Priis ƒ 3,OCTROOIRAAD Ter inzage gelegde O O / 0 7 O1 n 1 !•J O L Octrooiaanvrage Nr. f IntCl. A 61 k 27/04
NEDEI^AND
Indieningsdatum:
19 maart 1973, 24 uur.
Datum van terinzageiegging: 24 september 1573.
De hierna volgende tekst is een afdruk van de beschrijving met conclusie(s), zoals deze op bovengenoemde datum werd ingediend,
Aanvrager:
Mallinckrodt Chemical Works te St. Louis,, Missouri, Verenigde Staten van .Amerika
Gemachtigde:
I r . G . H . Boelsma c.s.» Laan Copes van C a t t e n b u r c h 80, ' s - G r a v e n h a g e
Ingeroepen recht van v o o r r a n g :
20 maart 1 9 7 2 , no. 236.159
Korte aanduiding:
De u i t v i n d i n g
Verenigde
W e r k w i j z e ter bereiding van een preparaat» d a t g e s c h i k t i s voor het merken met technetium-99m. h e e f t b e t r e k k i n g op het gebied van radio-
farmaceutisch d i a g n o s t i s c h onderzoek o p de b e r e i d i n g
S t a t e n var. A m e r i k a ,
en t o e p a s s i n g
er. meer in het b i j s o n d e r
v a n een i n j e c t e e r b a r e
suspensie
v a n v a s t d e e l t j e s v o r m i g g e d e n a t u r e e r d macroproteine, dat geschikt
i s v o o r m e r k e n m e t t e c h n e t i u m - 9 9 m en voor
b i j onderzoekmethoden van de De u i t v i n d i n g
toepassing
longen.
v e r s c h a f t e e n preparaat, dat geschikt is
v o o r m e r k e n m e t t e c h n e t i u m - 9 9 m e n toegepast kan worden bij ond e r z o e k s m e t h o d e n van de l o n g e n , bestaat
uit
7 30
welk preparaat in hoofdzaak
e e n injecteerbare suspensie in een bufferoplossing
304
2
van d e e l t j e s gedenatureerd macroproteine, t i n gebonden i s ,
welk macroproteine
ten minste circa 20.000
waaraan
twaewaardig
een molecuulgewicht
bezit.
Ook v e r s c h a f t d e u i t v i n d i n g e e n w e r k w i j z e t e r van een g e b u f f e r d e i n j e c t e e r b a r e gedenatureerd'magropi?o t e i n e ,
suspensie
bereiding
van d e e l t j e s
welke suspensie geschikt
m e r k e n xttef t e c h h e t i u m ~ i 5 9 m e n v o o r t o e p a s s i n g b i j methoden^vaiiMe.longen,
van
w a a r b i j men: d e e l t j e s
van
is
onderssoeks-
van een
gedenatu-
r e e r d macropro t e i n e . i n , k o n t a k t b r e n g t met een o p l o s s i n g , e e n i n wate.r* o p l o s b a a r z a u t v a n t w e e w a a r d i g
t i n bevat,
door t i n gebonden wordt aan h e t - m a c r o p r o t e i n e •
het
die waar-
macroproteine
met daaraan -gebonden tweewaardig t i n w a s t met e e n sing-
bufferoplos-
e n daarna h e t m a c r o p r o t e i n e met daaraan gebonden
waardig t i n
suspendeert
in een
twee-
bufferoplossing.
Macrogeaggregeerde macroproteinen hebben t o e p a s s i n g vonden a l s dragers voor r a d i o n i c l i d e n , diagnostische
serum,
die geschikt
stralings-onderzoekmethoden.
zijn dergelijke
eiwitten,
dat gemerkt i s
voor
bijvoorbeeld
In h e t
albumine
met e e n r a d i o n u c l i d e ,
zijn
bij
bijzonder
uit
menselijk
toegepast b i j
diagnose-van. ; s t o r i n g e n i n de longbloedsomloop. ' r a d i p a j c t i e f f ^ e m e r k te' e i w i t - m a c r o a g g r e g a t e n
ge-
de
De v e r d e l i n g
i n de longen,
van
die
bepaald'wofröé^door: onderzoek met b e h u l p van i s o t o pens t r a l i n g , is
een a a n w i j z i n g v o o r de a l dan n i e t
dé pathologische Om ' g e s c h i k t
aanwezigheid van
bepaal-
toestanden. te
z i j n voor
longonderzoek moeten
radioaktieve
macropr£>t&3ffedeeltjes gemerkt z i j n met een gammastraling '
e.
terend radionuclide , ten.
en een g r o o t t e
De g e n f e r k t e d e e l t j e s
een betrekkelijk korte te verwijderen
i n een bepaald gebied
moeten ook n i e t - t o x i s c h
de organismen afbreekbaar z i j n , tijd
dat wil
fysisch of
bezit-
en door
zeggen z i j moeten c h e m i s c h u i t de
levenin
longen
zijn.
