VALIDASI METODE PENETAPAN KADAR KLORAMFENIKOL MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI DAN APLIKASINYA DALAM SEDIAAN TETES MATA
SKRIPSI
Oleh : Salamah Farichatus Sa’diyah 115010701
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS WAHID HASYIM SEMARANG 2016 1
VALIDASI METODE PENETAPAN KADAR KLORAMFENIKOL MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI DAN APLIKASINYA DALAM SEDIAAN TETES MATA
SKRIPSI
diajukan untuk memenuhi salah satu syarat dalam mencapai derajat Sarjana Farmasi Program Studi Ilmu Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang
Oleh : Salamah Farichatus Sa’diyah 115010701
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS WAHID HASYIM SEMARANG 2016
i
ii
PENGESAHAN SKRIPSI Berjudul VALIDASI METODE PENETAPAN KADAR KLORAMFENIKOL MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI DAN APLIKASINYA DALAM SEDIAAN TETES MATA
Oleh : Salamah Farichatus Sa’diyah 115010701
Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang Pada tanggal :
Mengetahui : Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang Pembimbing Utama,
(Dr. Sumantri, M.Sc., Apt) M.Si., Apt)
Pembimbing Pendamping,
Dekan,
(Sri Susilowati, S.Si.,
iii
SURAT PERNYATAAN Yang bertanda tangan di bawah ini : Nama
: Salamah Farichatus Sa’diyah
NIM
: 115010701
Judul Skripsi
:
Validasi Metode Kloramfenikol
Penetapan
Kadar
Menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Dan Aplikasinya Dalam Sediaan Tetes Mata Menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu perguruan tinggi dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain kecuali yang secara tertulis digunakan sebagai acuan dalam naskah dan disebutkan dalam pustaka. Demikian surat pernyataan ini saya buat untuk dapat digunakan sebagaimana mestinya.
Semarang,
Salamah Farichatus Sa’diyah
iii
iv
MOTTO DAN PERSEMBAHAN
Man Jadda Wajadda (Siapa yang bersungguh-sungguh pada suatu hal niscaya akan mendapatkan apa yang diinginkan) (Negeri Lima Menara)
Alhamdulillahirobbil’alamin, sujud syukur kehadirat Ilahi Robbi atas segala nikmat yang telah diberikanNya. Karya tulis ini penulis persembahkan kepada : Bapak dan ibu tercinta yang tidak pernah berhenti memberikan doa, motivasi dan kasih sayangnya Saudara-saudaraku yang selalu mendukungku
iv
v
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum Wr.Wb. Alhamdulillah segala puji dan syukur hanyalah milik Allah SWT karena atas rahmat, ridho dan hidayahNya yang telah dilimpahkan selama ini sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Validasi Metode Penetapan Kadar Kloramfenikol Menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi dan Aplikasinya Dalam Sediaan Tetes Mata”. Sholawat dan salam selalu tercurah kepada junjungan Nabi Agung Muhammad SAW. Skripsi ini disusun dalam rangka memenuhi tugas akhir sebagai persyaratan memperoleh gelar sarjana Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang. Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini terdapat banyak kekurangan dan masih jauh dari sempurna. Dalam penulisan skripsi ini tidak terlepas dari bantuan dan dukungan berbagai pihak. Untuk itu penulis ingin mengucapkan terima kasih sebesar-besarnya kepada : 1.
Ibu Sri Susilowati, S.Si., M.Si., Apt selaku dekan Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang.
2.
Bapak Dr. Sumantri, M.Sc., Apt. dan Ibu Aqnes Budiarti, SF., M.Sc., Apt. selaku pembimbing utama yang telah bersedia meluangkan waktu, tenaga, dan pikiran untuk memberikan bimbingan dan pengarahan dalam penyusunan skripsi ini.
v
vi
3.
Bapak Drs. H. Ibrahim Arifin, M.Sc., Apt dan Ibu Maria Ulfah, S.Farm. , M.Sc., Apt selaku penguji skripsi atas saran, masukan dan koreksi terhadap skripsi ini.
4.
Dosen-dosen Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang yang telah memberikan bekal ilmu pengetahuan sebagai dasar penulisan skripsi ini.
5.
Pimpinan dan staf Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang yang telah membantu pelaksanaan penelitian ini.
6.
PT. Phapros yang telah memberikan bantuan bahan untuk penelitian ini.
7.
Teman satu tim Alfi Imanuha Choiro yang telah berjuang bersama dalam melakukan penelitian ini.
