrinologických onemocnění. PPPM a kardiovaskulární onemocnění V  několika přednáškách byla prezentována predikce kardiovaskulárních chorob již v dětském věku a  predikce kardiovaskulárních komplikací obezity a  diabetu. Nový přístup představilo sdělení Dr.  Kastrupa z  univerzitní nemocnice Rigshospitalet v  dánské Kodani: využití kmenových buněk pro reparační procesy při kardiovaskulárních chorobách, včetně možností predikce úspěchu léčby. V této sekci jsme měli rovněž možnost si poslechnout dva příspěvky z České republiky: primární prevence kardiovaskulárních chorob (Dr. Hana Rosolová, FN  Plzeň) a  primární a  sekundární prevence mozkových a  cévních příhod s  využitím biomarkerů (Dr. Jiří Polívka, FN Plzeň). PPPM a neurodegenerativní onemocnění Většina přednášek této sekce byla věnována problematice Alzheimerovy choroby, zejména možnosti využití biomarkerů pro detekci časných stádií. Prof. Golubnitschaja prezentovala neurodegenerativní oční choroby a  optimalizaci prevence a monitoraci terapie glaukomu. PPPM a diabetes Přednášky se soustředily především na nové strategie v terapii diabetes a na nefrologické, oční a cévní komplikace diabetu, jejich predikci a prevenci. Prevence „na míru“ Tato sekce se týkala prevence, tradiční medicíny, personalizované výživy a životního stylu. Hovořilo se zde například o  personalizované výživě pro pacienty trpící autoimunitními chorobami, inovativních psychosomatických markerech u  nepřenosných chorob, vlivu třísměnného zaměstnání na riziko vzniku rakoviny prsu či individuální prevenci zubního kazu, ale i možném propojení personalizované medicíny a výzkumných programů. Dr. J. Kinkorová (Technologické centrum AV  ČR) zde informovala o síti národních kontaktních bodů programu Health v 7. Rámcovém programu EU.

21

Výzkum biomarkerů Problematika biomarkerů byla probírána z  různých pohledů. Část přednášek se zaměřila na standardizaci, validaci a využití nových analytických metod pro diagnostiku civilizačních chorob. Další prezentace se věnovaly závažné problematice etiky především genetických vyšetření. Bioinformatika a biobanky Samostatné sekce byly věnovány bioinformatice a  sběru biologického materiálu a  optimalizaci jeho uskladnění pro potřeby dlouhodobého sledování a opakovaných vyšetření. Závěrem Kongres nepochybně splnil svůj účel. Přispěl především k vzájemné informovanosti o PPPM mezi odbornou a  laickou veřejností. Na hodnocení jeho dopadu do praxe si však musíme ještě počkat. Oficiální materiály z akce budou poskytnuty jak národním zdravotnickým organizacím zúčastněných zemí, tak především nadnárodním společnostem zabývajícím se organizací zdravotní péče a výzkumu. Někteří z přednášejících Světového kongresu v Bonnu (Dr. R. Danesi, doc. J. Kinkorová, Dr. H. Rosolová, Dr. J. Polívka) přijali pozvání na vzdělávací konferenci „Personalizovaná medicína – od výzkumu k pacientovi“ (3. – 4. listopadu, Plzeň), kterou pořádala Lékařská fakulta v Plzni. Tato akce byla zároveň zahájením tříletého projektu Operačního programu Vzdělávání pro konkurenceschopnost „Molekulární genetika nádorových a  kardiovaskulárních chorob“ (CZ.1.07/2.3.00/20.0040), jehož koordinátorem je Lékařská fakulta v  Plzni ve spolupráci se Západočeskou univerzitou v  Plzni, Palackého univerzitou Olomouc a Ostravskou univerzitou v Ostravě. Více informací o konferenci naleznete na stránkách www.imunokurzy.cz.

RNDR. MARIE KARLÍKOVÁ, PH. D. CENTRÁLNÍ RADIOIZOTOPOVÁ LABORATOŘ, UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE – LÉKAŘSKÁ FAKULTA V PLZNI HUSOVA 3, 306 05  PLZEŇ e-mail: [email protected] PROF. MUDR. ONDŘEJ TOPOLČAN, CSC. ÚSEK IMUNODIAGNOSTIKY - ODDĚLENÍ NUKLEÁRNÍ MEDICÍNY FAKULTNÍ NEMOCNICE PLZEŇ, DR.E. BENEŠE 13, 305 99  PLZEŇ, e-mail: [email protected]

22

IGF1 a nádorové markery ve stádiích nádoru prsu CA 15-3

Úvod Karcinom prsu je nejčastějším typem nádoru u žen. Podle statistik WHO postihuje 1/5 ženské populace. Mortalita má tendenci mírného, avšak vytrvalého vzestupu s velkými variacemi mezi jednotlivými zeměmi, které jsou v rámci statistik WHO sledovány. Teoretická část Základní charakteristiky měřených analytů uvádí tabulka 1.

Jde o  glykoprotein o  molekulové hmotnosti 290  kDa, antigen polymorfního epiteliálního mucinu (PEM), nazývaný rovněž MUC1. V dospělosti je syntetizován v epiteliálních buňkách vývodů mléčné žlázy, slinných žláz a bronchů. V současné době se CA 15-3 využívá především k monitorování nemocných s karcinomem prsu. Koncentrace CA  15-3 korelují se stádiem onemocnění. Při 90% specificitě dosahuje senzitivita u  neléčených nemocných pouze

Tabulka 1: Charakteristika měřených analytů Analyt

Chemická charakteristika

Biologická charakteristika

Molekulová hmotnost

CEA

glykoprotein

onkofetální protein

200 000

CA 15-3

glykoprotein

onkofetální protein

290 000

IGF1

bazický peptid,monomer

růstový faktor

7 400

TK

thymidin-5-fosfotransferáza

enzym

25 000

TPA-M

polypeptid

cytokeratinový fragment 8, 18, 19

MonoTotal

polypeptid

cytokeratinový fragment 8, 18, 19

CEA Sérový CEA patří k  základním markerům studovaným u  různých nádorových lokalizací. Jde o  onkofetální glykoprotein s  vysokým obsahem sacharidů o  molekulové hmotnosti 180  –  200  kDa. Za fyziologických podmínek je produkován ve vyvíjejícím se embryu. V dospělosti je omezeně syntetizován epiteliálními buňkami střevní sliznice, žaludku a bronchů. CEA patří do imunoglobulinové genové rodiny a podílí se pravděpodobně na procesu adheze a metastazování buněk. V současné době má význam především při stagingu a monitorování kolorektálních karcinomů, karcinomů plic, prsu, močového měchýře a dalších malignit. Z klinických zkušeností vyplývá, že se nedá použít ani pro screening, ani pro primární nebo diferenciální diagnostiku nádorových onemocnění. V průběhu maligního procesu je CEA produkován nádorovou tkání. Jeho hladiny se výrazně zvyšují především ve vztahu k  celkové hmotě nádoru. Vzhledem k  odbourávání játry a vylučování ledvinami je jeho hladina zvýšena u nemaligních postižení těchto orgánů (hepatitida, selhání ledvin atd.). Hladinu CEA může též zvyšovat Crohnova choroba, střevní polypy, onemocnění plic, pankreatitida či kouření.

