KAJIAN PENGGUNAAN BA DAN NAA UNTUK MERANGSANG PEMBENTUKAN TUNAS LENGKENG DATARAN RENDAH (Dimocarpus longan Lour) SECARA IN VITRO
Oleh :
Tanjung Dewi Anniasari H0105032
FAKULTAS PERTANIAN UNIVERSITAS SEBELAS MARET SURAKARTA 2010
KAJIAN PENGGUNAAN BA DAN NAA UNTUK MERANGSANG PEMBENTUKAN TUNAS LENGKENG DATARAN RENDAH (Dimocarpus longan Lour) SECARA IN VITRO
Skripsi Untuk memenuhi sebagian persyaratan guna memperoleh derajat Sarjana Pertanian di Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret
Jurusan/Program Studi Agronomi
Oleh :
Tanjung Dewi Anniasari H0105032
FAKULTAS PERTANIAN UNIVERSITAS SEBELAS MARET SURAKARTA 2010 2
KAJIAN PENGGUNAAN BA DAN NAA UNTUK MERANGSANG PEMBENTUKAN TUNAS LENGKENG DATARAN RENDAH (Dimocarpus longan Lour) SECARA IN VITRO
Yang dipersiapkan dan disusun oleh TANJUNG DEWI ANNIASARI H 0105032
Telah dipertahankan di depan Dewan Penguji Pada tanggal:……..April 2010 Dan dinyatakan telah memenuhi syarat
Susunan Tim Penguji Ketua
Anggota I
Anggota II
Ir. Retno Bandriyati A. P., MS NIP. 196411141988032001
Ir. Endang Setia Muliawati, MSi NIP. 196407131988032001
Dr. Ir. Pardono, MS NIP. 195508061983031003
Surakarta,
April 2010
Universitas Sebelas Maret Fakultas Pertanian Dekan
Prof. Dr. Ir. H. Suntoro W. A., MS NIP.195512171982031003 3
KATA PENGANTAR
Alhamdulillah, puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah memberikan rahmat dan kemudahan sehingga penulis dapat menyelesaikan penulisan skripsi yang berjudul “Kajian Penggunaan BA dan NAA untuk Merangsang Pembentukan Tunas Lengkeng Dataran Rendah (Dimocarpus Longan Lour) secara in Vitro”. Penulis mendapatkan bantuan dari berbagai pihak yang telah membantu dalam penyusunan skripsi ini. Terima kasih penulis ucapkan kepada pihak-pihak antara lain : 1. Bapak Prof. Dr. Ir. H. Suntoro W.A., MS. selaku Dekan Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret Surakarta. 2. Bapak Ir. Wartoyo S.P., MS. Selaku Ketua Jurusan Agronomi Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret Surakarta. 3. Ibu Ir. Retno Bandriyati A.P., MSi. selaku dosen Pembimbing Utama yang telah memfasilitasi penelitian ini dan Ibu Ir. Endang Setia M., MSi. selaku dosen Pembimbing Pendamping atas bimbingan dan arahan dari awal hingga akhir penyusunan skripsi. 4. Bapak Dr. Ir. Pardono, MS selaku dosen Penguji yang telah memberikan masukan dan saran pada penyusunan skripsi ini. 5. Bapak Prof. Dr. Ir. Edi Purwanto, MSc selaku dosen Pembimbing Akademik yang telah memberikan bimbingan dan arahan selama studi penulis. 6. Keluarga tercinta: Bapak, Ibu, Suami, Adik, dan Anak yang selalu memberi dukungan semangat dan doa yang tidak pernah putus. 7. Teman-teman Agronomi angkatan 2005 yang telah memberikan bantuan, dukungan, dan motivasinya selama penelitian dan penyusunan skripsi ini. 8. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu yang telah membantu penulis selama penelitian dan penyusunan skripsi. Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih banyak kekurangan. Semoga skripsi ini bermanfaat bagi penulis khususnya dan pembaca pada umumnya. Surakarta, 4
Penulis
April 2010
DAFTAR ISI
Halaman HALAMAN JUDUL ......................................................................................
i
HALAMAN PENGESAHAN........................................................................ ii KATA PENGANTAR.................................................................................... iii DAFTAR ISI................................................................................................... iv DAFTAR TABEL .......................................................................................... vi DAFTAR GAMBAR...................................................................................... vii DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................ viii RINGKASAN ................................................................................................. ix SUMMARY .................................................................................................... x I.
PENDAHULUAN A. Latar Belakang ................................................................................... 1 B. Perumusan Masalah ........................................................................... 3 C. Tujuan Penelitian ............................................................................... 3 D. Hipotesis ............................................................................................ 3
II. TINJAUAN PUSTAKA A. Tanaman Lengkeng Dataran Rendah (Dimocarpus longan Lour) ..... 4 B. Kultur Jaringan Tanaman Berkayu .................................................... 6 C. Media Kultur Jaringan ....................................................................... 8 D. Zat Pengatur Tumbuh . ....................................................................... 9 III. METODE PENELITIAN A. Waktu dan Tempat Penelitian ........................................................... 12 B. Bahan dan Alat Penelitian ................................................................. 12 C. Cara Kerja Penelitian ......................................................................... 12 1. Rancangan Penelitian ................................................................ 12 2. Pelaksanaan Penelitian .............................................................. 13 3. Variabel Pengamatan ................................................................ 15 4. Analisis Data ............................................................................. 16 5
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN A. Kemunculan Kalus ............................................................................ 17 B. Tekstur Kalus .................................................................................... 19 C. Warna Kalus . ..................................................................................... 21 D. Ukuran Kalus ..................................................................................... 24 E. Kemunculan Tunas ............................................................................ 27 F. Subkultur . .......................................................................................... 30 V. KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan......................................................................................... 32 B. Saran ................................................................................................... 32 DAFTAR PUSTAKA .................................................................................... 33 LAMPIRAN.................................................................................................... 38
6
DAFTAR TABEL
Nomor Judul Halaman 1. Kemunculan kalus eksplan lengkeng dataran rendah (Dimocarpus longan Lour) karena pengaruh penambahan BA dan NAA pada media kultur WPM............................................................................... 17 2.
3.
4.
Tekstur kalus eksplan lengkeng dataran rendah (Dimocarpus longan Lour) karena pengaruh penambahan BA dan NAA pada media kultur WPM..........................................................................................
20
Warna kalus eksplan lengkeng dataran rendah (Dimocarpus longan Lour) karena pengaruh penambahan BA dan NAA pada media kultur WPM..........................................................................................
22
Ukuran kalus eksplan lengkeng dataran rendah (Dimocarpus longan Lour) karena pengaruh penambahan BA dan NAA pada media kultur WPM .........................................................................................
26
7
DAFTAR GAMBAR
Nomor Judul Halaman 1. Tekstur kalus eksplan lengkeng dataran rendah (Dimocarpus longan Lour) karena pengaruh penambahan BA dan NAA pada media kultur WPM .......................................................................................... 2.
20
Warna kalus eksplan lengkeng dataran rendah (Dimocarpus longan Lour) karena pengaruh penambahan BA dan NAA pada media kultur WPM . ........................................................................................
3.
22
Ukuran kalus eksplan lengkeng dataran rendah (Dimocarpus longan Lour) karena pengaruh penambahan BA dan NAA pada media kultur WPM . ........................................................................................
4.
25
Respon eksplan pada perlakuan penambahan NAA 1 ppm sebelum dilakukan subkultur (a), respon eksplan setelah dilakukan subkultur pada media WPM dengan penambahan BAP 2 ppm (b) .....................
30
5. Respon eksplan pada perlakuan penambahan BA 2 ppm dan NAA 1 ppm sebelum dilakukan subkultur (a), respon eksplan setelah dilakukan subkultur pada media WPM dengan penambahan BAP 2 ppm (b) .................................................................................................
8
31
DAFTAR LAMPIRAN
Nomor Judul Halaman 1. Komposisi bahan pada media WPM.................................................... 39 2.
Cara menentukan konsentrasi BA dan NAA.. .....................................
40
3.
Keragaan eksplan Dimocarpus longan Lour secara in vitro pada media WPM karena penambahan zat pengatur tumbuh BA dan NAA pada 12 MST .............................................................................
41
9
KAJIAN PENGGUNAAN BA DAN NAA UNTUK MERANGSANG PEMBENTUKAN TUNAS LENGKENG DATARAN RENDAH (Dimocarpus longan Lour) SECARA IN VITRO Tanjung Dewi Anniasari H0105032
RINGKASAN Indonesia merupakan Negara yang kaya akan tanaman buah-buahan tropis, salah satunya yaitu lengkeng. Kebutuhan dalam negeri akan buah lengkeng ini semakin meningkat sehingga sebagian besar kebutuhan dipenuhi oleh buah lengkeng impor. Oleh karena itu diperlukan upaya peningkatan produksi lengkeng. Terdapat kendala dalam pengembangan tanaman lengkeng, yaitu harga bibit yang mahal. Untuk memenuhi kebutuhan bibit lengkeng dapat dilakukan suatu usaha perbanyakan dengan metode kultur jaringan. Dalam metode perbanyakan lengkeng dengan kultur jaringan diperlukan zat pengatur tumbuh. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh kombinasi konsentrasi zat pengatur tumbuh yang tepat dalam merangsang pembentukan tunas lengkeng dataran rendah. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Oktober 2009 sampai Januari 2010, di Laboratorium Bioteknologi Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret Surakarta. Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap yang terdiri dari dua faktor perlakuan yang disusun secara faktorial. Faktor perlakuan pertama adalah konsentasi BA yang terdiri dari empat taraf perlakuan yaitu tanpa BA, 0,5 ppm, 1 ppm, 2 ppm, dan 3 ppm. Faktor perlakuan kedua adalah konsentrasi NAA yang terdiri dari empat taraf perlakuan yaitu tanpa NAA, 0,5 ppm, 1 ppm, 2 ppm, dan 3 ppm. Data kemudian dianalisis secara deskriptif. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kombinasi konsentrasi BA 2 ppm dan NAA 1 ppm memberikan hasil terbaik pada variabel tekstur kalus, warna kalus,
10
dan ukuran kalus. Semua kombinasi perlakuan belum mampu merangsang pembentukan tunas lengkeng dataran rendah (Dimocarpus longan Lour).
