UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN PADA EKSTRAK DAUN JERUK NIPIS (Citrus aurantifolia) DENGAN MENGGUNAKAN METODE DPPH ( 1,1-DIPHENYL-2-PICRYLHYDRAZYL)
Laporan Penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar SARJANA KEDOKTERAN
OLEH :
Nilam Fajarwatiala NIM : 1110103000083
PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA 1434 H / 2013 M
KATA PENGANTAR
Assalamualaikum Warahmatullahi Wabarakatuh. Puji syukur saya panjatkan kehadirat Allah SWT atas segala nikmat dan karunia yang telah diberikan, sehingga saya dapat menyelesaikan penelitian ini tepat pada waktunya. Saya menyadari tanpa bantuan, bimbingan dan do’a dari berbagai pihak, sulit bagi saya untuk menyelesaikan penelitian ini. Oleh karena itu, saya mengucapkan terima kasih kepada: 1. Prof. DR. (hc) dr. M.K. Tadjudin, Sp. And, dr. M. Djauhari Widjajakusumah, DR. Arif Sumantri, M.Kes, Dra. Farida Hamid, MA selaku Dekan dan pembantu dekan FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta yang selalu memimbing dan memberikan kesempatan kepada saya untuk menempuh pendidikan di Program Studi Pendidikan Dokter FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. 2. Dr. Witri Ardini, M. Gizi, Sp. GK selaku Ketua Program Studi dan untuk seluruh dosen Program Studi Pendidikan Dokter FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta yang telah membimbing dan mengajarkan saya selama menjalani masa didik di Program Studi Pendidikan Dokter FKIK UIN Syarif Hidayatullah 3. Dr. Mukhtar Ikhsan, SpP(K), MARS dan Zeti Harriyati, M. Biomed selaku dosen pembimbing, dimana selain mengarahkan juga memberikan motivasi kepada saya sehingga penelitian ini bisa selesai pada waktunya 4. Kedua orang tua tercinta, Bpk. Mariman dan Ibu Ramilah serta adik saya tersayang Sofiana Puspitasari yang selalu mendukung saya untuk menyelesaikan penelitian ini 5. Suryani, S.Si yang banyak mengarahkan dan mengajari saya dalam melakukan penelitian ini sehingga penelitian ini bisa selesai pada waktunya
6. Juniarti, S.Si dan Yuhernita, S.Si, M.Si yang telah memberi arahan, petunjuk serta bahan sehingga penelitian ini dapat dilaksanakan. 7. Zuwwidatul Husna, Nabilla Ayesha Putri, Leliana Nurul Wachidah, Achmad Ali Machfud selaku kakak tingkat di PSPD yang juga selalu memberi nasihat dan pengarahan dalam melaksanakan penelitian ini. 8. Akhmad Hudan Eka Prayoga, Fithriyah, Naufal Farisatrianto, Nurazminah Alwi dan Khoirul Ahmada Putra yang selalu mengingatkan, membantu dan menyemangati saya dalam melakukan penelitian ini 9. Seluruh mahasiswa PSPD 2010 dan juga sahabat serta teman-teman yang tidak bisa disebutkan namanya satu persatu
Saya menyadari laporan penelitian ini masih jauh dari kesempurnaan. Maka dari itu, penulis menerima adanya kritik dan saran yang membangun untuk penelitian ini Demikian laporan penelitian ini saya tulis, semoga bermanfaat bagi masyarakat dan para pembaca pada umumnya.
Ciputat, 13 September 2013
Penulis
vi
ABSTRAK Nilam Fajarwati. Program Studi Pendidikan Dokter. Uji aktivitas antioksidan daun jeruk nipis (Citrus aurantifolia) dengan metode DPPH ( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl).2013 Banyak penyakit yang pada awalnya disebabkan oleh radikal bebas, sehingga radikal bebas dan antioksidan banyak diteliti di dunia kesehatan. Daun jeruk nipis (Citrus aurantifolia) diduga memiliki aktivitas antioksidan yang kuat seperti halnya buah jeruk nipis yang mampu meredam aktivitas dari radikal bebas. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak daun jeruk nipis metode dengan DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl). Penelitian ini dilakukan secara observasional. Ekstrak daun jeruk nipis didapatkan dengan cara maserasi menggunakan pelarut metanol. Uji aktivitas antioksidan ekstrak daun jeruk nipis dilakukan pada konsentrasi 25 ppm, 50 ppm, 75 ppm dan 100 ppm. Ekstrak daun jeruk nipis ditambah dengan DPPH (634µM). Vitamin C digunakan sebagai kontrol positif. Pengukuran absorbansi untuk mengetahui aktivitas antioksidan daun jeruk nipis menggunakan spektrofotomerer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum yaitu 515 nm. Hasil penelitian ini didapatkan perubahan warna secara kualitatif baik pada esktrak daun jeruk nipis dan vitamin C. Nilai IC50 ekstrak daun jeruk nipis senilai 93,41 ppm dan termasuk aktivitas antioksidan kuat berdasarkan klasifikasi Blois. Kata Kunci : antioksidan, ekstrak daun jeruk nipis (Citrus aurantifolia), DPPH
ABSTRACT NilamFajarwati. Medical Education Study Program. Antioxidant Activity Assay of Key Lime Leaves (Citrus aurantifolia) Extract by DPPH (1,1Diphenyl-2-Picrylhydrazyl) Method.2013. Many health problems caused by free radical production so recent studies focused on it. Key lime (Citrus aurantifolia) leaves has been predicted has a strong antioxidant activity as strong as its fruit to reduce free radical activity. The aim of this study is to know antioxidant activity of key lime leaves extract by DPPH (1,1diphenyl-2-picrylhydrazyl) method. Key lime leaves extracted by maceration with methanol as its solvent. Antioxidant activity tested in different concentration 25 ppm, 50 ppm, 75 ppm and 100 ppm. Key lime leaves extract was added by DPPH (634µM). This study used vitamin C as positive control. Absorbance measurement used spectrophotometer UV-Vis in maximum wave length 515 nm to show the antioxidant activity. Result of this study shows color differences both key lime leaves and vitamin C on a qualitative scale. IC50 value of key lime leaves is 93,41 ppm and classified as strong antioxidant according to Blois classification. Keywords: Antioxidant, Key Lime Leaves (Citrus aurantifolia) Extract, DPPH
vii
DAFTAR ISI Halaman LEMBAR JUDUL ................................................................................
i
LEMBAR PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................
ii
LEMBAR PERSETUJUAN PEMBIMBING ....................................
iii
LEMBAR PENGESAHAN .................................................................
iv
KATA PENGANTAR ..........................................................................
v
ABSTRAK ............................................................................................
vii
ABSTRACT ..........................................................................................
vii
DAFTAR ISI .........................................................................................
viii
DAFTAR TABEL ................................................................................
xi
DAFTAR GAMBAR ............................................................................
xii
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................
xiii
BAB 1. PENDAHULUAN .....................................................................
1
1.1 Latar Belakang ...................................................................
1
1.2 Rumusan Masalah ..............................................................
2
1.3 Tujuan Penelitian ...............................................................
2
1.3.1 Tujuan Umum ..........................................................
2
1.3.2 Tujuan Khusus .........................................................
2
1.4 Manfaat Penelitian .............................................................
3
viii
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA ..........................................................