CK 8 52 500 CK18 45 000 CK19 40 000

20 – 40 %, u metastazujících nádorů až 80 %. Relaps onemocnění bývá charakterizován senzitivitou CA 15-3 dosahující 60 – 90 %. Stanovení CA  15-3 umožňuje předpovědět návrat onemocnění s předstihem několika měsíců před detekcí dostupnými zobrazovacími metodami. Dynamika změn po terapii obvykle koreluje s  terapeutickým efektem. Stanovení nelze použít pro screening nemocných s  karcinomem prsu a pro určení primární nebo diferenciální diagnózy. Sérovou hladinu CA  15-3 mohou zvyšovat benigní onemocnění prsu, benigní nádory trávicího ústrojí, jaterní cirhóza, akutní a  chronická hepatitida, chronická renální insuficience, chronická bronchitida a pneumonie. IGF1 Inzulínu podobný růstový faktor 1 (IGF1, insulin-like growth factor 1) je peptid, který se podílí na řízení růstu, metabolismu, přežívání a  diferenciaci buněk. Je regulován růstovým hormonem (GH). Má specifické vazebné proteiny IGFBP (insulin-like growth factor binding proteins). Až 95 % IGF1 cirkuluje v krvi vázáno na specifické vazebné proteiny. Funkcí vazebného proteinu je prodloužit poločas rozpadu faktorů růstu v oběhu na několik hodin.

Informační magazín IN VITRO DIAGNOSTIKA 19 - 2011

IGF1 je bazický peptid s nízkou molekulovou hmotností 7 400 Da. Je tvořen jednoduchým řetězcem o 70 aminokyselinách. Ve velkém množství jej produkují játra (přibližně 10  mg/den). Zároveň je lokálně vytvářen i v mnoha jiných tkáních např. ledvinách, srdci, plicích, tukové tkáni či tkáních různých žláz. IGF1 může být rovněž produktem chondroblastů, fibroblastů a osteoklastů. Na orgánové úrovni účinkuje IGF1 autokrinním i  parakrinním mechanismem. Působení v  buňkách je zprostředkováno vlastním IGF1 receptorem. Nejvyšší koncentrace nacházíme u dětí v pubertě. V pozdějších letech jejich hladiny klesají, přibližně o 10 % za každých 10 let. TK TK patří k enzymům syntézy DNA, charakteristickým pro proliferující tkáň. Jde o thymidin-5-fosfotransferázu, která existuje v eukaryotických buňkách ve dvou izoenzymech: TK1 a TK2. TK katalyzuje přeměnu thymidinu na thymidinmonofosfát, čímž je umožněna syntéza DNA náhradní cestou. Za fyziologických podmínek je TK intenzivně syntetizována především v játrech během vývoje plodu, po porodu se syntéza zpomaluje. V séru převažuje fetální forma (95 % z celkového množství). Pro screening a  určení diagnózy nelze stanovení TK použít. Monitorování průběhu onemocnění a úspěšnosti terapie je hlavní oblastí jejího využití. Zvýšení hladiny TK v séru z nemaligních příčin zahrnuje respirační viroinfekty s  lymfocytární aktivací, zánětlivá onemocnění plic a trávicího ústrojí, infekce EB virem, cytomegaloviry nebo herpesviry a  revmatická onemocnění. TPA-M TPA-M je polypetid ze solubilních fragmentů cytokeratinů typu středních filament (cytokeratin 8, 18 a 19). Jde o velmi nespecifický nádorový marker, který odráží intenzitu aktivity nádorových buněk. TPA-M je ukazatelem vhodným především pro monitorování a  hodnocení účinnosti terapie. Je to marker s nejvyšší senzitivitou pro sledování nemocných s  karcinomem močového měchýře. Vyšetření TPA-M nelze použít pro screening, diagnózu a  staging onemocnění. Dále se užívá pro monitorování nemocných s  nádory prsu, plic, GIT a  ledvin. Dynamika jeho změn při terapii je obvykle rychlejší než u  markerů diferenciačního typu. Nespecificky je TPA-M v séru zvýšen při některých onemocněních jater (cirhóza, hepatitida), rovněž tak u infekčních onemocnění. MonoTotal MonoTotal je polypetid ze solubilních fragmentů cytokeratinů typu středních filament (cytokeratin 8, 18 a 19). Jde také o velmi nespecifický nádorový marker, který odráží intenzitu aktivity nádorových buněk.

23

Je vhodný především pro monitorování a  hodnocení účinnosti terapie malobuněčného karcinomu plic. Jeho vyšetření nelze použít pro screening, diagnózu a staging onemocnění. Dále se uplatňuje jako doplňkový nádorový ukazatel u  nemocných s  karcinomy v  oblasti hlavy. Nespecificky je MonoTotal v séru zvýšen při některých onemocněních jater (cirhóza, hepatitida), rovněž tak u infekčních onemocnění. Metodika a soubor pacientů Náš soubor čítal 82 pacientek s karcinomem prsu. Jednalo se o ženy operované na chirurgické klinice FN  Plzeň v  letech  2008  –  2010. Věková charakteristika zkoumaného souboru v  době stanovení diagnózy je obsažena v  tabulce 2. Tabulka 2: Věková charakteristika souboru žen s karcinomem prsu Počet

Průměr

Medián

Min.

Max.

82

68

66

32

84

Výsledky Výsledky a fakta, která jsme obdrželi po statistickém vyhodnocení, obsahují tabulky 3 – 8.

Tabulka 3: Sérové hladiny CEA v jednotlivých nádorových stádiích Stádium

N

Mean SD

Medián

Min.

Max.

ρ-value Kruskal- Wallis test

I

45

1,71 +

1,35

0,5

7,4

-

II

34

3,19

1,55

0,5

33,7

0,0877*

III

3

3,70

3,70

2,80

4,60

0,0207**

* porovnání stádia I a II, ** porovnání stádia II a III

Tabulka 4: Sérové hladiny CA 15-3 v jednotlivých nádorových stádiích Stádium

N

Mean

Medián

Min.

Max.

ρ-value KruskalWallis test

I

45

13,3

11,5

10,0

26,0

-

II

34

12,8

11,0

10,0

24,0

0,5611*

III

3

42,0

30,0

18,0

78,0

0,0063**

* porovnání stádia I a II, ** porovnání stádia II a III U všech pacientek jsme měli k dispozici histologický nález. Mohli jsme tedy náš soubor rozdělit do tří skupin podle závažnosti nádorového onemocnění. Hodnoty analytů jsme v  jednotlivých stádiích karcinomu statisticky vyhodnotili a  provedli srovnání stádia  I a  II, dále pak stádia II a III. Zajímalo nás, jestli se hodnoty analytů u  jednotlivých vývojových fází nádoru od sebe statisticky významně liší a zda hladiny analytů nějakým způsobem korelují se závažností onemocnění. Použité analytické metody Sérové vzorky byly odebírány předoperačně. Vzorky venózní krve byly odebírány za pomoci odběrového systému VACUETTE (Greiner). Krevní vzorky byly centrifugovány 10  minut při 1700 x g, poté zamraženy při -80°C. Rozmraženy byly pouze 1  x, a  to před samotnou analýzou. Sérové hladiny CEA a  CA  15-3 byly měřeny za použití analytického systému DxI (Beckman Coulter). Sérové hladiny IGF1 a TK byly stanoveny izotopovými soupravami IGF1 IRMA a TK REA (Immunotech). Sérové hladiny cytokeratinů byly zjištěny pomocí izotopových souprav IRMA, TPA-M (DiaSorin) a MonoTotal (IDL). Statistické zpracování Pro statistické vyhodnocení byl použit software SAS 9.2. U souborů pacientek byly spočítány průměry a mediány sérových koncentrací. V tabulkách jsou dále uvedeny hodnoty minimální a  maximální koncentrace daného analytu. Pro porovnání jednotlivých nádorových stadií byl použit Kruskal-Wallisův test.

Tabulka 5: Sérové hladiny IGF1 v jednotlivých nádorových stádiích Stádium

N

Mean

Medián

Min.

Max.

ρ-value KruskalWallis test

I

45

181

168

24

369

-

II

34

183

168

32

384

0,9962*

III

3

70

51

48

110

0,0167**

* porovnání stádia I a II, ** porovnání stádia II a III

Tabulka 6: Sérové hladiny TK v jednotlivých nádorových stádiích Stádium

N

Mean

Medián

Min.

Max.