8.
Sahabat-sahabatku serta teman-teman Pondok Pesantren Luhur Wahid Hasyim atas motivasi, pelajaran, pengalaman dan kebersamaan yang kalian berikan.
9.
Semua pihak yang telah membantu penelitian dan penyusunan skripsi ini. Semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi masyarakat, bagi
perkembangan ilmu kefarmasian pada khususnya dan ilmu pengetahuan pada umumnya. Wassalamu’alaikum Wr.Wb.
Semarang,
Penulis vi
vii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ............................................................................
i
PENGESAHAN SKRIPSI ...................................................................
ii
SURAT PERNYATAAN .....................................................................
iii
HALAMAN PERSEMBAHAN ..........................................................
iv
KATA PENGANTAR ..........................................................................
v
DAFTAR ISI .........................................................................................
vii
DAFTAR TABEL ................................................................................
x
DAFTAR GAMBAR ............................................................................
xi
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................
xii
INTISARI .............................................................................................
xiii
ABSTRACT ..........................................................................................
xiv
BAB I. PENDAHULUAN ....................................................................
1
A. Latar Belakan Masalah ........................................................
1
B. Perumusan Masalah .............................................................
3
C. Tujuan Penelitian .................................................................
3
D. Pentingnya Skripsi Diusulkan .............................................
4
E. Tinjauan Pustaka .................................................................
4
1. Kloramfenikol ...............................................................
4
2. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) ..................
6
3. Validasi ..........................................................................
11
a. Presisi (ketelitian) ....................................................
11
vii
viii
b. Akurasi (ketepatan) .................................................
12
c. Linieritas ..................................................................
13
d. Selektivitas ..............................................................
13
e. Sensitivitas ..............................................................
14
4. Sediaan tetes mata .........................................................
15
F. Landasan Teori ....................................................................
16
G. Hipotesis ..............................................................................
17
BAB II. METODE PENELITIAN ......................................................
19
A. Alat dan Bahan ....................................................................
19
1. Alat ................................................................................
19
2. Bahan .............................................................................
19
B. Jalannya Penelitian ..............................................................
20
1. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum .................
20
2. Pembuatan Komposisi Fase Gerak ................................
20
3. Pembuatan Lartutan Stok Baku Kloramfenikol ............
20
4. Pembuatan Kurva Baku .................................................
20
5. Uji Validasi ...................................................................
21
a. Uji Presisi (ketelitian) ..............................................
21
b. Uji Akurasi (ketetapan) ...........................................
21
c. Uji Linieritas ...........................................................
22
d. Uji Selektivitas ........................................................
22
e. Uji Sensitivitas ........................................................
23
viii
ix
6. Penetapan Kadar Kloramfenikol dalam Sediaan Tetes Mata .............................................
24
C. Skema Jalannya Penelitian ..................................................
25
BAB III. HASIL PENELTIAN DAN PEMBAHASAN ....................
26
A. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum .......................
26
B. Optimasi Komposisi Fase Gerak .........................................
27
C. Pembuatan Kurva Baku Kloramfenikol ..............................
28
D. Validasi Metode Meliputi: ..................................................
29
1. Presisi (ketelitian) ..........................................................
29
2. Akurasi (ketepatan) .......................................................
30
3. Selektivitas ....................................................................
32
4. Linieritas ........................................................................
33
5. Sensitivitas ....................................................................
34
E. Penetapan Kadar Kloramfenikol Dalam Sediaan Tetes Mata ...........................................................................
35
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN .............................................
37
A. Kesimpulan ..........................................................................
37
B. Saran ....................................................................................
38
DAFTAR PUSTAKA ...........................................................................
39
LAMPIRAN ..........................................................................................
41
ix
x
DAFTAR TABEL
Tabel I.
Hasil Optimasi Komposisi Fase Gerak .....................................
27
Tabel II.
Hasil Kurva Baku Kloramfenikol Secara KCKT ...................... 28
Tabel III.
Hasil Uji Presisi Kloramfenikol ................................................
Tabel IV.
Hasil Uji Akurasi (Ketepatan) Kloramfenikol Dengan Metode
30
Penambahan Baku (Standard Addition Method.) ...................... 31 Tabel V.
Hasil Uji Linieritas Kloramfenikol Dengan Konsentrasi 20-60 µg/mL .........................................................
Tabel VI.