11
THE STUDY OF USING THE BA AND NAA TO STIMULATE THE SHOOT FORMATION OF LONGAN (Dimocarpus longan Lour) BY IN VITRO
Tanjung Dewi Anniasari H0105032
SUMMARY
Indonesia is a place which is rich in tropical fruit plants. One of them is longan. The domestic needs of this fruit is more and more increase. This condition force the emergence of the import longan to fulfill the needs of the longan fruit in large quantities. Therefore, the efforts to increase the longan production are needed. There is an obstruction in the propagation of longan, is the expensive of seed price. To fulfill the demand of longan seed, could be done by effort of multiplication using tissue culture method. In multiplication method of longan with tissue culture need the plant growing regulator. This research was aimed to find out the combination of the exact concentration from the plant growing regulator on stimulating the shoot formation of longan. This research was done on October 2009 until January 2010 in the Biotechnology Laboratory of Agriculture Faculty, Sebelas Maret University, Surakarta. This research used Completely Randomize Design which consisted of two factors were arranged by factorial. First factor was the BA concentration consisted of: without BA, 0,5 ppm, 1 ppm, 2 ppm, and 3 ppm. Second factor was the NAA concentrations which consisted of four levels: without NAA, 0,5 ppm, 1 ppm, 2 ppm, and 3 ppm. Then, the data was analyzed descriptively. The result showed that the combination of BA concentration 2 ppm concentration and NAA concentration 1 ppm gave the best result at the callus texture, callus color, and callus size. All treatments have not been able to stimulate the shoot formation of longan (Dimocarpus longan Lour).
12
I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Indonesia terkenal dengan kekayaan sumber daya tanaman buah-buahan yang beraneka ragam. Salah satu jenis tanaman buah eksklusif yang sudah ditanam di beberapa daerah di Indonesia adalah lengkeng (Dimocarpus longan Lour) yang mempunyai cita rasa buah yang manis dan aroma yang khas, serta memiliki nilai gizi cukup tinggi. Tanaman lengkeng merupakan jenis tanaman buah subtropis yang digemari masyarakat. Permintaan pasar dalam negeri terhadap buah lengkeng terus meningkat sehingga prospek komoditas ini cukup cerah untuk dikembangkan secara komersial. Lengkeng biasa diperbanyak dengan cara generatif maupun vegetatif. Secara generatif, lengkeng dapat diperoleh dengan mengecambahkan biji, sedangkan dengan vegetatif banyak cara yang dilakukan, antara lain dengan sambung pucuk, sambung masuk seperti pelana, tempel mata tunas atau okulasi, dan penyusuan. Untuk perbanyakan lengkeng secara vegetatif diperlukan batang atas yang mempunyai sifat unggul dari segi kualitas dan produksi buah, dan batang bawah yang sistem perakarannya baik dan dalam serta tahan terhadap keadaan tanah yang kurang menguntungkan, termasuk hama dan penyakit yang ada dalam tanah. Batang bawah umumnya menggunakan varietas lokal (Sunanto, 1990). Kini kebutuhan Lengkeng nasional sekitar 21 ribu ton per tahun. Sekitar 90 persen impor dari Thailand dan China (Mulyana, 2009). Permintaan lengkeng yang terus meningkat lebih banyak dipenuhi dari lengkeng impor walaupun harganya relatif lebih mahal. Prospek komoditas lengkeng cukup cerah. Permintaan pasar dalam negeri terhadap buah lengkeng cenderung terus meningkat dari tahun ke tahun. Dalam beberapa tahun terakhir, pasar dalam negeri dibanjiri buah lengkeng dari Thailand, baik dalam bentuk buah segar maupun olahan dalam kaleng (canning). Karenanya, dengan mudah kita dapat menemukan lengkeng di pasar-pasar tradisionil dan pasar swalayan. Hingga kini, permintaan terhadap bibit lengkeng terus 13 1
meningkat tajam. Dijual bibit lengkeng setinggi 30 cm seharga minimum Rp. 60.000. Harga bibit bisa semakin mahal, sesuai dengan umur dan kualitasnya. Tanaman lengkeng dalam pot dapat berharga mulai dari Rp. 250.000. Lengkeng yang dikembangkan masih jarang dikembangkan antara lain Diamond River, Pimpong, Itoh, Aroma Durian, Gading, Kristalin, Fuand Ray (Baroto, 2009). Oleh karena itu untuk mengembangkan potensi dan peluang pasar buah lengkeng tersebut perlu dilakukan usaha percepatan penyediaan bibit. Perbanyakan cepat melalui teknik kultur jaringan diharapkan dapat menjadi solusi untuk memperoleh bibit yang bersifat sama dengan induknya dalam jumlah yang banyak, tidak merusak pohon induk, dan murah harganya. Penggunaan teknik kultur jaringan berkembang dengan pesat sejalan dengan semakin besarnya manfaat dari penggunaan kultur jaringan tersebut . Menurut Santoso dan Nursandi (2004) kultur jaringan akan berhasil dengan baik apabila syarat-syarat yang dibutuhkan dapat terpenuhi. Syaratsyarat tersebut meliputi beberapa hal sebagai berikut: pemilihan eksplan/bahan tanam, penggunaan media yang cocok, keadaan yang aseptik, dan pengaturan udara yang baik. Menurut Yusnita (2004), salah satu komponen media yang menentukan keberhasilan kultur jaringan adalah jenis dan konsentrasi Zat Pengatur Tumbuh (ZPT) yang digunakan. Jenis dan konsentrasi ZPT tergantung pada tujuan dan tahap dalam pengulturan. Benzil Adenin (BA) termasuk golongan sitokinin yang penting sebagai pemacu pertumbuhan dan morfogenesis dalam kultur jaringan. Naphthalene Acetic Acide (NAA) adalah zat pengatur tumbuh golongan auksin,
yang berpengaruh terhadap
perkembangan sel melalui peningkatan sintesa protein. Peningkatan sintesa protein tersebut dapat digunakan untuk sumber tenaga dalam pertumbuhan (Sriyanti dan Wijayani, 1994).
14
B. Perumusan Masalah Berdasarkan uraian di atas, maka dalam penelitian ini dapat dirumuskan suatu masalah yaitu konsentrasi BA dan NAA yang tepat untuk merangsang pembentukan tunas lengkeng (Dimocarpus longan Lour) secara in vitro.
C. Tujuan Penelitian Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh kombinasi konsentrasi BA dan NAA untuk merangsang pembentukan tunas lengkeng (Dimocarpus longan Lour) secara in vitro.
D. Hipotesis Penggunaan kombinasi konsentrasi BA dan NAA memberikan pengaruh untuk merangsang pembentukan tunas lengkeng secara in vitro.
15
II. TINJAUAN PUSTAKA
A. Tanaman lengkeng dataran rendah (Dimorcarpus longan lour) Tanaman lengkeng atau kalengkeng termasuk suku rambut-rambutan. Kedudukan tanaman lengkeng dalam sistematika (taksonomi) tumbuhan diklasifikasikan sebagai berikut. Kingdom : Plantae (tumbuh-tumbuhan) Divisi
: Spermatophyta (tumbuhan berbiji)
Subdivisi : Angiospermae (berbiji tertutup) Kelas
: Dicotyledonae (biji berkeping dua)
Ordo
: Sapindales
Famili
: sapindaceae
Genus
: Nephelium
Spesies
: Nephelium longanum sin. Euphoria longana (Lour.)
(Rukmana, 2003). Lengkeng atau longan (Dimorcarpus longan Lour atau Euphoria longan Steud atau Euphoria longana Lam atau Nephelium longana Camberss) adalah satu famili dengan leci/lychee dan rambutan yaitu famili sapindaceae, biasa dikenal dengan sebutan dragon’s eye (si Mata Naga). Di Cina lebih banyak dikenal fungsinya sebagai obat daripada sebagai buah segar (Usman, 2004). Di Indonesia, kelengkeng terdapat di Temanggung, Magelang, sedangkan leci di terdapat di Bali. Tinggi tanaman dapat mencapai 40 m. Lebih cocok ditanam di dataran rendah (300-900 m dpl), tipe iklim basah dengan musim kering tidak lebih dari 4 bulan. Suhu malam dingin selama musim kemarau mendorong tanaman berbunga. Ada tanaman yang berbunga sempurna maupun hanya berbunga betina atau jantan saja. Tanaman kelengkeng berbunga setahun sekali, biasanya pada bulan Agustus-Oktober dan buah dapat dipanen 4 bulan setelah bunga mekar (Anonim, 2009).
4 16
Buah lengkeng berbentuk bulat dengan ukuran kurang lebih sebesar kelereng. Buah ini bergerombol pada malainya. Kulit buahnya berwarna cokelat muda sampai kehitaman dengan permukaan agak berbintil-bintil. Daging buahnya berwarna putih bening dan berair. Rasanya sangat manis dengan aroma harum yang khas. Bijinya berbentuk bulat, terdiri dari dua keping, dan dilapisi kulit biji yang berwarna hitam. Daging bijinya sendiri berwarna putih, mengandung karbohidrat, sedikit minyak, dan saponin. Daging lengkeng enak dimakan segar dan dapat dibuat minuman dalam kaleng (canning). Bijinya mengandung saponin yang baik untuk sampo pencuci rambut. Daunnya biasa digunakan untuk obat tradisional terhadap penyalat dalam karena mengandung quercetin. Pohonnya dapat digunakan untuk kayu bakar seperti halnya pohon rambutan. Selain itu, tanaman lengkeng bermanfaat untuk taman, pelindung jalan, dan konservasi lahan yang curam (Rasidi, 2007). Data yang kami peroleh dari penangkar bibit di Demak, sebaran lengkeng dataran rendah introduksi ini telah sampai di 11 propinsi yaitu Jawa Barat, Jawa Tengah, Jawa Timur, NTB, Kalimantan Timur, Kalimantan Tengah, Kalimantan Barat, Kalimantan Selatan, Lampung, Sulawesi Selatan, dan Sulawesi Utara. Total tanaman yang dikirim mencapai 50.000 buah. Sementara itu, dari penangkar bibit asal Kalimantan Barat diperoleh data penyebaran lengkeng dataran rendah terutama Diamond River mencapai 1.830 tanaman. Melihat animo masyarakat akan lengkeng dataran rendah, diperkirakan penyebarannya masih akan terus meluas ke seluruh Indonesia (Mariana dan Sugiyatno, 2008). Lengkeng Diamond River merupakan lengkeng introduksi dari Thailand. Daya adaptasi cukup luas, dapat tumbuh di dataran rendah sampai dataran tinggi, tetapi lebih banyak berkembang di dataran rendah. Asalusulnya merupakan lengkeng dataran tinggi yang beradaptasi dengan baik di dataran rendah. Umur berbuah genjah, bibit dari perbanyakan vegetatif dapat menghasilkan buah saat umur 1 tahun sedangkan bibit dari biji dapat berbuah saat umur 2-3 tahun. Rasa buah manis dan daging buah basah. 17
Berbuah 2-3 kali setahun. Populasi tanaman terbesar berada di Thailand, sehingga negara ini merupakan pemasok utama lengkeng ke Indonesia. Saat ini, daerah Demak, Semarang dan Pontianak merupakan sentra populasi lengkeng Diamond River di Indonesia. Buah lengkeng ini banyak dijumpai mulai dari pasar tradisional sampai supermarket dan hampir selalu mengisi saat lengkeng lokal tidak ada. Umumnya orang menyebut dengan lengkeng ”Bangkok” (Tim plasmanutfah Balitjestro, 2009). Diamond river (sebutan dari Malaysia). Asli lengkeng dataran rendah, mudah berbuah di Indonesia. Sifat unggulnya pada sosok tanamannya. Percabangan banyak dan produktivitas tinggi. Berbuah sepanjang tahun. Lazim dilihat pohon diamond river bertaburan bunga dan buah. Rasa buah manis, tapi berkualitas rendah. Daging buah tipis, transparan dan becek. Diamond River dengan penanaman pada bedengan yang ditinggikan, maka kelebihan air dapat dibuang. Maka seiring bertambahnya umur buah, daging semakin kering dan biji semakin mengecil. Diamond river cocok ditanam sebagai tabulampot atau tanaman pekarangan karena tajuknya indah dan buah lebat (Baroto, 2009).
