Veterinární a farmaceutická univerzita Brno Farmaceutická fakulta Ústav humánní farmakologie a toxikologie
KVĚTINŮV DEN Mezioborový seminář mladých farmakologů a toxikologů čtvrtý ročník Brno 29. května 2014
Veterinární a farmaceutická univerzita Brno Farmaceutická fakulta Ústav humánní farmakologie a toxikologie
KVĚTINŮV DEN Mezioborový seminář mladých farmakologů a toxikologů
čtvrtý ročník
Brno 29. května 2014
Místo konání: Brno, Palackého tř. 1-3, areál Veterinární a farmaceutické univerzity Brno, pavilon farmacie (budova 44), velká posluchárna v suterénu.
Organizační výbor: doc. MVDr. Pavel Suchý, Ph.D. doc. RNDr. Ladislava Bartošová, Ph.D. MUDr. Marta Chalupová PharmDr. Peter Kollár, Ph.D. MUDr. Tomáš Parák, Ph.D. Františka Hamáková 1
Sponzoři akce: ACTIVA s. r. o.
Drinex, s.r.o.
MIKROP Čebín, a.s.
SIEMENS, s.r.o.
2
Program semináře „Květinův den 2014“ 29. května 2014 REGISTRACE ÚČASTNÍKŮ OFICIÁLNÍ ZAHÁJENÍ Moderátor dopolední sekce :
9,00 h
9,30 h
9,30 h
9,45 h
PharmDr. Michal Kolorz, Ph.D.
Nepovimová E. 9,45 7-MEOTA-donepezil like compounds – novel agents to combat Alzheimer’s disease Halvová P. 10,00 TDM cyklosporinu A a jeho metabolitů v časné fázi po transplantaci ledvin Kračmarová A. 10,15 Imunomodulační a antioxidační účinky atypického antipsychotika klozapinu Wojnarová L. 10,30 Perspektiva hepatoprotektivních účinků aktivátorů a inhibitorů SIRT1 a AMPK a jejich klinický přínos Dragunová Z. 10,45 Vybrané markery trombofílie a ich asociácia s tehotenskými komplikáciami Živná D. 11,00 Účinky ciprofloxacinu na raná vývojová stádia kapra obecného (Cyprinus carpio) Šišperová E. 11,15 Zkušenosti získané na Leibniz-Institute of Freshwater Ecology and Inland Fisheries v Berlíně Veselá I. 11,30 Vliv FGF inhibitorů na chondrogenezi
OBĚD
11,45 h
Poznámky: Délka příspěvku je 10 minut + 5 minut diskuze Dopolední občerstvení bude zajištěno průběžně v předsálí
3
12,45 h
Moderátor odpolední sekce :
PharmDr. Kateřina Wróblová, Ph.D. 13,00
Konečná M. Antimikrobiálna aktivita antokyánov
Kushkevych I. 13,15 + + 2+ Activity of Na /K -activated Mg -dependent ATP-hydrolase in the cell-free extract of the sulfate-reducing bacteria Desulfovibrio piger Vib-7 and Desulfomicrobium sp. Rod-9 Kolmanová E. 13,30 Využití troponinu cTnI v preklinickém výzkumu Dovrtělová G. 13,45 Vliv oleamidu na metabolickou aktivitu CYP2C6 a fagocytární aktivitu potkana Medveďová I. 14,00 Vplyv roflumilastu na reaktivitu dýchacích ciest a apoptózu v modeli experimentálne navodenej astmy v závislosti od spôsobu jeho podania Kazimierová I. 14,15 Účinok Provinolu, Flavínu7 a ich kombinovanej terapie s budesonidom na experimentálnom modely alergickej astmy Šepsová V. 14,30 Ovlivnění močového měchýře potkana inhibitory acetylcholinesterasy Tabiová K. 14,45 Morfologické a behaviorálne zmeny v animálnom neurovývojovom modeli schizofrénie Baďo O. 15,00 Antihypertenzívny efekt nových ultra krátko pôsobiacich betablokátorov s metoxy substitúciou v ortho polohe UKONČENÍ ODBORNÉ ČÁSTI PROGRAMU
15,15 h
Odjezd na společenský večer
17,00 h
SPOLEČENSKÝ VEČER
17,30
Návrat na VFU
00,00 h 00,30 h
4
ANTIHYPERTENZÍVNY EFEKT NOVÝCH ULTRA KRÁTKO PÔSOBIACICH BETABLOKÁTOROV S METOXY SUBSTITÚCIOU V ORTHO POLOHE Baďo O.1, Tengler J.2, Frydrych M.1, Kolmanová E.1 1 2
Ústav humánnej farmakológie a toxikológie, Faf, VFU Brno, ČR Ústav chemických liečiv, Faf, VFU Brno, ČR
Novo syntetizované látky s 2-metoxy-fenoxyethyl substitúciou v postrannom reťazci na amino skupine patria medzi najnovšie ultra krátko pôsobiace betablokátory. Látky boli pripravené na Ústave chemických liečiv Faf VFU Brno kolegom PharmDr. Janom Tenglerom. V základnom reťazci majú alkylkarbamátovú substitúciu a v spojovacom reťazci esterovú labilnú skupinu zodpovednú za rýchly rozpad v krvnej plazme.a Cieľom nášho experimentu bolo sledovať vplyv látok 2mc2c a 2mc2d vo vybraných dávkach 1 a 3 mg.kg-1 na krvný tlak a tepovú frekvenciu u normotenzných potkanov. Testované látky boli aplikované intravenózne a invazívnou metódou boli vyhodnotené zmeny jednotlivých parametrov. Zdravé laboratórne potkany Wistar boli rozdelené do 5 skupín. 1. a 2. skupine bola aplikovaná látka 2mc2c v dávke 1 a 3 mg.kg-1 a boli pozorované zmeny krvného tlaku a tepovej frekvencie. 3. a 4. skupine bola aplikovaná látka 2mc2d v rovnakej dávke 1 a 3 mg.kg-1. Skupina 5. slúžila ako negatívna kontrola. Testované látky boli intravenózne podané do vena jugularis a následne bol invazívne sledovaný krvný tlak na arteria carotis po dobu 20 minút na prístroji HSE UNIPER UP-100 a zároveň bola sledovaná tepová frekvencia po rovnakú dobu pomocou EKG pre veterinárne účely. Látka 2mc2c v dávke 1 mg.kg-1 znížila štatisticky významne krvný tlak na dobu 14,5 minúty a tepovú frekvenciu počas prvých 6 minút. Rovnaká látka v dávke 3 mg.kg-1 spôsobila znženie krvného tlaku na celú dobu experimentu 20 minút a zníženie tepovej frekvencie v prvých dvoch minútach a neskôr medzi 8.-12. minútou. Látka 2mc2d v dávke 1 mg.kg-1 znížila krvný tlak počas celého experimentu na 20 minút a tepovú frekvenciu znížila od 1.-12. minúty. Rovnaká látka vo vyššej koncentrácií 3 mg.kg-1 znížila krvný tlak aj tepovú frekvenciu počas celej doby 20 minút okamžite po podaní. a
Jan Tengler, Iva Kapustíková, Matúš Peško, et al., “Synthesis and Biological Evaluation of 2-
Hydroxy-3-[(2-aryloxyethyl)amino]propyl Scientific
World
Journal,
vol.