4
2.1 Landasan Teori ...................................................................
4
2.1.1 Tanaman Jeruk Nipis ..................................................
4
2.1.2 Simplisia ..................................................................
6
2.1.3 Ekstrak dan Ekstraksi ...............................................
6
2.1.3.1 Ekstrak ............................................................
6
2.1.3.2 Ekstraksi .........................................................
6
2.1.4 Radikal bebas ..............................................................
7
2.1.4.1 Dampak Radikal Bebas bagi Kesehatan ........
8
2.1.5 Antioksidan .................................................................
9
2.1.5.1 Vitamin C .......................................................
10
2.1.6 Uji Aktivitas Antioksidan ...........................................
10
2.1.6.1 Metode DPPH.................................................
10
2.1.6.2 Metode ABTS.................................................
12
2.1.6.3 Metode Deoksiribosa ......................................
12
2.1.6.4 Metode Xantin Oksidase ................................
12
2.1.7 Spektrofotometer UV-Vis dan Absorbansi .................
13
2.2 Kerangka Teori......................................................................
14
2.3 Kerangka Konsep ...............................................................
15
2.4 Definisi Operasional ..........................................................
15
Bab 3. METODE PENELITIAN ........................................................
16
3.1 Desain Penelitian ............................................................... ix
16
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian ............................................
16
3.3 Sampel...................................................................................
16
3.4 Alat dan Bahan Penelitian .....................................................
16
3.4.1 Alat Penelitian.............................................................
16
3.4.2 Bahan Penelitian .........................................................
17
3.5 Cara Kerja Penelitian ............................................................
17
3.5.1 Penyiapan Sampel atau Pembuatan Simplisia Nabati .
17
3.5.2 Pembuatan Ekstrak Daun Jeruk Nipis ........................
17
3.5.3 Pembuatan Larutan .....................................................
17
3.6 Pengukuran Absorbansi ........................................................
19
3.7 Manajemen Analisis Data Antioksidan ................................
20
BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN ...............................................
21
4.1 Hasil Ekstraksi Daun Jeruk Nipis .........................................
21
4.2 Absorbansi dan % Penghambatan .........................................
22
4.3 Penetapan Nilai IC50...........................................................................................
25
BAB 5. SIMPULAN DAN SARAN .....................................................
27
5.1 Simpulan ............................................................................
27
5.2 Saran ..................................................................................
27
DAFTAR PUSTAKA ...........................................................................
28
LAMPIRAN .............................................................................................
31
x
DAFTAR TABEL Halaman Tabel 3.1 Klasifikasi aktivitas antioksidan ...............................................
20
Tabel 4.1 Nilai absorbansi dan % penghambatan ekstrak daun jeruk nipis ............................................................
23
Tabel 4.2 Nilai absorbansi dan % penghambatan vitamin C ....................
23
Tabel 4.3 Nilai IC50 ...................................................................................
25
Tabel 6.1 Perhitungan absorbansi, % penghambatan dan IC50 ekstrak daun jeruk nipis ............................................................
32
Tabel 6.2 Perhitungan absorbansi, % penghambatan dan IC50 Vitamin C ..................................................................................
xi
33
DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 2.1 Tanaman jeruk nipis ..............................................................
5
Gambar 2.2 Daun jeruk nipis ....................................................................
5
Gambar 2.3 Rumus kimia DPPH dan DPPH-H ........................................
11
Gambar 4.1 Larutan seri ekstrak konsentrasi 25 ppm, 50 ppm, 75 ppm, 100 ppm ......................................
22
Gambar 4.2 Larutan seri vitamin C 1 ppm, 2 ppm, 3 ppm,4 ppm ............
22
Gambar 4.3 Persamaan regresi linier ekstrak daun jeruk nipis .................
24
Gambar 4.4 Persamaan regresi linier vitamin C .......................................
24
Gambar 6.1 Hasil determinasi ...................................................................
31
Gambar 6.2 Pengeringan daun jeruk nipis ................................................
34
Gambar 6.3 Larutan hasil maserasi ...........................................................
34
Gambar 6.4 Proses evaporasi ....................................................................
34
Gambar 6.5 Ekstrak kental daun jeruk nipis ..........................................
34
Gambar 6.6 Penimbangan ekstrak daun jeruk nipis ..................................
34
xii
DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1 Hasil Determinasi ...............................................................
31
Lampiran 2 Nilai Absorbansi, % Penghambatan dan IC50 Ekstrak Daun Jeruk Nipis.......................................................
32
Lampiran 3 Nilai Absorbansi, % Penghambatan dan IC50 Vitamin C ................................................................................
33
Lampiran 4 Gambar Alat dan Bahan Penelitian ........................................
34
Lampiran 5 Riwayat Penulis ......................................................................
35
xiii
BAB 1 PENDAHULUAN
1.1
Latar Belakang Masalah Banyak penyakit pada awalnya disebabkan karena reaksi oksidasi yang
berlebihan, sehingga saat ini radikal bebas dan antioksidan banyak dibahas dan diteliti dalam dunia kedokteran dan kesehatan.1 Radikal bebas sudah sejak lama dikenal bisa menyebabkan kerusakan membran sel, retikulum endoplasma dan bisa mengganggu deoxyribonucleic acid (DNA) sel.2 Berbagai keadaan yang mempengaruhi terbentuknya radikal bebas misalnya infeksi, rokok, terpajan polutan, sinar ultraviolet (UV), olah raga, kekurangan gizi dan lain-lain.1,3 Radikal bebas adalah suatu molekul yang sangat reaktif dengan elektron yang tidak memiliki pasangan pada orbita luarnya, sehingga akan mencari reaksi agar mendapatkan elektron pasangannya yang berujung pada kerusakan sel dan jaringan.4 Meningkatnya produksi dan menurunnya eliminasi radikal bebas bisa berakibat terjadinya stres oksidatif sehingga menyebabkan kerusakan sel dan jaringan.
Stres oksidatif juga dapat berkonstribusi pada proses penuaan dan
berbagai macam penyakit kronis seperti kanker dan neurodegenerasi.1,4,5 Didalam tubuh terdapat mekanisme kimiawi yang berperan dalam mengontrol stres oksidatif yaitu antioksidan.1,4 Antioksidan yang ada dalam tubuh atau yang biasa disebut dengan antioksidan endogen yaitu enzim katalase, glutation peroksidase dan superoksida dismutase.1,6 Selain antioksidan yang terdapat secara alami dalam tubuh, juga terdapat antioksidan yang berasal dari diet sehari-hari atau antioksidan eksogen.1 Beberapa sumber antioksidan eksogen, yaitu buah-buahan, sayur, biji-bijian karena mengandung vitamin E, vitamin A, vitamin C dan beta karoten.7 Berdasarkan data di atas, buah juga termasuk sumber makanan yang kaya antioksidan, Salah satu buah yang mempunyai aktivitas antioksidan yang tinggi adalah jeruk nipis (Citrus aurantifolia) karena mengandung fenol dan flavonoid.8 1
2
Penggunaan buah jeruk nipis untuk menyembuhkan berbagai macam penyakit sudah dilakukan sejak ribuan tahun yang lalu. Selain buah jeruk nipis, daun jeruk nipis juga sering digunakan sebagai obat oleh masyarakat.9 Penelitian yang sebelumnya menyebutkan bahwa daun jeruk nipis memiliki aktivitas antioksidan yang kuat dengan nilai medianinhibitory concentration (IC50) 76,9 ppm. Medianinhibitory concentration (IC50) adalah konsentrasi ekstrak dalam µg/ml (ppm) yang dapat menghambat aktivitas oksidasi radikal sebanyak 50 %. Adanya aktivitas antioksidan pada daun jeruk nipis karena kandungannya kaya akan alkaloid, fenol, saponin, tannin, steroid dan flavonoid.9 Penelitian mengenai daun jeruk nipis di Indonesia sangat terbatas dan belum ada publikasi. Sehingga perlu dilakukan penelitian karena ketersediaannya yang berlimpah. Berdasarkan hal tersebut, peneliti ingin mengetahui aktivitas antioksidan dengan metode DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) menggunakan konsentrasi larutan uji
yang berbeda untuk dibandingkan dengan penelitian
sebelumnya. Metode DPPH dipilih karena sederhana, akurat, cepat dan bisa dilakukan dengan sedikit sampel.10
1.2
Rumusan Masalah Berdasarkan uraian latar belakang masalah diatas dapat dirumuskan masalah penelitian: Apakah ekstrak daun jeruk nipis ( Citrus aurantifolia) memiliki aktivitas antioksidan ?