B. Kultur Jaringan Tanaman Berkayu Teknologi kultur jaringan dapat menghindari kendala musim dan empat dalam penyediaan bibit dan dapat memproduksi bibit dalam waktu relatif cepat dan jumlah bibit yang dihasilkan lebih besar. Namun hal ini tergantung pada metoda perbanyakan yang digunakan. Jumlah planlet yang dihasilkan melalui perbanyakan dengan metoda multiplikasi tunas mikro lebih sedikit dibandingkan dengan metoda perbanyakan melalui pembentukan embriosomatik (Amien et al, 2007). Kultur jaringan dapat menghasilkan tanaman baru dalam jumlah yang besar dalam jangka waktu yang relatif singkat, dengan sifat dan kualitas yang diharapkan sama sehingga perbanyakan in vitro memberi harapan untuk dikembangkan jika menginginkan hasil bibit yang berkualitas secara cepat (Yusnita, 2004). 18
Kultur jaringan termasuk teknik perbanyakan tanaman secara vegetatif buatan yang didasarkan pada sifat totipotensi tumbuhan. Totipotensi adalah kemampuan beberapa sel tanaman yang masih dalam proses pertumbuhan untuk membentuk individu tanaman dalam proses kultur jaringan. Bagian tumbuhan dapat berkembang menjadi tumbuhan lengkap jika ditumbuhkan pada kondisi yang memungkinkan. Dengan kultur jaringan, dalam waktu yang bersamaan bisa diperoleh bibit tanaman dengan jumlah banyak (Rahardja dan Wiryanta, 2003). Kultur jaringan akan lebih besar persentase keberhasilannya bila menggunakan jaringan meristem. Jaringan meristem adalah jaringan muda, yaitu jaringan yang terdiri dari sel-sel yang selalu membelah, dindingnya tipis belum mempunyai penebalan dari zat pektin, plasmanya penuh dan vakuolanya kecil-kecil (Hendaryono dan Wijayanti, 1994). Bagian tanaman yang dapat digunakan sebagai eksplan adalah biji atau bagian-bagian biji seperti aksis embrio atau kotiledone, tunas pucuk, potongan batang satu buku, potongan akar, potongan daun, potongan umbi batang, umbi akar, empulur batang, umbi lapis dengan sebagian batang dan bagian bunga. Selain itu eksplan yang digunakan merupakan jaringan muda yang sedang tumbuh aktif karena mempunyai daya regenerasi lebih tinggi, sel-selnya masih aktif membelah diri (Yusnita, 2004). Pemanfaatan teknologi kultur jaringan untuk tujuan perbanyakan bibit telah diaplikasikan pada berbagai tanaman tahunan seperti jati, eukaliptus, akasia, dan lain-lain. Beberapa kelebihan dari penggunaan teknik kultur jaringan dibandingkan dengan cara konvensional adalah (1) faktor perbanyakan tinggi, (2) tidak tergantung pada musim karena lingkungan tumbuh in vitro terkendali, (3) bahan tanaman yang digunakan sedikit sehingga tidak merusak pohon induk, (4) tanaman yang dihasilkan bebas dari penyakit meskipun dari induk yang mengandung patogen internal, (5) tidak membutuhkan tempat yang sangat luas untuk menghasilkan tanaman dalam jumlah banyak (Mariska dan Sukmadjaja, 2003).
19
Perbanyakan
tanaman
secara
besar-besaran
telah
dibuktikan
keberhasilannya pada perkebunan kelapa sawit dan tebu. Dengan cara kultur jaringan dapat klon suatu komoditas tanaman dalam relatif cepat. Manfaat yang dapat diperoleh dari kloning ini cukup banyak, misalnya: di luar pulau Jawa akan didirikan suatu perkebunan yang membutuhkan bibit tanaman dalam jumlah ribuan, maka sudah dapat dibayangkan betapa mahalnya biayanya hanya untuk transportasi saja. Hal ini dapat diatasi dengan usaha kloning melalui budidaya jaringan, karena hanya perlu membawa beberapa puluh botol planlet yang berisi ribuan bibit. Dengan cara ini dapat menghemat waktu dan biaya yang cukup banyak dalam persiapan pemberangkatan ataupun transportasinya (Sriyanti dan Wijayani, 1994). Saat
ini
sudah
terdapat
beberapa tanaman
kehutanan
yang
dikembangbiakkan dengan teknik kultur jaringan, antara lain adalah: jati, sengon, akasia, dll. Bibit hasil kultur jaringan yang ditanam di beberapa areal menunjukkan pertumbuhan yang baik, bahkan jati hasil kultur jaringan yang sering disebut dengan jati emas dapat dipanen dalam jangka waktu yang relatif lebih pendek dibandingkan dengan tanaman jati yang berasal dari benih generatif, terlepas dari kualitas kayunya yang belum teruji di Indonesia (Nurwardani, 2008).
C. Media Kultur Jaringan Faktor pertunasan pada tanaman tahunan (terutama tahunan berkayu) relatif masih rendah. Tunas harus selalu di subkultur untuk memacu jaringan bersifat juvenil. Pada beberapa tanaman tahunan berkayu, seperti manggis media dasar WPM atau Jordan memberikan hasil yang lebih baik dibandingkan MS (Mariska dan Ragapadmi, 2001). Formula dasar untuk media kultur jaringan dibuat untuk menyediakan nutrisi dan mengatur pertumbuhan yang optimal untuk tanaman yang spesifik. Formulasi media Woody Plant Medium (WPM) dikembangkan oleh Brent Mc Cown dan Greg Lloyd ini cocok dan optimal untuk kultur jaringan tanaman berkayu (Kyte and Kleyn, 1996). 20
Beberapa media dasar yang banyak digunakan dalam kultur jaringan antara lain media dasar Murashige dan Skoog (1962) yang dapat digunakan untuk hampir semua jenis kultur, media dasar B5 untuk kultur sel kedelai dan legume lainnya, media dasar White (1934) sangat cocok untuk kultur akar tanaman tomat, media dasar Vacin dan Went (1949) digunakan untuk kultur jaringan anggrek, media dasar Nitsch dan Nitsch (1969) digunakan dalam kultur tepung sari (pollen) dan kultur sel, media dasar Schenk dan Hildebrandt (1972) untuk kultur jaringan tanaman monokotil, media dasar WPM (Woody Plant Medium, 1981) khusus untuk tanaman berkayu (Anonim, 2007). Media WPM (Woody Plant Medium) yang dikembangkan oleh Lioyd & Mc Coen pada tahun 1981, merupakan media dengan konsentrasi ion yang lebih rendah dari media MS. Media diperuntukkan khusus tanaman berkayu, dan dikembangkan oleh ahli lain, tetapi sulfat yang digunakan lebih tinggi dari sulfat pada media WPM. Saat ini WPM banyak digunakan untuk perbanyakan tanaman hias berperawakan perdu dan pohon-pohon (Erwin, 2009). Jenis medium dengan komposisi unsur kimia yang berbeda dapat digunakan untuk media tumbuh dari jaringan tanaman yang berbeda pula. Misalnya media Vacin Went sangat baik untuk media tumbuh anggrek. Tetapi tidak cocok untuk media tumbuh lain. Untuk eksplan dari tanaman keras sering menggunakan medium WPM, sedangkan untuk tanaman semusim (sayuran dan tanaman hias) sering menggunakan medium MS. Medium Kundson C cocok untuk menanam eksplan kelapa kopyor dan anggrek (Sriyanti dan Wijayani, 1994).
