DAFTAR PUSTAKA
______________, 2005. Catatan koalisi Resistance and Solidarity Against Agrochem TNCs/RESIST, Philipina. Aaron, Peacock, D. 2004. Methods of sampling microbial communities and apparatus therefore. The University of Tennessee Research Foundation. Alexander, M. 1977. Soil Microbiology, Second Edition. John Wiley & Sons,Ind., New York. BPLHD Jawa Barat. 2006. http://www.bplhdjabar.go.id/kategori/kehati/publikasi. BPLHD. 2004. Pengembangan Biomarker Sebagai Indikator Kerusakan LingkunganOleh Polutan Logam Berat. Propinsi Jawa Barat. Connell, Des. Chemistry and ecotoxicology of pollution, A willey-intersciene publication. Cowan. S. T. 1974. Manual for The Identification of Medical Bacteria, Cambridge university press. Crossley Jr. DA, Mueller BR & Perdue JC. 1992. Biodiversity of Microarthopds in Agricultural Soil: Relations To Processes. Agric. Ecosystem Environment. Departemen Kesehatan. 1998. Daftar Penggunaan Pestisida di Indonesia, Jakarta. Doran, JW. Parkin. 1994. Definning and Assessing Soil Quality for Sustainable Enironment. SSSA Special Publication 35. SSSA. Madison. Fadliah, Anna. 2006. Analisis Kesetimbangan Massa Profenofos dan Klorpirifos Di Persawahan Dalam Upaya Penentuan Potensi Residu di Air Permukaan. Tugas Akhir Jurusan Teknik Lingkungan. Institut Teknologi Bandung. Hadisantosa, Fajar. 2004. Analisa Kualitas Air Permukaan Sungai Citarum Hulu Dihubungkan Dengan Tata Guna Lahan Dengan Menggunakan Biomarker, Tesis S-2, Program Magister Kesehatan dan Keselamatan Lingkungan ITB. Bandung. Haug, G, Hoffmann. 1989. Chemistry of Plant Protection, Springer-Verlag Berlin, Heidelberg. Haque, R. 1975. Environmental Dynamic of Pesticides. Plenum Press, New York.
xii
Holt, john G. 1994. Bergey’s manual of determinative bacteriology, Williams & Wilkins. Http://www.nap.edu. Diakses pada tahun 2007. http://www.inchem.org/documents/jmpr/. Chemical Safety Information from Intergovernmental Organizations. Chlorpyrifos Jacob, Agustinus. 2001. Metoda dan Teknik Pengambilan Sampel Tanah dan Tanaman dalam Mengevaluasi Status Kesuburan Tanah. Makalah Falsafah Sains (PPs 702). IPB. Komisi Pestisida. Metode Pengujian Residu Pestisida dalam Hasil Pertanian. Departemen Pertanian. 1997 Loehr, R.C., 1984. Pollution Control for Agriculture, Second Edition. Academic Press, Inc., Florida. Michael, P. 1984. Ecological methods for field and laboratory investigations. McGraw-Hill publishing Company Limited, Michael J. Pelczar, Jr. Roger D. Reid. 1958. Microbiology. McGraw-Hill book company, Inc. Peakal, David. (1992), Animal Biomarkers as Pollution Indicators. Chapman & Hall. Paoletti MG, Favretta MR, Stinner SB, Purrington FF, & Bater JE. 1991. Invertebrates as bioindicator of soil use. CAB International. Oxon. Pracaya. 2003. Bertanam Sayuran Organik di Kebun, Plot, dan Polibag. Penebar Swadaya, Jakarta. Pustekkom.
2005.
Bakteri.
http://www.e-dukasi.net/modul_online/MO_86/
kb1_3.htm. Diakses pada tanggal 10 Mei 2007. Rashed, M. Nageeb. (2000) Biomarkers as Indicators for Water Pollution With Heavy metals in Rivers, Seas and Ocans. South Valley University, Egypt. Rosliana, Nina. 2001. Bioremediasi Tanah Akibat Paparan Pestisida Klorpirifos. Tesis Magister Jurusan Teknik Lingkungan. Institut Teknologi Bandung. S, K, Agarwal, 2002. Pollution Management III, Pesticide Pollution. APH Publishing Corporation. New Delhi. Sa’id, E.G., 1994. Dampak Negatif Pestisida, Sebuah Catatan bagi Kita Semua. Agrotek, Vol. 2(1). IPB, Bogor.
