ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga BAB I

ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga

4

BAB I

T I N J A U A N

P U S T A K A

1. TUBERKULOSIS PARU

1.1 Definisi Tuberkulosis adalah penyakit infeksi yang dise babkan oleh kuman Mikobakterium tu ber kul os is, dimana paru-paru merupakan organ yang paling sering terse rang penyakit ini dibandingkan dengan organ tubuh yang lain

(8 ,1 2 ).

Mikobakterium tuberkulosis

(M. TB.) adalah kuman

berbentuk batang dengan panjang 2-4 Um, tebal 0,3 Um. Mempunyai sifat tidak dapat bergerak,

tidak berspora,

obligat aerob, tahan asam, metabolisme serta pertum buhannya lambat

(8,26) dan tumbuh amat baik dalam m e

dia yang mengandung gliserol, lur),

albumin, mineral

asam lemak (kuning te -

(darah/serum) dan glukosa,

se-

perti yang terdapat dalam media "Lowenstein-Jensen” . Mikobakterium yang dapat menimbulkan penyakit pa da manusia dibagi menjadi 4 spesies, yaitu: Mikobakte rium tub erk u lo si s, Mikobakterium b o v i s , Mikobakterium m i k r o t i , Mikobakterium af ri ka nu m, dimana ke 4 spesies ini disebut sebagai "tuberkulosis kompieks"

(24,26).

1.2 Imunologi tuberkulosis paru Fungsi utama dari sistem pertahanan tubuh adalah melindungi

"host" terhadap infeksi kuman.

Bila kuman M.TB. masuk kedalam tubuh manusia, ma ka usaha pertama dari sistem pertahanan tubuh ialah

Skripsi

Studi Perbandingan Antara...

Adimasta, Melania R.


5

mengerahkan netrofil untuk memfagositosis kuman terse but. Tetapi kuman tersebut

tidak mengalami kehancur-

an dan segera meninggalkannya. Kemudian akan difagosi tosis oleh makrofag dan diproses didalamnya. -Kuman yang telah diproses ini (super antigen) bersama-sama dengan molekul respon imun (ir) akan diterima oleh re septor dari limfosit-T,

yang kemudian akan mengaktif-

kan limfosit-T tersebut. Limfosit-T yang telah diak tifkan akan mengalami transformasi bias, proliferasi dan diferensiasi menjadi "subset" sebagai berikut: (5,7,16) 1. T H (T Helper),

yang merangsang limfosit-B untuk

menjadi sel plasma yang selanjutnya memproduksi imunoglobulin (Ig). Diduga "subset" dari limfosit-T inilah yang memproduksi limfokin, yang antara lain dapat merangsang dan mengaktifkan makrofag sehingga lebih poten dalam melakukan fagositosis dan penghancuran kuman. 2. T d

(T

Delayed type hipersensitivity ), yang ber -

sangkut paut dengan "delayed type hipersensitivity" 3. T v (T Killer), dapat memusnakan sasaran bila t'erja K. ~ di kontak, baik secara langsung maupun dengan per antaraan Ig M yang diangkutnya* 4. T 0 (T Supressor), yang menekan limfosit-B supaya o tidak membentuk Ig secara berlebihan. 5. T w (T Memory), mengingatkan

(memory) pada sistem

limfosit-T untuk memberikan respon yang sama pada invasi kuman selanjutnya. Imunoglobulin yang pertama dibentuk pada infeksi dengan kuman TB.

adalah Ig M, yang lambat laun kadar-

nya akan berkurang dan diganti atau disusul oleh Ig G dan Ig A, dimana Imunoglobulin-imunoglobulin tersebut dapat mengikat

Skripsi

"antigen dari kuman TB". Kuman yang te




6

lah diikat oleh imunoglobulin tersebut kemudian difa gositosis oleh makrofag yang telah diaktifkan oleh MAP (Macrofag Activiting Factor)

(16).

Pada tahun 1982, Kardjito dkk.

(13) melaporkan

bahwa pada kasus-kasus TB. paru aktif di Indonesia, hanya Ig G saja yang menunjukkan kenaikkan kadar diatas normal yang bermakna. Hal ini diduga disebabkan oleh karena proses TB. paru merupakan proses yang me nahun,

dan sebagian besar dari penderita TB. paru di

Indonesia baru datang berobat setelah proses berja lan agak lanjut.