D. Zat Pengatur Tumbuh Zat pengatur tumbuh (ZPT) pada tanaman adalah senyawa organik bukan hara, yang dalam jumlah sedikit dapat mendukung, menghambat dan dapat merubah proses fisiologis tumbuhan. ZPT sangat diperlukan sebagai komponen medium bagi pertumbuhan dan diferensiasi. Tanpa penambahan 21
zat pengatur tumbuh dalam medium, pertumbuhan sangat terhambat bahkan mungkin tidak tumbuh sama sekali. Pembentukan kalus dan organ-organ ditentukan oleh penggunaan yang tepat dari zat pengatur tumbuh tersebut (Hendaryono dan Wijayanti, 1994). Organogenesis
merujuk
kepada
proses
yang
menginduksi
pembentukan jaringan, sel atau kalus menjadi tunas dan tanaman sempurna. Proses ini diawali oleh hormon pertumbuhan. Benziladenin dan sitokinin lainnya, baik sendiri maupun dalam kombinasi dengan asam naftalen asetat atau asam indol asetat kadang-kadang dengan asam giberelat menyebabkan diferensiasi dan pembentukan tunas. Pembentukan akar dapat terjadi serentak atau dapat diinduksi sesudahnya (Wetter dan Constabel, 1991). Sitokinin adalah zat pengatur tumbuh yang ditemukan oleh Haberlandt tahun 1913. Sitokinin mempunyai peranan dalam proses pembelahan sel. Bentuk dasar dari sitokinin adalah adanya gugus adenin (6-amino purine) yang menentukan kerja sitokinin yakni meningkatkan aktivitas dalam proses fisiologis tanaman. Dalam penelitian kultur jaringan, apabila konsentrasi sitokinin lebih besar dari auksin, maka akan terjadi stimulasi pertumbuhan tunas dan daun, sebaliknya bila sitokinin lebih rendah daripada auksin, maka terjadi stimulasi pertumbuhan akar. Sebaliknya, bila perbandingan sitokinin dan auksin berimbang, maka pertumbuhan tunas, akar dan daun akan berimbang pula (Abidin, 1994). Sitokinin adalah zat pengatur tumbuh yang berperan mengatur pembelahan sel serta mempengaruhi diferensiasi tunas. Benzil Adenin (BA) adalah salah satu zat pengatur tumbuh sintetik dengan daya rangsang lebih lama dan tidak mudah dirombak oleh sistem enzim dalam tanaman (Mariska dan Sukmadjaya, 1987). Peran sitokinin selain merangsang pembentukan tunas adventif, juga merangsang multiplikasi tunas aksilar dan melawan dominasi apikal, sedangkan auksin merangsang pembentukan akar adventif. Perbanyakan tunas aksilar telah dilakukan pada kultur jaringan pisang cavendish, vanili, dan stroberi. Perbanyakan tunas adventif telah dilakukan pada kultur jaringan 22
melinjo. Semua perbanyakan tunas tersebut dirangsang oleh sitokinin BA dalam media kultur. Murashige (1974) menyatakan bahwa auxin dan sitokinin merupakan zat pengatur tumbuh yang kritis sehingga dalam penggunaannya harus hatihati, perlu diteliti macam dan konsentrasinya. Penggunaan auxin dalam budidaya jaringan umumnya memberikan respon terhadap pemanjangan sel, pembentukan kalus, dan akar adventif, sedangkan pada konsentrasi tinggi mendorong pembentukan kalus saja. Pada pengulturan untuk menumbuhkan
dan menggandakan tunas
aksilar atau merangsang tumbuhnya tunas-tunas adventif, ZPT yang digunakan adalah sitokinin dengan auksin rendah. Pengulturan untuk merangsang pembentukan akar pada tunas, biasanya menggunakan ZPT auksin. Jenis auksin yang sering digunakan untuk pengakaran in vitro adalah IBA dan NAA, karena efektivitasnya tinggi dan harganya relatif murah (Yusnita, 2004). Zat pengatur tumbuh NAA dapat berperan sebagai perangsang terbentuknya enzim-enzim yang aktif dalam pembelahan sel. Tanpa pemberian NAA, walau telah diberikan sitokinin, eksplan yang ditumbuhkan secara in vitro belum mampu untuk tumbuh akar (Simatupang, 1991). Menurut Gaspar et al. (1996), NAA sangat diperlukan dalam masa pertumbuhan organogenesis termasuk pembentukan tunas daun. Auksin (NAA) memberikan pengaruh terhadap perkembangan sel karena auksin dapat
menaikan
tekanan
osmotik,
meningkatkan
permeabilitas
sel,
meningkatkan sintesis protein, meningkatkan plastisitas dan pengembangan dinding sel (Abidin, 1990).
23
III. METODE PENELITIAN
A. Waktu dan Tempat Penelitian Penelitian ini akan dilaksanakan mulai bulan Oktober 2009 sampai Januari 2010 di Laboratorium Bioteknologi Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret Surakarta.
B. Bahan dan Alat Penelitian Bahan tanaman yang digunakan sebagai eksplan adalah buku tunggal (satu buku) tanaman lengkeng dataran rendah. Bahan kimia yang akan digunakan dalam penelitian ini meliputi media Woody Plant Media (WPM), zat pengatur tumbuh BA dan NAA, sterilan, aquadest, bayclin, fungisida, bakterisida, spirtus, dan alkohol, sabun cuci Alat yang digunakan adalah botol kultur, bunsen, Laminar Air Flow Cabinet (LAFC), petridish, pinset, scalpel, timbangan analitik, plastik PP 0,4, plastik clip, tisu, karet, magnetik stirer, hot plate, beker glass, gelas ukur, erlenmeyer, pH meter, botol–botol kultur, autoklaf, hand sprayer, pipet ukur, aluminium foil, kertas label, dan rak kultur.
C. Cara Kerja Penelitian Rancangan Penelitian Penelitian ini menggunakan rancangan lingkungan RAL (Rancangan Acak Lengkap) yang disusun secara faktorial terdiri atas dua faktor perlakuan sebagai berikut : a. Faktor pertama yaitu konsentrasi BA dengan lima taraf konsentrasi, yaitu : B0 : Perlakuan tanpa BA B1 : Perlakuan dengan penambahan konsentrasi BA 0,5 ppm B2 : Perlakuan dengan penambahan konsentrasi BA 1,0 ppm B3 : Perlakuan dengan penambahan konsentrasi BA 2,0 ppm 24 12
B4 : Perlakuan dengan penambahan konsentrasi BA 3,0 ppm b. Faktor kedua yaitu konsentrasi NAA dengan lima taraf konsentrasi, yaitu : N0 : Perlakuan tanpa NAA N1 : Perlakuan dengan penambahan konsentrasi NAA 0,5 ppm N2 : Perlakuan dengan penambahan konsentrasi NAA 1,0 ppm N3 : Perlakuan dengan penambahan konsentrasi NAA 2,0 ppm N4 : Perlakuan dengan penambahan konsentrasi NAA 3,0 ppm Sehingga diperoleh 25 kombinasi perlakuan dan diulang sebanyak 3 kali.
Pelaksanaan Penelitian a. Sterilisasi botol dan alat Alat-alat yang harus disterilkan yaitu botol kultur, petridish, scalpel, pinset dan pisau pemes. Alat-alat tersebut dicuci sampai bersih kemudian dikeringkan. Setelah kering, alat-alat tersebut dibungkus dengan koran dan dimasukkan ke dalam autoklaf pada tekanan 1,5 kg/cm2 selama 45 menit. b. Pembuatan larutan stok Pembuatan larutan stok yaitu dengan menimbang bahan-bahan kimia, hara makro, hara mikro, maupun ZPT sesuai komposisi media WPM untuk dibuat larutan stok. Kemudian bahan-bahan tersebut dilarutkan dengan aquades dan diaduk sampai homogen dengan magnetic stirrer, kemudian dimasukkan dalam botol yang diberi label pada tiap botolnya sesuai dengan perlakuan dan disimpan dalam lemari pendingin. Komposisi media WPM secara lengkap disajikan dalam Lampiran 1. c. Penyiapan media Media yang akan digunakan adalah media WPM. Dalam pembuatan media, dibuat ¼ liter (250 ml), untuk 10 botol kultur. Pembuatannya dengan cara mencampurkan larutan stok dengan gula 25
7,5 g, kemudian dilarutkan dengan aquades sampai 250 ml. Larutan dikondisikan pada pH 5,7-6,3 dengan menambahkan NaOH untuk menaikkan pH dan HCl untuk menurunkan pH. Larutan ditambah agar-agar 2 g, lalu diaduk dengan magnetic stirrer hingga mendidih. Larutan dituangkan ke dalam botol kultur 25 ml/botol, kemudian ditutup dengan plastik PP. Media dimasukkan ke dalam autoklaf untuk disterilisasi dengan tekanan 1,5 psi selama 30 menit. Setelah selesai, botol diangkat dari autoklaf dan di tempatkan di ruang inkubasi agar media menjadi padat. Apabila media telah memadat, maka penanaman eksplan dapat dilakukan. d. Penambahan zat pengatur tumbuh BA dan NAA Penambahan zat pengatur tumbuh pada pembuatan media WPM dengan cara mencampurkan larutan stok dengan takaran tertentu dan ZPT yaitu BA dengan konsentrasi 0 ppm, 0,5 ppm, 1 ppm, 2 ppm dan 3 ppm serta penambahan NAA dengan konsentrasi 0 ppm, 0,5 ppm, 1 ppm, 2 ppm dan 3 ppm ke dalam labu takar kemudian menambahkan aquades hingga volume 250 ml. Larutan kemudian dipindahkan ke dalam beker glass, kemudian diaduk dengan menambahkan gula ke dalam larutan sebanyak 7,5 g, setelah homogen mengukur pH dengan pH meter hingga 5,7-6,3. Apabila pH terlalu rendah ditambahkan NaOH dan apabila pH terlalu tinggi ditambahkan HCl. Setelah pH sesuai, menambahkan agar sebanyak 2 g kemudian dipanasi hingga mendidih. Pembuatan zat pengatur tumbuh dengan konsentrasi tertentu disajikan secara lengkap dalam lampiran 2. e. Sterilisasi eksplan Bahan tanaman yang digunakan sebagai eksplan adalah buku tunggal (satu buku) bibit lengkeng dataran rendah. Eksplan dicuci dengan deterjen sampai bersih dan dibilas dengan air mengalir, kemudian direndam dalam campuran larutan Agrept dan Dithane selama 12 jam yang dikocok terus menerus di atas shaker kemudian
26
dibilas dengan aquades steril. Eksplan dibawa ke dalam LAFC dan satu per satu disterilisasi dalam larutan bayclin 80 % selama ± 1 menit. f. Penanaman eksplan Penanaman eksplan dilakukan di dalam Laminar Air Flow Cabinet (LAFC) yang telah dibersihkan terlebih dahulu dengan alkohol 70 % dan ruang LAFC disemprot spirtus. Penanaman diawali dengan mendekatkan mulut botol kultur dengan lampu bunsen. Selama penanaman mulut botol kultur harus berada dekat dengan lampu bunsen guna mencegah kontaminasi. Setelah penanaman selesai, botol ditutup dan diberi label perlakuan dan tanggal penanamannya. g. Pemeliharaan Pemeliharaan dilakukan untuk mengurangi resiko kontaminasi dengan cara menyemprotkan spirtus ke botol-botol kultur setiap 2 hari sekali serta mengeluarkan botol-botol kultur yang terkontaminasi dari rak tanam. h. Subkultur Subkultur dilakukan pada saat eksplan berumur 12 MST. Media subkultur yang digunakan yaitu media WPM dengan penambahan zat pengatur tumbuh BAP dengan konsentrasi 2 ppm.
D. Variabel Pengamatan a.
Kemunculan Kalus Pengamatan kalus dilakukan pada akhir penelitian (12 MST), dilakukan dengan mengamati secara visual terbentuk atau tidak terbentuknya kalus pada eksplan yang ditanam.
b.