Macrogeaggregeerd merkt
emit-
%
albumine
i s 'HieHfc j ö ' d i u m - 1 3 1 ,
voor longonderzoek
is
uit menselijk
op grote
door p e r f u s i e .
schappen van d i t onderzoeksmiddel
schaal
serum,
dat
in gebruik
gekomen
Hoewel de b i o l o g i s c h e uitstekend
zijn,
wordt
.. • .. / 'r b e l a n g r i j k nadeel van de t o e p a s s i n g daarvan veroorzaakt
geeigeneen door
het
schema,
volgens
dit
uiteenvallen
hetwelk het
zendt
jodium-131 u i t e e n v a l t .
jodium-131 een 3 - d e e l t j e s
z i j n gammastralen m o e i l i j k op doelmatige w i j z e z i j n en h e t
een f y s i s c h e
g e v o l g van deze injectie
nen,
zoals
jodium-131 gemerkt
de longen, de
blootgesteld,
.meerd kunnen worden,
van
afgeeft,
6 uren b e z i t .
gebied
MacDonald i n
werden t o t
biz.
zoek,
gelijke
in te
door G.V.
toepassing
niet
bij
long-
stand
Taplin
van
en
vol.
1, No. 2
als
trajekt.
Om h e t
om h e t
eiwit
a f g e k o e l d en h e t
te
punt
d e pH a l s
de temperatuur.
in
om h e t
in
een
der-
van albumine
bij-
waarna de
een
Deeltjes
geschikte
In p l a a t s
albumine
oplos-
d o o r d e pH
van albumine d i s p e r g e r e n
met w a t e r mengbare o l i e
serum-
longonder-
( c i r c a 4,9). door
Om
deeltjes-
met
albumine n e e r g e s l a g e n
isoelektrische
verbonden
neergeslagen
albumine
denatureren,
onder-
tecr.etium.-99m
albumine.
vorm t e b e r e i d e n w o r d t e e n o p l o s s i n g
op het
van
d a t g e b r u i k t kan w o r d e n v o o r
k a n men e e n w a t e r i g e o p l o s s i n g me,
met
door de m o e i l i j k h e d e n
van met t e c h n e t i u m gemerkt
van zowel
aantal
in Nuclear Medicine",
van de g e w e n s t e g r o o t t e worden v e r k r e g e n regeling
gunstige
h e t gemak e n d e d o e l m a t i g h e i d v a n d e
in een b i j z o n d e r
stellen
gecolli-
halfwaardetijd
van de h u i d i g e
zowel g e d e n a t u r e e r d worden
voorbeeld verhit
ge-
132-152.
te bereiden,
s i n g wordt
orga-
technetium-99m,
en t o e g e p a s t
d e vorm v a n m a c r o a g g r e g a t e n o f m i c r o b o l l e t j e s grootten
andere
die gemakkelijk
bereid
gepubliceerd
dusver echter beperkt
moet d i t
is
h e e f t men e e n g r o o t
voor de l o n g e n onder
aan de b e r e i d i n g albumine
is
"Seminars
De v e i l i g h e i d , zoeksmethoden
voor
longonderzoek
een f y s i s c h e
Een s a m e n v a t t e n d o v e r z i c h t
1971,
toegediend,
In hoofdzaak op grond van
technatium-99m gemerkte d e e l t j e s
(april)
een
alleen
betreft
jodium-131,
terwijl het
p r o f i e l e n van de d o s i m e t r i e
N.S.
niet
d a t met v o o r d e e l b i j
dat u i t s l u i t e n d gammastralen
kennis op d i t
aan w i e
Als
schildklier.
b r u i k t kan worden i n p l a a t s
onderzoek.
collimeren
albumine wordt
maar o o k v o o r w a t -
Een r a d i o n u c l i d e ,
van s l e c h t s
te
terwijl
h a l f w a a r d e t i j d van 8 dagen b e z i t .
aan e e n h o g e b e s t r a l i n g s d o s i s wat b e t r e f t
uit,
e i g e n s c h a p p e n w o r d t eer. p a t i e n t ,
van met
Tijdens
daarvan in w a r -
i n de vorm
van
microbolletjes
near t e slaan.
Onder d e v e r s c h i l l e n d e
methoden v o o r h e t merken van e i w i t d e e l t j e s werd b i j de meest g e b r u i k e l i j k e met t e c h n e t i u m gemerkt, om hefc v a s t e
met
technetium-99m
e e r s t een o p l o s s i n g van
waarna de p r e c i p i t a t i e
albumine i n d e e l t j e s
werd
dat z i j
Bovendien kunnen wegens de k o r t e
ter bereiding
netium-99m gemerkte macroaggregaten wordt een
gedenatureerd met h e t
albumine,
technetium.
van met t e c h - *
technetium-
Het merken g e s c h i e d t
gemerkt
echter
niet
h a n d e l i n g e n van de e i w i t d e e l t j e s
n o d i g om h e t
bijzonder
de n e i g i n g
v e n en h e t wordt nodig de o n t s t a n e g e s c h i k t e methode,
Voorts
bolletjes bruikt
methode
aan e l k a a r
te
agglomeraten volgens
een p a t i ë n t
t e c h n e t i u m en de
l a b i e l e n w a n n e e r men d e s u s p e n s i e
staan voor z e l f s
slechts
moeten zowel de z u i v e r i n g
l i n g vóór de i n j e c t i e
herhaald
circa
h e e f t met t e c h n e t i u m gemerkt albumine ondanks
7303342
be-
behande-
zijn
nadelen gewenste als
longen.
