AKTIVITAS EKSTRAK, FRAKSI PELARUT, DAN SENYAWA FLAVONOID DAUN SUKUN (Artocarpus altilis) TERHADAP ENZIM α-glukosidase SEBAGAI ANTIDIABETES

AKTIVITAS EKSTRAK, FRAKSI PELARUT, DAN SENYAWA FLAVONOID DAUN SUKUN (Artocarpus altilis) TERHADAP ENZIM α-GLUKOSIDASE SEBAGAI ANTIDIABETES

NYI MAS ROSMEINI ANICA GUSTINA

DEPARTEMEN BIOKIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2012

ABSTRAK NYI MAS ROSMEINI ANICA GUSTINA. Aktivitas Ekstrak, Fraksi Pelarut, dan Senyawa Flavonoid Daun Sukun (Artocarpus altilis) terhadap Enzim αGlukosidase sebagai Antidiabetes. Dibimbing oleh ANNA PRIANGANI ROSWIEM dan TJANDRAWATI MOZEF. Tanaman sukun merupakan tanaman herbal yang telah dilaporkan memiliki sifat biologis, seperti antioksidan, sitotoksik, antiinflamasi, antimikroba, inhibitor enzim 5α-reduktase, inhibitor enzim tirosinase, dan inhibitor chatepsin K. Tujuan penelitian adalah untuk mengetahui aktivitas inhibisi ekstrak dan senyawa flavonoid dalam daun sukun terhadap enzim α-glukosidase secara in vitro. Sampel ekstrak, fraksi, dan senyawa flavonoid yang digunakan diperoleh dari penelitian yang telah dilakukan oleh Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Bandung. Aktivitas inhibisi ditentukan dengan menentukan persentase inhibisi dan dilanjutkan dengan penentuan nilai IC50. Hasil penelitian menunjukkan bahwa keempat ekstrak pelarut (etanol, etil asetat, butanol, dan heksana) memiliki kemampuan menghambat aktivitas enzim α-glukosidase. Berdasarkan nilai IC50 dan uji statistik, ekstrak pelarut etanol dan fraksi etil asetat memiliki kemampuan menghambat enzim α-glukosidase. Aktivitas inhibisi fraksi etil asetat daun sukun (IC50=6,01 µg/mL) terhadap enzim α-glukosidase lebih baik dari ekstrak etanol daun sukun (IC50=8,89 µg/mL). Berdasarkan hasil penelitian dari keempat senyawa turunan flavonoid tersebut, yang berpotensi sebagai antidiabetes (menghambat kerja enzim α-glukosidase) yang terbaik adalah senyawa ((1-(2,4-dihidroksifenil)-3-[8-hidroksi-2-metil-2-(4-metil-3-pentenil)2H-1-benzopiran-5-yl]-1-propanon) dengan kode AC-31 (IC50=16,23 µM). Senyawa tersebut merupakan turunan flavonoid golongan dihidrokalkon. Kata kunci: antidiabetes, flavonoid, daun sukun (Artocarpus altilis), enzim αglukosidase.

ABSTRACT NYI MAS ROSMEINI ANICA GUSTINA. Extract, Fractions, and Flavonoids Compounds Activities from Breadfruit Leaves (Artocarpus altilis) against αGlucosidase Enzyme as an Antidiabetic. Under the direction of ANNA PRIANGANI ROSWIEM and TJANDRAWATI MOZEF. Breadfruits plants is one of the herbal plants that its leaves has been reported to have biological properties, such as antioxidant, cytotoxic, antiinflammatory, antimicrobial, 5α-reductase enzyme inhibitors, tyrosinase enzyme inhibitors, and chatepsin K inhibitors. This study was conducted to investigate inhibitor activity of extracts and flavonoids compounds from breadfruit leaves against α-glucosidase enzyme using in vitro method. Extract and flavonoid compound are from Indonesian Science Intitute’s research. Inhibitor activity was determined by inhibition percentage and followed by determining the IC50 value. The results showed that extract ethanol, and three other solvent fraction (ethyl acetate, butanol, and hexane) has ability to inhibit α-glucosidase enzyme activity. Based on IC50 values and statistical tests, ethanol and ethyl acetate extracts which has a potential ability to inhibit α-glucosidase enzyme. Ethyl acetate fraction from breadfruit leaves (IC50=6,01 µg/mL) has a better to inhibit α-glucosidase activity than ethanol extracts (IC50=8,89 µg/mL). Based on fourth flavonoid derivative compounds results, which has the best active compound as an antidiabeticis (1-(2,4-dihydroxyphenyl)-3-[8-hydroxy-2-methil2-(4-methyl-3-pentenil)-2H-1-ben zopyran-5-yl]-1-propanon) with AC-31code (IC50=16,23 µM). This compound is a flavonoids derivatives compound in dihydrocalcon group. Keywords: antidiabetic, flavonoids, breadfruits leaves (Artocarpus altilis), αglucosidase enzyme.

AKTIVITAS EKSTRAK, FRAKSI PELARUT, DAN SENYAWA FLAVONOID DAUN SUKUN (Artocarpus altilis) TERHADAP ENZIM α-GLUKOSIDASE SEBAGAI ANTIDIABETES

NYI MAS ROSMEINI ANICA GUSTINA

Skripsi sebagai salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Sains pada Departemen Biokimia

DEPARTEMEN BIOKIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2012

Judul Skripsi : Aktivitas Ekstrak, Fraksi Pelarut, dan Senyawa Flavonoid Daun Sukun (Artocarpus altilis) terhadap Enzim α-Glukosidase sebagai Antidiabetes Nama : Nyi Mas Rosmeini Anica Gustina NIM : G84070053

Disetujui Komisi Pembimbing,

Dr. Anna Priangani Roswiem, MS. Ketua

Tjandrawati Mozef, M. Es, SC, DU Anggota

Diketahui,

Dr. I Made Artika, M. App. Sc Ketua Departemen Biokimia Tanggal Lulus :

PRAKATA Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT atas segala rahmat, nikmat dan karunia-Nya penulis dapat menyelesaikan karya ilmiah ini sebagai salah satu persyaratan untuk memperoleh gelar Sarjana Sains pada Departemen Biokimia, Fakultas Matematika & Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor. Karya Ilmiah ini ditulis dengan judul “Aktivitas Ekstrak, Fraksi Pelarut, dan Senyawa Flavonoid Daun Sukun (Artocarpus altilis) terhadap Enzim αGlukosidase sebagai Antidiabetes”. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Maret hingga Juli 2011 di Laboratorium Kimia Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI)-Bandung. Terima kasih penulis ucapkan kepada Dr. Anna Priangani Roswiem, MS. dan Tjandrawati Mozef, M. Es, SC, DU atas bimbingan, waktu, dan perhatiannya kepada penulis selama penelitian dan penyusunan karya ilmiah. Ucapan terima kasih juga penulis sampaikan kepada Chandra Risdian, S.Si, selaku asisten peneliti yang telah banyak membantu dalam teknis pelaksanaan penelitian, kepada kedua orang tuaku (Hayat Gustina dan Siti Bajina Djumeini), Ibu Renata Magdalena, adik-adikku (Adwina, Khansa, dan Aulianita) dan seluruh keluarga tercinta atas segala doa, dukungan, dan kasih sayangnya penulis terus berjuang dan menjadi lebih baik. Terima kasih juga saya ucapkan kepada Gara, sahabatsahabat tercinta (Nadia, Tyas, C’mie, Ekky, Taufan, Dheo, Rama, Reni, Dwi, Thafa, Imus, Gama, Daonk, Didi, Dian, Awi, Anom, Rizky, John, Alan, Yudist, Riza, Ozo, Ricky, Ipunk, Agric Basketball, dan Dyah), dan Euis Nurhayati selaku rekan kerja atas dukungan dan bantuannya selama penelitian dan penyusunan skripsi. Semoga karya ilmiah ini dapat bermanfaat bagi pembaca dan ilmu pengetahuan, khususnya dibidang Biokimia dan Farmasi. Bogor, Februari 2012

Nyi Mas Rosmeini Anica Gustina

i

RIWAYAT HIDUP Penulis dilahirkan di Jakarta pada tanggal 20 Mei 1989 dari pasangan Hayat Gustina dan Siti Bajina Djumeini. Penulis adalah anak pertama dari dua bersaudara. Penulis lulus dari SMA Negeri 47 Jakarta pada tahun 2007, pada tahun yang sama melanjutkan studi pada Departemen Biokimia Institut Pertanian Bogor melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB (USMI). Selama perkuliahan, penulis pernah aktif dalam organisasi kemahasiswaan. Sesuai hobi penulis sejak Tingkat Persiapan Bersama (TPB) hingga sekarang, penulis aktif dalam kepengurusan dan kegiatan Unit Kegiatan Mahasiswa Bola Basket Institut Pertanian Bogor (Agric Basketball Club) sebagai sekretaris, tim managerial, official, pemain, serta menjadi Kapten Tim Basket Putri Institut Pertanian Bogor, Kapten Tim Basket Putri FMIPA, serta Kapten Tim Basket Putri Biokimia selama 3 tahun berturut-turut. Tahun 2008-2011 penulis meraih gelar Pemain Terbaik Basket Putri dari BEM-KM IPB dan BEM FMIPA. Selain menjuarai olahraga basket, pada tahun 2008 dan 2010 penulis juga menjuarai olahraga bidang atletik. Tahun 2008-2009 penulis aktif di himpunan profesi Community of Research and Education of Biochemistry Student (CREBs) sebagai Sekretaris Divisi PSDM. Tahun 2010 dan 2011 penulis menjadi Pembicara (motivator) pada acara Perkenalan Departemen Biokimia yang diadakan oleh Himpunan Profesi Community of Research and Education of Biochemistry Student (CREBs). Penulis juga aktif dalam kepanitiaan acara-acara olahraga dan seni yang diadakan BEM-KM IPB dan BEM Fakultas MIPA. Penulis pernah menjalani Praktik Lapangan (PL) di Laboratorium Toksikologi, Pusat Riset Obat dan Makanan-Jakarta pada tahun 2010 dan menulis laporan ilmiah yang berjudul “Analisis Minuman Berenergi terhadap Sel Vero menggunakan ELISA-reader”.

ii

DAFTAR ISI DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. iv DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................... iv PENDAHULUAN ...................................................................................................1 TINJAUAN PUSTAKA ..........................................................................................1 Diabetes Mellitus ........................................................................................................ 1 Pengobatan Diabetes Mellitus ..................................................................................... 2 Tanaman Sukun ........................................................................................................... 3 Enzim α-Glukosidase .................................................................................................. 3 Flavonoid..................................................................................................................... 4 Kuersetin ..................................................................................................................... 5

BAHAN DAN METODE ........................................................................................6 Alat dan Bahan ............................................................................................................ 6 Metode......................................................................................................................... 6

HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................................7 Aktivitas Kuersetin terhadap Enzim α-Glukosidase ................................................... 7 Daya Inhibisi Sampel Ekstrak dan Fraksi Pelarut terhadap Enzim α-glukosidase .......................................................................................................... 8 Nilai IC50 Sampel Ekstrak dan Fraksi Pelarut Daun Sukun ...................................... 9 Daya Inhibisi Sampel Senyawa Flavonoid terhadap Enzim α-glukosidase .............. 10 Nilai IC50 Sampel Senyawa Flavonoid .................................................................... 11

SIMPULAN DAN SARAN ...................................................................................12 Simpulan ................................................................................................................... 12 Saran .......................................................................................................................... 12

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................12 LAMPIRAN.......................................................................................................... 15

iii

DAFTAR GAMBAR 1

Tanaman Sukun (Artocarpus altilis) .................................................................3

2

Jenis-jenis flavonoid (Sumber: Grotewold (2007)). .........................................4

3

Struktur senyawa AC-51, AC-31, AC-33, dan AA-3 .......................................5

4

Struktur kuersetin ..............................................................................................6

5

Struktur flavon dan flavonol. ..........................................................................10