xiii
Salle, A.J. 1961. Fundamental Principles of Bacteriology fifth edition. New York : McGraw-Hill Book Company, Inc. Sandi. 2004. Pemetaan Penyebaran Residu Insektisida Organofosfat dalam Tanah di Desa Wangunharja, Kecamatan Lembang, Kabupaten Bandung.Tugas Akhir Jurusan Teknik Lingkungan. Institut Teknologi Bandung. Setiawan, Linda. 2001. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Pendegradasi Chlorpyrifos. Laporan Tugas Akhir Teknik Lingkungan ITB. Sherman, Cappuccino. 1987. Microbiology : A laboratory manual. The Benjamin/cummings publishing company, Inc. Sudarmono, S. 1991. Pestisida. Penerbit Kanisius, Yogyakarta. Soemirat, J. 2003. Toksikologi Lingkungan. Yogyakarta : Gajah Mada University Press. Sofia, Diana. 2001. Pengaruh Pestisida Dalam Lingkungan Pertanian. Usu digital Library. Sumatera Utara. Tarumingkeng, Rudy. 1992. Insektisida: Sifat, Mekanisme Kerja, Dan Dampak Penggunaannya. UKRIDA Press: Jakarta. Toledo, Martinez, M.V., V. Salmeron. J. Gonzalez-Lopez. 1993. Effects of diazinon and quinalphos on some functional groups of soil microflora. Toxicology Environment. U.S Environmental Protection Agency. 1999. Environmental Risk Asessment for Profenofos. U.S
Environmental
Protection
Agency.
2007.
http://www.epa.gov/U.S.
Environmental Protection Agency. Wit, R. 1992. Microbial Ecosystems in Spanish Coastal Salinas; an Ecological and Geochemical Study of Biomarkers. Dept. of Environmental Chemistry. Barcelona. Spain.
xiv
A-1
Lampiran A Data Penelitian
A-2
Tabel hasil karakterisasi koloni bakteri Characterization tests kode
A1 A2 A3 A4 B1 B2 B3 B4 B5 B6 C1 C2 C3 C4 C5 C6 D1 D2 D3 D4 D5 E1 E2 E3 E4 E5 F1 F2 F3 F4 F5 G1 G2 G3 G4 H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7
gram
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
spore
+ -
shape
sphere rod rod rod sphere rod rod rod rod rod rod rod sphere rod rod sphere sphere rod rod rod rod rod rod rod rod sphere rod sphere rod rod sphere sphere rod rod rod rod rod rod rod rod sphere Rod
mot
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
cat
+ + + + + + + + + + + + -
glu
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
O
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + -
F
+ + + + + + + + + + + + + + + -
Growth
MR
50C
370C
420C
SSA
McCA
-
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
+ + + + + + + + + + -
+ -
+ + + + + + + + + + -
-
VP
+ + + + + + + + + + + + + + + + +
CIT
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + -
SAC
+ + + + + + + + + + + + + + + + + -
MAN
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + -
ARA
+ + + + + + + -
INO
+ + + -
SOR
+ + + + + + + + + + + + + + + +
RHA
+ + + + + + -
NIT
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
IND
+ + + + + + + + + + -
URE
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
ADH
+ + + + + + + + + + + + -
ODC
+ + + + + + -
LDC
+ + + + + + + -
H2S
+ + + + + + -
hydrolisis GEL
casein
starch
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + -
+ + + + + + + + + + + + + + -
A-3
Characterization tests kode
H8 I1 I2 I3 I4 I5 I6 I7 I8 J1 J2 J3 J4 J5 J6 J7 J8 K1 K2 K3 K4 K5 K6 K7 K8 L1 L2 L3 L4 L5 L6 L7 L8
gram
+ + + + + + + + + + + + + + + -
spore
+ + + + + + -
shape
Coco bacillus rod rod rod rod rod rod rod sphere rod rod rod rod rod rod rod sphere rod sphere rod rod rod rod rod rod sphere rod rod rod rod rod sphere rod
mot
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
cat
+ + + + + + + + + + + + + + + -
glu
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
O
+ + + + + + + + + + + + + + -
F
+ + + + + + + + -
Growth 50C
370C
-
+
-
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
MR
420C
SSA
McCA
+ + + + + + + + + + -
+ + + + -
+ + + + + + + + + + + -
+ +
VP
+ + + + + + + + + + -
CIT
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
SAC
+ + + + + + +
MAN
+ + + + + + + + + + + + + + + + + -
ARA
+ + + + -
INO
+ + -
SOR
+ + + + + + + + -
RHA
+ + + + + -
NIT
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + -
IND
+ + + + -
URE
+ + + + + + + + + + + + + -
ADH
+ + + + + + + + + + -
ODC
+ + +
LDC
+ + + + + + + -
H2S
+ + +
hydrolisis GEL
casein
starch
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
+ + + + + + + + + + + + + + + + + -
+ + + + + + + + + -
A-4
Karakteristik bakteri hasil identifikasi Karakteristik bakteri genus Alkaligenes sp.
