ADLN - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA BAB I I I BAHAN, ALAT DAN METODE. Semua bahan k im ia yang digunakan adalah p roduksi

ADLN - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

18 BAB I I I BAHAN, ALAT DAN METODE 1 . Bahan.

1 . 1 , Bahan k im ia, Semua bahan k im ia yang digunakan adalah p ro duksi S. Merck D arm stadt dengan d e r a j a t "pro ana l i s a " , k e c u a li a p a b ila disebutkan l a i n , ' ? i a » i n HC1 yang d i gun akan adalah produksi Takeda,

Hor-

mon pertumbuhan 2 ,4 -D yang d i gun akan adalah pro duksi d a ri Sigma dan ag ar yang digunakan

adalah

B acto Agax, D ifco C e n tr if ie d , D ifco L a b o ra to rie s f D e tro it Michigan USA. 1 . 2 , P isa n g , P isa n g yang digunakan pada p e n e litia n i n i a dalah p isa n g ambon masak dengan k r i t e r i a sebagai (1 9 ) berikm t Z ' - selu ru h permukaan berwarna kuning. - nampak b e rca k -b e rca k sawo matang pada permukaannya. - pada i r i s a n m elin tan g , permukaannya berbentuk b u la t dan s ik u -s ik u tid a k nampak. Pengambilannya dilakukan di beberapa p asar di Ko tamadya Surabaya. 1 . 3 , K alus Solanum mammosum L. K alus Solanum mammo sum L y m g di gun akan p e n e litia n i n i d ip e ro le h d a ri Laboratorium

SKRIPSI

PENGARUH PENAMBAHAN BERBAGAI KONSENTRASI BUAH PISANG AMBON MASAK PADA MEDIA MURASHIGE & SKOOG DIMODIFIKASI UNTUK KULTUR KALUS SOLANUM MAMMOSUM L

pp da

B io -

MAHDALENA


19 te k n o lo g i Ju ru sa n B io lo g i Farm asi, F a k u lta s P a r masi U n iv e r s ita s A irla n g g a , y*ng ditumbuhkan pa da media MS* (I e n a e n i, 1 9 8 6 ) . 1 . 4 . Media. Media yang digunakan pada p e n e litia n i n i ada lah. media MS yang d im o d ifik a si (M S')f yang t e r d i r i a t a s makroelemen an organ ik , mikroelemen anor g an ik , v ita m in , suplemen organ ik l a i n ,

m isaln y a

as am amino ( g l i s i n ) , hormon pertumbuhan d a r i golongarn s it o k i n i n ( k in e tin ) dan auksin ( 2 , 4 -D ). Komposisi kimiawi media MS dan MS' t e r t e r a

pada

lam piran 4 dan 5 . Tabel II.Macam media yang digunakan. Macam media . J J e a i a -MS* + p isan g ambon masak A

10

B

15

*

C

20

D

25 £

t

Semua media d i a t a s tid a k menggunakan su k ro se. 2 . A l a t. - Laminar a i r flow c a b in e t "Kottermann" 8 5 8 0 . - A u tok laf 25 1 (Am erican P o rta b le A utoclave WAP In c.

Co

).

- pH-meter P is h e r .

SKRIPSI


MAHDALENA


PO

- B len d er "M au lin ex". - B o to l k u ltu r , 0 4 cm, t in g g i 7 cm* - Mikroskop "Olympus". - Timbangan a n a l i t i k " S a r t o r i u s " . If Lempeng ja d i K ie s e lg e l 60 P ? 5 4 , E . Merck. 3 . Metode.

3 , 1 . pembuatan m edia. Pembuatan m edia dilakukan s e su a i dengan raeto da M urashige^-^. M asing-m asing komponen

media

yang t e r d i r i d a ri makroelemen anorganik, m ikroelemen an organ ik , v ita m in , hormon pertumbuhan dan as am amino d ib u at l a r u t a n sto k . Dengan mencampur la ru ta n sto k ta d i (m asing-m asing diam bil 10 m l),

100 mg m i o - in o s it o l, p isa n g ambon masak yang t e la h d ihalu sk an ditambah a i r s u lin g hingga d ip e r oleh s s tu l i t e r m edia. pH la ru ta n media

d ia tu r

5 ,6 dengan menambahkan la r u ta n NaOH 0 , 1 N HC1 0 , 1 N. S e te la h ditambah dengan 1

i*

atau

a g a r, l a

ru ta n media dipanaskan sam bil t e r u s diaduk p ai mendidih. L a ru ta n m edia yang masih panas d i tuang ke dalam b o to l k u ltu r le b ih kurang

25 ml

tia p b o to l, d itu tu p r a p a t dengan aluminium f o i l , dan d i ik a t dengan t a l i a ta u benang. S t e r i l i s a s i media dilakukan pada. a u to k la f 121°C selama 20 me n it? ” ).