1.3 Alat-alat diagnostik Alat-alat diagnostik yang masih sering diguna kan sebagai penunjang diagnosis penyakit TB. paru, yaitu: 1. Pemeriksaan radiografik 2. Pemeriksaan bakteriologik 3. Pemeriksaan tes kulit ad 1. Pemeriksaan radiografik Sampai saat ini merupakan penunjang diag nosis penyakit TB. paru yang utama,

tetapi m a

sih mempunyai keterbatasan-keterbatasan seba gai b e r i k u t : * Sering memberikan hasil positip semu, sukar untuk memberikan hasil pembacaan dengan te pat, terutama pada anak-anak (6 ,2 2 ). * Mengingat efek samping pemeriksaan ini, maka pemeriksaan ulangan hanya dapat dilakukan se telah jangka waktu tertentu (maksimal 3 kali s e t a h u n ). * Fasilitas ini hanya dimiliki oleh rumah sa kit pusat,

Skripsi

sehingga menyulitkan untuk peme -




7

riksaan dida era h- dae ra h. * mahal ad. 2. Pemeriksaan bakteriologik Sebagai alat penunjang diagnosis TB. paru yang memastikan

(konfirmatif), tetapi masih mem

punyai kelemahan-kelemahan sebagai berikut: * Sering memberikan hasil negatip semu

[hanya

10% (17,22) daripada kasus TB. paru yang da pat ditemukan dengan pemeriksaan bakteriolo gik] . * Pemeriksaan dengan perbenihan membutuhkan wak tu yang lama ( 1-2 bulan). * Pada anak-anak sulit mendapatkan dahak, biasa nya hanya air liur saja (2 2 ). ad. 3. Pemeriksaan tes kulit Pemeriksaan ini hanya menyatakan bahwa seseorang pernah terinfeksi oleh kuman M.TB.

dan

kurang mempunyai arti sebagai alat penunjang diagnosis

(5,22).

1.4 Antigen Mikobakterium tuberkulosis Menurut Standford dan Grange (12), antigen Mikobakteria dibagi menjadi 4 kelompok sebagai berikut: 1. Kelompok I

: Antigen yang terdapat pada semua spe

sies Mikobakteria dan beberapa bakteri lain (Corine-bakteri, Nokardia, Listeria). 2. Kelompok XI : Antigen yang hanya terdapat pada spe sies yang tumbuh lambat. 3. Kelompok III: Antigen yang terdapat pada spesies yang tumbuh cepat. 4. Kelompok IV : Antigen yang khas untuk setiap spe sies. M > L U PER.F UifAK.A AN 'U N IV E R S I T A S A l R L A N G G A '

S U R A B A Y A Skripsi




8

Banyak usaha telah dilakukan untuk memisahkan an tigen yang khas untuk setiap spesies tersebut

(kelom-

pok IV), tetapi sejauh ini masih belum ada yang berha sil dengan sempurna (1 2 ), sebab pada m ik o b a k t e r i a , an tigen yang khas maupun yang tidak khas seringkali ter dapat pada molekul protein yang sama (12). Mahfouz d k k . mencoba memurnikan antigen yang khas ini dengan cara polimerisasi tuberku lop rot ei n, setelah didiaiisa sel.ama semalam dalam larutan dapar asetat

(15). De -

ngan polimerisasi ini diharapkan bahwa disamping pe murnian antigen,

juga didapatkan peningkatan daya imu

noadsorbent dari antigen tersebut. Polimer ini ternya ta stabil sampai 8 bulan bila disimpan pada 4°C (2).

2. SEROLOGI TUBERKULOSIS

2.1 Sejarah singkat Pada tahun 1898 para sarjana meneliti bahwa se rum penderita TB. mampu membentuk gumpalan dengan sus pensi Mikobakterium tub erk ul os is . Tahun 1901, uji fik sasi komplemen digunakan dalam serodiagnosa T B . Sete lah 30 tahun, uji ini tidak digunakan lagi, karena ti dak adanya antigen yang lebih baik,

dan tidak ditemu-

kan metoda standarisasi yang lebih baik.