1.3
Tujuan Penelitian
1.3.1 Tujuan Umum
Mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak daun jeruk nipis menggunakan metode DPPH dengan berbagai konsentrasi larutan uji
1.3.2 Tujuan Khusus
Mengetahui nilai IC50 dari daun jeruk nipis
Mengetahui apakah ekstrak daun jeruk nipis memiliki aktivitas antioksidan sangat kuat, kuat, sedang, lemah atau tidak bisa digolongkan
3
1.4
Manfaat Penelitian 1.4.1
Bagi Institusi
Mengetahui adanya aktivitas antioksidan pada daun jeruk nipis sehingga bermanfaat untuk pengembangan obat alami untuk penyakit-penyakit yang disebabkan oleh radikal bebas Memberi informasi tentang manfaat daun jeruk nipis bagi penelitian selanjutnya sehingga manfaat daun jeruk nipis bisa dikembangkan lebih jauh lagi. 1.4.2
Bagi Peneliti Penelitian ini sebagai salah satu syarat untuk mendapatkan gelar Sarjana Kedokteran di Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta
Menambah wawasan peneliti tentang daun yang mengandung antioksidan
Sebagai pengalaman peneliti untuk melakukan penelitian di bidang kesehatan
1.4.3
Bagi Masyarakat Memberi informasi kepada masyarakat mengenai aktivitas antioksidan ekstrak daun jeruk nipis untuk mencegah penyakit yang disebabkan radikal bebas.
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA
2.1
Landasan Teori
2..1.1 Tanaman Jeruk Nipis Citrus aurantifolia atau biasa disebut jeruk nipis merupakan tanaman buah yang berasal dari Asia. Tanaman ini tumbuh baik pada iklim tropis. Di Indonesia sendiri keberadaannya sudah ratusan tahun yang lalu dan hingga saat ini sering digunakan sebagai bumbu masakan.11 Tanaman ini memiliki ketinggian 150350cm.12 Tanaman ini memiliki buah yang berasa sangat asam dan berkulit tipis serta bunga yang berwarna putih. Tanaman ini akan merontokan bunga dan buahnya bila kecepatan angin > 40-48%. Temperatur optimal untuk tanaman ini antara 25-30oC dan kelembapan yang ideal sekitar 70-80%. Tanah yang baik untuk tanaman ini adalah tanah lempung sampai lempung berpasir, humus cukup, air dan udara baik. pH tanah optimum sekitar 6. Tanaman ini juga menyukai air yang mengandung garam 10% dan tumbuh baik dengan kemiringan tanah sekitar 30o.11 Menurut klasifikasi botani, tanaman jeruk nipis adalah sebagai berikut11:
Divisi : Spermatophyta
Sub divisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledonae
Ordo : Rutales
Keluarga : Rutaceae
Genus : Citrus
Spesies :Citrus sp. Tanaman jeruk nipis memiliki daun dengan panjang berkisar 4-6 cm,
berwarna hijau sampai kuning tua, berbentuk bulat panjang dan tumpul bagian 4
5 ujung serta bertekstur agak kaku dengan bagian tepi daun berlekuk keatas.12,13 Berikut ini gambar morfologi tanaman jeruk nipis:
Gambar 2.1 Tanaman Jeruk Nipis Sumber: www.goree.rice.edu
Gambar 2.2Daun Jeruk Nipis Sumber :http://www.discoverlife.org
Ekstrak daun Citrus aurantifolia memiliki kandungan senyawa bioaktif seperti : alkaloid, fenolik, saponin, tannin, steroid dan flavonoid. Senyawa fenolik dan flavonoid tersebut bisa bersifat sebagai antioksidan. Selain bersifat antioksidan daun jeruk nipis juga mempunyai sifat antimikrobakterial.9 Seperti daun jeruk nipis, buah jeruk nipis juga mempunyai efek antioksidan. Buah jeruk nipis juga memiliki efek antimikrobakteri, mencegah penyakit kanker dan
6
degeneratif karena mengandung senyawa bioaktif seperti flavonoid, kumarin dan psoralen.14,15 2.1.2
Simplisia Simplisia adalah bahan alam yang digunakan sebagai obat dan belum
mengalami pengolahan apapun kecuali pengeringan. Terbagi menjadi dua yaitu simplisia nabati dan hewani.16 2.1.3
Ekstrak dan Ekstraksi
2.1.3.1 Ekstrak Ekstrak adalah sedian pekat yang didalamnya terdapat zat aktif yang telah disaring dari simplisia nabati atau hewani menggunakan bantuan pelarut yang sesuai. lalu, semua atau hampir semua pelarut diuapkan hingga tersisa massa atau serbuk yang diperlakukan sedemikian rupa agar memenuhi standar baku yang sudah ditetapkan.16 2.1.3.2 Ekstraksi Ekstraksi merupakan proses pemisahan zat-zat dari bahan padat maupun cair menggunakan bantuan pelarut. Pelarut yang digunakan hanya mengekstrak substansi tanpa menyebabkan material lainnya ikut larut. Beberapa pelarut yang sering digunakan adalah etanol, metanol, n-hexana, aseton, benzena, etil asetat dan kloroform.16 Metode ekstraksi menggunakan pelarut dapat dilakukan dengan cara dingin dan panas, yaitu : Cara dingin a) Maserasi Maserasi adalah suatu proses perendaman menggunakan pelarut untuk menyaring simplisia dengan beberapa kali pengadukan. Ada 2 macam maserasi yaitu maserasi kinetik dan remaserasi. Maserasi kinetik apabila pada saat maserasi dilakukan pegadukan terus-menerus sedangkan
7
remaserasi adalah dengan menambahkan pelarut setelah maserat pertama disaring dan seterusnya. b) Perkolasi Perkolasi merupakan suatu proses penyaringan simplisia dengan memakai pelarut yang selalu baru. Tahapan perkolasi, yaitu : pelembaman bahan, tahap perendaman antara, perkolasi sebenarnya (penetesan atau penampungan ekstrak) yang berakhir bila perkolat sudah mencapai 1-5 kali bahan. Perkolasi biasanya dilakukan pada temperatur kamar.16 2.1.4
Cara panas terdiri dari refluks, digesti, sokletasi, infludasi dan dekoktasi.16 Radikal Bebas Radikal bebas adalah suatu molekul yang memiliki satu atau lebih elektron
tidak berpasangan pada orbital luarnya, sehingga menyebabkan elektron yang tidak berpasangan berusaha mendapatkan pasangannya dengan cara menyerang dan berikatan dengan elektron disekitarnya. Bila radikal bebas berikatan dengan elektron dari senyawa kovalen yang umumnya adalah molekul besar seperti lipid, protein dan DNA, maka kerusakan yang terjadi akan lebih parah. Dampak yang terjadi akibat kerja radikal bebas untuk mencari pasangannya adalah terbentuknya radikal bebas baru yang berasal dari atom atau molekul yang elektronnya diambil. Dapat juga berasal dari atom atau molekul yang telah diberikan elektron oleh radikal bebas. Radikal bebas bisa stabil bila berikatan dengan radikal bebas lainnya. Berbagai kerusakan dapat terjadi akibat aktivitas radikal bebas, seperti gangguan fungsi sel dan kerusakan struktur sel yang memicu terjadi berbagai penyakit.1 Secara umum terdapat 3 tahapan pembentukan radikal bebas, yaitu1 : 1) Inisiasi (awal pembentukan) Fe++ + H2O2
Fe+++ + OH-+ .OH
R1-H + .OH
R1. + H2O
8
2) Propagasi (pemanjangan rantai radikal)
R2-H + R1.
R2. + R1-H
R3-H + R2.
R3. + R2-H
3) Terminasi (radikal bebas bereaksi dengan radikal bebas lainnya atau dengan penangkapan radikal yang menyebabkan pemanjangan rantainya rendah)
R1. + R1.