Berbentuk batang dengan ukuran 0,4-0,5 x 2 μm
Gram negatif
Sel biasanya tunggal
Motil
Fakultatif aerob
Temperatur optimum 37oC
Karakteristik bakteri genus Bacillus sp.
Berbentuk batang
Umumnya gram positif
Membentuk endospora
Bergerak dengan flagella lateral
Hampir semua menghidrolisis gelatin dan casein
Aerob dan fakultatif anaerob
Karakteristik bakteri genus Enterobacter sp.
Berbentuk batang
Gram negatif
Aerob dan fakultatif anaerob
Motilitas tinggi
Karakteristik bakteri genus Erwinia sp.
Berbentuk batang atau lurus
Gram negatif
Sel umumnya tunggal
Bergerak dengan flagella
Sebagian besar spesiesnya tidak dapat mereduksi nitrat
Menghasilkan pigmen kuning yang tidak larut dalam air
Fakultatif anaerob
A-5
Temperatur optimum 20-30oC
Karakteristik bakteri genus Proteus sp.
Berbentuk batang
Gram negatif
Aerob dan fakultatif anaerob
Temperatur optimum 37oC
Karakteristik bakteri genus Pseudomonas sp.
Berbentuk batang lurus atau kurva
Gram negatif
Habitatnya tunggal atau berpasangan
Bergerak dengan flagella polar
Menghasilkan pigmen nonflouresent
Tidak dapat melakukan denitrifikasi
Tidak mempunyai endospora
Temperatur optimum 30oC
Umumnya terdapat ditanah dan di air
Menggunakan senyawa organik sederhana sebagai sumber karbon dan energi
Karakteristik bakteri genus Micrococcus sp.
Berbentuk batang
Gram positif
Habitatnya berpasangan
Non-motil
Tidak mempunyai endospora
Aerob
Karakteristik bakteri genus Staphylococcus sp.
Berbentuk batang
Gram positif
A-6
Habitatnya berpasangan
Non-motil
Tidak mempunyai endospora
Aerob dan fakultatif anaerob
Karakteristik bakteri genus Citrobacter sp.
Berbentuk batang
Gram negatif
Aerob dan fakultatif anaerob
Umumnya ditemukan di tanah dan air
Karakteristik bakteri genus Seratia sp.
Berbentuk batang
Gram negatif
motil
Aerob dan fakultatif anaerob
B-1
Lampiran B Prosedur Penelitian
B-2
Prosedur Ekstraksi Metode ekstraksi insektisida dari tanah yang digunakan adalah Metode Shaker (Komisi Pestisida,1997). Alat:
Timbangan
Labu ukur 10 ml
Rotary Evaporator
Labu erlenmeyer
Oven 130 ºC
Filter
Shaker
Botol vial
Saringan Pasir
Spatula
Pipet hisap 100 ml &25ml
Buchner
Kolom florisil
Bahan :
25 gr sampel tanah (berat basah)
Kapas tak berlemak
Aquadest
Na2SO4 anhidrant
Pelarut organik Aseton
Pelarut organik Heksan
Florisil
Cara kerja : Sebanyak 25 gram tanah pertanian dicampur dengan pelarut aseton 100 mL, kemudian di kocok dengan Shaker selama 20 menit. Selanjutnya larutan aseton dipisahkan dari lumpurnya dengan corong buchenert yang dilapisi celite. Larutan aseton dicampur dengan pelarut heksan 50 mL. Insektisida organofosfat dari aseton akan terikat dalam pelarut heksan, dengan menggunakan corong pemisah aseton dan heksan dipisahkan. Lalu, untuk menghilangkan parikulat pengotor dan mengurangi kandungan air, sampel dialirkan ke kolom florisil. Kemudian sampel dievaporasi dengan suhu 500C sampai volumenya ± 1 mL. Berikut adalah diagram cara kerja ekstraksi contoh tanah:
B-3
Keringkan &Ayak Sampel Tanah
100 ml Aceton
Erlenmeyer 250 ml
25 gr Sampel Tanah
Shaker 20 menit , 150 rpm
Diamkan&Saring dgn Buchenert+kertas saring+ celite
Padatan dibuang
Cairan Evaporasi pd 40-50ºC hingga ½ nya 25 ml Hexan Kocok dgn corong pisah
Hexan
Supernatan 25 ml Hexan
Kocok lagi dgn corong pisah selama 2 menit
Kolom Florisil 5 ml Hexan- Na2SO4-Florisil teraktivasi 3 gr-kapas Bilas kolom dengan 5 ml Hexan
Lapisan air dibuang
Evaporasi hingga 1-2 ml
Aseton hingga Vial 10 ml Siap untuk Diinjeksikan
Upaya mengihindari kontaminasi : 1. Menghindari penggunaan sabun pencuci peralatan laboratrium yang akan mengandung germisida. 2. Mengihindari penggunaan cairan penyemprot serangga, dan berbagai jenis parfum.
