PEMERIKSAAN KADAR PIRAZINAMIDA DALAM PLASMA DARAH PASIEN TB MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI
SKRIPSI
OLEH: KHAIRUSSAADAH NIM 071524035
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN 2010
Universitas Sumatera Utara
PEMERIKSAAN KADAR PIRAZINAMIDA DALAM PLASMA DARAH PASIEN TB MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI
SKRIPSI
Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara
OLEH: KHAIRUSSAADAH NIM 071524035
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN 2010
Universitas Sumatera Utara
LEMBAR PENGESAHAN SKRIPSI PEMERIKSAAN KADAR PIRAZINAMIDA DALAM PLASMA DARAH PASIEN TB MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI OLEH: KHAIRUSSAADAH NIM 071524035 Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara Pada Tanggal: Agustus 2010 Pembimbing I,
Panitia Penguji,
(Dr. Karsono, Apt.) NIP 19540909198201 1 001
(Prof. Dr. Urip Harahap, Apt.) NIP 19530101198303 1 004
Pembimbing II,
(Prof. Dr. M. Timbul Simanjuntak, M.Sc., Apt.) NIP 19521204198002 1 001
(Dr. Karsono, Apt.) NIP 19540909198201 1 001
(Dr. Edy Suwarso, SU., Apt.) NIP 130935857
(Drs. Muchlisyam, M.si., Apt) NIP 19500622198002 1 001 Medan, Agustus 2010 Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara Dekan,
(Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra., Apt.) NIP. 19531128198303 1 002
Universitas Sumatera Utara
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur alhamdulilah kepada Allah SWT yang senantiasa telah melimpahkan anugerah dan kemurahanNya serta kemudahan sehingga peneliti dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul "Pemeriksaan Kadar Pirazinamida Dalam Plasma Darah Pasien TB Menggunakan kromatografi Cair Kinerja Tinggi". Skripsi ini diajukan sebagai salah satu syarat guna memperoleh gelar Sarjana Farmasi dari Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara. Salah satu penyakit penyebab kematian utama yang disebabkan oleh infeksi, adalah tuberkulosis (TB). TB merupakan ancaman bagi penduduk Indonesia dan dunia. Pada tahun 2004, sebanyak seperempat juta orang bertambah penderita baru dan sekitar 140.000 kematian setiap tahunnya. Peningkatan jumlah penderita disebabkan oleh berbagai faktor, yakni kurangnya tingkat kepatuhan penderita untuk berobat dan meminum obat, harga obat yang mahal, timbulnya resistensi ganda, kurangnya daya tahan hospes terhadap mikobakteria, berkurangnya daya bakterisid obat yang ada, meningkatnya kasus HIV/AIDS dan krisis ekonomi. Penyebab utama terjadinya kegagalan pengobatan tuberkulosis adalah penderita tidak mematuhi ketentuan dan lamanya pengobatan secara teratur untuk mencapai kesembuhan. Pirazinamida digunakan dalam fase pengobatan awal untuk aktivitas bakterisidnya. Pirazinamida merupakan suatu obat garis depan yaitu sebagai agen “sterilisator” aktif untuk melawan sisa-sisa organisme intraseluler yang dapat mengakibatkan kekambuhan Tujuan penelitian ini adalah untuk memeriksa kadar pirazinamida dalam plasma darah pasien TB. Hasil penelitian ini diharapkan dapat digunakan sebagai uji pendahuluan untuk kepentingan pemantauan terapi obat dalam darah pasien yang berpenyakit TB guna membantu dalam penyesuaian dosis obat sehingga diperoleh pengobatan yang optimal. Pada kesempatan ini peneliti hendak menyampaikan rasa hormat dan terimakasih yang sebesar-besarnya kepada Bapak Dr. Karsono, Apt., dan Bapak Prof. Dr. M. Timbul Simanjuntak, M.Sc., Apt., yang telah banyak memberikan bimbingan dan bantuan selama penelitian dan penulisan skripsi ini berlangsung. Ucapan terimakasih juga peneliti sampaikan kepada Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara
Universitas Sumatera Utara, Bapak Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt., yang telah memberikan fasilitas selama masa pendidikan dan penelitian, juga kepada Bapak Prof. Dr. Urip Harahap, Apt., Bapak Dr. Edy Suwarso, SU., Apt, dan Bapak Drs. Muchlisyam, M.si., Apt., selaku dosen penguji yang telah memberikan masukan dalam penyusunan skripsi ini. Dalam kesempatan ini, peneliti ingin menyampaikan rasa terimakasih dan penghargaan yang tulus kepada kedua orang tua, kakak, abang dan adik-adikku, serta keponakanku (caca) atas doa, semangat, dan dorongan dalam menyelesaikan skripsi ini. Juga kepada Fenti, Suji, Desi Dewi, Anggel, Yuli, dan Bang Anton, yang selalu ada memberi semangat dan pikiran selama penelitian dan penyusunan skripsi ini. Tidak lupa peneliti ingin mengucapkan terimakasih kepada para sahabat Hani, Delly, Desi, Evi, Riza, Reni, Rena dan rekan-rekan mahasiswa Farmasi khususnya stambuk 2007 ekstensi, staf dan para asisten di Laboratorium Biofarmasi dan Laboratorium Penelitian serta semua pihak ang telah membantu, yang tidak dapat disebutkan namanya satu persatu, atas segala dorongan motivasi dan bantuannya kepada peneliti sehingga skripsi ini dapat selesai .
Peneliti mengharapkan kritik dan saran yang membangun dari semua pihak guna perbaikan skripsi ini. Akhirnya peneliti berharap semoga Skripsi ini dapat menjadi sumbangan yang berarti bagi ilmu pengetahuan pada umumnya dan ilmu farmasi pada khususnya.
Medan, Agustus 2010
Peneliti, Khairussaadah
Universitas Sumatera Utara
PEMERIKSAAN KADAR PIRAZINAMIDA DALAM PLASMA DARAH PASIEN TB MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI
Abstrak Tuberkulosis, singkatnya TB, adalah suatu penyakit menular yang disebabkan oleh Mycobacterium tuberculosis. Pirazinamida merupakan obat garis depan yang penting digunakan bersama isoniazid dan rifampisin dalam pemberian jangka pendek. Kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) fase terbalik dengan deteksi ultraviolet merupakan metode yang dilakukan untuk pemeriksaan kadar pirazinamida dalam plasma. Obat dideteksi pada panjang gelombang 254 nm. Pemeriksaan dilakukan pada kolom ODS-C18 dan sistem elusi isokromatik. Fase gerak terdiri dari buffer fosfat pH 7,4 dan metanol (96,8:3,2 v/v) dan dielusi pada laju alir 0,8 ml/menit. Pirazinamida terelusi pada waktu retensi 21,663 menit. Sedangkan batas deteksi dan batas kuantifikasi berturut-turut adalah 2,8475 mM dan 8,6288 mM. Kalibrasi dan analisis dilakukan berdasarkan pada perbandingan luas puncak antara bahan obat yang terukur oleh detektor vs konsentrasi bahan obat untuk memperoleh garis regresi. Kurva kalibrasi linear pada jarak konsentrasi 4,0614 – 10,0723 mM dengan persamaan regresinya yaitu: y = 453189,0032x 1668790,0151 sehingga diperoleh koefisien korelasi (r) : 0,9567. Berdasarkan pemeriksaan ini, maka kadar pirazinamida dalam plasma darah pasien teberkulosis adalah sebesar 10,6136 mM.