1948 ditemu-

kan uji serologi TB. yang menggunakan antigen tuberku lin

yang disalutkan pada sel darah m e r a h . Tahun 1949

Florence Seibert yang tertarik pada struktur antigen dari M.TB.,

juga mengembangkan uji serologi ini, yang

didasarkan pada hubungan antara komponen-komponen an tigen M.TB., "host".

dengan respon imun yang terjadi pada

Uji-uji lain yang diperkenalkan antara lain:

aglutinasi partikel inert, gel difusi, uji fluoresens

Skripsi




9

antibodi dan RIA (12).

2.2 Macam-macam uji untuk diagnosis tuberkulosis

2.2.1 Uji aglutinasi Antigen yang larut diikatkan pada partikel a tau s e l , kemudian direaksikan dengan antibodi dari antigen tersebut, maka akan terjadi aglutinasi. Uji aglutinasi ini mempunyai kelemahan,

yaitu

kurang sensitip, karena hanya dapat untuk mendeteksi kadar antibodi yang tinggi dalam serum. Maka diadakan penelitian lebih lanjut untuk mendeteksi k a dar antibodi yang rendah dalam serum dengan menggunakan faktor penguat atau label, yaitu antara lain, uji RIA dan uji ELISA (11).

2.2.2 Uji Radio Imun ( RIA = Radio Immuno Assay) Antigen yang dilekatkan pada fase p a d a t , dire aksikan dengan antibodi dalam serum, kemudian ditam bah konyugat yang berlabel radioisotop. Hasil diten tukan dengan menggunakan alat "radiation counter"

( 1 0 , 1 1 ). Keuntungan uji RIA:

,

* Merupakan uji serologi yang amat sensitip,

i spesi-

fik serta amat baik untuk penentuan bahan-bahan dengan kadar amat rendah (3). Kerugian/ kelemahan uji RIA: * Membutuhkan peralatan yang mahal * Waktu paruh reagensianya amat pendek * Perlu tindakan-tindakan khusus untuk melindungi petugas laboratorium maupun pegawai-pegawai pa brik pembuat reagensia dari

Skripsi


sinar-sinar radioak-



10

tif dan membutuhkan tempat pembuangan khusus un tuk reagensia yang telah digunakan.

2.2.3 ELISA (Enzyme Linked Immunoserbent Assay) Kelemahan-kelemahan dari uji radio imun mendorong para peneliti untuk mencari penggantinya yang lebih sederhana,

lebih murah dan dengan reagensia

yang dapat tahan lama,

yaitu uji ELISA.

Serum yang mengandung antibodi yang akan diten tukan direaksikan dengan antigen yang terikat pada fase p a d a t . Kemudian ditambahkan konyugat

(antihu -

man imunoglobulin berlabel enzim) dan akhirnya di tambahkan substrat.

Hasil dibaca dengan spektrofoto

meter (1 1 ). ELISA ternyata lebih praktis, namun sensitifitasnya

6251 dan spesifisitasnya 74,3% masih -belum

m e m a d a i , disamping itu dibutuhkan alat "micro ELISA reader" yang hanya dimiliki oleh rumah sakit yang besar saja (1 0 ).

2.2.4 Uji Imunoperoksidase (uji IPO) Uji Imunoperoksidase merupakan perpaduan anta ra 2 uji serologik yang telah dikembangkan lebih da hulu,

yaitu uji imunofluoresens dan ELISA (akan di-

p u b l i k as ik an ). Uji IPO ini mulai dikembangkan karena mempunyai keuntungan-keuntungan antara

lain, ha

silnya dapat dibaca dengan menggunakan mikroskop ca haya biasa dan morfologi antigennya dapat dilihat dengan nyata dibawah mikroskop

(1,4,21).

Uji IPO dibagi menjadi 4 tipe, yaitu: (lihat gambar 1 ) a. Uji IPO langsung b. Uji IPO tak langsung

Skripsi




11

c. Uji Avidin-Biotin d. Uji peroksidase-antiperoksidase

(PAP)

ad a. Uji IPO langsung Uji ini merupakan cara yang paling seder hana untuk menentukan lokasi dari antigen ter t e n t u . Antibodi dari antigen yang akan diten tukan,

diikatkan secara kimia (ikatan kovalen)

dengan enzim Horseradish peroksidase lam bentuk konyugat.

