Jurnal Ilmu dan Kesehatan Hewan, Pebruari 2014
Vol 2 No 1: 49-59
Sensitifitas dan Spesifisitas Teknik Imunohistokimia Rabies The Sensitivity and Spesificity of Rabies Immunohistochemical Technique I Ketut Wirata1*, I Ketut Berata2, I Ketut Puja2 1 Balai Besar Veteriner Denpasar Jl Raya Sesetan Denpasar 2 Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana Jl. PB Sudirmn, Denpasar *Corresponding author email:
[email protected] ABSTRACT Fluorescent Antibody Test (FAT) is a golden standard for rabies diagnosis, but it requires many sample preconditions before testing. Immunohistochemical technique (IHC) has the same principle as the FAT, however, it is more simple. This study was conducted to examine the sensitivity and specificity of IHC compare to FAT. The sensitivity and specificity were calculated using the formula of 2 x 2 contingency table and statistical analysis of the chi-square. Out of 40 samples that rabies positive on FAT, 27 samples (67.5%) showed rabies positive on IHC and 13 samples (32.5%) showed rabies negative on IHC. All samples that rabies negative on FAT were also rabies negative on IHC. The IHC has the sensitivity and specificity level 67.5% and 100% respectively. The IHC has a lower sensitivity than FAT, however, IHC has many advantages such as it can be performed on formalin fixed-samples. A further research is necessary to improve the sensitivity of IHC on detecting the rabies. Key words: rabies, dog, sensitivitas, FAT, IHC ABSTRAK Flourescent Antibody Test (FAT) adalah baku emas untuk diagnosa rabies, tetapi FAT membutuhkan beberapa persyaratan sampel sebelum pengujian. Teknik imunohistokimia (IHC) memiliki prinsip sama dengan FAT, namun teknik ini lebih sederhana. Penelitian ini dilakukan untuk menganalisis sensitifitas dan spesifisitas IHC dibandingkan dengan FAT. Sensitifitas dan spesifisitas dihitung menggunakan rumus Tabel 2 x 2 dan analisa statistik dengan chi-square. Dari 40 sampel yang positif rabies pada FAT, 27 sampel (67,5%) menunjukkan positif rabies pada IHC dan 13 sampel (32,5%) menunjukkan negatif rabies pada IHC. Seluruh sampel yang negatif rabies pada FAT juga menunjukkan negatif rabies pada IHC. IHC memiliki tingkat sensitifitas dan spesifisitas berturut-turut sebesar 67,5% dan 100%. Meskipun IHC memiliki sensitifitas yang lebih rendah dari FAT, IHC mempunyai beberapa keunggulan seperti dapat diterapkan pada sample yang diformalin. Penelitian lebih masih dibutuhkan untuk meningkatkan sensitifitas IHC dalam mendeteksi rabies. Kata kunci : rabies, anjing, sensitifitas ,FAT, IHC
49
Wirata et al.
Jurnal Ilmu dan Kesehatan Hewan, Pebruari 2014
kasus rabies telah meluas di semua
PENDAHULUAN
Kabupaten/Kota di Bali, secara berturutRabies adalah penyakit viral yang
turut: Kabupaten Badung, Kota Denpasar,
menginfeksi sistem saraf pusat (SSP) pada
Tabanan, Gianyar, Karangasem, Buleleng,
hewan yang berdarah panas dan manusia
Bangli, Klungkung dan Jembrana. Wabah
(Anjaria et al., 1985; Akoso, 2007).
yang terjadi pada hewan dan manusia telah
Penyakit rabies merupakan infeksi akut
mengakibatkan
pada sistem saraf pusat dan dan hampir
umumnya disebabkan oleh tidak adanya
semua
berakhir
perlakuan atau kurangnya perlakuan yang
dengan kematian (Yousaf et al., 2012)
baik (post exposure treatment) terhadap
Penyakit rabies disebabkan oleh virus dari
korban yang terkena Rabies. Tindakan
genus Lyssavirus (Blanton et al., 2010).
vaksinasi dan pemberian serum anti rabies
Virus
neurotropik,
sebagai tindakan post exposure treatment
berbentuk seperti peluru dengan ukuran
(PET) telah meningkatkan keberhasilan
diameter 75 nanometer dan panjang 100-
pengobatan bagi korban terutama manusia
130 nanometer. Materi genetik virus
yang terkena gigitan anjing.
kejadian
rabies
infeksinya
bersifat
kematian.Kematian
tersusun atas untaian rantai tunggal RNA.