De u i t v i n d i n g v e r s c h a f t e e n v e r b e t e r d p r e p a r a a t , makkelijk en doelmatig
ont-
onge-
geen algemene t o e p a s s i n g gevonden
onderzoeksmiddel voor de
dis-
worden.
Als g e v o l g van de v e r s c h i l l e n d e bovengenoemde
stralingseigenschappen
te
micro-
e e n uur na de
a l s de u l t r a s o n o r e
kle-
een
d a a r e e n i n j e c t i e mee
de b i n d i n g t u s s e n h e t
enigszins
laat
reiding,
is
deze
bijvoorbeeld ultrasonore behandeling,
pergeren direkt voordat vangt.
wasbe-
niet-gebonden
Ook b e z i t t e n d e v o l g e n s
gemerkte m i c r o b o l l e t j e s
van
worden
d o e l m a t i g v o l g e n s d e z e methode en er z i j n v e r s c h e i d e n e
gevormde,
dit
aanwezigheid van m i c r o b o l l e t j e s
waardoor de b o l l e t j e s
technetium te verwijderen.
ge-
wordt.
B i j een a l t e r n a t i e v e methode
gevormd b i j
met h e t
v o l t o o i d worden a l v o r e n s
menselijke patiënten gebruikt
zwavelcolloide
suspensie
halfwaarde-
t i j d van technetiura-99m geen s t e r i l i t e i t s p r o e v e n
bij
di-
terwijl
technetium u i t de
denatureerde en neergeslagen e i w i t
te
u i t v o e r e n om
de j u i s t e g r o o t t e b e z i t t e n ,
z u i v e r i n g n o d i g i s om n i e t - o m g e z e t te verwijderen.
uitgevoerd
m o e t men e c h t e r
r e k t e e n m i c r o s c o p i s c h onderzoek van de d e e l t j e s te stellen,
albumine
van de g e w e n s t e g r o o t t e
v o r m e n . W a n n e e r men d e z e m e t h o d e t o e p a s t ,
vest
beleende
gemerkt kan worden met
dat
ge-
technetium-99m
- 5 onder vorming van een i n j e c t e e r b a r e kan worden b i j schaft
de u i t v i n d i n g
aanzienlijke 5
onderzoeksmethoden
uitgang,
suspensie,
die
van de l o n g e n ;
een d e r g e l i j k
preparaat,
toegepast
voorts
dat
t i j d s v e r l o p e n kan worden o p g e s l a g e n
gedurende zonder
tjesgrootte,
zonder ondersoek
ultrasonore behandeling
s c h a f t de u i t v i n d i n g w e r k w i j z e n
of
zuivering.
ter bereiding
nog
past
i s om g e m e r k t
t e worden
paraat bestaat 15
Verder
van d i t
bij
onderzoeksmethoden
in hoofdzaak u i t
p r o t e i n e met daaraan gebonden
bezit.
20
vat,
die
wordt.
tin,
het
circa
20.000
ter
tweewaardig
Gevonden werd,
i
tin
zout van tweewaardig
aan h e t m a c r o p r o t e i n e
van
met een
dat een i n j e c t e e r b a r e
tin
suspensie
t i n b e r e i d kan worden en gedurende
Van z e l f s
nog meer b e l a n g
is,
d a t h e t m a c r o p r o t e i n e van de s u s p e n s i e
aanzienlijke kan worden
t o e g e p a s t kan worden b i j
op v e i l i g e
an d o e l m a t i g e
onderzoeksmethoden
van de
der bepaling
van de d e e l t j e s g r o o t t e ,
of
voor h e t v e r w i j d e r e n van n i e t ~ g e b o n d e n
zuivering
Zodoende worden de b e t r e k k e l i j k
730 3 3 4 2
ultrasonore
omslachtige
en
op-
is,
en g e m a k k e l i j k
merkt kan worden met technetiurn-99m en d a t de v e r k r e g e n p e n s i e van h e t gemerkte e i w i t
ge-
gebonden
dat ook gevonden snel
tin
van e e n
tweewaardig
zonder o n t l e d i n g
be-
gesuspendeerd.
en n e e r g e s l a g e n m a c r o p r o t e i n e met d a a r a a n
vóór h e t gebruik
op-
gebonden
denatureerd
geslagen.
35
berei-
B i j d e z e w e r k w i j z e worden d e e l t j e s in kontakt gebracht
in
macro™
Het m a c r o p r o t e i n e met d a a r a a n g e b o n d e n t w e e w a a r d i g
tijdsverlopen
30
pre-
suspensie
een werkwijze
wordt daarna gewassen en i n e e n b u f f e r o p l o s s i n g 25
Het
waarbij
van ten m i n s t e
een in water oplosbaar
waardoor
dat toege-
van een g e d e n a t u r e e r d
een molecuulgewicht
preparaat.
van de l o n g e n .
tweewaardig
een gedenatureerd macroproteine lossing,
worden
een preparaat,
een i n j e c t e e r b a r e
Verder v e r s c h a f t de u i t v i n d i n g
ding van d i t
ver-
preparaat»
t e worden met t e c h n e t i u m - 9 9 m en
een b u f f e r o p l o s s i n g van d e e l t j e s
macroproteine
deel-
vermeld.
