UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ KATEDRA FARMAKOGNOZIE

UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ KATEDRA FARMAKOGNOZIE

STANOVENÍ KATECHINŮ A FENYLPROPANOVÝCH KYSELIN VE VYBRANÝCH DOPLŇCÍCH STRAVY Rigorózní práce

Mgr. ŠÁRKA KŘÍŽOVÁ

Vedoucí rigorózní práce: PharmDr. Jan Martin, Ph.D.

Hradec Králové 2015

Prohlášení „Prohlašuji, že tato práce je mým původním autorským dílem, které jsem vypracovala samostatně (pod vedením konzultanta). Veškerá literatura a další zdroje, z nichž jsem při zpracování čerpala, jsou uvedeny v seznamu použité literatury a v práci řádně citovány. Práce nebyla využita k získání jiného nebo stejného titulu.“ V Hradci Králové dne 20. 3. 2015 ……………………………. Mgr. Šárka Křížová 2

Poděkování Ráda bych poděkovala PharmDr. Janu Martinovi, Ph.D. za cenné rady a konzultace, které mi poskytl při vypracování této rigorózní práce. Děkuji i celému kolektivu na katedře farmakognozie za ochotu a pomoc při vypracování této rigorózní práce.

3

OBSAH 1.

Úvod ................................................................................................................. 6

2.

Cíl práce ........................................................................................................... 8

3.

Teoretická část.................................................................................................. 9 3.1.

Doplňky stravy.......................................................................................... 9

3.1.2.

Legislativa vztahující se k doplňkům stravy ................................... 10

3.1.3.

Uvádění doplňků stravy do oběhu ................................................... 11

3.1.4.

Požadavky na složení doplňků stravy ............................................. 12

3.1.5.

Požadavky na balení doplňků stravy ............................................... 13

3.1.6.

Označování doplňků stravy ............................................................. 13

3.1.7.

Zdravotní a výživová tvrzení ........................................................... 15

3.1.8.

Rozdíly mezi doplňkem stravy a léčivým přípravkem .................... 17

3.2.

Třísloviny................................................................................................ 19

3.2.1.

Zelená káva...................................................................................... 20

3.2.2.

Zelený čaj ........................................................................................ 21

3.2.3.

Guarana ........................................................................................... 23

3.3.

Obsahové látky charakteru katechinů a fenylpropanových kyselin ....... 24

3.3.1.

Katechin (C) .................................................................................... 24

3.3.2.

Epikatechin (EC) ............................................................................. 24

3.3.3.

Epikatechin gallát (ECG) ................................................................ 25

3.3.4.

Epigallokatechin (EGC) .................................................................. 26

3.3.5.

Epigallokatechin gallát (EGCG) ..................................................... 26

3.3.6.

Gallokatechin (GC) ......................................................................... 27

3.3.7.

Gallokatechin gallát (GCG)............................................................. 28

3.3.8.

Kyselina gallová .............................................................................. 29

3.3.9.

Kyselina kávová .............................................................................. 29

3.3.10. Kyselina chlorogenová .................................................................... 30 4.

Experimentální část ........................................................................................ 31 4.1.

Použité chemikálie, materiály, přístroje a vybavení ............................... 31

4.1.1.

Chemikálie....................................................................................... 31

4.1.2.

Zkoumané přípravky a materiály .................................................... 31

4

4.1.3.

5.

Přístroje a vybavení ......................................................................... 32

4.2.

Příprava vzorků ....................................................................................... 32

4.3.

HPLC analýza ......................................................................................... 33

4.3.1.

Charakteristika HPLC ..................................................................... 33

4.3.2.

HPLC analýza.................................................................................. 33

4.3.3.

Validace HPLC analýzy .................................................................. 35

4.4.

Statistické zpracování výsledků .............................................................. 36

4.5.

Informace o přípravcích uváděné výrobcem .......................................... 37

4.5.1.

MedPharma – Zelený čaj ................................................................. 37

4.5.2.

Swiss – Tree3Chlorella ................................................................... 38

4.5.3.

Lipoxal Xtreme II ............................................................................ 39

4.5.4.

Strong Nature - Zelená káva ............................................................ 41

4.5.5.

Vieste Zelená káva extra ................................................................. 42

4.5.6.

Fit and Slim GC 1000 Zelená káva ................................................. 43

4.5.7.

GS C.L.A. 2000 se zeleným čajem ................................................. 44

4.5.8.

Bioaktivní C.L.A. Booster ............................................................... 45

Výsledky......................................................................................................... 47 5.1.

Vyhodnocení jednotlivých vzorků.......................................................... 48

5.1.1.

MedPharma – Zelený čaj ................................................................. 48

5.1.2.

Swiss – Tree3Chlorella ................................................................... 49

5.1.3.

Lipoxal Xtreme II ............................................................................ 50

5.1.4.

Strong Nature - Zelená káva ............................................................ 51

5.1.5.

Vieste Zelená káva extra ................................................................. 52

5.1.6.

Fit and Slim GC 1000 Zelená káva ................................................. 53

5.1.7.

GS C.L.A. 2000 se zeleným čajem ................................................. 54

5.1.8.

Bioaktivní C.L.A. Booster ............................................................... 55

5.2.

Souhrnné vyhodnocení ........................................................................... 56

6.

Diskuse ........................................................................................................... 59

7.

Závěr............................................................................................................... 64

8.

Literatura ........................................................................................................ 65

9.

Abstrakt .......................................................................................................... 70

10. Abstract .......................................................................................................... 71 11. Obrazová příloha ............................................................................................ 72 5

1. ÚVOD Trh s doplňky stravy se silně rozvíjí nejen v České republice, ale i po celém světě. Vzrůstá tak i počet spotřebitelů, kteří užívají doplňky stravy. Ovšem čím větší množství doplňků stravy se na trhu vyskytuje, tím problematičtější bývá vyznat se mezi jednotlivými přípravky a zvolit ten správný. Zprvu je nutné vymezit tyto pojmy - doplněk stravy, potravinový doplněk a léčivo. Protože pokud budeme hovořit o doplňcích stravy, nehovoříme o lécích, nýbrž o výrobcích využívajících látky přírodního původu nebo přírodně identické, které nejsou zařazeny do seznamu léčiv. Tyto termíny jsou zaměňovány zejména u laické veřejnosti, která nerozlišuje rozdíl mezi doplňkem stravy a lékem, a z lékárny si vždy odnáší jen „lék“. Zde často vzniká kámen úrazu. Definice doplňku stravy vychází jednak ze směrnice EU a jednak ze zákona o potravinách. Doplňky stravy jsou považovány za potraviny určené k přímé spotřebě, jejich účelem je doplňovat běžnou stravu. Od potravin pro běžnou spotřebu se odlišují vysokým obsahem vitamínů, minerálních látek nebo jiných látek s nutričním či fyziologickým účinkem. Cílem je doplnit běžnou stravu na úroveň příznivě ovlivňující zdravotní stav konzumenta. 14) Potravní doplňky jsou nutriční faktory (aminokyseliny, vitamíny, minerální látky, atd.) s významným biologickým účinkem, lze s nimi obohacovat běžné potraviny nebo potraviny určené pro zvláštní výživu. Doplněk stravy tedy může obsahovat jeden i více potravních doplňků. 14) Léčivem se podle zákona o léčivech rozumí léčivá látka nebo jejich směs anebo léčivé přípravky. Léčivá látka je jakákoliv látka nebo směs látek, která je určená k tomu, aby byla součástí léčivého přípravku, která způsobuje jeho účinek. Tento účinek je zpravidla farmakologický, imunologický nebo metabolický. Léčivým přípravkem se rozumí jakákoliv látka nebo kombinace látek, kterou lze použít u lidí nebo podat lidem, nebo použít u zvířat či podat zvířatům, a to buď za účelem obnovy, úpravy či ovlivnění fyziologických funkcí prostřednictvím účinku farmakologického, imunologického nebo metabolického, nebo za účelem stanovení lékařské diagnózy. 45) U doplňku stravy není deklarována účinnost. Doplněk stravy nesmí poškodit zdraví, musí tedy být zdravotně nezávadný a bezpečný a musí být 6

vhodně označen dle platné legislativy. Cílem doplňků stravy je doplnit to, co v danou chvíli našemu organismu chybí ve stravě, a to z různých důvodů. Pestrá a vyvážená strava by za běžných podmínek měla dodávat organismu veškeré potřebné živiny pro správný růst a vývoj a měla by přispívat k udržení dobrého zdraví. Ovšem ne každý má v dnešní uspěchané době pestrou a vyváženou stravu a proto se doplňky stravy stávají nedílnou součástí našich jídelníčků. Tato rigorózní práce je zaměřena na dnes poměrně populární skupinu doplňků stravy, které podle výrobců přispívají k regulaci tělesné hmotnosti, podporují energetický metabolismus a celkově přispívají k detoxikaci organismu. Tato skupina je poměrně rozmanitá, ať už z hlediska obsahových látek a jejich množství, tak z hlediska ceny. Některé doplňky stravy je možno pořídit cca za 100 Kč, ale některé snadno překročí i hranici tisícikoruny. Často zde čelíme otázkám, jestli je daný výrobek skutečně tak jedinečný nebo jestli se farmaceutické firmy tímto způsobem jen snadno obohacují. Do této práce byly vybrány přípravky přibližně podobného složení, v cenové relaci cca 200 - 600 Kč. Klienti u této kategorie doplňků stravy mívají často přehnaná očekávání. Spoléhají na to, že spolknou zázračnou tobolku a kila půjdou jednoduše dolů. Tak jednoduché to samozřejmě není. Celkově je nutno upravit životní styl a dodržovat režimová opatření, zejména dostatek pohybu, zdravou stravu a dostatek tekutin. Z přírodních zdrojů podporujících redukci tělesné hmotnosti se uplatňují zejména zelený čaj, zelená káva, guarana, ale i vláknina. Stimulují energetický metabolismus a spalování tuků, působí antioxidačně nebo mohou navozovat pocit sytosti. Nadváha a obezita nejsou jen kosmetický problém, jak si mnozí myslí, ale jedná se o celosvětový problém, který způsobuje řadu dalších onemocnění. Obezita je multifaktoriální komplexní onemocnění, které je ovlivněno životním stylem, stravovacími návyky, životním prostředím, ale i genetickými faktory. Obezita vychází z energetické nerovnováhy mezi nadměrným příjmem kalorií a nedostatečným výdejem energie, za který může zejména sedavý způsob života a nedostatek fyzické aktivity. Jistou roli hraje i genetika. Obezita je spojena s metabolickými i chronickými onemocněními, jako je diabetes 2. typu, kardiovaskulární onemocnění, hypertenze, respirační onemocnění, způsobuje jisté ortopedické komplikace, ale i některé onkologické komplikace. 43)

7

2. CÍL PRÁCE Tato rigorózní práce s názvem „Stanovení katechinů a fenylpropanových kyselin ve vybraných doplňcích stravy“, je zaměřena na komerčně dostupné doplňky stravy s obsahem vybraných tříslovin a fenylpropanových kyselin, popisuje jejich legislativu a zhodnocení z hlediska obsahových látek. Cílem této rigorózní práce bylo:




vybrat doplňky stravy s deklarovaným obsahem katechinových tříslovin a fenylpropanových kyselin,




shromáždit informace o těchto doplňcích stravy a jejich obsahových látkách,




připravit extrakty z vybraných doplňků stravy a stanovit katechiny a fenylpropanové kyseliny,




zhodnotit vybrané doplňky stravy z hlediska obsahu biologicky aktivních látek.

8

3. TEORETICKÁ ČÁST

3.1.

Doplňky stravy

3.1.1. Definice doplňků stravy: Nejlépe vystihuje definici doplňků stravy zákon o potravinových a tabákových výrobcích a směrnice Evropského parlamentu a Rady č. 2002/46/ES. Zákon č. 139/2014 Sb., kterým se mění zákon č. 110/1997 Sb., o potravinách a tabákových výrobcích a o změně a doplnění některých souvisejících zákonů (dále jen „zákon o potravinách“), charakterizuje doplněk stravy následovně: „Doplněk stravy je potravina, jejímž účelem je doplňovat běžnou stravu a která je koncentrovaným zdrojem vitaminů a minerálních látek nebo dalších látek s nutričním nebo fyziologickým účinkem, obsažených v potravině samostatně nebo v kombinaci, určená k přímé spotřebě v malých odměřených množstvích.“ 11) Směrnice Evropského parlamentu (EP) a Rady (R) č. 2002/46/ES o sbližování právních předpisů členských států týkajících se doplňků stravy, charakterizuje doplňky stravy následovně: „Doplňky stravy jsou potraviny, jejichž účelem je doplňovat běžnou stravu a které jsou koncentrovanými zdroji živin nebo jiných látek s výživovým nebo fyziologickým účinkem, samostatně nebo v kombinaci, jsou uváděny na trh ve formě dávek, a to ve formě pastilek, tablet, tobolek, pilulek či v jiných podobných formách, dále ve formě sypké, jako kapalina v ampulích, v lahvičkách s kapátkem a v jiných podobných formách kapalných nebo sypkých výrobků určených k příjmu v malých odměřených množstvích.“ 55)

9

3.1.2. Legislativa vztahující se k doplňkům stravy:


Zákon č. 139/2014 Sb., kterým se mění zákon č. 110/1997 Sb., o potravinách a tabákových výrobcích a o změně a doplnění některých souvisejících zákonů, ve znění pozdějších předpisů;




Zákon č. 378/2007 Sb., o léčivech a o změnách některých souvisejících zákonů;




Směrnice Evropského parlamentu a Rady 2002/46/ES o sbližování právních předpisů členských států týkajících se doplňků stravy;




Nařízení Evropského parlamentu a Rady č. 1924/2006/ES o výživových a zdravotních tvrzeních při označování potravin;




Vyhláška č. 54/2004 Sb., o potravinách určených pro zvláštní výživu a o způsobu jejich použití;




Vyhláška č. 113/2005 Sb., o způsobu označování potravin a tabákových výrobků;




Vyhláška č. 450/2004 Sb., o označování výživové hodnoty potravin;




Vyhláška č. 225/2008 Sb., kterou se stanoví požadavky na doplňky stravy a na obohacování potravin, ve znění pozdějších předpisů. 12) 14)

Dříve patřily doplňky stravy k potravinám pro zvláštní výživu, od 15. února 2004 již patří do samostatné kategorie potravin, kterou upravuje vyhláška č. 225/2008 Sb., která stanovuje požadavky na doplňky stravy a na obohacování potravin, ve znění pozdějších předpisů. Z výše uvedeného vyplývá, že doplněk stravy není léčivo, ale potravina. Hranice mezi doplňkem stravy a některou jinou kategorií produktů někdy bývá velmi úzká. V žádném případě nesmí být doplňky stravy zaměňovány s léčivy, léčivými přípravky nebo léčivou látkou, a to nejen při vlastním označování, ale zejména při deklaraci účinků. Na doplňky stravy se tedy vztahují příslušná ustanovení potravinového práva, což v praxi znamená, že subjekt, který vyrábí, uvádí nebo dováží do oběhu doplněk stravy (a je jedno jakou formou), se považuje za provozovatele potravinářského podniku, a to se všemi vyplývajícími důsledky. 9)

10

3.1.3. Uvádění doplňků stravy do oběhu Doplňky stravy, které mají být uvedeny na trh, musí splňovat jednak obecné a jednak specifické požadavky na uvádění potravin do oběhu. Řídí se vyhláškou č. 225/2008 Sb., kterou se stanovují požadavky na doplňky stravy a na obohacování potravin. Obecnými požadavky se myslí například jakost, označení či zdravotní nezávadnost, specifické požadavky jsou následující:
informační povinnost provozovatele potravinářského podniku dle § 3d odst. 1 písm. b) zákona o potravinách,
doplňky stravy mohou být uvedeny na trh pouze balené dle § 11 odst. 1 písm. f) zákona o potravinách. 9) 11) Podle zákona o potravinách musí provozovatel potravinářského podniku před prvním uvedením doplňku stravy na trh oznámit jeho uvedení Ministerstvu zemědělství. Oznámení se provádí zasláním českého textu označení výrobku, včetně informací uvedených na obale v českém jazyce, a to v listinné nebo v elektronické podobě. Provozovatel potravinářského podniku, který oznámil uvedení doplňku stravy na trh, odpovídá za správnost a obsah oznámení. 10) 12) 13) (Do 31. 12. 2014 platily odlišné podmínky. Provozovatel potravinářského podniku, který vyráběl nebo uváděl doplněk stravy do oběhu, byl povinen před jeho prvním uvedením na trh zaslat Ministerstvu zdravotnictví ČR, a v kopii Ministerstvu zemědělství ČR, český text označení uvedený na obale. Úspěšná notifikace však ještě neznamenala schválení výrobku, případně posouzení jeho účinnosti.) 12) V případě, že byly splněny veškeré legislativní požadavky, může být doplněk stravy uveden na trh, a to v den odeslání oznámení o uvedení doplňku stravy na trh Ministerstvu zemědělství. Provozovatel potravinářského podniku, který uvedl doplněk stravy na trh, odpovídá za splnění požadavků všech právních předpisů, včetně bezpečnosti výrobku a označení výrobku. Ministerstvo zemědělství již nezasílá potvrzení o splnění této informační povinnosti. 12) 13) V České republice podléhají potraviny i doplňky stravy dozoru Státní zemědělské a potravinářské inspekce (SZPI). Osoba, která uvedla doplněk stravy na trh, nese i plnou odpovědnost za to, že výrobek bude zdravotně nezávadný.