ρ-value KruskalWallis test

I

45

7,6

5,5

2,5

52,6

-

II

34

7,0

6,2

2,4

17,5

0,6524*

III

3

17,6

17,2

14,4

21,3

<0,0001**

* porovnání stádia I a II, ** porovnání stádia II a III

Tabulka 7: Sérové hladiny TPA-M v jednotlivých nádorových stádiích Stádium

N

Mean

Medián

Min.

Max.

ρ-value KruskalWallis test

I

45

28,6

16,5

10,0

156

-

II

34

41,2

27,0

10,0

152

0,0740*

III

3

582

596

48

1081

<0,0001**

* porovnání stádia I a II, ** porovnání stádia II a III

24

Tabulka 8: Sérové hladiny MonoTotalu v jednotlivých nádorových stádiích Stádium

N

Mean

Medián

Min.

Max.

ρ-value KruskalWallis test

I

45

70,7

43,0

0

739

-

II

34

82,9

75,7

0

308

0,5992*

III

3

1216

682

95

2871

<0,0001**

* porovnání stádia I a II, ** porovnání stádia II a III Diskuze Nádorové markery CEA, CA 15-3, TK, TPA-M a  MonoTotal korelují se závažností onemocnění, tj.  se stádiem nádorového onemocnění, přičemž statisticky významný rozdíl jsme pozorovali především u všech markerů mezi stádiem II a III. Rozdíl v hodnotách ve stádiích I a II nebyl statisticky významný. Tabulka 9 souhrnně ukazuje statistické významnosti sledovaných nádorových marketů mezi stádii I vs. II a II vs. III.

statistické významnosti IGF1 mezi stádii I vs. II a II vs. III. Hladiny IGF1 v  séru tedy negativně korelují se závažností nádorového onemocnění. Tato skutečnost je v  souladu s  teorií, která byla opakovaně vyslovena některými autory v souvislosti s IGF1 a nádory prsu a tlustého střeva. Na základě tohoto názoru se signální dráha IGF1 uplatňuje v podpoře růstu nádoru v jeho časných stádiích. Čím vyšší je nádorové stádium, tím je v buňkách nádorové tkáně aktivo-

Tabulka 9: Statistické významnosti analytů mezi stádii nádorového onemocnění Marker

Statistická významnost (ρ-value) Stádium I vs. II

Stádium II vs. III

CEA

0,0877

0,0207

CA 15-3

0,5611

0,0063

TK

0,6524

<0,0001

TPA-M

0,0740

<0,0001

MonoTotal

0,5992

<0,0001

Koncentrace nádorových markerů pozitivně korelují s průběhem nádorového onemocnění. Čím vyšší a závažnější je stádium nádoru, tím vyšší jsou koncentrace v  séru. Průběh zvyšování koncentrací všech nádorových markerů je dosti podobný. Z  našich výsledků je dobře patrné výrazné navýšení markerů proliferace a aktivity nádorových buněk (TK, TPA-M, MonoTotal) oproti markerům odrážejícím spíše hmotu a diferenciaci nádoru (CEA, CA 15-23). U růstového faktoru IGF1 jsme též neprokázali statisticky významný rozdíl v  koncentracích mezi stádiem I a II. Statisticky významný je rozdíl mezi stádii II a III. Avšak narozdíl od nádorových markerů jsou hladiny IGF1 nejnižší ve stádiu  III. Tabulka  10 souhrnně ukazuje

váno více prorůstových cest a význam přenosu signálu v  prorůstové dráze IGF1 ustupuje do pozadí. Závěr Sérové hladiny nádorových markerů CEA, CA  15-3, TK, TPA-M a  MonoTotal pozitivně korelují s průběhem nádorového onemocnění. Statisticky významný rozdíl jsme pozorovali mezi stádiem  II a  III. Rozdíl v  hodnotách ve stádiích I a II nebyl statisticky významný. Sérové hladiny růstového faktoru IGF1 negativně korelují se závažností nádorového onemocnění. Statisticky významný je rozdíl mezi stádii  II a  III. Rozdíl v  hodnotách ve stádiích I a II nebyl statisticky významný. Literatura

Tabulka 10: Statistické významnosti IGF1 mezi stádii nádorového onemocnění

Analyt

IGF1

Statistická významnost (ρ-value) Stádium I vs. II

Stádium II vs. III

0,9962

0,0167

1. Peterson J.E., Kulik G., Jelinek T., Reuter C.W., Shannon J.A., Weber M.J. Src phosphorylates the insulin-like growth factor type I receptor on the autophosphorylation sites. Requirement for transformation by src. J Biol Chem. 1996 Dec 6; 271(49):31562–31571. 2. Samani A.A., Yakar S., LeRoith D., Brodt P. The role of the IGF system in cancer growth and metastasis: overview and recent insights. Endocr Rev. 2007; 28:20–47. 3. Werner H., LeRoith D. The role of the insulin-like growth factor system in human cancer. Adv Cancer Res. 1996; 68:183–223.

Informační magazín IN VITRO DIAGNOSTIKA 19 - 2011

4. Schnarr B., Strunz K., Ohsam J., Benner A., Wacker J., Mayer D. Down-regulation of insulin-like growth factor-I receptor and insulin receptor substrate-1 expression in advanced human breast cancer. Int J Cancer. 2000; 89:506–513. 5. Tennant M.K., Thrasher J.B., Twomey P.A., Birnbaum R.S., Plymate S.R. Insulin-like growth factor-binding protein-2 and -3 expression in benign human prostate epithelium, prostate intraepithelial neoplasia, and adenocarcinoma of the prostate. J Clin Endocrinol Metab. 1996; 81:411–420. 6. Renehan A.G., Zwahlen M., Minder C., O’Dwyer S.T., Shalet S.M., Egger M. Insulin-like growth factor (IGF)-I, IGF binding protein-3, and cancer risk: systematic review and meta-regression analysis. Lancet. 2004; 363:1346–1353. 7. Wolpin B.M. et al. Circulating insulin-like growth factor binding protein-1 and the risk of pancreatic cancer. Cancer Res. 2007; 67:7923–8. 8. Topolcan O., Holubec L., Polivkova V., Svobodova S., Pesek M., Treska V., Safranek J., Hajek T., Bartunek L., Rousarova M., Finek J. Tumor markers in pleural effusions, Anticancer Res.; 27(4A):1921-4; 2007. 9. Peeters P.H.M., Lukanova A., Allen N. et al. Serum IGF-I, its major binding protein (IGFBP-3) and epithelial ovarian cancer risk: the European Prospective Investigation into Cancer and Nutrition (EPIC) Endocrine-Related Cancer. 2007; 14(1):81–90. 10.Weiderpass E., Brismar K., Bellocco R., Vainio H., Kaaks R. Serum levels of insulin-like growth factor-I, IGF-binding protein 1 and 3, and insulin and endometrial cancer risk. Br. J. Cancer. 2003; 89:1697–1704. 11. Vorwerk P., Wex H., Hohmann B., Mohnike K., Schmidt U., Mittler U. Expression of components of the IGF signalling system in childhood acute lymphoblastic leukaemia. Mol Pathol. 2002; 55:40–45. 12.Linnerth N.M., Siwicky M.D., Campbell C.I., Watson K.L., Petrik J.J., Whitsett J.A., Moorehead R.A. Type I insulin-like growth factor receptor induces pulmonary tumorigenesis. Neoplasia. 2009; 11:672–682. 13.Tomizawa M., Shinozaki F., Sugiyama T., Yamamoto S., Sueishi M., Yoshida T. Insulin-like growth factorI receptor in proliferation and motility of pancreatic cancer. World J Gastroenterol. 2010 Apr 21; 16(15):1854-8. 14.Kim W.Y., Jin Q., Oh S.H., Kim E.S., Yang Y.J., Lee D.H., Feng L., Behrens C., Prudkin L., Miller Y.E., Lee J.J., Lippman S.M., Hong W.K., Wistuba I.I., Lee H.Y. Elevated epithelial insulin-like growth factor expression is a risk factor for lung cancer development. Cancer Res. 2009; 69:7439–48. doi: 10.1158/00085472.CAN-08-3792. 15.Avnet S. et al. Insulin receptor isoform A and insulin-like growth factor II as additional treatment targets in human osteosarcoma. Cancer Res. 2009; 69:2443–2452.