DAFTAR LAMPIRAN 1 Diagram alir penelitian....................................................................................16 2 Tahapan uji inhibisi enzim α-glukosidase ekstrak daun sukun ......................17 3 Pembuatan sampel ekstrak pelarut (Dewi 2007).............................................18 4 Pembuatan stok sampel ekstrak pelarut dan stok sampel senyawa .................19 5 Nilai absorbansi, perhitungan, dan grafik kuersetin sebagai kontrol pembanding .....................................................................................................20 6 Nilai absorbansi, perhitungan, dan grafik ekstrak etanol ................................21 7 Nilai absorbansi, perhitungan, dan grafik fraksi butanol ................................22 8 Nilai absorbansi, perhitungan, dan grafik fraksi heksana ...............................23 9 Nilai absorbansi, perhitungan, dan grafik fraksi etil asetat .............................24 10 Persentase inhibisi, persamaan logaritmik, dan IC50 ekstrak dan fraksi pelarut.............................................................................................................25 11 Nilai absorbansi, perhitungan, dan grafik senyawa AC-31 ............................26 12 Nilai absorbansi, perhitungan, dan grafik senyawa AC-51 ............................27 13 Nilai absorbansi, perhitungan, dan grafik senyawa AA-3 ..............................28 14 Nilai absorbansi, perhitungan, dan grafik senyawa AC-33 ............................29 15 Persentase inhibisi, persamaan logaritmik, dan IC50 senyawa flavonoid ......30 16 Hasil uji T-Test sampel ekstrak dan fraksi pelarut .........................................31 17 Hasil uji T-test sampel senyawa flavonoid .....................................................32 18 Hasil uji aktivitas inhibisi sampel ekstrak pelarut dan sampel senyawa flavonoid terhadap enzim α-glukosidase ..........................................33 19 Instrumen yang digunakan dalam penelitian ..................................................34

iv

1

PENDAHULUAN Indonesia merupakan negara yang memiliki flora yang sangat beragam yang banyak dimanfaatkan oleh rakyat Indonesia sebagai obat tradisional (Waji & Sugrani 2009). Hal ini disebabkan karena obat tradisional lebih mudah didapat, dan murah harganya. Pengobatan tradisional merupakan salah satu pengobatan yang menjadi tren saat ini. Namun, apabila penggunaan bahan alam yang digunakan untuk pengobatan tersebut kurang tepat, maka dapat menimbulkan efek samping yang merugikan. Oleh sebab itu, perlu diketahui kelebihan dan kekurangan dari tanaman obat tersebut agar dapat digunakan secara optimal. Sukun (Artocarpus altilis) merupakan salah satu tanaman yang terdapat di Indonesia dan dimanfaatkan untuk kehidupan seharihari. Buah tanaman ini dapat digunakan sebagai sumber alternatif makanan pokok. Selain itu, daun sukun digunakan sebagai obat alternatif, seperti obat hepatitis, jantung, ginjal, tekanan darah tinggi, diabetes, serta dapat digunakan sebagai bahan ramuan obat penyembuh kulit yang bengkak atau gatalgatal (Ramdhani 2009). Menurut Ermin et al. (1991), sukun mengandung fenol, kuersetin, dan champorol, sedangkan menurut Ramdhani (2009), sukun banyak mengandung senyawa kimia yang berkhasiat, seperti saponin, polifenol, asam hidrosianat, asetilkolin, tanin, riboflavin, fenol, dan flavonoid. Senyawa turunan flavonoidnya adalah artoindonesianin, kuersetin, dan masih banyak lagi (Ramdhani 2009). Diabetes Mellitus (DM) merupakan penyakit yang banyak diderita oleh penduduk di bumi ini. Berdasarkan data yang dikeluarkan World Health Organization (WHO), penderita diabetes di Indonesia pada tahun 2010 berjumlah 21,3 juta orang. Jumlah ini meningkat dari tahun 2000 yang hanya berjumlah 8,4 juta penderita. Holt dan Hanley (2007), telah memprediksi bahwa pada tahun 2025 jumlah penderita akan meningkat menjadi 324 juta orang. Jumlah tersebut menunjukkan kenaikan jumlah penderita diabetes dengan persentase sebanyak 72% (Holt & Hanley 2007). Selain itu, terdapat laporan kasus penyakit diabetes yang juga menyebabkan kematian. Oleh sebab itu, penyakit diabetes menjadi perhatian para peneliti. Terdapat banyak faktor yang dapat menyebabkan penyakit diabetes, seperti pola hidup yang kurang baik, pola makan yang

tidak seimbang, obesitas, ataupun penyakit keturunan. Penyakit diabetes melitus dapat dicegah sebelum terjangkit dengan menjaga pola makan yang baik, sehat, dan seimbang. Penyakit diabetes tidak dapat disembuhkan, namun resiko penyakit diabetes dapat diperkecil. Terapi diabetes dapat dilakukan dengan mengkonsumsi obat, baik secara tradisional ataupun modern, serta penting pula dilakukan diet makanan yang sehat dan seimbang. Berbagai macam jenis obat juga dikembangkan, mulai dari obat sintetis antidiabetes, pengobatan dengan insulin, obat yang bekerja pada enzim-enzim tertentu yang berperan dalam metabolisme glukosa, obat yang bekerja pada reseptor, maupun obat-obat yang langsung ke sel target dalam metabolisme glukosa. Pengembangan jenis obat-obatan ini memerlukan tahapan-tahapan tertentu sebagai acuan dasar ilmiah. Tahapan-tahapan tersebut salah satunya adalah dengan melakukan pengujian secara in vitro sebagai tahap pengembangan obat tersebut. Uji secara in vivo dari ekstrak daun sukun menunjukkan penurunan kadar gula darah (Dewi 2007). Penurunan kadar gula darah ini salah satunya melalui aktivitas enzim α-glukosidase, sehingga komponen ekstrak daun sukun terhadap aktivitas α-glukosidase sebagai obat diabetes perlu diteliti lebih lanjut. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui ekstrak dan senyawa flavonoid (AC-31, AC51, AA-3, dan AC-33) dari daun sukun terhadap aktivitas enzim α-glukosidase yang berperan dalam proses metabolisme glukosa secara in vitro. Hipotesis yang diajukan dalam penelitian ini adalah ekstrak daun sukun dan senyawa flavonoid di dalamnya diduga memiliki kemampuan menghambat aktivitas enzim α-glukosidase. Hasil penelitian ini diharapkan dapat digunakan sebagai salah satu dasar dalam pembuatan obat diabetes melitus (DM) dengan bahan dasar ekstrak daun sukun.

TINJAUAN PUSTAKA Diabetes Mellitus Diabetes mellitus merupakan penyakit metabolik yang sangat kompleks dan dapat diketahui dengan adanya hiperglikemia (kadar gula darah yang melebihi kadar normalnya) serta menyebabkan dampak pada pengeluaran insulin ataupun aktivitas insulin yang tidak normal. Penyakit diabetes mellitus juga merupakan penyakit gangguan metabolisme karbohidrat, lemak, maupun protein dengan

2

ditandai hiperglikemia kronik. Semua jenis penyakit diabetes mellitus pada metabolisme tersebut, umumnya ditandai dengan gejala yang mirip. Perkembangan dari penyakit ini adalah terjadinya kelainan, disfungsi, dan kerusakan beberapa organ khususnya mata, ginjal, saraf, jantung, dan pembuluh darah (Susanti 2006). Hiperglikemia merupakan keadaan saat konsentrasi glukosa dalam darah melebihi batas normal. Keadaan ini diakibatkan karena defisiensi insulin relatif maupun absolut sehingga penyerapan glukosa yang masuk ke dalam sel tersebut terhambat. Saat keadaan normal, kira-kira 50% glukosa yang dikonsumsi mengalami metabolisme sempurna menjadi CO2 dan air, 5% menjadi glikogen, dan 30-40% menjadi lemak. Namun, proses ini terganggu pada pasien diabetes mellitus yang menyebabkan glukosa tidak dapat masuk ke dalam sel, dan energi yang diperoleh terutama berasal dari metabolisme protein dan lemak (Susanti 2006). Diabetes mellitus terdiri atas tiga tipe penyakit, yaitu diabetes tipe 1, diabetes tipe 2, dan tipe lainnya yang biasa dialami oleh ibuibu hamil. Diabetes tipe 1 biasa disebut dengan insulin-dependent diabetes atau diabetes yang bergantung pada insulin. Diabetes tipe 1 ini disebabkan destruksi sel beta (sel β) penghasil insulin pada pulau Langerhans pankreas. Destruksi sel β pada diabetes tipe 1 adalah kesalahan reaksi autoimunitas yang menghancurkan sel β pankreas. Reaksi autoimunitas tersebut dapat dipicu oleh adanya infeksi pada tubuh. Sampai saat ini dibetes mellitus tipe 1 hanya dapat diobati dengan insulin, dengan pengawasan yang teliti terhadap tingkat glukosa darah melalui alat monitor pengujian darah (Holt & Hanley 2007). Diabetes tipe 2 atau diabetes yang tidak tergantung insulin, terjadi karena kesalahan/ketidakteraturan (disorder) dalam produksi insulin, resistensi terhadap insulin, atau berkurangnya sensitivitas sel terhadap insulin yang melibatkan reseptor di membran sel. Tahap awal yang utama adalah berkurangnya sensitivitas sel terhadap insulin, ditandai dengan meningkatnya kadar insulin dalam darah. Selain itu, diabetes tipe ini biasanya muncul perlahan dan tidak terlihat secara signifikan. Para penderita biasanya tidak menyadari adanya tanda-tanda penyakit ini. Penyakit ini biasanya disebabkan karena adanya penyakit keturunan (genetik) atau riwayat kesehatan

keluarga yang pernah mengalami penyakit ini serta pengaruh lingkungan, seperti pola makan, gaya hidup, serta obesitas (Holt & Hanley 2007). Pengobatan Diabetes Mellitus Penyembuhan diabetes dilakukan dengan melakukan diet dan olahraga. Namun, saat diet dan olahraga tidak dapat mempertahankan kondisi normal glukosa dalam darah, perlu ditambahkan pula agen/obat yang bersifat hipoglikemik yang diberikan secara oral. Pemberian agen/obat ini hanya digunakan sebagai tambahan saja, bukan untuk pengganti dari pola makan dan gaya hidup. Artinya, olahraga dan diet makanan yang juga perlu dilakukan agar kondisi gula dalam darah dapat tetap normal. Agen hipoglikemik oral tersebut memerlukan beberapa kapasitas dari sisa sekresi insulin agar kerjanya menjadi lebih efektif. Oleh karena itu, agen hipoglikemik ini tidak efektif apabila digunakan pada pasien dengan penyakit diabetes tipe 1. Berikut ini terdapat tiga kategori agen oral, yaitu insulin secretagoge, insulin sensitizer,dan inhibitor absorbsi glukosa yang terdapat pada saluran pencernaan. Namun, dapat pula dilakukan kombinasi dari masing-masing kategori obat tersebut sebagai peningkatan kadar glukosa dalam darah dengan hilangnya fungsi sel-β secara progresif (Holt & Hanley 2007). Insulin secretagogues seperti sulfonilurea dan meglitinida, merupakan obat yang menstimulasi insulin yang diproduksi oleh pankreas. Obat ini dapat digunakan sebagai kombinasi obat untuk perawatan penderita resistensi insulin. Mekanisme kerja dari insulin secretagogus adalah dengan merangsang pelepasan insulin dari sel-β pankreas sebagai respon terhadap rangsangan glukosa yang berlebih, sehingga terjadi penutupan pompa kalium pada membran (Holt & Hanley 2007). Mekanisme kerja dari insulin sensitizer berbeda dengan insulin secretagogues. Obat insulin sensitizer tidak berpengaruh pada sekresi insulin, namun obat ini meningkatkan efektivitas insulin yang terdapat dalam sirkulasi darah. Contoh dari obat insulin sensitizer adalah biguanida dan thiazolidinediones. Biguanida yang tersedia di pasaran adalah metformin. Obat ini berfungsi untuk meningkatkan pengambilan glukosa pada otot dan adiposit, menekan proses glukoneogenesis pada hati, dan

3

mengurangi penyerapan glukosa pada usus kecil saat kelebihan metformin (Holt & Hanley 2007). Sedangkan thiazolidinediones biasa disebut juga dengan glitazone. Obat ini digunakan secara klinis termasuk diantaranya pioglitazone dan rosiglitazone. Obat ini meningkatkan sensitivitas sel terhadap insulin yang terdapat pada jaringan adiposa, otot, dan hati. Inhibitor absorbsi glukosa yang terdapat pada saluran pencernaan digunakan untuk mengurangi penyerapan karbohidrat dari makanan. Contoh dari obat ini adalah acarbose yang didisain untuk menghambat αglukosidase pada perbatasan antara usus kecil serta mengurangi penyerapan glukosa dari usus (Holt & Hanley 2007). Tanaman Sukun Tanaman sukun (Artocarpus altilis) dapat digolongkan menjadi sukun yang berbiji disebut breadnut dan yang tanpa biji disebut breadfruit. Sukun merupakan tanaman tropik sejati, yang dapat tumbuh paling baik di dataran rendah yang panas, namun juga dapat tumbuh di tempat yang basah (Ramdhani 2009). Sukun bukan buah bermusim meskipun biasanya berbunga dan berbuah dua kali setahun. Kulit buahnya berwarna hijau kekuningan dan terdapat segmensegmen petak berbentuk poligonal. Segmen poligonal ini dapat menentukan tahap kematangan buah sukun (Mustafa 1998).

