Quantum Blue Calprotectin Extended Kvantitativní laterální průtoková analýza

Quantum Blue® Calprotectin Extended Kvantitativní laterální průtoková analýza LF-CALE25 25 testů Poslední revize: 27.1. 2014

BÜHLMANN LABORATORIES AG Baselstrasse 55 CH - 4124 Schönenbuch, Switzerland Tel.: +41 61 487 1212 Fax: +41 61 487 1234 [email protected]

Zplnomocněný zástupce výrobce v České republice: BioVendor – Laboratorní medicína a.s. IČ: 63471507 Tůmova 2265/60, 616 00 Brno, tel: +420 549 124 111, fax: +420 549 211 465 Mail: [email protected], www.biovendor.cz

POUŽITÍ BÜHLMANN Quantum Blue® Calprotectin je imunoanalýza vytvořená pro kvantitativní stanovení kalprotektinu ve vzorcích lidské stolice a to v kombinaci se snímačem BÜHLMANN Quantum Blue®. Pouze pro laboratorní použití. PRINCIP ANALÝZY Testovací membrána je potažena monoklonálními protilátkami (mAb) vysoce specifickými pro kalprotektin. Sekundární monoklonální detekční protilátky konjugované na částice koloidního zlata jsou naneseny na podložku uvolňující konjugát a uvolní se do reakčního systému po přidání extrahovaného a naředěného vzorku stolice. Zlatý konjugát kalprotektin/anti-kalprotektin se naváže na anti-kalprotektinové protilátky navázané na testovací membráně (testovací linie; testovací proužek) a zbývající volný anti-kalprotektinový zlatý konjugát se naváže na kozí antimyší protilátky navázané na testovací membráně (kontrolní linie; kontrolní proužek). Intenzita signálu testovací linie a kontrolní linie ® je kvantitativně změřená pomocí snímače BÜHLMANN Quantum Blue . DODÁVANÉ REAGENCIE A PŘÍPRAVA Reagencie Testovací kazeta Vakuově zabalená v hliníkové fólii Extrakční pufr RFID čipová karta

Množství 25 kusů

Kat.č. B-LFCALUS-TC

Poznámka

120 ml 1 ks

B-CAL-EX B-LFCAL-RCC

Připraven k použití Bílá plastová kartička Tabulka 1

DODÁVANÉ REAGENCIE A MATERIÁL DOPLŇKOVÉ Zařízení pro extrakci stolice Smart Prep ®

Schebo Quick-Prep

TM

50 zkumavek 50 zkumavek 1,3 ml, připraveno k použití

B-CAL-RD B-CAL-SO50 Tabulka 2

UCHOVÁVÁNÍ A SKLADOVÁNÍ REAGENCIÍ Všechny součásti soupravy jsou stabilní při 2-8°C do data exspirace vytištěného na štítcích. OPATŘENÍ Bezpečnostní opatření Žádná z reagencií tohoto testu neobsahuje složky lidského původu. Se vzorky pacientů je třeba manipulovat jako s potenciálně biologicky nebezpečnými; řiďte se příslušnými bezpečnostními opatřeními. Nespotřebovaný roztok by měl být zlikvidován podle místních předpisů. Technická opatření Všechny reagencie a vzorky musí být vytemperovány na pokojovou teplotu (18-28°C) před spuštěním testu. Reagencie před použitím dobře promíchejte (pomocí vortexu). Součásti balení nesmí být použity po skončení data exspirace uvedeného na štítku. Nemíchejte reagencie různých šarží. Testovací kazety nesmí být používány opakovaně. Postup analýzy Pozorně čtěte instrukce před provedením testu. Výkon testu bude nepříznivě ovlivněn, pokud nebudou reagencie správně naředěny, nebo v případě, že s nimi bylo manipulováno nebo byly skladovány jinak, než je uvedeno v tomto návodu k použití. Použijte zapisovací RFID čipovou kartu pro změnu parametrů testu specifických podle šarže. Před spuštěním testu musí být snímač zapnut (viz manuál snímače). 2