R1-R1
R2. + R1.
R2-R1
R2. + R2.
R2-R2dst
2.1.4.1Dampak Radikal Bebas bagi Kesehatan Pada kondisi fisiologis, jumlah radikal bebas yang rendah dibutuhkan untuk ekspresi gen, pertumbuhan sel dan sebagai pertahanan terhadap infeksi.2 Dampak negatif dari radikal bebas akan terjadi bila mekanisme pertahanan tubuh terhadap radikal bebas menurun.17 Radikal bebas dapat menyebabkan kerusakan sel endotel dengan cara bereaksi dengan nitrat oksida menjadi peroksinitrit1. Pembuluh darah diseluruh tubuh dapat terkena efeknya seingga bisa timbul keadaan seperti:
Kerusakan pada pembuluh darah yang ada di retina mata menyebabkan penurunan daya penglihatan sampai bisa terjadi kebutaan.
Kerusakan pada pembuluh darah ginjal di glomerulus menyebabkan gangguan fungsi ginjal dan bisa berakhir pada gagal ginjal tahap terminal.
Menurunnya sistem pertahanan tubuh.
Kerusakan pada pembuluh darah koroner dapat meningkatkan risiko terjadinya penyakit jantung koroner dan stroke.1,5
9
2.1.5
Antioksidan Antioksidan adalah suatu senyawa yang dapat menangkal efek negatif
radikal bebas dalam tubuh dengan memberikan satu elektronnya kepada senyawa radikal bebas. Radikal bebas dapat dihambat dengan cara mencegah dan menghambatterbentuknya radikal bebas baru, menangkap radikal bebas, pemutusan rantaian dengan memotong propagasi dan memperbaiki kerusakan yang disebabkan radikal bebas. Secara umum antioksidan digolongkan menjadi 2 yaitu :
Antioksidan enzimatis: enzim superoksida dismutase (SOD), katalase dan glutation peroksidase
Antioksidan non-enzimatis -Larut lemak: tokoferol, karatenoid, flavonoid dan quinon -Larut air: asam askorbat (Vitamin C), asam urat, protein pengikat logam dan aprotein pengikat heme1 Selain itu, antioksidan juga digolongkan berdasarkan mekanisme kerjanya menjadi 3 kelompok, yaitu :
Antioksidan Primer Antioksidan primer adalah senyawa yang mampu dengan cepat
memberikan atom hidrogen kepada senyawa radikal bebas sehingga berubah menjadi senyawa stabil dan mencegah pembentukan radikal bebas baru dengan memutus reaksi berantai (polimerasi). Antioksidan primer disebut juga antioksidan enzimatis. Antioksidan Sekunder Antioksidan sekunder disebut juga antioksidan eksogen atau nonenzimatis. Mekanisme kerjanya dengan cara memotong reaksi oksidasi berantai radikal bebas atau dengan menangkapnya, sehingga efek negatif radikal bebas bisa dicegah. Sumber makanan yang mengandung antioksidan tersier contohnya adalah sayuran, buah-buahan dan daging merah.
10
Antioksidan Tersier Enzim DNA repair dan metionin sulfoksida reduktase merupakan
kelompok antioksidan tersier. Enzim-enzim ini berfungsi sebagai perbaikan biomolekuler sel yang rusak akibat efek radikal bebas.1 Ada juga yang menggolongkan antioksidan berdasarkan sumbernya :
Antioksidan Alami Antioksidan yang berasal dari alam didapatkan dari tumbuhan dan telah
diisolasi seperti Vitamin C, vitamin E, karoten, polienol bioflavonoid dan katekin.
Antioksidan Sintetik Antioksidan Sintetik digunakan untuk memelihara kualitas makanan
karena proses oksidasi terutama pada saat penyimpanan. Contohnya BHA (Butylated Hidroxyanisol), BHT (Butylated Hydroxytoluene), TBHQ ( TertierButyl Hidroxy Quinon).18 2.1.5.1 Vitamin C Vitamin C atau L-asam askorbat termasuk antioksidan yang larut dalam air. Pada keadaan murni, vitamin C (C6H6O6) berbentuk kristal putih dan mempunyai berat molekul 176,13. Antioksidan vitamin C dapat bereaksi dengan radikal bebas dengan memindahkan satu elektron dan menghasilkan radikal askorbil. Kemudian, radikal askorbil akan berubah menjadi askorbat dan dehidroaskorbat.1 2.1.6
Uji Aktivitas Antioksidan
2.1.6.1 Metode DPPH DPPH (1,1-Diphenyl-2-Picrylhidrazyl) merupakan radikal bebas dengan massa molar relatif 394.33 (MrC18H12N5O6 = 394.33), bersifat stabil pada suhu kamar dan mempunyai panjang gelombang maksimum 515-517 nm.19,20,21 Antioksidan akan memberikan sebagian atom hidrogen ke radikal bebas DPPH agar menjadi lebih stabil (DPPH-H).19 Salah satu senyawa bioaktif yang dapat
11
diisolasi dan bersifat antioksidan adalah flavonoid. Flavonoid akan menangkap radikal bebas DPPH. Radikal bebas DPPH akan mengoksidasi flavonoid sehingga terbentuk radikal dengan kereaktifan yang rendah. Flavonoid mendonorkan radikal hidrogen dari cincin aromatik dan menghasilkan radikal flavonoid yang bersifat tidak toksik.22 Berikut ini mekanisme penangkapan aktivitas DPPH oleh antioksidan:
Gambar 2.3 Mekanisme DPPH menjadi DPPH stabil (DPPH-H) Sumber :EkstrakMethanol Daun Surian Yang Berpotensi Sebagai Antioksidan. makara sains
Prinsipnya pada metode DPPH melihat perubahan warna DPPH dalam larutan dari ungu pekat menjadi kuning pucat karena aktivitas sampel yang mengandung antioksidan yang mampu menangkap dan meredam aktivitas radikal bebas. Semakin banyak DPPH yang diredam, warna larutan semakin berubah menjadi pucat. Perubahan warna selain dapat dilihat secara kualitatif juga bisa menggunakan spektrofotometer UV-Vis (spektrofotometer ultraviolet visibel) dan dinilai absorbansinya. Pada spektrofotometer akan dilihat perubahan serapan warna (nilai absorbansi). Absorbansi yang baik untuk larutan DPPH adalah kurang dari 1. Tinggi rendahnya aktivitas antioksidan pada sampel dilihat dari nilai efficient concentration (EC50) atau Inhibition Contentration (IC50) yaitu nilai dimana 50% DPPH kehilangan sifat radikal bebasnya. Semakin kecil nilai IC 50 semakin tinggi aktivitas antioksidan pada sampel.19,23 Pengerjaan menggunakan DPPH harus cepat dan hati-hati karena molekul DPPH mudah terdegradasi oleh cahaya dan oksigen. Namun, metode DPPH lebih sederhana, akurat, cepat dan bisa dilakukan dengan sedikit sampel.10
12