Gambar 1 Tanaman Sukun (Artocarpus altilis) (Sumber: Hendalastuti & Rojidin 2006) Sukun (Artocarpus altilis) adalah tumbuhan dari genus Artocarpus dalam famili Moraceae yang banyak terdapat di kawasan tropika seperti Malaysia dan Indonesia. Ketinggian tanaman ini bisa mencapai 20 meter (Mustafa 1998). Di pulau Jawa tanaman ini dijadikan tanaman budidaya oleh

masyarakat. Buahnya terbentuk dari keseluruhan kelopak bunganya, berbentuk bulat atau sedikit bujur dan digunakan sebagai bahan makanan alternatif (Heyne 1987). Terdapat beberapa sinonim untuk tanaman sukun, yaitu Artocarpus communis, Artocarpus communis Forst, breadfruit, Artocarpus incisa L. f., Artocarpus altilis (Park.) Fosberg (Bappenas 2008). Berikut ini merupakan taksonomi dari tanaman sukun, kingdom : plantae; divisi : magnoliophyta; kelas : magnoliopsida; ordo : urticales; famili : moraceae; genus : Artocarpus; spesies: Artocarpus altilis(Sumber : Syamsuhidayat & Hutapea 1991). Penyebaran tanaman ini hampir merata di seluruh Indonesia, terutama Jawa Tengah dan Jawa Timur. Meratanya penyebaran sukun di sebagian besar kepulauan Indonesia, serta minimnya serangan hama dan penyakit yang membahayakan pada tanaman ini, memungkinkan sukun untuk dikembangkan (Ramdhani 2009). Pengembangan buah tanaman ini dapat digunakan sebagai sumber alternatif makanan pokok. Daun dari tanaman ini digunakan sebagai obat alternatif, seperti obat hepatitis, jantung, ginjal, tekanan darah tinggi, diabetes, serta dapat digunakan sebagai bahan ramuan obat penyembuh kulit yang bengkak atau gatal-gatal, karena mengandung fenol, kuersetin, dan champorol (Ermin et al. 1991). Tanaman sukun memiliki beberapa kandungan kimia yang berkhasiat sehingga dapat digunakan sebagai tanaman herbal. Kandungan-kandungan tersebut diantaranya ialah saponin, polifenol, asam hidrosianat, asetilkolin, tanin, riboflavin, fenol. Daun tanaman ini juga mengandung kuersetin, champorol dan artoindonesianin. Artoindonesianin dan kuersetin merupakan senyawa turunan dari flavonoid (Soemyarso & Sjaifullah 2004). Berdasarkan penelitian Syah et al (2006), terdapat dua senyawa flavonoid tergeranilasi dari daun sukun, yaitu 2-geranil-2’,4’,3,4-tetrahidroksidihidrokalkon, dan 8-geranil-4’,5,7-trihidroksiflavanon. Kedua senyawa ini diisolasi dari ekstrak metanol daun sukun. Enzim α-Glukosidase Enzim α-glukosidase merupakan enzim yang terdapat pada usus halus manusia. Enzim ini merupakan enzim kunci yang berperan dalam proses akhir pemecahan karbohidrat. Gao et al. (2007) menjelaskan bahwa enzim α-glukosidase bekerja dengan cara menghidrolisis ikatan α-glikosidik pada

4

oligosakarida dan menghasilkan α-Dglikosida atau glukosa. Pengujian aktivitas enzim α-glukosidase dapat diukur secara in vitro dan in vivo. Uji aktivitas enzim α-glukosidase dilakukan untuk mengetahui adanya aktivitas ekstrakpelarut dan senyawa-senyawa yang terdapat dalam ekstrak daun sukun sebagai penghambat terbentuknya glukosa (antidiabetes). Penumpukan glukosa yang berlebihan merupakan salah satu pemicu terjadinya diabetes mellitus tipe II. Vichayanrat, et al. (2002) menyatakan bahwa pengobatan diabetes dengan inhibitor αglukosidase saat ini masih memiliki efek samping yang cukup serius, namun hal ini dapat diminimalisir dengan menggunakan pengobatan secara alami. Menurut Jo S-H, et al. (2009), telah ditegaskan bahwa inhibitor alami yang berasal dari tumbuhan memiliki kemampuan inhibisi yang sangat baik dan efek samping yang sangat kecil, sehingga kemampuan inhibisi dari ekstrak daun sukun diduga dapat mencegah terjadinya penyakit diabetes mellitus tipe II. Perkembangan ilmu pengetahuan dan teknologi dalam dunia biokimia dan kedokteran telah banyak memberikan informasi yang terkait dengan mekanisme kerja enzim α-glukosidase. Informasi ini membantu para ilmuwan untuk menemukan senyawa-senyawa baru yang dapat menghambat aktivitas enzim α-glukosidase. Inhibitor enzim α-glukosidase ini berperan untuk mengatasi berbagai macam penyakit yang berhubungan dengan metabolisme karbohidrat, diantaranya diabetes mellitus, kanker, HIV, hepatitis, serta kegemukan (Liu et al. 2006). Inhibitor enzim α-glukosidase merupakan obat antihiperglikemia untuk pasien diabetes melitus tipe II. Karbohidrat yang dikonsumsi secara normal akan diubah terlebih dahulu menjadi monosakarida untuk dapat diserap oleh usus menjadi glukosa darah. Inhibitor enzim α-glukosidase ini akan mencegah pemecahan karbohidrat, seperti pati dan oligosakarida lainnya sehingga dapat mengurangi konsentrasi gula darah dari karbohidrat yang dikonsumsi (Chiasson 2002). Contoh obat dari jenis inhibitor enzim α-glukosidase, diantaranya adalah acarbose, maglitol, dan voglibose (Neal 2002). Penghambatan aktivitas enzim αglukosidase dipelajari dengan cara pseudosubstrat. Cara ini untuk mengetahui kemampuan sampel sebagai panghambat reaksi hidrolisis glukosa pada substrat p-

nitrofenil-α-D-glukopiranosida (p-NPG). Substrat yang terhidrolisis ini menghasilkan α-D-glukosa (glukosa) dan p-nitrofenol yang berwarna kuning (Sutedja 2003). Berikut merupakan reaksi kimia yang terbentuk: p-NPG Warna kuning yang dihasilkan ini menjadi indikator kemampuan sampel sebagai inhibitor penghambat reaksi. Sugiwati (2005) menyatakan bahwa produk yang dihasilkan berbanding lurus dengan warna kuning yang terbentuk dan berbanding terbalik dengan kemampuan inhibitor dalam menghambat produk. Flavonoid Flavonoid merupakan senyawa berbentuk fenol yang terbesar ditemukan di alam. Flavonoid merupakan senyawa yang terdiri atas 15 atom karbon, yang terdiri atas rantai propana (C-3) yang terikat pada dua cincin benzena (C-6). Golongan flavonoid yang terbesar mempunyai cincin piran yang menghubungkan rantai tiga-karbon dengan salah satu dari cincin benzena (Gambar 2). Flavonoid merupakan senyawa yang bersifat polar karena memiliki gugus gugus hidroksil yang tidak tersubstitusi. Oleh karena itu, pelarut polar seperti etanol, metanol, etil asetat, atau campuran pelarut dapat digunakan untuk mengekstrak flavonoid dari berbagai jaringan tumbuhan (Markham 1988). Flavonoid yang tersedia di alam, sebagian besar dalam bentuk glikosida. Glikosida merupakan kombinasi antara suatu gula dan suatu alkohol yang terikat pada ikatan glikosidik. Flavonoid ditemui dalam bentuk mono-, di-, atau triglikosida. Oleh karena itu, unit-unit gugus hidroksil dalam flavonoid tersebut terikat oleh glukosa. Flavonoid digolongkan ke dalam beberapa golongan, yaitu flavonoid, isoflavonoid, dan neoflavonoid (Gambar 2). Pada tumbuhan tingkat tinggi, flavonoid terdapat pada bagian vegetatif maupun dalam bunga. Pada bunga, flavonoid berperan sebagai

Gambar 2 Jenis-jenis flavonoid: (a) Flavonoid, (b) isoflavonoid, (c) neoflavonoid (Sumber: Grotewold (2007)).

5

pigmen bunga yang berperan dalam menarik burung dan serangga penyerbuk. Selain itu, flavonoid juga berperan dalam pengaturan pertumbuhan, fotosintesis, antimikroba, dan antivirus (Robinson 1995). Berbagai penelitian juga telah menyebutkan bahwa senyawa flavonoid berperan sebagai antidiabetes. Berdasarkan penelitian Hartika (2009), Lukacinova et al.(2008), dan Fawzy et al. (2008) menunjukkan bahwa senyawa golongan flavonol dan flavon merupakan senyawa aktif yang berperan sebagai antidiabetes. Sampel senyawa flavonoid dari ekstrak daun sukun ini direaksikan dengan p-NPG dan enzim αglukosidase. Sampel-sampel ini diharapkan dapat berkompetisi dengan substrat sehingga sampel dapat menempel pada sisi aktif enzim dan tidak terbentuk produk. Produk yang akan dihitung absorbansinya adalah p-nitrofenol yang berwarna kuning (Sutedja 2003). Semakin pekat warna p-nitrofenol menandakan bahwa semakin banyak jumlah produk p-nitrofenol yang terbentuk (Sugiwati 2005). Berdasarkan jurnal yang ditulis oleh Syah (2005), senyawa-senyawa yang berasal dari tanaman sukun merupakan tanaman yang sangat bermanfaat dan memiliki potensi secara biologis. Senyawa ini telah dievaluasi sifat biologisnya terhadap berbagai sistem uji, yaitu meliputi sifat sitotoksik, antiinflamasi, antimalaria, antimikroba, sebagai inhibitor enzim 5α-reduktase, tirosinase, dan protease sistein chatepsin K. Secara fitokimia, sukun merupakan penghasil senyawa-senyawa flavonoid, stilbena dan 2-arilbenzofuran terprenilasi atau tergeranilasi. Terdapat berbagai macam senyawa yang telah diisolasi, seperti1-(2,4-dihidroksifenil)-3-[8-hidroksi-2metil-2-(4-metil-3-pentenil)-2H-1-benzopiran5-yl]-1-propanon yang diberi kode AC-31, 2geranil-2’,3,4,4’-tetrahidroksidihidrokalkon yang diberi kode AC-51, siklokomunol yang diberi kode AA-3, 8-geranil-4’,5,7trihidroksiflanon dengan kode AC-33, siklokomunin, artokomunol, dan masih banyak lagi (Gambar 3). Menurut Syah (2005), tanaman sukun belum dilaporkan mempunyai sifat biologis sebagai antidiabetes, namun hasil riset Dewi (2007) baik secara in vitro maupun secara in vivo, menunjukkan bakwa ekstrak daun sukun berpotensi sebagai antidiabetes. Pada penelitian ini, beberapa senyawa yang telah diisolasi tersebut (AC-31, AC51, AC-33, dan AA-3) (Gambar 3) akan diuji

Gambar 3 Struktur senyawa: (a) (2-geranil2’,3,4,4’-tetrahidroksidihidrokalkon)/ AC-51; (b) ((1-(2,4-dihidroksifenil)-3-[8-hidroksi-2metil-2-(4-metil-3-pentenil)-2H -1benzopiran-5-yl]-1-propanon)/AC-31; (c)8geranil-4’,5,7-trihidroksiflanon/AC-33); dan (d) siklokomunol/AA-3 (Sumber: Syah (2005)). sebagai antidiabetes. Syah (2005) telah menguji sifat biologis dari senyawa-senyawa diatas, yaitu senyawa AC-51 memiliki fungsi antitumor dan antiinflamasi dengan cara menginhibisi enzim 5-lipoksigenase; senyawa AA-3 memiliki fungsi sitotoksik, namun dari keempat senyawa diatas belum dilakukan pengujian untuk antidiabetes. Oleh sebab itu, keempat senyawa diatas akan diuji sebagai antidiabetes. Kuersetin Indonesia memiliki berbagai jenis flora, diantaranya banyak yang dimanfaatkan sebagai obat herbal. Namun, untuk mencapai fungsi yang baik perlu pengujian secara kimia, biologi, maupun biokimia.Uji fitokimia merupakan salah satu cara dalam penentuan senyawa yang terkandung dalam tanaman. Uji fitokimia mengkaji kandungan senyawa aktif yang terdapat pada tumbuhan. Senyawa aktif tersebut diharapkan memiliki efek farmakologis pada manusia atau kepentingan manusia itu sendiri. Salah satu contoh senyawa golongan flavonoid adalah kuersetin (3,3’,4’,5,7-pentahidroksiflavonol) (Gambar 4). Lee, et al. (2008) melaporkan bahwa senyawa flavonoid, seperti kuersetin dan turunannya memiliki manfaat yang sangat besar bagi kehidupan manusia.