11

Dovozci i výrobci by měli mít ověřeno, zda výrobky, které nabízí k prodeji, odpovídají svými vlastnostmi výrobkům, které jsou schválené či notifikované. 14) Před uvedením nového doplňku stravy do oběhu je doporučováno výrobcům i dovozcům doplňků stravy, aby si nechali vypracovat odborný posudek ve Státním zdravotním ústavu (SZÚ). Žadatel zašle žádost, text české etikety, produktovou specifikaci, dokumentaci ke složkám, které se běžně v EU nevyužívají a vzorky. SZÚ zašle žadateli potvrzení objednávky a do jednoho až dvou měsíců vydá při splnění všech podmínek Certifikát zdravotní bezpečnosti. SZÚ posuzuje složení přípravku nejen z hlediska zdravotní nezávadnosti, ale i platné legislativy (jaké formy vitaminů a minerálních látek byly použity, použití rostlinných částí nebo jejich extraktů, které se tradičně využívají na území EU, množství účinných složek v doporučené denní dávce, atd.). Dále SZÚ posuzuje označení přípravku z hlediska platných předpisů a kontroluje, jestli jsou uvedena i doporučená varování pro citlivé skupiny populace. Toto posouzení provádí Oddělení pro bezpečnost speciálních druhů potravin a mikrobiologie PBU (předmětů běžného užívání). Pro splnění podmínek musí mít doplněk stravy vyhovující složení, značení, podmínky pro jeho použití a vyhovující laboratorní vyšetření (chemické a mikrobiologické). Výrobce není povinen před uvedením na trh ověřovat účinnost ani bezpečnost doplňku stravy. 10) Doplňky stravy registrované Ministerstvem zdravotnictví do 31. 12. 2014 byly vloženy do databáze ROHY (Registr rozhodnutí hlavního hygienika). V této databázi jsou uvedeny údaje o složení a další údaje včetně podmínek použití. Doplňky stravy oznámené Ministerstvu zemědělství od 1. 1. 2015 již nejsou do databáze ROHY vkládány. Do databáze jsou vkládány pouze údaje o potravinách oznamovaných od 1. 1. 2015 Ministerstvu zdravotnictví, tedy o potravinách pro zvláštní lékařské účely a o potravinách pro počáteční kojeneckou výživu. 10)

3.1.4. Požadavky na složení doplňků stravy Složení doplňků stravy se řídí Vyhláškou č. 225/2008 Sb., kterou se stanoví požadavky na doplňky stravy a na obohacování potravin, ve znění pozdějších předpisů. Vyhláška uvádí následující požadavky:

12




Vitamíny a minerální látky, které je možné použít pro výrobu (příloha č. 1 – např. Vitamin A (µg), vitamin D (µg), vápník (mg), hořčík (mg)).




Povolené formy těchto vitamínů a minerálních látek (příloha č. 2 – např. vitamín A ve formě retinolu, retinyl-acetátu, retinyl-palmitátu a β-karotenu).




Podmínky pro použití některých dalších látek (příloha č. 3 – např. Crataegus spp.(hloh) – sušený list, květ, plod – nejvyšší přípustné množství v denní dávce je 200mg).




Doplňky stravy dle této vyhlášky nesmí obsahovat rostliny, nebo jejich části, uvedené v příloze č. 4 (např. z oměje (Aconitum spp.) nesmí být použit kořen).




Do doplňků stravy není možné přidávat jednotlivě nebo ve směsi omamné či psychotropní látky (uvedené v zákoně č. 167/1998 Sb.), prekurzory kategorie 1 přílohy I (Nařízení Evropského parlamentu a Rady (ES) č. 273/2004 o prekurzorech drog), další látky, u nichž byl prokázán teratogenní, halucinogenní, toxický, genotoxický, omamný nebo jiný nepříznivý účinek na lidský organismus. 9)

3.1.5. Požadavky na balení doplňků stravy Podle Vyhlášky č. 225/2008 Sb., mohou být použity jen takové obaly a obalové materiály, které doplněk stravy chrání před znehodnocením a znemožní jeho záměnu nebo změnu obsahu. Obaly a obalové materiály musí splňovat takové požadavky, aby mohly přijít do přímého styku s potravinou (doplňkem stravy), a zároveň nesmí senzoricky ani jiným způsobem ovlivnit potravinu (doplněk stravy). 9)

3.1.6. Označování doplňků stravy Označování doplňků stravy se řídí jednak Vyhláškou č. 113/2005 Sb., o způsobu označování potravin a tabákových výrobků, která uvádí obecné

13

požadavky na označování potravin, a jednak Vyhláškou č. 225/2008 Sb., která uvádí, jaké údaje musí být uvedeny na obalu doplňku stravy. Obecné požadavky na označování potravin:


název obchodní firmy a sídlo výrobce nebo prodávajícího




země původu nebo vzniku,




název druhu, skupiny nebo podskupiny potravin, pod níž se uvádí potravina na trh,




údaj o množství,




datum použitelnosti u potravin, které podléhají rychlé zkáze,




datum minimální trvanlivosti nebo datum použitelnosti u potravin jiných než podléhajících rychlé zkáze,




údaj o způsobu použití (u potravin, u kterých by mohla být poškozena zdravotní nezávadnost při nesprávném použití),




údaj o způsobu skladování,




údaj o složení potravin dle použitých surovin, přídatných látek,




údaj o obsahu alergenních složek,




označení šarže,




údaj o ošetření potraviny nebo suroviny ionizujícím zářením (slovy "ošetřeno ionizujícím zářením" nebo "ozářeno"),




údaje o nepříznivém ovlivnění zdraví lidí, pokud je tak stanoveno ve zvláštních předpisech. 9)

Požadavky na označování doplňku stravy:


označení "doplněk stravy", který musí být součástí názvu,




název vitamínů, minerálních látek či dalších látek charakterizujících výrobek,




množství vitamínů a minerálních látek nebo dalších látek, vztažené k doporučené denní dávce (použity mohou být jen jednotky uvedené v příloze č. 1),




údaj o obsahu vitamínů a minerálních látek v procentech doporučené denní dávky (uvádí příloha č. 5),




doporučené denní dávkování, případně další podmínky použití,




varování před překročením doporučeného denního dávkování, 14




upozornění, že doplňky stravy nejsou náhradou pestré stravy,




upozornění, aby byly výrobky uloženy mimo dosah dětí,




upozornění „Nevhodné pro těhotné ženy" u doplňků stravy, které obsahují více než 800 µg vitamínu A v denní dávce,




doplněk stravy obsahující ploštičník hroznovitý (Cimicifuga racemosa) nebo jeho extrakty, musí mít na obalu upozornění na přerušení konzumace a vyhledání lékařské pomoci při podezření na jaterní onemocnění. 56)

Označování doplňků stravy nesmí přisuzovat nebo odkazovat na vlastnosti týkající se prevence, léčby nebo vyléčení lidských onemocnění. Dále označovaní doplňků stravy nesmí obsahovat žádné tvrzení naznačující nebo uvádějící, že vyvážená a pestrá strava obecně nemůže poskytnout dostatečné množství vitamínů nebo minerálních látek. 56)

3.1.7. Zdravotní a výživová tvrzení Zdravotním tvrzením se rozumí takové tvrzení, které uvádí nebo ze kterého vyplývá, že existuje nějaká souvislost mezi zdravím a danou kategorií potravin, potravinou nebo některou z jejích složek. Výživovým tvrzením se pak rozumí tvrzení, které uvádí nebo ze kterého vyplývá, že potravina může mít určité prospěšné výživové vlastnosti. 14) Výživová tvrzení se připouští pouze tehdy, pokud jsou uvedena v příloze nařízení Evropského parlamentu a Rady č. 1924/2006 a jsou v souladu se stanovenými podmínkami. Aktuální přípustná výživová tvrzení: „S nízkou energetickou hodnotou“, „Bez energetické hodnoty“, „Se sníženou energetickou hodnotou“, „Bez tuku“, „S nízkým obsahem tuku“, „Bez nasycených tuků“, „S nízkým obsahem nasycených tuků“, „Bez cukrů“, „S nízkých obsahem cukrů“, „Bez přídavku cukrů“, „Bez sodíku/soli“, „S nízkým obsahem sodíku/soli“, „S vysokým obsahem vlákniny“, „S vysokým obsahem bílkovin“, „Zdroj bílkovin“, „Se zvýšeným obsahem (název živiny)“, „Zdroj (název 15

vitamínu/vitamínů) nebo (název minerálu/minerálů)“, „Light/Lite (Lehký)“, „Přirozeně/Přirozený“, „S vysokým obsahem omega-3 mastných kyselin“, atd. 15) Používání zdravotních tvrzení na obalu potravin, jejich prezentace a reklama se řídí nařízením Evropského parlamentu a Rady č. 1924/2006 o údajích týkajících se potravin z hlediska jejich nutriční hodnoty a vlivu na zdraví. Podle tohoto nařízení používaná zdravotní tvrzení musí být založena na všeobecně uznávaných vědeckých poznatcích. Lze používat pouze zdravotní tvrzení schválená Evropskou komisí. Nařízení rozlišuje dva základní typy zdravotních tvrzení. Pro oba typy tvrzení platí, že jsou zakázána, pokud neodpovídají všem požadavkům a pokud nejsou obsažena v seznamu schválených tvrzení nebo nejsou schválena v souladu s nařízením. 16)
Zdravotní tvrzení o snížení rizika onemocnění a o vývoji a zdraví dětí – tím se rozumí, každé zdravotní tvrzení, které uvádí, naznačuje nebo ze kterého vyplývá, že spotřeba určité kategorie potravin, potraviny nebo některé z jejích složek významně snižuje riziko vzniku určitého lidského onemocnění.
Zdravotní tvrzení jiná než odkazující na snížení rizika onemocnění a na rozvoj a zdraví dětí (tzv. „tvrzení funkční“ či obecně známá tvrzení) jedná se o tvrzení odkazující na význam živiny či látky pro růst a vývoj organismu a jeho fyziologické funkce nebo na psychické a behaviorální funkce nebo na snižování a kontrolu hmotnosti, snížení pocitu hladu, zvýšení pocitu sytosti či snížení energie obsažené ve stravě. 16) Zdravotní tvrzení jsou u doplňků stravy povolena pouze tehdy, pokud je současně uvedeno:


sdělení o významu vyvážené a různorodé stravy a zdravého životního stylu,




sdělení o množství potraviny a způsobu její konzumace potřebné k dosažení zmiňovaného příznivého účinku,




případné upozornění pro osoby, které by se měli konzumace uvedené potraviny vyhnout, a varování, pokud nadměrná konzumace potraviny může ohrozit zdraví. 14) 16

Zakázána jsou zdravotní tvrzení, která:
naznačují, že nekonzumování potraviny by mohlo ohrozit zdraví,
odkazují na množství úbytku hmotnosti,
odkazují na doporučení lékařů a jiných odborníků ve zdravotnictví, povolena jsou jen doporučení charitativních organizací v oblasti zdraví a doporučení vnitrostátních sdružení odborníků v oblasti výživy nebo dietologie a lékařství. 14) U výživových a zdravotních tvrzení je požadována:
pravdivost a vědecká podloženost, nesmí být klamavá, nepravdivá či dvojsmyslná,
existence dostatečně vysokého nebo naopak dostatečně sníženého množství určité látky v potravině,
využitelnost látky obsažené v potravině pro organismus,
reálná možnost konzumace potřebného množství potraviny, nikoliv nabádání k nadměrné konzumaci potraviny, ani tvrzení nesmí uvádět, že vyvážená strava nezajistí potřebné množství živin,
srozumitelnost tvrzení pro spotřebitele. 14) 16)

3.1.8. Rozdíly mezi doplňkem stravy a léčivým přípravkem
Podle platných právních předpisů musí být na obalu doplňku stravy uvedeno označení „doplněk stravy“.
V České republice posuzuje a schvaluje doplňky stravy Ministerstvo zemědělství. Posouzení a schválení léčivého přípravku spadá do kompetencí Státnímu ústavu pro kontrolu léčiv (SÚKL).
Účinky doplňku stravy uváděné výrobcem nejsou nikým ověřovány. U doplňku stravy se neposuzuje jejich účinnost, požadována je pouze zdravotní nezávadnost. Naopak léčivý přípravek před svým uvedením na trh musí projít nejprve registračním řízením, ve kterém je hodnocena jakost, bezpečnost a účinnost přípravku v daných léčebných či preventivních indikacích. Účinnost léčivého přípravku musí být doložena příslušnými klinickými studiemi. 17


V případě nejasností o tom, zda se jedná o léčivý přípravek či nikoliv, je na webových stránkách Státního ústavu pro kontrolu léčiv k dispozici databáze registrovaných léčivých přípravků. Tato databáze umožňuje vyhledávání podle názvu účinné látky, názvu přípravku, ATC skupiny či podle kódu SÚKLu.
Někteří výrobci doplňků stravy doposud na obale uvádí tzv. číslo HEM. Jedná se o jednací číslo rozhodnutí, které měl přípravek, který byl do oběhu uveden jako potravina. V minulosti bylo toto číslo vydáváno Ministerstvem zdravotnictví ČR.
Léčivý přípravek, kterému byla udělena v rámci registračního řízení registrace, musí mít na obale a v příbalové informaci podle platných právních předpisů uvedené tzv. registrační číslo. Rozlišují se dva typy registrace a tedy i dva typy registračního čísla. Záleží na tom, zda byl léčivý přípravek zaregistrován jen v České republice (pak se jedná o tzv. národní registraci), nebo zda byl léčivý přípravek registrován ve členském státě Evropské unie (pak mluvíme o tzv. národní registraci, která platí ve všech členských státech EU). Registrační číslo u národních registrací přiděluje SÚKL, u centralizovaných registrací je registrační číslo přidělováno Evropskou lékovou agenturou (EMEA). 17)

18

3.2.

