Chemické a morfologické vyšetření močí klasické provedení a automatizované postupy
MUDr. Petr Kubáč Vítkovická nemocnice a.s.
Fn Brno 18. listopadu 2009
Chemické vyšetření močí Mokrá chemie
Ehrlichovo činidlo, Benediktovo činidlo, kyselina sulfosalicylová y Riziko pro laboranty, zápach, vaření močí D á í výroba Domácí ý b reagencií, ií žád žádná á standardizace t d di Srovnatelnost, přesnost správnost ? Cena
Chemické vyšetření močí Močové proužky PH, Glukosa PH Glukosa, Ketony Bezpečná suchá chemie Standardní vlastnosti Praktické použití v laboratoři Subjektivní odečet K lib Kalibrace ? Manuální zpracování Ak dit Akreditovatelnost t l t?
Chemické vyšetření močí Močové proužky odečítané readerem Stejné výhody jako předchozí Objektivní odečet odečet, Kalibrovatelnost Komunikace s PC, Archiv výsledků Dohledatelné měření Kalibrace ? Polomanuální zpracování Práce s čarovými kódy ? Walk away y time ?
Chemické vyšetřené močí
Roboticky namáčené močové proužky
Chemické vyšetřené y močí R b ti k namáčené Roboticky áč é močové č é proužky žk Veškeré V šk é výhody ýh d readerů d ů Páce se zkumavkami s čarovými kódy Práce se zkumavkami v racích Robotická ruka není stejně šikovná jako lidská Velký pracovní objem (6-10 ml minimum) Reprodukovatelnost namáčení Nespolehlivé namáčení (1 z 20 vzorků nezměřen ?! ) Slepá p větev vývoje ý j ?
Chemické vyšetřené y močí Pi t jí í analyzátory Pipetující l át
Chemické vyšetřené močí
Pi t jí í analyzátory Pipetující l át
Veškeré V šk é výhody ýh d předchozí ř d h í skupiny k i Odstraněn problém robotické ruky Doposud nevídaná reprodukovatelnost (srovnatelná s kvantitatinvě měřícími analyzátory) Vysoká spolehlivost provozu Problém podávání proužků Složitost konstrukce - cena Speciální proužky nevhodné pro ruční analýzu Kalibrace ? Správnost ?
Chemické vyšetřené močí
Pi t jí í analyzátory Pipetující l át – kazeta k t s proužky žk
Chemické vyšetřené močí B d Budoucnost t – Návrat Ná t mokré k é chemie h i ? Pipetující Pi t jí í readery d té téměř ěř stejně t j ě složité l žité stolní t l í fotometrické analyzátory Propracovaná metodika kvantitativního měření v moči za pomocí enzymových souprav Propracovaná metodika kalibrací, kontroly kvality a návaznosti Močová laboratoř bez močového analyzátoru ?
Chemické vyšetření močí Návratt mokré Ná k é chemie h i - Jsou J t bl t bi table-top biochemické h i ké analyzátory močovými analyzátory budoucnosti ?
Močové sedimentyy Proč P č neexistuje i t j externí t í kkontrola t l na kkvantitativní tit ti í močové sedimenty ? Jaká je návaznost (standardizace ) vyšetření močových sedimentů ? Počty elementů v zorném poli ! Objem zorného pole ! Barvení – Nebarvení !
Močové sedimentyy Obj Objem zorného éh pole l – Plocha Pl h Zeiss Z i Fl Fluovall = 200 um = 31 000 um2 Olympus BX40 = 515 um = 208 000 um2 Poměr plochy 1 : 7 při stejném zvětšení 400x
Močové sedimentyy Objem zorného pole = tloušťka vrstvy x plocha Tloušťka vrstvy dle European urianalysis guidelines = 33 um Tloušťka vrstvy Fastread = 100 um Poměr tlouštěk 1 : 3 x Poměr plochy 1 : 7 Poměr objemů 1 : 20 v nejhorším případě
Močové sedimentyy St Stanovisko i k ČSKB z roku k 2003 Výsledky semikvantitativního morfologického vyšetření (nekvantitativního vzorku, tj. nesbírané moče) se vydávají v arbitrárních jednotkách jednotkách, které jsou odvozeny od pásma početní koncentrace příslušných elementů. Je možné vydávání y výsledků ý jako j p počtu elementů na litr nebo mikrolitr vyšetřované moče. Vydávání výsledků na „zorné pole“ se zásadně nedoporučuje.