6

dihidroksifenil)-3-[8-hidroksi-2-metil-2-(4-me til-3-pentenil)-2H-1-benzopiran-5-yl]-1-propa non)/AC-31, (2-geranil-2’,3,4,4’-tetrahidroksi dihidrokalkon)/AC-51, siklokomunol/AA-3, dan 8-geranil-4’,5,7-trihidroksiflanon/AC-33) yang berasal dari daun sukun. Persiapan Sampel Ekstrak dan Fraksi Pelarut Daun Sukun Gambar 4 Struktur kuersetin (3,3’,4’,5,7pentahidroksiflavonol) (Sumber: Jo S-H, et al.(2009)) Studi secara epidemiologi yang dilakukan Griffiths, et al. (2002) menjelaskan bahwa senyawa-senyawa flavonoid, termasuk kuersetin memiliki kemampuan pada penyakit diabetes tipe II. Pada tahun 2009, Jo, et al. dalam jurnalnya membuktikan bahwa kuersetin memiliki kemampuan aktivitas inhibisi αglukosidase. Hasil penelitiannya juga menjelaskan bahwa kuersetin memiliki hasil yang signifikan dalam menginhibisi α-glukosidase dibandingkan acarbose yang selama ini sudah dijadikan obat diabetes. Sehingga dalam penelitian ini kuersetin dijadikan kontrol pembanding.

BAHAN DAN METODE Alat dan Bahan Alat-alat yang digunakan adalah pipet mikro, multipipet, 96-well plate, ELISAreader, neraca analitik, lemari es (-20 0C), lemari beku (-80 0C), tip, waterbath, tabung Eppendorf, vorteks, tabung gelap 10 mL, laminar flow, spatula, inkubator CO2, stopwatch, alat-alat gelas, dan shaker. Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun sukun, Dimetilsulfoksida (DMSO), buffer fosfat (pH 7), bovine serum albumin, enzim αglukosidase, p-nitrofenil-α-D-glukopiranosida (p-NPG), larutan natrium bikarbonat (Na2CO3), dan senyawa kuersetin. Metode Sampel Sampel yang digunakan berasal dari Laboratoriun Kimia, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Bandung. Sampel penelitian ini adalah ekstrak daun sukun menggunakan pelarut etanol, butanol, etil asetat, dan heksana. Serta senyawasenyawa flavonoid yang diambil dari fraksi etil asetat, yang terdiri atas ((1-(2,4-

Sampel ekstrak daun sukun terdiri atas ekstrak etanol, fraksi butanol, fraksi etil asetat, dan fraksi heksana daun sukun. Ekstrak dan fraksi tersebut dalam bentuk serbuk, dan dibuat larutan eektrak dan fraksi pelarut dalam DMSO dengan konsentrasi 500 mg/mL (Lampiran 4). Sampel ini disebut stok sampel pelarut. Sampel ekstrak dan fraksi pelarut yang digunakan telah diperoleh dari penelitian sebelumnya. Sampel ekstrak dan fraksi pelarut ini pada awalnya didapatkan dengan mengekstraksi daun sukun. Ekstraksi pertama menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 70%. Pelarut etanol digunakan karena pelarut etanol merupakan pelarut serbaguna, yang bersifat polar dan mampu mengekstrak senyawa-senyawa aktif secara optimal serta memperkecil jumlah pengotor yang ikut dalam larutan pengekstraksi. Selanjutnya ekstrak etanol tersebut difraksinasi berturut-turut menggunakan pelarut heksana, etil asetat, dan butanol (Dewi 2007). Partisi dengan heksana dan etil asetat untuk memisahkan senyawa yang bersifat nonpolar dan senyawa yang polar sebagian (Lampiran 3). Persiapan Sampel Senyawa Flavonoid Sampel senyawa terdiri atas senyawaAC31, AC-51, AA-3, dan AC-33 yang berasal dari ekstrak daun sukun. Keempat senyawa dalam bentuk serbuk, dan akan dibuat larutan sampel senyawa dalam DMSO dengan konsentrasi 50 mM (sampel ini disebut stok sampel senyawa) (Lampiran 4). Uji Aktivitas Inhibisi Kuersetin terhadap Enzim α-Glukosidase Berdasarkan jurnal yang ditulis oleh Jo, et al., kuersetin merupakan salah satu senyawa flavonoid yang dapat digunakan sebagai antidiabetes. Pengujian aktivitas inhibisi kuersetin terhadap enzim α-glukosidase dilakukan untuk membuktikan bahwa kuersetin dapat digunakan sebagai inhibitor enzim α-glukosidase. Hasil positif akan menunjukkan bahwa kuersetin layak digunakan dalam penelitian ini sebagai kontol

7

pembanding. Kuersetin diuji aktivitas inhibisi dengan enzim α-glukosidase. Terdapat beberapa konsentrasi kuersetin yang digunakan dalam uji inhibisi, yaitu 3,125 µM; 6,25 µM; 12,5 µM; 25 µM; 50 µM; 100 µM; dan 200 µM (Lampiran 5), serta dihitung persentase inhibisi dari masing-masing konsentrasi tersebut. Selanjutnya dihitung nilai IC50 kuersetin yang dijadikan kontrol pembanding untuk sampel-sampel yang digunakan (Lampiran 15). Uji Aktivitas Inhibisi Enzim α-Glukosidase (Modifikasi Metode Sancheti et al. 2009) Pengujian aktivitas inhibisi enzim αglukosidase menggunakan substrat pnitrofenil-α-D-glukopiranosida (p-NPG). Larutan enzim dibuat dengan melarutkan 100 mL bufer fosfat (pH 7.0) dengan 200 mg bovine serum albumin, dan ditambahkan 1 mg α-glukosidase. Enzim yang akan digunakan dalam pengujian perlu diencerkan, yaitu sebanyak 0.1 mL larutan enzim dilarutkan dengan 5 mL bufer fosfat (pH 7.0). Pereaksi yang digunakan terdiri atas 25 µL pnitrofenil-α-D-glukopiranosida 20 mM sebagai substrat, 45 µL bufer fosfat (pH 7.0), dan 5 µL larutan sampel dalam DMSO yang diaduk hingga homogen. Pembuatan larutan p-nitrofenil-α-D-glukopiranosida dilakukan dengan melarutkan 15 mg p-NPG dalam 2.5 mL bufer fosfat. Setelah ketiga pereaksi homogen, sebanyak 25 µL larutan enzim α-glukosidase ditambahkan dan diinkubasi selama 30 menit dengan suhu 37 0C. Reaksi tersebut dihentikan dengan menambahkan sebanyak 100 µL Na2CO3 0,2 M. Selanjutnya diukur padapanjang gelombang 400 nm menggunakan ELISA-reader (Lampiran 2). Blanko warna diisi menggunakan pereaksi 25 µL p-NPG, 5 µL sampel, dan 70 µL bufer fosfat. Kontrol positif diisi dengan 5 µL DMSO, 25 µL p-NPG, 25 µL enzim, dan 45 µL bufer fosfat. Sedangkan kontrol negatif sama perlakuannya dengan kontrol positif namun tidak menggunakan enzim. Semua perlakuan akan ditambahkan dengan 100 µL natrium karbonat (Na2CO3) (Lampiran 2). Kontrol pembanding yang digunakan adalah kuersetin. Kuersetin yang akan digunakan sebelumnya perlu diketahui bobot molekulnya. Kemudian persiapan stok kuersetin yang akan digunakan sama seperti persiapan sampel.

Percobaan dilakukan sebanyak 3 kali ulangan dan dihitung dalam % inhibisi dengan rumus: C S 100% % C dengan ketentuan: C merupakan absorbansi kontrol positif dan S adalah absorbansi sampel terkoreksi. Contoh perhitungan dapat dilihat pada lampiran 6-9 dan lampiran 11-14. Analisis Data (Mattjik 2002) Rancangan percobaan pada penelitian ini adalah perbandingan antara kuersetin (sebagai antidiabetes) dengan senyawasenyawa lainnya menggunakan uji T. Hipotesis yang digunakan adalah: H0:µ1 ≤ µ2, dan H1: µ1 > µ2. Keterangan: µ1= rataan kuersetin µ2= rataan sampel masing-masing ekstrak, fraksi, dan senyawa yang dibandingkan dengan kuersetin. Analisis data dilakukan secara statistik, menggunakan program MINITAB 14. Pengaruh perlakuan secara signifikan ditunjukkan dengan α = 0,01. Jika terdapat perbedaan yang nyata antara kuersetin dengan sampel lain yang dibandingkan, maka disimpulkan bahwa sampel tersebut lebih baik sebagai antidiabetes (Lampiran 16 & 17).

HASIL DAN PEMBAHASAN Aktivitas Kuersetin terhadap Enzim α-Glukosidase Pada pengujian yang dilakukan dalam penelitian ini, persentase inhibisi yang dinyatakan baik sebagai parameter antidiabetes yaitu sampel yang memiliki daya inhibisi lebih dari 50%. Nilai ini menunjukkan bahwa sampel memiliki kemampuan menginhibisi setengah atau lebih enzim α-glukosidase, sehingga dapat disebut antidiabetes karena menghambat pembentukan glukosa. Pengujian aktivitas kuersetin terhadap enzim α-glukosidase dilakukan pada tujuh konsentrasi (3,125 µM; 6,25 µM; 12,5 µM; 25 µM; 50 µM; 100 µM; dan 200 µM), menunjukkan bahwa konsentrasi 3,125 µM memiliki hasil persentase inhibisi yang paling rendah, yaitu 21,03% (Lampiran 15). Daya inhibisi kuersetin yang terbaik dari penelitian ini adalah pada konsentrasi 100 µM dan 200 µM,

8

dengan persentase inhibisi berturut-turut sebesar 60,94 % dan 85,95 % (Tabel 1). Berdasarkan hasil ini, kuersetin dengan konsentrasi 200 µM memiliki kemampuan menghambat aktivitas enzim α-glukosidase sebesar 85,95%, sehingga membuktikan bahwa kuersetin dapat dijadikan sebagai inhibitor α-glukosidase. Grafik perbandingan antara konsentrasi dan persentase inhibisi kuersetin dinyatakan secara logaritmik. Persamaan yang didapat adalah y = 15.35ln(x) - 6.008, dengan R2 sebesar 0,900 (Lampiran 5). Selain itu, hasil perhitungan IC50 kuersetin dari konsentrasi 3,125 µM sampai 200 µM adalah sebesar 44,14 µM atau setara dengan 13,34 µg/mL (Lampiran 15). Berdasarkan jurnal Fawzy et al. (2008) yang membahas tentang kuersetin, kuersetin merupakan jenis flavonoid yang masuk dalam golongan flavonol. Fawzy et al. (2008) juga menjelaskan bahwa kuersetin merupakan senyawa aktif yang memiliki aktifitas antidiabetes yang dapat menurunkan kadar gula darah. Hal ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan bahwa nilai inhibisi dari kuersetin memiliki hasil yang cukup besar, yaitu 86,55%. Nilai ini diperkuat dengan hasil R2 sebesar 90% (Lampiran 5). Berdasarkan persamaan logaritmik dari kuersetin, nilai IC50 kuersetin yang telah didapat, yaitu senilai 44,14 μM atau setara dengan 13,34 μg/mL (Lampiran 15). Semakin kecil nilai IC50, menunjukkan bahwa semakin baik kemampuan suatu senyawa untuk menginhibisi. Berdasarkan nilai IC 50 tersebut, kuersetin dengan konsentrasi 44,14 μM atau setara dengan 13,34 μg/mL, mampu menghambat setengah aktivitas enzim αglukosidase untuk memproduksi glukosa. Nilai ini menunjukkan bahwa nilai IC 50 kuersetin sangat baik digunakan sebagai kontrol pembanding. Cara kerja dari kuersetin sebagai antidiabetes disebabkan adanya substituen gugus hidroksil pada cincin C-3 (Lukacinova et al 2008) (Gambar 4). Hidroksilasi cincin C-3 pada cincin karbon kerangka flavonol tersebut berperan penting dalam penghambatan enzim α-glukosidase (Jo S-H 2009) (Gambar 5). Tadera et al. (2006) menyatakan bahwa aktivitas penghambatan enzim yang tinggi itu diakibatkan karena adanya reaksi hidroksilasi pada C-3 (C-3OH) (Gambar 5).