Tingginya jumlah kasus gigitan oleh
Ada 7 serotipe dari lyssavirus yaitu:
anjing akan berdampak terhadap tingginya
serotipe 1 adalah virus rabies klasik telah
permintaan vaksin anti rabies (VAR) yang
menyebar ke suluruh dunia; serotipe 2
diperuntukkan
adalah Lagos bat virus ditemukan di
sehingga ini akan sangat membebani
Afrika;
Mokola
pemerintah, karena untuk daerah yang
rhabdovirus ditemukan di Afrika; serotipe
endemis rabies seperti di Bali, biaya VAR
4
atau perlakuan paska terpapar penyakit
serotipe
adalah
3
adalah
Duvenhage
rhabdovirus
bagi
gigitan,
ditemukan di Afrika bagian selatan;
rabies
European Bat Lyssavirus (EBL) dibagi
pemerintah.
dalam 2 biotipe yaitu EBL 1 dan EBL 2;
manusia,
dan terakhir serotipe 7 yaitu Australian
mengganggu ketentraman batin, rasa aman
Bat
dan menimbulkan rasa takut, kekhawatiran
Lyssavirus
(Bowen-Davis
and
Lowings, 2000).
di
Provinsi
sepenuhnya
oleh
dampaknya
pada
Karena keberadaan
rabies
telah
serta keresahan masyarakat di daerah
Sejak mewabahnya rabies pertama kali
ditanggung
korban
Bali,
tepatnya
tertular.
di
Kabupaten Badung bulan Nopember 2008,
Kurangnya informasi bagi masyarakat tentang 50
penyakit
rabies
sering
Jurnal Ilmu dan Kesehatan Hewan, Pebruari 2014
Vol 2 No 1: 49-59
menimbulkan ketakutan yang berlebihan
teknik FAT (Flourescent Antibody Test)
atau tidak berdasar. Sehingga terkadang
seperti tingkat sensitifitas yang tinggi dan
masyarakat tidak mau tahu dan cenderung
waktu
memaksa untuk mendapatkan VAR setiap
Organisasi Kesehatan Hewan Dunia (OIE)
kali tergigit oleh anjing, padahal tidak
menjadikan FAT sebagai baku emas untuk
semua gigitan oleh anjing terinfeksi rabies.
diagnosa penyakit rabies (Shankar, 2009).
pengujian
yang
relatif
cepat,
Informasi tentang sejarah kasus atau
Pengujian rabies dengan teknik FAT
riwayat gigitan dan gejala klinis hewan
memerlukan spesimen otak dalam keadaan
penular rabies (HPR) yang menggigit
segar atau segar beku atau dengan
diperlukan rabies
dalam
mendiagnosa
kasus
pengawet glycerin 50%. Hal ini sering
disamping
pemeriksaan
atau
menjadi kendala di lapangan karena tidak
pengujian secara laboratorium. Diagnosa
semua
berdasarkan
laboratorium
anamnesa
pemeriksaan
dan
laboratorium
hasil terhadap
spesimen untuk
pengawet
diharapkan
penyimpanannya
dijadikan
sebagai
diterima
diperiksa
di
dalam
keadaan segar. Pada spesimen yang diberi
spesimen otak anjing yang menggigit bisa
bisa
glycerin juga
50%
masa
relatif
singkat
pedoman atau dasar dalam pengambilan
karena apabila terlalu lama dalam glycerin
keputusan untuk pemberian vaksin anti
spesimen otak akan rusak dan tidak bisa
rabies (VAR).
