Rapid-VIDITEST
Streptococcus pneumoniae (Jednokrokový kazetový test pro in vitro detekci antigenu Streptococcus pneumoniae v moči) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail:
[email protected], Web: www.vidia.cz
POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Streptococcus pneumoniae je kvalitativní rychlý test, který je určený pro detekci antigenu Streptococcus pneumoniae v moči a pro diagnostiku pneumonie, meningitidy a otitis media. Vzorek moči není nutné ředit. Pouze pro laboratorní použití. ÚVOD: Streptococcus pneumoniae (S. pneumoniae) je grampozitivní bakterie (1), která byla poprvé izolována Pasteurem v roce 1881 ze slin od pacienta se vzteklinou. Chemická struktura a antigenicita pneumokokového kapsulárního polysacharidu a jeho asociace s virulencí a jeho role u onemocnění člověka byla objasněna v období 1915 až 1945. Bakterie je anaerobní, lancetovitého tvaru, šířící se přímým kontaktem z člověka na člověka prostřednictvím respiračních kapiček. U člověka způsobuje závažné onemocnění. Odhaduje se, že asi 62% invazivních onemocnění na celém světě je přičítáno deseti nejčastějším serotypům (2). S. pneumoniae kolonizuje tkáně horního respiračního traktu a způsobuje vážnou pneumonii a mírnou nebo akutní bolest ucha či otitidu. Pneumokoky způsobují 13% až 19% všech případů bakteriálních meningitid v USA (4). Jedna čtvrtina pacientů s pneumokokovou meningitidou měla také pneumonii. Klinické symptomy jsou obecně stejné jako jsou u jiných purulentních bakteriálních meningitid a zahrnují bolest hlavy, letargii, zvracení, podrážděnost, horečku, ztuhlost šíje, kraniální příznaky, záchvaty a kóma. Procento fatálních případů u pneumokokové meningitidy se pohybuje okolo 30% a může být až 80% u starých lidí. Bakteriální pneumonie je zodpovědná za 12% – 15% invazivních pneumokokových onemocnění u dětí do dvou let a v USA se S. pneumoniae stal hlavním původcem bakteriálních meningitid u dětí mladších 5 let. Antibiotická léčba je efektivní, ačkoliv už je identifikováno více penicilin-rezistentních kmenů. Je dostupných několik vakcín s různou účinností závisejících na věku pacienta nebo jestli mají pacienti nějakou chronickou nemoc nebo imunodeficienci. Nicméně bylo prokázáno, že očkování poskytuje ochranu proti pneumokokové pneumonii (6).
1
PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Streptococcus pneumoniae je kvalitativní rychlý test pro detekci antigenu Streptococcus pneumoniae bez ředění vzorku moči. Metoda zahrnuje unikátní kombinaci konjugátu monoklonální protilátky s barvičkou a monoklonální protilátku na pevné fázi namířené proti různým epitopům, tak aby byla selektivně identifikována bakterie Streptococcus pneumoniae s vysokým stupněm citlivosti. Po přidání vzorku se konjugát protilátka-barvička váže na antigen S. pneumoniae a vzniká komplex protilátka-antigen. Tento komplex se váže na imobilizovanou protilátku proti S. pneumoniae v oblasti testovací linky (T) a vzniká růžově zbarvená linka. Když ve vzorku není přítomen S. pneumoniae, neobjeví se žádná linka v oblasti testovací linky. Reakční směs pokračuje vzlínáním po membráně. Nenavázaný konjugát se váže na reagencie v oblasti kontrolní linky a vzniká tak růžově zbarvená linka, která indikuje správnou funkci reagencií a správné provedení testu. OBSAH SOUPRAVY: -
testovací kazety jednorázové pipety návod k použití
POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: -
nádoba na sběr vzorků moči
SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Vzorky odebírejte do čistých odběrových nádob bez detergentu. Pro optimální detekci se preferuje první ranní moč, protože tento vzorek často obsahuje vyšší koncentraci bakterií. Pokud není test proveden okamžitě, vzorek by měl být skladován v lednici (2-8°C) po dobu 24 hodin. V tomto případě před testem vzorek vytemperujte na laboratorní teplotu. Pokud je testování možné za více než 24 hodin, vzorky by se měly uchovávat zmrazené. Po rozmražení nechte vzorky před testem vytemperovat na laboratorní teplotu. Vyhněte se opakovanému zmrazování a rozmrazování. PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte vzorky a testovací kazety vytemperovat na laboratorní teplotu 1. Vyjměte testovací kazetu z obalu. 2. Označte testovací kazetu jménem pacienta nebo číslem kontroly. 3. Nakapejte 4 kapky (150 µl) vzorku moči do okénka pro vzorek (S) tak, že pipetu držte vertikálně. 4. Po 15 minutách odečtěte výsledek. Výsledek neinterpretujte po více než 15 minutách.
2
INTERPRETACE VÝSLEDKŮ: POZITIVNÍ: Kromě barevné linky v oblasti kontrolní linky (C) se objeví také barevná linka v testovací oblasti (T). NEGATIVNÍ: Objeví se pouze jedna barevná linka v kontrolní oblasti (C). V testovací oblasti (T) se neobjeví žádná linka. NEPLATNÝ: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně (C) neobjeví linka. V tomto případě opakujte test, nebo odeberte nový vzorek a znovu otestuje.