Daya Inhibisi Sampel Ekstrak dan Fraksi Pelarut terhadap Enzim α-glukosidase Pada pengujian aktivitas inhibisi sampel ekstrak dan fraksi pelarut terhadap enzim αglukosidase, digunakan konsentrasi uji, yaitu 250 μg/mL; 125 μg/mL; 62,5 μg/mL; dan 31,25 μg/mL. Keempat variasi konsentrasi tersebut tidak memberikan hasil yang optimal karena nilai persentase inhibisi dengan konsentrasi sampel tidak berbanding lurus, sehingga dilakukan pengulangan uji dengan konsentrasi yang lebih rendah hingga mendapatkan hasil yang optimal (Tabel 1). Hasil yang optimal ditunjukkan dengan nilai persentase inhibisi yang berbanding lurus dengan konsentrasi sampel, sehingga dapat menghasilkan R2 yang mendekati 1,00 (Lampiran 6-10). Selain itu, dapat dilihat dari nilai IC50 yang kecil dari variasi konsentrasi tersebut (Lampiran 10). Optimasi kedua dilakukan dengan lima variasi konsentrasi, dengan konsentrasi awal 100 μg/mL hingga 6,25 μg/mL. Pada variasi konsentrasi ini hanya fraksi butanol dan fraksi heksana yang menunjukkan hasil yang sesuai (Lampiran 6 & 7). fraksi butanol menghasilkan persentase inhibisi yang cukup baik, yaitu 50,99–65,38% pada variasi konsentrasi 12,5-100 μg/mL (Tabel 1). Sedangkan fraksi heksana, menghasilkan persentase inhibisi sangat rendah, yaitu kurang dari 50% (Tabel 1), sehingga fraksi heksana tidak dapat digunakan sebagai antidiabetes. Hasil ini sesuai dengan penelitian Ramdhani (2009) yang menyatakan Tabel 1 Daya inhibisi dan IC50 sampel ekstrak pelarut dengan kontrol pembanding (kuersetin). Sampel [C] % IC50 Ekstrak (μg/mL) Inhibisi (μg/mL) Daun Sukun 60,44 85,95 13,34 Kuersetin 30,22 60,94 25 74,33 8,89 Etanol 12,5 57,65 100 65,38 Butanol 50 57,33 14,42 25 56,87 12,5 50,99 100 12,46 2,68E+1 Heksana 2 50 10,22 25 79,86 Etil 12,5 65,19 6,01 Asetat 6,25 50,52

9

bahwa heksana tidak dapat melarutkan senyawa-senyawa aktif dalam daun sukun. Berbeda dengan fraksi butanol dan fraksi heksana, ekstrak etanol dan fraksi etil asetat belum mendapatkan hasil yang optimal dengan pengulangan variasi kosentrasi di atas, sehingga dilakukan pengulangan uji dengan menggunakan konsentrasi yang lebih rendah. Variasi konsentrasi tersebut adalah 25 μg/mL; 12,5 μg/mL; 6,25 μg/mL; 3,125 μg/mL; dan 1, 562 μg/mL. Berdasarkan variasi konsentrasi ini, ekstrak etanol dan fraksi etil asetat memiliki hasil yang optimal. Ekstrak etanol memiliki persentase inhibisi di atas 50% pada konsentrasi 25 μg/mL dan 12,5 μg/mL, dengan nilai persentase inhibisi berturutturut adalah 74,33 % dan 57,65 % (Lampiran 10). Sedangkan pada fraksi etil asetat memiliki inhibisi terbaik pada konsentrasi 25 μg/mL; 12,5 μg/mL; dan 6,25 μg/mL, dengan nilai persentase tertinggi 79,87 % pada konsentrasi 25 μg/mL (Tabel 1). Grafik perbandingan antara konsentrasi sampel ekstrak dan fraksi pelarut dengan persentase inhibisi dibentuk berdasarkan persamaan logaritmik (Lampiran 6-9). Berdasarkan persamaan tersebut, nilai regresi tertinggi adalah sebesar 99% dari sampel fraksi etil asetat (Lampiran 9), diikuti sampel ekstrak etanol sebesar 98,8 % (Lampiran 6), fraksi butanol 93,1 % (Lampiran 7), dan fraksi heksana sebesar 83 % (Lampiran 8). Berdasarkan nilai regresi dan persentase inhibisi, ekstrak yang memiliki aktivitas antidiabetes terbaik adalah fraksi etil asetat dan ekstrak etanol. Hal ini disebabkan karena dengan konsentrasi 25 μg/mL, fraksi etil asetat mampu menginhibisi sebesar 79,86%, sedangkan ekstrak etanol mampu menginhibisi sebesar 74,33% (Tabel 1). Berdasarkan hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa aktivitas antidiabetes ekstrak dan fraksi pelarut berturut-turut adalah fraksi etil asetat (konsentrasi 256,25 μg/mL) > ekstrak etanol (konsentrasi 25-12,5 μg/mL) > fraksi butanol (konsentrasi 100-12,5 μg/mL) > fraksi heksana (konsentrasi 100-50 μg/mL). Hasil ini sesuai dengan penelitian Ramdhani (2009) yang menyatakan kandungan senyawa aktif dalam daun sukun dapat larut dalam pelarut-pelarut di atas, kecuali heksana.

Nilai IC50 Sampel Ekstrak dan Fraksi Pelarut Daun Sukun Tahapan selanjutnya dalam penelitian ini adalah menentukan nilai IC50 masing-masing sampel untuk mengetahui konsentrasi sampel yang dapat menghambat 50% aktivitas enzim α-glukosidase. Semakin rendah nilai IC50 maka semakin baik digunakan sebagai antidiabetes, karena dengan nilai konsentrasi sampel yang sangat rendah dapat menghambat 50% aktivitas enzim α-glukosidase sehingga pembentukan glukosa akan terhambat. Nilai IC50 masingmasing ekstrak dihitung dari persamaan logaritmik yang telah didapat dari grafik sampel ekstrak pelarut. Nilai IC50 masingmasing sampel ini dibandingkan dengan kontrol pembanding, yaitu kuersetin. Nilai IC50 kuersetin setelah dikonversi ke dalam satuan μg/mL adalah sebesar 13,34 μg/mL (Tabel 1). Ekstrak yang memiliki nilai IC50 yang lebih kecil dari nilai IC50 kuersetin merupakan nilai ekstrak yang memiliki aktivitas antidiabetes yang baik. Hasil yang terlihat dalam tabel 1 menunjukkan bahwa nilai IC50 terendah hingga tertinggi dimiliki oleh fraksi etil asetat, ekstrak etanol, fraksi butanol, serta fraksi heksana dengan nilai berturut-turut sebesar 6,01 μg/mL; 8,89 μg/mL; 14,42 μg/mL; dan 2,6x1012 μg/mL. Apabila dibandingkan dengan nilai IC50 kuersetin (13,34 μg/mL), ekstrak dan fraksi pelarut terbaik yang dapat digunakan sebagai antidiabetes adalah fraksi etil asetat dan ekstrak etanol karena memiliki nilai IC50 yang lebih kecil dari kuersetin, yaitu 6,01 μg/mL dan 8,89 μg/mL (Lampiran 10). Nilai tersebut diuji secara statistik untuk menentukan ketelitian hasil penelitian ini. Berdasarkan nilai statistik uji T dengan tingkat kepercayaan 0.01, sampel ekstrak etanol dan fraksi etil asetat memiliki hasil yang berbeda nyata dengan kuersetin, sedangkan sampel fraksi butanol dan fraksi heksana tidak berbeda nyata (Lampiran 16). Hasil ini menunjukkan bahwa kedua sampel ini (fraksi etil asetat dan ekstrak etanol) lebih baik digunakan sebagai antidiabetes daripada kuersetin . Hasil penelitian dan hasil statistik memiliki hasil yang sesuai, bahwa pelarut etanol dan pelarut etil asetat memiliki kemampuan dalam mengekstrak senyawa aktif daun sukun, sehingga mampu menginhibisi aktifitas enzim α-glukosidase. Sedangkan pelarut heksana dan butanol sangat kecil dalam menginhibisi enzim α-glukosidase

10

Gambar 5 Struktur: (a) flavon, dan (b)flavonol (Sumber: Grotewold (2007)). dan memiliki nilai IC50 diatas kuersetin, sehingga kedua pelarut tersebut tidak memberikan hasil yang signifikan dalam menghambat enzim α-glukosidase. Hasil uji fitokimia yang dilakukan oleh Dewi (2007) menunjukkan bahwa daun sukun sangat banyak mengandung senyawa flavonoid. Senyawa flavonoid tersebut diantaranya adalah flavonol, flavon, flavan, flavanon, dihidroflavonol, flavan-3-ol, flavan4-ol, dan flavan-3,4-diol (Grotewold 2007). Hasil penelitian Hartika (2009), Lukacinova et al. (2008), dan Fawzy et al. (2008) menunjukkan bahwa senyawa golongan flavonol dan flavon merupakan senyawa aktif yang berperan sebagai antidiabetes. Flavonol lebih polar dibandingkan dengan flavon karena flavonol memiliki gugus hidroksil pada posisi C-3 (Gambar 5). Pelarut etil asetat yang bersifat semi-polar baik untuk mengekstrak senyawa flavonol, sedangkan senyawa flavon dapat larut dalam pelarut butanol yang memiliki kepolaran yang lebih tinggi (Wijono 2003). Nilai IC50 ekstrak etanol dan fraksi etil asetat tidak berbeda jauh (Tabel 1). Hal ini disebabkan karena etanol merupakan pelarut yang dapat melarutkan hampir semua senyawa-senyawa aktif. Pada penelitian ini, ekstrak etanol mampu mengekstrak senyawasenyawa kimia yang bersifat polar maupun non-polar yang terdapat di dalam daun sukun, sehingga nilai IC50 etanol lebih rendah bila dibandingkan dengan kuersetin. Hasil tersebut menunjukkan kemampuan inhibisi dari ekstrak etanol lebih baik dibandingkan kuersetin. Nilai IC50 etil asetat menunjukkan hasil yang lebih kecil dari pelarut etanol. Hal ini menjelaskan bahwa senyawa-senyawa aktif yang dapat larut dalam etil asetat merupakan senyawa-senyawa yang dapat diekstrak dengan baik oleh pelarut etil asetat ini merupakan senyawa yang memiliki sifat semi-polar. Salah satu senyawa yang terdapat dalam fraksi etil asetat adalah flavonol (Wijono 2003). Senyawa yang larut dalam etil asetat ini sangat berpotensi sebagai antidiabetes karena nilai IC50 dalam pelarut

etil asetat bernilai 6,01 μg/mL lebih kecil dibandingkan nilai IC50 pelarut etanol yang bernilai 8,89 μg/mL. Hal ini diperkuat dengan hasil penelitian Hartika (2009), Lukacinova et al. (2008), dan Fawzy et al. (2008), yang menunjukkan bahwa flavonol merupakan salah satu senyawa yang berpotensi sebagai antidiabetes. Berdasarkan hasil penelitian ini, terbukti bahwa ekstrak daun sukun dalam pelarut etil asetat sangat baik digunakan sebagai antidiabetes karena memiliki nilai IC50 yang lebih kecil dibandingkan kuersetin sebagai kontrol pembanding dan pelarut etanol yang mampu mengekstrak hampir semua senyawa-senyawa aktif. Daya Inhibisi Sampel Senyawa Flavonoid terhadap Enzim α-glukosidase Sampel senyawa flavonoid yang digunakan adalah AC-31, AC-51, AC-33, dan AA-3 (Gambar 3). Variasi konsentrasi sampel senyawa yang digunakan dalam pengujian dimulai dengan lima variasi konsentrasi, yaitu 500; 250; 125; 62,5; dan 31,25 μM dengan perlakuan yang sama. Berdasarkan kelima variasi konsentrasi tersebut hanya sampel senyawa AC-51, AA-3, dan AC-33 yang memiliki kemampuan inhibisi yang optimal (Lampiran 15). Sedangkan sampel senyawa AC-31 belum mendapatkan hasil yang optimal, sehingga perlu dilakukan pengulangan uji dengan variasi konsentrasi yang lebih rendah. Pengulangan uji sampel senyawa AC-31 dilakukan dengan lima variasi konsentrasi, yaitu 100; 50; 25; 12,5; Tabel 2 Daya inhibisi dan IC50 sampel senyawa dengan kontrol pembanding (kuersetin). Sampel [C] % IC50 Senyawa (µM) (μM) Inhibisi Flavonoid 200 85,95 44,14 Kuersetin 100 60,94 500 86,35 25,15 AC-51 250 82,19 125 81,54 62,5 64,71 100 79,35 16,23 AC-31 50 69,88 25 58,32 500 84,03 57,85 AC-33 250 75,52 125 64,50 500 69,20 72,99 AA-3 250 77,17 125 55,37