diperiksa dengan uji FAT. Oleh karena itu
Pemeriksaaan laboratorium yang biasa
diperlukan suatu teknik diagnostik yang
dilakukan terhadap spesimen otak yang
cepat dan akurat dan mampu mengatasi
diduga
kendala
rabies
pewarnaan
diantaranya
Seller,
Antibody
Test),
imunohistokimia
FAT
adalah
:
(Flourescent
Mouse
pengiriman
dan
masa
penyimpanan spesimen.
histopatologi, (IHK),
jarak
Salah satu teknik uji lain untuk mendiagnosa
seperti
yang
atas
adalah
teknik
Inoculation Test (MIT), maupun teknik
disebutkan
molekular lainnya seperti Polymerase
imunohistokimia
Chain Reaction (PCR). Sedangkan uji
mempunyai prinsip yang sama dengan
serologi
FAT yaitu untuk melihat adanya ikatan
yang
direkomendasikan
oleh
di
rabies
(IHK).
Teknik
IHK
Office Internationale des Epizooties (OIE,
antigen-antibodi spesifik rabies.
2008) adalah Fluorescent Antibody Virus
ini mempunyai sensitivitas sama dengan
Neutralization
Bahkan
FAT (Singatia et al., 2012). Perbedaannya
dengan beberapa kelebihan yang dimiliki
adalah pada teknik IHK pengujian bisa
Test
(FAVN).
51
Teknik
Wirata et al.
Jurnal Ilmu dan Kesehatan Hewan, Pebruari 2014
dilakukan pada jaringan yang sudah
ditandai dengan adanya warna hijau (apple
difiksasi dalam formalin buffer netral 10%
green) yang berpendar (OIE, 2008).
sehingga spesimen dapat disimpan dalam waktu yang relatif lebih lama pada suhu
Teknik IHC Rabies
ruang tanpa diperlukan perlakuan khusus
Pengujian dengan teknik IHC rabies
seperti harus disimpan pada suhu dingin,
dilakukan
terlindung dari sinar, dan sebagainya.
dinyatakan positif dan negatif rabies.
Namun perlu kiranya dilakukan suatu
Teknik IHC mempergunakan sampel otak
penelitian
yang
untuk
mengetahui
tingkat
terhadap
terdiri
dari
bagian
cerebrum,
cerebellum
terhadap FAT yang merupakan baku emas
Sampel otak kemudian difiksasi dengan
untuk
formalin buffer netral 10% dan selanjutnya
rabies
yang
direkomendasikan oleh OIE.
bagian
yang
sensitifitas dan spesifisitas teknik IHK
pemeriksaan
dan
sampel
hippocampus.
diproses dalam tissue processor untuk selanjutnya dilakukan proses embedding sampai
METODE PENELITIAN
dalam
bentuk
blok
paraffin.
Jaringan dalam blok paraffin selanjutnya dipotong
Teknik FAT Rabies Pengujian
dengan
teknik
dengan
microtome
dengan
FAT
ketebalan 3-4 µm, kemudian jaringan
dilakukan dengan membuat preparat apus
ditempelkan pada gelas obyek yang sudah
otak yang difiksasi dengan aseton pada
dilapisi dengan poly L- Lysin. Selanjutnya
suhu -20˚C selama 30 menit. Setelah
preparat
dikeringkan pada suhu ruang, preparat
tertempel jaringan) diperlakukan sesuai
apus digenangi dengan conjugate rabies-
dengan tahapan prosedur teknik IHC.
anti nucleocapsid. Inkubasi dilakukan dalam
inkubator
suhu
37˚C
(obyek
Teknik
gelas
IHK
yang
sudah
menggunakan
dengan
streptavidin yang sudah dilabel, yang
memberi kelembaban secukupnya. Setelah
sudah tersedia dalam satu kemasan kit
30 menit, preparat dicuci dengan larutan
komersial (LSAB-2 System peroxidase
PBS pH 7,2 sebanyak 3 kali dilanjutkan
universal kit, DAKO, No. K 0672,
dengan menambahkan aquos mounting
Denmark).
