Praktické cvičení č. 1.
Cvičení 1. 1. Všeobecné pokyny ke cvičení, zápočtu a zkoušce Bezpečnost práce 2. Mikroskopie - mikroskop a mikroskopická technika - převzetí pracovních pomůcek - pozorování trvalého preparátu a) příčný řez dřevem – Fraxinus excelsior L. (jasan ztepilý) - pozorování dočasného preparátu b) nativní preparát Saccharomyces cerevisiae - kvasinka pivní „pekařské droždí“, přímé pozorování v kapce vody c) vitální barvení preparátu Saccharomyces cerevisiae 0,5 % roztokem metylenové modři d) nativní preparát Saccharomyces ellipsoideus – kvasinka vinná
Pomůcky: nelinkovaný A4 sešit, tužka, propiska, pastelky (alespoň červená, zelená a hnědá), guma, žiletka, nechlupatící hadřík Protokol: Datum, zadání, poznámky k výkladu, vypracování Zápočet: Protokoly, 80 % docházka (cvičení cévní svazky, kořen, stonek, list povinné), praktická znalost Zkouška: Zápočet Znalost teoretická ze cvičení, přednášek, literatury Literatura: Procházka, S. a kol. (1998): Botanika , morfologie a fyziologie rostlin. MZLU Brno, 242 s. Kolařík, J. et al al.. (2005): Péče o dřeviny rostoucí mimo les – II., ČSOP Vlašim, 720 s.
Příprava dočasného preparátu Pracovní postup: - zhotovení mikroskopického řezu přesně orientovaného - tloušťka 1-2 buněčné vrstvy Orientace řezu: příčná
podélná
(=transverzální)
a/ radiální – prochází středem b/ tangenciální –mimo střed
Zalití řezu: pokládání krycího sklíčka pomocí preparační jehly Krycí sklíčko Podložní sklíčko
Řez v kapce vody
Preparační jehla
Pravidla: - podložní a krycí sklíčka musí být čistá a suchá - přebytek vody v preparátu – odsát filtračním papírem přiložením ke hraně krycího sklíčka, voda nesmí být na svrchní straně krycího sklíčka - nedostatek vody v preparátu – ke kraji krycího sklíčka přikápnout vodu Práce s mikroskopem - dbáme na správné osvětlení – seřídíme nastavením osvětlovací lampy, zrcátkem, kondenzorem, clonou, filtrem - preparát nejprve sledujeme při nejmenším zvětšení, potom nastavíme silnější objektiv - makrošroubem snížíme tubus, sledujeme jak se čočka objektivu blíží ke krycímu sklíčku, zvedáním tubusu potom zaostříme a doostříme mikrošroubem - dbát na to, aby pracovní stolek mikroskopu a optické části byly suché a nepolité chemikáliemi používanými k barvení preparátů! Vždy důkladně očistit!
Mikroskop: Části mechanické – tubus, pracovní stolek (7) s úchytkami a posunem preparátu posun vertikálně makrošroubem (5), mikrošroubem (6), stativ (rukojeť a podkova), posun kondenzoru, regulace osvětlení (3), clona (4) Části optické – okulár (1) výměna vysunutím, objektiv (2) - výměna otočením revolverového měniče, kondenzor, modrý filtr, zrcátko.
1
2
7 4
3 5 6
Příčný řez dřevem – Fraxinus excelsior L. (jasan ztepilý) - pozorování trvalého preparátu
Stavba dřeva kruhovitě pórovitá
hranice letokruhu letní dřevo letokruh jarní dřevo (velké cévy uspořádané do kruhu) dřeňové paprsky
Příčný řez dřevem – Fraxinus excelsior L. (jasan ztepilý) - pozorování trvalého preparátu Stavba dřeva kruhovitě pórovitá dřeňové paprsky
hranice letokruhu letní dřevo jarní dřevo
letokruh
(velké cévy uspořádané do kruhu)
dřeňové paprsky
Zhotovení nativního preparátu Saccharomyces cerevisiae - kvasinka pivní a přímé pozorování v kapce vody Na podložní sklo dáme do kapky vody kapku kvasnic smíchaných s vodou a trochou cukru. Zakryjeme krycím sklem a budeme sledovat pod mikroskopem při malém a velkém zvětšení: Kvasinky jsou jednobuněčné, oválné organismy. Rozmnožují se pučením (vegetativní rozmnožování).
V preparátu probíhá kvašení, které se projevuje unikáním CO2 (bublinky) C6H12O6 -> 2C2H5OH + CO2 + 100,4kJ
Barvení preparátu Saccharomyces cerevisiae (vitální barvení) - přikápneme k hraně krycího skla kapku 0,5 % roztoku methylenové modři a prosajeme filtračním papírem. Výsledné zjištění: Mrtvé buňky budou tmavě modře zbarvené, živé buňky budou nezbarvené.
Saccharomyces ellipsoideus – kvasinka vinná kvasinka
rafid