Třísloviny

Třísloviny jsou polyfenolické látky. V rostlinné říši mají hojné zastoupení. Téměř každá čeleď zahrnuje druhy obsahující třísloviny. Typické jsou zejména pro řády Fagales, Rosales, Geraniales, Sapindales, Ericales. Jednou ze společných vlastností tříslovin je schopnost srážet kožní bílkoviny. Tříslovinné hydroxyskupiny se naváží na aminoskupiny proteinů a vytvoří vazby mezi polypeptidickými řetězci proteinů. Spojování se děje vazbami typu vodíkových můstků. Výsledkem jsou pak pružné, málo bobtnavé, nerozpustné makromolekuly. Chemicky jsou třísloviny polyfenoly o vysoké molekulární hmotnosti, které nekrystalizují, ve vodě a alkoholech se rozpouštějí na koloidní roztoky kyselé reakce. S bílkovinami, těžkými kovy a alkaloidy vytváří těžce rozpustné sloučeniny. Používají se tedy jako zkoumadla k důkazům želatiny, bílkovin a alkaloidů. Specifickou vlastností tříslovin je jejich schopnost aglutinovat erytrocyty, čímž se i dříve stanovovaly. Třísloviny jsou látky dosti nestálé, na vzduchu snadno kondenzují, polymerizují a oxidují na tmavé a terapeuticky neúčinné flobafeny. Účinnost tříslovin se dlouhým skladováním snižuje. Některé třísloviny se hydrolyzují již delším zahříváním s vodou nebo s kyselinami za vzniku nerozpustných červenohnědě zbarvených látek, tzv. tříslovinných červení. Tyto látky vznikají také působením enzymů při sušení některých drog. Jelikož jsou třísloviny obvykle směsí polyfenolů, lze je jen obtížně dělit. Dělí se na dva základní typy – hydrolyzovatelné a nehydrolyzovatelné. Hydrolyzovatelné třísloviny jsou často nazývány jako gallotaniny či ellagenové třísloviny. Hydrolýzou těchto tříslovin většinou vzniká kyselina gallová a cukr. Nehydrolyzovatelné

třísloviny

jsou

také

nazývány

kondenzovanými

či

katechinovými tříslovinami. Nejedná se o estery, nýbrž o hydrogenované flavonoly, resp. anthokyany. Někdy je konstituce tříslovin neznámá, jindy je lze zařadit do obou skupin. 46) Třísloviny se ve větších množstvích obvykle vyskytují v různých rostlinných orgánech, v listech, plodech, kůře nebo kmenu. Jsou obsaženy v nezralých plodech, zráním obvykle mizí. Oxidace tříslovin je pravděpodobně zdrojem energie pro metabolické pochody nebo mohou být východiskem pro 19

tvorbu kyselin. Vzhledem ke svému antiseptickému působení mohou rostlinu chránit před houbami a hmyzem. Jejich úloha v rostlinném metabolismu není zcela jasná, pravděpodobně poskytují rostlině ochranu v určitých stádiích vývoje a pak se buď odbourávají, nebo ukládají jako konečné produkty metabolismu v určitých pletivech dospělé rostliny – v korku, dřevě nebo duběnkách. Třísloviny mají adstringentní účinek. Srážejí bílkoviny a tím je činí rezistentní vůči proteolytickým enzymům. Třísloviny se uplatňují při léčení zánětů, hemoroidů, menších spálenin a omrzlin, střevních a žaludečních katarů a průjmů, či jako kloktadla. Také se používají jako antidota při otravách těžkými kovy. Při léčení spálenin se proteiny obnažené tkáně srážejí, vytváří se mírně antisepticky působící ochranná koagulační membrána, pod níž může probíhat regenerace nové tkáně, zároveň se sníží krvácivost a bolestivost. Ale při použití na velké plochy popálenin se tanin může resorbovat a způsobit až poškození jater. Proto se dnes v těchto případech od použití tříslovin upouští. 47) 48)

3.2.1. Zelená káva Rod Coffea L., z čeledi Rubiaceae (mořenovité), zahrnuje kávovníky rostoucí jako keře, stromy nebo liány v tropech a subtropech Afriky a Jižní Ameriky. Původně pochází z Etiopie. Rod Coffea má asi 60 druhů, které se dělí do 4 sekcí. Nejdůležitější sekcí je Eucoffea, zahrnující 24 druhů, z nichž ekonomicky nejvýznamnější jsou Coffea arabica, Coffea liberica, Coffea robusta. Zhruba 65% celosvětové produkce představuje Coffea arabica. Jedná se o vždyzelenou subtropickou dřevinu oceánského klimatu. Pěstuje se na plantážích pro svá semena – kávová zrna. Nejvýznamnější produkční plantáže jsou v Brazílii, Kolumbii, na Kostarice, Jamajce, v Portoriku a Indii. V paždí vstřícných, přisedlých nebo krátce řapíkatých listů se tvoří až 20 drobných květů. Z květů vzniká oválná peckovice, ve zralosti temně červené barvy, některé zůstávají žluté. Peckovice má dužnaté oplodí nasládlé chuti se dvěma semeny. Plody dozrávají až devět měsíců, poté se zpracovávají suchou nebo mokrou cestou tak, aby se získala suchá zelená semena. Semena se dále upravují pražením, kdy získají typickou vůni a chuť. Zelená semena kávy obsahují sacharidy, tuky, bílkoviny, kofein, celulózu, organické kyseliny a minerální látky. Pražená semena 20

obsahují zhruba 0,7-1,5% kofeinu. Druh Coffea robusta je tropický strom rovníkových oblastí, semena jsou menší a na kvalitu horší. Druh Coffea liberica je typický pro tropické pobřeží západní Afriky, semena jsou horší kvality a přidávají se spíše do směsí. 18) Káva je používána nejen jako pochutina, ale i jako lidový lék na astma a jiná plicní onemocnění, při chřipce, při otravě atropinem a opiem, při malárii, migrénách a závratích. Ve studiích bylo prokázáno, že káva má prospěšný efekt při léčbě rakoviny, kardiovaskulárních onemocněních, obezitě a diabetu.

19)

Kofein obsažený v kávě má účinky analgetické, anorektické, diuretické, CNS stimulační, kardiotonické a lipolytické. Hojně se využívá jako přísada do léků proti bolesti a na hubnutí. 20)

3.2.2. Zelený čaj Camellia sinensis (L.) (syn. Thea sinensis (L.)), kamélie čínská nebo také čajovník čínský, z čeledi Theaceae (čajovníkovité), je rostlina pocházející z deštných asijských lesů. Dnes je pěstována v Asii od Srí Lanky po Gruzii a v Africe. Čajovník vyžaduje velmi vlhké a poměrně stabilní klima, subtropického až tropického charakteru. Jedná se o stálezelený keř nebo nižší strom, který může dorůstat až do výšky

3 - 15 m, v kultuře se zpravidla udržuje na výšce 1,2 m.

Listy jsou tmavozelené, řapíkaté, v mládí na spodní straně bíle chlupaté. Postavení listů je střídavé, tvar vejčitý až kopinatý, na okraji jsou drobně pilovité a na vrcholu zašpičatělé. Dlouhé jsou 4 až 15 cm a široké 2 až 5 cm. Čajovník má květy s pětibratrými tyčinkami, plodem je tobolka se 3 pouzdry, velká semena obsahují olej. Rozlišuje se mnoho komerčních typů suroviny v závislosti na botanické odrůdě, způsobu zpracování, stáří listů a geografickém původu. Nejčastěji se rozlišují tyto obchodní druhy surovin – zelený čaj, černý čaj, oolong čaj a bílý čaj. Zelený čaj je stabilizovaný, rychle sušený, rolovaný, neprobíhá zde proces vadnutí a fermentace. Nálev ze zeleného čaje je trpký a svíravý, protože nedošlo k rozkladu tříslovin a chlorofylu. Černý čaj musí nejprve zavadnout, poté se roluje, fermentuje a suší. V průběhu vadnutí dochází k rozkladu chlorofylu a kondenzaci tříslovin. Oolong čaj je čaj polofermentovaný. Po sběru se nechá 21

několik hodin na slunci, poté jsou zavadlé listy v bambusových koších přeneseny do místnosti s kontrolovanou teplotou, kde se nechají částečně zoxidovat. Bílý čaj je pouze z terminálních pýřitých bílých pupenů a je jen lehce fermentovaný. Čajovníky se dělí do tří skupin – čínská, assámská a indočínská. U čínských čajovníků se sbírají listy 4-7cm dlouhé, u assámských čajovníků se sbírají listy až 20cm dlouhé a u indočínských se sbírají listy 8cm dlouhé. Počet listů na odstřižených výhoncích určuje kvalitu čaje. Listy se sbírají jako tzv. fleše obsahující vrcholový pupen a 1-3 listy pod ním, musí být tmavozelené barvy, tuhé a voskovité. Se sběrem se začíná 4 roky po výsadbě, plantáže se sklízí i několikrát do roka. První sklizeň bývá považována za nejkvalitnější. Kvalitní surovina obsahuje až 4 % purinových bází, tj. kofein, theophyllin a theobromin, až 25 % polyfenolů, zejména tříslovin. 18) 21) Pití zeleného čaje má zdraví prospěšné účinky již po staletí. Kofein působí psychostimulačně. Theophyllin a theobromin mají účinky zejména periferní, konkrétně vazodilatační, bronchodilatační, kardiostimulační a mírně diuretické. V nedávných studiích byly u zeleného čaje prokázány účinky antioxidační, antimikrobiální, antivirové, protinádorové, dále působí preventivně proti diabetu, obezitě, leukemii, Parkinsonově chorobě a kardiovaskulárním onemocněním.

22)

Poměrně nedávno se výzkumníci začali dívat i na možnosti využití zeleného čaje v antimikrobiální terapii a potenciální prevenci infekcí. Antimikrobiální efekt byl prokázán u katechinů obsažených v zeleném čaji – konkrétně u ECG, EGC a EGCG. 26) Antioxidační efekt vychází ze schopnosti zeleného čaje vychytat velké množství volných radikálů a vyvázat reaktivní formy kyslíku (ROS). Protizánětlivé účinky mohou být důsledkem zvýšené produkce IL-10 a protizánětlivých cytokinů. Zánět se vyskytuje mimo jiné i u nemocí jako artritida, kardiovaskulární onemocnění, rakovina i při stárnutí organismu. Antikarcinogenní účinky zeleného čaje byly pozorovány u mnoha typů rakoviny, jejich mechanismy mohou zahrnovat inhibici angiogeneze a růst buněk, případně indukci apoptózy v rakovinných buňkách. Za pozitivní kardiovaskulární účinky může jednak antioxidační a protizánětlivý efekt zeleného čaje, ale i schopnost inhibovat aterosklerózu, snižovat množství lipidů v krvi a zlepšovat poměr mezi LDL a HDL cholesterolem. Zelený čaj má zdraví prospěšné účinky i na dutinu ústní. Například bakterie Streptococcus mutans je zodpovědná za zubní kaz, zelený čaj 22

má na tuto bakterii přímý antimikrobiální účinek, navíc inhibuje uchycení této bakterie na povrchu dutiny ústní. Kromě toho, zelený čaj je přírodním zdrojem fluoridu. Dále se ukázalo, že zelený čaj má antimikrobiální efekt proti různým grampozitivním a gramnegativním bakteriím (Escherichia coli, Salmonella spp., Staphylococcus aureus, Enterococcus spp.), některým houbám (Candida albicans) a na některé viry (HIV, Herpes Simplex Virus, virus chřipky). 26)

3.2.3. Guarana Paullinia cupana (Kunth), paulinie nápojná, z čeledi Sapindaceae (mýdelníkovité), známá pod názvem jako guarana, je popínavý keř pocházející z Amazonie. V současnosti je pěstována v Brazílii, Venezuele a Uruguayi. Dorůstá do výšky 10 až 12m. Listy jsou střídavé, lichozpeřené, se 3-5 lístky. Květy jsou drobné bílé nebo žluté barvy, sestavené do hroznů. Plodem je obvykle červeně zabarvená tobolka se třemi tmavohnědými až černými semeny. Ze semen se připravuje hustá pasta chuti čokolády (Pasta guarana), která má vysoký obsah kofeinu a tříslovin. Semena se nejprve properou, pak praží, následně se rozemelou a s vodou se vytvoří těsto, ze kterého se zformují tyčinky. Tyčinky se dále udí a tak jsou připraveny k dlouhodobému skladování. Tato usušená pasta se pak drtí a slouží k přípravě nápoje, nejčastěji s horkou vodou nebo mlékem. 18) Guarana je známá zejména pro své povzbuzující účinky, obsahuje větší množství kofeinu než čaj nebo káva a je nenávyková. Obsah kofeinu je až 6 %, dále obsahuje theophyllin a theobromin, třísloviny, sacharidy, bílkoviny, vitamíny B a C. V předchozích výzkumech bylo prokázáno, že guarana má pozitivní vliv na metabolismus tuků, úbytek tělesné hmotnosti, zvyšuje bazální metabolismus a potlačuje chuť k jídlu. Dále se ukázalo, že má i kardioprotektivní účinek, inhibuje agregaci destiček a působí proti ateroskleróze. V oblasti Amazonie byla provedena kontrolovaná studie ve starší populaci, která analyzovala vztah mezi spotřebou guarany a prevalencí metabolických onemocnění (obezita, hypertenze, diabetes mellitus 2. typu, dyslipidemie). U lidí užívajících pravidelně guaranu byl nižší výskyt metabolických onemocnění než u lidí, kteří guaranu nikdy neužívali.

23)

Guarana zlepšuje krátkodobou i dlouhodobou paměť, má

antidepresivní účinek a působí na bolesti hlavy. Tradičně se využívá jako lék proti 23

chronickému průjmu, při menstruačních bolestech a horečce. Zvyšuje libido a v latinskoamerických zemích je používána jako afrodisiakum. 24) 25)

3.3.

Obsahové látky charakteru fenylpropanových kyselin a katechinů:

3.3.1. Katechin (C) Katechin je významný antioxidant. Uplatnění by mohl nalézt například v kožním lékařství. Kožní vrásky a ochablé kontury jsou následkem úbytku kolagenu, elastinu a kyseliny hyaluronové v kůži. Dochází ke snižování počtu fibroblastů, které hrají klíčovou roli v produkci těchto složek extracelulární matrix. Předchozí ošetření fibroblastů (+)-katechinem zabraňuje apoptóze fibroblastů navozené oxidačním stresem. 37) Obrázek č. 1: OH HO

O

OH OH

OH KATECHIN

3.3.2. Epikatechin (EC) Epikatechin je látka, která by mohla mít v budoucnu uplatnění při léčbě Alzheimerovy choroby. Při pokusu na transgenních myších s Alzheimerovou chorobou, které byly krmeny stravou bohatou na (-)epikatechin, bylo prokázáno snížení hladiny β-amyloidu v mozku i v séru, v porovnání s kontrolní skupinou myší. (-)Epikatechin byl dobře tolerován a nebyl prokázán žádný vedlejší účinek. Redukoval depozita β-amyloidu v mozku, snižoval jeho hladiny v séru i mozku a 24

zmírňoval zánět nervů u transgenních myší, jen zlepšení prostorové paměti v porovnání s kontrolní skupinou a předchozími studiemi se neprokázalo. Stručně řečeno, výzkumy potvrzují účinnost EC, avšak dopad EC na patologii a přesný mechanismus účinku není zatím zcela jasný, a je třeba dalších výzkumů. 30) Obrázek č. 2: OH HO

O

OH OH

OH EC

3.3.3. Epikatechin gallát (ECG) ECG je látka působící antibakteriálně, je schopna inhibovat růst některých grampozitivních a gramnegativních bakterií. V dutině ústní inhibuje růst bakterie Streptococcus mutans, která způsobuje zubní kaz a krvácení dásní.

33) 34)

Antibakteriální efekt je dán schopností ECG vmezeřit se do fosfolipidové dvojvrstvy cytoplazmatické membrány a tím narušit její funkci. Jedna studie porovnávala účinnost klasické ústní vody s obsahem chlorhexidinu (0,12%) s ústní vodou obsahující katechiny ze zeleného čaje (0,25%). Výsledky v redukci zubního plaku byly srovnatelné. 35) Obrázek č. 3: OH HO

O

OH O

OH

OH

O

OH OH ECG 25

3.3.4. Epigallokatechin (EGC) Extrakt ze zeleného čaje má antibakteriální účinky, toho je možné využít při léčbě močových infekcí způsobených bakterií Escherichia coli. Za tento antibakteriální účinek jsou zodpovědné katechiny. Nejlepší antimikrobiální účinek mají EGCG a EGC, zároveň jsou v extraktu v nejvyšší koncentraci, oba se vylučují žlučí, ale jen EGC se vylučuje i močí. To je tedy předpokladem pro využití EGC v léčbě bakteriálních infekcí močových cest. V in vitro testech byl prokázán inhibiční efekt EGC na růst E. coli izolovaných z močového traktu. Studie ukázaly, že koncentrace 500 µg katechinu ze zeleného čaje inhibuje růst E. coli a koncentrace nad 5000 µg působí již baktericidně. Pro srovnání - jeden šálek japonského zeleného čaje obsahuje 150 mg EGC, při jeho vyloučení je v moči dosaženo koncentrace zhruba 3,5 mg, což by mělo dokonale postačovat pro jeho antibakteriální účinek. 31) Obrázek č. 4: OH OH HO

O

OH OH

OH EGC

3.3.5. Epigallokatechin gallát (EGCG) EGCG je katechin, vyskytující se zejména v zeleném čaji. Z celkového počtu všech katechinů v zeleném čaji představuje zhruba 50 – 75 %.