11

dan 6,25 µM. Berdasarkan variasi konsentrasi tersebut dihasilkan persentasi inhibisi yang optimal (Lampiran 15). Sampel senyawa AC-51 memiliki persentase inhibisi yang cukup besar dari kelima variasi konsentrasi di atas. Empat variasi konsentrasi, yaitu 500, 250, 125, dan 62,5 μM memiliki persentase inhibisi di atas 50%. Persentase tersebut berturut-turut sebesar 86,35 %; 82,19 %, 81,54 %; 64,71 % (Tabel 2). Grafik perbandingan antara konsentrasi dengan persentase inhibisi melalui persamaan logaritmik, dengan persamaan y= 13,74 ln(x) + 6,1 dan R2 sebesar 0,86 (Lampiran 12). Pada sampel senyawa AA-3, persentase inhibisi di atas 50% ditunjukkan pada tiga konsentrasi tertinggi, yaitu 500, 250, dan 125 μM. Persentase inhibisi tersebut berturutturut sebesar 69,20%; 77,17%; dan 55,37% (Tabel 2). Persamaan logaritmik yang didapat antara konsentrasi dengan persentase inhibisi adalah y = 13.37 ln(x) - 7.216, dengan R2 senilai 0,841 (Lampiran 13). Persentase inhibisi terbaik pada sampel senyawa AA-3 adalah konsentrasi 250 mM (Tabel 2). Hasil persentase inhibisi pada sampel senyawa AC-33 juga menghasilkan tiga variasi kosentrasi tertinggi, yaitu 500, 250,dan 125 μM. Ketiga konsentrasi tersebut memiliki persentase inhibisi sebesar 84,03%; 75,52%; dan 64,50% (Tabel 2). Berbeda dengan AA-3, persentase inhibisi terbesar pada AC-33adalah 84,03% dengan konsentrasi 500 mM (Tabel 2). Persamaan logaritmik yang ditunjukkan melalui grafik antara konsentrasi dengan persentase inhibisi adalah y = 13.18ln(x) 4.958, dengan R2 sebesar 0,934 (Lampiran 14). Pada sampel senyawa AC-31 didapatkan tiga variasi konsentrasi tertinggi yang memiliki persentase inhibisi di atas 50%. Konsentrasi tersebut adalah 100 μM, 50 μM, dan 25 μM, dengan persentase inhibisi berturut-turut adalah 79,35%; 69,88%; dan 58,32% (Tabel 2). Grafik antara konsentrasi dan persentase inhibisi pada senyawa AC-31 juga dinyatakan melalui persamaan logaritmik. Persamaan logaritmik yang didapat pada sampel senyawa AC-31 adalah y = 16.57ln(x) + 4.344, dengan R2 sebesar 0,992 (Lampiran 11). Berdasarkan hasil nilai persentase inhibisi di atas, maka aktivitas antidiabetes senyawa flavonoid berturut-turut adalah: AC-51 (konsentrasi 500 μM-62,5 μM), AC-33 (konsentrasi 500 μM-125 μM), AC-31 (konsentrasi 100 μM-25 μM), dan AA-3

(konsentrasi 500 μM-125 μM). Namun, apabila dibandingkan dengan kuersetin sebagai kontrol positif, nilai persentase inhibisi yang dimiliki AC-51 lebih kecil, karena persentase inhibisi yang dimiliki oleh kuersetin adalah 85,95% dengan konsentrasi 200 μM, sedangkan nilai persentase inhibisi AC-51 adalah 86,35% pada konsentrasi 500μM (Tabel 2). Nilai ini menunjukkan bahwa kuersetin memiliki kemampuan inhibisi lebih baik dibandingkan AC-51. Kuersetin memiliki kemampuan yang lebih baik karena dengan konsentrasi yang lebih kecil, senyawa ini memiliki daya inhibisi yang lebih besar. Sedangkan senyawa AC-51 yang memiliki daya inhibisi mendekati kuersetin, namun membutuhkan konsentrasi yang lebih besar. Walaupun telah disebutkan sebelumnya bahwa berdasarkan nilai persentase inhibisi yang terbaik adalah AC-51, namun berdasarkan analisis data persentase inhibisi yang terbaik adalah AC-31 (Tabel 2). Hal ini disebabkan karena dengan konsentrasi 100 μM, senyawa AC-31 dapat menginhibisi hingga 79,35% (Tabel 2) dan menghasilkan R2 sebesar 0,9923 (Lampiran 15)). Apabila dibandingkan dengan konsentrasi yang diujikan pada kuersetin maupun AC-51, aktivitas senyawa AC-31 terbukti lebih aktif menghambat enzim α-glukosidase. Nilai IC50 Sampel Senyawa Flavonoid Berdasarkan hasil persentase daya inhibisi sampel senyawa flavonoid, telah disebutkan bahwa senyawa yang memiliki aktivitas inhibisi terbaik adalah AC-31, namun perlu dilakukan penentuan nilai IC50 masing-masing sampel senyawa flavonoid agar diketahui senyawa yang berpotensi sebagai antidiabetes. Nilai IC50 didapatkan dari persamaan logaritmik. Setelah didapatkan nilai IC50, selanjutnya keempat sampel senyawa diuji statistik dan membandingkannya dengan IC50 senyawa kuersetin. Nilai IC50 digunakan untuk menunjukkan keefektifan suatu senyawa atau zat tertentu dalam menginhibisi fungsi biologis maupun fungsi biokimia. Semakin rendah nilai IC50 menunjukkan bahwa senyawa tersebut memiliki kemampuan inhibisi yang baik. Nilai IC50 pada tabel 2 menunjukkan bahwa nilai IC50 tertinggi hingga terendah adalah AA-3, AC-33, AC-51, dan AC-31 dengan nilai konsentrasi inhibisi berturut-turut 72,99; 57,85; 25,15; dan 16,23 (Tabel 2). Apabila dibandingkan dengan IC50 kuersetin senilai 44,14 µM, hanya senyawa AC-51 dan

12

AC-31 yang dapat digunakan sebagai inhibitor enzim α-glukosidase. Namun, hasil ini diuji secara statistik melalui uji T. Berdasarkan data hasil uji T pada tingkat kepercayaan α < 0.01, menunjukkan bahwa sampel senyawa AC-31 memiliki hasil yang berbeda nyata dengan kuersetin, sedangkan sampel senyawa AC-51 memiliki hasil yangtidak berbeda nyata (Lampiran 17). Hasil ini menunjukkan bahwa hanya sampel AC-31yang baik digunakan sebagai antidiabetes dibandingkan kuersetin secara statistik. Senyawa-senyawa yang digunakan dalam penelitian ini merupakan senyawa golongan flavonoid. Senyawa golongan flavonoid memiliki ciri umum yaitu terdiri atas rantai propana (C-3) yang terikat diantara dua cincin benzena (C-6) (Grotewold 2007). Keempat senyawa ini telah diisolasi dan diidentifikasi oleh Syah (2005), serta telah teruji memiliki beberapa sifat biologis. Berdasarkan publikasi tersebut, senyawa AC-31, senyawa AC-51, dan senyawa AC-33 termasuk ke dalam senyawa turunan flavonoid yang tergeranilasi. Senyawa AC31 dan AC-51 ditemukan dalam bentuk dihidrokalkon, sedangkan senyawa AC-33 ditemukan dalam bentuk flavanon. Senyawa AA-3 juga merupakan senyawa flavonoid yang merupakan turunan dari flavon. Turunan flavon ini merupakan jenis piranoflavon. Berdasarkan hasil penelitian, nilai IC50 senyawa AC-31 dan AC-51 memiliki nilai yang lebih kecil dibandingkan kuersetin. Sedangkan AC-33 dan AA-3 memiliki nilai IC50 yang lebih tinggi dibandingkan kuersetin (Tabel 2). Hasil ini menunjukkan bahwa senyawa flavonoid dalam bentuk dihidrokalkon memiliki aktvitas yang sangat baik untuk menghambat aktivitas enzim αglukosidase, dibandingkan flavanon dan piranoflavon. Walaupun senyawa AC-31 dan AC-51 dalam jenis yang sama, yaitu dihidrokalkon, namun senyawa AC-31 lebih berpotensi sebagai antidiabetes bila dibandingkan senyawa AC-51. Hal ini dapat dilihat dari nilai IC50 senyawa AC-31 yang lebih kecil dari senyawa AC-51 dan dipertegas dengan hasil statistik yang menunjukkan bahwa hanya senyawa AC-31 yang berpotensi sebagai antidiabetes. Selain itu, apabila dilihat berdasarkan strukturnya, kedua senyawa ini memiliki perbedaan pada struktur gugus geranilnya (Gambar 3).

SIMPULAN DAN SARAN Simpulan Ekstrak etanol dan etil asetat daun sukun dapat menghambat enzim α-glukosidase, sehingga berpotensi sebagai antidiabetes. Daya inhibisi ekstrak etil asetat daun sukun terhadap enzim α-glukosidase memiliki nilai IC50 yang lebih tinggi, yaitu sebesar 6,01 µg/mL. Sedangkan nilai IC50 ekstrak etanol daun sukun adalah sebesar 8,89 µg/mL. Senyawa ((1-(2,4-dihidroksifenil)-3-[8hidroksi-2-metil-2-(4-metil-3-pentenil)-2H-1benzopiran-5-yl]-1-propanon)/AC-31 memiliki nilai inhibisi paling tinggi terhadap enzim α-glukosidase, dengan nilai IC50 sebesar 16,23 µM dan merupakan turunan flavonoid dengan golongan dihidrokalkon. Saran Penelitian selanjutnya hendaknya melakukan uji fitokimia terhadap ekstrak dan dan fraksi pelarut yang digunakan. Selain itu, perlu dilakukan berapa unit produk yang terbentuk dari sampel-sampel yang digunakan sehingga diketahui kemampuan sampel dalam menginhibisi enzim α-glukosidase.

DAFTAR PUSTAKA [Bappenas]. 2008. Program Nasional Bagi Anak Indonesia Kelompok Kesehatan. Bappenas. [terhubung berkala]. http://www.bappenas.go.id. [21 Februari 2011]. Chiasson J, Josse RG, Gomis R, Hanefeld M, Karasik A, Laakso M. 2002. Acarbose for prevention of type 2 diabetes mellitus: the stop NIDDM randomized. Medical Progress 359: 2072-2077. Dewi, PNL. 2007. Daun Sukun (Artocarpus communis) sebagai Fitofarmaka Antidiabetes. Laporan Kemajuan Kegiatan Tahap I Riset Unggulan dan Kompetitif. Pusat Penelitian Kimia LIPI: Bandung. Ermin T, Atmodjo D, Winarno, Soemantri AG. 1991. Penatalaksanaan kegawatan neonatus. Semarang: Balai Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro hal.: 46-90. Fawzy C, Abdallah HM, Mohamed SAM, Fathy MS, dan Amany AS. 2008. Antidiabetic and Antioxidant Activities

13

of Major Flavonoids of Cynanchum acutum L. (Asclepiadaceae) Growing in Egypt. Z. Natureforsch 63: 658-662. Gao H, Huang YN, Gao B, dan Kawabata J. 2007. Chebulagic acid is a potent αglucosidase inhibitor. Biosci Biotechnol Biochem 72:601-603. Griffiths G, Trueman L, Crowther T, dan Thomas B. 2002. Onions, a global benefit to health. Phytotherapy Res 17:603-615.

dan F. Nistiar. 2008. Preventive effects of flavonoids on alloxan-induced diabetes mellitus in rats. ACTA VET BRNO (77): 175-182. Markham KR. 1988. Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Bandung: Institut Teknologi Bandung. Terjemahan dari: Techniques of Flavonoid Identification. Mattjik A.A. dan Sumertajaya IM. 2000. Perancangan Percobaan Jilid I. Bogor: IPB Press.

Grotewold, Erich. 2007. The Science of Flavonoids. USA: Springer.

Mustafa, AM. 1998. Isi kandungan Artocarpus communis. Food Science 9: 23.

Hartika, Rolif. 2009. Aktivitas Inhibisi αGlukosidase Ekstrak Senyawa Golongan Flavonoid Buah Mahkota Dewa. [Skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor.

Neal, MJ. 2002. Medical Pharmacology a Glance. New York: Blackwell Publishing.