In hoofdzaak v e r s c h a f t de u i t v i n d i n g geschikt
toe-
v a n da
V e r d e r e b i j z o n d e r h e d e n en v o o r d e l e n van de u i t v i n d i n g hieronder
achter-
met t e c h n e t i u m ~ 9 9 m g e m e r k t k a n worden e n d a a r n a
g e p a s t kan worden voor i n j e c t i e
10
ver-
ge-
suswijze
longen
zon-
behandeling technetium.
tijdrovende
methoden,
dia tot
dusver nodig waren,
vermeden en worden
de k o s t e n van de b e r e i d i n g van een g e s c h i k t e passing b i j
longonderzoeksmethoden
van verbonden r i s i c o ' s
tot
vinding
is bij
voorkeur
dat bijzonder
onderzoek.
U i t e r a a r d kan e c h t e r
volgens
de u i t v i n d i n g
beter ontvankelijk i s o t o o p van
i s voor
seruraalbumine,
gedenatureerd
van ten minste
circa
t e maken v o o r m e r k e n m e t e e n
eiwitbestanddeel
worden gekenmerkt
als
Macroaggregaten'worden beschouwd a l s
n e e r de e i w i t d e e l t j e s zoeksmiddelen
deeltjes
bij
bedraagt
voorkeur
circa
preparaat
van
onregelmatige
5 - 8 0
micron.
toepassing
men e e n s u s p e n s i e
e i w i t gebonden
van volgens
twaewaardige
technetium-99m bevat,
en h e c h t
staat tin.
aan h e t
serumproteine
een
van de gewenste g r o o t t e .
van gedenatureerd
met s u c c e s
bijvoorbeeld
eiwit.
toepassing
dunde w a t e r i g e o p l o s s i n g
7 3 0 3 0 4 2
Wanneer
een
de
oplos-
Hoewel e l k
tech-
uitvinding
ander g e s c h i k t
Er z i j n
tin
oplossing,
macroproteivorming
verschillende
van macroaggregaten of
t o e g e p a s t kan worden,
verkregen onder
ver-
gebonden.
en daarna n e e r g e s l a g e n onder
w i j z e n bekend t e r v e r k r i j g i n g
in
w o r d t meer dan 90 % v a n h e t
serumalbumine o f
ne e e r s t g e d e n a t u r e e r d
ei-
mat t w e e w a a r d i g
u i t v o e r e n van de werkwijze v o l g e n s
wordt menselijk
letjes
s
van de gesuspendeerde
de u i t v i n d i n g
sing van natriumpertechnetaat,
deeltjes
grootte
serumalbumina v e r v o l g e n s b e h a n d e l t met een
zevenwaardig
Wan-
onder-
30 m i c r o n .
wit-macroaggregaten v o o r merken met t e c h n a t i u m - 9 9 m aan h e t
als
de gemiddelde
15 -
De v e r b e t e r d e o n t v a n k e l i j k h e i d
Bij het
20.000
"macro a g g r e g a t e n " .
bestemd z i j n voor
voor de longen,
van de d e e l t j e s
netium snel
macro-
radioaktief
van h e t
vorm m e t e e n g e m i d d e l d e d i a m e t e r v a n c i r c a
die
long-
t w e e w a a r d i g t i n g e b o n d e n w o r d e n om h e t
van h e t
van de u i t v i n d i n g
behandeld
uit-
technetium.
De d e e l t j e s
band met h e t
daar-
van de
toepassing b i j
aan i e d e r
met een molecuulgewicht
toe-
teruggebracht.
van h e t preparaat
geschikt
toe
toepassing
gedenatureerd menselijk
een eiwit,
proteine
e n da met d e
e e n minimum
Het m a c r o p r o t e i n e b e s t a n d d e e l
suspensie
zowel
van
werk-
microbol-
van deze
werkwijzen
werden uitmuntende
resultaten
van een werkwijze,
van m e n s e l i j k
waarbij
serumalbumina
een
ver-
eerst
op
- 7
-
ean temperatuur van c i r c a 70° v e r w a r m d w o r d t om h e t gekoeld
tot
door langzame
-
10
instellen
dat wil
isoelektrische
anorganische
gemiddelde 15
geval
azijnzuur
in een t r a j e k t
deeltjesgrootte
w a n n e e r men d e s u s p e n s i e
eiwit,
waarvan
men e e n t e m p e r a t u u r
toe het
Men k a n e c h t e r o o k De
van 5 - 8 0
ligt
in een
m i c r o n met
30 m i c r o n .
dit
re-
een
Het é é n
geheel
verbeterd,
na h e t n e e r s l a a n nog k o r t e p a s t men b i j
an-
deeltjes-
aggregaten wordt verder
B i j voorkeur
tot
gelijk
p a s t men z o u t z u u r
toepassen.
van 15 -
vormen van de n e e r g e s l a g e n
nieuw verwarmt.