2.1.6.2 Metode ABTS Metode ABTS(2,2-Azinobis(3-ethylbenzothiazoline)-6-sulfonic acid)untuk mengetahui aktivitas antioksidan pada makanan atau minuman. Secara kimia, reagen ABTS bersifat stabil, larut dalam air dan lipid. ABTS yang merupakan subtrat peroksidase dapat dioksidasi oleh H2O2 (peroksida) membentuk radikal kation. Radikal ABTS stabil dapat dibentuk dengan oksidasi kalium persulfat ABTS. Aktivitas penghambatan oleh antioksidan terlihat dari semakin hilang warna ABTS yang diukur absorbansinya dengan spektrofotometer. 24 2.1.6.3 Metode Deoksiribosa Deoksiribosa bila terdegradasi akan menghasilkan produk karbonil dan dikarbonil seperti MDA atau malondialdehid. Dalam suasana asam MDA dengan Thiobarbituric acid (TBA) menghasilkan kromagen berwarna merah muda. Semakin banyak deoksiribosa yang terdegradasi maka semakin tinggi kromogen MDA-TBA.25 2.1.6.4 Xantin Oksidase Uji aktivitas antioksidan metode xantin oksidase menggunakan enzim superoksida dismutase (SOD). Enzim SOD adalah salah satu dari antioksidan endogen yang bekerja dengan mengkatalis radikal O2 (superoksida) menjadi H2O2. Larutan hasil pencampuran antara larutan ekstrak dengan enzim SOD dan xantin diukur absorbansinya.26 2.1.7
Spektrofotometer UV-Vis dan Absorbansi Spektrofotometer UV-Vis adalah alat yang biasa digunakan untuk analisa
kuantitatif dan semikualitatif pada laboratorium biokimia. Prinsip kerjanya adalah interaksi cahaya dan materi yaitu adanya penyerapan ultraviolet atau sinar tampak oleh molekul sehingga terjadi eksitasi elektron pada orbital molekul. Spektrofotometer UV-Vis akan melewatkan sinar pada kuvet (wadah berisi larutan), kemudian akan terbaca panjang gelombang larutan dalam satuan nm. Daerah spektrofotometer dibagi menjadi tiga yaitu near UV, Visible dan Very
13
near Infrared (185-400 nm, 400-700 nm dan 700-1100 nm). Namun seringnya pada rentang 185-900 nm. Dasar pengukuran absorbansi adalah hukum LambertBeer yaitu absorbansi tergantung diameter kuvet (dalam cm), konsentrasi larutan dan koefisien absorpsi molar (L mol-1cm-1). 27
14
2.2
Kerangka Teori Radikal Bebas
Antioksidan
Endogen
Eksogen
Metode DPPH
DPPH Ekstrak daun jeruk nipis (Citrus aurantifolia) Memiliki elektron yang tidak berpasangan Terdapat senyawa bioaktif seperti fenol dan flavonoid
Bersifat antioksidan dengan mendonorkan atom hidrogen
DPPH menjadi DPPH-H yang lebih stabil
Semakin banyak aktivitas antioksidan terhadap DPPH Perubahan warna larutan dari ungu pekat menjadi kuning pucat
Absorbansi diukur dengan Spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum DPPH yaitu 515 nm. Absorbansi baik <1 Perhitungan IC50
Daun jeruk nipis memiliki aktivitas antioksidan tergolong kuat
15
2.3
Kerangka konsep
Ekstrak daun jeruk nipis
Kandungan senyawa bioaktif
Bersifat antioksidan
Metode DPPH
Spektrofotometer UV-Vis
analisis
Keterangan :
= diteliti = tidak diteliti
2.4
Definisi Operasional
No.
Variabel
Definisi
Cara ukur
Alat ukur
1
Konsentrasi ekstrak daun jeruk nipis Absorbansi sampel
3
IC50
V1M1=V2M2 (perbandingan ekstrak dengan mL metanol) Diukur panjang gelombang dengan alat spektofotometer Persamaan regresi linier
-
2
Konsentrasi larutan uji dalam ppm (1 ppm = 1 μg/mL) Nilai absorbansi pada masingmasing sampel Nilai konsentrasi ekstrak yang mampu menghambat aktivitas proses oksidasi sebesar 50 %
Skala ukur Numerik
Spektofoto meter
Numerik
-
Kategorik Ordinal
Hasil ukur 25 ppm 50 ppm 75 ppm 100 ppm nm
Klasifikasi Blois: IC50 < 50 µg/ml = sangat kuat IC50 50-100 µg/ml = kuat IC50 101-150 µg/ml= sedang IC50 151-200 µg/ml = lemah IC50> 200 µg/ml = tidak aktif
BAB 3 METODE PENELITIAN
3.1
Desain Penelitian Penelitian ini merupakan penelitian observasional untuk mengetahui
aktivitas antioksidan daun jeruk nipis dengan menggunakan metode DPPH. 3.2
Waktu dan Tempat penelitian Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Biologi Fakultas Kedokteran
dan Ilmu Kesehatan (FKIK) Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah pada bulan Maret sampai Agustus 2013 3.3
Sampel Sebanyak 500 gram daun jeruk nipis yang digunakan dalam penelitian ini
didapatkan dari pekarangan rumah daerah Jakarta Selatan. Daun dipilih yang tidak terlalu muda dan tua, tidak kering, tidak berjamur, sudah dibersihkan. Kemudian, dideterminasi oleh Pusat Penelitian Biologi Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Bogor. Determinasi dilakukan untuk mengurangi kemungkinan kesalahan identitas sampel. Hasil determinasi menunjukan bahwa sampel yang diuji benar spesies Citrus aurantifolia. (lampiran 1). Kemudian dibuat larutan ekstraknya dalam berbagai konsentrasi, yaitu : 25 ppm, 50 ppm, 75 ppm, 100 ppm yang masing-masing dibuat secara triplo. 3.4
Alat dan Bahan Penelitian
3.4.1
Alat penelitian Timbangan analitik; tabung reaksi; tabung Erlenmeyer; cawan; gelas ukur;
labu ukur 10 mL; kaca arloji; batang pengaduk; botol gelap; gelas beaker; mikropipet 10, 100, dan 1000 μl; tip 10, 100, 1000 μl; alumunium foil; shaker waterbath; kuvet dan spektrofotometer UV-Vis Hitachi 2,2 solution 16
17
3.4.2
Bahan Penelitian Simplisia, metanol, DPPH, air aquades dan Vitamin C
3.5
Cara Kerja Penelitian
3.5.1
Penyiapan Sampel atau Pembuatan Simplisia Nabati Daun jeruk nipis basah diambil dari pekarangan rumah daerah Jakarta
Selatan (sudah dideterminasi) kemudian dikeringkan dengan cara dijemur di bawah sinar matahari. Daun yang telah kering diblender menjadi serbuk daun jeruk nipis. 28 3.5.2
Pembuatan ekstrak daun jeruk nipis Pembuatan ekstrak daun jeruk nipis (Citrus aurantifolia) dilakukan oleh
peneliti di laboratorium biologi dengan menggunakan metode maserasi dan remaserasi yaitu menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan.
28
Setelah dilakukan maserasi selama 24
jam dilakukan penyaringan untuk memisahkan filtrat dan residu. Filtrat kemudian dilakukan evaporasi (penguapan) menggunakan rotator evaporator pada suhu 37oC untuk memisahkan pelarut metanol sehingga didapatkan ektrak kental daun jeruk nipis. Kemudian residu direndam lagi dalam pelarut metanol untuk dilakukan remaserasi.13 3.5.3
Pembuatan Larutan a) Pembuatan Larutan DPPH 634 μM9
Timbang DPPH sebanyak 0,0015 gram Larutkan dalam 6 mL metanol Larutan dikocok hingga homogen kemudian dimasukan ke dalam botol gelap
Absorbansi diukur dengan spektrofotometer UV-Vis untuk memperoleh panjang gelombang maksimum.
b) Pembuatan Larutan kontrol
Dalam 1800 μL metanol ditambahkan 200 μL larutan DPPH
Larutan dikocok hingga homogen.