Kata kunci: Pemeriksaan, Pirazinamida, KCKT fase terbalik
Universitas Sumatera Utara
EXAMINATION OF PIRAZINAMIDA IN BLOOD PLASMA TUBERCULOSIS PATIENT BY HIGHT PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY
Abstract Tuberculosis or TB, is a spread diases by infection the Mycobacteria tuberculosis. Pyrazinamide is the first drug important used with isoniazid and rifampin in short treatment. A reversed-phase high performance liquid chromatography (HPLC) method with ultraviolet detection was developed for the examination of pyrazinamide level in plasma. Drug were detected at 254 nm. The separation was performance on ODS-C18 colomn and an isokromatic programe. Mobile phase composed of phosphate buffer pH 7,4 and methanol (96,8:3,2 v/v) and eluated at 0,8 ml/min. Pyrazinamide was eluted at 21,663 min. Limit detection and limit of quantitation are 2,8475 mM and 8,6288 mM respectively. Calibration and analysis is based on peak area pyrazinamide was detected vs drugs concentration be obtain the linear regression. The curve was linear over the range 4,0614 – 10,0723 mM with regression equation: y = 453189,0032x 1668790,0151 wiht the result correlation coefficient (r) = 0,9567. Based on this examination, the level of pyrazinamide in blood plasma tuberculosis patient is 10,6136 mM.
Keywords: Examination, Pyrazinamide, Reversed phase HPLC
Universitas Sumatera Utara
DAFTAR ISI
Halaman JUDUL .........................................................................................................
i
HALAMAN JUDUL ...................................................................................
ii
LEMBAR PENGESAHAN ........................................................................
iii
KATA PENGANTAR.................................................................................
iv
ABSTRAK ...................................................................................................
vi
ABSTRACT .................................................................................................
vii
DAFTAR ISI................................................................................................
viii
DAFTAR GAMBAR...................................................................................
xi
DAFTAR LAMPIRAN ...............................................................................
xii
BAB I
PENDAHULUAN.........................................................................
1
1.1 Latar Belakang .........................................................................
1
1.2 Perumusan Masalah .................................................................
4
1.3 Hipotesis...................................................................................
4
1.4 Tujuan Penelitian .....................................................................
5
1.5 Manfaat Penelitian ...................................................................
5
1.6 Alur Penelitian .........................................................................
5
1.7 Kerangka Penelitian ................................................................
6
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ...............................................................
7
2.1 Tuberkulosis.............................................................................
7
2.2 Pirazinamida.............................................................................
9
2.3 Darah dan Plasma.....................................................................
10
Universitas Sumatera Utara
2.4 Pemantauan Terapi Obat ..........................................................
12
2.5 Kromatografi ............................................................................
14
2.5.1 Pembagian Kromatografi ......................................................
15
2.5.2 Tujuan Kromatografi.............................................................
15
2.5.2.1 Analisis Kualitatif .....................................................
16
2.5.2.2 Analisis Kuantitatif ...................................................
17
2.6 Kromatografi Cair Kinerja Tinggi KCKT................................
19
2.6.1 Cara kerja KCKT ............................................................
20
2.6.2 Komponen KCKT ...........................................................
20
2.6.2.1 Wadah fase gerak ............................................. ..
21
2.6.2.2 Pompa................................................................
22
2.6.2.3 Injektor ..............................................................
23
2.6.2.4 Kolom................................................................
24
2.6.2.5 Fase Diam .........................................................
25
2.6.2.6 Detektor.............................................................
25
2.6.2.7 Komputer, integrator, atau recorder ..................
26
BAB III METODOLOGI PENELITIAN .................................................