27)

Je tedy

nejhojnější a s nejsilnějšími antioxidačními účinky. Studie prokázaly, že EGCG má in vitro protinádorové účinky u různých typů rakovin, jako je rakovina prsu, prostaty, jícnu, plic, kůže, žaludku, tlustého střeva a slinivky břišní. Protinádorový účinek je zprostředkován regulací angiogeneze rakovinných buněk. Důležitou vlastností EGCG je poměrně nízká systémová toxicita, proto byl tento katechin navržen jako potenciální adjuvans nebo imunostimulant v terapii rakoviny. 28) 29) 26

EGCG má významný potenciál i v terapii obezity. V in vitro studiích na buněčných kulturách, ale i na živočišných a lidských, EGCG inhibuje diferenciaci preadipocytů, snižuje proliferaci adipocytů, indukuje apoptózu adipocytů, potlačuje lipogenezi a podporuje lipolýzu a β-oxidaci mastných kyselin. 43) EGCG dále vykazuje významnou antibakteriální aktivitu, ale i protizánětlivou a antioxidační. EGCG je aktivní zejména proti gram-pozitivním bakteriím. Minimální inhibiční koncentrace u gram-negativních bakterií je 8 – 16x vyšší než u gram-pozitivních bakterií. To je dáno tím, že gram-negativní bakterie má pro svoji ochranu komplikovanější stavbu, buněčná stěna je tvořena vrstvou peptidoglykanu a má ještě vnější membránu s lipopolysacharidy. V jedné studii však EGCG inhibuje růst gram-negativních bakterií Pseudomonas aeruginosa a Escherichia coli, které byly izolovány z kožních infekcí a jsou multirezistentní. U pacientů, kde není možno podat systémová antibiotika, ať už z důvodu vyššího zatížení organismu nebo z rizika vedlejších účinků, či rezistence na antibiotika, může být potenciálně využit EGCG jako alternativa nebo jako pomocná látka v lokální antimikrobiální terapii. 44) Obrázek č. 5: OH OH HO

O

OH O

OH

OH

O

OH OH EGCG

3.3.6. Gallokatechin (GC) Některé katechiny vykazují anthelmintický efekt. Ve studiích in vitro byl testován anthelmintický účinek proti hlísticím, konkrétně proti škrkavce Ascaris

27

suum, parazit domácích a divokých prasat. Nejlepší výsledek vykazoval EGC a ještě lepší anthelmintický efekt měl GC. 32) Obrázek č. 6: OH OH HO

O

OH OH

OH GC

3.3.7. Gallokatechin gallát (GCG) GCG má antiprotozoární aktivitu, které by mohlo být využito v léčbě Chagasovy choroby. Jedná se o endemické onemocnění způsobené prvokem Trypanosoma cruzi, jehož přenašečem jsou dravé ploštice. Postihuje zejména Jižní a Střední Ameriku a na člověka se může přenést hmyzím kousnutím. Extrakt z čajovníku inhibuje arginin kinázu, klíčový enzym v energetickém metabolismu Trypanosomy cruzi. Nejaktivnější sloučeninou byl GCG, který vykazoval trypanocidní účinky v krevním řečišti. Druhý nejaktivnější s lytickým efektem byl EGCG. 36) Obrázek č. 7: OH OH HO

O

OH O

OH

OH

O

OH OH GCG 28

3.3.8. Kyselina gallová Kyselina gallová je široce rozšířená fytochemická sloučenina vyskytující se v mnoha rostlinných tkáních, například v duběnkách, zeleném čaji, ananasu, červeném víně, a to ve formě volné nebo vázaná na třísloviny. Kyselina gallová působí jako silný antioxidant, dále vykazuje účinky antibakteriální, protitivirové, protizánětlivé, antiobezitní, hepatoprotektivní, antiastmatické a antikancerogenní. Ve studiích byl prokázán cytotoxický efekt v některých nádorových buňkách, a to bez poškození normálních buněk. U rakoviny děložního čípku kyselina gallová výrazně snížila proliferaci nádorových buněk. 38) 39) Obrázek č. 8: O

OH

HO

OH OH

KYSELINA GALLOVÁ

3.3.9. Kyselina kávová Kyselina kávová se strukturou řadí mezi fenylpropanové kyseliny. Vyskytuje se v mnoha přírodních zdrojích, zejména v ovoci a zelenině. Často je součástí některých doplňků stravy. Vykazuje řadu biologických aktivit, jako je antioxidační, antivirová, protizánětlivá a antikarcinogenní. Dále je schopna snižovat hladinu cukru v krvi a působit tak antidiabeticky. 42) Obrázek č. 9: O HO

OH

HO KYSELINA KÁVOVÁ 29

3.3.10. Kyselina chlorogenová Kyselina chlorogenová je esterem kyseliny kávové.

Je přítomná

v několika druzích ovoce, zeleniny a v kávě. Například v šálku kávy je obsaženo až 150mg. Stejně jako ostatní polyfenolické sloučeniny má kyselina chlorogenová řadu nutričních a farmakologických aktivit. Vykazuje účinky antidiabetické, antihypertenzní

a

protinádorové.

Ve

studiích

byly

prokázány

účinky

hypolipidemické, antioxidační a protizánětlivé, kterých by mohlo být využito například při léčbě aterosklerózy. Další studie prokázala antiagregační účinek. Kyselina chlorogenová snižuje množství prozánětlivých mediátorů, inhibuje agregaci krevních destiček a brání tak vzniku trombu. 40) 41) Obrázek č. 10: OH HO

O O

HO

O OH

OH OH

KYSELINA CHLOROGENOVÁ

30

4. EXPERIMENTÁLNÍ ČÁST

4.1.

Použité chemikálie, materiály, přístroje a vybavení

4.1.1. Chemikálie


methanol pro HPLC: Merck, Darmstadt, Německo;




methanol 100%: Penta, Praha, ČR;




aqua destilata: FaF HK, ČR;




ethanol 85%: FaF HK, ČR;




referenční standardy (kyselina kávová, kyselina chlorogenová, quercetin, hyperosid, quercitrin, kyselina gallová, gallokatechin, epigallokatechin, katechin,

epigallokatechin

gallát,

epikatechin,

gallokatechin

gallát,

epikatechin gallát, katechin gallát): Sigma-Aldrich Chemie, Steinheim, Německo.

4.1.2. Zkoumané přípravky a materiály


doplněk stravy: Zelený čaj, MedPharma, Tetčice, ČR;




doplněk stravy: Tree3Chlorella, SWISS Pharmaceutical Investment + Simply You Pharmaceuticals a. s., Praha 3, ČR;




doplněk stravy: Lipoxal Xtreme II, Walmark, a.s., Třinec, ČR;




doplněk stravy: Strong Nature – Zelená káva, Sterna consulting, s.r.o. + Elephant Co, Beograd, Srbsko;




doplněk stravy: Zelená kává extra, Vieste group, s.r.o. + Medicura Natural Products Inc, Německo;




doplněk stravy: Celius Fit and Slim GC 1000 Zelená káva, Willows Ingredients Ltd., Ashford, Co. Wicklow, Irsko + Celius CZ s.r.o., Praha 10;




doplněk stravy: GS C.L.A. 2000 se zeleným čajem, Green-Swan Pharmaceuticals Ltd., England + Green-Swan Pharmaceuticals CR, a. s., Praha 4 – Krč, ČR;

31




doplněk stravy: Bioaktivní C.L.A. Booster, Pharma Nord ApS, Vojens, Dánsko + Pharma Nord Praha s.r.o., Odolena Voda, ČR.

4.1.3. Přístroje a vybavení


předvážky EK 1200 A: A&D, Tokyo, Japonsko;




analytické váhy A 200S: Sartorius, Göttingen, SRN;




vodní lázeň GFL (DHIM 15750): Laboratorní přístroje, Praha, ČR;




HPLC chromatograf JASCO (čerpadlo PU-2089, diodový detektor MD-2015, fluorescenční detektor FP-2020, autosampler AS 2055): Jasco International, Tokyo, Japonsko;




chromatografická kolona LiChrospher RP-18 250x4 (5µm) s předkolonkou: Merck, Darmstadt, SRN;




vialky, Labicom s.r.o.: Olomouc, ČR;




injekční jehla a stříkačka: Chirana, Brno, ČR;




mikrofiltr (0,20 µm): Corning Inc., New York, USA.

4.2.

Příprava vzorků

Při přípravě vzorků byly použity dvě metody:




Extrakce methanolem 60 % na vodní lázni




Extrakce methanolem 100 % na vodní lázni

Postup: Extrakce methanolem 60 % na vodní lázni Tablety a kapsle byly nejprve rozdrobněny v porcelánové třecí misce a z této drti bylo naváženo 0,4 g do varné baňky. U želatinových kapslí bylo stejné množství tekutého obsahu odebráno pomocí injekční stříkačky a jehly. K tomuto obsahu bylo přidáno 15 ml 60 % methanolu a následně byla provedena extrakce pod zpětným chladičem. Extrakce byla provedena celkem dvakrát. První probíhala 15 min, extrakt byl zfiltrován přes vatu do odměrné baňky a vata byla vrácena 32

zpět do varné baňky. K druhé extrakci bylo použito 10 ml 60 % methanolu a extrakce probíhala dalších 10 min. Oba extrakty byly spojeny, filtrovány a filtrát byl v odměrné baňce doplněn 60 % methanolem na 25 ml. Po zchladnutí byl extrakt zfiltrován přes mikrofiltr o průměru 20 µm do vialky. Vzorek byl podroben HPLC analýze. Z každého produktu byly provedeny vždy 3 stanovení. Tato metoda byla použita pro stanovení kyseliny gallové a katechinů. Extrakce methanolem 100 % na vodní lázni Postup u druhého stanovení probíhal stejným způsobem jako u prvního, s tím rozdílem, že k extrakci byl použit 100 % methanol. Tato metoda extrakce byla použita pro stanovení flavonoidů a fenylpropanových kyselin.

4.3.

HPLC analýza

4.3.1. Charakteristika HPLC HPLC je zkratka pro vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii, z anglického High Performance Liquid Chromatography. Jedná se o separační metodu umožňující současně jak kvalitativní, tak i kvantitativní hodnocení separovaných složek směsi, a to s vysokou selektivitou, citlivostí a v relativně krátkém čase. Pro analýzu touto metodou postačuje velmi malé množství vzorku. Pomocí HPLC můžeme určit jak identitu, tak stanovit obsah i čistotu analyzovaného vzorku. 49)

4.3.2. HPLC analýza K HPLC analýze katechinů, fenylpropanových kyselin a flavonoidů byla použita chromatografická sestava JASCO (čerpadlo PU-2089, diodový detektor MD-2015, fluorescenční detektor FP-2020, autosampler AS-2055), vybavená předkolonovým filtrem a kolonou LiChrospher RP-18 250x4 (5µm) s ochranou předkolonkou.

33

Stanovení katechinů: Mobilní fáze se skládala z eluentu A: acetonitril / voda / kyselina fosforečná, v poměru 5: 94,7: 0,3; v / v / v; a z eluentu B: acetonitril / kyselina fosforečná v poměru 99,7: 0,3; v / v. Eluce mobilní fáze probíhala gradientově, a to následovně: 4 % eluentu B v čase t = 0-5 min, a 4 – 30 % eluentu B v čase t = 5-34 min. Rychlost průtoku mobilní fáze byla 0,8 ml / min a teplota kolony 25° C. Objem nastřikovaného vzorku a roztoku standardů byl 20 µl. Detekce byla provedena pomocí DAD detektoru v rozmezí vlnových délek 190 - 450 nm. Obsah sledovaných látek - gallokatechinu (GC), epigallokatechinu (EGC), epikatechinu (EC), gallokatechin gallátu (GCG), epikatechin gallátu (ECG), katechin gallátu (CG) byl vypočten z píků při vlnové délce 220 nm, ve které mají tyto katechiny své absorpční maximum. Vlnová délka pro identifikaci a kvantifikaci kyseliny gallové (GA) byla stanovena na 263 nm. Katechin (C) a epigallokatechin galát (EGCG), byly sledovány fluorescenčním detektorem (excitační vlnová délka 276 nm, emisní vlnová délka 316 nm). Obsah látek byl kvantifikován matematickou metodou normalizace a porovnáním s šestibodovou kalibrační křivkou vytvořenou pomocí externě měřených standardů téže látek. Stanovení flavonoidů a fenylpropanových kyselin: Mobilní fáze se skládala z eluentu (A): acetonitril / voda / kyselina fosforečná v poměru 8: 91,7: 0,3; v / v / v; a z eluentu (B): acetonitril / kyselina fosforečná v poměru 99,7: 0,3; v / v. Eluce mobilní fáze probíhala gradientově a to následovně: 0 % eluentu B v čase t = 0-10 min; v čase t = 10-30 min 0-11 % eluentu B; a 11-56,5 % eluentu B v čase t = 30-55 min. Rychlost průtoku mobilní fáze byla 1 ml / min a teplota kolony 25°C. Objem nástřiku byl 20 µl. Obsah sledovaných flavonoidů byl vypočítán z píků při vlnové délce 254 nm, kde flavonoidy vykazují své absorpční maximum. Pro lepší identifikaci píků a stanovení quercetinu byly stanoveny referenční vlnové délky 335 a 368 nm. Identifikace a stanovení sledovaných látek - kyseliny kávové, kyseliny chlorogenové, quercetinu, hyperosidu, quercitrinu bylo provedeno na základě porovnání retenčních časů a spekter s referenčními standardy. Standardy byly zakoupeny od firmy Sigma, Německo.

34

Graf č. 1: Ukázka chromatogramu se standardy katechinů (1- GA, 2 – GC, 3 – EGC, 4 – C, 5 – EGCG, 6 – EC, 7 – GCG, 8 – ECG, 9 – CG)

4.3.3. Validace HPLC analýzy Validace znamená ověření platnosti zvolené analytické metody. Výrobce HPLC sestavy (Jasco) zajišťuje instrumentální validaci, a to podle normy ISO 9001

(International

Organization

for

Standardization).

Způsobilost

chromatografického systému se ověřuje testem linearity (kdy z pěti různých koncentrací standardu se lineární regresní analýzou zjistí hodnota korelačního koeficientu r, která musí být větší než 0,9900) a testem opakovaného nástřiku (tzv. test na přesnost, kde se provede 6 nástřiků stejným vzorkem a vypočte se relativní směrodatná odchylka, která musí být vždy menší než 1,5%). Pro hodnocení Počtu teoretických pater a Asymetrie píku byly převzaty metody z Evropského lékopisu. Pro zhodnocení celé metody byly použity tyto validační parametry: 35

Správnost metody – statisticky významná rozdílnost mezi získanou a skutečnou hodnotou. Kvantitativní limit – nejmenší hodnota, která je měřitelná s přijatelnou přesností a správností. 50) 51)

4.4.