18
c) Pembuatan Larutan uji 1. Larutan Induk (1000 ppm) 10 mg ekstrak daun jeruk nipis dilarutkan kedalam 10 mL metanol= 10mg/10 mL = 1 mg/mL = 1000 μg/mL = 1000 ppm 2. Larutan Seri a) 100 ppm 200 μL dari larutan induk ditambahkan metanol sampai volumenya 1800 μL. Kemudian tambahkan 200 μL larutan DPPH. b) 75 ppm 150 μL dari larutan induk ditambahkan metanol sampai volumenya 1800 μL. Kemudian tambahkan 200 μL larutan DPPH. c) 50 ppm 100 μL dari larutan induk ditambahkan
metanol sampai
volumenya 1800 μL. Kemudian tambahkan 200 μL larutan DPPH. d) 25 ppm 50 μL dari larutan 1000 ppm ditambahkan metanol sampai volumenya 1800 μL. Kemudian tambahkan 200 μL larutan DPPH. a. Pembuatan Larutan Kontrol Positif (Vitamin C)29 Vitamin C berupa serbuk putih didapatkan dari Laboratorium Kimia Obat Farmasi FKIK UIN Syarif Hidayatullah. Vitamin C yang digunakan merupakan produk perusahaan VWR. 1. Larutan Induk (100 ppm) 1 mg Vitamin C murni dilarutkan dalam 10 mL metanol = 0,1 mg/mL = 100 μg/ml (ppm). 2. Larutan seri (1,2,3,4 ppm) a) 1 ppm
19 20 μL dari larutan induk ditambahkan metanol sampai volumenya 1800 μL. Kemudian ditambahkan 200 μL larutan DPPH. b) 2 ppm 40 μL dari larutan induk ditambahkan
metanol sampai
volumenya 1800 μL. Kemudian ditambahkan 200 μL larutan DPPH. c) 3 ppm 60 μL dari larutan induk ditambahkan
metanol sampai
volumenya 1800 μL. Kemudian ditambahkan 200 μL larutan DPPH. d) 4 ppm 80 μL dari larutan induk ditambahkan
metanol sampai
volumenya 1800 μL.Kemudian ditambahkan 200 μL larutan DPPH.
3.6
Pengukuran Absorbansi Semua larutan kontrol, larutan ekstrak daun jeruk nipis dan larutan standar
positif (vitamin C) dikocok menggunakan shaker waterbath dan diinkubasi pada suhu 37oC selama 30 menit dalam keadaan gelap (ditutup alumunium foil). Hal ini dilakukan karena radikal DPPH mudah didegradasi oleh cahaya. Kemudian absorbansinya diukur menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 515 nm.9 Setelah nilai absorbansinya didapat, dihitung persen hambatan masing-masing larutan dengan menggunakan rumus:9,19,30 % Hambatan = (Abs0– Abssample) x 100% Abs0 Setelah didapatkan % aktivitas hambatan dicari nilai IC50 melalui persamaan regresi linier y = a + bx
20
3.7
Manajemen Analis Data Antioksidan Data antioksidan pada radikal DPPH (% penghambatan) ekstrak daun
jeruk nipis dianalisis dan dihitung nilaiIC50. Semakin kecil nilai IC50 berarti aktivitas antioksidan semakin kuat. Pada penelitian ini nilai IC50 dianalisis dan dihitung mengunakan persamaan regresi linear.19,30,31 Data % hambatan dankonsentrasi larutan digunakan untuk mencari nilai IC50 dengan persamaan regresi linear y= a + bx, dimana y adalah % hambat 50 (senilai 50) dan x adalah nilai IC50.
9,32
Berikut ini tabel mengenai klasifikasi
aktivitas antioksidan menurut Blois: Tabel 3.1 Klasifikasi aktivitas antioksidan19,21: No.
Nilai IC50
Antioksidan
1.
< 50 ppm
Sangat kuat
2.
50-100 ppm
Kuat
3.
100-150 ppm
Sedang
4.
151-200 ppm
Lemah
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1
Hasil Ekstraksi Daun Jeruk Nipis Dari hasil ekstraksi didapatkan 31 gram simplisia dari 500 gram daun
jeruk yang dikeringkan. Dimana setelah maserasi didapatkan larutan ekstrak sebanyak 480 mL. Metode maserasi dipilih karena prosedurnya sederhana, mudah, murah, cepat dan dapat menghindari kerusakan senyawa bioaktif akibat panas.28,33 Kemudian setelah dilakukan evaporasi didapatkan ekstrak kental daun jeruk nipis sebesar 3,6 gram. Dalam penelitian ini menggunakan pelarut metanol karena berdasarkan penelitian sebelumnya, aktivitas antioksidan daun jeruk nipis lebih baik dengan menggunakan pelarut metanol dibandingkan pelarut lainnya.9 Selain itu, metanol merupakan pelarut polar yang bisa menarik senyawa bioaktif yang bersifat polar seperti flavonoid. Pembuatan ekstrak pada penelitian ini tidak mengukur kadar air dan kadar abu. Hasil ekstraksi ditentukan oleh luas permukaan dan jenis pelarut. Jenis pelarut dipilih berdasarkan sifat dari senyawa bioaktif simplisia yang akan diambil.29
4.2
Absorbansi dan % Penghambatan Hasil ekstraksi daun jeruk nipis selanjutnya diuji aktivitas antioksidan
menggunakan metode DPPH. Kemudian dibuat larutan kontrol, larutan seri ekstrak daun jeruk nipis dan larutan seri vitamin C. Setelah diinkubasi akan terlihat secara kualitatif ada tidaknya perubahan warna pada larutan. Berikut ini gambar yang menunjukan perubahan warna larutan seri ekstrak daun jeruk nipis:
21
22
25 ppm
50 ppm
75 ppm
100 ppm
Gambar 4.1 Larutan seri ekstrak konsentrasi 25 ppm ,50 ppm,75 ppm,100 ppm
Pada gambar 4.1 terlihat bahwa semakin besar konsentrasi semakin terlihat perubahan warna ungu pekat menjadi lebih pucat. Pada konsentrasi 25 ppm dan 50 ppm terlihat warna ungu yang lebih pekat. Hal ini disebabkan baru sedikit elektron bebas pada DPPH yang diikat oleh antioksidan. Pada konsentrasi 75 ppm warna larutan menjadi ungu pucat menunjukan lebih banyak elektron yang diikat. Pada konsentrasi 100 ppm terlihat warna kuning keunguan menunjukan bahwa hampir semua elektron bebas pada DPPH telah berikatan dengan atom hidrogen antioksidan yang ada dalam sampel sehingga mengubah DPPH menjadi DPPH-H yang sudah kehilangan sifat radikal bebasnya.19 Vitamin C sebagai antioksidan digunakan sebagai kontrol positif karena terbukti mempunyai aktivitas antioksidan yang kuat.9 Berikut ini adalah gambar perubahan warna berbagai larutan seri vitamin C:
1 ppm
2 ppm
3 ppm
4 ppm
Gambar 4.2 Larutan seri vitamin C 1 ppm, 2 ppm, 3 ppm, 4 ppm
23
Pada gambar 4.2 terlihat pada rangkaian seri tabung adanya perubahan warna menjadi lebih pucat, berarti vitamin C sudah memperlihatkan aktivitas antioksidan pada konsentrasi kecil. Hal ini bisa menunjukan bahwa vitamin C mempunyai aktivitas antioksidan yang sangat kuat. Setelah diamati secara kualitatif, larutan kontrol, larutan seri ekstrak daun jeruk nipis dan larutan seri vitamin C diukur absorbansinya dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang maksimum DPPH yaitu 515 nm. Hal ini untuk mendapatkan nilai absorbansi yang maksimum juga.9 Kemudian dicari % penghambatan masing-masing konsentrasi. Berikut ini nilai absorbansi dan % penghambatan dari setiap konsentrasi ekstrak daun jeruk nipis dan vitamin C: Tabel 4.1 Nilai absorbansi dan % penghambatan ekstrak daun jeruk nipis No
Konsentrasi
Rata-rata nilai
% Penghambatan
(ppm)
absorbansi
1
25 ppm
0,561
9,3 %
2
50 ppm
0,472
23,7 %
3
75 ppm
0,396
36,02 %
4
100 ppm
0,273
55,89 %
*Larutan kontrol = 0,619 nm
Tabel 4.2 Nilai absorbansi dan % penghambatan vitamin C No
Konsentrasi
Rata-rata nilai
% Penghambatan
(ppm)
absorbansi
1
1 ppm
0,561
2
2 ppm
0,498
9,3 % 19.5 %
3
3 ppm
0,389
37,15 %
4
4 ppm
0,283
54,28 %
*Larutan kontrol = 0,619
Berdasarkan 4.1 dan 4.2 terlihat semakin besar konsentrasi semakin kecil absorbansinya karena semakin besar konsentrasi larutan, aktivitas antioksidan semakin tinggi. Hal ini ditandai dengan semakin pudarnya warna DPPH dan semakin besarnya nilai % penghambatan.
