Rapid-VIDITEST Yersinia enterocolitica O:3 (Jednokrokový kazetový test pro detekci Yersinia enterocolitica O:3.) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail:
[email protected], Web: www.vidia.cz
POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Yersinia enterocolitica O:3 je jednokrokový imunochromatografický test pro kvalitativní detekci Yersinia enterocolitica O:3 ve vzorcích stolice za účelem zjištění Yersinia enterocolitica O:3 u infikovaných osob. Pouze pro laboratorní použití. ÚVOD: Tato bakterie je gram-negativní, má tvar tyčinky, netvoří spory, je rodu Yersinia a čeledě Enterocateriaceae. Je fakultativně anaerobní a pohyblivá při pokojové teplotě ale nepohyblivá při teplotě 37°C. Kmeny jsou obvykle velké 0.5-0.8 µm na 1-3 µm. Existuje 6 biotypů (1A, 1B, 2, 3, 4, a 5 podle genomové sekvence) obsahujících 50 serotypů, ale jen některé serotypy jsou patogenní pro lidi. Hlavní zvířecí zdroje infekce Yersinií enterocoliticou zahrnují domácí zvířata, jako jsou prasata, kozy, dobytek, koně, hlodavci a domácí zvířata, jako jsou psi a kočky. Člověk je náhodný hostitel a není potřebný pro zachování přenosu v přírodě. Většina lidských patogenních kmenů se nachází v rozdílných serotypech (např. O:3, O:5.27, O:8 a O:9). Kromě kolonizování výše uvedených zvířecích zdrojů Yersinií enterocoliticou, Yersinia pseudotuberculosis přebývá v řadě druhů ptáků, včetně holubů, krůt, kachen, hus a kanárků. Yersinióza se vyskytuje spíše v zemích s mírným teplotním klimatem než v tropických a subtropických oblastech. V chladnějších klimatických podmínkách se infekce Yersinií vyskytují zejména v zimních měsících. Infekce se projevuje jako invazivní průjem charakterizovaný horečkou, bolestí břicha, kulturou stolice obsahující hlen a krev. Inkubační doba pro střevní yersiniózu je asi 3 až 7 dní, pacienti vylučují organismy ve stolici a zůstávají infekční během symptomatické doby 2 až 3 týdnů. Přenos Yersinie ve stolici u zotavujících se neléčených jedinců se může výjimečně protáhnout na týdny až měsíce u malého procenta pacientů. Kromě toho se může střevní yersinióza podobat akutnímu zánětu slepého střeva. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Yersinia enterocolitica O:3 je kazetový kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení Yersinia enterocolitica O:3 ve vzorcích stolice. Na testovacích zónách membrány kazety jsou předem navázány monoklonální protilátky proti antigenům Yersinie enterocolitica O:3. V průběhu testování vzorek reaguje s konjugátem, který byl imobilizovaný na membráně (anti-Yersinia enterocolitica O:3 protilátky). Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně kazety. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve „výsledkové zóně“ projeví jako barevná linka. Směs pak 1
vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v „kontrolní zóně“, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií.
OBSAH SOUPRAVY: -
testovací kazety odběrové zkumavky s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky návod k použití certifikát kontroly balení
POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU -
nádoba na sběr vzorků jednorázové rukavice stopky
SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Odeberte dostatečné množství stolice (1 – 2g nebo ml tekutého vzorku). Vzorky odebírejte do čistých odběrových nádob (bez konzervantů nebo transportního média). Test by měl proběhnout co nejdříve po odebrání vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 1 - 2 dny před testováním v chladničce při +2 až +8°C. V případě delšího skladování, maximálně 1 rok, by se měly vzorky uchovávat zmrazené při -20°C. Před použitím nechte vzorky vytemperovat na laboratorní teplotu. Příprava vzorků a) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem (1). b) Pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku stolice (cca 125mg) (2). Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředicího roztoku. c) Zkumavku důkladně promíchejte za účelem dobré homogenizace vzorku (3). d) Při stanovení vzorku z tekuté stolice odeberte 125µL vzorku do ředicího roztoku.
2
PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte kazetu, vzorek a zkumavku s roztokem vytemperovat na laboratorní teplotu (+15 až +30°C). Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést test. 1. Znovu protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo odstřihněte konec špičky zkumavky (obr. 4). 2. Těsně před použitím vyjměte kazetu Rapid-VIDITEST Yersinia enterocolitica O:3 z obalové folie a položte ji na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou zkumavku a kazetu. 3. Do okénka pro vzorek aplikujte z odběrové zkumavky přesně 4 kapky (100 l) naředěného vzorku (obr. 5). 4. Po 10 minutách odečtěte výsledek.