B-4
3. Menghindari kemungkinan kontaminasi dari pengujian sebelumnya yang tertinggal dalam:peralatan gelas, alat suntik, dan kolom kromatografi, dengan jalan mencuci seluruh peralatan dengan deterjen secara berulang, dan dilanjutkan dengan pembilasan menggunakan aquades, kemudian dengan pelarut aseton. 4. Menghindari pemakaian alat yang terbuat dari polimer polivinil klorida (PVC), karena sebagian besar pestisida terserap dalam bahan ini. Peralatan yang digunakan sebaiknya terbuat dari gelas, teflon (PTFE), atau karet silikon (silicone rubber), karena dikenal tidak menyerap pestisida. 5. Memisahkan peralatan gelas untuk keperluan analisis pestisida dari peralatan gelas untuk keperluan analisis yang lain.
B-5
Prosedur Identifikasi Dan Perhitungan Jumlah Bakteri
A.
Sterilisasi Alat
Otoklaf diisi air secukupnya, kemudian alat dan bahan yang akan disterilkan disusun dengan baik dalam otoklaf. Otoklaf ditutup dan dikunci dengan rapat, katup “release” dibiarkan terbuka. Setelah udara keluar semua, katup ditutup. Temperatur dipanaskan hingga mencapai 121oC dan tekanan 1 atm (15 lbs), maksimal 1,5 atm. Setelah itu waktu dihitung hingga 20 menit untuk alat dan 15 menit untuk bahan. Setelah itu, otoklaf dimatikan kemudian tunggu sampai tekanan 0. Setelah selesai, kunci otoklaf dibuka. Alat – alat dapat dikeringkan dioven dan bahan dapat disimpan.
B.
Pengenceran
Sampel tanah seberat 10 gram diambil, lalu dimasukan kedalam tabung reaksi yang telah diberi 100 ml NaCl fisiologis, lalu dikocok agar homogen. Dari tabung tersebut diambil dengan menggunakan volume pipet sebanyak 1ml kedalam tabung reaksi lain yang berisi 9 ml NaCl fisiologis untuk melakukan pengenceran 10-1.
Disiapkan beberapa tabung reaksi lain yang berisi 9 ml NaCl fisiologis untuk pengenceran selanjutnya. Dari tabung reaksi hasil pengenceran 10-1 tadi , diambil 1 ml dengan menggunakan pipet 1 ml kedalam tabung reaksi kedua yang berisi 9 ml NaCl fisiologis agar mendapatkan pengenceran 10-2. Pengenceran terus dilakukan hingga mendapatkan pengenceran 10-9.
C.
Pengamatan Morfologi Koloni Bakteri dan Pembuatan Biakan Murni
Sampel tanah yang telah diencerkan selanjutnya dilakukan penanaman pada media agar nutrisi. Koloni bakteri yang tumbuh pada cawan petri diamati keadaan morfologi baik itu bentuk, pinggiran, warna, ataupun permukaan koloninya. Koloni yang memiliki ciri yang sama pada satu cawan petri, dianggap kedalam satu spesies. Koloni yang terlihat berbeda pada saat melakukan pengamatan morfologi koloni tadi diambil dengan menggunakan oose yang telah disterilkan
B-6
dalam api bunsen. Masing – masing jenis bakteri yang berbeda diisolasi. Setelah diperoleh koloni yang mampu hidup pada media, maka setiap koloni yang diperoleh dibuat tiga ulangan. Akhirnya dari beberapa kali pengulangan, minimal lima kali ulangan untuk setiap strain, ditemukan isolat murni dari bakteri tanah tersebut. Isolat murni tersebut kemudian di tanam dalam agar miring. Kemudian dilanjutkan dengan identifikasi isolat. Penyimpanan koloni bakteri dilakukan pada suhu 40C dan siap untuk digunakan pada pengujian selanjutnya.
D.