24
Setelah mendapatkan data % penghambatan maka dibuat grafik antara konsentrasi larutan (x) dan % penghambatan (y) dan didapatkan persamaan regresi liniernya. Berikut persamaan regresi linier ekstrak daun jeruk nipis dan vitamin C: Gambar 4.3 Persamaan regresi linier ekstrak daun jeruk nipis
Gambar 4.4 Persamaan regresi linier vitamin C
25
4.3 Penetapan Nilai IC50 Nilai IC50 dapat ditetapkan dengan menggunakan persamaan regresi linier. Untuk memudahkan input data maka digunakan microsoft excel untuk mencari persamaan regresi linier. Semakin kecil nilai IC50 maka semakin besar aktivitas antioksidan.19 Setelah melakuan perhitungan, IC50 daun jeruk nipis dan vitamin C sebagai berikut: Tabel 4.3 Nilai IC50 No
Bahan
Nilai IC50
1.
Ekstrak Daun Jeruk Nipis
93,41 ppm
2.
Vitamin C
3,8 ppm
Tabel 4.4 menunjukan ekstrak daun jeruk memiliki nilai IC50 sebesar 93,41 ppm. Berdasarkan klasifikasi Blois termasuk dalam kategori antioksidan kuat. Hal ini sesuai dengan penelitian yang sebelumnya dimana dengan menggunakan pelarut metanol didapatkan nilai IC50 sebesar 76,9 ppm dan tergolong antioksidan kuat.9 Lingkungan yang baik dapat mempengaruhi senyawa bioaktif yang terkandung, daun jeruk nipis pada penelitian ini didapatkan dari tanaman jeruk nipis yang tumbuh bebas di pekarangan, berbeda dengan penelitian yang dilakukan sebelumnya daun jeruk nipis berasal dari herbarium yang lingkungan untuk tumbuh sudah dikondisikan dengan baik. Sehingga hasil nilai IC50 lebih kecil dari pada penelitian ini. Penelitian ini juga menggunakan konsentrasi larutan seri ekstrak daun jeruk nipis yang lebih kecil dari penelitian sebelumnya dan didapatkan hasil aktivitas antioksidan kuat juga. Aktivitas antioksidan yang kuat disebabkan karena daun jeruk nipis banyak mengandung senyawa bioaktif seperti flavonoid.9 Flavonoid merupakan metabolit sekunder yang tersebar pada tumbuhan dan termasuk senyawa fenolik sehingga cenderung mudah larut dalam pelarut polar.29 Flavonoid bersifat antioksidan sehingga mampu meredam aktivitas radikal hidroksil, superoksidase dan sebagai antilipoperoksidan.14 Berdasarkan tabel diatas juga menunjukan nilai IC50 vitamin C 3,8 ppm dan tergolong sebagai antioksidan yang sangat kuat.
26
Penelitian uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH pada daun Citrus aurantium dan Citrus limetta tergolong sedang, sama dengan hasil pada buahnya. Sedangkan untuk aktivitas antioksidan biji kedua jeruk tersebut tergolong kuat.34 Penelitian lain dengan metode yang sama buah jeruk nipis juga memiliki aktivitas antioksidan yang tergolong kuat.
14,15
Pada jeruk keprok, bali dan lemon
aktivitas antioksidan dalam pelarut metanol lebih baik dibandingkan pelarut etil asetat dan n-heksana. Pada pelarut metanol tergolong aktivitas antioksidan sedang sedangkan pada etil asetat dan n-heksana aktivitas antioksidan tidak bisa digolongkan dalam kriteria Blois.35 Uji aktivitas antioksidan daun surian dengan metode DPPH didapatkan aktivitas antioksidan tergolong sangat kuat dengan nilai IC50 lebih kecil dibandingan vitamin C.10 Firman Allah dalam Surah Thaahaa : "Yang telah menjadikan bagi kalian bumi sebagai hamparan, dan Yang telah menjadikan bagi kalian di bumi itu jalan-jalan, dan menurunkan dari langit air hujan, maka Kami tumbuhkan dengan air hujan itu berjenis-jenis dari tumbuh-tumbuhan yang bermacam-macam. Makanlah dan gembalakanlah binatang-binatang kalian. Sesungguhnya pada yang demikian itu, terdapat tandatanda kekuasaan Allah, bagi orang-orang yang berakal."(Thaahaa [20]: 53-54)
Penelitian ini merupakan salah satu bentuk implementasi ayat di atas, dimana sebagai orang yang berakal seharusnya kita banyak mencari tahu potensi yang ada di bumi Allah ini. Penelitian ini menunjukan salah satu tanaman yang diturunkan oleh Allah ternyata memiliki dampak yang baik bagi kesehatan.
BAB 5 SIMPULAN DAN SARAN
5.1 Simpulan Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, pada berbagai konsentrasi larutan uji ekstrak daun jeruk nipis didapatkan aktivitas antioksidan. Nilai IC50 ekstrak daun jeruk nipis sebesar 93,41 ppm tergolong sebagai antioksidan kuat menurut Kriteria Blois.
5.2 Saran 1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai peranan antioksidan daun jeruk nipis dengan pelarut air, karena penggunaan pada masyarakat daun jeruk nipis sering direbus untuk dijadikan obat. 2. Perlu dilakukan penelitian untuk mengetahui kandungan senyawa bioaktif ekstrak daun jeruk nipis yang bersifat antioksidan 3. Perlu dilakukan penelitian lanjut mengenai efek daun jeruk nipis lainnya seperti toksisitas dan antimikrobakterial.