0(ln,
zeggen ongeveer
eiwit.
af-
bij
v a n d e pH o p d e g e w e n s t e w a a r d e v o o r
zuren of
85°C,
neergeslagen
circa
g r o o t t e van de zo n e e r g e s l a g e n macroaggregaten presentatief
22°C,
punt van h e t
Bij voorkeur
n e e r s l a a n van h e t g e d e n a t u r e e r d e dere
-
van een verdund zuur,
d e pH c i r c a 4 , 9 b e d r a a g t . voor h e t
circa
en daarna wordt
i n de orde van 18°
5,2 bedraagt,
a a n d e pH v a n h e t
voorkeur
Het albumine w o r d t d a a r n a
toevoeging
d e pH c i r c a 4 , 8 is
20°C„
bij
te denatureren
een temperatuur
voorkeur omstreeks 5
eiwit
100°C,
tijd
opnieuw
t o e van o n g e v e e r d e z e l f d e o r d e
op-
verwar-
als bij
het
denatureren. 20
Na h e t o p n i e u w v e r w a r m e n w o r d e n d e van albumine. u i t
afgescheiden,
gesuspendeerd
in een verse b u f f e r o p l o s s i n g
d e pH a l s
van h e t
wil 25
de s u s p e n s i e
macroaggregaatdeeltjes
die
z e g g e n pH 4 , 9 ) .
isoelektrische
gewassen
en
opnieuw
met o n g e v e e r
dezelf-
punt van h e t
eiwit
Een g e s c h i k t e b u f f e r o p l o s s i n g
t a a t b u f f e r m e t e e n pH v a n 4 , 9
is
(dat
een
(0t052n natriumacetaat
en
ace» 0,02n
zoutzuur). Het b i n d e n van de e i w i t a g g r e g a t e n met t w e e w a a r d i g wordt u i t g e v o e r d waterige 30
oplossing,
die
verdient
tin
stahnozouten, kunnen worden. waardige
aan h e t
eiwit
stanno-chloride
en z i j n g r o t e r e
bijvoorbeeld
tinverbinding
7303342
te
andere
van,
Voor d i t
zijn
een
eveneens
aangezien
de
dat doel
oplosbaarheid
in water
nodig een o p l o s s i n g
verbruiken,
aan
Het k o n t a k t van
gebonden wordt.
hoewel
voegen
e r de o o r z a a k
stannosulfaat,
echter te
is
de v o o r k e u r wegens
stabiliteit,
Het i s
toe
stanno-ionen bevat.
m a c r o a g g r e g a t e n met s t a n n o - i o n e n tweewaardig
35
door de e i w i t s u s p e n s i e
tin
oplosbare gebruikt
van een
twee-
vierwaardige
t i n i o n e n n i e t werkzaam
zijn.
E r z i j n v o l d o e n d e s t a n n o - i o n e n b e s c h i k b a a r om a a n e i w i t gebonden t e worden, en de o p l o s s i n g van h e t
a l s h e t m e n g s e l v a n da
het
eiwitsuspensie
s t a n n o z o u t c i r c a 3 mg s t a n n o - i o n e n
per
1 0 0 mg m a c r o a g g r e g a t e n b e v a t . M e t d e r g e l i j k e h o e v e e l h e d e n
heeft
de b i n d i n g van tweewaardig t i n
aan h e t e i w i t m o l e c u u l
plaats
b i j kamertemperatuur en b l i j k t
i n c i r c a 15 minuten o f
ke vrijwel voltooid te
zijn.
t a t e n d i e n t men h e t m e n g s e l , echter
langduriger
te
deert
dat stanno-ionen
laten staan,
en e i w i t
resul-
bevat,
b i j voorkeur c i r c a 24
uren.
s c h e i d t men d e a g g r e g a t e n
w a s t z e met v e r s e b u f f e r o p l o s s i n g
ze er weer i n .
dergelij-
Ter v e r k r i j g i n g v a n o p t i m a l e
N a d a t d e b e h a n d e l i n g s t i j d om i s , de v l o e i s t o f f a s e ,
snel
en
suspen-
Na h e t o p n i e u w s u s p e n d e r e n k u n n e n d e
c r o a g g r e g a t e n gedurende l a n g e t i j d b i j 4°C worden
van
ma-
opgaslagen.
Volgens aan andere u i t v o e r i n g s v o r m van de u i t v i n d i n g
wor-
den de stappen van h e t n e e r s l a a n en de b i n d i n g van t i n van werkwijze tot natief
Volgens d i t
alter-
l o s t men h a t s t a n n o z o u t o p i n h e t v e r d u n d e z u u r ,
gebruikt slaan,
één enkele stap gekombineerd.
is
om h e t d o o r w a r m t e g e d e n a t u r e e r d e
dat
e i w i t neer
te
w a a r d o o r êên s t a p v a n d a b o v e n b e s c h r e v e n w e r k w i j z e
uitgeschakeld. wordt h e t z e l f d e
O n v e r s c h i l l i g w e l k e u i t v o e r i n g s v o r m men eindresultaat
verkregen,
dat wil
wordt
volgt,
z e g g e n de
r e i d i n g van een s u s p e n s i e van n e e r g e s l a g e n g e d e n a t u r e e r d e witdeeltjes
met daaraan gebonden tweewaardig
integriteit clide
eigenschappen
60 dagen i n a a n z i e n l i j k e mate o v e r s c h r e d e n wordt,
dükt a l s
afval verwijderd dient
te
radionu-
neemt
de
af,
dat het
van
macroaggrega-
t e n k a n t o t meer dan 60 d a g e n v e r l e n g d worden d o o r de t e b e v r i e z e n e n hem i n b e v r o r e n t o e s t a n d o p t e
pro-
suspen-
slaan.
i s gebleken,
d a t de l e v e n s d u u r van da b e v r o r e n s u s p e n s i e
4 maanden o f
langer bedraagt.