Tekstur kalus Tekstur kalus diamati pada akhir penelitian (12 MST) dan ditentukan dengan sistem penilaian. Kategori penilaian tekstur adalah sebagai berikut: kalus tumbuh dengan tekstur kalus kompak, kalus tumbuh dengan
tekstur kalus sedang (intermediate), kalus tumbuh
dengan tekstur kalus remah (friable) (Turhan, 2004). 27
Kalus friable ditandai dengan adanya bagian-bagian penyusun kalus mudah dipisahkan satu sama lain, sedangkan kalus kompak menunjukkan bagian-bagian kalus yang menyatu, padat dan sulit dipisahkan. Untuk kalus dengan tekstur intermediate/sedang ditunjukkan oleh adanya bagian kalus yang bertekstur remah dan pada bagian yang lain bertekstur kompak/padat. c.
Warna kalus Pengamatan variabel warna kalus dilakukan pada akhir penelitian (12 MST), dilakukan dengan mengamati secara visual dengan sistem penilaian. Kategori penilaian warna kalus adalah: kalus tumbuh berwarna coklat, kalus tumbuh berwarna putih hingga kecoklatan, kalus tumbuh berwarna putih, dan kalus tumbuh berwarna hijau keputihan, hijau kekuningan hingga hijau tua.
d.
Ukuran kalus Pengamatan variabel ukuran kalus dilakukan pada akhir penelitian (12 MST) dan ditentukan dengan sistem penilaian. Kategori penilaian ukuran kalus adalah: kecil, sedang, agak besar, besar.
e.
Kemunculan tunas Kemunculan tunas diamati dengan melihat dan mendata macam kombinasi perlakuan yang bisa memunculkan tunas.
f.
Subkultur Subkultur diamati dengan melihat adanya perubahan yang terjadi pada eksplan setelah dilakukan subkultur. Pengamatan dilakukan pada saat 12 MST (setelah subkultur).
E. Analisis Data Data hasil penelitian untuk semua variabel penelitian dianalisis secara deskriptif.
28
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Kemunculan Kalus Kalus adalah suatu jaringan hidup hasil dari suatu pertumbuhan yang terdiri dari massa yang tidak teratur (Wetherel, 1982). Menurut Suryowinoto (2000) dalam budidaya in vitro atau budidaya (kultur) jaringan, menginduksi terbentuknya kalus merupakan salah satu langkah penting. Setelah itu diusahakan agar rangsangan terjadi deferensiasi, terjadi akar dan tunas. Zat pengatur tumbuh sangat diperlukan sebagai komponen media bagi pertumbuhan dan diferensiasi kalus. Tanpa penambahan zat pengatur tumbuh dalam media, pertumbuhan akan terhambat bahkan mungkin tidak tumbuh sama sekali. Pembentukan kalus dan organ-organ ditentukan oleh penggunaan yang tepat dari zat pengatur tumbuh tersebut (Sriyanti dan Wijayani, 1994). Jacobsen (1990) menyatakan bahwa konsentrasi hormon di dalam sel tergantung pada level hormon endogen, hormon eksogen dan keduanya dipengaruhi oleh proses penyerapan, translokasi dan pola metabolismenya. Tabel 1. Kemunculan kalus eksplan lengkeng dataran rendah (Dimocarpus longan Lour) karena pengaruh penambahan BA dan NAA pada media kultur WPM NAA (ppm) 0
0 -
0,5 v
BA (ppm) 1 v
0,5
v
v
v
-
v
1
v
v
v
v
v
2
v
v
v
v
v
3
v
v
v
v
v
Keterangan
2 v
3 v
: -) : tidak muncul kalus; v) : muncul kalus
Pada penelitian ini, kalus diperoleh dengan menanam eksplan dalam media WPM dengan zat pengatur tumbuh BA dan NAA. Kombinasi zat pengatur tumbuh demikian diharapkan untuk merangsang pembelahan sel, 29
17
pembesaran sel dan pertumbuhan kalus. Zat pengatur tumbuh dibutuhkan untuk menginduksi pembelahan sel (Kurz dan Costabel, 1991). Kalus akan terbentuk pada media yang mengandung konsentrasi auksin dan sitokinin dalam keadaan seimbang (Abidin, 1994). Hampir pada semua kombinasi perlakuan yang diberikan mampu memunculkan kalus (tabel 1), kalus yang terbentuk merupakan respon dari eksplan yang ditanam akibat adanya penambahan zat pengatur tumbuh, dalam hal ini yaitu BA dan NAA. Munculnya kalus ditandai dengan adanya tonjolan-tonjolan pada bagian permukaan eksplan, baik di pangkal, di tengah, maupun di ujung eksplan. Hanya pada perlakuan tanpa penambahan BA dan NAA (B0N0) dan perlakuan dengan penambahan BA 2 ppm dan NAA 0,5 ppm (B3N1) saja yang tidak mampu memunculkan kalus. Pada perlakuan tanpa penambahan BA dan NAA tidak muncul kalus diduga karena hormon endogen pada tanaman lengkeng belum mampu untuk menginduksi terbentuknya kalus. Menurut Sriyanti (2000) walaupun di dalam jaringan sudah terkandung zat pengatur tumbuh endogen yang disebut hormon, khususnya IAA, namun hormon eksogen perlu ditambahkan, karena kerja hormon endogen kurang efektif apabila tidak dilengkapi dengan hormon eksogen. Auksin umumnya ditambahkan ke dalam nutrisi media untuk menginduksi kalus dari eksplan (George dan Sherrington, 1984). Selain itu, sesuai dengan penelitian yang telah dilakukan Fitriani (2008), hal tersebut dapat pula diakibatkan karena auksin endogen dalam keadaan suboptimal untuk pembentukan kalus. Pada perlakuan penambahan BA 2 ppm dan NAA 0,5 ppm (B3N1) juga tidak memunculkan kalus, hal ini diduga karena konsentrasi sitokinin BA 2 ppm dan auksin 0,5 ppm yang ditambahkan tidak seimbang sehingga belum mampu memunculkan kalus. Hal ini sesuai dengan pernyataan Bhojwani dan Razdan (1983) cit. Anonim (2009) bahwa jika sitokinin dan auksin dalam jumlah yang seimbang akan mendorong pembentukan kalus. Menurut Stepan & Sarkissian (1990) morfogenesis jaringan yang dibudidayakan dipengaruhi oleh interaksi serta keseimbangan antara zat pengatur tumbuh yang 30
ditambahkan dari luar (eksogen) dan hormon tumbuh yang dihasilkan sel itu sendiri. Kalus dapat berdeferensiasi menjadi tunas, tunas yang terbentuk dari kalus merupakan tunas adventif. Tunas adventif akan terbentuk secara cepat dan dalam jumlah yang banyak. Namun, tunas ini dapat memiliki kelemahan karena ketidakstabilan genetik selnya. Kejadian ini mungkin terjadi karena: aberasi kromosom, mutasi gen, endoreduplikasi yang menghasilkan poliploidi, transposisi urutan DNA, amplifikasi gen, dan delegasi gen. ketidakstabilan kromosom ini selain faktor waktu, juga sangat tergantung pada komposisi media yang digunakan serta jenis tanamannya. Penggunaan zat pengatur tumbuh yang tidak hati-hati sangat memungkinkan terjadinya hal ini (Santoso dan Nursandi, 2004). Tunas lengkeng yang diharapkan yaitu tunas yang terbentuk dari selsel generatif. Tunas yang terbentuk merupakan tunas–tunas aksilar yang tumbuh pada ketiak eksplan pucuk akibat penekanan pertumbuhan tunas lateral. Menurut Bhojwani dan Razdan (1983) cit. Zulkarnain (2009) proliferasi tunas aksilar diperlukan dalam kultur jaringan karena sel-selnya bersifat seragam dan resisten terhadap perubahan-perubahan genotip. Tunas aksilar ini dapat dipacu dengan media yang mengandung sitokinin pada konsentrasi tepat, baik dengan atau tanpa auksin. Ditambahkan oleh Wattimena (2000) bahwa proliferasi tunas aksilar hanya memerlukan sitokinin dalam konsentrasi tinggi tanpa auksin atau auksin dalam konsentrasi yang rendah sekali.
B. Tekstur Kalus Tekstur kalus dapat dibedakan menjadi tiga, yaitu: kompak, intermediate dan remah (Turhan, 2004). Tekstur kalus merupakan salah satu penanda yang dipergunakan untuk menilai kualitas suatu kalus.
31
Kalus kompak Kalus remah
B4N2
B3N3
Kalus intermediate B1N3 Keterangan: B4N2 = penambahan BA 3 ppm + NAA 1 ppm, B3N3 = penambahan BA 2 ppm + NAA 2 ppm, dan B1N3 = penambahan BA 0,5 ppm + NAA 2 ppm. Gambar 1.
Tekstur kalus eksplan lengkeng dataran rendah (Dimocarpus longan Lour) yang terbentuk karena pengaruh penambahan BA dan NAA pada media kultur WPM
Tabel 2. Tekstur kalus eksplan lengkeng dataran rendah (Dimocarpus longan Lour) yang terbentuk karena pengaruh penambahan BA dan NAA pada media kultur WPM NAA (ppm) 0
0 -
0,5 intermediate
BA (ppm) 1 remah
0,5
kompak
intermediate
kompak
1
kompak
kompak
2
kompak
intermediate
kompak
remah
intermediate
3
intermediate
kompak
kompak
intermediate
kompak
Keterangan
2 kompak
3 kompak
-
kompak
intermediate intermediate
: -) : tidak muncul kalus 32
kompak
Secara visual, kalus yang terbentuk pada eksplan Dimocarpus longan Lour sebagian besar bertekstur kompak, ikatan antar selnya tampak kuat. Kalus yang kompak juga mempunyai tekstur yang sulit untuk dipisahkan dan terlihat padat. Beberapa kalus mengalami pembentukan lignifikasi sehingga kalus tersebut mempunyai tekstur yang keras dan kompak. Menurut Wiedenfeld (1997), struktur kalus yang kompak dan terjadi perubahan warna kekuningan atau kehijauan, mengindikasikan terjadinya diferensiasi sel. Laju pertumbuhan juga dipengaruhi oleh kemampuan jaringan untuk menyerap zat-zat hara yang tersedia, hal ini banyak dipengaruhi oleh aerasi dan tekstur kalus. Kalus yang terlalu padat dan kompak mempunyai kemampuan menyerap zat hara lebih rendah daripada tekstur kalus yang tidak terlalu padat.