Statistické zpracování výsledků

Podle následujících matematických vztahů byla vypočtena statistická významnost naměřených výsledků pomocí t-testu významnosti dvou průměrů: Aritmetický průměr: ∑

= , 

kde:
 - naměřené hodnoty, a - rozsah souboru. Směrodatná odchylka:

∑
−
   = , −1

kde:
- aritmetický průměr,
 - naměřené hodnoty,  - rozsah souboru. Testovací kritérium: =

|
 −
 |

   +  − 2 . ,  +    +  

kde:
 - aritmetický průměr kontrolního souboru,
 - aritmetický průměr pokusného souboru,  - počet členů kontrolního souboru,  - počet členů

pokusného souboru,  - směrodatná odchylka kontrolního souboru,  směrodatná odchylka pokusného souboru.

Testovacímu kritériu přísluší t-rozdělení se stupněm volnosti, které se vypočte následovně:

 =  +  − 2 36

Pokusný soubor se od kontrolního souboru statisticky významně liší,

pokud vypočtené testovací kritérium t je větší než kritická hodnota  pro vypočtený stupeň volnosti v na hladině významnosti p  = 0,05. 52)

4.5.

Informace o přípravcích uváděné výrobcem

4.5.1. MedPharma – Zelený čaj Charakteristika přípravku udávaná výrobcem na obalu a na jeho webových stránkách: Doplněk stravy. Tento přípravek od firmy MedPharma obsahuje extrakt zeleného čaje se 40 % obsahem polyfenolů, který chrání buňky před oxidativním stresem. Kromě tohoto extraktu obsahuje ještě vitamín C, vitamín E, zinek a selen, které přispívají k normální činnosti štítné žlázy, stavu nehtů a vlasů. 1) Složení: Extrakt zeleného čaje; emulgátor: celulóza; L-askorbová kyselina; DL-αtokoferyl acetát; stabilizátor: kroskarmelóza sodná; oxid zinečnatý; emulgátor: hypromelóza; zvlhčovadla: kyselina stearová, stearan hořečnatý; protispékavé látky: dioxid křemičitý, talek; selenan sodný. Léková forma: tableta Balení: 60 tablet + 7 tablet zdarma Obsah v 1 tabletě (denní dávka): Zelený čaj 200 mg, vitamín C 100 mg, vitamín E 30 mg, zinek 10 mg, selen 50 µg. Dávkování: 1 tableta 1x denně. Upozornění: Nepřekračovat doporučené denní dávkování. Přípravek je určen zejména pro dospělé, neměl by se podávat dětem do 3 let. Přípravek není určen jako náhrada pestré stravy. Uchovává se v chladu a temnu při teplotě 4-25°C. Energetická hodnota ve 100 g výrobku: 1230 kJ (293 kcal) Výrobce: Medpharma, spol. s.r.o., Křiby 292, 664 17 Tetčice, ČR.

37

4.5.2. Swiss – Tree3Chlorella Charakteristika přípravku udávaná výrobcem na jeho webových stránkách: Doplněk stravy Tree3Chlorella obsahuje unikátní trojkombinaci látek pro správnou detoxikaci organizmu. V tomto komplexu se vzájemně doplňují tři přírodní složky - chlorella, kurkumin a green tea. Díky biomase chlorelly tento Tree3komplex pomáhá odstranit těžké kovy a jiné škodlivé látky z organismu, a zároveň napomáhá zregenerovat a posilovat vitalitu organizmu. Chlorella se řadí mezi jednobuněčné mikroskopické řasy. Jedná se o přírodní a komplexní zdroj všech esenciálních živin, vitaminů, minerálů a stopových prvků. Podporuje imunitní systém, vitalitu organizmu a regeneraci buněk. Její buněčné stěny se speciálním technologickým postupem upravují na aktivní mikroskopické fragmenty. Tyto fragmenty na sebe dokáží vázat a z organismu eliminovat nejen škodlivé látky ale i těžké kovy. Chlorella má blahodárný vliv na orgány, které tělo detoxikují – tj. žlučník, játra a ledviny. Podporuje i trávicí systém. Kurkumin je extrahován z kořene kurkumy dlouhé (Curcuma longa). Kurkuma je tradiční přírodní prostředek s antioxidačními účinky, který pomáhá snižit oxidační stres. Green Tea je extrahován z nejkvalitnějších listů a pupenů čajovníků Camellia sinensis. Je tradičním stimulačním přírodním prostředkem, který má antioxidační účinky a vhodně tak doplňuje účinky chlorelly. 2) Složení: Biomasa chlorelly; extrakt kurkumy (Curcuma); extrakt zeleného čaje (Green Tea); zpevňující látky: mikrokrystalická celulóza; sladidlo: maltodextrin; plnidlo: kukuřičný škrob, povidon K30; protispékavá látka: stearan hořečnatý, oxid křemičitý. Léková forma: tableta Balení: 60 tablet Obsah ve 2 tabletách (denní dávka): Tree3Complex 1220 mg: biomasa chlorelly 1000 mg, extrakt zeleného čaje 200 mg, extrakt kurkumy 20 mg. Dávkování: Dospělý užívá pravidelně 2 tablety denně, pro dosažení rychlejšího nástupu účinku lze užívat až 4 tablety denně po dobu 1 - 2 týdnů. Přípravek je možné užívat dlouhodobě. Vhodný je pro diabetiky a celiatiky, v doporučené

38

denní dávce 2 tablety denně mohou užívat i kojící ženy. Při užívání přípravku Tree3Chlorella je třeba dodržovat zásady zdravé výživy a životosprávy. Upozornění: Nepřekračovat doporučené denní dávkování. Přípravek není určen pro děti do 3 let. Ukládat mimo dosah dětí. Užívání v těhotenství by mělo být zkonzultováno s lékařem nebo lékárníkem. Není určeno jako náhrada pestré stravy. Neužívat v případě alergie na některou z obsažených složek. Přípravek je nutno skladovat v suchu a temnu při teplotě 15-25 °C a chránit před vlhkem a přímým slunečním zářením. Výrobce: Ve spolupráci se SWISS Pharmaceutical Investment vyrábí Simply You Pharmaceuticals a. s., Roháčova 188/37, 130 00 Praha 3, ČR, EU.

4.5.3. Lipoxal Xtreme II Charakteristika přípravku udávaná výrobcem na jeho webových stránkách: Doplněk stravy Lipoxal Xtreme II obsahuje vysoce účinné extrakty ze zeleného čaje, zázvoru, guarany a synefrin z plodů hořkého pomeranče - Citrus aurantium. Na stimulaci metabolizmus tuků a na zvýšení intenzity jejich spalování se podílí zejména komplex účinných látek ze zeleného čaje, guarany a synefrin. Zelený čaj, guarana, extrakt z olivových listů a korejský červený ženšen mají antioxidační vlastnosti a chrání tak buňky těla před oxidačním stresem, který může mimo jiné vzniknout i během spalování tuků. Koncentrovaný extrakt ze zeleného čaje (Camellia sinensis) obsahuje vysoký podíl polyfenolů, včetně katechinů a epigallokatechin gallátu (EGCG), je silným buněčným antioxidantem a chrání buňky před poškozením. Spolu s kofeinem je schopen inhibovat střevní lipázu, stimulovat lipolýzu (odbourávání tuků), blokovat diferenciaci a množení tukových buněk, snižovat lipoperoxidaci nasycených mastných kyselin (oxidace mastných kyselin může podporovat rozvoj aterosklerózy) a stimulovat termogenezi (výdej tepla). Na zvýšení výkonnosti organismu a úpravě hladin krevního cukru se podílí extrakt ze ženšenu (Panax ginseng) s obsahem ginsenosidů. Má i významný účinek adaptogenní, tonizující a metabolický.

39

Za stimulaci adrenergního nervového systému a termogenezi je zodpovědný koncentrovaný kakaový extrakt (Theobroma cacao) s obsahem theobrominu. Zároveň má i antioxidační účinek. Na podpoře srdeční činnosti, stimulaci krevního oběhu a výdeji kalorií se podílí Guarana (Paullinia cupana), která je přírodním zdrojem důležitého methylxantinu kofeinu. Stimulaci metabolismu a krevního oběhu podporuje extrakt z listů olivovníku (Olea europaea) s vysokým obsahem oleuropeinu. Má i výrazný účinek antioxidační. Vyšší dávky extraktu působí snížení krevního tlaku. Na tonizaci zažívacího ústrojí a stimulaci termogeneze (výdej tepla) se podílí extrakt ze zázvoru (Zingiber officinalis) s obsahem gingerolů. Extrakt vykazuje i protizánětlivé účinky. L-karnitin tartrát je stabilnější formou L-karnitinu. Kromě antioxidačních účinků stimuluje i odbourávání uvolněných mastných kyselin ve svalech. Jeho vyšší přísun by měl být v průběhu nevyvážených diet nebo u nedostatečně vyvinutého svalového korzetu. Synefrin je látka alkaloidní povahy. Vyskytuje se v oplodí divokého pomeranče (Citrus aurantium). Zrychluje metabolismus bez negativního vlivu na srdeční činnost či krevní tlak. 3) Složení: Zelený čaj extrakt; látky protispékavé: mikrokrystalická celulóza, kyselina stearová, stearát hořečnatý, talek; plnidlo: fosforečnan vápenatý, zázvor extrakt, guarana extrakt, extrakt z plodů Citrus aurantium; stabilizátory: karboxymethylcelulóza, hydroxypropylmethylcelulóza; kakao extrakt, guarana extrakt, Panax ginseng extrakt, L-karnitin tartát, olivové listí extrakt, korejský ženšen červený; barviva: titanová běloba, oxidy a hydroxidy železa; odpěňovač: polyethylenglykol. Léková forma: tableta Balení: 120 tablet Obsah ve 4 tabletách (denní dávka): Zelený čaj extrakt (45 % EGCG) 650 mg, guarana extrakt (22 % kofeinu) 120 mg, kakao extrakt (98 % theobrominu) 50 mg, Panax ginseng extrakt (10 % ginsenosidů) 50 mg, korejský ženšen červený 40 mg, zázvor extrakt (5 % gingerolů) 150 mg, L-karnitin tartát 50 mg, olivové listí extrakt (20 % oleuropeinu) 50 mg, synefrin 10 mg.

40

Dávkování: 2 tablety 2 krát denně. Tablety se zapíjí dostatečným množstvím vody a měly by být užívány současně s jídlem. Nesmí se užívat na lačno nebo večer před spaním. Upozornění: Nepřekračovat doporučenou denní dávku. Výrobek není určen dětem, těhotným a kojícím ženám, a není určen ani jako náhrada pestré stravy. Uchovávat mimo dosah dětí. Skladuje se v suchu a temnu při teplotě do 25 º C. Distributor: Walmark, a.s., Oldřichovice 44, Třinec, ČR.

4.5.4. Strong Nature - Zelená káva Charakteristika přípravku udávaná výrobcem na jeho webových stránkách: Doplněk stravy Strong Nature Zelená káva obsahuje bezkofeinový extrakt ze zelené kávy, který podporuje snižování hmotnosti přirozenou cestou bez hladovění a diet. Zelená káva se zde podílí na formování tvaru těla, zeštíhlení pasu a snižování hmotnosti. Aktivní látkou v těchto kapslích je tzv. Svetol® (registrovaná obchodní značka firmy Naturex SA, Francie), což je standardizovaný sušený výtažek ze zrn zelené kávy (Coffea robusta P.) se 45 – 50 % obsahem chlorogenových kyselin. 4) Složení: Svetol ® – standardizovaný suchý výtažek ze zrn zelené kávy; želatina; barviva: oxid titaničitý (E171), chinolonová žlutá (E104), patentová modrá (E131), sunset žlutá (E110), ponceau 4R (E124). Léková forma: kapsle Balení: 20 kapslí Obsah v 1 kapsli (denní dávka): Svetol (aktivní látka) 400 mg, jde o výtažek ze zelené kávy se 45 – 50 % chlorogenových kyselin. Dávkování: 1 kapsle denně po dobu nejméně 60 dnů. Kapsle se užívají zpravidla 20 minut před hlavním jídlem a je třeba je dostatečně zapít tekutinou. Tento přípravek je doporučován osobám se zvýšenou tělesnou hmotností. Urychluje metabolismus (zrychluje zejména spalování tuků) a snižuje chuť k jídlu. Doporučená denní dávka se nesmí překročit. Upozornění: Nedoporučuje se užívání přípravku dětem do 16 let, těhotným a kojícím ženám, osobám se srdečními či jinými cévními chorobami v pokročilém 41

stadiu, osobám s vysokým krevním tlakem a diabetem 1. typu. Uchovávat mimo dosah malých dětí. Barviva sunset žlutá (E110), chinolinová žlutá (E104) a ponceau 4R (E124) by mohla vyvolat nepříznivý účinek na činnost a pozornost dětí. Tento doplněk stravy neslouží jako náhrada rozmanité stravy. Uchovávat na tmavém a suchém místě, při pokojové teplotě v rozmezí 15-25° C. Doplněk stravy Strong Nature Zelená káva je vyroben z vysoce kvalitních surovin v souladu se standardami HACCP, BS OHSAS 18001:2007, ISO 9001:2008 a ISO 14001:2004. Energetická hodnota ve 100 g přípravku: 1626,4 kJ (383 kcal) Výrobce: Elephant Co, Pančevački put 42 – 44, 11000 Beograd, Srbsko. Dovozce pro ČR: STERNA CONSULTING, s.r.o., J.Feketeházyho 1/6668, 927 01 Šaľa, Slovenská republika.

4.5.5. Vieste Zelená káva extra Charakteristika přípravku udávaná výrobcem na jeho webových stránkách: Doplněk stravy. Přípravek Zelená káva extra obsahuje vysoké množství kyseliny chlorogenové a polymerických fenolů, které se řadí mezi silné antioxidanty. Udává se, že extrakt ze zelené kávy ve formě kapslí má mnohem výraznější účinky než pouhé pití zelené kávy. Navíc doplněk stravy obsahuje vitamín C a chrom, jež jsou prospěšné pro správnou látkovou výměnu. Vitamín C je nezbytný pro řadu procesů, které v našem těle probíhají. Přispívá ke tvorbě krvinek, podílí se na dobrém vývoji zubů, kostí a chrupavek, podporuje odolnost a obranyschopnost organismu, v neposlední řadě má pozitivní vliv i na hubnutí. Působí i při vstřebávání železa, které se nepřímo podílí na trávení. V kombinaci s kofeinem (zelená káva), dokáže vitamín C působit na výkonnost organismu, což může napomoci zefektivnit hubnoucí trénink. Chrom je důležitým stopovým prvkem, který přispívá nejen k normálnímu metabolismu živin z potravy, ale i k udržení normální hladiny cukru v krvi. 5) Složení: Extrakt ze zelené kávy (45 % kyselina chlorogenová, 5 % kofein), vitamin C, chrom (III) chlorid-6-hydrát, pomocné látky: želatina a kukuřičný škrob. 42

Léková forma: kapsle Balení: 60 kapslí Obsah v jedné kapsli: Zelená káva 200 mg, vitamín C 20 mg, chrom 30 µg. Dávkování: Užívají se 2 - 3 kapsle denně. Kapsle by se měly zapít dostatečným množstvím tekutiny. Nesmí se překračovat doporučené denní dávkování. Upozornění: Přípravek není určen pro děti, těhotné a kojící ženy, dále se nedoporučuje osobám se srdečními či cévními chorobami v pokročilém stádiu, osobám s vysokým krevním tlakem a diabetem 1. typu. Neslouží jako náhrada pestré stravy. Uchovávat v suchu při teplotě do 25°C. Ukládat mimo dosah dětí. Výrobce: Medicura Natural Products Inc, Tulpenweg 6, 97724 Burglauer, Německo. Distributor: Vieste group, s.r.o., Heinemannnova 2695/6, 160 00 Praha 6.