media dan ditutup dengan cover slip.
proteolitik dipergunakan sebagai antigen
Selanjutnya
retrieval dengan cara mendigesti jaringan,
pemeriksaan
dilakukan
dibawah mikroskop flourescen, dan sel-sel
antibodi
neuron yang terinfeksi virus rabies akan
antibodi 52
Enzim
monoklonal primer,
trypsin
sebagai
rabies
sebagai
goat-anti
mouse
Jurnal Ilmu dan Kesehatan Hewan, Pebruari 2014
Vol 2 No 1: 49-59
biotinylated sebagai antibodi sekunder dan
Analisis Data
streptavidin peroksidase sebagai label.
Data
hasil
yang
diperoleh
pada
Diaminobenzidine (DAB) dipergunakan
penelitian ini selanjutnya akan dianalisis
untuk
dengan menggunakan Tabel Kontingensi 2
memberikan
efek
presipitasi
berwarna pada ikatan antigen-antibodi.
x 2 seperti yang terlihat pada Tabel1.
Tabel 1. Tabel Kontingensi 2 X 2 IHC Neg
TP
FN
FP
TN
Jml
Jm
Neg
FAT
Pos
Pos
Persentase sensitifitas dan spesifisitas dihitung dengen formula sebagai berikut. TP
TN
Sentifitas= TP+FN ×100% ; Spesifisitas= TN+FP ×100% . TP (true positif): sampel positif rabies dengan FAT, dan tetap menunjukkan positif rabies dengan IHC. FN (false negatif): sampel positif rabies dengan FAT, tetapi menunjukkan negatif rabies dengan teknik IHC. FP (false positif): sampel negatif rabies dengan FAT, tetapi menunjukkan positif rabies dengan teknik IHC. TN (true negatif): sampel negatif rabies dengan FAT, dan tetap menunjukkan negatif dengan IHC.
Dengan asumsi bahwa teknik FAT
teknik
imunohistokimia
(IHC)
dapat
adalah baku emas untuk diagnosa rabies
ditentukan. Apabila pada penghitungan
dan dengan menggunakan metode analisis
sensitifitas
di atas, maka sensitifitas dan spesifisitas
menunjukkan 53
maupun perbedaan,
spesifisitas maka
akan
Wirata et al.
Jurnal Ilmu dan Kesehatan Hewan, Pebruari 2014
dilanjutkan dengan menggunakan analisis
setelah diperiksa dengan teknik FAT
statistik Chi-square.
sebanyak 624 sampel (14,5%) dinyatakan positif rabies (BBV Denpasar, 2011).
HASIL DAN PEMBAHASAN Pengujian sampel otak anjing dengan Hasil
IHC Sampel yang dinyatakan positif dan
Pengujian sampel otak anjing dengan
negatif rabies pada pemeriksaan FAT,
FAT Wilayah Provinsi Bali dikonfirmasi rabies
secara
November
laboratorium
2008
selanjutnya
diperiksa
dengan
menggunakan IHC. Dari 40 sampel positif
dinyatakan terjangkit rabies sejak 01-12-
rabies pada FAT, sebanyak 27 (67,5%)
2008
No:
sampel menunjukkan positif (Gambar 1)
tentang
dan 13 (32,5%) sampel menunjukkan hasil
Pernyataan Berjangkitnya Wabah Penyakit
negatif rabies pada IHC. Sedangkan
Anjing
seluruh sampel yang negatif rabies pada
SK
secara
28
resmi
dengan
dan
pada
masing-masing diambil 40 sampel untuk
MENTAN
1637.1/Kpts/PD.640/12/2008
Gila
(Rabies)
Di
Kabupaten
Badung Provinsi Bali. Selama kurun
FAT
(40
sampel),
juga
seluruhnya
waktu Desember 2008 sampai Desember
menunjukkan negatif rabies pada IHC
2011 telah tercatat sampel sebanyak 4300
(Tabel 1).