Isolasi
Tujuan dari isolasi adalah memisahkan mikroorganisme dari biakan campuran hingga diperoleh biakan murni. Prinsip kerjanya adalah mikroorganisme terdapat dimana-mana sehingga mikroorganisme mampu tumbuh dengan baik bila tersedia medium atau makanan sebagai substratnya. Dalam satu substrat dapat tumbuh lebih dari satu jenis mikroorganisme, dengan demikian dikembangkan satu teknik isolasi /pemisahan sehingga dalam satu biakan terdapat hanya satu jenis mikroorganisme atau yang disebut biakan murni.
Teknik isolasi yang digunakan adalah teknik menuang (poured plate), dimana mikroorganisme yang akan dipisahkan berada dalam suatu suspensi, untuk memisahkannya dituang kedalam medium tertentu.
bahan dan alat : 1. tabung medium NA 2. Cawan steril 3. biakan bakteri 4. jarum inokulasi dan pembakar spirtus 5. penangas air
Prosedur : 1. medium agardicairkan kedalam penangas airi hingga suhu 40oC. 2. medium cair dituangkan kedalamcawan petri steril biarkan membeku. 3. diambil sedikit bakteri dari biakan dengan jarum inokulasi 4. kemudian digoreskan pada medium padat dalam cawan petri tadi. 5. inkubasi pada suhu kamar sampai terjadi pertumbuhan dan diamati
B-7
E.
Pewarnaan Gram
Sampel diambil dari koloni yang telah dimurnikan pada tabung, dan dibuat apusan pada kaca objek sehingga membentuk film yang tipis. Setelah itu dikeringkan dan difiksasi. Preparat ditetesi kristal ungu dan didiamkan selama 30 detik, dibilas dengan akuades. Setelah kering diberi lugol, dibiarkan selama 30 detik lalu dibilas kembali dengan akuades. Kemudian preparat didekolorasi dengan alkohol 95% selama 10-20 detik dan dibilas dengan akuades. Preparat dikeringkan dan diberi zat warna pembanding, air fuchsin selama 30 detik. Kaca objek tersebut dikeringkan setelah dibilas dengan akuades. Lalu diamati di bawah mikroskop.
Bakteri gram positif (+) akan terlihat berwarna ungu. Sedangkan bakteri gram negatif
(-)
terlihat
berwarna
merah.
Pemeriksaan
dibawah
mikroskop
menggunakan perbesaran hingga 1000x. Sebelumnya preparat ditetesi sedikit minyak imersi.
F.
Pewarnaan Spora
Spora dapat diwarnai sehingga dapat diamati lebih seksama dan dibedakan dari sel vegetatif. Bahan dan alat : -
Kaca objek yang bersih dan kering
-
Jarum inokulasi
-
Mikroskop
-
Pembakar spiritus
-
Kertasi isap
-
Biakan bakteri
-
Larutan malacheet green dan safranin
-
Penangas air dan ram kawat
Cara kerja : 1.
Buat apusan dari tiap bakteri lalu fiksasi
2.
Teteskan malacheet green hingga seluruh apusan terendam lalu letakkan diatas penangas dengan menggunakan ram kawat. Lakuakn pemanasan selama 5 menit. Jaga apusan jangan sampai kering dengan cara meneteskan pewarna.
B-8
3.
Cuci dengan air mengalir. Keringkan dengan kertas isap.
4.
Teteskan safranin pada seluruh apusan sehingga seluruh apusan tertutup. Biarkan selama 1-2 menit.
5.
Cuci dengan air mengalir lalu keringkan dengan kertas isap.
6.
Amati dengan mikroskop dengan menggunakan minyak imersi. Sel vegetatif akan berwarna merah muda dan spora berwarna hijau.
G.
Identifikasi bakteri
Berdasarkan S. T. Cowan maka test yang dilakukan untuk identifikasi bakteri adalah sebagai berikut: 1.
Pewarnaan gram
2.
Pewarnaan spora
3.
Motilitas
Inokulasi tabung dengan cara menusuk biakan pada media motilitas, inkubasi pada suhu 37oC. Hasil : Positif : media menjadi keruh Negatif : media keruh hanya pada bekas goresan
Media motilitas : -
80 g gelatin
-
10 g pepton
-
3 g beef extact
-
5 g nacl
-
4 g agar
-
1 l aquadest
Rendam gelatin dalam aquadest selama 30 menit, tambahkan bahan-bahan lain, panaskan hingga larut. Distribusi dalam tabung @ 5 ml. Sterilisasi pada 115oC selama 20 menit.
4.
Katalase
Inokulasi medium agar nutrisi dengan metoda gores. Inkubasi pada suhu kamar selama 2 hari. Teteskan H2O2 pada koloni yang tumbuh. Hasil : Positif : ada gelembung udara Negatif : tidak ada gelembung udara
B-9
5.