4.5.6. Fit and Slim GC 1000 Zelená káva Charakteristika přípravku udávaná výrobcem na jeho webových stránkách: Doplněk stravy. Zelená káva je bohatým zdrojem aktivních látek. Zásadní význam pro

předpokládané

vlastnosti

tohoto

přípravku

má

zejména

kyselina

chlorogenová. Kyselina chlorogenová patří mezi silné antioxidanty a ve vysoké dávce příznivě ovlivňuje i metabolismus cukrů. Tělu tak nabízí dodatečný zdroj energie, který by se jinak uložil ve formě tuku. V kombinaci s tělesnou aktivitou může užívání kapslí Fit and Slim GC 1000 mg napomoci ke snižování hmotnosti a štíhlejšímu pasu. 6) Složení: Extrakt zelené kávy, plnidlo: mikrokrystalická celulóza; protispékavá látka: stearan hořečnatý; želatina, barvivo: oxid titaničitý. Léková forma: kapsle Balení: 40 kapslí Obsah v jedné kapsli (denní dávka): Jedna kapsle obsahuje zrna zelené kávy (50% kyselina chlorogenová - extrakt 40:1), kde 25 mg extraktu odpovídá 1000 mg. Dávkování: 1 - 2 kapsle denně. Nesmí se překračovat doporučená denní dávka. Upozornění: S ohledem na vysoké množství účinné látky nelze tento výrobek doporučit dětem do 16 let, těhotným a kojícím ženám, osobám se srdečními, 43

případně jinými cévními chorobami, dále osobám s vysokým krevním tlakem a nemocným s diabetem 1. typu. Přípravek není určen jako náhrada pestré stravy. Uchovávat v suchu při teplotě do 25°C. Ukládat mimo dosah dětí. Výrobce: Willows Ingredients Ltd., Ashford, Co. Wicklow, Irsko. Distributor: Celius CZ s.r.o., Moskevská 534, 101 00 Praha 10.

4.5.7. GS C.L.A. 2000 se zeleným čajem Charakteristika přípravku udávaná výrobcem v příbalové informaci a na webových stránkách výrobce: Doplněk stravy. Přípravek GS C.L.A. 2000 se zeleným čajem obsahuje vysoce koncentrovanou 80 % konjugovanou kyselinu linolovou (CLA) a standardizovaný extrakt ze zeleného čaje. Tyto dvě složky se navzájem vhodně doplňují. Zrychlují metabolismus, regulují tělesnou hmotnost a podporují hubnutí. Konjugovaná kyselina linolová (CLA) je esenciální mastná kyselina, kterou lidský organismus neumí sám vytvořit. Extrakt zeleného čaje podporuje metabolismus a napomáhá k regulaci tělesné hmotnosti. 7) Složení: Konjugovaná kyselina linolová (C.L.A.), želatina, glycerol, protispékavá látka: oxid křemičitý; extrakt ze zeleného čaje, čištěná voda, barvivo: E171, E141. Léková forma: měkká želatinová kapsle Balení: 40 + 40 kapslí zdarma Obsah v 1 kapsli: 80 % C.L.A. 1000 mg, extrakt ze zeleného čaje 30 mg. Dávkování: Užívá se pravidelně 1–2 kapsle 2x denně jako součást dietního režimu při snižování tělesné hmotnosti. Přípravek je vhodný i k dlouhodobému užívání. Upozornění: Přípravek není určen dětem, těhotným a kojícím ženám. Nemělo by se překračovat doporučené denní dávkování. Není určeno jako náhrada pestré stravy. Barvivo E104 by mohlo nepříznivě ovlivnit činnost a pozornost dětí. Uchovává se při teplotě 10–25 °C. Nutno chránit před přímým slunečním zářením a vlhkem. Výrobek neobsahuje lepek, cukr ani laktózu. Výrobce: Se svolením Green-Swan Pharmaceuticals Ltd., England vyrábí GreenSwan Pharmaceuticals CR, a. s., Pod Višňovkou 27, 140 00 Praha 4 - Krč, Česká republika. 44

4.5.8. Bioaktivní C.L.A. Booster Charakteristika přípravku udávaná výrobcem na jeho webových stránkách: Doplněk stravy. Přípravek Bioaktivní C.L.A. Booster je zaměřen na podporu hubnutí. Na účinku se podílí kombinace dvou látek - konjugované kyseliny linolové (CLA) s přírodním, vysoce účinným rostlinným extraktem ze zeleného čaje (GTE), u kterého bylo vědeckými studiemi prokázáno, že zvyšuje energetický výdej a podporuje oxidaci tuků. Proto může ovlivnit nejen tělesnou hmotnost, ale i poměr tuků a svalů v těle. Kombinace těchto dvou látek má vliv na účinnější spalování tuků a zabraňuje tak jeho následnému ukládání. Tato kombinace konjugované kyseliny linolové a zeleného čaje je vhodná pro všechny, kteří pracují na snížení tělesné hmotnosti nebo chtějí zlepšit poměr mezi tukovou a svalovou tkání. Nejlepších výsledků je dosaženo, když se doplněk stravy Bioaktivní C.L.A. Booster kombinuje s pravidelným cvičením. Svalová tkáň je stimulována ke spalování více tuků. Tuk přijatý stravou je pak lépe využit. Doporučená doba aktivní činnosti při užívání tohoto přípravku je nejméně 30 min denně. Konjugovaná kyselina linolová (CLA) je mastná kyselina. Vyskytuje se v mase a mléce všech přežvýkavců. Kyselina linolová je enzymaticky přeměňována z trávy, při trávicím procesu přežvýkavců. Ve studiích bylo prokázáno, že CLA jednak zrychluje metabolizmus tuků ve svalech a jednak podporuje růst svalové tkáně. CLA je schopna tlumit činnost lipoprotein-lipázy, což je enzym důležitý pro ukládání tuků v těle. Zároveň stimuluje karnitin-palmitoyl-transferázu, což je enzym řídící metabolizmus tuků ve svalech. CLA tedy udržuje zdravou rovnováhu mezi svalovou a tukovou tkání v těle, a to tak že brání ukládání tuků v těle a zároveň stimuluje svaly k přeměně tuků na energii. CLA získala díky těmto svým zdraví prospěšným účinkům certifikát GRAS (Generally Recognized As Safe). Tento certifikát je přidělován bezpečným potravinářským přídavným látkám. Výtažek ze zeleného čaje - Green Tea Extract (GTE), obsahuje účinnou složku EGCG (epigallokatechin gallát), která napomáhá tělu udržovat normální metabolizmus tuků. 8) Složení: Konjugovaná kyselina linolová (CLA), výtažek ze zeleného čaje, mastné kyseliny z oleje ze semen světlice barvířské, želatina, zvlhčující látka:

45

purifikovaná voda; barvivo: amoniakový karamel (E150c); protispékavá látka: oxid křemičitý. Lékovou forma: měkká želatinová kapsle Balení: 80 kapslí Obsah v jedné kapsli: Konjugovaná kyselina linolová (CLA) 525 mg, výtažek ze zeleného čaje 250 mg. Dávkování: U dospělého člověka je doporučena dávka 2 - 6 kapslí za den. Děti od 10 let mohou 2 kapsle 1 – 2 x denně. Přípravek lze užívat i u dětí od 3 do 10 let, v dávce jedna kapsle 1 - 2x denně. Užívat mohou i těhotné a kojící ženy. Kapsle se užívají během jídla. Upozornění: Nesmí se překračovat doporučená denní dávka. Není určeno pro děti do 3 let. Není určeno jako náhrada pestré stravy. Přípravek se uchovává při pokojové teplotě 15–25 °C. Nutno ukládat mimo dopad přímého slunečního světla. Při nízké teplotě by se obsah kapslí mohl zakalit. Energetická hodnota v jedné kapsli: 35,8 kJ (8,6 kcal) Výrobce: Pharma Nord ApS, Tinglykke 4-6, DK-6500 Vojens, Dánsko a Dovozce a distributor: Pharma Nord Praha s.r.o. - Pražská 387, 250 70 Odolena Voda, ČR.

46

5. VÝSLEDKY V následujících tabulkách a grafech jsou uvedeny výsledky HPLC analýzy obsahových látek v komerčně dostupných doplňcích stravy. Veškeré hodnoty byly získány průměrem tří hodnot. Statisticky významné výsledky a průměrné hodnoty jsou v tabulkách zvýrazněny.

Tabulka č. 1: Přehled navážek a průměrná hmotnost tablet

Navážka (g) 1. Stanovení s 60 % methanolem

Název produktu

1. MedPharma - Zelený čaj 2. Swiss - Tree3Chlorella 3. Lipoxal Xtreme II 4. Strong Nature - Zelená káva 5. Vieste - Zelená káva extra 6. Fit and Slim GC 1000 Zelená káva 7. GS C.L.A. 2000 se zeleným čajem 8. Bioaktivní C.L.A. Booster

Průměrná Průměrná Průměrná navážka u navážka u hmotnost 2. Stanovení 1. stanovení 2. stanovení 1 tablety se 100 % (g) (g) (g) methanolem

1

0,4032

0,4040

2

0,4066

0,4044

3

0,4021

0,4071

1

0,4002

0,4062

2

0,4029

0,4043

3

0,4018

0,4066

1 2

0,4059 0,4042

0,4077 0,4066

3

0,4009

0,4023

1

0,4094

0,3755

2

0,4018

0,4009

3

0,4007

0,4140

1

0,4003

0,4011

2 3 1

0,4030 0,3796 0,4064

2

0,4040

0,4052

0,6045

0,4016

0,4057

0,7883

0,4037

0,4055

0,6224

0,4040

0,3968

0,5169

0,4009 0,4087 0,4064

0,3943

0,4036

0,4967

0,4005

0,4042

0,4039

0,4065

0,3541

3

0,4049

0,4090

1 2

0,4252 0,4097

0,4107 0,4086

0,4164

0,4068

1,5150

3

0,4143

0,4010

1

0,4002

0,4050

2

0,4061

0,4147

0,4085

0,4087

1,3350

3

0,4191

0,4064

47

5.1.

Vyhodnocení jednotlivých vzorků

5.1.1. MedPharma – Zelený čaj Tabulka č. 2: Obsah katechinů a kyseliny gallové

Obsah jednotlivých látek (%) vzorek kyselina gallová

GC

EGC

C

EGCG

EC

GCG ECG

Celkový obsah katechinů (%) CG

1

0,113

0,000 0,000 0,702 0,000 0,032 0,459 0,000 0,128

1,321

2

0,108

0,000 0,000 0,664 0,000 0,028 0,427 0,000 0,121

1,240

3

0,113

0,000 0,000 0,673 0,000 0,017 0,521 0,011 0,118

1,340

Průměrný obsah (%)

0,111

0,000 0,000 0,680 0,000 0,026 0,469 0,004 0,122

1,300

Tabulka č. 3: Obsah fenylpropanových kyselin a flavonoidů

Celkový Celkový obsah obsah kys. kys. vzorek kyselina kyselina kávová chlorokyselina kyselina chloro- chlorogenová kávová kávová hyperosid quercitrin quercetin A+B genová genová (%) A+B (%) A B A B 0,000 0,000 0,002 0,005 0,000 0,008 0,000 1 0,000 0,007 Obsah jednotlivých látek (%)

2

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,005

0,000

0,000

0,000

3

0,000

0,000

0,001

0,004

0,000

0,004

0,000

0,000

0,005

Průměrný 0,000 obsah (%)

0,000

0,001

0,003

0,000

0,006

0,000

0,000

0,004

48

5.1.2. Swiss – Tree3Chlorella Tabulka č. 4: Obsah katechinů a kyseliny gallové

Obsah jednotlivých látek (%) vzorek kyselina gallová

GC

EGC

C

EGCG

EC

GCG ECG

Celkový obsah katechinů (%) CG

1

0,011

0,000 0,000 0,101 0,000 0,000 0,048 0,205 0,000

0,354

2

0,012

0,000 0,000 0,105 0,000 0,000 0,049 0,224 0,000

0,378

3

0,015

0,000 0,000 0,140 0,000 0,000 0,056 0,283 0,000

0,479

Průměrný obsah (%)

0,013

0,000 0,000 0,115 0,000 0,000 0,051 0,237 0,000

0,404

Tabulka č. 5: Obsah fenylpropanových kyselin a flavonoidů

Celkový Celkový obsah obsah kys. kys. vzorek kyselina kyselina kávová chlorokyselina kyselina chloro- chlorogenová kávová kávová hyperosid quercitrin quercetin A+B genová genová A+B (%) (%) A B A B 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 1 0,000 0,000 Obsah jednotlivých látek (%)

2

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

3

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

Průměrný 0,000 obsah (%)

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

49

5.1.3. Lipoxal Xtreme II Tabulka č. 6: Obsah katechinů a kyseliny gallové

Obsah jednotlivých látek (%) vzorek kyselina gallová

GC

EGC

C

EGCG

EC

GCG ECG

Celkový obsah katechinů (%) CG

1

0,211

0,000 0,000 1,452 0,035 0,420 0,875 0,000 0,091

2,873

2

0,228

0,000 0,000 1,454 0,036 0,416 0,879 0,000 0,113

2,898

3

0,205

0,000 0,000 1,349 0,030 0,368 0,816 0,000 0,085

2,648

Průměrný obsah (%)

0,215

0,000 0,000 1,418 0,034 0,401 0,857 0,000 0,096

2,806

Tabulka č. 7: Obsah fenylpropanových kyselin a flavonoidů

Celkový Celkový obsah obsah kys. kys. kyselina kávová chlorochlorogenová hyperosid quercitrin quercetin A+B genová (%) A+B (%) B 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000

Obsah jednotlivých látek (%) vzorek

1

kyselina kyselina kyselina chlorokávová kávová genová A B A 0,000 0,000 0,000

2

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

3

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

Průměrný 0,000 obsah (%)

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

50

5.1.4. Strong Nature - Zelená káva Tabulka č. 8: Obsah katechinů a kyseliny gallové

Obsah jednotlivých látek (%) vzorek kyselina gallová

GC

EGC

C

EGCG

EC

GCG ECG

Celkový obsah katechinů (%) CG

1

0,000

0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000

0,000

2

0,000

0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000

0,000

3

0,000

0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000

0,000

Průměrný obsah (%)

0,000

0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000

0,000

Tabulka č. 9: Obsah fenylpropanových kyselin a flavonoidů

Celkový Celkový obsah obsah kys. kys. kyselina kyselina kávová chlorokyselina kyselina chloro- chlorogenová kávová kávová hyperosid quercitrin quercetin A+B genová genová A+B (%) (%) A B A B 0,059 3,088 3,047 2,134 0,000 0,000 0,001 3,147 5,181 Obsah jednotlivých látek (%)

vzorek

1 2

0,074

2,951

3,218

2,293

0,000

0,000

0,000

3,025

5,511

3

0,660

2,903

2,996

2,008

0,000

0,000

0,001

3,563

5,004

Průměrný 0,264 obsah (%)

2,981

3,087

2,145

0,000

0,000

0,001

3,245

5,232

51

5.1.5. Vieste Zelená káva extra Tabulka č. 10: Obsah katechinů a kyseliny gallové

Obsah jednotlivých látek (%) vzorek kyselina gallová

GC

EGC

C

EGCG

EC

GCG ECG

Celkový obsah katechinů (%) CG

1

0,000

0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000

0,000

2

0,000

0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000

0,000

3

0,000

0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000

0,000

Průměrný obsah (%)

0,000

0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000

0,000

Tabulka č. 11: Obsah fenylpropanových kyselin a flavonoidů

Celkový Celkový obsah obsah kys. kys. vzorek kyselina kyselina kávová chlorokyselina kyselina chloro- chlorogenová kávová kávová hyperosid quercitrin quercetin A+B genová genová (%) A+B (%) A B A B 0,009 0,114 0,096 0,000 0,000 0,000 0,000 1 0,123 0,096 Obsah jednotlivých látek (%)

2

0,012

0,141

0,074

0,000

0,000

0,000

0,000

0,153

0,074

3

0,006

0,152

0,690

0,000

0,000

0,000

0,000

0,158

0,690

Průměrný obsah (%)

0,009

0,136

0,287

0,000

0,000

0,000

0,000

0,145

0,287

52

5.1.6. Fit and Slim GC 1000 Zelená káva Tabulka č. 12: Obsah katechinů a kyseliny gallové

Obsah jednotlivých látek (%) vzorek kyselina gallová

GC

EGC

C

EGCG

EC

GCG

ECG

CG

Celkový obsah katechinů (%)