4-[(Alkoxycarbonyl)amino]benzoates,”
2013,
Article
ID
doi:10.1155/2013/274570 Tento experiment prebiehal za využitia IGA 104/2013/FAF 5
274570,
13
pages,
The 2013.
VLIV OLEAMIDU NA METABOLICKOU AKTIVITU CYP2C6 A FAGOCYTÁRNÍ AKTIVITU POTKANA THE EFFECT OF OLEAMIDE ON THE METABOLIC ACTIVITY OF CYP2C6 AND PHAGOCYTIC ACTIVITY IN RAT Dovrtělová G., Nosková K., Sabová M., Juřica J., Zendulka O. CEITEC MU, Farmakologický ústav, Lékařská Fakulta, Masarykova Univerzita, Brno Klíčová slova: oleamid, cytochrom P450, CYP2C6, fagocytární aktivita
Oleamid (cis-9,10-oktadecenamid) je přirozeně se vyskytující metabolit kyseliny olejové, který byl izolován z mozkomíšního moku spánkově deprivovaných koček. Je řazen společně s anadamidem (agonista CB1,2; TRPV1) a několika dalšími látkami mezi endokanabinoidy. Enzymy syntetizující tento lipid nejsou dosud plně charakterizovány, jeho biodegradace je jako u ostatních endokanabinoidů zprostředkovaná enzymem FAAH (Fatty Acid Amid Hydrolase), který byl izolován z lidského mozku i jater. Oleamid je často označován za molekulu indukující spánek, protože byl prokázán jeho pozitivní vliv na nespavost a spánkovou latenci u potkanů. Kromě hypnosedativních účinků bylo experimentálně prokázáno i jeho hypotermické a analgetické působení a také jeho inhibiční účinek na proliferaci lymfocytů. S ohledem na možné budoucí terapeutické použití oleamidu je žádoucí stanovit jeho interakční potenciál při kombinaci s jinými léčivy. Cílem naší práce bylo zjistit vliv oleamidu na biotransformaci ostatních léčiv, konkrétně substrátů CYP2C9/11. Dále jsme se zaměřili na možné účinky oleamidu na imunitní systém, a to počty leukocytů a jejich fagocytární aktivitu. K experimentu byli použiti potkani kmene Wistar, kteří byli randomizovaně rozděleni do 5 skupin. Po dobu 7 dní byl i.p. aplikován první skupině fyziologický roztok, druhé propylenglykol a dalším skupinám oleamid rozpuštěný v propylenglykolu ve 3 koncentracích (0.1, 1.0 a 10.0 mg/kg/den). Z krve odebrané z retrobulbárního plexu byl stanoven celkový počet leukocytů a také jejich fagocytární aktivita pomocí chemiluminometrického stanovení. Počty lymfocytů byly mezi sledovanými skupinami bez statisticky významných rozdílů. Fagocytární aktivita leukocytů byla u skupiny potkanů premedikovaných nejvyšší dávkou oleamidu (10.0 mg/kg/den) oproti kontrolám signifikantně zvýšena. Z jaterní tkáně jednotlivých zvířat byla diferenciální ultracentrifugací izolována jaterní mikrosomální frakce a v ní stanoven celkový počet proteinů a metabolická aktivita CYP2C6. Skupina aplikovaná nejvyšší dávkou oleamidu (10.0 mg/kg/den) vykazovala signifikantní pokles celkového proteinu v mikrosomální jaterní frakci. Práce byla podpořena projektem „CEITEC - Central European Institute of Technology” (CZ.1.05/1.1.00/02.0068) z Evropského fondu pro regionální rozvoj.
6
VYBRANÉ MARKERY TROMBOFÍLIE A ICH ASOCIÁCIA S TEHOTENSKÝMI KOMPLIKÁCIAMI Dragunová Z.1, Gaľová J.1, Fecenková M.1, Kolorz M.2, Bartošová L.2, Bernasovská J.1 [1]
Prešovská univerzita v Prešove, Fakulta humanitných a prírodných vied, Katedra biológie,
Ul.17.novembra 1, 08016 Prešov, Slovenská republika;
[email protected] [2]
Veterinární a farmaceutická univerzita, Ústav humánnej farmakológie a toxikológie,
Palackého 1/3, 61242, Brno, Česká Republika Trombofilné stavy predstavujú heterogénnu skupinu vrodených alebo získaných porúch hemostázy, ktoré sú patofyziologicky asociované so zvýšenou tendenciou ku koagulácii a predisponujú pacienta ku vzniku alebo recidíve trombózy. Sú jednou z príčin vzniku tromboembolickej choroby v gravidite, významne sa uplatňujú v etiopatogenéze preeklampsie, intrauterinného úmrtia a rastovej retardácie plodu, abrupcie placenty a recidivujúcich spontánnych potratov.
Cieľom našej práce bolo analyzovať a objasniť
súvislosť medzi prítomnosťou troch vybraných trombofilných mutácií (Faktor V Leiden, MTHFR C677T A MTHFR A1298C) a komplikáciami počas gravidity. Alelové varianty boli detekované pomocou real-time PCR genotypizačnej analýzy s použitím TaqMan sond. Súbor pre analýzu tvorilo 108 žien s tehotenskými komplikáciami a 91 žien kontrolného súboru hospitalizovaných na oddelení gynekológie a pôrodníctva, FNsP J.A. Reimana v Prešove. Signifikantne vyššiu frekvenciu faktora V Leiden
sme zaznamenali v skupine pacientok
v porovnaní s kontrolnou skupinou (P=0,0029). Rovnako sme v skupine žien s tehotenskými komplikáciami zaznamenali štatisticky vyššiu frekvenciu polymorfizmu C677T (P=0,027), avšak pri hodnotení polymorfizmu A1298C táto asociácia preukázaná nebola (P=0,30).
Kľúčové slová: Trombofília. Tehotenské komplikácie. Faktor V Leiden. MTHFR C677T. MTHFR A1298C.
Poďakovanie Práca vznikla s podporou projektu ITMS 26220120023 a projektu APVV-0716-10.
7
TDM CYKLOSPORINU A A JEHO METABOLITŮ V ČASNÉ FÁZI PO TRANSPLANTACI LEDVIN 1,2
Halvová P., 1Peřinová I., 1,2Brozmanová H., 2Grundmann M.