Opslag in bevroren
«
F
7303842
van
worden.
De n u t t i g e l e v e n s d u u r v a n d e s u s p e n s i e s
sie
een
de
t e g a a n . Wanneer e e n o p s l a g t i j d
d o e l m a t i g h e i d voor werken g e w o o n l i j k zodanig
ei-
4°C
als
van d e o n t v a n k e l i j k h e i d v o o r merken met
achteruit beginnen
be-
tin.
De v e r k r e g e n s u s p e n s i e s b e z i t t e n b i j o p s l a a n b i j l e v e n s d u u r v a n c i r c a 60 d a g e n v o o r d a t
de
toestand
Het circa was
- 9 -
tot dusver echter
in het
algemeen n i e t
de m a c r o a g g r e g a a t d e a l t j e s volgende ontdooien vormen, 5
die
gen gebruikt
te
da n e i g i n g h e b b e n t i j d e n s
aan e l k a a r
te groot
aantrekkelijk,
te klonteren
8 - 1 6
z i j n om b i j o n d e r z o e k s m e t h o d e n
10
propyleenglycol,
Het b i j
voorkeur
glycol.
De a g g l o m e r a t i e
toegepaste
h e t ook a a n b e v e l i n g Voor d i t
doel
is
gelatine
anti-agglomeratiemiddel op te
suspensie op t e
o£
nemen,
saccharose. is
propyleen»
wordt
direkt
i n da s u s p e n s i e
tegen te gaan
conserveermiddel
aiwitoplossingen aanvaardbaar
conserveermiddelen
Het met t i n b e h a n d e l d e
vóór
verdient
toe
te
voegen.
of
aan da g e r e d e
en d o e l m a t i g
suspen-
gebleken.
een technetiumgenerator
bac-
toepassen,
e i w i t van de s u s p e n s i e kan
schikt 25
afkomstige eluaat
aan de s u s p e n s i e
z i j n voor de b e r e i d i n g
verkrijgbaar.
Een d e r g e l i j k e
toe
eluaat
binding
van h e t
geschikt
t e c h n e t i u m aan h e t
h e i d van 95 % o f m e e r . 30
35
v e r l o p e n om d e s p e c i f i e k e
zijn
3.535.085.
eiwit
B i j voorkeur
Generators, i n de
handel
men
spontaan en s n e l op met e e n
ge-
beschre-
Wanneer
l a a t men c i r c a
aktiviteit
die
is bijvoorbeeld
treedt
van
natriumpertechne-
eluaat,
generator
en de s u s p e n s i e mengt,
van h e t
van
te voegen.
ven i n h e t Amerikaanse o c t r o o i s c h r i f t het
In
andere n i e t - t o x i s c h e
en g e m a k k e l i j k met technetium-99m gemerkt worden door h e t
taat direkt
doel-
nemen.
v a n b e n z y l a l k o h o l k a n men o o k
teriostatische 20
glycerol,
een g e s c h i k t
van de u i t v i n d i n g
plaats
lon-
de t o e v o e g i n g van c i r c a 1 gaw.% b e n z y l a l k o h o l
aan da a a n v a n k e l i j k e sies
i n de
anti-agglomeratiemxddei
i n de s u s p e n s i e
Om b a c t e r i ë n g r o e i
15
te
v a n da
van de m a c r o p r o t e i n e d e e l t j e s
m a t i g voorkomen door h e t het bevriezen
daarop-
worden.
gew.% v a n e e n a n t i - a g g l o m a r a t i e m i d d e l
bijvoorbeeld
het
en agglomeraten
Deze m o e i l i j k h e i d wordt overwonnen door circa
aangezien
een
doelmatig30 m i n u t e n
van de gemerkte
suspensie
o p e e n optimum t e b r e n g e n .
Het mechanisme van h e t merken
is
verklaard,
oxidatie
tin
maar h i e r b i j
tot
de v i e r w a a r d i g e
tie
van h e t
Aan h e t
is
technetium
vierwaardig
k e l e m i n u t e n na de t o e v o e g i n g
7303342
tweewaardige
t o e s t a n d b e t r o k k e n mat g e l i j k t i j d i g e
zevenwaardige
eiwit b l i j f t
van h e t
tot
een
lagere
t i n gebonden»
van h e t
niet
reduk-
valentie.
Reeds binnen
technetiumeluaat
kan
ende
#
s u s p e n s i e van h e t gemerkte albumine d i r e k t door injectie verdere
aan d i e r e n o f mensen worden t o e g e d i e n d zonder
longonderzoek wordt op een
mum g e b r a c h t d o o r v o l d o e n d e e l u a a t suspensie
tot
enige
behandeling.
Da d o e l m a t i g h e i d v a n h e t
te
intraveneuze
opti-
t o e t e p a s s e n om e e n
t e v e r k r i j g e n met een s p e c i f i e k e
gekerk-
aktiviteit,.die
c i r c a 2 0 m e i TcO^ p e r mg v a n h e t m a c r o g e a g g r e g e e r d e
mine b e d r a a g t .