1

0,000

0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000

0,000

2

0,000

0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000

0,000

3

0,000

0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000

0,000

Průměrný obsah (%)

0,000

0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000

0,000

Tabulka č. 13: Obsah fenylpropanových kyselin a flavonoidů

Celkový Celkový obsah obsah kys. kys. kyselina kyselina kávová chlorokyselina kyselina chloro- chlorogenová kávová kávová hyperosid quercitrin quercetin A+B genová genová (%) A+B (%) A B A B 0,016 0,038 0,128 0,000 0,000 0,000 0,000 0,054 0,128 Obsah jednotlivých látek (%)

vzorek

1 2

0,015

0,029

0,132

0,000

0,000

0,000

0,000

0,044

0,132

3

0,020

0,039

0,133

0,000

0,000

0,000

0,000

0,059

0,133

Průměrný obsah (%)

0,017

0,035

0,131

0,000

0,000

0,000

0,000

0,052

0,131

53

5.1.7. GS C.L.A. 2000 se zeleným čajem Tabulka č. 14: Obsah katechinů a kyseliny gallové

Obsah jednotlivých látek (%) vzorek kyselina gallová

GC

EGC

C

EGCG

EC

GCG ECG

Celkový obsah katechinů (%) CG

1

0,000

0,000 0,000 0,166 0,000 0,027 0,547 0,000 0,104

0,844

2

0,000

0,000 0,000 0,160 0,000 0,027 0,521 0,000 0,098

0,806

3

0,000

0,000 0,000 0,157 0,000 0,025 0,514 0,000 0,097

0,793

Průměrný obsah (%)

0,000

0,000 0,000 0,161 0,000 0,026 0,527 0,000 0,100

0,814

Tabulka č. 15: Obsah fenylpropanových kyselin a flavonoidů

Celkový Celkový obsah obsah kys. kys. vzorek kyselina kyselina kávová chlorokyselina kyselina chloro- chlorogenová kávová kávová hyperosid quercitrin quercetin A+B genová genová (%) A+B (%) A B A B 0,006 0,003 0,002 0,023 0,000 0,000 0,000 1 0,009 0,025 Obsah jednotlivých látek (%)

2

0,007

0,000

0,000

0,028

0,000

0,000

0,000

0,007

0,028

3

0,007

0,002

0,000

0,027

0,000

0,000

0,000

0,009

0,027

Průměrný obsah (%)

0,007

0,002

0,001

0,026

0,000

0,000

0,000

0,008

0,027

54

5.1.8. Bioaktivní C.L.A. Booster Tabulka č. 16: Obsah katechinů a kyseliny gallové

Obsah jednotlivých látek (%) vzorek kyselina gallová

GC

EGC

C

EGCG

EC

GCG ECG

Celkový obsah katechinů (%) CG

1

0,000

0,000 0,152 0,028 0,110 0,379 0,070 0,100 0,000

0,839

2

0,000

0,000 0,172 0,033 0,123 0,428 0,079 0,110 0,000

0,945

3

0,000

0,000 0,186 0,037 0,142 0,523 0,095 0,131 0,000

1,114

Průměrný obsah (%)

0,000

0,000 0,170 0,033 0,125 0,443 0,081 0,114 0,000

0,966

Tabulka č. 17: Obsah fenylpropanových kyselin a flavonoidů

Celkový Celkový obsah obsah kys. kys. kyselina kyselina kávová chlorokyselina kyselina chloro- chlorogenová kávová kávová hyperosid quercitrin quercetin A+B genová genová (%) A+B (%) A B A B 0,017 0,010 0,004 0,001 0,000 0,000 0,000 0,027 0,005 Obsah jednotlivých látek (%)

vzorek

1 2

0,012

0,009

0,006

0,003

0,000

0,000

0,000

0,021

0,009

3

0,021

0,012

0,005

0,003

0,000

0,000

0,000

0,033

0,008

Průměrný obsah (%)

0,017

0,010

0,005

0,002

0,000

0,000

0,000

0,027

0,007

55

5.2.

Souhrnné vyhodnocení

Graf č. 2:

Graf č. 3:

56

Graf č. 4:

Graf č. 5:

57

Graf č. 6:

58

6. DISKUSE Cílem

této

rigorózní

práce

bylo

stanovit

obsah

katechinů

a

fenylpropanových kyselin ve vybraných doplňcích stravy. Tato práce byla zaměřena na skupinu doplňků stravy s obsahem zelené kávy a zeleného čaje, vyskytujících se na území ČR, které podle výrobců přispívají k regulaci tělesné hmotnosti, podporují energetický metabolismus a celkově přispívají k detoxikaci organismu. Ve většině případů se jedná spíše o polykomponentní přípravky, vyráběné v ČR, ale i dovážené. V některých přípravcích jsou zelená káva a zelený čaj hlavními složkami a v některých mají naopak jen doplňující účinek k jiným složkám – např. ke konjugované kyselině linolové. Zkoumané přípravky byly ve třech typech lékových forem, a to tablety, měkké a tvrdé želatinové kapsle. Celkem bylo zakoupeno 8 přípravků, které byly podrobeny HPLC analýze na obsah jednotlivých katechinů, fenylpropanových kyselin a některých flavonoidů. Při přípravě vzorků byly použity dvě metody extrakce a dvě metody HPLC analýzy. První metoda extrakce probíhala s 60 % methanolem na vodní lázni a byla použita pro stanovení kyseliny gallové a katechinů. Druhá metoda extrakce probíhala se 100 % methanolem a byla použita pro stanovení flavonoidů a fenylpropanových kyselin. Vyhodnocení výsledků nebylo jednoduché, protože nebyly k dispozici výchozí extrakty, které firmy používají pro výrobu doplňků stravy. Nebyly tedy známy kvality výchozích materiálů. Hodnoty naměřené v rámci této práce byly srovnávány jednak s údaji na etiketách jednotlivých přípravků a jednak s obecně známými hodnotami, kde kvalitní extrakt ze zeleného čaje obsahuje 50 – 80 % katechinů

53)

. Za dávku působící antioxidačně a podporující redukci tukových

zásob je považováno množství od 60 mg extraktu ze zeleného čaje denně.

54)

Zhodnocena byla i legislativa, a to do jaké míry byla splněna či nikoliv. Porovnávány byly údaje na etiketách jednotlivých přípravků, na webových stránkách výrobců, případně v příbalové informaci, pokud byla přítomna. Experiment č. 1 : MedPharma – Zelený čaj V tomto přípravku bylo naměřeno 1,3 % katechinů, 0,111 % kyseliny gallové a v malých množstvích byly detekovány kyselina chlorogenová a 59

quercitrin. Výrobce na své etiketě udává obsah 200 mg extraktu ze zeleného čaje se 40 % obsahem polyfenolů. Po přepočtu by tedy v 1 tabletě mělo být 80 mg katechinů. To znamená, že obsah udávaný výrobcem by měl být 13,2 % katechinů v tabletě. Námi naměřená hodnota je tedy podstatně nižší, než uvádí výrobce, a dle doporučení užívat jednu tabletu denně, se jeví obsah katechinů jako nedostatečný. Z hlediska legislativy jsou na obalu uvedeny veškeré povinné údaje, ostatní informace o přípravku jsou spíše stručnějšího charakteru. Experiment č. 2: Swiss – Tree3Chlorella V tomto vícesložkovém přípravku extrakt ze zeleného čaje nepředstavuje dominantní složku, tou je chlorella. Výsledky ukazují, že procentuální zastoupení katechinů bylo 0,404 % a kyseliny gallové 0,013 %. Obsah fenylpropanových kyselin ani flavonoidů zaznamenán nebyl. Výrobce na obalu udává 200 mg extraktu zeleného čaje v doporučené denní dávce 2 tablety, to tedy znamená v jedné tabletě 100 mg extraktu zeleného čaje. Při použití kvalitního výchozího extraktu (s obsahem alespoň 50 % katechinů) by obsah měl být 50 mg katechinů v tabletě, což odpovídá 6,34 % katechinů.

Při srovnání s těmito obvyklými

hodnotami je tedy námi naměřený obsah nízký, a to i při počáteční dávce 4 tablety. Měření však mohlo být zatíženo chybou, neboť chlorella která obsahuje mimo jiné i velké množství bílkovin, mohla část tříslovin vázat a vytvářet komplexní sloučeniny. Informace o přípravku uváděné výrobcem jsou obsáhlejší zejména na webových stránkách. Vhodné by bylo doplnění údajů na etiketě o množství účinných složek vztažených na jednu tabletu. Jako jeden z mála výrobců udává na obale i informaci o dodržování zdravé výživy a životosprávy. Experiment č. 3: Lipoxal Xtreme II U tohoto přípravku bylo naměřeno jedno z největších množství katechinů ze všech hodnocených přípravků, a to 2,806 %. Dále bylo naměřeno 0,215 % kyseliny gallové, obsah fenylpropanových kyselin ani flavonoidů zaznamenán nebyl. Výrobce na etiketě uvádí obsah 650 mg extraktu ze zeleného čaje, z toho 45 % EGCG. Tyto hodnoty jsou vztaženy na doporučenou denní dávku 4 tablety. Hodnota vztažená na jednu tabletu je tedy 162,5 mg extraktu ze zeleného čaje. Při obsahu 45 % EGCG by výrobce musel použít vysoce kvalitní extrakt obsahující minimálně 70 % katechinů. Při přepočtu na jednu tabletu by tedy obsah katechinů 60

měl být minimálně 113,75 mg, což odpovídá 18,28 % katechinů v tabletě. Námi naměřené hodnoty byly nižší. Místo největšího obsahu EGCG, který měl být nejhojněji zastoupen, bylo naměřeno největší množství katechinu (C), konkrétně 1,454 %. I tak tento přípravek podle naměřených hodnot řadíme ke kvalitnějším zástupcům. Jelikož se jedná o polykomponentní přípravek, na účinku se mohou podílet i další obsahové látky. Kromě extraktu ze zeleného čaje se na zvýšení energetického metabolismu mohou podílet i guarana a synefrin. Před oxidačním stresem, který může mimo jiné vznikat i během spalování tuků, chrání buňky extrakt z olivového listí a kakaový extrakt. Údaje uváděné výrobcem na obale jsou poměrně obsáhlé, vhodné by bylo doplnění údajů o obsahu látek v jedné tabletě a údaj o obsahu látek v procentech doporučené denní dávky. Obsáhlé informace o přípravku uvádí výrobce na webových stránkách, kde jsou detailně popsány i jednotlivé složky přípravku. Experiment č. 4: Strong Nature – Zelená káva Přípravek

firmy

Strong

Nature

obsahoval

nejvyšší

procento

fenylpropanových kyselin ze všech hodnocených přípravků, konkrétně 5,23 % kyseliny chlorogenové (A+B) a 3,25 % kyseliny kávové (A+B). Naměřeno bylo i malé procento flavonoidu quercetinu, obsah katechinů zaznamenán nebyl. Výrobce na obale uvádí 400 mg standardizovaného extraktu ze zelené kávy v jedné kapsli s obsahem 45 – 50 % chlorogenových kyselin. Po přepočtu vychází obsah fenylpropanových kyselin na 180 mg v 1 kapsli, což odpovídá 34,8 %. Námi naměřená hodnota byla výrazně nižší, při sečtení fenylpropanových kyselin byl obsah 8,48 % a je tedy čtvrtinový nežli udává výrobce. Dle doporučení užívat jednu kapsli denně se obsah jeví jako nedostatečný. Pravděpodobně byl použit výchozí extrakt nižší kvality nebo mohlo dojít k technologické chybě. I tak řadíme tento přípravek ke kvalitnějším zástupcům. Údaje o přípravku uváděné výrobcem na obalu i na webových stránkách jsou dostačující, detailně jsou popsány rizikové skupiny, pro které není užívání přípravku vhodné. Experiment č. 5: Vieste Zelená káva extra V tomto přípravku bylo procentuální zastoupení kyseliny chlorogenové (A+B) 0,287 % a kyseliny kávové (A+B) 0,145 %. Obsah dalších látek nebyl zaznamenán. Výrobce na obalu udává obsah 200 mg extraktu ze zelené kávy 61

v jedné kapsli, z toho 45% chlorogenových kyselin. Po přepočtu by tedy mělo být v jedné kapsli 90 mg chlorogenových kyselin, což odpovídá obsahu 18,12 %. Ani při doporučeném dávkování 2 – 3 kapsle denně se na tuto hodnotu nedostaneme. Pravděpodobně tedy byl při výrobě použit výchozí extrakt nižší kvality. Údaje na obale jsou spíše stručnějšího charakteru, detailně jsou uvedeny rizikové skupiny osob, pro které není přípravek vhodný, uveden je i obsah v jedné kapsli. Na webových stránkách distributora jsou detailněji rozepsány účinky jednotlivých obsahových látek. Experiment č. 6: Fit and Slim 1000 Zelená káva V tomto přípravku byly naměřeny jedny z nejnižších hodnot ze všech hodnocených přípravků. Procentuální zastoupení kyseliny chlorogenové (A+B) bylo 0,131 % a kyseliny kávové (A+B) 0,052 %. Výrobce na obale uvádí poměrně nejasně, že kapsle obsahuje 25mg extraktu ze zelené kávy obsahující 50% kyseliny chlorogenové. Po přepočtu by tedy mělo být v jedné kapsli 12,5 mg kyseliny chlorogenové, což odpovídá 3,57 %. Ovšem ani při doporučeném dávkování až 2 kapsle denně se na tuto hodnotu nedostaneme. Výrobce tedy pravděpodobně použil málo kvalitní výchozí extrakt. Údaje na obalu jsou spíše základního charakteru, detailněji jsou popsány skupiny, pro které není užívání přípravku vhodné. Výrobce zde uvádí hmotnost jedné kapsle 0,45 g, ale ani jedna kapsle této hodnoty nedosáhla, a na navážku musely být použity 2 kapsle. Průměrná hmotnost kapsle byla 0,35 g. Experiment č. 7: GS C.L.A. 2000 se zeleným čajem Zelený čaj v není v tomto přípravku dominantní, tou je konjugovaná kyselina linolová. Procentuální zastoupení katechinů bylo 0,814 %, kyseliny chlorogenové (A+B) 0,027 % a kyseliny kávové (A+B) 0,008 %. Výrobce na obalu uvádí množství 30 mg extraktu ze zeleného čaje v jedné kapsli. Při použití kvalitního výchozího extraktu (s obsahem alespoň 50 % katechinů) by obsah měl být 15 mg katechinů v tabletě, což odpovídá 0,99 % katechinů. Při srovnání s těmito obvyklými hodnotami byl námi naměřený obsah odpovídající. O přípravku tedy můžeme říci, že se řadí mezi kvalitnější zástupce z hlediska obsahu zeleného čaje. V tomto přípravku má zelený čaj spíše podpořit účinek konjugované kyseliny linolové, při dávkování 2 tablety 2x denně se však obsah extraktu ze 62

zeleného čaje jeví jako dostatečný. Údaje na obale jsou stručnějšího charakteru, informace o přípravku na webových stránkách výrobce jsou detailnější. Jako jeden z mála přípravků obsahuje i příbalový leták, kde je uvedeno, že přípravek je bezpečný i pro dlouhodobé užívání, a uvedeny jsou i zásady zdravého snižování hmotnosti a výpočet BMI. Experiment č. 8: Bioaktivní C.L.A. Booster V tomto přípravku se vyskytuje opět kombinace konjugované kyseliny linolové a zeleného čaje. Procentuální obsah katechinů byl 0,966 %, kyseliny chlorogenové (A+B) 0,007 % a kyseliny kávové (A+B) 0,027 %. Výrobce na obalu uvádí 250 mg extraktu ze zeleného čaje v jedné kapsli, tj. 1500 mg v denní dávce (vztaženo na 6 kapslí). Při použití kvalitního výchozího extraktu (s obsahem minimálně 50 % katechinů), by měl být obsah katechinů v jedné kapsli 125 mg, což odpovídá 9,36 % katechinů. Námi naměřené hodnoty byly nižší. Výrobce pravděpodobně použil výchozí extrakt nižší kvality. Jelikož se jedná o dvousložkový přípravek, není účinek připisován jen zelenému čaji, ten by měl spíše podpořit účinek konjugované kyseliny linolové, která je přítomna ve větším množství. Při srovnání s ostatními přípravky je dávka 6 kapslí za den poměrně vysoká, navíc může docházet k problémům se spolknutím kapsle, neboť jsou kapsle poměrně veliké. Výrobce na obale uvádí i množství účinných látek vztažených na 100 g, jako jeden z mála uvádí i doporučení užívat přípravek v návaznosti na pohyb a úpravu dietního režimu. Informace dostupné o tomto přípravku na webových stránkách jsou asi nejpodrobnější ze všech hodnocených přípravků, zmiňuje se i obsah EGCG, nicméně jeho přesné množství uvedeno není.