Vzorky pacientů, se kterými nebylo správně zacházeno, mohou vykazovat nepřesné výsledky. POŽADOVANÉ MATERIÁLY NEDODÁVANÉ SE SOUPRAVOU Vortex pro extrakci vzorků stolice. Přesné pipety s jednorázovými špičkami: 10-1000 µl a 1 ml. Centrifuga. 5 ml zkumavky pro ředění extraktů. Časovač. ® Snímač Quantum Blue firmy BÜHLMANN (kat. č.: BI-POCTR-ABS) Rukavice a laboratorní plášť Jemné ubrousky nebo savý papír. ODBĚR VZORKU A SKLADOVÁNÍ Při použití extrakčních zkumavek (viz tabulka 2) bude potřeba méně než 1g stolice. Vzorky stolice odebírejte do prázdných zkumavek a skladujte je v chladu při 2-8°C do 6 dnů. Extrakty jsou stabilní 7 dnů při 2-8°C po dobu 24 měsíců při ≤-20°C. Důležité: Vzorek musí být odebrán do odběrové zkumavky bez jakýchkoliv chemických nebo biologických přídavků. POSTUP ANALÝZY Postup analýzy se skládá ze tří kroků: 1. Extrakce vzorků stolice: Extrakce je popsána v návodu k použití pro příslušné extrakční zařízení. 2. Zpracování vzorků: Před použitím pro analýzu extrakty vzorků stolice nařeďte 1:10 pomocí Extrakčního pufru B-CALEX (např. 50 μl vzorku a 450 μl pufru). Homogenizujte pomocí vortexu. Centrifugujte naředěné extrakty po dobu 5 minut při 3’000 x g a pokračujte v laterální průtokové analýze. Jinou možností je nechat extrakt stolice ustát po dobu 10 minut. Pro laterální průtokovou analýzu se použijte supernatant. 3. Postup laterální průtokové analýzy Načtěte do snímače metodu a parametry specifické podle šarže pomocí RFID čipové karty, která je součástí balení. Přidejte 60 µl naředěného extraktu stolice na vzorkový vkládací port (jamku) testovací kazety. Inkubujte po 12 + 1 min. (při ručním spuštění časovače). Vložte testovací kazetu do zásuvky snímače. Ihned naskenujte kazetu stisknutím tlačítka ENTER (<START>). Poznámka: Prosím podívejte se do manuálu snímače pro základní funkce a inicializaci a práci se snímačem, zvláště, jak vybrat testovací metody a jak načíst parametry specifické dle šarže z RFID čipové karty, abyste mohli měřit vzorky. KONTROLA KVALITY Pokud shodnost analýzy nekoreluje s ustanovenými limity a opakování vyloučí technické chyby, zkontrolujte následující záležitosti: i) pomůcky pro pipetování, kontrolu teploty a měření času, ii) datum exspirace reagencií a iii) podmínky skladování a inkubace. Výsledek vlastního testu snímače, který byl proveden při uvedení do provozu přístroje, musí být platný. VALIDACE VÝSLEDKŮ U platného výsledku musí být v jakémkoliv případě viditelná kontrolní linie (C). (viz obrázky 1A a 1B). Používá se pouze jako kontrola funkčnosti testu a nelze ji používat pro interpretaci testovací linie (T). Pokud testovací linie (T) není detekovatelná ani po 12 minutách inkubace (obrázek 1A), je koncentrace kalprotektinu přítomného ve vzorku stolice pod detekčním limitem. Pokud je testovací linie (T) detekovatelná po 12 minutách inkubace (obrázek 1B), je koncentrace kalprotektinu přítomného ve vzorku stolice vypočítaná snímačem Quantum Blue®. Pokud je po 12 minutách inkubace detekovatelná pouze testovací linie (T) (obrázek 1C), výsledek testu je neplatný a analýzu kalprotektinu je třeba opakovat s použitím jiné testovací kazety. 3