sampel. Dari jumlah sampel tersebut,
Gambar 1. Badan negri berwarna coklat pada area definitif intrasitoplasmik sel neuron. (Pewarnaan IHC dengan label streptavidin biotin dan DAB x 400). Tingkat sensitifitas IHC terhadap FAT
berarti bahwa pengujian sampel dengan
adalah sebesar 67,5% dengan tingkat
menggunakan teknik IHC hanya mampu
spesifisitasnya sebesar 100%. Hal ini
mendeteksi 67,5% dari total sampel positif 54
Jurnal Ilmu dan Kesehatan Hewan, Pebruari 2014
Vol 2 No 1: 49-59
berdasarkan hasil uji FAT. Sedangkan sampel
negatif
terdeteksi
dengan
negatif
teknik
100%
FAT dengan
Teknik yang diakui dunia sebagai teknik pilihan untuk mendiagnosa rabies adalah
FAT
(Subramaniam 2013).
dan
menggunakan teknik IHC. Perbedaan nilai
Madhusudana,
Fluorescent
sensitifitas antara IHC dan FAT (32,5%)
Antibody Test (FAT) adalah suatu metoda
sangat nyata (P<0,01).
uji yang memiliki beberapa kelebihan dibandingkan dengan metoda uji yang lain
Tabel 5.1. Tabel Kontingensi 2 X 2
seperti kecepatan dalam memperoleh hasil (± 2 jam), mempunyai reliabilitas diagnosa
13
Pos
Neg
27
Neg
Pos
0
Jml
FAT
IHC
27
–
98 Jml
kasus
apabila
sehingga FAT merupakan golden standard
40
diagnosa
rabies
(OIE,
2000).
Walaupun demikian, agar teknik ini dapat
40
menghasilkan 53
dari
mempergunakan konjugat yang sesuai,
untuk 40
100%
80
sesuai
dengan
yang
diharapkan ada beberapa persyaratan yang harus
dipenuhi
ketika
melakukan
pemeriksaan. Reliabilitas Pembahasan
hasil
pengujian
FAT
ditentukan oleh sampel yang diuji. FAT
Kejadian rabies di dunia masih tinggi.
akan sangat sensitif pada sampel otak
Hal ini mendorong untuk terus dilakukan
segar, akan tetapi dapat juga digunakan
penelitian terkait penyakit rabies. Berbagai
sampel jaringan yang telah diberi tripsin
metoda
atau enzym lainnya (Whitfield et al., 2001)
dan
teknik
dikembangkan, mengidentifikasi
pengujian baik
agen
terus untuk
maupun
atau sampel
yang pengiriman maupun
uji
penyimpanannya harus pada suhu dingin
serologi. Diagnosa rabies pada hewan
atau beku, atau diberi media pengawet
dapat dibuat dengan direct florescent
glyserin 50% dalam PBS (OIE, 2000).
antibody, teknik inokulasi pada mencit,
Pada kondisi tertentu, persyaratan
kultur jaringan dan polymerase chain
sampel yang akan diperiksa tidak dapat
reaction. Teknik diagnosa tersebut telah
memenuhi persyaratan, misalnya karena
direkomendasi oleh WHO (Bourhy et al.,
keterbatasan
alat
2005).
Pendinginan
penting
55
pendinginan. artinya
pada
Wirata et al.
Jurnal Ilmu dan Kesehatan Hewan, Pebruari 2014
pengiriman sampel. Sampel yang dikirim
alternatif uji belum bisa digunakan sebagai
tanpa
teknik
pendingin
bisa
mengakibatkan
pemeriksaan
rabies,
kerusakan jaringan sampel dan berpeluang
penggunaan
meningkatkan kemungkinan hasil negatif
beberapa
palsu (Umoh et al., 1981).