Hendalastuti, H.R dan Rojidin, A. 2006. Karakteristik Budidaya dan Pengolahan Buah Sukun: Studi Kasus di Solok dan Kampar. Di dalam: Seminar Hasil Litbang Hasil Hutan, Jakarta, 2006. Jakarta: Departemen Kehutanan. 220232. Heyne, K. 1987. Tumbuhan Berguna Indonesia Jilid II. Badan Litbang Kehutanan: Jakarta. Holt, RIG dan Hanley, NA. 2007. Essential Endocrinology and Diabetes. United Kingdom: Blackwell Publishing. Jo S-H, Ka E-H, Lee H-S, Apostolidis E, Jang H-D dan Kwon Y-I. 2009. Comparison of antioxidant potential and rat intestinal α-Glucosidases inhibitory activities of kuersetin, rutin, and isokuersetin. International Journal of Applied Research in Natural Products2 (4): 5260. Lee SK, Hwang JY, Kang MJ, Kim YM, Jung SH, Lee JH, and Kim JI. 2008. Hypoglycemic effect of onion skin extract in animal models of diabetes mellitus. Food Sci Biotech 17:130-134. Liu Y, Zou L, Lin M, Wen-Hua Chen, Bo Wang. 2006. Synthesis and pharmacological activities of santhone derivatives as alfa-glucosidase inhibitors. Bioorganica and medical chemistry 14: 5683-5690. Lukacinova, J. Mojzis, R. Benacka, J. Keller, T. Maguth, P. Kurila, L. Vasko, O. Racz,

Ramdhani, AN. 2009. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Sukun (Artocarpus altilis) terhadap Larva Artemia salina Leach denganmetode Brine Shrimp Lethality Test (BST). [Skripsi]. Semarang: Universitas Diponegoro. Robinson, T. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tingkat Tinggi. Bandung: ITB. Sancheti Shruti, Sandesh Sancheti and SungYum Se. 2009. Chaenomeles sinensis: a potent α- and β-glucosidase inhibitor. American Journal of Pharmacology and Toxicology 4(1): 8-11. Soemyarso, N dan Noer, MS. 2004. Gagal ginjal akut pada nonatus. Lab/SMF Ilmu Kesehatan Anak FK UNAIR/RSU Dr Soetomo. [terhubung berkala]. http://unmed.utah.edu/. [20 Februari 2011]. Sugiwati, S. 2005. Aktivitas Antihiperglikemik dari Ekstrak Buah Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa(Scheff) Boerl.) sebagai Inhibitor α-Glukosidase In Vitro dan In Vivo pada Tikus Putih. [tesis]. Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Susanti, E. 2006. Hubungan Antara Atherogenic Index of Plasma, LDL kecil padat, Lechitin Cholesterol Acyl Transferase, dan Cholesterol ester transfer perotein pada Diabetes Melitus Tipe 2 Terkontrol. Bandung: Laboratorium Klinik Prodia. Sutedja, L. 2003. Bioprospekting Tumbuhan Obat Indonesia sebagai Sediaan Fitofarmaka Antidiabetes. Laporan

14

Kemajuan Tahap II Riset Unggulan Terpadu, Pusat Penelitian Kimia-LIPI. Syah, YM. 2005. Fitokimia, Kemotaksonomi, dan Sifat Biologis Metabolit Sekunder dar Tanaman Sukun (Kelewih) [Review]. Bull.Soc. Nat. Prod. Chem (Indonesia) 5: 33-50. Syah, YM; Achmad, SA.; Bakhriar, E.; Hakim, E.H.; Juliawaty, L.D.; Latip, J. 2006. Dua flavonoid tergeranilasi dari daun Sukun (Artocarpus altilis). ITB: Bandung. Syamsuhidayat, SS dan Hutapea, J.R. 1991. Inventaris Tanaman Obat Indonesia, edisi kedua. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Tadera K, Minami Y, Takamatsu K, dan Matsuoka T. 2006. Inhibition of αglucosidase and α-amylase by flavonoids. J Nutr Sci Vitaminol 52:149153. Vichayanrat A, Ploybutr S, Tunlakit M, and Watanakejorn P. 2002. Efficacy and safety of voglibose in comparison with acarbose in type 2 diabetic patients. Diabetes Res Clin Pract 55(2):99-103. Waji, RA dan Sugrani, A. 2009. Kimia organik bahan alam: flavonoid (kuersetin).[Makalah]. Makassar: Universitas Hasanuddin. WHO. 2010. Definition, Diagnosis and Classification of Diabetes Melitus and it’s Complications. Geneva: WHO Publishing. Wijono, S. 2003. Isolasi dan identifikasi flavonoid pada daun katuk (Sauropus androgynus (L.) Merr). Makara Sains7 (2): 52-66.

LAMPIRAN

16

Lampiran 1

Diagram alir penelitian Ekstraksi daun sukun (Dewi 2007)

Persiapan sampel

Uji inhibisi kuersetin terhadap enzim α-glukosidase

Uji inhibisi enzim α-glukosidase dengan sampel

Penentuan persentase inhibisi sampel

Penentuan IC50 sampel

Uji Statistik

17

Lampiran 2

Tahapan uji inhibisi enzim α-glukosidase ekstrak daun sukun

Persiapan sampel uji ekstrak dan senyawa flavonoid (Pengenceran sampel menjadi konsentrasi yang ditentukan)

Sebanyak 5 µL larutan sampel uji/DMSO dimasukkan dalam sumur microplate

Kontrol (+)

Kontrol Pembanding (kuersetin)

Sampel uji

25 µL p-NPG

25 µL p-NPG

25 µL p-NPG

45 µL Bufer fosfat

45 µL Bufer fosfat

45 µL Bufer fosfat

Blanko warna

Kontrol (-)

25 µL p-NPG 25 µL p-NPG

70 µL Bufer fosfat

70 µL Bufer fosfat

Penambahan 25 µL larutan enzim α-Glukosidase

Inkubasi selama 30 menit pada suhu 37 0C

Penambahan larutan Na2CO3 sebanyak 100 µL

Baca serapan pada panjang gelombang 400 nm *Keterangan: - Blanko warna diisi dengan sampel, substrat (p-NPG), dan bufer fosfat. - Kontrol (+) diisi dengan DMSO, substrat (p-NPG), bufer fosfat, dan enzim αglukosidase. - Kontrol (-) diisi dengan DMSO, substrat (p-NPG), dan bufer fosfat. - Perlakuan diisi dengan sampel, substrat (p-nPG), bufer fosfat, dan enzim αglukosidase.

18

Lampiran 3

Pembuatan sampel ekstrak pelarut (Dewi 2007) Daun sukun dikeringkan pada suhu 50 0C, dihaluskan Direndam dalam etanol (maserasi)

Ekstak daun sukun diuapkan vakum Ekstrak etanol daun sukun Sebanyak 250 g ekstrak etanol daun sukun diambil dan ditambahkan pelarut Heksana: H2O = 1:4 Fraksinasi larutan tersebut

Fraksi Heksana

Residu Fraksinasi dengan etil asetat Fraksi Etil Asetat

Residu Fraksinasi dengan butanol

Fraksi Butanol

Residu

19

Lampiran 4

Pembuatan stok sampel ekstrak pelarut dan stok sampel senyawa

Pembuatan stok sampel fraksi pelarut didahului dengan menimbang tabung Eppendorf kosong menggunakan neraca analitik, kemudian masing-masing sampel dimasukkan ke dalamnya dan ditimbang kembali bobotnya. Hasil penimbangan tabung Eppendorf dengan sampel dikurangi bobot tabung Eppendorf kosong menjadi berat bersih sampel fraksi pelarut. Sampel fraksi tersebut dilarutkan dengan larutan dimetilsulfoksida (DMSO). Volume DMSO yang akan ditambahkan, dapat dihitung dengan contoh sebagai berikut: Konsentrasi yang akan dibuat adalah 500 mg/mL, berat bersih fraksi adalah 5,8 mg. Maka volume DMSO yang ditambahkan adalah= berat bersih fraksi pelarut 500 / volume DMSO mL 5,8 mg 500 / volume DMSO mL volume DMSO mL 11,6 mL Hal yang sama juga dilakukan untuk pembuatan stok sampel senyawa, yaitu menimbang tabung Eppendorf kosong menggunakan neraca analitik, kemudian masingmasing sampel dimasukkan ke dalamnya dan ditimbang kembali bobotnya. Hasil penimbangan tabung Eppendorf dengan sampel dikurangi bobot tabung Eppendorf kosong menjadi berat bersih sampel senyawa. Sampel senyawa ini juga dilarutkan dengan larutan dimetilsulfoksida (DMSO). Pada awalnya, bobot molekul masing-masing sampel senyawa harus diketahui. Setelah diketahui bobot molekul masing-masing sampel, dilakukan perhitungan dengan rumus: sampel

*Bobot molekul (BM) AC-31= 408 g/mol; AC-33= 409 g/mol; AC-51= 410 g/mol; AA-3= 352 g/mol Konsentrasi stok sampel yang akan dibuat adalah 50 mM. Konsentrasi tersebut diubah menjadi satuan mol/mL. Setelah didapatkan, selanjutnya dihitung dengan cara seperti di bawah ini: .

/

Tabel persiapan stok sampel ekstrak pelarut (500 μg/mL) dan sampel senyawa (50 μM) Sampel Etanol Butanol Etil asetat Heksana AC-31 AC-51 AA-3 AC-33

Berat tabung (mg) 872,5 868,2 873,2 861,5 870,7 869,5 860,6 854,6

Berat akhir (mg) 878,3 873,5 880 866 876,6 881,3 861,8 855,5

Berat bersih (mg) 5,8 5,3 6,8 4,5 5,9 11,8 1,2 0,9

Volume DMSO (µL) 11,6 10,6 13,6 9 280 560 68 44

20

Lampiran 5

Konsentrasi

Nilai absorbansi, perhitungan, dan grafik kuersetin sebagai kontrol pembanding Absorbansi Sampel

Sampel (μM)

1 0,259 0,37 0,409 0,555 0,565 0,619 0,639

200 100 50 25 12,5 6,25 3,125

Ulangan 2 0,274 0,379 0,445 0,502 0,578 0,595 0,601

Absorbansi Blanko warna

3 0,271 0,338 0,463 0,525 0,556 0,602 0,605

0,174 0,101 0,082 0,07 0,062 0,063 0,063

Absorbansi sampel terkoreksi

Absorbansi

Ulangan 2 0,100 0,278 0,363 0,432 0,516 0,532 0,538

terkoreksi rata-rata 0,094 0,261 0,357 0,457 0,504 0,542 0,552

1 0,085 0,269 0,327 0,485 0,503 0,556 0,576

3 0,097 0,237 0,381 0,455 0,494 0,539 0,542

*Absorbansi kontrol positif = 0,669 Contoh perhitungan: 1. Absorbansisampel terkoreksi = Absorbansisampel – absorbansiblanko warna 2. Absorbansi terkoreksi rata-rata = Absorbansi sampel terkoreksi ulangan 1 + 2 + 3 3 = 0,085 + 0,100 + 0,097 3 = 0,094 3. % Inhibisi % Inhibisi

= Abs. kontrol positif – Abs. sampel terkoreksi rata-rata Abs. kontrol positif = 0,669 – 0,094 0,669 = 86,552

% Inhibisi

Grafik Kuersetin 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

y = 0,331x + 24,65 R² = 0,958

%inhibisi Linear (%inhibisi)

0

50

100

150

200

250

Konsentrasi

21

Lampiran 6 Konsentrasi

Nilai absorbansi, perhitungan, dan grafik ekstrak etanol

Absorbansi Sampel

Sampel (μg/mL) 25 12,5 6,25 3,125 1,56

1 0,668 0,953 1,59 2,21 2,338

Ulangan 2 0,691 1,167 1,744 1,999 2,303


3 1,006 1,311 0,791 0,773 1,066


1 0,522 0,869 1,514 2,144 2,270

0,146 0,084 0,076 0,066 0,068

Ulangan 2 0,545 1,083 1,668 1,933 2,235

Absorbansi terkoreksi rata-rata 0,642 1,060 1,299 1,595 1,834

3 0,860 1,227 0,715 0,707 0,998

*Absorbansi kontrol positif = 2,502

Contoh perhitungan: 4. Absorbansisampel terkoreksi = Absorbansisampel – absorbansiblanko warna 5. Absorbansi terkoreksi rata-rata = Absorbansi sampel terkoreksi ulangan 1 + 2 + 3 3 = 0,522 + 0,545 + 0,860 3 = 0,642 6. % Inhibisi % Inhibisi


% Inhibisi

Grafik Etanol 80 70 60 50 40 30 20 10 0

y = 16.82ln(x) + 17.77 R² = 0.988

%inhibisi %inhibisi Log. (%inhibisi) 0

10

20

30

Konsentrasi

22


Absorbansi Sampel

Sampel (μg/mL)