1
Ústav klinické farmakologie, FN Ostrava
2
Ústav klinické farmakologie, Lékařská fakulta Ostravské univerzity, Ostrava
Klíčová slova: cyklosporin A, metabolity, TDM, transplantace ledvin Úvod: Cyklosporin A (CsA) je kalcineurinový inhibitor často užívaný po transplantaci ledvin. Má
úzký
terapeutický
index
s výraznou
interindividuální
a
intraindividuální
farmakokinetickou variabilitou. Proto je při terapii CsA indikováno terapeutické monitorování hladin. Vzhledem k tomu, že dávka a hladina CsA v krvi (před užitím) nekorelují přesně s klinickým stavem, zdá se být výhodnější monitorovat CsA v místě účinku – lymfocytech. Cíl studie: Porovnat koncentrace CsA a jeho metabolitů (AM1, AM9 a AM4N) v krvi a periferních lymfocytech u pacientů s normální a zpožděnou funkcí ledvin. Metoda: Do studie bylo zahrnuto 14 pacientů po transplantaci ledvin (8 mužů), kteří byli sledováni po dobu 3 měsíců od transplantace. Pacienti užívali mikroemulzi CsA (Sandimmun Neoral® nebo Equoral®) v kombinaci s kys. mykofenolovou a prednisonem. Na základě hodnot sérového kreatininu a clearance kreatininu byli pacienti rozděleni do 2 skupin. Skupina 1 – pacienti s okamžitým nástupem funkce ledvin (IF), skupina 2 – pacienti se zpožděným nástupem funkce ledvin (DGF). Koncentrace CsA a jeho metabolitů byly měřeny v krvi a lymfocytech metodou LC/MS-MS, ve vzorcích odebraných před (C0) a za 2 hod (C2) po užití CsA. Výsledky: U DGF byly nalezeny od 1. dne signifikantně vyšší hladiny sérového kreatininu (v průběhu prvního týdne cca 5-6krát). U skupiny s DGF byly v průběhu prvního týdne naměřeny signifikantně vyšší hladiny CsA před užitím v průměru o 50%, hladiny AM1 byly 5. den po transplantaci téměř trojnásobné. Byly nalezeny zejména velké rozdíly u AM4N – hladiny u DGF byly v prvním týdnu 15-20krát vyšší. Rozdíly u AM9 nebyly statisticky významné. Obdobné výsledky byly nalezeny i v lymfocytech. Ke zlepšení renálních funkcí u DGF pak došlo postupně a mezi druhým a třetím měsícem rozdíly mezi skupinami vymizely. Závěr: Zůstává otázkou zda rozdíly ve fenotypu u pacientů s IF a DGF jsou příčinou opožděné funkce ledvin nebo jejím markerem. Podporováno grantem IGA MZ 1A/8655-5 8
ÚČINOK
PROVINOLU,
FLAVÍNU7
A ICH
KOMBINOVANEJ
TERAPIE
S BUDESONIDOM NA EXPERIMENTÁLNOM MODELY ALERGICKEJ ASTMY THE EFFECT OF PROVINOL, FLAVIN7 AND THEIR COMBINATIONS WITH BUDESONIDE ON EXPERIMENTAL MODEL OF ALLERGIC ASTHMA Kazimierová I., Jošková M., Kocmálová M., Fraňová S. Ústav farmakológie Jesseniovej lekárskej fakulty Univerzity Komenského, Martin Kľúčové slová: Provinol, Flavín7, budesonid, špecifický odpor, kašeľ, zápal Nové štúdie vo farmakoterapii astmy potvrdili protizápalovú a bronchodilatačnú aktivitu polyfenolov, ktoré môžu prispieť k prevencii a k zlepšeniu liečby astmy. Cieľom nášho experimentu bolo potvrdiť, či 21-dňová liečba s Provinolom (zmes polyfenolov z červeného vína) a Flavínom7 (zmes polyfenolov z červeného ovocia) bude viesť k signifikantnej inhibícii astmatických reakcií a zhodnotiť účinok kombinovanej terapie týchto substancií s budesonidom na zvieracom modely alergickej astmy. Morčatá boli počas 21-dňovej senzibilizácie s ovalbumínom liečené Provinolom (20mg/kg, p.o.), Flavínom7 (2ml/kg, p.o.), budesonidom (1 mM počas 5 minútovej inhalacii) a kombináciou týchto látok v polovičných dávkach. Zmeny obranných mechanizmov dýchacích ciest (špecifický odpor dýchacích ciest (sRaw) po inhalácii histamínu (10-3 mol.l-1) a kašľový reflex vyvolaný inhaláciou kyseliny citrónovej (10-3 mol.l-1) ) sme hodnotili in vivo metódou u bdelých morčiat umiestnených v celotelovom bodypletyzmografe na 7., 14., a 21. deň experimentu. Mukociliárny klírens bol hodnotený metódou in vitro, 24 hodín po poslednej
senzibilizácii
ovalbumínom.
Hladiny
IL-4,
IL-5
a IL-13
v sére
a v bronchoalveolavárnej tekutine boli použité ako parameter protizápalovej aktivity testovaných substancií. Naše výsledky ukázali, že Provino a Flavín7 signifikantne znížili sRaw, potlačili kašľový reflex a pozitívne ovplyvnili mukociliárny klírens počas 21-dňovej aplikácie. Okrem toho, kombinácia Provinol+budesonid a Flavín7+budesonid zosilňovala bronchodilatačný a antitusický účinok substancie používanej v monoterapii. Naše výsledky tiež potvrdili protizápalový účinok Provinolu a Flavínu7. Na záver môžeme povedať, že náš experiment preukázal možnosť využitia Provinolu a Flavínu7 v prevencii a v liečbe astmy a ich využitie v kombinovanej terapii. Táto práca bola podporovaná Agentúrou na podporu výskumu a vývoja na základe Zmluvy č. APVV0305-12, CEKR II. –Projekt spolufinancovaný zo zdrojov EU; Grant VEGA 1/0165/14, Grant MZ 2012/35-UKMA-12.