Teknik IHC dapat diaplikasikan dengan
Banyak kejadian bahwa sampel yang
baik
metode
IHC
meskipun
kelebihan
pada
sampel
mempunyai
dibanding
yang
FAT.
dipreservasi
dikirim ke laboratorium dalam kondisi
dengan larutan gliserol selama 15 bulan
yang sudah rusak. Bila hal ini tetap
dan dalam keadaan beku selama 2 tahun
dilakukan
FAT
(Subramaniam and Madhusudana, 2013).
dikhawatirkan akan menghasilkan negatif
Disamping itu kelebihan penggunaan IHC
palsu. Karena itu, teknik pemeriksaan yang
adalah
memungkinkan dapat memeriksa sampel
retrospektif
yang sudah rusak sangat diperlukan.
terdahulu.
pemeriksaan
dengan
dapat
digunakan
untuk
terhadap
studi
kasus-kasus
Kemajuan pengetahuan di bidang
Dalam penelitian ini, teknik IHC
pemeriksaan suatu agen penyakit ataupun
mempunyai tingkat sensitifitas sebesar
serologi berbasis molekuler-seluler telah
67,5% dan tingkat spesifisitas sebesar
berkembang pesat. Salah satu tehnik
100% dibandingkan dengan teknik FAT
alternatif adalah teknik imunohistokimia
pada pengujian sampel otak anjing yang
(IHC).
berasal dari wilayah Bali. Beberapa hal
Teknik
IHC
pada
dasarnya
merupakan perpaduan 3 disiplin ilmu yaitu
yang
imunologi, histologi dan kimia. Prinsip
pengujian
teknik IHC adalah adanya ikatan antigen-
dalam fiksasi formalin, lama digesti oleh
antibodi spesifik yang sudah dilabel, dan
enzim proteolitik, konsentrasi antibodi
teknik ini tidak membutuhkan mikroskop
pendeteksi,
flourescen
spesimen, ukuran spesimen, dan tentu saja
(Subramaniam
dan
Madhusudana, 2013). Dalam bahwa
mungkin adalah:
mempengaruhi lamanya
distribusi
hasil
spesimen
antigen
pada
hal yang bersifat subyektif yaitu penguji.
penelitian
pemeriksaan
ini
didapatkan yang
bahwa tingkat sensitifitas teknik IHK lebih
pemeriksaan
rendah atau hanya sebesar 67,5% dari
dengan FAT, ada yang negatif pada
teknik FAT. Hal ini bisa dimungkinkan
pemeriksaan IHC. Sensitifitas uji IHC
karena terdapat perbedaan lamanya waktu
lebih
ini
fiksasi dalam formalin. Pada sampel yang
sebagai
disimpan cukup lama dalam formalin
sebelumnya
positif
rendah
menunjukkan
sampel
Pada penelitian ini diperoleh hasil
pada
dari bahwa
FAT. IHC
Hal
56
Jurnal Ilmu dan Kesehatan Hewan, Pebruari 2014
mungkin
akan
membutuhkan
waktu
Vol 2 No 1: 49-59
pendeteksi
75–100%
lebih
tinggi
ataupun konsentrasi enzim proteolitik yang
dibanding pada sampel yang difiksasi
berbeda dengan sampel yang difiksasi
dengan acetone. Pada pemeriksaan sampel
dalam waktu yang relatif singkat. Waktu
yang
dan konsentrasi enzim proteolitik yang
kemungkinan
optimal sangat berpengaruh terhadap hasil
konsentrasi
pengujian.
optimal.