V i j f minuten na de i n j e c t i e b e v a t t e n de
van een p a t i ë n t
90 % o f meer v a n h e t g e ï n j e c t e e r d e
9 9 m . De a l d a n n i e t
longen
technetium-
aanwezigheid van een p a t h o l o g i s c h e
toestand
wordt daarna b e p a a l d door de l o n g e n van de p a t i ë n t op af te
albu-
t a s t e n en h e t emissiepatroon
straling
t e v e r g e l i j k e n met e e n
stan-
daardpatroon . Het gemerkte g e d e n a t u r e e r d e v a n de p a t i ë n t
albumine wordt u i t de
a f g e s c h e i d e n mat e e n s n e l h e i d overeenkomend
een b i o l o g i s c h e h a l f w a a r d e t i j d van c i r c a
5 - 1 0
behandelde
macroaggregaten van albumine gedurende a a n z i e n l i j k e
kunnen z i j
met
uren.
Z o d o e n d e k a n men d e s u s p e n s i e s v a n d e m e t t i n
lopen opslaan,
longen
tijdsver-
w a a r b i j z i j nog hun s t e r k t e b e h o u d e n .
Daarna
d e s g e w e n s t mat t e c h n e t i u m g e m e r k t worden d o o r
een-
voudig een natriumpertechnetaat bevattende oplossing
toe
voegen,
onderzoeks-
waarna z i j
d i r e k t g e b r u i k t kunnen worden a l s
middel voor de longen zonder verdere b e h a n d e l i n g . v i n d i n g worden d e r h a l v e de dure, wijzen,
die
te
Door de
uit-
t i j d r o v e n d e en m o e i l i j k e
t o t dusver nodig waren,
werk-
overbodig.
,
De o n d e r s t a a n d e v o o r b e e l d e n ' i l i c h t e n d e u i t v i n d i n g
toe.
VOORBEELD I E e n o p l o s s i n g v a n 5 0 0 mg v e r s m e n s e l i j k 4 5 ml v a n e e n o p l o s s i n g
serumalbumina
van 1 gew.% b e n z y l a l k o h o l
in water
1 5 m i n u t e n o n d e r l a n g z a a m r o e r e n o p 8 5 ° C v e r w a r m d om h e t te
denatureren.
D a a r n a b r a c h t men d e o p l o s s i n g o v e r i n
koudwaterbad en toen de temperatuur had b e r e i k t , snel roeren
een waarde van 18°
v o e g d e men i n v e r l o o p tfan c i r c a 3 m i n u t e n l a n g z a a m 2 ml 0 , 0 8 5 n z o u t z u u r
verkregen s u s p e n s i e van n e e r g e s l a g e n Daarna werd de s u s p e n s i e weer
7303342
toe.
in werd
eiwit
een -
22°C
onder
De pH v a n
de
a l b u m i n e b e d r o e g 4 , 8 - 5^2
5 m i n u t e n o p 83 °C o n d e r
langzaam
- 11 -
r o e r e n verwarmd,
waardoor de n e e r g e s l a g e n
meer compact en minder o n d e r h e v i g analyse
van de d e e l t j e s g r o o t t e
ten bleken deze een g r o o t t e 5
m i d d e n f r a k t i e van 15 -
aan f r a g m e n t a t i e w e r d e n .
v a n da n e e r g e s l a g e n
t e hebben van 5 - 8 0
30 m i c r o n .
van 4 , 8
B i j de v o l g e n s V o o r b e e l d 0 , 6 ml l n
zoutzuur,
dat
bumine.
liet
suspensie
3 mg t w e e w a a r d i g
het mengsel
toepassing
p e r ml tin
men
bevatte.
p e r 1 0 0 mg
natriumacetaatoplossing
24 uren i n c u b e r e n .
van c e n t r i f u g e r e n ,
i n 30 ml v e r s e
al-
toe
Na a f l o o p v a n d e z e eiwit
Men en
incuba-
driemaal
w a a r b i j men h e t m a t e r i a a l
onder weer
acetaatbuffer
suspendeerde na i e d e r e
wasbehande-
ling.
De b e h a n d e l d e d e e l t j e s
werden t e n s l o t t e weer
gesuspen-
deerd
in
5 0 ml v a n e e n a c e t a a t b u f f e r
benzylalkohol
bij
die
s u s p e n s i e s kunnen a l s h i e r b o v e n
4°C o p g e s l a g e n o f b e v r o r e n worden.
gen moeten worden,
Als
worden de s u s p e n s i e s
v e r d u n d met a c e t a a t b u f f e r Als
m e t pH 4 , 8 ,
1
gew.%
bevatte.
De v e r k r e g e n
25
voegde
De pH v a n h e t v e r k r e g e n m e n g s e l b e d r o e g 4 „ 0 - 4 , 1 .
t i e t i j d w a s t e men d e m a c r o a g g r e g a t e n v a n
20
m e t e e n pH
II
I bereide
v o e g d e 2 ml van e e n 0 , 4 m o l a i r e 15
gesus-
zoutzuur).