9
VYUŽITÍ TROPONINU cTnI V PREKLINICKÉM VÝZKUMU Kolmanová E.1, Bartošová L.1, Parák T.1, Suchý P.1, Scheer P.2, Baďo O.1
1
Ústav humánní farmakologie a toxikologie, Farmaceutická fakulta, Veterinární a
farmaceutická fakulta Brno, Palackého 1-3, 612 42 Brno, Česká republika 2
Mezinárodní centrum klinického výzkumu, Fakultní nemocnice u svaté Anny, Pekařská 53,
656 91 Brno, Česká republika Plazmatické hladiny biomarkerů jsou ukazateli fyziologického či patofyziologického stavu organismu. Při poškození myokardu dochází k elevaci kardiomarkerů, mezi nimiž zaujímají přední postavení kardiospecifické izoformy troponinu (cTnI a cTnT). Vyznačují se vysokou specificitou k srdeční tkáni a vysokou senzitivitou metod stanovení. Naším cílem bylo rozšířit spektrum experimentů prováděných v rámci preklinického výzkumu právě o stanovení troponinu I. Jeho využití spatřujeme v primárním screeningu účinků látek na srdeční tkáň. Na pracovišti ÚHFT jsme na animálním modelu zavedli dvě nové metodiky, které nám umožní v budoucích experimentech hodnotit kardioprotektivní účinek nově syntetizovaných látek. Model akutní kardiotoxicity byl u potkanů kmene Wistar navozen i.p. aplikací isoproterenolu (ISO) v dávce 50 mg/kg b.w. V předem určených časových intervalech byla z vena jugularis odebírána krev a z krevní plazmy byla pomocí biochemického analyzátoru Dimesion (Siemens®) stanovena hladina cTnI a srdečního izoenzymu kreatinkinázy (CKMB). Z experimentálních výsledků vyplývá vyšší specificita cTnI k myokardu s maximální plazmatickou hladinou 4 hod po aplikaci ISO. Tento model se vyznačuje jednoduchou metodikou, která není zatížena invazivními zákroky. Druhou nově zavedenou metodikou je model ischemie-reperfúze (I/R) myokardu in vivo. Po navození anestezie a tracheální intubaci byla potkanům provedena levá thorakotomie. Po narušení perikardu a obnažení myokardu jsme podvázali levou koronární cévu (LAD). Ischemická fáze probíhala 20 minut. Uvolněním ligace LAD jsme dosáhli fáze reperfúze trvající 30 minut. Průběh I/R byl monitorován na EKG. Z vena jugularis byla na začátku ischemické fáze, v jejím průběhu a během reperfúze odebírána krev pro stanovení cTnI. Experiment byl ukončen explantací srdce, které bylo následně podrobeno histologickému zpracování (barvení v tetrazoliu). Velikost nekrotických ložisek byla vyhodnocená pomocí planimetrického programu Mobile Infarct Tool. Využití více hodnotících kritérií (EKG, histologie, stanovení cTnI) umožňuje komplexnější zhodnocení účinků potenciálních kardioprotektiv. 10
ANTIMIKROBIÁLNA AKTIVITA ANTOKYÁNOV Konečná M.1, Poráčová J.1, , Hubcejová J.1, Kšonžeková P.2, Tkáčiková Ľ.2, Mariychuk R.3
1
Prešovská univerzita v Prešove, Fakulta humanitných a prírodných vied PU v Prešove, Katedra biológie, Ul.17.novembra 1, 08016 Prešov, Slovenská Republika;
[email protected] 2 Univerzita veterinárskeho lekárstva a farmácie v Košiciach, Katedra mikrobiológie a imunológie, Komenského 73, 041 81 Košice, Slovenská Republika 3 Prešovská univerzita v Prešove, Fakulta humanitných a prírodných vied PU v Prešove, Katedra ekológie, Ul.17.novembra 1, 08016 Prešov, Slovenská republika
Antokyány sú predmetom rozsiahleho výskumu vzhľadom na ich biologické účinky. Dôležité miesto významnosti zaujímajú ich antimikrobiálne účinky. Cieľom tejto štúdie bolo hodnotenie antimikrobiálneho
účinku na antokyány bohatých extraktov pripravených
z plodov bobuľovitých rastlín (Vaccinium myrtilus L., Aronia melanocarpa L. a Sambucus nigra L.) acetónovou a etanolovou extrakciou. Pomocou platňovej difúznej metódy bol hodnotený vplyv
uvedených extraktov
na
rast
štyroch
grampozitívnych bakterií
(Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Bacillus cereus a Listeria monocytogenes). Na základe dosiahnutých výsledkov je možné konštatovať, že antokyány izolované z bobuľovín vykazovali určitý stupeň antimikrobiálnej aktivity, pričom najcitlivejší bol voči ich pôsobeniu bakteriálny kmeň Bacillus cereus. Zaujímavým zistením je aj fakt, že nami testované etanolové extrakty boli v porovnaní s acetónovými extraktmi účinnejšie. Záverom môžeme konštatovať, že bobuľoviny zohrávajú dôležitú úlohu vo výžive ľudí nielen ako významná skupina prírodných antioxidantov, ale aj ako preventívne a liečivé prostriedky pri rôznych bakteriálnych infekciách.
Kľúčové slová: antimikrobiálna aktivita, antokyány, grampozitívne baktérie, platňová difúzna metóda
11
IMUNOMODULAČNÍ A ANTIOXIDAČNÍ ÚČINKY ATYPICKÉHO ANTIPSYCHOTIKA KLOZAPINU IMMUNOMODULATING AND ANTIOXIDATIVE IMPACT OF ATYPICAL ANTIPSYCHOTIC DRUG CLOZAPINE Kračmarová A.1,2, Pohanka M.2 1
Katedra toxikologie, 2Centrum pokročilých studií, Fakulta vojenského zdravotnictví,
Univerzita obrany Klíčová slova: schizofrenie, vrozená imunita, interleukin 6, oxidační stres Mechanizmus účinku atypického antipsychotika klozapinu nebyl dosud uspokojivě objasněn. Z literatury jsou známy mimo jiné jeho vliv na produkci prozánětlivého cytokinu interleukinu 6 (IL6), schopnost interagovat s alfa 7 nikotinovým acetylcholinovým receptorem (α7nAChR) a schopnost snižovat projevy oxidačního stresu v organizmu. Cílem práce bylo ověřit hypotézu, že jsou protizánětlivé účinky klozapinu zprostředkovány α7nAChR exprimovaným na makrofázích a rovněž verifikovat antioxidační potenciál klozapinu. Myší makrofágová linie j774.2 byla kultivována za standardních podmínek. Po dobu 24 hodin byly buňky vystaveny působení klozapinu (0,4 – 12,0 µg/ml), případně methyllycakonitinu (MLA; 10-11 – 10-5 M), selektivního antagonisty α7nAChR. Zánětlivá odpověď byla vyvolána přidáním lipopolysacharidu (LPS) z Escherichia coli (1 µg/ml). Po uplynutí 24 hodin byla metodou ELISA stanovena hladina IL-6 uvolněného do media. Viabilita buněk v přítomnosti testovaných látek byla ověřena standardním MTT testem. Antioxidační kapacita klozapinu byla stanovena pomocí DPPH testu (redukce 2,2-difenyl-1pikrylhydrazylového radikálu) a vztažena k N-acetyl-L-cysteinu (NAC). Produkce IL6 buňkami vystavenými klozapinu signifikantně poklesla z 21.12 ± 2.94 µg/ml až na 2.152 ± 0.340 µg/ml. Hladina IL6 produkovaná buňkami, jež byly vystaveny klozapinu a zároveň MLA se však navzdory předpokladu nelišila. Antioxidační aktivita klozapinu (1,00 mmol/l) odpovídala antioxidační aktivitě NAC o koncentraci 0,13 mmol/l. Podařilo se potvrdit protizánětlivé působení klozapinu na makrofágy, u nichž byla zánětlivá odpověď vyvolána pomocí LPS. Protože však nedošlo k oslabení protizánětlivého účinku po podání antagonisty α7nAChR, hypotéza, že k tomuto efektu dochází v důsledku aktivace α7nAChR, se neprokázala. DPPH test ukázal relativně dobrou antioxidační kapacitu klozapinu, což vysvětluje jeho schopnost zmírnit známky oxidačního stresu v organismu. Práce byla provedena s laskavou podporou MŠMT – projekt SV/FVZ201203. 12
ACTIVITY OF Na+/K+-ACTIVATED Mg2+-DEPENDENT ATP-HYDROLASE IN THE CELL-FREE EXTRACT OF THE SULFATE-REDUCING BACTERIA DESULFOVIBRIO PIGER VIB-7 AND DESULFOMICROBIUM SP. ROD-9 Kushkevych I.1, Fafula R.2 1
Department of Human Pharmacology and Toxicology, Faculty of Pharmacy,
University of Veterinary and Pharmaceutical Sciences Brno, Czech Republic 2
Department of Biophysics, Faculty of Pharmacy, Danylo Halytsky Lviv National Medical
University, Ukraine Keywords: Na+/K+-ATPase activity, hydrogen sulfide, toxicity, intestinal microbiocenosis, bowel diseases, ulcerative colitis.