Konsentrasi dan lama proses digesti
difiksasi
Akurasi
dengan belum
antibodi
diagnosa
formalin
menggunakan pendeteksi
rabies
yang
sangat
oleh enzim proteolitik/proteinase akan
tergantung dari kualitas sampel, distribusi
mempengaruhi sensitifitas hasil (Cynthia
antigen virus dan bagian organ sampel
et al., 1997). Proses digesti ini sangat
yang diuji. Tidak ada pola
penting dalam mengekspos/menemukan
untuk distribusi virus rabies di dalam
kembali antigen target yang ada di dalam
jaringan susunan saraf pusat hewan yang
jaringan yang sudah difiksasi dengan
terinfeksi (Sylvia et al., 2001). Hal ini
formalin. Proses digesti dan konsentrasi
mungkin menjadi salah satu penyebab
enzim yang berlebihan
terjadinya perbedaan hasil pengujiaan pada
akan merusak
jaringan bahkan bisa melepaskan jaringan
penelitian
dari slide. Waktu optimal untuk kerja
menggunakan sampel otak anjing dengan
enzim adalah 30 menit pada suhu 37°C
ukuran sampel yang cukup besar, atau
untuk
dalam
sebaliknya sampel otak yang sudah dalam
formalin selama beberapa hari. Sedangkan
bentuk potongan kecil. Hal ini sangat
sampel yang difiksasi formalin untuk
menyulitkan untuk menentukan bagian
waktu
yang harus diambil untuk dilakukan
sampel
yang
yang
difiksasi
lebih
lama,
akan
membutuhkan waktu sampai 45 menit untuk proses digesti
ini.
Pada
yang pasti
penelitian
ini
pengujian.
oleh proteinase
Ukuran sampel menjadi permasalahan
(Cynthia et al., 1997). Dalam penelitian ini
yang penting pada hewan-hewan dengan
menemui kesulitan untuk menentukan
ukuran organ otak yang besar. Hal ini
waktu optimal digesti diakibatkan sampel
dikarenakan banyak bagian dari otak yang
yang digunakan waktu fiksasinya berbeda.
tidak diperiksa/diuji. Semestinya beberapa
Konsentrasi
antibodi
pendeteksi
bagian dari otak yang diduga terinfeksi
berperan terhadap hasil. Pada umumnya,
rabies seperti: batang otak, hipokampus
bila sampel difiksasi dengan formalin akan
dan
membutuhkan
diperiksa pada kasus yang diduga rabies.
konsentrasi
antibodi
57
serebelum
harus
diambil
untuk
Wirata et al.
Jurnal Ilmu dan Kesehatan Hewan, Pebruari 2014
Pada kondisi dimana tersedia seluruh
pengalaman yang cukup untuk terbiasa
bagian dari organ otak, khususnya pada
melihat perubahan /reaksi yang terjadi
hewan kecil, pemotongan membujur pada
pada preparat yang diperiksa/diuji. Pada
organ otak akan memberikan gambaran
beberapa sampel positif rabies, tidak
distribusi yang lebih jelas pada pengujian.
ditemukan
Hasil negatif pada pemeriksaan dengan
sitoplasmik
teknik IHC kemungkinan karena tidak
imunoreaktif dengan antigen virus rabies
adanya antigen pada bagian organ yang
pada beberapa neuron. Hal ini mungkin
diperiksa
belum
saja akan terlewatkan oleh penguji apabila
terdistribusikan ke bagian yang diperiksa
tidak melakukan pemeriksaan dengan
sehingga tidak terdeteksi adanya antigen
cermat dan teliti. Pada penelitian ini juga
pada bagian potongan tersebut. Hal lain
tidak
yang bisa menjelaskan hal ini adalah tidak
terjadinya hal tersebut.
atau
mungkin
semua hewan yang
adanya
negri
tetapi
menutup
bodi
tampak
intra adanya
kemungkinan
akan
diperiksa sampel
otaknya berasal dari hewan yang mati
SIMPULAN DAN SARAN
dengan gejala klinis rabies. Banyak sampel yang diperiksa dalam penelitian ini berasal
Simpulan
dari hewan yang dieutanasia karena mulai
Teknik IHC memiliki tingkat
menunjukkan gejala klinis rabies, kasus
sensitifitas yang lebih rendah dibadingkn
gigitan, atau bahkan merupakan hasil
dengan FAT, namun tingkat
eliminasi terhadap anjing liar. Beragamnya
spesifisitasnya sama dengan FAT pada
sejarah sampel yang diperiksa tentu akan
pengujian sampel otak anjing yang berasal
memberikan gambaran distribusi antigen
dari wilayah Bali.