1 0,559 0,504 0,592 0,69 0,555

100 50 25 12,5 6,25

Nilai absorbansi, perhitungan, dan grafik fraksi butanol

Ulangan 2 0,548 0,52 0,518 0,464 0,699


3 0,549 0,541 0,475 0,583 0,736


1 0,358 0,415 0,501 0,608 0,488

0,201 0,089 0,091 0,082 0,067

Ulangan 2 0,347 0,431 0,427 0,382 0,632


3 0,348 0,452 0,384 0,501 0,669



= Abs. kontrol positif – Abs. sampel terkoreksi rata-rata Abs. kontrol positif = 1,014 – 0,351 1,014 = 65,384 Grafik Butanol

70

y = 7.896ln(x) + 28.93 R² = 0.931

% Inhibisi

60 50 40 30

%inhibisi

20

%inhibisi

10

Log. (%inhibisi)

0 0

50

100

150

Konsentrasi

23


Absorbansi Sampel

Sampel (μg/mL)

1 0,918 0,911 0,995 1,018 1,052

100 50 25 12,5 6,25

Nilai absorbansi, perhitungan, dan grafik fraksi heksana

Ulangan 2 1,025 1,009 1,064 1,041 1,033


3 1,002 1,009 1,064 1,009 1,079

0,094 0,066 0,061 0,064 0,059


Absorbansi

Ulangan 2 0,931 0,943 1,003 0,977 0,974

terkoreksi rata-rata 0,888 0,910 0,980 0,959 0,996

1 0,824 0,845 0,934 0,954 0,993

3 0,908 0,943 1,003 0,945 1,020



= Abs. kontrol positif – Abs. sampel terkoreksi rata-rata Abs. kontrol positif = 1,014 – 0,888 1,014 = 12,458 Grafik Heksana

14

y = 0.108x + 2.46 R² = 0.830

% Inhibisi

12 10 8 6

%inhibisi

4

%inhibisi

2

Linear (%inhibisi)

0 0

50

100

150

Konsentrasi

24

Lampiran 9 Nilai absorbansi, perhitungan, dan grafik fraksi etil asetat Konsentrasi

Absorbansi Sampel

Sampel (μg/mL)

1 0,302 0,374 0,543 0,592 0,815

25 12,5 6,25 3,125 1,56

Ulangan 2 0,331 0,444 0,528 0,741 0,813


3 0,346 0,479 0,604 0,659 0,972


0,126 0,086 0,066 0,067 0,061

1 0,176 0,288 0,477 0,525 0,754

Ulangan 2 0,205 0,358 0,462 0,674 0,752

3 0,220 0,393 0,538 0,592 0,911





% Inhibisi

Grafik Etil Asetat 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

y = 21.18ln(x) + 12.11 R² = 0.990

%inhibisi %inhibisi Log. (%inhibisi)

0

10

20

30

Konsentrasi

25

Lampiran 10 Persentase inhibisi, persamaan logaritmik, dan IC50 ekstrak dan fraksi pelarut [C] %inhibisi (μg/mL) 25 74,33 12,5 57,65 6,25 48,09 Etanol 3,125 36,27 1,56 26,69 100 65,38 50 57,33 25 56,87 Butanol 12,5 50,99 6,25 41,19 100 12,46 50 10,22 Heksana 25 3,35 12,5 5,46 6,25 1,81 25 79,87 12,5 65,20 Etil 6,25 50,53 Asetat 3,125 40,02 1,56 19,05 Sampel

y 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50

a

b

Ln(x)

IC50

R2 (%)

17,77

16,82

1,916

8,89

98,8

28,93

7,896

2,668

14,42

93,1

2,46

0,108

2,68E+12

83

12,11

21,18

6,01

99

1,788

26

Lampiran 11 Nilai absorbansi, perhitungan, dan grafik senyawa AC-31 Konsentrasi

Absorbansi Sampel

Sampel (μM)

1 0,181 0,340 0,417 0,530 0,675

100 50 25 12,5 6,25

Ulangan 2 0,281 0,364 0,510 0,606 0,810


3 0,376 0,392 0,515 0,621 0,731

0,070 0,060 0,058 0,060 0,057


1 0,111 0,280 0,359 0,470 0,618

Ulangan 2 0,211 0,304 0,452 0,546 0,753


3 0,306 0,332 0,457 0,561 0,674




% Inhibisi

Senyawa AC-31 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

y = 16.57ln(x) + 4.344 R² = 0.992


50

100

150

Konsentrasi

27


Absorbansi Sampel

Sampel (μM)

1 0,74 0,536 0,182 0,628 0,820

500 250 125 62,5 31,25

Ulangan 2 0,704 0,541 0,614 0,633 0,908


3 0,766 0,514 0,559 0,641 0,865

Absorbansi sampel terkoreksi Ulangan 1 2 0,199 0,163 0,261 0,266 -0,005 0,427 0,500 0,505 0,709 0,797

0,541 0,275 0,187 0,128 0,111

3 0,225 0,239 0,372 0,513 0,754





% Inhibisi

Senyawa AC51 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

y = 13.74ln(x) + 6.1 R² = 0.860


0

200

400

600

Konsentrasi

28

Lampiran 13 Nilai absorbansi, perhitungan, dan grafik senyawa AA-3 Konsentrasi

Absorbansi Sampel

Sampel (μM)

1 2,945 2,015 1,377 1,06 1,185

500 250 125 62,5 31,25

Ulangan 2 2,824 2,077 1,321 1,102 1,167


3 2,918 2,164 1,325 1,206 1,218

2,454 1,758 0,701 0,363 0,300


1 0,491 0,257 0,676 0,697 0,885

Ulangan 2 0,370 0,319 0,620 0,739 0,867


3 0,464 0,406 0,624 0,843 0,918

*Absorbansi kontrol positif = 1,434 Contoh perhitungan: 1. Absorbansisampel terkoreksi = Absorbansisampel – absorbansiblanko warna 2. Absorbansi terkoreksi rata-rata = Absorbansi sampel terkoreksi ulangan 1 + 2 + 3 3 = 0,491 + 0,370 + 0,464 3 = 0,442 3. % Inhibisi % Inhibisi


%inhibisi

Senyawa AA-3 y = 13.37ln(x) - 7.216 R² = 0.841

90 80 70 60 50 40 30 20 10 0


0

200

400

600

Konsentrasi

29


Absorbansi Sampel

Sampel (μM)

1 0,432 0,488 0,589 0,850 0,904

500 250 125 62,5 31,25

Ulangan 2 0,421 0,421 0,598 0,860 0,886


3 0,362 0,513 0,643 0,793 0,904

0,176 0,123 0,101 0,059 0,075


Absorbansi

Ulangan 2 0,245 0,298 0,497 0,801 0,811

terkoreksi rata-rata 0,229 0,351 0,509 0,775 0,823

1 0,256 0,365 0,488 0,791 0,829

3 0,186 0,390 0,542 0,734 0,829




% Inhibisi

Senyawa AC-33 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

y = 13.18ln(x) - 4.958 R² = 0.934


200

400

600

Konsentrasi

30

Lampiran 15 Persentase inhibisi, persamaan logaritmik, dan IC50 senyawa flavonoid Sampel

AC-31

AC-51

AA-3

AC-33

Kuersetin

[C] (μM) 100 50 25 12,5 6,25 500 250 125 62,5 31,25 500 250 125 62,5 31,25 500 250 125 62,5 31,25 200 100 50 25 12,5 6,25 3,125

%inhibisi 79,35 69,88 58,32 48,16 32,77 86,35 82,19 81,54 64,71 47,47 69,20 77,17 55,37 47,02 37,93 79,67 63,21 62,15 45,93 42,61 86,55 62,61 48,93 34,57 27,85 22,41 21,03

a

b

Ln(x)

IC50

R2 (%)

50

4,344

16,57

2,755

16,23

99,2

50

6,1

13,74

3,195

25,15

86

50

-7,216

13,37

4,279

72,99

84,1

50

-4,958

13,18

4,169

57,84

93,4

50

-6,008

15,35

y

3,648

44,14

95,8

31

Lampiran 16 Hasil uji T-Test sampel ekstrak dan fraksi pelarut Two-Sample T-Test and CI: Kuersetin_1; etanol1 Two-sample T for Kuersetin_1 vs etanol1 N Mean StDev SE Mean Kuersetin_1 3 13,337 0,271 0,16 etanol1 2 8,895 0,547 0,39 Difference = mu (Kuersetin_1) - mu (etanol1) Estimate for difference: 4,44205 99% lower bound for difference: 2,84473 T-Test of difference = 0 (vs >): T-Value = 12,63 P-Value = 0,001

Two-Sample T-Test and CI: Kuersetin_1; Butanol Two-sample T for Kuersetin_1 vs Butanol N Mean StDev SE Mean Kuersetin_1 3 13,337 0,271 0,16 Butanol 3 14,43 3,36 1,9 Difference = mu (Kuersetin_1) - mu (Butanol) Estimate for difference: -1,08992 99% lower bound for difference: -8,37356 T-Test of difference = 0 (vs >): T-Value = -0,56 P-Value = 0,698 DF = 4 Both use Pooled StDev = 2,3808

Two-Sample T-Test and CI: Kuersetin_1; Etil Asetat Two-sample T for Kuersetin_1 vs Etil Asetat N Mean StDev SE Mean Kuersetin_1 3 13,337 0,271 0,16 Etil Asetat 3 6,01 1,22 0,71 Difference = mu (Kuersetin_1) - mu (Etil Asetat) Estimate for difference: 7,32452 99% lower bound for difference: 4,61512 T-Test of difference = 0 (vs >): T-Value = 10,13 P-Value = 0,000 DF = 4 Both use Pooled StDev = 0,8856

Two-Sample T-Test and CI: Kuersetin_1; Heksana Two-sample T for Kuersetin_1 vs Heksana N Mean StDev SE Mean Kuersetin_1 3 13,337 0,271 0,16 Heksana 3 2,67613E+12 4,63516E+12 2,67611E+12 Difference = mu (Kuersetin_1) - mu (Heksana) Estimate for difference: -2676126814913 99% lower bound for difference: -12703376156513 T-Test of difference = 0 (vs >): T-Value = -1,00 P-Value = 0,813 DF = 4 Both use Pooled StDev = 3277553948248,6300

32

Lampiran 17 Hasil uji T-test sampel senyawa flavonoid Two-Sample T-Test and CI: Kuersetin; AC-33 Two-sample T for Kuersetin vs AC-33 N Mean StDev SE Mean Kuersetin 3 44,145 0,898 0,52 AC-33 3 57,85 1,05 0,61 Difference = mu (Kuersetin) - mu (AC-33) Estimate for difference: -13,7009 99% lower bound for difference: -16,6926 T-Test of difference = 0 (vs >): T-Value = -17,16 P-Value = 1,000 DF = 4 Both use Pooled StDev = 0,9779 Two-Sample T-Test and CI: Kuersetin; AA-3 Two-sample T for Kuersetin vs AA-3 N Mean StDev SE Mean Kuersetin 3 44,145 0,898 0,52 AA-3 3 73,0 13,8 8,0 Difference = mu (Kuersetin) - mu (AA-3) Estimate for difference: -28,8414 99% lower bound for difference: -58,8008 T-Test of difference = 0 (vs >): T-Value = -3,61 P-Value = 0,989 DF = 4 Both use Pooled StDev = 9,7927 Two-Sample T-Test and CI: Kuersetin; AC51 Two-sample T for Kuersetin vs AC51 N Mean StDev SE Mean Kuersetin 3 44,145 0,898 0,52 AC51 3 25,15 9,36 5,4 Difference = mu (Kuersetin) - mu (AC51) Estimate for difference: 18,9976 99% lower bound for difference: -1,3542 T-Test of difference = 0 (vs >): T-Value = 3,50 P-Value = 0,012 DF = 4 Both use Pooled StDev = 6,6523 Two-Sample T-Test and CI: Kuersetin; AC31 Two-sample T for Kuersetin vs AC31 N Mean StDev SE Mean Kuersetin 3 44,145 0,898 0,52 AC31 3 16,23 4,36 2,5 Difference = mu (Kuersetin) - mu (AC31) Estimate for difference: 27,9131 99% lower bound for difference: 18,2863 T-Test of difference = 0 (vs >): T-Value = 10,86 P-Value = 0,000 DF = 4 Both use Pooled StDev = 3,1467

33

Lampiran 18 Hasil uji aktivitas inhibisi sampel ekstrak pelarut dan sampel senyawa flavonoid terhadap enzim α-glukosidase

34

Lampiran 19 Instrumen yang digunakan dalam penelitian

(1) Inkubator CO2

(3) Shaker

(2) Multipipet

(4) ELISA-reader

35

AKTIVITAS EKSTRAK, FRAKSI PELARUT, DAN SENYAWA FLAVONOID DAUN SUKUN (Artocarpus altilis) TERHADAP ENZIM α-glukosidase SEBAGAI ANTIDIABETES

Recommend Documents