Fermentasi Glukosa
Masukan suspensi bakteri kedalam tabung yang berisi media glukosa. Inkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam. Hasil : Positif : kuning Negatif : ungu
6.
Oksidasi
Masukan suspensi bakteri kedalam tabung yang berisi media OF. Inkubasi pada suhu 37oC selama 14 hari. Hasil : Positif : kuning Negatif : ungu Media OF -
2 g pepton
-
5 g NaCl
-
0,3 g K2HPO4
-
15 ml larutan BTB 0,2 %
-
1 L aquades
larutkan padatan dengan pemanasan dalam air tambahkan indikator. sterilisasi 115oC selama 20 menit.
7.
Fermentasi
Masukan suspensi bakteri kedalam tabung yang berisi media OF. Inkubasi pada suhu 37oC selama 14 hari. hasil : positif : kuning negatif : ungu
8.
Pertumbuhan pada suhu 5oC
Bakteri ditanam pada agar nutrisi kemudian ditanam pada suhu 5oC
9.
Pertumbuhan pada suhu 37oC
Bakteri ditanam pada agar nutrisi kemudian ditanam pada suhu 37oC
10.
Pertumbuhan pada suhu 45oC
Bakteri ditanam pada agar nutrisi kemudian ditanam pada suhu 45oC
B-10
11.
Pertumbuhan pada media agar SS
Bakteri ditanam pada agar SS kemudian ditanam pada suhu 37oC
12.
Pertumbuhan pada media agar Mc Conkey
Bakteri ditanam pada agar Mc Conkey kemudian ditanam pada suhu 37oC
13.
Pemakaian sitrat
Inokulai dengan membuat goresan pada permukaan agar simon’s citrate miring. Inkubasi dan periksa hingga 7 hari untuk pertumbuhan dan perubahan warna Hasil : positif : biru dan adanya pertumbuhan pada goresan negatif : tetap hijau
14.
Fermentasi sukrosa
Inokulasi media sukrosa dengan suspensi bakteri, inkubasi selama 24 jam Hasil : positif : kuning negatif : ungu
Media sukrosa : -
10 g pepton
-
5 g sukrosa
-
5 ml larutan BCP 0,2%
-
1 L auquadest
Masukan pepton kedalam air dan panaskan hingga mendidih. Setelah agak dingin masukan sukrosa dan BCP, distribusi dalam tabung @ 2ml. sterilisasi.
15.
Fermentasi manitol
Inokulasi media manitol dengan suspensi bakteri, inkubasi selama 24 jam Hasil : positif : kuning negatif : ungu Media manitol : -
10 g pepton
-
5 g manitol
-
5 ml larutan BCP 0,2%
-
1 L auquadest
B-11
Masukan pepton kedalam air dan panaskan hingga mendidih. Setelah agak dingin masukan manitol dan BCP, distribusi dalam tabung @ 2ml. Sterilisasi.
16.
Fermentasi arabinose
Inokulasi media arabinose dengan suspensi bakteri, inkubasi selama 24 jam Hasil : positif : kuning negatif : ungu
media arabinose : -
10 g pepton
-
5 g arabinose
-
5 ml larutan BCP 0,2%
-
1 L auquadest
Masukan pepton kedalam air dan panaskan hingga mendidih. Setelah agak dingin masukan arabinose dan BCP, distribusi dalam tabung @ 2ml. Sterilisasi.
17.
Fermentasi inositol
Inokulasi media inositol dengan suspensi bakteri, inkubasi selama 24 jam Hasil : positif : kuning negatif : ungu media inositol : -
10 g pepton
-
5 g inositol
-
5 ml larutan BCP 0,2%
-
1 L auquadest
Masukan pepton kedalam air dan panaskan hingga mendidih. Setelah agak dingin masukan inositol dan BCP, distribusi dalam tabung @ 2ml. sterilisasi.
18.
Fermentasi sorbitol
Inokulasi media sorbitol dengan suspensi bakteri, inkubasi selama 24 jam Hasil : positif : kuning negatif : ungu
media sorbitol :
B-12
-
10 g pepton
-
5 g sorbitol
-
5 ml larutan BCP 0,2%
-
1 L auquadest
Masukan pepton kedalam air dan panaskan hingga mendidih. Setelah agak dingin masukan sorbitol dan BCP, distribusi dalam tabung @ 2ml. sterilisasi.
19.