Studie byla podpořena z  grantu IGA MZ NS 96-18.

MGR. RADEK KUČERA ODDĚLENÍ NUKLEÁRNÍ MEDICÍNY, KLATOVSKÁ NEMOCNICE A.S., PLZEŇSKÁ 569, 339 38 KLATOVY e-mail: [email protected] PROF. MUDR. ONDŘEJ TOPOLČAN, CSC., ODDĚLENÍ NUKLEÁRNÍ MEDICÍNY, FN PLZEŇ MUDR. MONIKA ČERNÁ, CHIRURGICKÁ KLINIKA, FN PLZEŇ MUDR. ANDREA ŇARŠANSKÁ, CHIRURGICKÁ KLINIKA, FN PLZEŇ PROF. MUDR. VLADISLAV TŘEŠKA, CSC., CHIRURGICKÁ KLINIKA, FN PLZEŇ

25

Kongres ESHRE 3. – 6. července 2011 Stockholm Ve dnech 3. – 6.  července jsem měl příležitost zúčastnit se osobně kongresu ESHRE (European Society of Human Reproduction and Embryology), který se letos konal ve švédském Stockholmu. Celkem bylo registrováno přes 8  000  účastníků z  celého světa. ESHRE se těší velmi dobré pověsti, proto její každoroční sjezd patří vždy mezi hojně navštěvované akce. Odborný program probíhal paralelně v  pěti velkých přednáškových sálech. K dispozici byla i bohatá posterová prezentace. V pondělí dopoledne jsem se zúčastnil laboratorní sekce, která byla věnována výhradně problematice AMH. Všechny přednášky shodně hodnotily přínos a využití AMH v in vitro fertilizaci jako kladný. Ke každému z přednesených sdělení se rozproudila velmi intenzivní věcná debata, což svědčí o vysoké aktuálnosti tohoto tématu. Další sekce, jež byla v  centru mého zájmu, probíhala v úterý. Předmětem diskuze byl tentokrát PCOS (Polycystic Ovarian Syndrome). V  průběhu letošního jara jsem obdržel řadu dotazů týkajících se využití AMH a Inhibinu B u  PCOS. Ve svých přednáškách někteří autoři

26

Obr. 1: Stockholm

v  souvislosti s  diagnostikou PCOS zmiňovali AMH a  Inhibin  B jako perspektivní a  přínosné markery. Systematické studie na větších souborech pacientů však zatím prezentovány nebyly. Výstupem z kongresu je sborník nazvaný Human Reproduction. Ten obsahuje 350 stran abstraktů ze všech přednášek i posterů, které byly na sjezdu prezentovány. Součástí kongresu byla rovněž rozsáhlá expozice firem. Stánek společnosti Beckman Coulter byl zajišťován přímo našimi spolupracovníky z  USA. Přítomní kolegové nám po skončení akce předali od koncových zákazníků (Rumunsko, Mexiko, ČR, Egypt, Írán) řadu požadavků na odborné informace. Všechny se nám podařilo promptně vyřídit. Velmi zajímavé bylo složení účastníků. Hojné zastoupení z  evropských zemí, USA, Kanady, Austrálie, Japonska, Koreje a  Číny asi nikoho nepřekvapí. Taktéž početná účast z  Ruska už dnes není nikterak neobvyklým jevem. Pozoruhodné však bylo, že jste na konferenci mohli potkat velké množství osob z  Indie, dále pak z  Thajska, Bangladéše či Filipín a  afrických zemí, jako je Nigérie, Ghana, Angola. Přítomnost zástupců států Perského zálivu např.

Obr. 2: Stánek BC

Spojených arabských emirátů, Kuvajtu nebo Saudské Arábie v dnešní době pravděpodobně velkým překvapením také není. Aby má zpráva z kongresu nebyla pouze suchým výčtem faktů, přidám ještě jednu veselou „historku z natáčení“. Když jsem si vybíral místo, kde budu ve Stockholmu bydlet, použil jsem k ověření lokality osvědčený server Google Map. Protože však hotel vedle veletržního paláce, v  němž se kongres konal, byl již obsazený, vybral jsem si ubytování prakticky v těsné blízkosti (cca 1,5 km). Byl to dle mapy nejbližší hotel vyjma toho, který se nacházel přímo v areálu výstaviště. Na stránkách ESHRE jsem se rovněž dočetl, že je přímo z hotelu zajištěna pro účastníky akce kyvadlová doprava minibusem do kongresového centra a  zpět, a to dokonce několikrát denně. Pouze jsem na mapě nějak nemohl blíže identifikovat objekty sousedící s hotelem. Nakonec jsem si vytvořil teorii, že se zřejmě jedná o  autobusové nádraží nebo něco podobného. Hotelové pokoje vypadaly na fotkách webové prezentace skvěle a  také název NEW WORLD přímo vybízel k  tomu, abych si jeden z  nich zarezervoval. Bylo tedy rozhodnuto. Rozšířím si odborné obzory a ještě k tomu budu pobývat v Novém světě. Že asi bude něco v nepořádku jsem zjistil až tehdy, když jsem se v  taxíku, řízeném palestinským imigrantem, k Novému světu blížil. Nutno ještě předeslat, že taxi dopravu jsem zvolil po mém výstupu z  autobusu na stockholmském centrálním nádraží (CS – Central Station, pozn. aut.), kam jsem dorazil expresní autobusovou linkou z  letiště. Pro nezasvěcené osoby, jež doposud nenavštívily Stockholm, je potřeba dodat, že letiště Arlanda, na které ČSA létají, je vzdáleno od Stockholmu téměř 50  km severním směrem. Tento „zanedbatelný“ fakt jsem se dozvěděl až po příchodu do příletové haly z informačních tabulí. Jako dopravu do Stockholmu bylo možné využít autobus, vlak, taxi apod. Vybral jsem si autobus, protože odjezdové stání bylo umístěno přímo před východem z letištní haly a autobus jezdil každých 15  minut. Avšak přes veškerou moji snahu jsem si nedokázal u žádného z automatů, jichž bylo v  letištní hale několik, jízdenku koupit. Plechové skříně zatvrzele odmítaly moji platební kartu a  nedaly se obměkčit ani