yang berbeda di dalam jaringan otak. Ini terkait dengan lamanya virus sudah berada
Saran
di dalam tubuh hewan (masa inkubasi) sampai hewan diambil sebagai sampel. Pemeriksaan laboratorium
rabies tentu
Penelitian lebih lanjut perlu dilakukan unutk meningkatkan sensitifitas teknik
secara
IHC.
membutuhkan
keterampilan khusus bagi penguji. Begitu
UCAPAN TERIMAKASIH
juga dengan pemeriksaan rabies dengan teknik
IHC
keterampilan
yang
juga
khusus,
memerlukan
ketelitian
dan
Kami sampaikan ucapan terima kasih kepada Kepala Balai Besar Veteriner 58
Jurnal Ilmu dan Kesehatan Hewan, Pebruari 2014
Vol 2 No 1: 49-59
Denpasar , drh I Ketut Diarmita, MP, yang
for reproducible detection of rabies
telah berkenan memberikan ijin dan
virus antigen mRNA and genome in
fasilitas penelitian. Apresiasi juga kami
situ in formalin-fixed tissues. Journal
layangkan
of Virological Methods 67 (1997) 5-
kepada
staf
Balai
Besar
Veteriner Denpasar yakni drh Gd Agus J, IW Sudira, IK Widia dan F. Indra K atas keterlibatnya
dalam
penanganan
12. Shankar BP. 2002. Advances in diagnosis
dan
of rabies. Veterinary World.2(2): 74-
pengujian spesimen rabies.
78. Subramaniam R, Madhusudana SN. 2013. Laboratory
DAFTAR PUSTAKA
Rabies: Akoso
BT.
2007.
Pengendalian Kanisius
Pencegahan Rabies.
dan
Recent
of
Human
Advances.
The
Scientific World Journal, 1-10.
Penerbit
Singathia R, Dutta P, Yadav R, Gupta SR,
IKAPI)
Gangil R, Gattani A. 2012. Current
(Anggota
Yogyakarta. Anjaria
Diagnosis
Update on Rabies Diagnosis. IJAVMS,
JM,
Jhala
Immunoperoxidase
CI. reaction
1985. in
6: 229-240. Umoh
JU,
Blenden
DC.
1981.
diagnosis of Rabies. Int. J. Zoonoses
Immunofluorescent staining of rabies
12(4): 267 – 275.
virus antigen in formalin-fixed tissue
Blanton JD, Palmer D,Dyer J, Rupprecht
after treatment with trypsin. Bulletin
CE. 2010. Rabies surveillance in the
of the World Health Organization, 59
United States during 2010. JAVMA,
(5): 737-744.
239 (6): 773-783.
Yousaf MZ, Qasim M, Zia S, Khna MR,
Bourhy H, Dacheux L, Strady C, Mailles
Ashfaq UA, Khan S. 2012. Rabies
A. 2005. Rabies in Europe in 2005.
molecular
Euro Surveillance, 10:11.
prevention and treatment. Virology
Bowen-Davies
J,
Lowings
P.
2000.
virology,
diagnosis,
Journal , 9:50.
Current perspectives on rabies.1. The
Whitfield SG, Fekadu M, Shaddock JH.
biology of rabies and rabies-related
2001. A comparative study of the
viruses. In practice, March 2000, 118-
fluorescent antibody test for rabies
124.
diagnosis in fresh and formalin-fixed
Cynthia K, Warner, Sylvia G, Whitfield,
brain tissue specimens. J. Virol.
Fekadu M, Hue H. 1997. Procedures
Methods.95:145– 151. 59