PLATNOST TESTU: Interní kontrola provedení testu je zahrnuta v testovací kazetě: Barevná linka objevující se v oblasti kontrolní linky (C) je vnitřní kontrolou provedení testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. OMEZENÍ TESTU: 1. Rapid-VIDITEST Streptococcus pneumoniae je skríningový test na přítomnost Streptococcus pneumoniae ve vzorcích moči. 2. Podobně jako u jiných diagnostických metod by měl lékař hodnotit data získaná tímto testem s ohledem na další klinické informace včetně kultivace, pokud výsledky nejsou konzistentní s klinickými projevy. 3. Test nerozlišuje mezi kolonizovanými a infikovanými jedinci. 4. Rapid-VIDITEST Streptococcus pneumoniae nemůže rozlišit různé pneumokokové infekce potenciálně indukované Streptococcus pneumoniae.
3
CHARAKTERISTIKY TESTU: Citlivost a specifita Diagnostická citlivost a specifita Byla provedena srovnávací studie mezi rychlotestem BinaxNOW ® Streptococcus pneumoniae a Rapid-VIDITEST Streptococcus pneumoniae na panelu 16 čerstvých vzorků moči a 42 skladovaných vzorků moči. Rapid-VIDITEST Streptococcus pneumoniae vs BinaxNOW ® test: BinaxNOW ® Streptococcus pneumoniae (referenční metoda) + Suma Rapid-VIDITEST + 26 4 30 Streptococcus 7 21 28 pneumoniae Suma 33 25 58 Z tabulky vyplývá diagnostická citlivost Rapid-VIDITEST Streptococcus pneumoniae 79% (26/33) a specifita 84% (21/25) ve srovnání s referenční metodou. Celková shoda je 81% (47/58) a je dostatečná i přes to, že dlouhé skladování 44 vzorků (33 pozitivních a 9 negativních) mohlo způsobit degradaci antigenu Streptococcus pneumoniae. Analytická citlivost Kultura Streptococcus pneumoniae byla několikrát ředěna ve vzorcích negativní moči. Tato ředění byla následně testována na testech BinaxNOW ® Streptococcus pneumoniae a Rapid-VIDITEST Streptococcus pneumoniae. Výsledky jsou prezentovány v následující tabulce a ukazují u obou shodnou analytickou citlivost. Ředění Streptococcus pneumoniae
1/50000 1/20000 1/10000 1/1000 1/100 1/10
Výsledky Rapid-VIDITEST Streptococcus pneumoniae + + + + +
BinaxNOW ® Streptococcus pneumoniae + + + + +
Křížová reaktivita Různé kmeny bakterií byly testovány použitím Rapid-VIDITEST Streptococcus pneumoniae, aby se určilo, jestli dochází k nespecifické reakci (křížové reaktivitě). Výsledky jsou v následující tabulce. Skupina Streptococcus pneumoniae kapsulárního typu (8) Strep A, B, C, D, E, F, G, H
Výsledky pozitivní negativní
4
Staphylococcus Aureus Bacillus subtitilis
negativní negativní
Reprodukovatelnost intra-assay Reprodukovatelnost (intra-assay) byla hodnocena testováním replikátů 5 naředěných vzorků s různou koncentrací Streptococcus pneumoniae. Všechny série ukazují konvergentní výsledky v souladu s očekávanými výsledky. Reprodukovatelnost mezi šaržemi Rapid-VIDITEST Streptococcus pneumoniae byla 100%. SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při pokojové teplotě 4 - 30°C. Test je stabilní do data exspirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: -
Pouze pro profesionální in vitro diagnostiku. Čtěte pozorně návod k použití před provedením testu. Nepoužívejte po uplynutí exspirační doby. Nepoužívejte, pokud je poškozena obal kazety. Nejezte, nepijte, nekuřte v místě, kde nakládáte se vzorky a se soupravami. Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem. Dodržujte u všech postupů zavedené opatření pro mikrobiální riziko, odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy. Používejte ochranné pomůcky jako laboratorní plášť, jednorázové rukavice, ochranu očí v průběhu nakládání se vzorky. Vlhkost a teplota může nepříznivě ovlivnit výsledky testu.
REFERENCE: 1. AlonsoDeVelasco, E., Verheul,A.F.,Verhoen, J, Snippe, H. Streptococcus pneumoniae: virulence factors, pathogenesis, and vaccines. Microbiological Reviews, 59 (4), 591 – 603, 1995. 2. CDC. Updated recommendations for preventionof invasive pneumococcal disease among adults using the 23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine (PPSV23). MMWR, 59 (34) : 1102-1106, 2010. 3. Kadioglu, A., Weiser, J.N., Paton, J.C., and Andrew, P.W. The role of Streptococcus pneumoniae virulence factors in host respiratory colonization and disease. Nature Reviews, Microbiology, 6 (4) doi: 10.1038/nrmicro1871, 2008. 4. Robinson, K.A., Baughman, W., Rothrock, G. Epidemiology of invasive Streptococcus pneumoniae infections in the United States, 1995-1998. Opportunities for prevention in the conjugate vaccine era. JAMA, 285 : 1729-1735, 2001. 5. Whitney, C.G., Farley, M.M., Hadler, J. et al. Increasing prevalence of multidrug-resistant Streptococcus pneumoniae in the United States. N. Engl. J. Med., 343 : 1917-1924, 2000. 6. Tsai, C.J., Griffin, M.R., Nuorti, J.P. et al. Changing epidemiology of pneumococcal meningitis after the introduction of pneumococcal conjugate vaccine in the United States. Clin. Infect. Dis., 46 : 1664-1672, 2008.
5
POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro
Číslo šarže (LOT)
Datum exspirace
Výrobce
Poslední revize tohoto návodu: 09/2015
6