The aim of our work was to study the characteristics of ATP-hydrolase reactions catalyzed by Na+/K+-ATPase in cell-free extracts of the sulfate-reducing bacteria Desulfovibrio piger Vib-7 and Desulfomicrobium sp. Rod-9 isolated from the human large intestine, and to carry out the kinetic analysis of the enzyme reaction. Microbiological, biochemical, biophysical and statistical methods in this work were used. The Na+/K+-activated Mg2+-dependent ATPhydrolase activity of the sulfate-reducing bacteria D. piger Vib-7 and Desulfomicrobium sp. Rod-9
isolated from the human large intestine has been studied. The activity of Na+/K+-
ATPase (16.11 ± 1.87 and 7.31 ± 0.98 U×mg-1 protein for D. piger Vib-7 and Desulfomicrobium sp. Rod-9, respectively) in the cell-free extract of both bacterial strains has been detected. The effect of different temperature and pH on the enzyme activity of the D. piger Vib-7 and Desulfomicrobium sp. Rod-9 cell-free extracts has been examined. The maximal Na+/K+-ATPase activity for both bacterial strains at +35ºC temperature and the highest activity of the studied enzyme in the cell-free extracts of D. piger Vib-7 at pH 7.0 and Desulfomicrobium sp. Rod-9 at pH 6.5 have been measured. Based on experimental data, the analysis of kinetic properties of Na+/K+-activated Mg2+-dependent ATP-hydrolase by the studied bacteria has been carried out. The Na+/K+-ATPase activity, maximal (instantaneous) reaction rate (V0) and initial (maximal) rate of the Na+/K+-ATPase reaction (Vmax) is significantly higher in D. piger Vib-7 cells than in Desulfomicrobium sp. Rod-9. Michaelis constants (Km) of the enzyme activity for both bacterial strains have been calculated.
13
VPLYV ROFLUMILASTU NA REAKTIVITU DÝCHACÍCH CIEST A APOPTÓZU V MODELI EXPERIMENTÁLNE NAVODENEJ ASTMY V ZÁVISLOSTI OD SPÔSOBU JEHO PODANIA INFLUENCE OF ROFLUMILSAT ON AIRWAY REACTIVITY AND APOPTOSIS IN EXPERIMENTAL MODEL OF ALLEREGIC ASTHMA BASED ON WAY OF ADMINISTRATION Medveďová I., Fulmeková A., Mokrý J., Eichlerova A., Prso M.
Ústav farmakológie Jesseniovej lekárskej fakulty Univerzity Komenského, Martin
Kľúčové slová: roflumilast, apoptóza, viabilita, špecifický odpor, zápal Úvod: Alergická astma je chronické ochorenie dýchacích ciest (DC), ktoré je sprevádzané hyperreaktivitou DC a ich infiltráciou zápalovými bunkami, hlavne eozinofilmi a Th2 lymfocytmi. Nadmerná akumulácia eozinofilov a následné vyplavenie zápalových mediátorov významne zosilňujú alergický zápal dýchacích ciest. Prostredníctvom apoptózy sú zápalové bunky eliminované bez rozvoja zápalovej odpovede, preto jedným z možných spôsobov, ako zmierniť zápal DC, je indukcia apoptózy eozinofilov. Roflumilast, ako selektívny inhibítor fosfodiesterázy 4 (PDE4), sa bežne používa v liečbe chronickej obštrukčnej choroby pľúc (CHOCHP). Cieľom našej práce bolo zistiť účinok roflumilastu na reaktivitu dýchacích ciest a viabilitu zápalových buniek v modeli alergickej astmy u morčiat v závislosti od spôsobu jeho podania. Materiál a metódy: V našej štúdii sme použili dospelé morčatá (samce) rozdelené do niekoľkých skupín. Kontrolná skupina bola bez senzibilizácie. Ďalšie
skupiny (5) boli
senzibilizované 14 dní a následne im bol podávaný roflumilast perorálne, inhalačne, intraperitoneálne alebo v kombinácii so salbutamolom inhalačne. Výsledky: Špecifický odpor dýchacích ciest (RxV) bol po nebulizácii histamínu meraný v dvojkomorovom pletyzmografe. Zníženie špecifického odporu bolo zaznamené len u morčiat, ktorým bol podávaný roflumilast perorálne. Použitím metódy orgánových kúpeľov v podmienkach in vitro bola reaktivita tracheálnych tkanivových stripov na kumulatívne dávky histamínu
zredukovaná signifikantne (p<0,01) u morčiat liečených
roflumilastom
intraperitoneálne alebo v kombinácii so salbutamolom inhalačne. Najnižšia reaktivita pľúcnych stripov bola zaznamenaná v skupine zvierat, ktorým bol roflumilast podávaný 14
inhalačne. Najsignifikantnejší pokles viability zápalových buniek (p<0,01) bol pozorovaný u skupiny liečenej roflumilastom intraperitoneálne. Záver: Naše výsledky poukazujú na možné využitie roflumilastu v modeli alergického zápalu DC. Roflumilast viedol k zníženiu reaktivity dýchacích ciest v podmienkach in vivo, zníženiu reaktivity pľúcnych aj tracheálnych tkanivových stripov v podmienkach in vitro a taktiež bol preukázaný aj jeho potencionálny pro-apoptotický účinok, ktorý bude skúmaný v nasledujúcich štúdiách použitím ďalších metodík. Táto práca bola podporovaná Agentúrou na podporu výskumu a vývoja na základe Zmluvy č. APVV-0305-12; Projektom „Martinské centrum pre biomedicínu (BioMed Martin)“, ITMS kód: 26220220187; Grantom VEGA 1/0260/14 a Grantom M7 2012/35-UKMA-12.
15
7-MEOTA-DONEPEZIL LIKE COMPOUNDS – NOVEL AGENTS TO COMBAT ALZHEIMER’S DISEASE Nepovimova E.,a,b Korabecny J.,a,b Dolezal R.,a Cabelova P.,c Musilek K.,d and Kuca K.a,b,d a
Biomedical Research Centre, University Hospital Hradec Kralove, Sokolska 581, 500 05 Hradec Kralove, Czech Republic. b Department of Toxicology, Department of Public Health, Centre for Advanced Studies, Faculty of Military Health Sciences, University of Defence, Trebesska 1575, 500 01 Hradec Kralove, Czech Republic. c Department of Pharmaceutical Chemistry and Drug Control, Faculty of Pharmacy in Hradec Kralove, Charles University in Prague, Heyrovskeho 1203, 500 05 Hradec Kralove, Czech Republic. d University of Hradec Kralove, Faculty of Science, Department of Chemistry, Rokitanskeho 62, 500 03 Hradec Kralove, Czech Republic.