(HRP) da

Konyugat ini diteteskan

pada bahan yang akan ditentukan. Setelah diin kubasi,

sediaan dicuci untuk menghilangkan si

sa-sisa konyugat yang tidak bereaksi. Ke mudi an ditambahkan substrat yang mengandung bahan kromogen. Hasil positip bila pada sediaan yang diperiksa didapatkan perubahan warna pada an tigen yang akan ditentukan. Cara ini cukup sederhana dan tidak membu tuhkan waktu yang lama, tetapi kelemahannya

,

diperlukan konyugat khusus untuk setiap anti gen

(4).

ad b. Uji IPO tak langsung Pada sediaan yang mengandung antigen, di tambahkan antibodi dari antigen tersebut

(ti

dak dalam ikatan konyugat), diinkubasikan selama waktu tertentu,

dicuci dan ditambahkan

4

konyugat tama,

(antiglobulin dari antibodi yang per

yang diikatkan pada enzim HRP). Kemud i

an ditambah substrat yang mengandung bahan kromogen.

Hasil positip

bila

aan yang diperiksa didapatkan

pada

sedi

perubahan w a r

na pada antigen yang akan ditentukan. i Cara ini lebih sensitip daripada cara langsung dan hanya memakai 1 macam konyugat

Skripsi




12

untuk berbagai jenis antigen,

tetapi dibutuh

kan waktu yang lebih lama dan pengecatan latar belakang (background staining) lebih se rin g terjadi

(4).

ad c. Uji Avidin-Biotin Cara ini menggunakan 3 macam reagensia sebagai berikut: * Antibodi pertama yang spesifik dari antigen yang akan ditentukan. * Antibodi kedua (yang dapat mengikat antibo di pertama),

diikatkan pada biotin

dalam

bentuk konyugat. * Kompleks peroksidase yang diikatkan pada A vidin-biotin

yang juga dalam bentuk konyu

gat. Antigen yang akan ditentukan dapat di perlihatkan dengan penambahan substrat

yang

mengandung bahan kromogen. Cara ini lebih sensitip dibandingkan de ngan cara langsung dan tak langsung (4). ad d. Uji peroksidase-antiperoksidase (PAP) Uji PAP ini juga menggunakan 3 macalm reagensia sebagai berikut: * Antibodi pertama yang spesifik dari antigen yang akan d i t e n t u k a n . * Antibodi

kedua,

sebagai penghubung yang da

pat mengikat antibodi pertama dan kompleks PAP. * Kompleks PAP, merupakan enzim peroksidase dalam bentuk

ikatan imunologik.

Antigen yang akan ditentukan dapat di perlihatkan

dengan penambahan substrat

yang mengandung bahan kromogen. M 1 L I K. PERPUSTAKAAN 'U N I V E R S IT A S A IR L A N G G A '





13

Uji PAP ini mempunyai sensitifitas

LOO -

1000 kali lebih tinggi dari uji IPO tak

Lang -

sung dan setara dengan RIA (21).

Key Ai\TU.u. x Anti*«n

# Pcroxidaae Knsys

'v

A ^mm

Primary Antibody

► Biotin

Secondary Antibody

Avldln

PA? Coaplex

A AA

A AA Direct Method

Indirect Method

A

Y IA A

PAP Method

A AA Avidin-Biodn Method

gambar 1. Prinsip dasar berbagai uji IPO

2.2.4.1

Perekat antigen (lihat gambar 2) Perekat antigen yang digunakan pada uji

IPO

ini. tergantung dari bahan yang mengandung antigen tersebut. ringan, albumin,

Bila antigen terdapat dalam potongan ja

dianjurkan untuk menggunakan Meyer's

egg

sedangkan untuk beberapa sediaan hapus

digunakan alum gelatin.

Mahfouz d k k . mendapatkan

bahwa yolk sac normal merupakan perekat antigen TB.

paru yang baik

mendapatkan

(15).