švédskou korunou v hotovosti, kterou jsem jim podlézavě nabízel. Odevzdaně jsem tedy zamířil k  informačnímu stánku, kde dvě blonďaté Švédky zasvěceně rozdávaly informace o  své rodné zemi a  zároveň prodávaly jízdenky na autobus. Vyškolený českým systémem získávání informací jsem ihned pochopil, že si musím pro umožnění  přístupu k  přepážce vzít číslo, jež vydával podobný terminál jako u  nás na poště, v bance či na pojišťovně. Se škodolibou radostí jsem sledoval tragický příběh japonských turistů, kteří se u přepážky také dožadovali informací o způsobu dopravy do Stockholmu. Protože však neměli pořadová čísla, byli korpulentní Švédkou nemilosrdně odkázáni k  výdejnímu lístkovému terminálu, aby si tak mohli, stejně jako já, vychutnat půlhodinku čekání, až na ně přijde řada. Ve chvíli, kdy se japonští turisté fotili u  stojanu s  pořadovými čísly, bliklo to mé nad jednou z přepážek a já jsem konečně dokonal své vítězné tažení. Jeho výsledkem bylo získání autobusové jízdenky z letiště Arlanda do Stockholmu. Souboj s plechovou skříní na jízdenky a následný drastický příběh japonských turistů mě tak vyčerpal, že jsem se rozhodl k poslední části své cesty využít taxi. Jsme tedy zpět ve stockholmském taxíku a  palestinský Švéd mi svou exotickou angličtinou oznamuje, že jsme za minutu na místě. Stín pochybnosti nad správností mé volby hotelu začal nabývat poměrně jasných obrysů. Jeli jsme totiž po čtyřproudé komunikaci podél skladištní oblasti a vtom na mě vykoukl zpoza kamionového terminálu pro ovoce a  zeleninu neonový nápis NEW WORLD. Po čtyřproudovce dálničního typu se valily oběma směry kolony aut a i když bylo výstaviště na dohled, nevedl tímto směrem žádný chodník. Má představa ranní procházky do místa konání kongresu svěžím stockholmským ránem prosyceným baltsky slanými zápornými ionty vzala rychle za své. S pocitem trosečníka jsem opustil taxi a zamířil k hotelovým dveřím. V rámci objektivity musím uvést, že hotel NEW WORLD byl jinak naprosto skvělý. Pohyblivé schody do vstupní haly, příjemný personál, pěkné a prostorné pokoje, restaurace uprostřed hotelu pod pyramidový atriem, vynikající snídaně. Jediným jeho handicapem bylo tedy jeho umístění. V  těsném sousedství se nacházelo jedno z největších překladišť zboží proudícího do Švédska. Nakonec ale vše skončilo happyendem. Kyvadlová doprava do veletržního paláce se konala, kongres byl skvělý a navíc jsem si rozšířil obzory v  oblasti Cargo&Spedice. Měl jsem totiž možnost shlédnout, jakým způsobem se ve Švédsku rozváží zelenina, jak se překládá elektronika a  bílé zboží a  jakým způsobem se do země dostávají bulharské broskve a  meruňky. Na přilehlou skladištní oblast jsem si tak zvykl, že již od srpna zvažuji, kdy do Stockholmu znovu vyrazím. Rovněž jsem již několikrát zadal na Google Map heslo NEW WORLD HOTEL a láskyplně jsem si prohlížel leteckou mapu. Tak to je vše, co jsem vám chtěl sdělit o kongresu ESHRE a  nových klinických poznatcích týkajících se AMH a Inhibinu B.

Obr. 3: Veletržní palác

Obr. 4: ESHRE centrum

Obr. 5: Přednáškový sál V  souvislosti s  mojí návštěvou kongresu ESHRE bych rád upozornil na to, že společnost Beckman Coulter spustila internetové stránky zabývající se výhradně problematikou AMH a reprodukce. Adresa stránek je: https://www.beckmancoulter.com/amh

RADEK KUČERA e-mail: [email protected]

Informační magazín IN VITRO DIAGNOSTIKA 19 - 2011

27

Uživatelské setkání Beckman Coulter 4. – 6. září 2011 Hluboká nad Vltavou Začátkem září jsme pozvali uživatele našich hematologických analyzátorů na tradiční společné setkání, které se tentokrát uskutečnilo v  Hluboké nad Vltavou. V  místě konání, tedy Parkhotelu Hluboká nad Vltavou, jsme se sešli v  neděli 4.  září kolem poledne, a  akci tak zahájili obědem. Poté dostali účastníci prostor k  ubytování, relaxaci, procházce či návštěvě místního zámku. Odborný program byl zahájen po druhé hodině. Nejprve jsme zákazníky seznámili s aktualitami z naší společnosti. Dále vystoupil MUDr.  Lysák, jehož přednášky byly velmi poutavé a posluchači pozitivně hodnocené. Po rychlé večeři jsme se přemístili na Státní zámek Kratochvíle, kde se konal náš první společenský večer. Na Kratochvíli nás přivítala se svým krátkým vystoupením skupina historického šermu Dačičtí. O další část bohatého programu se postarala hudební skupina Arleens. Jejich libá hudba se fantasticky prolnula celým zámkem. Následovalo drobné občerstvení a poté jsme měli možnost shlédnout ohnivou show na motivy legendy o  Prométheovi. Tím ale bohatý program zdaleka nekončil. Velmi zajímavá byl prohlídka zámku a jeho zahrady, své kouzlo dodalo i noční osvětlení objektu. Po závěrečné exkurzi kostela s  krátkou hudební produkcí jsme se přesunuli zpět do hotelu, kde jsme nabírali síly na pondělní program. Druhý den bylo po snídani na řadě pokračování odborného programu, v  rámci něhož byla nejlépe hodnocena MUDr.  Šigutová a  její Koagulace zábavnou formou. Odpoledne bylo určeno relaxaci, odpočinku a  dobrodružství. Účastníci se rozdělili na čtyři zájmové skupiny: wellness, golf, kola a  rafty. Vše se zdálo být naprosto úžasné, jen počasí se rozhodlo, že si s  námi trochu zašpásuje. Proto se přesně v  době zahájení odpoledních aktivit obloha zatáhla a  začal se zvedat vítr. Rafťáci však již byli na cestě na místo nalodění. Cyklisté se prozatím připravovali na náročný výkon ve wellness centru a  golfisté vyrazili na green. Po několika minutách se ale do hotelového wellnessu na kůži promočení vrátili – právě začalo pršet. Skupinka rafťáků byla opravdu hodně odolná, nepřízně počasí se nebála a vydala se na cestu po řece, ačkoli již při nástupu do plavidel pršelo.

živá hudba. Během něho měl každý prostor k diskusím s kolegy či společnému tanci.

Autobus s  promočenými, vodáky se vrátil až na konci běželi ohřát do sauny, jiní společenský večer, kterým

Úterní odborný blok zahájil Dr. Ramon Lopez. Toho posléze vystřídali další přednášející. Po obědě se všichni postupně odhlásili z  hotelu a připravovali se na odjezd domů.

28

ale šťastnými dne. Někteří se připravovat na nás provázela

V  průběhu celého setkání vládla opravdu pohodová a  přátelská atmosféra. Už nyní se tedy těším na to příští.

KLÁRA SVOBODOVÁ e-mail: [email protected]

Informační magazín IN VITRO DIAGNOSTIKA 19 - 2011

29

X. celostátní sjezd ČSKB 25. – 27. září 2011, Plzeň Letošní, tentokráte již desátý celostátní sjezd ČSKB jsme pojali jako prezentaci našeho nového biochemického analyzátoru AU  5800. Ten jsme do plzeňského Parkhotelu, kde se celá akce uskutečnila, dopravili a  nainstalovali v  sobotu 24. září. Nedělní program byl zahájen v  jednu hodinu po poledni. Po slavnostním otevření přišla na řadu spousta zajímavých přednášek. Večer jsme se pak zúčastnili uvítacího koktejlu a na závěr dne jsme naše zákazníky pozvali na společné posezení s  večeří v  plzeňské hospůdce Tivoli, známé též jako U  Švejka. Atmosféra byla velmi příjemná a uvolněná. Další den akce byl opět naplněn množstvím poutavých sdělení a  workshopů. Prezentační stánek Beckman Coulter přišlo navštívit mnoho našich klientů. Měli jsme tak možnost si s  nimi popovídat a pozvat je na drobné pohoštění. Po skončení odborného programu byl pro účastníky sjezdu připraven společenský večer ve stylu šedesátých let, kterým hosty v  nádherné budově Měšťanské besedy provázela hudební skupina The Beatles Revival Band. Součástí večera byl i  výborný raut. Poté, co jsme ochutnali všechny nabízené dobroty, jsme poseděli a  vyměnili si informace

30

a  zkušenosti s  kolegy z  různých jiných pracovišť. Nechyběla ani příležitost zatančit si či zazpívat známé melodie. Úterní ráno jsme zahájili snídaní. Tu jsme pro zákazníky zajistili v  prostorách Parkhotelu. Jakmile jsme zasytili naše vyhládlé žaludky, přesunuli jsme se na workshop. Na něm byly posluchačům představeny novinky společnosti Beckman Coulter. Účastníci se v  rámci pracovního setkání blíže seznámili s  biochemickým analyzátorem AU  5800, který bylo možné si prohlédnout na našem stánku po celou dobu konání akce. Následovala zajímavá přednáška MUDr. Fuchsové – odpověděla na otázku: „Proč proPSA?“ M. Cottin nám představila novou soupravu na stanovení HIV Comba. Rovněž jsme se snažili zákazníkům vysvětlit, jakým způsobem funguje tzv.  vzdálená správa ProService. Celý odborný seminář ukončilo krátké sdělení týkající se nové generace hematologických analyzátorů DxH. Pak už přišlo na řadu jen sklizení stánku a  odjezd domů. A  nyní sbíráme síly a náměty pro ročník následující.