3
INTERPRETACE VÝSLEDKU: Vzorky se aplikují do oválného okénka označeného S (sample – vzorek), výsledky se odečítají v obdélníkovém okénku uprostřed kazety označeném C (kontrolní zóna) a T (výsledková zóna).
Zelená Červená
Negativní
Červená
Neplatný
Pozitivní
Neplatný
Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane čistá. Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové zóně T. Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka bez ohledu na přítomnost červené linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita červené barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve vzorku. Nicméně tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst v průběhu onemocnění.
PLATNOST TESTU: V testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně, je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu.
4
OMEZENÍ TESTU: 1. Rapid-VIDITEST Yersinia enterocolitica O:3 slouží pouze k prokázání přítomnosti Yersinie enterocolitica ve vzorku (kvalitativní detekce) a měla by být používána pouze k detekci Yersinia enterocolitica O:3 antigenů ve vzorcích stolice. Testem nelze stanovit kvantitativní množství antigenu ani míru jeho nárůstu v průběhu infekce Yersinií enterocoliticou O:3 2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). Vzorek je potřeba naředit ředícím roztokem a opakovat test. 3. Některé vzorky stolice mohou způsobit snížení intenzity kontrolní zelené linky. 4. Pokud je výsledek testu negativní a klinické symptomy přetrvávají, doporučuje se dodatečné testování za použití jiných klinických metod. Negativní výsledek testu nevylučuje možnost infekce Yersinií enterocoliticou O:3. 5. Test poskytuje pravděpodobnou diagnózu infekce Yersinií enterocoliticou O:3. Potvrzení diagnózy může provést až lékař po zvážení klinického a laboratorního nálezu.
OČEKÁVANÉ HODNOTY: Gastrointestinální trakt je místo vstupu většiny případů yersiniózy. Obvykle je potřeba inokulum ze 109 organismů, aby došlo ke klinické infekci. Cesty přenosu Yersinie enterocoliticy a Yersinie pseudotuberculosis jsou fekálně-orální a nejčastěji se šíří prostřednictvím požití kontaminovaných potravin. V USA, Evropě, Austrálii a na Novém Zélandu byly také popsány případy transfuze erytrocytů a krevních destiček kontaminovaných Yersinií enterocoliticou. Během posledního desetiletí se Yersinia enterocolitica ukázuje jako stále významnější zástupce při vypuknutí gastrointestinálních otrav jídlem v USA i jinde. Kromě toho bylo v některých nemocnicích hlášeno propuknutí gastroenteritidy Yersinií enterocoliticou.
ÚČINNOST TESTU: Citlivost a specifita: Bylo provedeno testování soupravy Rapid-VIDITEST Yersinia enterocolitica O:3 a výsledky byly potvrzeny aglutinačním testem (Yersinia enterocolitica aglutinační kit, Progen). Výsledky vykazovaly > 99% shodu v citlivosti i specifitě. Křížová reaktivita: Rapid-VIDITEST Yersinia enterocolitica O:3 byl testován na stanovení křížové reaktivity. Nebyla nalezena žádná křížová reaktivita s běžnými střevními patogeny, dalšími organismy a látkami někdy přítomnými ve stolici (Campylobacter, Helicobacter pylori, Shigella, Clostridium difficile, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella, Yersinia enterocolitica O:9).
5
SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě +2 až +30°C. Test je stabilní do data exspirace uvedeném na obalu. Test musí zůstat zabalen v původní folii. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: -
pouze pro in vitro diagnostiku nepoužívejte po uplynutí expirační doby před použitím test musí zůstat v uzavřeném v obalu se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy test nepoužívejte, jestliže je obal poškozen během testu nejezte, nepijte a nekuřte, dodržujte Správnou laboratorní praxi, používejte ochranný oděv a jednorázové rukavice test musí být proveden do dvou hodin od otevření obalu
REFERENCE: 1. R.A. Smego, J. Frean, H. J. Koornho. “Yersiniosis I: Microbiological and Clinicoepidemiological Aspects of Plague and Non-Plague Yersinia Infections”. Eur J Clin Microbiol Infect Dis (1999) 18:1–15 Q Springer-Verlag 1999
POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro
Číslo šarže (LOT)
Datum exspirace
Výrobce
Poslední revize tohoto návodu: 05/2014
6