Sedangkan Nassau (17)

,

bahwa larutan gelatin 0,5% merupakan

perekat kuman T B . yang baik.

Skripsi




14

gambar 2. Penampang membujur telur eram

2.2.4.2 Peroksidase endogen Adanya peroksidase endogen didalam sediaan jaringan,

hapus darah/sumsum tulang,

yolk sac, da

pat mengacaukan pembacaan hasil yang sebenarnya (dapat memberikan hasil reaksi positip semu/pengo toran).

Untuk menghindari gangguan ini, maka sedi

aan yang akan digunakan terlebih dahulu diblokade dengan menggunakan hidrogen peroksida (HgOg 30%) selama 5 menit

(4).

2.2.4.3 Pewarnaan latar belakang

(background staining)

Reaksi positip semu/pengotoran dapat juga ta* jadi jika antibodi primer (antibodi pertama) diab sorbsi dalam sediaan/perekat antigen, karena anti bodi primer ini nantinya akan mengikat antibodi ke d ua /p en g h u b u n g . Untuk mengatasi hal ini, yaitu

Skripsi




15

dengan memberikan

"non immune serum" yang berasal

dari hewan yang sama dengan-hewan dimana antibodi sekunder dibuat

(dengan pengenceran 1 :2 0 .) pada se

diaan sebelum sediaan tersebut diberi ko.nyugat (4)

2.2.4.4 Substrat dan kromogen Substrat yang akan digunakan untuk uji dalah hidrogen peroksida

IPO a

(HgOg)- Reaksinya terja-

di sebagai b e r i k u t :

HRP akan membentuk kompleks dengan HgOg, dan kom pleks ini akan bereaksi dengan elektron donor (be berapa macam kromogen) yang kemudian menghasilkan molekul

berwarna,

HgO dan HRP. HRP yang dibebas -

kan akan digunakan kembali untuk membentuk

kom -

pleks dengan H 20 2 dan reaksi berjalan seperti semula,

dan seterusnya (4). Pada uji IPO ada beberapa kromogen yang bia-

sanya digunakan sebagai donor elektron pada subs trat, * 3,3'

yaitu antara lain: diaminobenzidina (3,3' DAB)

Akan memberikan endapan berwarna c o k l a t . * 3-amino-9 etilkarbasol Akan memberikan endapan berwarna m e r a h . * p-fenilendiamina dihidroklorida Akan memberikan warna biru hitam.

Skripsi




16

2.2.4.5 Pewarnaan kontras

(counterstain)

Pewarnaan kontras yang digunakan tergantung dari substrat dan kromogennya. nya digunakan metilen biru

Untuk DAB, biasa -

(4).

2 . 2 . 4 .6 Kontrol Uji

IPO merupakan uji laboratorik yang semi-

kuantitatif,

maka untuk menjamin presisi dari uji

ini, perlu digunakan kontrol. Ada beberapa macam kontrol

yang dapat digunakan

(4):

* Kontrol negatip: Untuk kontrol negatip digunakan serum orai^ sehat yang tidak mengandung antibodi yang

akan

ditentukan. C o n t o h : pada penentuan Ig G terhadap M.TB, digu nakan serum bayi sehat dengan uji tuber kulin negatip. * Kontrol positip: Untuk kontrol positip digunakan serum pen derita T B . yang pasti mengandung antibodi

yang

akan ditentukan. Contoh:

pada pemeriksaan TB.paru,

digunakan pod.

sera dari penderita-penderita T B . paru yang menunjukkan kenaikkan kadar

Ig G

terhadap basil TB. yang nyata diatas ni lai normalnya. * Kontrol Substitusi: Untuk kontrol substitusi digunakan "non iirmu ne serum" yang berasal dari hewan yang sama

de

ngan hewan asal dari reagensia yang dipakai. kon trol

ini digunakan sebagai blanko sediaan, kare-

na setiap pengotoran/hasil positip semu yang tam pak,

disebabkan oleh karena ikatan protein non MiLIK P E R P U iT A K A A N UN IVERSITAS A IR L A N G G A





17

spesifik/endogen peroksidase,

dan bukan berasal

dari ikatan antibodi spesifik dengan antigennya.

Skripsi



ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga BAB I

Recommend Documents