KLÁRA SVOBODOVÁ e-mail: [email protected]

INVESTMENT IN EDUCATION DEVELOPMENT

XXXIII. NATIONAL IMMUNOANALYTICAL DAYS

XII. CECHTUMA (Human tumor markers) I I I . C O N F E R E N C E O N P E R S O N A L I Z E D MEDICINE

April 1 - 3, 2012

Hotel Vladimír, Ústí nad Labem

Czech Republic Czech Nuclear Medicine Society

Organizer:

(Czech Medical Society), Immunoanalytical methods Group

In cooperation with:

Czech Endocrinology Society, Czech Clinical Chemistry Society, Czech Allergology and Clinical Immunology Society – Laboratory Immunology Group

S blížícím se koncem roku je možné se buď ohlížet za rokem právě uplývajícím, nebo naopak vyhlížet, co nás čeká v tom příštím. Pokud zvolíte druhou z nabízených variant a pokusíte se poodhrnout roušku budoucnosti, ocitáte se na značně nejisté půdě. Ekonomický vývoj v Evropě i ve světě je dnes prakticky nemožné predikovat a politická rozhodnutí jsou s ním dnes již natolik těsně spojena, že také zde je těžké cokoliv odhadovat. Všechny tyto změny se pak odráží v našich každodenních životech. Navíc na příští rok, konkrétně na datum  21.12.2012, připadá konec Mayského kalendáře, resp. jeho posledního, tj. 13. cyklu. Budeme tedy ponecháni ve světě mimo „mayský“ čas, ve světě, jehož pevné zakotvení nám již nyní nahlodávají neutrina pohybující se nadsvětelnou rychlostí. V  nejistých dobách rádi saháme po něčem pevném, stabilním. Naštěstí lze stále na takové pevné body narazit. Jednou z  těchto jistot bude v  příštím roce konání 33. ročníku konference Imunoanalytické dny. Na shledanou 1. – 3. dubna 2012 v Ústí nad Labem!

PATRIK ŠAF e-mail: [email protected]

Faculty Hospital in Pilsen, Medical Faculty in Pilsen – Charles University Prague Technology center Academy of Science CR European Group for Tumor Markers – EGTM, European Association for Predictive, Preventive & Personalised Medicine - EPMA

www.imunodny.cz

Analytická cytometrie VI. 8. – 11. října 2011, Praha

V

e dnech 8.  –  11.  října se pod záštitou České společnosti pro analytickou cytologii (ČSAC) uskutečnila tradiční cytometrická konference „Analytická cytometrie VI.“ s  hojnou účastí zahraničních přednášejících. Hlavními a  již tradičními tématy byly buněčná biologie, imunologie, hematologie a botanika. Samotné akci předcházel workshop skupiny Euroflow  –  cytometrická diagnostika v hematologii. Beckman Coulter Česká republika  s.r.o se coby zlatý sponzor zúčastnil kongresu formou prezentace, v  rámci níž představil aktuality z oblasti průtokové cytometrie, a samozřejmě také formou stánku, kde se velkému zájmu těšil vystavený cytometr Navios spolu s analytickým softwarem Kaluza. Naše společnost rovněž s potěšením zaštítila sponzorství ceny ČSAC za nejlepší publikaci s  cytometrickou tématikou za rok  2010. Toto ocenění získala Mgr.  Marcela Vlková,  PhD. a kol. z FN u sv. Anny v Brně za práci uveřejněnou v  Journal of Immunology: Characterization of lymphocyte subsets in patients with common variable immunodeficiency reveals subsets of naive human B cells marked by CD24 expression. Cena byla finančně podpořena částkou 20 000 Kč. Symbolický šek byl výherkyni slavnostně předán na závěr konference Ing. Václavem Mádrem, ředitelem společnosti Beckman Coulter Česká republika s.r.o.

V průběhu akce se zároveň uskutečnilo valné shromáždění ČSAC, na němž byl zvolen nový výbor společnosti ČSAC a její předseda. Tím se stal Doc. MUDr. Tomáš Kalina, PhD.

Informační magazín IN VITRO DIAGNOSTIKA 19 - 2011

Za dva roky se budeme těšit na další setkání v rámci konference Analytická cytometrie VII., tentokrát v Mikulově.

ROMAN VLČEK e-mail: [email protected]

31

XII. Slovensko-české dni laboratórnej hematológie a transfuziológie V. Bratislavské hematologické a transfuziologické dni s medzinárodnou účasťou 42. týždeň aktuálneho kalendárneho roka sa v bratislavskom hoteli Holiday Inn niesol v duchu medicínskeho odboru hematológia a transfuziológia. V náväznosti na seba sa konali dve odborné konferencie, a to XII. Slovensko-české dni laboratórnej hematológie a transfuziológie (XII. SČDLHaT) a V. Bratislavské hematologické a transfuziologické dni (V. BHaT dni). Záštitu nad XII. SČDLHaT prevzali Slovenská hematologická a  transfuziologická spoločnosť SLS, Klinika laboratórnej medicíny OÚSA a Vysoká škola zdravotníctva a sociálnej práce sv. Alžbety. Koordinátormi konferancie boli Doc. MUDr. Tomáš Lipšic, CSc. a Doc. RNDr. Miroslav Pecka, CSc. Prvý deň konferencie zazneli príspevky z oblasti hematológie a  hemokoagulácie a  v  poslednom bloku sa prezentovali príbuzné odbory – patológia, imunológia a  genetika. Nasledujúci deň bol otvorený bohatou diskusiou Fóra neštátnych laboratórnych pracovísk. Pokračovalo sa témami z okruhu imunológie erytrocytov, leukocytov a trombocytov, špeciálnej biochémie a  špeciálnej mikrobiológie/virológie. V bloku venovanom systémom kontroly kvality odznela v  podaní Ing.  Ingrid Škorňovej z  Kliniky hematológie a transfuziológie UN Martin prednáška zameraná na praktické skúsenosti s  IQAP (Interlaboratory Quality Assurance Program), pomocou ktorého na jej pracovisku zabezpečujú kontrolu správnosti a  presnosti meraní na analyzátore Coulter LH 750.

32

V.  BHaT dni organizovala Slovenská hematologická a  transfuziologická spoločnosť SLS, Klinika hematológie a  transfuziológie LF  UK, SZU a  UN  Bratislava a  Nemocnica sv.  Cyrila a  Metoda. Prezidentom konferencie bol Doc.  MUDr.  Martin Mistrík,  PhD. Záštitu nad akciou mali dekan LF  UK Bratislava Doc. MUDr. Peter Labaš, CSc., rektorka SZU Bratislava Dr.h.c. Prof. PhDr. Dana Farkašová, PhD., riaditel´ UN  Bratislava MUDr.  Miroslav Bucha a zástupca riaditel´a UN Bratislava, Nemocnica sv. Cyrila a Metoda MUDr. Peter Lofaj, PhD. Vedeckému výboru predsedala Doc. MUDr. Angelika Bátorová, PhD. Organizačný výbor viedla MUDr. Eva Demečková. Konferencia bola tematicky zameraná na akútne a chronické leukémie, chronické myeloproliferatívne ochorenia, myelodysplastický syndróm, mnohopočetný myelóm, malígne lymfoproliferácie, transplantácie krvotvorných buniek, anémie, imunitné cytopénie, trombofilné a  kravácavé stavy a  transfuziológiu. Už tradične bola akcia otvorena slávnostným odovzdávaním ocenení SLS hematológom, ktorí najviac participovali na  rozvoji odboru hematológia a  transfuziológia s  ciel´om zabezpečiť kvalitnú úroveň liečby pre svojich pacientov. Všetkým srdečne blahoželáme a prajeme vel´a elánu do ďalšej tvorivej práce. Hrubiškova prednáška tentoraz odznela v podaní Doc. MUDr. Martin Mistríka, PhD. na tému Transplantácia krvotvorných kmeňových buniek. V  ďalšom priebehu konferencie odznelo