C. Warna Kalus Salah satu variabel yang penting untuk diteliti yaitu warna kalus. Berdasarkan pengamatan warna kalus dapat diketahui kondisi kesehatan kultur. Warna kalus merupakan salah satu variabel yang cukup sering diamati dalam berbagai percobaan atau penelitian yang berkaitan dengan induksi kalus. Berdasarkan warna kalus juga dapat diketahui apakah suatu kalus masih memiliki sel-sel yang aktif membelah atau masih hidup ataukah telah mati. Biasanya pertumbuhan yang cepat dan warna kalus yang cenderung terang mengindikasikan bahwa kondisi kesehatan kultur tersebut cukup baik. Sedangkan warna coklat hingga hitam secara umum menunjukkan keadaan kalus yang sel-selnya telah mati. Kalus akan menunjukkan warna kuning bening dan akan berubah menjadi kecoklatan seiring dengan pertumbuhan kalus yang semakin tua (Abdullah et al., 1998).
33
Kekuningan
Putih
hijau
B1N2
B2N0
Coklat
Kecoklatan
B4N3
B4N1
Keterangan:
B1N2= penambahan BA 0,5 ppm dan NAA 1 ppm, B2N0= hanya dengan penambahan BA 1 ppm, B4N3= penambahan BA 3 ppm dan NAA 2 ppm, dan B4N1= penambahan BA 3 ppm dan NAA 0,5 ppm
Gambar 2. Warna kalus eksplan lengkeng dataran rendah (Dimocarpus longan Lour) yang terbentuk karena pengaruh penambahan BA dan NAA pada media kultur WPM Tabel 3. Warna kalus eksplan lengkeng dataran rendah (Dimocarpus longan Lour) yang terbentuk karena pengaruh penambahan BA dan NAA pada media kultur WPM NAA (ppm) 0
0 -
0,5 1
kecoklatan coklat, hijau
2
coklat
3
coklat, putih
0,5 coklat, kekuningan coklat, putih coklat, kekuningan, hijau kecoklatan, kekuningan coklat, kecoklatan
Keterangan : -) : tidak muncul kalus 34
BA (ppm) 1 kecoklatan, putih coklat coklat
coklat coklat
2 coklat
3 coklat
coklat, kecoklatan, putih, hijau putih, kecoklatan kecoklatan, kekuningan
coklat kecoklatan
kecoklatan coklat
Hasil penelitian menunjukkan bahwa warna yang terlihat pada kaluskalus tanaman lengkeng dataran memiliki rentang mulai dari coklat hingga hijau. Warna kalus dapat bermacam-macam tergantung dari jenis sumber eksplan itu diambil, seperti warna kekuning-kuningan, putih, hijau, atau kuning kejingga-jinggaan (Luri, 2009). Pada perlakuan penambahan 1 ppm NAA saja, maupun yang dikombinasikan masing-masing dengan BA 0,5 ppm dan BA 2 ppm (B0N2, B1N2, dan B3N2) terdapat warna kalus hijau. Hal ini berarti kalus yang terbentuk masih dalam keadaan baik. Pada perlakuan penambahan 1 ppm NAA yang dikombinasikan masing-masing dengan BA 0,5 ppm dan BA 2 ppm (B1N2, dan B3N2) terdapat tonjolan hijau, diduga sebagai awal terbentuknya tunas, hal ini dimungkinkan karena kombinasi konsentrasi BA dan NAA telah sesuai kebutuhan eksplan. Warna hijau pada kalus merupakan klorofil yang diduga terbentuk akibat pengaruh sitokinin yang ditambahkan pada media, yaitu berasal dari air kelapa sebagaimana diungkapkan Santoso dan Nursandi (2004), sitokinin dapat mendorong pembentukan klorofil. Kalus yang berwarna kuning bening merupakan kalus yang belum mengalami penuaan. Proses penuaan pada kalus seharusnya dihambat oleh BA yang diberikan dalam media. Tetapi dari hasil penelitian diperoleh hasil bahwa sebagian besar kalus berwarna coklat, hal ini berlawanan dengan pernyataan bahwa benziladenin (BA) merupakan salah satu jenis sitokinin yang
berperan
dalam
memperlambat
proses
senesensi
sel
dengan
menghambat perombakan butir-butir klorofil dan protein dalam sel (Wattimena, 1988). Hal ini dapat disebabkan karena, selain akibat proses penuaan, warna coklat pada kalus juga dapat disebabkan karena adanya sintesis senyawa fenol dalam kalus. Seperti yang juga telah dijelaskan oleh Leon, et al. (2001), pada saat terjadi perlukaan, tumbuhan akan segera memproduksi jenis oksigen reaktif (reactive oksigen species), termasuk di dalamnya anion superoksida pada jaringan yang rusak, dan hidrogen peroksida pada skala lokal maupun sistemik. Produksi maksimal superoksida akan terjadi beberapa menit pasca 35
perlukaan, sedangkan hidrogen peroksida akan diproduksi maksimal setelah 4–6 jam. Hidrogen peroksida diketahui sebagai respon adanya sistemin. Adapun sistemin berpotensi menyebabkan terjadinya ledakan proses oksidasi (oxydative burst). Jadi wajar jika terjadi pencoklatan secara cepat pada awal pertumbuhan kalus maupun sel.
D. Ukuran kalus Ukuran kalus merupakan salah satu variabel yang cukup penting untuk diamati. Ukuran kalus yang terbentuk dapat dipergunakan untuk mengetahui apakah konsentrasi auksin eksogen yang ditambahkan tersebut efektif atau tidak dalam menstimulasi pembelahan sel-sel pada eskplan (Dwiyono, 2009). Kombinasi antara BA dan NAA yang diberikan pada media akan memacu pembesaran sel apabila komposisinya sesuai. Sebagaimana pernyataan bahwa komposisi media dengan menggunakan kombinasi ZPT dari golongan auksin dan sitokinin dalam jumlah yang seimbang dapat menginisiasi pembesaran sel (Marlina, 2009). Ukuran kalus menunjukkan banyaknya sel amorphous yang terbentuk dari sel-sel jaringan awal yang membelah diri secara terus-menerus. Semakin besar ukuran kalus menunjukkan semakin tinggi aktifitas dan jumlah sel-sel jaringan awal yang membelah diri. Ukuran kalus pada tiap perlakuan yang diberikan memunculkan hasil yang berbeda-beda. Hal ini diduga karena masing-masing kalus memiliki kepekaan dan daya serap terhadap media yang berbeda serta adanya pengaruh dari zat pengatur tumbuh yang diberikan (Trimulyono, et al., 2004). Sebagaimana pula pernyataan bahwa kemampuan jaringan dalam menyimpan air dan unsur hara berbeda-beda (dalam hal ini meliputi kemampuan mengadakan difusi, osmosis dan pengaturan tekanan turgor sel) (Sriyanti, 2000).
36
B2N3
B0N4 Ukuran kalus kecil
Ukuran kalus Sedang
B4N3
B4N2
Ukuran kalus agak besar
Ukuran kalus besar
Keterangan: B2N3 = penambahan BA 1 ppm dan NAA 2 ppm, B0N4 = tanpa penambahan BA dan dengan penambahan NAA 3 ppm, B4N3 = penambahan BA 3 ppm dan NAA 2 ppm, dan B4N2 = penambahan BA 3 ppm dan NAA 1 ppm.
Gambar 3. Ukuran kalus eksplan lengkeng dataran rendah (Dimocarpus longan Lour) yang terbentuk karena pengaruh penambahan BA dan NAA pada media kultur WPM
37
Tabel 4. Ukuran kalus eksplan lengkeng dataran rendah (Dimocarpus longan Lour) yang terbentuk karena pengaruh penambahan BA dan NAA pada media kultur WPM NAA (ppm) 0
0 -
0,5 besar
BA (ppm) 1 sedang
0,5
agak besar
besar
kecil
-
sedang
1
agak besar
besar
sedang
besar
besar
2
agak besar
besar
kecil
sedang
sedang
3
agak besar
besar
sedang
besar
kecil
Keterangan
2 besar
3 agar besar
: -) : tidak muncul kalus
Pada kultur jaringan, morfogenesis dari eksplan selalu tergantung dari interaksi dari auksin dan sitokinin (Wattimena et al, 1992). Apabila interaksi antara sitokinin dan auksin yang diberikan sudah sesuai dengan kebutuhan eksplan maka proses pembelahan yang terjadi akan semakin cepat, hal ini tentu saja akan meningkatkan pertambahan ukuran kalus. Proses ini juga sangat dipengaruhi oleh zat pengatur tumbuh eksogen yang diberikan, dalam hal ini BA dan NAA. Menurut Wattimena, et al. (1992) eksplan merupakan jaringan atau sel tanaman yang diisolasi dari tanaman, apabila dikulturkan memerlukan auksin dan sitokinin eksogen untuk tumbuh dan berkembang. Berdasarkan tabel 4 dapat diketahui bahwa respon eksplan satu sama lain berbeda-beda, tidak sejalan dengan penurunan atau peningkatan konsentrasi BA maupun NAA. Respon masing-masing eksplan yang menunjukkan perbedaan, diduga disebabkan oleh kondisi biologis eksplan yang berbeda walau secara fisik sudah relatif diseragamkan. Bagian eksplan yang terinisiasi membentuk kalus, disebabkan sel-sel yang kontak dengan media terdorong menjadi meristematik dan selanjutnya aktif mengadakan pembelahan seperti jaringan penutup luka. Waering dan Philips (1981) dikutip Marlin (2005) menyatakan bahwa kebutuhan nutrisi dan zat pengatur tumbuh untuk memacu proses morfogenesis pada kultur in vitro akan berbeda untuk setiap jenis tanaman dan eksplan yang digunakan. 38
Pada perlakuan pemberian BA dengan konsentrasi 3 ppm dan NAA dengan konsentrasi 3 ppm (B4N4) dihasilkan kalus yang berukuran kecil. Hal ini diduga karena konsentrasi auksin, dalam hal ini NAA yang diberikan terlalu tinggi. Hendaryono dan Wijayani (1994) menyatakan bahwa pada kadar yang tinggi, auksin lebih bersifat menghambat daripada merangsang pertumbuhan. Wijono dalam Prahardini dan Sudaryono (1992) membuktikan bahwa penambahan 3 mg/l NAA dan 2 mg/l BA efektif untuk induksi kalus pepaya. Pada semua perlakuan penambahan BA dengan 0,5 ppm yang dikombinasikan dengan masing-masing konsentrasi NAA diperoleh hasil ukuran kalus yang besar. Hal ini juga terjadi pada perlakuan penambahan BA 2 ppm saja (B3N0), penambahan BA 2 ppm dan NAA 1 ppm (B3N2), penambahan BA 2 ppm dan NAA 3 ppm (B3N4), dan penambahan BA 3 ppm dan NAA 1 ppm (B4N2). Hal ini diduga karena terjadi keseimbangan antara BA dan NAA dalam proses pembentukan kalus. Hal ini karena adanya NAA yang berperan dalam pembesaran dan pemanjangan sel (peningkatan ukuran sel) dan BA yang berperan dalam pembelahan sel (peningkatan jumlah sel). Menurut Jona dan Menini (1987) dalam Gerungan dan Sumardi (1995), jika kandungan hormon dalam media berimbang atau sesuai dengan kebutuhan eksplan maka jaringan meristem atau parenkim akan membelah terus menerus menghasilkan kalus. Dari hasil pengamatan juga ditemukan adanya pencoklatan (browning). Pencoklatan ini dikarenakan terjadinya akumulasi senyawa fenol yang dapat menghambat peningkatan ukuran kalus. Menurut Wattimena (2000), senyawa-senyawa fenol dapat menghambat pembelahan sel, pembesaran sel dan pertumbuhan.