[email protected]
Alzheimer’s disease (AD) is a multifactorial progressive neurodegenerative disorder that manifests as memory loss, spatial disorientation, and gradual deterioration of intellectual capacity. Nowadays, there are no effective preventative measures, definitive diagnostic guidelines, or curative therapy for AD, its precise etiology remains unknown as well. To date, the pharmacotherapy of AD has relied on acetylcholinesterase (AChE) inhibitors – tacrine, donepezil, rivastigmine and galantamine – and, more recently, on an N-methyl-D-aspartate receptor antagonist – memantine. Multi-target-directed ligands (MTDLs) have a great potential for treating complex diseases such as neurodegenerative disorders because they interact with multiple targets. The design of such compounds that can hit more than one specific target thus represents an innovative strategy for AD treatment. Since one of the two currently approved drug-groups in AD therapy are cholinesterase inhibitors, they are one of the most used starting compounds in MTDLs design strategy. In our contribution we will introduce 7-MEOTA-donepezil like compounds as MTDLs combining 7-MEOTA unit, representing less toxic tacrine (THA) derivative, with analogues of N-benzylpiperazine moieties mimicking N-benzylpiperidine fragment of donepezil. 7-MEOTA-donepezil like compounds exerted mostly non-selective profile in inhibiting cholinesetrases of different origin with IC50 values ranging from micromolar to sub-micromolar concentration scale. Kinetic analysis revealed mixed-type mode of inhibition presuming that these inhibitors are capable to simultaneously bind peripheral anionic site (PAS) as well as catalytic anionic site (CAS) of AChE. Molecular modeling studies and QSAR studies were performed to rationalize in vitro studies. The work was supported by the Post-doctoral project (No. CZ.1.07/2.3.00/30.0044), by University of Defence (Long Term Development Plan – 1011) and specific research (No. SV/FVZ201409). 16
OVLIVNĚNÍ MOČOVÉHO MĚCHÝŘE POTKANA INHIBITORY ACETYLCHOLINESTERASY THE EFFECT OF ACETYLCHOLINESTERASE INHIBITORS ON THE RAT BLADDER Šepsová V.1, Tobin G.2, Žďárová Karasová J.3, Soukup O.3,4 1
Katedra toxikologie ,3Katedra vojenského zdravotnictví, Fakulta vojenského zdravotnictví,
Hradec Králové, Česká republika 2
Katedra farmakologie, Univerzita Goteborg, Švédsko
4
Centrum biomedicínského výzkumu, Fakultní nemocnice, Hradec Králové, Česká republika
Klíčová slova: acetylcholinesterasa, inhibitory, muskarinové receptory, močový měchýř
Kontrakce močového měchýře je zprostředkovávána různými typy receptorů. Močový měchýř obsahuje muskarinové receptory (mAChR) M2 a M3 v poměru 80 % : 20 %, avšak kontrakce zprostředkovávají minoritně zastoupené M3. Dále se zde vyskytují purinergní P2X receptory, jejichž agonistou není acetylcholin jako u mAChR ale adenosin-5´-trifosfát (ATP). Inhibitory acetylcholinesterasy (AChEI) jsou užívány jako standardní léčiva Alzheimerovy či Parkinsonovy choroby, ale jsou podávány i jako profylaktické látky před zasažením nervově paralytickými látkami. Cílem práce bylo zjistit, jak samotné AChEI ovlivňují funkci močového měchýře a zjistit přesný mechanismus jejich působení. Testování probíhalo v orgánové lázni, kde byly mezi elektrody upevněny stripy (6 x 2 mm) močových měchýřů potkanů kmene Wistar. Následovala elektrická stimulace stripů, aplikace agonisty mACHR - metacholinu a poté agonisty P2X receptorů - ATP při různých koncentracích (10-6 – 10-4 M) ACHEI. Byla zaznamenána síla kontrakce a data vyhodnoceny statistickým programem GraphPad Prism 5.0. (San Diego, CA). U všech testovaných AChEI byla prokázána v koncentraci 10-4 M 100% inhibice kontrakce močového měchýře. I přes strukturní podobnost testovaných ACHEI byly zjištěny rozdíly v ovlivnění mAChR i purinergních receptorů.
Tato práce vznikla za finanční podpory grantu Ministerstva obrany České republiky, Dlouhodobý plán rozvoje organizace 1011- ZHN.
17
ZKUŠENOSTI ZÍSKANÉ NA LEIBNIZ-INSTITUTE OF FRESHWATER ECOLOGY AND INLAND FISHERIES V BERLÍNĚ EXPERIENCE GAINED AT THE LEIBNIZ-INSTITUTE OF FRESHWATER ECOLOGY AND INLAND FISHERIES IN BERLIN Šišperová E.
Veterinární a farmaceutická univerzita Brno, Palackého tř. 1/3, 612 42 Brno, Ú. veř. veterinářství, ochr. zvířat a welfare [2390]
Klíčová slova: pstruh duhový, oxidační stres, RT-PCR, cytochrom, superoxiddismutasa
Cílem 3 měsíčního pobytu na oddělení ekofyziologie a akvakultury v Leibniz-Institute of Freshwater Ecology and Inland Fisheries v Berlíně bylo získat zkušenosti v používání metody RT-PCR. Tuto metodu jsem využila na měření určitých parametrů oxidačního stresu u pstruha duhového (Oncorhynchus mykiss). Ryby v experimentální skupině byly krmeny komerčním krmivem Biomar pellets EFICO Alpha 717, 4.5 mm s přídavkem 2mg DON/kg krmiva. Pokus byl proveden na Veterinární a farmaceutická univerzitě v Brně, vzorky zadní ledviny a jater byly převezeny v RNA lateru do Berlína. Zde jsme vzorky homogenizovali a izolovaly RNA pomocí trizolu a převedli ji pomocí Agilent RNA 6000 Nano Kitu do cDNA. Primery vyhledané v literatuře jsme si nechali vyrobit v laboratoři TibMolBiol v Berlíně a jako house keeping gen byl použit elongation factor (EFIα). Pomocí metody RT-PCR jsme zjistili negativní vliv DON na genovou expresi cytochromu P450 1A (CYP1A) v ledvinách i játrech pstruha duhového, došlo ke snížení genové exprese CYP1A (p<0.05) v experimentální skupině v porovnání s pokusnou. Žádné statisticky významné rozdíly mezi skupinami nebyly zjištěny u genové exprese cytozolické superoxiddismutasy Cu/Zn (SOD).