SKRIPSI


MAHDALENA


21

3 - 2 . Pemindahan k a lu s . Pemindahan k a lu s dilakukan s e c a r a a s e p ti c pa da "lam in ar a i r flow c a b in e t" . Sebelum digunakan lam in ar a i r flow c a b in e t i n i diseraprot dulu ngan

e ta n o l 70

$>

sam bil u dara d ia lirlca n

de

selam©

s a tu jam. K alus yang fcudah berumur dua sampai t i ga minggu dipindah ke media yang baru yang

saraa

kom posisinya. Pemindahan k alu s untuk t i a p -

tl a p

t e t o l k u ltu r sama banyaknya s e c a r a v i s u a l. Pemin dahan k a lu s ke media yang baru yang sama komposi sin y a dilakukan sebanyak lim a k a l i pemindahan da r i t>emindahan yang pertam a (lim a p a s a s i ). 3 .3 * Penimbangan bobot k a lu s . Penimbangan bobot k alu s dim ulai s e te la h medi a d i i s i dengan k a lu s , disebmt sebagai b e r a t awal k s lu s . Setel'aft kal-a& bfertutiur~satu ming&u

sampai

empat minggu dilakukan penimbangan l a g i , dan in i d ise b u t sebagai b e r a t ak hir k a lu s . Cara penimbangan: k alu s dikelu ark an d a ri

b o to l

k u ltu r , d ib ersih k an d a ri s i s a media kemudian d itim bang. K alus yang sudah ditim bang kemudian di~ keringkan untuk d ie k s tr a k s i. 3*4* A n a lisa p r o f i l kandungan k alu s Solanum mammosum L. 3 . 4 . 1 . E k s tra k s i s te r o i d d a ri k a lu s . E k s tra k s i s te r o id d a ri k alus Solanum

SKRIPSI


MAHDALENA


??

mammosum L s e c a r a skem atis t e r t e r a

-pada

lam piran 2 . K alus h a s i l penimb?ngan dikeringkan dalam lem ari p engerin g pada suhu 40 - 60°C, d i serbuk dan dihomogenkan. Ditimbang 5 gram serbuk k a lu s , d ire flu k s dua k a li selama 3 jam dengan 50 ml p etro leu raeter pada 60 65°C . S e te la h d is a r in g , f i l t r a t petroleum e t e r dipisahk an dan ampasnya d ire flu k s sa tu k a li selam a 2 jam dengan 50 ml

aseto n

pada suhu 80 - 85°C- F i l t r a t aseto n d ip i sahkan dan ampasnya d ih i d r o li s a dengan 50 ml HC1 2 N pada suhu 100°C selama 2 j?m. G etelah ^ in p trrlk n n

1 K kemu-

d ian d i^ a rin g dan k e r ta s s a rin g

bersansu

sama ampasnya dikeringkan di dalam \ecisri pengerin g pada suhu 50°C. Kemudian d ire f-*; lu k s sa tu k a l i selam a £ jam dengan 50 k loro fo rm . M asing-masing fr a k s i

ml

diuapkan

Premudian d ia n a l is a dengan KLT( '°) . 3.4.2.

A n alisa h a s i l e k s tra k s i k alu s Solanum mam mo sum L dengan KLT. K rom atografi dilakukan pada ja d i K ie s e lg e l 60 F 254 dengan

lempeng ■,pen,ampfiik

noda a n isa ld e h id a . Lempeng h a s i l kromatog r a f i dikeringkan dalam lem ari

SKRIPSI

n en g erin g


MAHDALENA


selam a 5 - 1 0

raenit pnda suhu 100 - 105 °C.

E k strak rjetro leu m eter d ie lu s i

dengan

n - h e k s a n a -e t ila s e ta t 8 0 : 2 0 , s t e r o l bebas a kan memberlkan warna ungu. E k strak aseto n d ie lu s i dengan k loroform -m etanol 95 : 5 . P i l t r a t k loroform d ie lu s i dengan

k lo r o -

f o r m - e t i l a s e t a t 4 : 1 , d io sg en in akan membe rik a n warna kuning k eh ijau an ,

sedangkan (3 ) s o la so d in a raemberikan v:arna b iru -u n gu v ♦

Pengumpulan d a ta . 3 . 5 . 1 . Pem eriksaan makroskopiK kal u s . - warna k a lu s . - te k s tu r. - jfleferen si-asi -feel. 3 - 5 . 2 . Pem eriksaan m ikroskopik kal u s . - bentuk s e l . 3 . 5 . 3 . Pem eriksaan pertumbuhan k a lu s . Sebagai param eter pertumbuhan k alu s digunakan indeks pertumbuhan yang d i d e f in is ik a n s e b a g a i: b e ra t ak h ir; k alu s ^ 1 0 0 * b e re t awal k alu s B e r a t awal k a lu s d ip e ro le h d a r i : ^e ra t(m ed ia + k a lu s)

— ^e ra ^(media)

B e r a t awal k a lu s d ip e ro le h d a ri h a s i l

pe_

nimbengan s e te la h pemindahan dan b e ra t Ta k h ir k alu s d in e ro le h d ^ ri h a s i l penimbang-

SKRIPSI


MAHDALENA


?A

an t i a p minggu. D ari d a ta yang d ip ero leh kemudian d ib u at kurva indeks pertumbuhan r a ts u -r a ta k alu s Vs umur k alu s (minggu) dan kurva

indefcs

pertumbuhan r a t a - r a t a k alu s Vs p a s a s i. 3 - 5 . 4 - A n alisa s t a t i s t i k . Untuk mengetahui apakah ada perbeda^ an yang bermakna a n ta r mr-cam media, p asa s i dan umur k a lu s , maka dilakukan

car a

a n a lis a v a r ia n "d isa a n f a k t o r i a l a x b x c " , c a r a ren golahan d atanya t e r t e r a pada lam piran K eteran gan : f a k to r a = macam media fa k to r

= p a sa s i

f a k to r c = umur k alu s 3 . 5 . 5 . Pem eriksaan h a s i l e k s tra k s i k alu s S o la num mammosum L dengan KLT. -

juralah noda.

- warna no da. - harga R f#

SKRIPSI


MAHDALENA

ADLN - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA BAB I I I BAHAN, ALAT DAN METODE. Semua bahan k im ia yang digunakan adalah p roduksi

Recommend Documents