E. Kemunculan Tunas Terbentuknya tunas merupakan salah satu hal penting pada kultur jaringan tanaman. Keberhasilan regenerasi eksplan yang diinokulasi pada media kultur dapat ditunjukkan oleh adanya pembentukan tunas. Tunas 39
berfungsi untuk melangsungkan keturunan pada tanaman, karena tunas dapat menjadi sarana dalam pembentukan energi dari proses yang berlangsung pada daun. Keberhasilan pembentukan tunas adventif tergantung dari genotip eksplan, suplai nutrien dalam media kultur, zat pengatur tumbuh, kondisi fisik media, dan tingkat perkembangan eksplan. Pada penelitian ini digunakan media WPM yang diberi zat pengatur tumbuh BA dan NAA. Hal ini diharapkan agar dapat merangsang pembentukan tunas pada eksplan lengkeng dataran rendah yang ditanam. Sesuai yang telah dilakukan oleh Wakasa, et al. (1978) yaitu pada penggunakan kombinasi BA dan NAA untuk regenerasi tanaman nenas dengan menggunakan eksplan tunas samping. Kalus yang dihasilkan dari tanaman lengkeng dataran rendah pada penelitian ini tidak menunjukkan adanya pembentukan tunas pada semua kombinasi perlakuan. Komposisi dan keseimbangan konsentrasi zat pengatur tumbuh dalam hal ini auksin dan sitokinin, berperan dalam mengarahkan eksplan membentuk kalus. Namun kemampuan multiplikasi pada setiap jenis tanaman sangat bervariasi, terutama pada tanaman berkayu. Pada tabat barito (Kristina, 2009), dilakukan subkultur kembali pada media yang sama untuk mendapatkan data terbaik. Ternyata daya multiplikasi tunas, baik pada media MS + BA 1,0 mg/l + NAA 0,1 mg/l ataupun MS + BA 1,0 mg/l + NAA 0,5 mg/l memperlihatkan hasil yang sama baik. Tidak terbentuknya tunas diduga karena adanya penambahan zat pengatur tumbuh auksin dan sitokinin dengan perbandingan yang tidak sesuai dengan kebutuhan eksplan dalam pembentukan tunas. Abidin (1994) menyebutkan bahwa auksin dan sitokinin pada perbandingan tertentu, akan menghasilkan pertumbuhan yang berbeda. Pada tanaman Ceropegia bulbosa (Asclepediaceae) komposisi BA 3 mg/l ditambahkan NAA dengan konsentrasi rendah yakni 0,05 mg/l mampu membentuk tunas 10/eksplan tanpa kalus (Britto et al., 2003). Seperti diketahui, bahwa pembentukan tunas atau akar saja atau keduaduanya secara bersama-sama akan terjadi apabila terdapat auksin serta 40
sitokinin dalam nisbah tertentu. Nisbah auksin dan sitokinin yang rendah, cenderung akan mendorong pertumbuhan tunas dan daun. Sebaliknya, apabila nisbah auksin dan sitokinin tinggi, maka akan menumbuhkan akar, sedangkan nisbah auksin dan sitokinin yang seimbang akan mendukung bagi pertumbuhan tunas/daun dan akar yang berimbang pula (Abidin, 1989; Skoog dan Miller cit. Yusnita, 2003). Keberhasilan organogenesis juga dipengaruhi oleh keseimbangan antara auksin dan sitokinin baik di dalam maupun di luar jaringan (Thorpe l980 dalam Thorpe dan Patel, l984). Pada tanaman pasak bumi (E. longifolia Jack.), kombinasi sitokinin dan auksin pada media MS dapat memacu proliferasi tunas dari eksplan pucuk dan jaringan kotiledon. Komposisi untuk masing-masing jaringan berbeda, yaitu MS + 1,5 mg/l BA + 0,25 mg/l NAA; sementara untuk eksplan dari jaringan kotiledon menggunakan media MS + 0,75 mg/l BA + 0,05 mg/l NAA (Siregar, 2007). Perlakuan penggunaan BAP 0.5 ppm tanpa IBA pada media WPM merupakan konsentrasi yang paling optimal dalam pembentukan jumlah tunas terbanyak 3 buah dan panjang tunas tertinggi 8 mm (Widyarso, 2010). Setiap genotipa atau jaringan mempunyai respon yang berbeda dalam penyerapan zat pengatur tumbuh dalam medium dan memiliki kandungan zat pengatur tumbuh endogen yang berbeda. Sebagaimana diungkapkan oleh Soepardi (1983), respon tanaman yang optimal akan dicapai bila unsur-unsur hara tersebut dalam keadaan seimbang. Oleh karena itu kadangkala hanya dibutuhkan auksin, sitokinin secara sendiri-sendiri atau campuran auksin dan sitokinin (Oktavia et al., 2003). Umumnya penambahan BA menyebabkan kalus akan tumbuh mengarah menjadi tunas bila konsentrasi sitokinin endogen di dalam jaringan tanaman lebih tinggi dibandingkan konsentrasi auksin (Kristina, 2009). Daisy dan Wijayani (1994), kadar auksin yang tinggi lebih bersifat menghambat daripada merangsang pertumbuhan. Komposisi auksin dan sitokinin dalam media kultur in vitro mempunyai peranan penting dalam induksi dan regenerasi kalus menjadi tunas. Interaksi antara sitokinin dan auksin merupakan hal yang sangat penting dalam mengatur proses 41
pertumbuhan dan perkembangan dalam kultur in vitro. Perbandingan antara sitokinin dan auksin yang akan menentukan apakah kalus akan beregenerasi membentuk tunas, akar atau tunas dan akar. Konsentrasi zat pengatur tumbuh auksin atau sitokinin untuk pertumbuhan tunas pada setiap tanaman tidak selalu sama. Jenis dan konsentrasi zat pengatur tumbuh untuk memacu pertumbuhan tunas tergantung beberapa faktor, antara lain jenis tanaman, jaringan atau organ yang digunakan, keadaan fisiologi eksplan, serta kandungan sitokinin dan auksin endogen di dalam jaringan (Lestari dan Purnamaningsih, 2001). Regenerasi tunas dari eksplan kalus merupakan proses yang kompleks, karena dipengaruhi oleh banyak faktor, diantaranya faktor genotipe, tipe eksplan dan keseimbangan zat pengatur tumbuh, dalam hal ini auksin dan sitokinin serta kondisi fisiologi kalus. F. Subkultur Pada penelitian ini dalam upaya merangsang pembentukan tunas maka dilakukan subkultur beberapa eksplan lengkeng pada media WPM dengan penambahan BAP 2 ppm. Subkultur adalah proses pemindahan eksplan dari media lama ke media baru. Menurut Pennel (1987) faktor multiplikasi dari satu eksplan sangat ditentukan oleh media kultur, jenis tanaman, dan frekuensi subkultur. Beberapa spesies menunjukkan peningkatan keragaman dengan bertambahnya subkultur (Yang et al., 2000).
a Gambar 4.
b Respon eksplan pada perlakuan penambahan NAA 1 ppm sebelum di lakukan subkultur (a), respon eksplan setelah dilakukan subkultur dengan penambahan BAP 2 ppm (b) 42
b
a Gambar 5.
Respon eksplan pada perlakuan penambahan BA 2 ppm dan NAA 1 ppm sebelum di lakukan subkultur (a), respon eksplan setelah dilakukan subkultur dengan penambahan BAP 2 ppm (b)
Pada hasil penelitian, subkultur yang dilakukan terlihat dapat meningkatkan laju pertumbuhan jaringan pada tanaman lengkeng. Hal ini ditunjukkan dengan terbentuknya tunas. Pada media subkultur tersebut, BAP 2 ppm dapat memacu terbentuknya tunas yang berasal dari satu mata tunas eksplan lengkeng. Zat pengatur tumbuh tersebut telah banyak digunakan pada berbagai spesies tanaman karena dapat meningkatkan multiplikasi tunas secara langsung maupun tidak langsung.
43
V. KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan 1. Eksplan lengkeng dataran rendah Dimocarpus longan Lour hanya mampu menghasilkan kalus. 2. Kombinasi perlakuan penambahan BA dengan konsentrasi 2 ppm dan NAA dengan konsentrasi 1 ppm memberikan hasil terbaik pada tekstur kalus intermediate, warna kalus hijau, dan ukuran kalus besar. 3. Perlakuan subkultur pada media WPM dengan penambahan zat pengatur tumbuh BAP 2 ppm mampu merangsang pembentukan tunas lengkeng dataran rendah Dimocarpus longan Lour.
B. Saran Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan perbandingan konsentrasi BA lebih tinggi dibanding dengan konsentrasi NAA.