Dedikace: Stáž byla financována z projektu OPVK : CZ.1.07/2.3.00/30.0053
18
MORFOLOGICKÉ A BEHAVIORÁLNE ZMENY V ANIMÁLNOM NEUROVÝVOJOVOM MODELI SCHIZOFRÉNIE Tabiová K.1,2, Micale V.2, Kučerová J.1,2, Dražanová E.3, Kořínek R.3, Starčuk Z. Jr3, Šulcová A.2 1
Farmakologický ústav, Lékařská fakulta, Masarykova univerzita, Brno
2
Středoevropský technologický institut (CEITEC), Masarykova univerzita, Brno
3
Ústav přístrojové techniky AVČ, Magnetická rezonance a Kryogenika, Brno
Schizofrénia je závažné psychotické ochorenie, ktoré narušuje schopnosť pacienta zrozumiteľne jednať a uplatniť sa v živote. Toto ochorenia má výskyt v populácii ~ 1% a vyznačuje sa prítomnosťou pozitívnych, negatívnych symptómov a kognitívneho deficitu. Štúdie založené na zobrazovacích metódach magnetickej rezonancie (MRI) preukázali taktiež štrukturálne zmeny v mozgu u psychiatrických pacientov, ako napríklad zväčšenie laterálnych ventriklov, zmenšenie objemu spánkového laloku a deficit bielej hmoty [1]. Hypotéza neurovývojového podkladu patofyziológie schizofrénie je založená na štúdiach skúmajúcich rodinnú anamnézu a históriu pacientov trpiacich schizofréniou, ktoré poukazujú na prítomnosť negatívnych prenatálnych vplyvov ako hypoxia plodu, malnutrícia a infekcia matky počas tehotenstva, ktoré v spojitosti s genetickou predispozícou v niektorých prípadoch môžu vyústiť do fenotypu schizofrénie [2]. Napriek tomu že mnohé symptómy ochorenia a zmeny v morfológii mozgu zostávajú relatívne latentné v detskom veku pacienta a prejavy psychózy sa prejavia následne až vo vyššom veku, predpokladá sa možná identifikácia vybraných neurovývojových znakov už v skoršom premorbidnom štádiu. Cieľom tejto preklinickej štúdie je určenie potenciálnych dopadov prenatálnej administrácie mitotoxínu MAM (methylazoxymethanol acetate), čo je validovaný neurovývojový model schizofrénneho fenotypu, na časné behaviorálne prejavy potkana a na morfologické zmeny mozgu za použitia širokého spektra experimentálnych metód od zobrazenia pomocou MRI, imunochemických analýz až po behaviorálne testy v rôznych štádiach vývoja jedinca. Gravidným samiciam potkana (Sprague Dawley) bola v 17. gestačný deň podávaná intraperitoneálne látka MAM (22 mg/kg) alebo vehikulum u kontrolnej skupiny [3]. K určeniu miery neurovývojovej lézie boli novonarodené jedince od prvého postnatálneho dňa vystavené sérií testov neonatálnych reflexov ako ukazovateľa dozretia mozgu, až pokiaľ nebola pozorovaná plnohodnotná prítomnosť vrodených reflexov. U dospelých jedincov oboch pohlaví boli uskutočnené behaviorálne testy širokej škály, ako napríklad test sociálnej 19
interakcie ako index prítomnosti prejavov podobných negativnym symptómom a spoznanie nového objetu a test v Y-bludisku k určeniu vplyvu na kognitívne procesy. Výsledky preukázali, že výskyt neonatálnych reflexov bol oneskorený vzhľadom na kontrolnú skupinu. V čase dospievania prejavili jedince prenatálne vystavené MAM pokles sociálneho správania na základe zníženia času interakcie. Zaujímavé je, že spomínané behaviorálne zmeny korelovali s morfologickými zmenami zachytenými pomocou MRI. Tieto výsledky možno interpretovať v zmysle, že behaviorálne abnormality v neonatálnom veku sú prejavom narušeného zrenia mozgu ako následok enviromentálnej traumy (MAM) a môžu predstavovať prediktívny faktor k behaviorálnym a morfologickým abnormalitám ústiacim k schizofrénii podobnému fenotypu. Tieto zistenia môžu v budúcnosti prispieť k vývoju nových neuroprotektívnych liečebných postupov za účelom oddialenia prejavov ochorenia a výsledky by tiež mohli napomôcť k bližšiemu pochopeniu patofyziológie schizofrénie, čo by bol potrebný podklad k vývoju efektívnej terapie už vyvinutej schizofrénie, s čo najmenšou mierou nežiadúcich účinkov.
Referencie [1] Shenton, M.E., Dickey, C.C., Frumin, M., McCarley, R.W., 2001. A review of MRI findings in schizophrenia. Schizophr Res 49, 1-52. [2] Jones, C.A., Watson, D.J.G., Fone, K.C.F., 2011. Animal model of schizophrenia. Br. J. Phramacol. 164, 1162-1194. [3] Lodge, D.J., Grace, A.A., 2009. Gestational methylazoxymethanol acetate administration: A developmental disruption model of schizophrenia. Behav. Brain Res. 204, 306-312.
20
VLIV FGF INHIBITORŮ NA CHONDROGENEZI EFFECT OF FGF INHIBITORS ON CHONDROGENESIS Veselá I.1,2, Krejčí P.3, Bálek L.3, Buchtová M.1,2 1
Oddělení anatomie, embryologie a histologie, Veterinární a farmaceutická univerzita Brno
2
Laboratoř embryologie živočichů, Ústav živočišné fyziologie a genetiky, Akademie věd ČR
3
Biologický ústav, Lékařská fakulta, Masarykova univerzita, Brno
Klíčová slova: FGF, FGFR, chondrogeneze, inhibitory FGF Členové rodiny fibroblastových růstových faktorů (FGF, fibroblast growth factor) jsou důležitými regulátory řady procesů v průběhu embryonálního vývoje. V postnatálním období se uplatňují v regulaci tkáňové homeostázy, hojení ran a obnově tkání. FGF signalizace řídí důležité biologické funkce, jako je regulace buněčné proliferace, přežívání, migrace a diferenciace buněk. Poruchy této signalizace hrají významnou roli v patogenezi různých vývojových defektů, nádorových nebo metabolických onemocnění. V embryonálním i postnatálním vývoji se FGF signalizace podílí na vzniku dlouhých kostí z chrupavky tzv. enchondrální osifikací. Pro správný růst kostí je důležitá aktivace receptoru FGFR3, která vede k inhibici proliferace chondrocytů. Mutace v genu FGFR3 jsou spojovány s mnoha onemocněními chrupavky jako je například achondroplazie či thanatoforický nanizmus. V současné době je komerčně dostupných několik syntetických inhibitorů FGFR signalizace. Cílem naší studie bylo otestovat vliv inhibitorů AZD4547 a BGJ398 na vývoj končetin. Nejprve jsme analyzovali vliv inhibitorů na růst myších tibií izolovaných z embryí stáří E18. Tyto tibie byly inkubovány po 8 dní v diferenciačním médiu, následně byly fixovány, změřena jejich délka a po odvápnění byly zality do parafínu. Délka myších tibií kultivovaných za přítomnosti FGFR inhibitorů byla statisticky významně větší než délka tibií kultivovaných v kontrolním mediu nebo za přítomnosti FGF2. Přestože přítomnost FGF2 výrazně snižuje růst tibií, tento fenotyp může být neutralizován současnou přítomností FGF a inhibitorů. Následná analýza histologických řezů tibií prokázala změny zejména v oblasti hypertrofické chrupavky růstové ploténky, kde FGFR inhibitory vedly k jejímu rozšíření. Naopak přítomnost FGF2 tuto zónu redukovala. Při současné kultivaci FGF2 s inhibitory nebyly pozorovány výrazné změny oproti kontrolním tibiím kultivovaným v médiu. Následně byly inhibitory v různých koncentracích injikovány do pravého končetinového pupene kuřecích embryí pro jejich testování v in vivo systému. Embrya byla inkubována po 10-12 dní 21
po aplikaci inhibitoru a po fixaci v 100% etanolu byly analyzovány změny morfologie a případné abnormality vývoje skeletu. Inhibitory indukovaly zkrácení a deformace vyvíjejícího se křídla, přičemž embrya přežívala vysoké koncentrace inhibitorů bez zřetelného vlivu na jejich mortalitu. Tato práce byla finančně podpořena OP VK (CZ.1.074/2.3.00/30.0053) a GACR (1431540S).