až 82  zahraničných a  tuzemských prednášok a bolo vystavených 29 posterov. Hlavný spoločenský program bol situovaný do Slovenského divadla tanca, kde tanečno-divadelné predstavenie príbehu Carmen v réžii Jána Ďurovčíka a následné priatel´ské rozhovory počas recepcie príjemne ukončili deň plný odbornosti a  prispeli k  utužovaniu vzťahov a lepšej vzájomnej komunikácii. Aj naša spoločnosť priložila ruky k  dielu a na oboch konferenciách predstavila slovenskej odbornej verejnosti portfólio spoločností Beckman Coulter a Instrumentation Laboratory pre oblasť hematológie a hemostazeológie. Ako hlavný sponzor podujatia XII.  SČDLHaT sme usporiadali satelitné sympózium, na ktorom sme predstavili nový koncept hematologického laboratória UniCel DxH a  HematoFlow a  riešenie diagnostiky starých a nových antitrombotických liekov na koagulačných systémoch od Instrumentation Laboratory. Pozornosť návštevníkov na našom stánku sa sústredila najmä na vystavený koagulometer ACL TOP 500 CTS. Ďakujeme organizátorom za výborne pripravené a  kvalitné konferencie a  za prezentáciu nových poznatkov v  diagnostike a  liečbe hematologických ochorení. Tešíme sa na nasledujúce ročníky oboch podujatí.

JOZEFÍNA BERNÁTOVÁ e-mail: [email protected]

Výstava laboratorní techniky LABOREXPO 2011 5. – 6. října 2011, Praha

LABOREXPO je   největší a  zcela ojedinělou výstavou  laboratorního vybavení svého druhu v České republice. Její V.  ročník proběhl ve dnech 5.  –  6.  října  2011 v Kongresovém centru v Praze. Organizátorem a hlavním mediálním partnerem se stal časopis CHEMMAGAZÍN. Svým obsahem se letošní akce zaměřila především  na oblast základního, ale i aplikovaného výzkumu, na průmyslový vývoj a  výrobu, biochemii, biotechnologii,  life science  a  na mnohá další odvětví a obory, v nichž je využívána laboratorní technika. Mnohé z exponátů patřily mezi nově zaváděné produkty na trh. Skupina life science společnosti Beckman Coulter se této výstavy zúčastnila letos poprvé. Na svém prezentačním stánku nabídla k vidění zcela novou ultracentrifugu OptimaTM XPN -100, o které se můžete více dočíst na str. 6. Tento přístroj byl na českém LABOREXPU představen veřejnosti jako první v Evropě. Nebylo tedy divu, že o ni byl velký zájem rovněž z  řad konkurenčních výrobců. Dále mohli návštěvníci shlédnout přímo při práci pipetovací automat Biomek 3000 a termocycler AmpliSpeed. O uvedených přístrojích jsme vás informovali již v předchozích číslech našeho časopisu. Účastníci LABOREXPA se tedy mohli s vystavenými exponáty přímo seznámit, oslovit jejich prodejce a okamžitě získat všechny potřebné detailní informace. Souběžně s  výstavou probíhaly workshopy a  semináře pořádané samotnými vystavovateli. Součástí akce byl také doprovodný  odborný program. Ten byl tvořen sérií přednášek zaměřených na aplikace analytické techniky ve farmakologii, biochemii a genomice prezentované předními domácími i zahraničními odborníky. Svou velikostí se LABOREXPO řadí mezi tradiční velké expozice, jako je např.  Progomedica. Letošního ročníku se zúčastnilo 83  vystavovatelů předních domácích i  zahraničních výrobců a distributorů laboratorního vybavení a analytické techniky. Celkový počet firem zastoupených vystavovateli byl více než  700. Akci si přišlo prohlédnout  přibližně 1  200  návštěvníků. LABOREXPO se pořádá pouze jednou za dva roky a její další konání se plánuje na podzim roku 2013. Budeme proto rádi, když se zde s vámi setkáme.

MARTIN MÁŠA e-mail: [email protected]

Informační magazín IN VITRO DIAGNOSTIKA 19 - 2011

33

MUDr. Tomáš Soukup – tak trochu jiný doktor… Jako obvykle si domluvíte schůzku, vyberete kavárnu a  připravíte si podklady, na kterých se chystáte vystavět otázky pro svůj článek. Bohužel vám ale nezbývá moc času, proto si poznámky rozhodnete vytisknout s tím, že si je nastudujete těsně před setkáním. Sedíte v kavárně 20 minut předem. Tak kohopak to dnes budeme zpovídat, říkáte si a berete do ruky 13 stránek životopisu MUDr. Tomáše Soukupa, když v tom se vám nad prvními řádky rozbuší srdce. Věk 31 let?! 13-ti stránkový životopis?! Zaujati čtete dál. Zkušenosti: Stanford University, FP7 project, Dept. of Cardio-Thoracic Surgery, Dept. of Biochemistry Hong Kong, encyklopedie „WHO IS…“. Publikací v mezinárodních časopisech víc než 30, patent doposud 1. Čas do schůzky se krátí. Jste ohromeni. Kdo to asi přijde? Jak bude vypadat? Co je to za člověka? V tom se otevřou dveře a jako svěží vítr z hor vyplní místnost energický mladý na krátko ostříhaný muž s  úsměvem od ucha k  uchu. „Dobrý den. Nezlobte se, že jste na mě musel čekat.“ začíná rozhovor. Při podání ruky hledí

34

upřímně do očí. Padnoucí černé kalhoty, černé těsné tričko, osobitý parfém připomínající vůni exotického dřeva, cosi stříbrného v podpaží. „Tak jsme se konečně sešli.“ pokračuje a  na stůl odkládá hliníkové tělo minipočítače značky Apple. Tomáš tuto firmu přímo miluje. „Nejvíce mi imponuje filosofie a  osobnost zakladatele Steva Jobse.“ dozvíte se po chvíli z rozhovoru, zeptáte-li se na stříbrnou věcičku překrytou bundou. „Jedná se o připomenutí toho, jak vážně by člověk měl brát své poslání, svoji práci.“ vysvětluje. „Víte, každý by se měl snažit být alespoň trochu jako on, obzvláště pracujeme-li v  medicíně. Být lékařem je pro mne poslání, stejně jako byla pro Steva radost uživatele z  jeho dokonalých zařízení. Jak říkám svým studentům, je důležité být zamilovaný do svého poslání. Pěstujte své koníčky, propojte je s medicínou a  udělejte revoluci. Najděte sami sebe ve svých projektech a dejte do toho všechno. Pokud milujete celým srdcem to, co děláte, vaše práce přestává být šedivá, září barvami, co víc, stává se vášní. Lidé s  roztroušenou sklerózou, o které se ve volném čase v  rámci svého podnikaní společně s  kolegy starám, nejsou rázem jenom pacienti, ale přátelé a  nádherní lidé, jimž ze svého postu můžu dát naději a  vnést do jejich srdcí barvy,