44
DAFTAR PUSTAKA
Abidin, Z. 1994. Dasar-Dasar Pengetahuan Tentang Zat Pengatur Tumbuh. Penerbit Angkasa. Bandung. Abdullah, M.A., M. Ali, N.H. Marziah, dan A.B. Arrif. 1998. Establisment of Cell Suspension Cultures of Morinda elliptica for The Production of Anthraquinoes. Plant Cell Tissue and Organ Culture. 54: 173-182. Anonim. 2007. Inovasi Memperbanyak Bibit Tanaman. www.sinarharapan.co.id. Diakses tanggal 15 Oktober 2009. ________. 2003. Perbanyakan Bibit Jati melalui Kultur Jaringan. Balai Penelitian Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian _______. 2009. Kelengkeng (Longan (Ingg.), Euphoria longana (latin)). www.situshijau.co.id. Diakses tanggal 15 Oktober 2009. Amien, S., M. Ariyanti, M. Arief, dan D. Kurniawan. 2007. Induksi Kalus dari Daun Nilam Kultivar Lhoksemauwe, Sidikalang, dan Tapaktuan dengan 2,4-D. Zuriat. Vol. 18, No. 2. Baroto, A. L. 2009. Berkebun Tanaman Lengkeng Dataran Rendah. http://buahlengkeng.nusaadv.com. Diakses pada tanggal 7 Februari 2010. ________. 2009. Sekilas Lengkeng. http://buahlengkeng.nusaadv.com. Diakses pada tanggal 7 Februari 2010. Britto, S.J., E. Natajaran, And D.I. Arockiasamy. 2003. In Vitro Flowering and Multiplication from Nodal Explants of Ceropegia bulbosa Roxb. Var Ulbosa. Taiwania. 48 (2): 106 – 111. Daisy P., dan A. Wijayani. 1994. Teknik Kultur Jaringan. Kanisius. Yogyakarta. Dwiyono, E. 2009. Induksi Kalus Tanaman Mahkota Dewa (Phaleria Macrocarpa (Scheff.) Boerl.) dengan Perlakuan Kondisi Gelap dan 2,4D. Skripsi S1 Fakultas Pertanian UNS. Surakarta. Erwin, L. 2009. Macam-Macam Media Kultur Jaringan. vedcablog.blogspot.com. Diakses pada tanggal 26 Oktober 2009. Gaspar, T., C. Kevers, C. Penel, H. Greppin, D.M. Reid, and T.A. Thorpe. 1996. Plant Hormones and Plant Growth Regulators in Plant Tissue Culture. In Vitro Cell Dev. Biol.Plant 32: 272-289. 45 33
George, E. F., M. A. Hall, and G. J. De klerk. 2007. Plant Propagation by Tissue Culture. 3rd Edition. Vol 1. The Background. Springer, The Netherland. Gerungan, R.F.I, dan I. Sumardi. 1995. Organogenesis Padi (Oryza sativa L.) melalui Budidaya secara in Vitro. Berkala Penelitian Pasca Sarjana 8 (2B): 247-259. Hendaryono, D. P. S. dan A. Wijayanti. 1994. Teknik Kultur Jaringan. Kanisius. Yogyakarta. Jacobsen, H.J. 1990. Biochemical Mechanism of Plant Hormone Activity. In Handbook of Plant Cell Culture. Editors P.V. Ammirato, D.R. Evans, W.R. Sharp, Y.P.S. Bajaj (Ed). McGraw-Hill, Inc. NY. p. 112. Kristina, N. N. 2009. Induksi Tunas Tabat Barito (Ficus Deltoidea Jack) secara In Vitro Menggunakan Benzil Adenin (BA) dan Naphthalene Acetic Acid (NAA). Jurnal Littri 15(1). __________dan N. Bermawie, 1999. Pengaruh Subkultur dan Lama Periode Kultur pada Daya Multiplikasi Tunas Lada (Piper nigrum) Asal Biji Varietas Petaling 1. Jurnal Littri., 5 (3). Kurz, W.G.W. dan. F. Constabel 1991. Produksi dan Isolasi Metabolit Sekunder. Dalam Wetter, L.R dan F. Constabel (ed). Metode Kultur Jaringan Tanaman. Penerjemah: Widianto dan B. Mathilda. Penerbit ITB. Bandung. Kyte, L., and J. Kleyn. 1996. Plant from Test Tubes An Introduction to Micropropagation. Timber Press, Inc. Portland. Leon, J., E. Rojo, dan J.J. Sanchez-Serano, 2001. Wound Signalling in Plants. Journal of Experimental Botany 52 (34): 1 – 9 Lestari E. G. dan R. Purnamaningsih. 2001. Mikropropagasi Gynura pseudochina. Biosmart . Vol. 3, No. 2, hal. 18-22. Luri, S. 2009. Kultur Kalus. http:// kultur-jaringan.blogspot.com. Mariana, B. D. dan S. Agus. 2008. Sebaran Lengkeng Dataran Rendah di Indonesia. Balai Penelitian Tanaman jeruk dan Buah Subtropika. Mariska, I., E. Gati dan D. Sukmadjaya. 1987. Kultur Masa Tunas Dan Tangkai Daun Pada Tanaman Geranium secara in Vitro. Pembr. Littri: XIII(12):41-45. Mariska, I., dan R. Purnamaningsih. 2001. Perbanyakan Vegetatif Tanaman Tahunan melalui Kultur in Vitro. J. Litbang Pertanian. 20 (1). 46
Marlin. 2005. Regenerasi in Vitro Planlet Jahe Bebas Penyakit Layu Bakteri pada Beberapa Taraf Konsentrasi BAP dan NAA. Jurnal Ilmu-ilmu Pertanian Indonesia Vol. 7 No. 1. Bengkulu. Hal. 8−14. Marlina, N. 2009. Teknik Perbanyakan Lili dengan Kultur Jaringan. Buletin Teknik Pertanian Vol. 14 No. 1: 6-8. Mulyana, C. 2009. Budidaya Lengkeng Dimulai. www:jurnalbogor.com. Diakses pada tanggal 7 Februari 2010. Murashige, T. 1974. Plant Propogation through Tissue Culture. Ann. Rev. Plant Physiology. Nurwardani, P. 2008. Teknik Pembibitan Tanaman dan Produksi Benih Jilid 2. Direktorat Pembinaan Sekolah Menengah Kejuruan, Direktorat Jenderal Manajemen Pendidikan Dasar dan Menengah, Departemen Pendidikan Nasional. Jakarta. Oktavia, F., Siswanto, M. A. Budiani, dan Sudarsono. 2003. Embriogenesis Somatic Langsung dan Regenerasi Planlet Kopi Arabika (Coffe arabica) dari Berbagai Eksplan. Menara Perkebunan 71(2): 44-45 Pennel, D. 1987. Micropropagation in Horticulture. Grower Books, London. 125p. Prahardini, P.E.R dan T. Sudaryono. 1992. Pengaruh Kombinasi Asam Neftalen Asetat dan Benzyladenin terhadap Kultur Pepaya Kultivar Dampit secara in Vitro. J.Hort. 2(4) : 6-11 Rahardja dan W. Wiryanta. 2003. Aneka Cara memperbanyak Tanaman. Agromedia Pustaka. Jakarta. Rahman, M.M., M.N. Amin, T. Ahamed, M.B. Ahmed, dan M.R. Ali. 2005. In Vitro Rapid Propagation of Black Thorn (Kaempferia Galanga L.) : A Rare Medicinal and Aromatic Plant of Bangladesh. Journal of Biological Sciences, 5(3): 300-304. Rasidi, A. Lengkeng. www.mail-archive.com. Diakses tanggal 28 Oktober 2009. Rukmana, R. 2003. Prospek Agrobisnis dan Teknik Budidaya Lengkeng. Kanisius. Yogyakarta. Santoso, U. dan F. Nursandi. 2004. Kultur Jaringan Tanaman. Universitas Muhammadiyah Malang Press. Malang. Simatupang, S. 1991. Pengaruh Konsentrasi Benzil Amino Purine dan Lama Penggelapan terhadap Pertumbuhan Stek Kentang in Vitro. J. Hortikultura. Vol 1 (2): 38-44 47
Siregar, L.A.M. 2007. Organogenesis Pucuk Mikro Eurycoma longifolia Jack. Prosiding Seminar Nasional dan Pameran Perkembangan Teknologi Tanaman Obat dan Aromatik. Bogor. Soepardi, G. 1983. Sifat dan Ciri Tanah. IPB. Bogor. Sriyanti, D.P. 2000. Pelestarian Tanaman Nilam (Pogostemon heyneanus Benth.) melalui Kultur Mikrostek. Biosmart 2 (2): 19-22. Sriyanti, D. P. dan A. Wijayani. 1994. Teknik Kultur Jaringan. Kanisius. Yogyakarta. Street, H. E. 1973. Plant Tissue and Cell Culture. University of California Press. Berkeley. Sunanto, H. 1990. Budidaya Lengkeng dan Aspek Ekonominya. Kanisius. Yogyakarta. Suryowinoto, M. 2000. Pemuliaan Tanaman secara in Vitro. Kanisius Yogyakarta. Thorpe, T.A. dan K.R. Patel. l984. Clonal Propagation Adventious Buds. in I.K. Vasil (Ed.) Cell Culture and Somatic Cell Genetic of Plants Vol I. Laboratory Practical and Their Aplication. Academic Press Inc. London. Tim plasmanutfah Balitjestro. 2009. Diamond River. Balai Penelitian Tanaman jeruk dan Buah Subtropika. Trimulyono, G., Solichatun, dan S. D. Marliana. 2004. Perlakuan NAA dan Kinetin terhadap Kalus dan Minyak Atsiri Pogostemon cablin. Biofarmasi Vol. 2, No. 1, hal. 9-14. Usman, M. 2004. Sukses Membuahkan Lengkeng dalam Pot. Agromedia Pustaka. Jakarta Wakasa, K., K. Yoshiaki, dan K. Masaaki. 1978. Differentiation from in Vitro Cultures of Ananas comosus. Dalam: P. C. Deberg and R. H. Zimmerman (Editors). Micropropagation, Technology and Application. Kluwer Academic Publishers. Dordrecht. The Netherlands. Wattimena, G.A. 1988. Zat Pengatur Tumbuh Tanaman. Pusat Antar Universitas Institut Pertanian Bogor. Wattimena, G. A. 2000. Penggunaan Pengatur Tumbuh Tumbuhan pada Perbanyakan Propagul Tanaman. PAU. IPB. Bogor.
48
___________., L.W. Gunawan, M.A. Mattjik, E. Syamsudin, N.M.A. Wiendi, dan A. Ernawati. 1992. Bioteknologi Tanaman. Pusat Antar Universitas Bioteknologi. Bogor. Wetherell, D. F. 1982. Pengantar Propagasi Tanaman secara in Vitro. Avery Publishing Group, Inc., New Jersey. Wetter, L. R. dan F. Constabel. 1991. Metode Kultur Jaringan Tanaman. ITB Press. Bandung. Widyarso, M. 2010. Kajian Penggunaan BAP dan IBA untuk Merangsang Pembentukan Tunas Lengkeng (Dimocarpus Longan Lour) Varietas Pingpong secara in Vitro. Skripsi S1 Fakultas Pertanian UNS. Surakarta Yang, J.L., Y.L. Gui and Z.C. Guo. 2000. Studies on Defferentiation Potential and Chromosome Stability of Embryogenic Callus in Sub Cultures of Picea meyeri Rehd et Wils. Acta Bot Boreal Occident Sin. 20:44-47. Yusnita. 2004. Kultur jaringan Cara Memperbanyak Tanaman secara Efisien. Agro Media Pustaka. Jakarta. Zulkarnain. 2009. Kultur Jaringan Tanaman. Bumi Aksara. Jakarta.
49