Fermentasi Rhamnosa
Inokulasi media Rhamnosa dengan suspensi bakteri, inkubasi selama 24 jam Hasil : positif : kuning Negatif : ungu
media Rhamnosa : -
10 g pepton
-
5 g Rhamnosa
-
5 ml larutan BCP 0,2%
-
1 L auquadest
Masukan pepton kedalam air dan panaskan hingga mendidih. Setelah agak dingin masukan Rhamnosa dan BCP, distribusi dalam tabung @ 2ml. sterilisasi.
20.
Reduksi Nitrat
1. Inokulasi nitrat broth, inokulasi selama lebih dari 5 hari. Tambahkan 1 ml NIT 1 dan 1 ml NIT 2 hasil :
positif : merah negatif : tidak berwarna
2. Pada tabung yang tidak memberikan hasil warna merah dalam 5 menit ditambahkan serbuk Zn lalu biarkan sesaat. hasil :
positif : kuning/tidak berwarna negatif : merah
nitrate broth: -
1g KNO3
-
1 L nutrien broth
B-13
Larutan KNO3 dalam nutrien broth. Sterlilisasi dengan autoclave. reagen NIT 1: -
0,8 g sulfanilic acid
-
100 ml acetic acid 5 N
reagen NIT 2 -
0,6 g N-N-dimethyl-1-naphthylamine
-
100 mL acetic acid
21.
Produksi Indol
Inokulasi air pepton dan inkubasi selama 48 jam, tambahkan 1ml xylol lalu kocok. Tambahkan 0,5 ml pereaksi ehrlich melalui sisi tabung. Hasil : positif : merah / pink negatif : kuning/tidak berwarna Air pepton -
10 g pepton
-
5 g NaCl
-
1 L aquadest
Campurkan pepton dan nacl ke dalam aquadest. Panaskan hingga seluruh bahan larut. Sterilkan dengan autoclave.
22.
Aktivitas Urease
Inokulasi Suspensi Bakteri pada tabung yang berisi media urea. Inkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam. hasil : positif : merah / ungu negatif : kuning kaldu urea -
1g pepton
-
1 g dextose
-
1,2 g Na2HPO4
-
0,8 g K2HPO4
-
5 g NaCl
-
0,004 g phenol red
-
1 L aquadest
B-14
Campurkan Semua bahan, panaskan dengan sterilisasi, kemudian dinginkan sampai dengan ± 55oC. Tambahkan 5 ml urea steril 40 % secara aseptik. bagi kedalam tabung steril sebanyak 5 ml.
23.
Hidrolisis gelatin
Inokulasi gelatin agar dengan biakan inkubasi selama 3 hari. Basahi permukaan dengan 5-10 ml HgCl2. hasil : positif : permukaan bersih, HgCl2 keruh negatif : HgCl2 bening agar gelatin -
4 g gelatin
-
50 mL aquadest
-
1 L nutrient agar cair
Rendam gelatin dalam aquadest sampai lunak tambahkan nutrient agar cair, aduk kemudian sterilisasi.
24.
Hidrolisis casein
Inokulasi agar susu dengan biakan , inkubasi 24-48 jam. Amati adanya bagian yang bening. Pada bagian yang bening menunjukan adanya hidrolisis casein oleh bakteri.
25.
Hidrolisis Pati
Inokulasi agar pati dengan biakan , inkubasi 24-48 jam. Setelah terlihat adanya pertumbuhan tuangkan larutan lugol pada biakan biarkan selama 5 manit sampai terlihat adanya bagian yang bening dan biru. Bagian yang bening menunjukan adanya hidrolisis pati oleh bakteri.
26.
Hidrolisis Arginin
Inokulasi arginin broth dan setelah inkubasi selama 24 jam tambahkan 0,25 mL pereaksi nessler. hasil : positif : coklat negatif : kuning
B-15
arginin broth -
5 g pepton
-
5 g yeast extract
-
2 g K2HPO4
-
0,5 g glukosa
-
3 g arginin monohidroklorida
-
1 L aquadest
Larutkan dengan pemanasan hingga mendidih. Distribusikan dalam tabung @ 5 ml sterilisasi.
reagen nessler -
8 g KI
-
11,5 g Hg I2
-
50 mL NaOH 6 N
-
50 mL aquadest
Larutkan KI dan Hg I2 dalam 20 ml aquadest dan tambahkan aquadest hingga 50 mL. tambahkan NaOH. Kocok dan biarkan selama 24 jam. Reagen ini harus terlindung dari cahaya.
27.
Reaksi dekarboksilasi ornitin
Inokulasi tabung yang berisi media falkow’s-ornitin, inkubasi dan periksa setiap hari sampai hari ke-4 Hasil : positif : ungu negatif : kuning
28.