Močové sedimenty Hod n ocen í m očovéh o sed im en tu (d efin ice arb itrárn ích jed n otek 0 až 4)
analyt
0
1
2
3
4
0 - 10
11 – 50
51 - 100
101 - 500
> 500
0 - 10
11 – 50
51 - 100
101 - 250
> 250
Válce hyalinní
0
1 – 4
5 – 10
11 – 20
> 20
Válce ostatní
1
2 – 4
6 – 10
12 – 20
> 20
E pitele ploc hé (poč et elem entů/1 µl)
0 - 15
16 - 50
51 - 100
101 - 200
> 200
E pitele k ulovité (poč et elem entů/1 µl)
0 - 15
16 - 50
51 - 100
101 - 200
> 200
0
přítom ny
četné
Erytrocyty y y y (poč et elem entů/1 µl)
Leukocyty (poč et elem entů/1 µl)
Krystaly oxalátu
velmi četné záplava
Močové sedimentyy St Stanovisko i k ČSKB z roku k 2003 Arbitrární jednotky – další non SI systém v močové analytice. Vnesou arbitrární jednotky do kvantitativního močového sedimentu něco jiného než zmatek ? Není přechod zorné pole – mikrolitry snazší než přechod zorné pole – arbitrární jednotky.
Močové sedimentyy Příkl d z h Příklad hematologie t l i - Diferenciální Dif iál í kkrevníí rozpočet č t Počítá se v komůrce - dokonalá standardizace objemu Leukomat - (počítá se zcela přesně) Znamená to p přesný ý výsledek ý ? Statistická chyba výběru = 1 / sqrt (N) 100 buněk = 10% 1000 buněk = 3.3% 10 000 buněk = 1% Hematologické H t l i ké analyzátory l át počítají čít jí většinou ětši 8192 buněk (1% přesnost)
Močové sedimentyy St ti ti ká chyba Statistická h b výběru ýbě – chyba h b malých lý h čí čísell Id ál í způsob Ideální ů b zpracování á í močového č éh sedimentu di t V komůrce Na 10 000 buněk Je to reálné ?
Močové sedimentyy Příkl d z h Příklad hematologie t l i
Analyzátor počítá
buněk
základní diferenciál na 10 000
Laborantka počítá rozšířený diferenciál na 100 buněk C t kke správnosti Cesta á ti i pro moče č ?
Močové sedimentyy A l át Analyzátory močových č ý h sedimentů di tů Průtokové cytometry Automatické mikroskopy
Močové sedimentyy P ůt k é cytometry Průtokové t t
Močové sedimentyy Průtokové cytometry Plně automatizované Ověřená hematologická technologie Jiný způsob měření oproti mikroskopii N í co vidí Neví idí – v moči či převaha ř h neidentifikovatelných id tifik t l ý h elementů Neorientují se v patologických močích
Močové sedimentyy A t Automatické ti ké mikroskopy ik k
Močové sedimentyy A t Automatické ti ké mikroskopy ik k Přístroj analyzuje 500 fotografií z každého vzorku Nejasné elementy nabídne obsluze Obsluha vyřadí elementy, které NEJSOU zadaného typu Původní idea výrobce byla byla, že přístroj se bude na základě selekce buněk obsluhou dále učit FDA však p považuje j učení za nebezpečné, p ,p proto jjeho aktivaci zakázala
Močové sedimenty Automatické mikroskopy Díky ttechnologiím Dík h l ií di digitálního itál íh zobrazování b á í se analýza lý obrazu stává relativně lacinou technologií Mikroskopická metodika je blízká lidskému hodnocení Přístroj nejasné elementy nabídne obsluze – lze pořídit použitelnou analýzu i z patologických vzorků Hodnocení nejasných elementů je na začátku časově náročné téměř jako mikroskopování náročné, mikroskopování, což by bylo akceptovatelné, pokud by se přístroj učil – doba by se zkracovala Zákaz “učení” je úřednické opatření, které nelze snadno zvrátit vývojem technologie
Močová laboratoř budoucnosti Méně odvážný pohled (bližší budoucnost) Automatický pipetující analyzátor Průtokový ů ý cytometr Zkušená laborantka
Močová laboratoř budoucnosti Odvážnější pohled (vzdálenější budoucnost) Hlavní analyzátor vyšetřuje moče chemicky paralelně se séry Automatický mikroskop s učením vyhodnocuje většinu sedimentů Zbylé procento nejzávažnějších nálezů hodnotí cytopatolog ?
Močová laboratoř budoucnosti Smysl budoucí techniky ? Chemické vyšetření y jje kalibrované a zcela exaktní v SI jednotkách Kvantitu buněk počítá stroj v elementech na uL) Lidská obsluha se soustředí na strojově obtížně zachytitelné elementy, které hodnotí semikvantitavtivně OJEDINĚLÉ ČETNÉ OJEDINĚLÉ, ČETNÉ, VELMI ČETNÉ ČETNÉ, ZÁPLAVA
