Várandós nők Streptococcus agalactiaeszűrése

Várandós nők Streptococcus agalactiaeszűrése MALDI-TOF MS módszerrel

Pappné Ábrók Marianna, Arcson Ágnes, Urbán Edit, Deák Judit Szegedi Tudományegyetem, Általános Orvostudományi Kar

Klinikai Mikrobiológiai Diagnosztikai Intézet

2015. március 05.

Streptococcus agalactiae klinikai jelentősége    

A Streptococcus agalactiae (S. agalactiae, B-csoportú Streptococcus, GBS) súlyos invazív fertőzéseket okozhat újszülöttekben, valamint nőkben a terhesség alatt és a szülés utáni időszakban. A neonatalis sepsis és meningitis egyik leggyakoribb kórokozója: 0,5-3 eset/1000 élve születés Újszülöttkori infekciók  korai fertőzés: 0-6 napos korig  késői fertőzés: 7 nap-4 hónap (lehet nosocomialis is) Kockázati tényezők:  anyai kolonizáció  ismeretlen GBS kolonizációs státusz  jelen terhesség alatt GBS bakteriuria  korai burokrepedés >18 óra– infekció  korábbi terhességből származó újszülött invazív GBS infekcióban szenvedett  37. hétnél korábbi születés  intrapartum hőmérséklet >38 oC  koraszülés veszélye Prevention of perinatal group B streptococcal disease. 2002 and 2010 Revised guidelines from CDC. Recommendations and Reports 51, RR-11

Streptococcus agalactiae szűrés CDC ajánlás: 1996., 2002., 2010. Cél: Megelőzés 1996. 



„Risk based ” szemlélet: bármely korai fertőzésre hajlamosító tényező meglétekor – intrapartum AB profilaxis Tenyésztésen alapuló szemlélet: S. agalactiae kolonizáció intrapartum AB profilaxis

2002.  Ha nincs tenyésztési eredmény, akkor a „risk based” alapján  5 hétnél nem régebbi negatív tenyésztési eredmény esetén nem szükséges AB profilaxis (ha nincs egyéb rizikó tényező) 2010.  Krómagarok, PCR  Vizelet : GBS ≥104 cfu/mL koncentrációban  Penicillin dózis Prevention of perinatal group B streptococcal disease. 2002 and 2010 Revised guidelines from CDC. Recommendations and Reports 51, RR-11

Korai GBS infekciók az USA-ban Group B Strep Association formed 1st ACOG & AAP statements CDC draft guidelines published

Consensus guidelines Universal screening

Forrás:www. cdc.gov

2014

S. agalactiae kóroki szerepe a hazai Neonatalis Intenzív Centrumok (NIC) 2012. évi adatgyűjtése alapján 400

376 eset 350

300

244 eset 250

347

200

150

132 eset 236

100 111 50

0

21 (15,9%) sepsis

8 (3,3%) connatalis pneumonia

29 (7,7%) Összesen

Sziller és mtsi., Orvosi Hetilap, 2014. 155. évfolyam, 29. szám, 1167–1172.

GBS-szűrés  35-37 héten: hüvely, rectalis minta  Mintafeldolgozás   

szelektív dúsító (pl. Todd-Hewitt boullion + colistin, nalidixsav) -inkubáció 18-24óra 35-37 C, 5% CO2 kioltás: birkavéres agar /szelektív kromogén táptalajok (pl. Chromagar StrepB,Uriselect) Inkubáció: 24 (48) óra, 35-37 C, 5% CO2

 GBS-pozitív minták:  antibiotikum érzékenységi vizsgálat Prevention of perinatal group B streptococcal disease. 2002 and 2010 Revised guidelines from CDC.

Várandós asszonyok körében 2013-2014-ben végzett S. agalactiae szűrések tapasztalatai SZTE KMDI A vizsgált időszakban 11308 terhes nő hüvely, ill. cervix mintáját teszteltük tenyésztésen alapuló módszerrel Pozitív GBSszűrés 1522 (13,5%)

GBS-szűrés negatív GBS-szűrés pozitív

Negatív GBSszűrés 9786 (86,5%)

GBS szűrés SZTE KMDI: 2005. májusa óta

MALDI-TOF módszer alkalmazásának lehetőségei a várandós nők körében végzett S. agalactiae szűrés során 1. 2.

A kitenyészett baktériumok gyors identifikálása direkt módszerrel. 18-24 órán át inkubált szelektív Todd-Hewitt dúsítók üledékéből történő hangyasavas extrakció után MALDI-TOF MS

1.

2. centrifugálás extrakció

MALDI-TOF módszer alkalmazásának lehetőségei a várandós nők körében végzett S. agalactiae szűrés során

Ábrók és mtsai, submitted 2015

Szelektív dúsítóból végzett MALDITOF MS analízisek eredményei

Hagyományos GBSszűrés

MALDI-TOF MS

GBS-pozitív

GBSnegatív

GBS-pozitív

20

0

GBS-negatív

7

73

 100 minta vizsgálata alapján  GBS-negatív: 73 minta.  (E. faecalis 39; Lactobacillus sp. 12, alfahaemolyzáló Streptococcus 6, Staphylococcus sp. 6, Bacillus sp. 1 ; Candida sp. 1; Gram-negatív baktérium; not reliable identification 3, no peaks found 2esetben; log score-ok: 1.443-2.422)

MALDI-TOF módszer alkalmazásának lehetőségei a várandós nők körében végzett S. agalactiae szűrés során

 Az esetek 93%-ban a hagyományos szűréssel megegyező eredményt kaptunk.  Az eltérések oka: egyéb baktérium domináns jelenléte a mintában.  Pozitív-negatív prediktív érték meghatározása:  PPV : 100%  NPV: 91%  Specifitás – szenztivitás meghatározása:  Specifitás : 100%  Szenzitivitás : 74,1%  A vizsgálati anyag beérkezése után 24 órával megállapíthatjuk a GBS kolonizáció tényét.

Összefoglalás  A várandós nő hüvelyi/rectalis Streptococcus agalactiae kolonizációja rizikó tényező az invazív S. agalactiae fertőzés kialakulásában, ezért jelenlétének kimutatása és az izolált törzsek antibiotikum érzékenységének vizsgálata egyaránt fontos a megfelelő intrapartum antibiotikum profilaxis, valamint az újszülöttek kezelésének megválasztásához.  A MALDI-TOF MS megbízhatóan alkalmazható a kitenyészett törzsek identifikálására.  18-24 órán át inkubált szelektív Todd-dúsítók üledékéből történő hangyasavas extrakció után végzett MALDI-TOF analízis segítségével a vizsgálati anyag beérkezése után 24 órával megállapíthatjuk a GBS kolonizáció tényét.  Olcsóbb, mint a PCR vizsgálatok, illetve szelektív „ krómagarok” használata.  Nagyszámú mintán is alkalmazható.  ST-1 és ST-17 B-csoportú Streptococcus-klónok detektálásának lehetősége.

 Kutatások: antibiotikum –érzékenységi vizsgálatok, clindamycin rezisztencia meghatározása MALDI-TOF MS módszerrel

Köszönöm a megtisztelő figyelmet!