Reaksi dekarboksilasi lisin
Inokulasi tabung yang berisi media falkow’s-lisin, inkubasi dan periksa setiap hari sampai hari ke-4 Hasil : positif : ungu negatif : kuning
media Falkow’s-ornitin/lisin -
5 g pepton
-
3 g yeast extract
B-16
-
1 g glukosa
-
10 mL BCP 0,2 %
-
1 L aquadest
-
L-lisin hidroklorida
-
L-ornitin hidroklorida
Semua bahan dilarutkan dalam aquadest dan tambahkan larutan indikator. Sterilisasi dengan autoclave selama 20 menit. Bagi menjadi dua bagian yang sama dan tambahkan masing-masing l-lisin hidroklorida 0,5 % dan l-ornitin hidroklorida 0,5%. Distribusikan kedalam tabung lalu sterilisasi
29.
Produksi H2S
Inokulasi biakan pada media agarsecara tusuk. Inkubasi dan periksa setiap hari hingga 7 hari. Hasil : positif : warna hitam negatif : tidak berwarna media agar -
20 g pepton
-
1 g K2HPO4
-
0,5 g feeric acid
-
15 g agar
-
1 L aquadest
Semua bahan kecuali agar dimasukan ke dalam aquadest. Panaskan hingga hampir mendidih. Tambahkan agar secar perlahan sambil diaduk sehingga tidak menggumpal. Masukan kedalam tabung-tabung reaksi. Sterilkan dengan autoclave.
30.
reaksi MR/VP
Inokulasi media MR/VP dengan biakan. Inkubasi selama 24 jam. Untuk MR teteskan metil merah pada permukaan suspensi melalui pinggiran tabung. Untuk untuk VP tambahkan 1 mL larutan alfa naftol, 1 mL KOH 40 % dan kreatin 0,3% melalui dinding tabung campurkan dengan sempurna dan biarkan slama 5-30 menit. Hasil : positif : terbentuk cincin merah negatif : kuning
C-1
Lampiran C Gambar dan Foto Penelitian
C-2
Gambar A.1 Shaker
Gambar A.2 Evaporator
Gambar A.3 Corong pisah
Gambar A.4 Kromatografi gas
Gambar A.5 Penyemprotan Insektisida
C-3
Gambar A.6 Mikroskop
Gambar 8 Bahan Penelitian
Gambar 10 Isolasi
Gambar A.7 Colony Counter
Gambar 9 Inkubator
Gambar 11 Pewarnaan
C-4
Gambar 12 Agar SS dan Mc conkey
Gambar 13 Uji Biokimia
D-1
Lampiran D Hasil Kromatografi Gas
D-2
Gambar 1 Kromatograf
D-3
BALAI PENELITIAN LINGKUNGAN PERTANIAN
LABORATORIUM RESIDU BAHAN AGRO KIMIA Jl. Laladon Raya No. 240, Ciomas, Bogor 16610, Telp/Fax. (0251) 638987
LAPORAN HASIL PENGUJIAN RESIDU PESTISIDA KLORFIRIFOS DAN PROFENOPOS Konsentrasi residu (ppm) Klorfiripos Profenopos
No.
Kode Sampel
1
A
-
-
2
B
-
-
3
C
-
-
4
D
-
-
5
E
-
-
Keterangan: - = Tidak terdeteksi
Bogor, 6 Juni 2007 Kepala Lab.
Eman Sulaeman,SP. NIP : 080.136.802
D-4
BALAI PENELITIAN LINGKUNGAN PERTANIAN
LABORATORIUM RESIDU BAHAN AGRO KIMIA Jl. Laladon Raya No. 240, Ciomas, Bogor 16610, Telp/Fax. (0251) 638987
LAPORAN HASIL PENGUJIAN RESIDU PESTISIDA
No 1 2 3 4 5 6 7
Kode A B C D E F G Keterangan: 1. 2. 3.
Konsentrasi residu (ppm) 1 2 3 0,013 0,028 0,001 0,022 0,011 0,008 0,015 0,200 0,002 0,009 0,013 0,023 0,180 0,004 0,029 0,014 0,070 0,002
= Tidak terdeteksi klorpirifos profenofos diazinon
Bogor, 4 Mei 2007 Kepala Lab.
Eman Sulaeman,SP. NIP : 080.136.802
E-1
Lampiran E Foto Bakteri Hasil Isolasi
E-2
Gambar 1 Koloni berbentuk batang
Gambar 3 Koloni bentuk batang kurus
Gambar 5 Koloni bentuk batang
Gambar 2 Koloni berbentuk batang-kokus
Gambar 4 Koloni bentuk kokus
Gambar 6 Koloni bentuk batang