5 0 mg s t a n n o c h l o r i d e
D i t komt o v e r e e n met c i r c a
een
werden
verzameld en weer
en 0 , 0 2 n
VOORBEELD 10
m i c r o n met
i n 30 ml v a n e e n a c e t a a t - b u f f e r o p l o s s i n g (0,052n natriumacetaat
Bij
macroaggrega-
Na o p n i e u w v e r w a r m e n
de m a c r o a g g r e g a t e n d o o r c e n t r i f u g e r e n pendeerd
albumineaggregaten
(pH 4 , 8 ) ,
z i j bevroren moeten worden,
die
en 8 -
zij bij
opgesla-
4°C
i n de v e r h o u d i n g
1:5
1 % benzylalkohol
worden de s u s p e n s i e s
houding 1 : 5 verdund met a c e t a a t b u f f e r beeld 1 % benzylalkohol
beschreven
(pH 4 , 8 ) ,
die
16 % p r o p y l e e n g l y c o I
bevat.
i n de
ver-
bijvoorbevat»
C O N C L U S I E S ; 30
1. is
Werkwijze
van een p r e p a r a a t ,
dat
geschikt
om g e m e r k t t e w o r d e n m e t t e c h n e t i u m - 9 9 m e n t o e g e p a s t
den b i j een voor
35
ter bereiding
longonderzoeksmethoden,
met h e t kenmerk,
analoge materialen op z i c h z e l f
paraat bereidt,
dat een
injecteerbare
oplossing bevat
van d e e l t j e s
van g e d e n a t u r e e r d
met daaraan gebonden tweewaardig
7303842
tin,
wor-
d a t men o p
bekende w i j z e
suspensie
te
in een
een
pre-
buffer-
macroproteine
waarbij het
macroproteine
- 12 -
een molecuulgewicht van ten minste c i r c a 20.000 2.
Werkwijze v o l g e n s
bezit.
c o n c l u s i e 1, met h e t kenmerk,
dat
de
pH v a n d e b u f f e r o p l o s s i n g o n g e v e e r d e w a a r d e h e e f t v a n d e pH van h e t i s o - e l e k t r i s c h e
punt van h e t gedenatureerde
macro-
pro t e i n e . 3.
Werkwijze v o l g e n s
conclusie
het macroproteine d e e l t j e s albumine 4.
1 of 2,
met h e t kenmerk,
dat
van macrogeaggregeerd menselijk serum-
bevat.
Werkwijze v o l g e n s c o n c l u s i e s
de g r o o t t e van de d e e l t j e s
1 - 3 ,
met h e t kenmerk,
i n hoofdzaak c i r c a
5 - 8 0
dat
micron
be-
draagt. 5.
Werkwijze v o l g e n s c o n c l u s i e
4,
gemiddelde g r o e t t e van de d e e l t j e s
met h e t kenmerk,
c i r c a 15 -
dat
30 m i c r o n
de
be-
draagt. 6.
Werkwijze v o l g e n s c o n c l u s i e s
1 - 5 ,
met h e t kenmerk,
de m a c r o p r o t e i n e d e e l t j e s
d e vorm h e b b e n v a n
7.
conclusies
Werkwijze v o l g e n s
de b u f f e r o p l o s s i n g middel b'evat, rlycerol 8.
of
circa 8 - 1 6
1 - 6 ,
met h e t kenmerk,
1 - 7 ,
met h e t kenmerk,
van een g e d e n a t u r e e r d macroproteine
h e t m a c r o p r o t e i n e met d a a r a a n
t i n w a s t met een b u f f e r o p l o s s i n g
i n een
bufferoplossing.
9.
Werkwijze v o l g e n s c o n c l u s i e
als macroproteine menselijk
8,
Werkwijze v o l g e n s c o n c l u s i e
8 of
9,
een o p l o s s i n g gebruikt, mg m a c r o p r o t e i n e
bavat.
730 38 4 2
d a t men
met h e t kenmerk, een
gebruikt.
Werkwijze volgens c o n c l u s i e
10,
ma-
kiest.
ionen van tweewaardig t i n b e v a t t e n d e o p l o s s i n g
l o s s i n g van stannochloride
gèbonden
suspendeert'
met h e t kenmerk,
serumalbumine
van
macro-
en daarna h e t tin
dat
kontakt
t i n aan h e t
c r o p r o t e i n e met daaraan gebonden tweewaardig
11.
in
d i e een in water oplosbaar zout
waardoor Z e e w a a r d i g
p r o t e i n e gebonden wordt,
men a l s
saccharose,
gelatine.
tweewaardig t i n bevat,
10.
dat,
anti-agglomeratie-
in het bijzonder propyleenglycol,
b r e n g t met een o p l o s s i n g ,
tweewaardig
microbolletjes.
gew.% v a n e e n
Werkwijze v o l g e n s c o n c l u s i e s
men d e e l t j e s
dat
dat op'
met h e t kenmerk,
d i e c i r c a 3 mg t w a e w a a r d i g
d a t men
t i n per
100
- 13 -
12»
Werkwijze v o l g e n s
het macroproteine 13.
14.
8 - 11,
met h e t kenmerk,
z i c h i n de vorm van m a c r o - a g g r e g a t e n
Werkwijze v o l g e n s
het macroproteine
conclusies
zich
conclusies
8 - 11,
Werkwijze v o l g e n s c o n c l u s i e s
8 - 1 3 ,
b i j het
te
slaan b i j
iso-elektrische
punt van h e t
4
7 30 3 3 4 2
een pH-waarde, eiwit
ligt.
dat
bevindt.
met h e t kenmerk,
h e t macroproteine b e r e i d wordt door gedenatureerd i n zuur m i l i e u neer
bevindt.
met h e t kenmerk,
i n de vorm van m i c r o b o l l e t j e s
dat
dat
macroproteine
die
ongeveer