27
28
DAFTAR PUSTAKA 1. Winarsi H. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas: potensi dan aplikasi dalam kesehatan. Yogyakarta: Kanisius. 2007 2. Kunwar A, Priyadarsini KI. Free radicals, oxidative stress and importance of antioxidants in human health. Journal medical and allied sciences. July 2011;1(2): 53-60 3. Yao Y, Vieira A. Comparative antioxidant properties of citrus species: evidence for potent, non vitamin antioxidants in C.aurantifolia. International journal of food, nutrion and public health. 2011;4(1) 4. Corwin J. E. Buku saku patofisiologi. Edisi 3. Jakarta: EGC. 2009 5. Kumar V, cotran RS, Robbins SL. Buku ajar patologi robbins. Edisi 7. Volume 1. Jakarta: EGC. 2007 6. Marks DB, Marks AD, Smith CM. Biokimia kedokteran dasar sebuah pendekatan klinis. Jakarta: EGC. 2000 7. National Cancer Institute. Antioxidant and cancer prevention: fact sheet [serial online] 2004 july [cited 2013 june 15]. available from: URL: www.cancer.gov/cancertopics/factsheet/prevention/antioxidant 8. Loizzo MR, Tundis R, Bonesi M, Menichini F, De Luca D, Colica C et al. Evaluation of Citrus aurantifolia peel and leaves extracts for their chemical composition, antioxidant and anti-cholinesterase activities. J Sci Food Agric.2012 Dec;92(15):2960-7. 9. Reddy LJ, Jalli RD, Jose B, Gopu S. Evaluation of Antibacterial & Antioxidant Activities of The Leaf Essential Oil & Leaf Extract of Citrus aurantifolia. Asian Journal of Biochemical and Pharmaceutical Research. May 2012;2:346-53 10. Yuhernita, Juniarti. Analisis Senyawa Metabolit Sekunder Dari Ekstrak Methanol Daun Surian Yang Berpotensi Sebagai Antioksidan. Makara Sains. April 2011;15(1): 48-52 11. Prihatman K, editor. Jeruk [serial online] 2000 Pebruary [cited 2013July 22]. Available from: URL: http://www.warintek.ristek.go.id/ 12. Rukmana R. Jeruk nipis: prospek agribisnis, budidaya dan pasca panen. Yogyakarta: kanisius. 2003 13. Muhlisah F. Tanaman obat keluarga. Jakarta: penebar swadaya. 1999 14. Sidana J, Saini V, Dahiya S, Nain P, Bala S. A review on citrus: the boon of nature.Journal pharmacy science review and research. Jan-Peb 2013 18(2): 20-27
29
15. Ghafar MFA, Prasad N, Weng KK, Ismail A. Flavonoid, hespiridine, total phenolic content and antioxidant activities from citrus species. African Journal of Biotechnology. January 2010;9(3) : 326-30 16. Departemen Kesehatan RI. Parameter Standard Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan. Jakarta : Depkes RI. 2000.hal. 1-12. 17. Gitawati R. Radikal Bebas- Sifat dan Perannya dalam Menimbulkan Kerusakan/Kematian Sel. Cermin Dunia Kedokteran.1995;No.102: 33-36. 18. Ardiansyah. Antioksidan dan Peranannya bagi Kesehatan. Artikel IPTEK.2007 19. Molyneux P. The use of the stable free radical diphenylpicrylydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant activity. Jurnal Science Technology. Mar-Apr 2004;26(2): 212-8 20. Reynertson KA. Phytochemical Analysis of Bioactive Constituens from edible Myrtaceae Fruit, Dissertation. New York : The City University of New York.2007 21. Blois, MS.Antioxidant Determinations By The Use of a Stable Free Radical, Nature. 1958:1199-200 22. Amic D, Beslo D, Trinajstic, Davidovic. Structure-radical scavenging activity relationships of flavonoids. Croatia Chem Acta 76 (1) : 55-61 23. Kistiana HD, ariviani S, Khasanah LU. Ekstraksi pigmen antosianin buah senggani (Melastoma malabathricum auct. Non linn) dengan variasi jenis pelarut. Jurnal teknosains pakan. Oktober 2012;1(1): 107 24. Ozgen M, Reese Neil R, Artemio Z et al. Modified 2,2-Azino-bis-3 ethylbenzothiazoline-6-sulfonic Acid (ABTS) Method to Measure Antioxidant Capacity of Selected Small Fruits and Comparison to Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) and 2,2′-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) Methods. Journal of Agriciultural and Food Chemistry. 2006: 1151-57 25. Halliwell B, Gutteridge JMC. Free Radical in Biology and Medicine. New York: Oxford University Press.2000 26. Mun’im, Negishi O, Ozawa T. Antioxidative compounds from Crotalaria sessiflora. Biosci Biotechnol Biochem. Pebruary 2003;67 (2) 27. Rouessac A. Chemical Analysis Modern Instrumentatiom Methods and Techniques. England : Willey.2004 28. Harborne JB. Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan. Terjemahan K. Padmawinata Edisi II. Bandung: ITB Press. 2006.
30
29. Nabavi SF, Nabavi SN, Ebrahimzadeh MA, Asgarirad H. The Antioxidant Activity of Wild Medlar (Mespilus germanical) Fruits, Stem Bark and Leaf. African Journal of Biotechnology 10 January 2011;Vol.10(2): 283-9. 30. Widiyarti G, Sundowo A, Hanafi M. The free radical scavenging and antihyperglycemic activities of various gambiers available in Indonesian market. Makara Sains.November 2011; 15(2): 129-134 31. Kekuda TRP, Vinayaka KS, Kumar SUP, Sudharshan SJ. Antioxidant and Antibacterial Activity of Lichen Extracts, Honey and Their Combination. Journal of Pharmacy Research 2009;2(12):1875-1878. 32. Karamian R, Ghasemlou F. Screening of total phenol and flavanoid content, antioxidant and antibacterial activities of the methanolic extracts of three silene species from Iran. Journal of agriculture and crop sciences.2013;5: 305-312 33. Dhiya A, Monica M. Uji Aktivitas Antiradikal Bebas Ekstrak Buah Jeruk Bali (Citrus maxima Burm.Fz) dengan Metode DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhidrazyl). UNESA Journal of Chemistry. September 2012;1(2) 34. Umamaheswari M, Asokkumar K. In Vitro Antioxidant Activities Of Leaves, Fruits And Peel Extract Of Citrus. International Journal of Phytopharmacy. JanPeb 2012;2(1): 13-20 35. Wulandari RA , Winarti W. Penampisan Fitokimia Dan Uji Aktivitas Antioksidan Dengan Metode Peredaman Radikal Bebas DPPH Dari Ekstrak Tiga Jenis Daun Jeruk, Suku Rutaceae. FFUP.2011
31
LAMPIRAN Lampiran 1 Hasil Determinasi
Gambar 6.1 Hasil Determinasi
32
Lampiran 2 Nilai Absorbansi, % Penghambatan dan IC50Ekstrak Daun Jeruk Nipis Tabel 6.1 Perhitungan absorbansi, % penghambatan dan IC50 ekstrak daun jeruk nipis Konsentrasi (ppm) 25
50
75
100
Absorbansi (nm)
0,559 0,559 0,566 0,462 0,463 0,491 0,385 0,362 0,442 0,268 0,264 0,288
Y = a + bx 50 = -6,795 + 0,608X 56,795 = 0,608 X X = IC50 = 93.41
Rata-rata Absorbansi (nm) 0,561
% penghambatan(Abs0 – Abs sampel/ Abs0) x 100% (%) 0,619– 0,561x100% = 9,3 % 0,619
0,472
0,619 – 0,472x100% = 23,7 % 0,619
0,396
0,619 – 0,396x100% = 36,02 % 0,619
0,273 0,619 – 0,273x100% = 55,89 % 0,619
33
Lampiran 3 Nilai Absorbansi, % Penghambatan dan IC50 Vitamin C Tabel 6.2 Perhitungan absorbansi, % penghambatan dan IC50 Vitamin C
Konsentrasi (ppm) 1
2
3
4
Y = a + bx 50 = -8,09 + 15,25 x 58.09 = 15,25 x X = IC50 = 3.8
Absorbansi (nm)
Rata-rata Absorbansi (nm)
0,578 0,602 0,503 0,484 0,482 0,528 0,387 0,388 0,392 0,281 0,280 0,289
0,561
0,498
0,389
% Penghambatan (Abs0 – Abs sampel/ Abs0) x 100% (%) 0,619– 0,561x100% = 9,3 % 0,619 0,619 – 0,498x100% = 19.5 % 0,619 0,619 – 0,389x100% = 37,15 % 0,619
0,283 0,619 – 0,283x100% = 54,28 % 0,619
34
Lampiran 4 Gambar Alat dan Bahan Penelitian
Gambar 6.2 Pengeringan Daun Jeruk Nipis Gambar 6.3 Larutan hasil maserasi
Gambar 6.4 Proses Evaporasi
Gambar 6.5 Ekstrak Kental Daun Jeruk Nipis
Gambar 6.6 Penimbangan Ekstrak Kental Daun Jeruk Nipis
35
Lampiran 5 Riwayat Penulis
Identitas : Nama
: Nilam Fajarwati
Jenis Kelamin
: Perempuan
Tempat, Tanggal Lahir
: Karanganyar, 06 November 1993
Agama
: Islam
Alamat
: Jl. Tanah Kusir II RT 10/09 No. 21A, Kebayoran Lama, Jakarta Selatan
E-mail
:
[email protected]
Riwayat Pendidikan :
1999 – 2005
: Sekolah Dasar Negeri 07 Pagi Jakarta
2005 – 2007
: Sekolah Menengah Pertama Negeri 11 Jakarta
2007 – 2010
: Sekolah Menengah Atas Negeri 06 Jakarta
2010- sekarang : Program Studi Pendidikan Dokter FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