Pokud po 12 minutách inkubace není detekovatelná ani kontrolní linie (C) ani testovací linie (T) (obrázek 1D), výsledek testu je neplatný a analýzu kalprotektinu je třeba opakovat s použitím jiné testovací kazety. ® Jelikož snímač Quantum Blue umožňuje kvantitativní hodnocení testovací (T) a kontrolní (C) linie, je zaručena další kontrola validity kontrolní linie (C). Pokud je intenzita signálu kontrolní linie (C) po 12 minutách inkubace pod prahem specifickým pro danou šarži, výsledek testu je také neplatný a analýzu kalprotektinu je třeba opakovat s použitím jiné testovací kazety. STANDARDIZACE Laterální průtoková analýza je kalibrována pomocí testu BÜHLMANN Calprotectin ELISA (kat.č.: EK-CAL). ® Snímač BÜHLMANN Quantum Blue používá pro výpočet koncentrace kalprotektinu pro šarži specifickou standardní křivku pro výpočet koncentrace kalprotektinu. Rozmezí analýzy je mezi 30 a 1000 μg/g. OMEZENÍ Reagencie dodávané se soupravou jsou optimalizovány pro měření humánního kalprotektinu v extrahovaných vzorcích stolice. Hodnoty fekálního kalprotektinu by měly být při stanovování diagnózy používány jako doplňkové údaje. Výsledek testu získaný touto metodou může být potvrzen měřením jiných biomarkerů (jako je Creaktivní protein) nebo opakovaným měřením kalprotektinu (pomocí ELISA, kat. č. EK-CAL, nebo pomocí druhé testovací kazety) a porovnáním s CDAI skóre a klinickým stavem pacienta, před tím, než je provedeno jakékoliv klinické a/nebo terapeutické rozhodnutí. Během sledování léčby může být výsledek toho testu interpretován srovnáním výsledku s předchozím a v souladu s klinickým stavem pacienta. INTERPRETACE VÝSLEDKŮ Stanovení fekálního kalprotektinu je spolehlivý a snadný způsob jak odlišit organické a funkční gastrointestinálních onemocnění. Interpretace výsledků: Hodnoty pod 50 µg/g: Hodnoty kalprotektinu <50 µg/g neznačí zánět gastrointestinálního traktu. U pacientů s nízkými hladinami kalprotektinu není pravděpodobně potřeba invazivních procedur ke stanovení příčiny zánětu. Zvýšené hodnoty mezi >50 a >200 µg/g: Hodnoty kalprotektinu mezi 50 a 200 µg/g mohou značit mírné organické onemocnění jako zánět způsobený NSAID, mírnou divertikulitidou a IBD ve fázi remise. Nízká zánětlivá reakce znázorněná v tomto rozsahu může značit opakování měření a provedení dalšího vyšetřování. Zvýšené hodnoty nad 200 µg/g: Hodnoty kalprotektinu > 200 µg/g: značí aktivní organické onemocnění zánětem v gastrointestinálním traktu. Jsou doporučena další vyšetření a léčebné postupy podle odborníků. CHARAKTERISTIKA PROVEDENÍ Limit pro blank (LoB): <20 μg/g kalprotektinu. Limit detekce (LoD): <30 μg/g kalprotektinu. Opakovatelnost: 20,1% CV. Opakovatelnost analýzy byla spočítána z osmi extrahovaných vzorků stolice. Průměrné hodnoty tří různých šarží testovacích kazet jsou představeny v (tabulka 11). Opakovatelnost se kolísá mezi 17,9-23,9% CV. Linearita: Tři extrahované vzorky stolice se zvýšenými koncentracemi kalprotektinu byly sériově naředěny „negativním extraktem stolice“. Každé ředění bylo následně testováno podle postupu testu. Výsledky vyobrazené linearity jsou v označeném měřicím rozsahu od 30 do 1000 µg/g pro všechny vzorky. 2

Porovnání metod: R = 0,94; y=1,05-3,91 µg/g

4

50 vzorků stolice v poznačeném měřicím rozsahu tohoto testu bylo analyzováno podle postupu testu a porovnáno s hodnotami získanými pomocí BÜHLMANN Calprotectin ELISA. Korelační data ukazuje obrázek 3. Kvantifikační limit (LoQ): Nízký LoQ: ≤30 µg/g kalprotektinu; vysoký LoQ ≥ 1000 µg/g kalprotektinu. LoQ byl stanoven pomocí 14 vzorků stolice. Výslednou přesnost ukazuje obrázek 2. Limit pro kvantifikaci koresponduje s koncentrací kalprotektinu s nepřesností pod 25% Cv umožňující kvantitativní měření v rozsahu od 30 (nízký LoQ) do 1000 µg/g (vysoký LoQ). PŘÍLOHA I TABULKY A OBRÁZKY Obrázek 1

1A

Výsledky testu

1B

1C

Přesnost (opakovatelnost)

Tabulka 11 Vzorek č. Vzorek 1 Vzorek 2 Vzorek 3 Vzorek 4 Vzorek 5 Vzorek 6 Vzorek 7 Vzorek 8 Obrázek 2

1D

Koncentrace (průměr µg/g) 24,2 32,9 51,0 93,7 298,7 305,9 509,7 662,1

kalprotektinu

Profil přesnosti

Opakovatelnost (CV) 23,5% 18,7% 17,9 % 18,3 % 19,7 % 18,2 % 23,9 % 20,6 % Obrázek 3

5

Porovnání metod

PŘÍLOHA II LITERATURA 1. Tibble JA et al.: Use of surrogate markers of inflammation and Rome criteria to distinguish organic from nonorganic intestinal disease. Gastroenterol 123, 450-460 (2002) 2. Fagerhol MK: Calprotectin, a faecal marker of organic gastrointestinal abnormality. Lancet 356, 1783-4 (2000) 3. Tibble JA et al.: A simple method for assessing intestinal inflammation in Crohn’s disease. Gut 47,506-513 (2000). 4. Konikoff MR and Denson LA: Role of fecal calprotec-tin as a biomarker of intestinal inflammation in inflam-matory bowel disease. Inflamm Bowel Dis 12(6), 524-34 (2006) 5. Jahnsen J, Røseth AG, Aadland E. Measurement of calprotectin in faeces.. Tidsskr Nor Legeforen 128, 743–5 (2008) PŘÍLOHA III SYMBOLY Symbol

Vysvětlení

Symbol

Vysvětlení

Použijte do

Konzultujte s návodem k použití

Katalogové číslo

Testovací kazeta

Šarže

Extrakční pufr

In vitro diagnostický prostředek

RFID čipová karta

Obsahuje testů

Teplotní omezení

6