63

7. ZÁVĚR V rámci této rigorózní práce byla zvládnuta technika přípravy extraktů s obsahem katechinů a fenylpropanových kyselin ze zelené kávy, zeleného čaje a guarany. Z osmi vybraných doplňků stravy byly vytvořeny za využití dvou metod extrakty, které byly následně hodnoceny podle obsahu katechinů (GC, EGC, C, EGCG, EC, GCG, ECG, CG) a fenylpropanových kyselin (kyselina kávová, kyselina chlorogenová). Zároveň byla zvládnuta HPLC analýza pro kvantitativní stanovení uvedených katechinů a fenylpropanových kyselin. Porovnáním osmi vybraných doplňků stravy, vyrobených v ČR, i dovážených, bylo zjištěno, že jejich kvalita je značně různorodá. Ve většině případů neodpovídají uváděné údaje o obsahu účinných látek skutečně naměřeným hodnotám. Největší množství katechinů, v porovnání s deklarovaným obsahem výrobce, bylo naměřeno v přípravcích GS C.L.A. 2000 a v Lipoxalu Xtreme II. Přípravek GS C.L.A. 2000 obsahoval jako jediný deklarované množství extraktu ze zeleného čaje udávané výrobcem. Nejvíce fenylpropanových kyselin bylo obsaženo v přípravku Strong Nature – Zelená káva. Různorodá je i kvalita a množství informací uváděných o jednotlivých přípravcích. Závěrem lze konstatovat, že vybrané doplňky stravy splňují legislativní požadavky, ovšem z hlediska kvality je obsah námi testovaných biologicky aktivních složek nižší než udává výrobce. U většiny přípravků naměřené hodnoty ani nedosahují hladin potřebných pro léčebný účinek. Účinnost těchto výrobků je proto přinejmenším sporná.

64

8. LITERATURA: 1) MedPharma [online]. [cit. 2014-12-04]. Dostupné z: 2) Swiss - Tree3Chlorella [online]. [cit. 2014-12-04]. Dostupné z: 3) Lipoxal Xtreme II [online]. [cit. 2014-12-04]. Dostupné z: 4) Strong Nature – Zelená káva [online]. [cit. 2014-12-05]. Dostupné z: 5) Vieste – Zelená káva extra [online]. [cit. 2014-12-05]. Dostupné z: < http://www.viestegroup.cz/clanek-kava.php> 6) Celius – Fit and Slim GC 1000 [online]. [cit. 2014-12-06]. Dostupné z: 7) GS C.L.A. 2000 se zeleným čajem[online]. [cit. 2014-12-06]. Dostupné z: 8) Pharma Nord – Bioaktivní C.L.A. Booster [online]. [cit. 2014-12-06]. Dostupné z: 9) Státní zemědělská a potravinářská inspekce – Doplňky stravy [online]. [cit. 2014-12-07]. Dostupné z: 10) Státní zdravotní ústav – Doplňky stravy [online]. [cit. 2015-01-19]. Dostupné z: 11) Zákon č. 139/2014 Sb., o potravinách a tabákových výrobcích a o změně a doplnění některých souvisejících zákonů (zákon o potravinách). [online]. [cit. 2015-02-19]. Dostupné z: 12) Ministerstvo zemědělství – Uvádění doplňků stravy na trh [online]. [cit. 2015-01-19]. Dostupné z:

65

13) Informační centrum bezpečnosti potravin [online]. [cit. 2015-01-19]. Dostupné z: 14) Michalová I.: Průvodce spotřebitele, svazek č. 12 - Doplňky stravy (Potraviny k doplnění jídelníčku). 1.vyd. Praha: Sdružení českých spotřebitelů, o. s., 2007, s. 7-16. ISBN 978-80-903930-1-1. 15) Státní zemědělská a potravinářská inspekce – Výživová tvrzení [online]. [cit. 2015-01-19]. Dostupné z: 16) Státní zemědělská a potravinářská inspekce – Zdravotní tvrzení [online]. [cit. 2015-01-19]. Dostupné z: 17) Státní ústav pro kontrolu léčiv [online]. [cit. 2015-01-17]. Dostupné z: 18) Jahodář L.: Farmakobotanika - semené rostliny. 1.vyd. Praha: Nakladatelství Karolinum, 2006, s. 65-137. ISBN 80-246-1225-9. 19) Jeong J. H., Jeong H. R., Jo Y. N., Kim H. J., Lee U., Heo H. J.: Antioxidant and neuronal cell protective effects of columbia arabica coffee with different roasting conditions. Prev Nutr Food Sci. 2013; 18(1): 30-7. 20) National Tropical Botanical Garden [online]. [cit. 2014-12-27]. Dostupné z: 21) Botany – čajovník čínský [online]. [cit. 2014-12-27]. Dostupné z: 22) Zhao C., Li C., Liu S., Yang L.: The galloyl catechins contributing to main antioxidant capacity of tea made from Camellia sinensis in China. ScientificWorldJournal. 2014; 2014: 863984. 23) Portella R. de L., Barcelos R. P., da Rosa E. J., Ribeiro E. E., da Cruz I. B., Suleiman L., Soares F. A.: Guaraná (Paullinia cupana Kunth) effects

66

on LDL oxidation in elderly people: an in vitro and in vivo study. Lipids Health Dis. 2013; 12: 12. 24) Encyklopedie psychotropních rostlin [online]. [cit. 2014-12-28]. Dostupné z: 25) Guarana – Paullinia cupana [online]. [cit. 2014-12-28]. Dostupné z: 26) Reygaert W. C.: The antimicrobial possibilities of green tea. Front Microbiol. 2014; 5: 434. 27) Kanwar J., Taskeen M., Mohammad I., Huo C., Chan T. H., Dou Q. P.: Recent advances on tea polyphenols. Front Biosci. 2012 Jan; 4: 111–131. ¨ 28) Schramm L.: Going Green: The Role of the Green Tea Component EGCG in Chemoprevention. J Carcinog Mutagen. 2013 May 20; 4(142): 1000142. 29) Saleh F., Raghupathy R., Asfar S., Oteifa M., Al-Saleh N.: Analysis of the effect of the active compound of green tea (EGCG) on the proliferation of peripheral blood mononuclear cells. BMC Complement Altern Med. 2014; 14(1): 322. 30) Zeng Y. Q., Wang Y. J., Zhou X. F.: Effects of (−)Epicatechin on the Pathology of APP/PS1 Transgenic Mice. Front Neurol. 2014; 5: 69. 31) Reygaert W., Jusufi I.: Green tea as an effective antimicrobial for urinary tract infections caused by Escherichia coli. Front Microbiol. 2013; 4: 162. 32) Williams A. R., Fryganas C., Ramsay A., Mueller-Harvey I., Thamsborg S. M.: Direct anthelmintic effects of condensed tannins from diverse plant sources against Ascaris suum. PLoS One. 2014; 9(5): e97053. 33) Taylor P. W., Hamilton-Miller J. M., Stapleton P. D.: Antimicrobial properties of green tea catechins. Food Sci Technol Bull. 2005; 2: 71–81. 34) Mankovskaia A., Lévesque M. C., Prakki A.: Catechin-incorporated dental copolymers inhibit growth of Streptococcus mutans. J Appl Oral Sci. 2013 Mar-Apr; 21(2): 203–207. 35) Kaur H., Jain S., Kaur A.: Comparative evaluation of the antiplaque effectiveness of green tea catechin mouthwash with chlorhexidine gluconate. J Indian Soc Periodontol. 2014; 18(2): 178–182.

67

36) Paveto C., Güida M. C., Esteva M. I., Martino V., Coussio J., Flawiá M. M., Torres H. N.: Anti-Trypanosoma cruzi activity of green tea (Camellia sinensis) catechins. Antimicrob Agents Chemother. 2004; 48(1): 69–74. 37) Tanigawa T., Kanazawa S., Ichibori R., Fujiwara T., Magome T., Shingaki K., Miyata S., Hata Y., Tomita K., Matsuda K., Kubo T., Tohyama M., Yano K., Hosokawa K.: (+)-Catechin protects dermal fibroblasts against oxidative stress-induced apoptosis. BMC Complement Altern Med. 2014; 14: 133. 38) Sen S., Asokkumar K., Umamaheswari M., Sivashanmugam A.T., Subhadradevi V.: Antiulcerogenic effect of gallic Acid in rats and its effect on oxidant and antioxidant parameters in stomach tissue. Indian J Pharm Sci. 2013; 75(2): 149–155. 39) Zhao B., Hu M.: Gallic acid reduces cell viability, proliferation, invasion and angiogenesis in human cervical cancer cells. Oncol Lett. 2013; 6(6): 1749-1755. 40) Wu C., Luan H., Zhang X., Wang S., Zhang X., Sun X., Guo P.: Chlorogenic Acid Protects against Atherosclerosis in ApoE−/− Mice and Promotes Cholesterol Efflux from RAW264.7 Macrophages. PLoS One. 2014; 9(9): e95452. 41) Fuentes E., Caballero J., Alarcón M., Rojas A., Palomo I.: Chlorogenic Acid Inhibits Human Platelet Activation and Thrombus Formation. PLoS One. 2014; 9(3): e90699. 42) Yang W. S., Jeong D., Yi Y. S., Park J. G., Seo H., Moh S. H., Hong S., Cho J. Y.: IRAK1/4-Targeted Anti-Inflammatory Action of Caffeic Acid. Mediators Inflamm. 2013; 2013: 518183. 43) Wang S., Moustaid-Moussa N., Chen L., Mo H., Shastri A., Su R., Bapat P., Kwun I., Shen C. L.: Novel insights of dietary polyphenols and obesity. J Nutr Biochem. 2014 Jan; 25(1): 1-18. 44) Jeon J., Kim J. H., Lee C. K., Oh C. H., Song H. J.: The Antimicrobial Activity of (-)-Epigallocatehin-3-Gallate and Green Tea Extracts against Pseudomonas aeruginosa and Escherichia coli Isolated from Skin Wounds. Ann Dermatol. 2014 Oct; 26(5): 564–569. 45) Zákon o léčivech a o změnách některých souvisejících zákonů [online]. [cit. 2015-01-15]. Dostupné z: 68

46) Dušek J., Kašparová M., Siatka T., Spilková J., Tůmová L.: Praktická cvičení z farmakognosie. 2.vyd. Praha: Nakladatelství Karolinum, 2008, s. 52-53. ISBN 978-80-246-1589-9. 47) Hubík J., Dušek J., Spilková J.: Obecná farmakognosie – II. Sekundární látky, 1.vyd. Praha: Státní pedagogické nakladatelství, n.p., 1989, 275 s. 48) Celostní medicína - Třísloviny [online]. [cit. 2015-02-06]. Dostupné z: 49) Klimeš J. a kol., Kontrolně-analytické hodnocení léčiv lékopisnými metodami, 1.vyd. Hradec Králové: Nucleus HK, 2011, s. 245. ISBN 97880-87009-29-1 50) Křížová Š.: Diplomová práce: Produkce sekundárních metabolitů v explantátových

kulturách

třezalky

tečkované.

Hradec

Králové:

Farmaceutická fakulta, Univerzita Karlova v Praze, 2013, s. 37-38. 51) Dvořáková L.: Diplomová práce: Obsah flavonoidů v komerčně dostupných přípravcích s obsahem šišáku bajkalského. Hradec Králové: Farmaceutická fakulta, Univerzita Karlova v Praze, 2010, s. 31. 52) Reisenauer R.: Metody matematické statistiky, Praha, SNTL, 1970, s. 31. 53) Shivaprasad H. N., Khanam S.: HPLC analysis of Polyphenols in Green Tea Extracts. Asian J. Chem. 2006; 18(2): 877-881. 54) Fořt P. – Green Tea Extract [online]. [cit. 2015-02-21]. Dostupné z: 55) Směrnice Evropského parlamentu a Rady č. 2002/46/ES [online]. [cit. 2015-03-13].

Dostupné

z:


content/CS/ALL/?uri=CELEX:32002L0046> 56) Vyhláška č. 225/2008 Sb. [online]. [cit. 2015-03-13]. Dostupné z: 57) Obrázek – Coffea arabica [online]. [cit. 2015-02-28]. Dostupné z: 58) Obrázek – Camellia sinensis [online]. [cit. 2015-02-28]. Dostupné z: 59) Obrázek – Paullinia cupana [online]. [cit. 2015-02-28]. Dostupné z: 69

9. ABSTRAKT Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Farmakognozie Kandidát: Mgr. Šárka Křížová Konzultant: PharmDr. Jan Martin, Ph.D. Název rigorózní práce: Stanovení katechinů a fenylpropanových kyselin ve vybraných doplňcích stravy Klíčová slova: doplňky stravy, zelená káva, zelený čaj, guarana, katechiny, fenylpropanové kyseliny. Tato práce byla zaměřena na stanovení katechinů a fenylpropanových kyselin ve vybraných doplňcích stravy. Celkem bylo vybráno 8 doplňků stravy s obsahem zelené kávy, zeleného čaje a guarany, které jsou užívány při redukci tělesné hmotnosti, zrychlení metabolismu a detoxikaci organismu. Z těchto zkoumaných preparátů byly vždy připraveny 2 extrakty, jeden pro stanovení kyseliny gallové a katechinů, druhý pro stanovení fenylpropanových kyselin a flavonoidů. Ke stanovení zmíněných obsahových látek byla použita HPLC analýza. Z výsledků práce vyplývá, že tyto přípravky vyskytující se na území ČR, jsou ve většině případů nižší kvality. Z hlediska legislativy byly splněny veškeré požadavky, ovšem naměřený obsah účinných látek byl u většiny přípravků nižší, nežli udával výrobce.

70

10. ABSTRACT

Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of: Pharmacognosy Candidate: Mgr. Šárka Křížová Consultant: PharmDr. Jan Martin, Ph.D. Title of Thesis: The determination of catechins and phenylpropanoid acids in selected dietary supplements Key words: dietary supplements, green coffee, green tea, guarana, catechins, phenylpropanoid acids. This work was focused on the determination of catechins and phenylpropanoid acids in selected dietary supplements. We selected 8 dietary supplements containing of green coffee, green tea a and guarana, which are used for the body weight loss, boost metabolism and detoxification. We prepared 2 extracts from these examinated products, one for the determination of gallic acid and catechins, the second one for the determination of phenylpropanoid acids and flavonoids. We used HPLC analysis for the detection of mentioned substances. The results of this work show that these products occuring in the territory of the Czech Republic have lower quality in most cases. Legislative requirements of these products have been met, but the measured content of active substances was lower than the producer declarate.

71

11. OBRAZOVÁ PŘÍLOHA Obrázek č. 11: Coffea arabica (L.) 57)

Obrázek č. 12: Camellia sinensis (L.) 58)

Obrázek č. 13: Paullinia cupana (Kunth) 59)

72

Obrázek č. 14: MedPharma – Zelený čaj

Obrázek č. 15: Swiss – Tree3Chlorella

73

Obrázek č. 16: Lipoxal Xtreme II

Obrázek č. 17: Strong Nature – Zelená káva

74

Obrázek č. 18: Vieste – Zelená káva extra

Obrázek č. 18: Fit and Slim GC 1000 Zelená káva

75

Obrázek č. 19: GS C.L.A. 2000 se zeleným čajem

Obrázek č. 20: Bioaktivní C.L.A. Booster

76