22
PERSPEKTIVA HEPATOPROTEKTIVNÍCH ÚČINKŮ AKTIVÁTORŮ A INHIBITORŮ SIRT1 A AMPK A JEJICH KLINICKÝ PŘÍNOS THE PERSPECTIVE OF HEPATOPROTECTIVE EFFECTS OF SIRT1/AMPK ACTIVATORS AND INHIBITORS AND ITS CLINICAL RELEVANCE Wojnarová L., Kemelo MK.
Farmakologický ústav 1. LF UK, Albertov 4, Praha 2, 128 00
Klíčová slova: kyslíkové radikály, resveratrol, hepatoprotektivní látky, SIRT1, AMPK
V klinické praxi se lékaři často setkávají s mnoha pacienty trpícími různými jaterními chorobami a to jak akutními tak chronickými. Dříve bylo hlavním léčebným opatřením podávání tzv. hepatoprotektivních látek a dodržování tzv. jaterní diety. V dnešní době je však snaha od tohoto nespecifického způsobu léčby ustupovat a cílit léčbu na samu příčinu jaterní choroby. Výzkum se zaměřuje na rozpoznání jednotlivých molekulárních mechanismů jaterního poškození a jejich možného ovlivnění. Významnou roli v procesu jaterního poškození hraje často zvýšená tvorba reaktivních forem kyslíku (ROS). Pokud jsou ROS produkovány v nadbytku, mohou způsobit náhodné poškození biologických molekul a následnou ztrátu funkce a smrt buňky. Předmětem výzkumu se stávají přirozeně se vyskytující sloučeniny rostlinného původu vykazující cytoprotektivní účinky. Nejvíce studovanou látkou posledních let se stal resveratrol. Tato malá polyfenolická sloučenina vykazuje v mnoha studiích cytoprotektivní, antioxidační a protizánětlivé účinky. Předpokládá se, že jedním z mechanismů těchto příznivých účinků resveratrolu je aktivace sirtuinu 1 („silent information regulator T1“) a/nebo proteinové kinázy AMPK („adenosine 5´monophosphate-activated protein kinase“). Na experimentálním modelu akutního jaterního selhání
vyvolaného
podáním
hepatotoxicky
a
prozánětlivě
působících
látek
(lipopolysacharid+D-galaktosamin) jsme skutečně prokázali hepatoprotektivní účinky resveratrolu a jemu podobných látek rostlinného původu (kvercetin, kurkumin). Za stejných podmínek jsme také studovali účinky inhibitorů SIRT1 a AMPK. Dosavadní výsledky našeho výzkumu naznačují, že především modulace aktivity SIRT1 hraje úlohu v procesu hepatoprotekce. Využití syntetických aktivátorů SIRT1 a AMPK o malé molekule může přispět k dalšímu objasnění role SIRT1 a AMPK a představuje naději pro nalezení specifičtější léčby pro pacienty s jaterními chorobami. Dedikace: PRVOUK-P25/LF1/2, GAUK 916314. 23
ÚČINKY CIPROFLOXACINU NA RANÁ VÝVOJOVÁ STÁDIA KAPRA OBECNÉHO (CYPRINUS CARPIO) THE EFFECTS OF CIPROFLOXACIN ON EARLY LIFE STAGES OF COMMON CARP (CYPRINUS CARPIO) Živná D., Plhalová L., Chromcová L., Blahová J., Maršálek P., Štěpánová S., Svobodová Z.
Ústav veřejného veterinářství, ochrany zvířat a welfare, Fakulta veterinární hygieny a ekologie, Veterinární a farmaceutická univerzita Brno
Klíčová slova: léčiva, antibiotika, lipidní peroxidace, antioxidační enzymy, biotransformační enzymy
Fluorochinolony představují skupinu širokospektrálních antibiotik používaných jak v humánní tak veterinární medicíně. Jedním z nejpoužívanějších fluorochinolonových antibiotik je ciprofloxacin (CIP), jehož rezidua jsou často nacházena v povrchových vodách. Proto byla provedena studie, jejímž cílem bylo hodnocení subchronických účinků CIP na raná vývojová stádia kapra obecného (Cyprinus carpio). Na základě metodiky OECD 210 byl na oplozených jikrách kapra obecného (Cyprinus carpio) proveden embryolarvální test toxicity. Test probíhal 33 dní s obměnou roztoků po 12 hodinách. Testované koncentrace CIP byly 5, 150, 500, 1000 and 3000 µg/l. Larvální stádia byla během testu krmena naupliemi žábronožky solné (Artemia salina) ad libitum 2x denně. V průběhu testu (6., 12., 19., 26. a 33. den) byly odebírány vzorky na posouzení mortality, kulení, vývojového stádia, růstu a výskytu patomorfologických změn. Zbylé ryby byly na konci testu utraceny a jejich tkáně použity především pro stanovení vybraných markerů oxidativního stresu. Byla hodnocena aktivita glutathion S-transferázy, glutathionperoxidázy,
glutathionreduktázy, katalázy a koncentrace produktů lipidní
peroxidace. Bylo zjištěno, že CIP ovlivňuje aktivitu antioxidačních a biotransformačních enzymů a míru lipidní peroxidace ve tkáních. Tyto změny byly zaznamenány i v nejnižších testovaných koncentracích. Dále byl zjištěn zvýšený výskyt morfologických anomálií, které zahrnovaly především tvarové deformity páteře.
Práce byla financována z projektu IGA VFU 4/2014/FVHE.
24
Texty uvedené v tomto sborníky neprošly jazykovou úpravou. Za jejich odbornou stránku odpovídají autoři.
Akce je konána v rámci řešení projektu CZ.1.07/2.3.00/30.0053 Farmakotoxikologické hodnocení nově syntetizovaných (izolovaných) látek jako nástroj integrace preklinických disciplín na VFU Brno
25
Kolektiv autorů KVĚTINŮV DEN – MEZIOBOROVÝ SEMINÁŘ MLADÝCH FARMAKOLOGŮ A TOXIKOLOGŮ, Brno 2014 Typograficky připravili doc. MVDr. Pavel Suchý, Ph.D. a MUDr. Marta Chalupová Obálku navrhla doc. RNDr. Ladislava Bartošová, Ph.D. Text neprošel jazykovou korekturou Vydal a vytiskl Tribun EU Cejl 892/32, 602 00 Brno V Tribunu EU vydání 1. Brno 2014 ISBN www. knihovnicka.cz 26