o kterých doposud neměli ani ponětí. Učit klienty ve svém fitness centru, jak rozumět svému tělu, správně pečovat o sebe, svoje zdraví, mít skvělou náladu a spoustu energie po celý den k rozvíjení sebe sama a svých projektů, je pro mne zadostiučinění v boji s laxností dnešní medicíny a stavem společnosti.“ Tomáš pracuje i ve svém volném čase. Spolu se svými přáteli a partnery vybudoval v Hradci Králové firmu GoMango. Ta je pro více než 200  klientů oázou zdraví, relaxace a  sportu. Díky komplexnímu přístupu a  speciální metodice se zde lidé učí porozumět svému tělu, zdravě jíst a sportovat. V rámci svého podnikání zbavuje Tomáš všech neduhů nejenom klienty GoManga, ale pomáhá také například lidem s  roztroušenou sklerózou z  královehradeckého sdružení RosKa. Jak vám sám poví, na relaxaci už moc času nezbývá. Když na ni ale dojde, věnuje se cyklistice, nordwalkingu nebo přípravě na maratónský běh. „Jak vás tak poslouchám, vy rád provokujete, viďte Tomáši?“ ptáte se. „Ano, to dělám opravdu velmi rád! Je na čase měnit tento zkostnatělý svět a nastavit lidem zrcadlo. Z vlastní zkušenosti vím, že provokace a důvěra v sebe sama je ten nejlepší způsob.“ „Dobře, dobře, Tomáši,“ pokračujete, „jak ale poznáme, že jsme opravdu zamilovaní?“ „Jak by řekl Steve: Stay hungry stay foolish. Jinými slovy, hledejte, dokud nenajdete.“ Je to neuvěřitelné, rozhovor skončil stejně rychle, jako začal. Ve své dlani stále cítíte ten teplý pevný stisk a ve svém srdci pocit velikosti a chuť do práce. Stále jsem ohromen. Děkuji za rozhovor, Tomáši!

www.gomango.cz www.soukupto.cz BC. JAKUB PETERA e-mail: [email protected]

KŘÍŽOVKA O CENY Česká křížovka

Svěřuje se u piva jeden internista druhému: „Tak si představ, předevčírem za mnou přišel ten slavný hokejista... no, jak se jmenuje,... jo, Anikulin. Chtěl vědět, jestli večer jeho mužstvo vyhraje zápas. Nejdříve jsem ho chtěl poslat k psychiatrovi, ale pak jsem si vzpomněl, že potřebujeme nový ultrazvuk, tak jsem mu odebral krev, moč, stolici, sperma, vlasy, chlupy, kůži z dlaně a vybral od něj ceníkovou úhradu. Za patnáct minut jsem měl výsledky na stole. Řekl jsem mu, že vyhrají, že on sám dá dva góly, z nichž ten první bude vítězný. Člověče, skutečně vyhráli a on dal dvě branky, první na 3:2 byla vítězná. No a od té doby sedím nad těmi jeho hodnotami . . .” . . . (Tajenka.) autor: Ivan Šarkan

popuzovala k zlosti

1

německá řeka

electric light (zkr.)

Belar, kongo, Olaso, Saarn, sifo

zhoubné epidemické onemocnění

slitina železa a hliníku

kat (hanl.)

snad

lovení

sibiřská šelma

hmatal i

vědomě projevoval nepravdu

španěl. ten sta

úděl

mongolský pastevec

geol. vrstva prvohor

něco záhadného

značka objektivu

hroznýš

popravčí

naplň balením

nahoru, (angl.)

španělské víno

staroruský palác

papoušek Krajské oblastné divadlo (sl. zkr.)

udržuj oheň dravý pták

španělská vychovatelka

meno Hayekovej

milenec

skupina, společnost

zásah jezdce otěžemi

borový les veslo (angl.)

předhoří

kopál konžský

proudící voda

značka doutníků

nejvyšší karta

3

atletický klub

lámej (slov.)

kopání odstranit

sázka o všechno

nerost

gen

4

výrůstek z pylového zrna

zas

Olga (dom.)

město v Nigérii

kost (lék.) mez. kód Laosu poloha, při které cvičenec na nářadí visí

úder v tenisu Part. Libertale Italiano

babička (něm.) Org. spojených národů

znovu říkal totéž

myšlená přímka

Evrop. komise

kód urdštiny

argon

2

Národní úřad pro letectvo a vesmír (USA) město v Německu

platidlo v Iráku

chod koně, trap

Slovenská krížovka

Pri pive hovorí jeden internista druhému: „ Tak si predstav, predvčerom za mnou prišiel ten slávny hokejista... no, ako sa volá... áno, Anikulin. Chcel vedieť, či večer jeho mužstvo vyhrá zápas. Najprv som ho chcel poslat k psychiatrovi, ale potom som si spomenul na to, že potrebujeme nový ultrazvuk, tak som mu odobral krv, moč, stolicu, spermie, vlasy, chlpy, kožu z dlane a zobral od neho úhradu podl´a cenníka. Za pätnásť minút som mal výsledky na stole. Povedal som mu, že vyhrajú, a že on sám dá dva góly, z nich ten prvý bude víťazný. Človeče, skutočne vyhrali a on dal dva góly, prvý na 3:2 bol víťazný. No a odvtedy sedím nad tými jeho hodnotami . . .” . . . (Tajnička.) autor: Ivan Šarkan

prelomila

1

nemecká rieka

electric light (skr.)

amas, apar, Saarn, sifo

škatuľa

únosca Heleny

štvorček (typ.)

klamal, po česky

prezident USA

údel

nástenný gobelín

ázijský bard

Liana (dom.)

rieka v Afrike

rieka (odbor.)

slovenský básnik

popravca

ukryl

hore, po angl.

španielske víno

kaučukovitá látka

otec (dom.) vajíčko (medicínsky)

severský kopytník dravý vták

meno Hayekovej

mys

milenec apelácia kosť (anat.)

borina veslo, po angl.

bývalý jednotkový obchod

španielska vychovávateľka

uzavreté spoločnosti

značka cigár

kopaním odstránil

3

maliar, po nemecky

zalamuj (typ.)

4

stávka o všetko

Európ. komisia

idant

mesto v Nigérii

výrastok z peľového zrnka, po česky

pásovec trojpásy

Oľga (dom.)

soboľ, po česky

masa ľudí

jednostopové vozidlo

zasa

úder v tenise

babka, po nem.

medz. kód Laosu

Part. Libertale Italiano

Org. spojených národov

cvik na hrazde

znovu hovoril

2 platidlo v Iraku

strapcová metla

hmyz podobný včele

akže

kód urdčiny

argon Národný úrad pre letectvo a vesmír (USA)

mesto v Nemecku

zničený, vyradený (hovor.)

Pro 3 vylosované úspěšné luštitele jsou připraveny zajímavé ceny! Tajenky zasílejte e-mailem na adresu: [email protected] do 31. 1. 2012. Do předmětu uveďte „TAJENKA“. Nezapomeňte také, prosím, uvést své kontaktní údaje a název pracoviště. TAJENKA Z MINULÉHO ČÍSLA: TOTIŽ ČETL JEJICH PITEVNÍ PROTOKOLY. Výherci: Alena Bučková, Eva Hlávková, Blanka Stradiotová.

35

Kde se můžeme setkat formou stánku (říjen 2011 - březen 2012) 1. 10. 2011 RNA Club (Praha)

25. – 27. 10. 2011 XX. Biologické dny (Plzeň)

5. – 6. 10. 2011 LaborExpo (Brno)

11. 11. 2011 Pokroky v molekulární biologii a genetice (Praha)

6. – 7. 10. 2011 XXII. Izakovičov memoriál (Smižany)

24. 11. 2011 Seminář laborantek VFN (Praha)

18. – 19. 10. 2011 XII. Slovensko – české dni laboratórnej hematológie a transfuziológie (Bratislava)

7. – 9. 12. 2011 XXX. Regionální pracovní dny klinické biochemie (Karlova Studánka)

19. – 22. 10. 2011 XXVIII. sjezd českých a slovenských alergologů a klinických imunologů (Košice)

1. – 2. 2. 2012 RANK 2012 (Pardubice)

20. – 22. 10. 2011 V. Bratislavské hematologické a transfuziologické dni (Bratislava)

1. – 2. 3. 2012 International Conference 6th East West Immunogenetics Conference (Olomouc)