27
3.1 Alat...........................................................................................
27
3.2 Bahan .......................................................................................
27
3.3 Pengambilan Sampel................................................................
28
3.4 Rancangan Penelitian ...............................................................
28
3.4.1 Penyiapan Bahan.............................................................
28
3.4.1.1 Pembuatan Plasma Darah Pasien TB ..................
28
3.4.1.2 Pembuatan Plasma Kontrol .................................
28
Universitas Sumatera Utara
3.4.1.3 Pembuatan Pereaksi ............................................
29
3.4.1.3.1 Aqua Bebas CO2 ..................................
29
3.4.1.3.2 Natrium Hidroksida 0,2N.....................
29
3.4.1.3.3 Kalium Dihidrogen Fosfat 0,2M ..........
29
3.4.1.3.4 Buffer Fosfat pH 7,4 ............................
29
3.4.1.4 Pembuatan Fase Gerak........................................
29
3.4.1.5 Pembuatan Larutan Induk Baku Pirazinamida....
30
3.4.2 Prosedur Analisis .........................................................
30
3.4.2.1 Penyiapan Alat KCKT .....................................
30
3.4.2.2 Penentuan Garis Alas (Base Line)....................
30
3.4.2.3 Penyuntikan Fase Gerak...................................
30
3.4.2.4 Penyuntikan Plasma Kontrol............................
31
3.4.2.5 Analisis Kualitatif ............................................
31
3.4.2.6 Analisis Kuantitatif ..........................................
31
3.4.2.6.1 Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi Baku Pembanding Pirazinamida .......
31
3.4.2.6.2 Pemeriksaan Kadar Pirazinamida Dalam Plasma Darah Pasien TB .......
32
3.4.3 Penentuan Batas Deteksi dan Batas Kuantifikasi.........
33
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................
34
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .................................................
38
5.1 Kesimpulan ...........................................................................
38
5.2 Saran......................................................................................
38
DAFTAR PUSTAKA ...............................................................................
39
LAMPIRAN..............................................................................................
41
Universitas Sumatera Utara
DAFTAR GAMBAR
Gambar
Halaman
2.1
Rumus bangun pirazinamida..........................................................
9
2.2
Pengukuran tinggi puncak..............................................................
17
2.3
Sistem KCKT isokratik ..................................................................
21
2.4
Kromatogram .................................................................................
26
4.1
Kromatogram Hasil Penyuntikan Pirazinamida Baku ...................
34
4.2
Kromatogram Hasil Penyuntikan Sampel Plasma Pasien TB........
35
4.3
Kurva Kalibrasi Pirazinamida Baku Luas Puncak Vs Konsentrasi ...............................................................................
36
Universitas Sumatera Utara
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran
Halaman
1
Gambar Alat KCKT dan Syringe 50 μl.......................................... 41
2
Gambar Perangkat Penelitian Lainnya........................................... 42
3
Plasma Kontrol............................................................................... 45
4
Fase Gerak ..................................................................................... 46
5
Kromatogram Penyuntikan Larutan Pirazinamida Baku Fase Gerak Buffer Fosfat pH 7,4 : Metanol (96,8 : 3,2) ............... 47
6
Kromatogram Penyuntikan Plasma Kontrol ................................. 48
7
Kromatogram Penyuntikan Sampel Plasma Darah pasien TB .................................................. 49
8
Kromatogram Penyuntikan Larutan Pirazinamida Baku pada Pembuatan Kurva Kalibrasi ............................................. 50
9
Perhitungan Persamaan Regresi dan Kurva Kalibrasi Pirazinamida Baku yang Diperoleh Secara KCKT pada λ 254 nm....................................... 55
10
Perhitungan Konsentrasi Obat Pirazinamida dalam Plasma Pasien TB......................................... 57
11
Perhitungan Limit of Detection (LOD) dan Limit of Quantitation (LOQ) Pirazinamida Baku ....................... 58
12
Data Pasien.................................................................................... 59
13
Sertifikat Analisis Pirazinamida.................................................... 60
14
Surat Persetujuan Komisi Etik ...................................................... 61
15
Pembuatan Plasma dari Sampel Darah Pasien TB ........................ 62
16
Pembuatan Plasma Kontrol .......................................................... 63
17
Pembuatan Larutan Induk Pirazinamida Baku.............................. 64
18
Penyuntikan Plasma Kontrol ........................................................ 65
Universitas Sumatera Utara
19
20
Pembuatan Linieritas Kurva Kalibrasi Pirazinamida Baku ........................................................................
66
Pemeriksaan Kadar Pirazinamida dalam Plasma Darah Pasien TB...............................................................
67
Universitas Sumatera Utara