33
Hasil Uji Penetapan Kadar Kloramfenikol Dalam Sediaan Tetes Mata .................................................................................
x
35
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1.
Struktur Kimia Kloramfenikol ...............................................
5
Gambar 2.
Skema Komponen KCKT .......................................................
7
Gambar 3.
Skema Jalannya Penelitian .....................................................
25
Gambar 4.
Hasil Scanning Panjang Gelombang Kloramfenikol Menggunakan Spektrofotometri UV ......................................
26
Gambar 5.
Kromatogram Hasil Optimasi Komposisi Fase Gerak .........
27
Gambar 6.
Grafik Hasil Kurva Baku Kloramfenikol ................................ 29
Gambar 7.
Kromatogram Kloramfenikol Dalam Sediaan Tetes Mata Dengan Fase Gerak Air : Metanol : Asam Asetat Glasial (40:60:0,1, v/v) Dengan Laju Alir 1 mL/menit ......................
Gambar 8.
32
Hubungan linier antara konsentrasi kloramfenikol terhadap Luas area ................................................................................
xi
34
xii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1.
Kromatogram Larutan Baku Kloramfenikol ........................
Lampiran 2.
Contoh Perhitungan Perolehan Kembali Kloramfenikol
42
Dengan Metode Standard Addition Method ......................... 44 Lampiran 3.
Perhitungan LOD Dan LOQ Kloramfenikol ........................
46
Lampiran 4.
Kromatogram Contoh Sampel Kloramfenikol .....................
49
Lampiran 5.
Contoh Perhitungan Kadar Tetes Mata Kloramfenikol ....... 50
Lampiran 6.
Instrumen KCKT ..................................................................
Lampiran 7.
Certificate of Analysis Kloramfenikol .................................. 52
xii
51
xiii
INTISARI
Kloramfenikol merupakan antibiotik spektrum luas yang bekerja menghambat sintesis protein kuman. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk melakukan validasi metode penetapan kadar kloramfenikol dalam sediaan tetes mata dan mengetahui apakah hasil penetapan kadar menggunakan metode tersebut memenuhi persyaratan Farmakope Edisi IV (1995). Penetapan kadar kloramfenikol dalam sediaan tetes mata menggunakan alat KCKT yang dilengkapi dengan detektor UV-Vis pada panjang gelombang 280 nm. Fase diam yang digunakan yaitu C18 dan fase gerak berupa campuran air : metanol : asam asetat glasial (40:60:0,1, v/v) dengan laju alir 1 mL/menit. Uji validasi meliputi presisi, akurasi, selektivitas, linieritas dan sensitivitas. Hasil penelitian menunjukkan bahwa parameter validasi memenuhi persyaratan yaitu: uji presisi menghasilkan RSD 0,00,038%, uji akurasi menghasilkan perolehan kembali 99,90-105,52%, selektivitasnya baik, uji linieritas dengan nilai korelasinya (r) 0,9935 pada kisaran konsentrasi 20-120 µg/mL, uji sensitivitas menghasilkan LOD dan LOQ sebesar 13,55 µg/mL dan 45,17 µg/mL. Kadar ratarata kloramfenikol dalam sediaan tetes mata adalah 95,91%, dan memenuhi persyaratan kadar menurut Farmakope Indonesia Edisi IV.
Kata kunci : validasi, kloramfenikol, KCKT, sediaan tetes mata.
xiii
xiv
ABSTRACT Chloramphenicol is a broad-spectrum antibiotic that inhibit protein synthesis of bacteria. The purpose of this study was to validate the assay methods in the preparation of chloramphenicol eye drops and determine whether the results of the assay using the method meets the requirements of Pharmacopoeia fourth edition (1995). Determination of chloramphenicol eye drops HPLC instrument equipped with a UV-Vis detector at a wavelength of 280 nm . The stationary phase used is C18 and the mobile phase is a mixture of water:methanol:glacial acetic acid (40:60:0.1,v/v) with a flow rate of 1 mL/min. Validation test include precision, accuracy, selectivity, linearity and sensitivity . The results showed that the parameter validation meet the requirements. Precision test generates RSD 0.0 to 0.038% , the accuracy of the test resulted in recoveries from 99.90 to 105.52%, good selectivity, linearity test with a correlation (r) 0.9935 on the concentration range of 20-120 mg/mL, test sensitivity produce LOD and LOQ of 13.55 µg/mL and 45.17 µg/mL. Average level of chloramphenicol eye drops is 95.91%, and meet the requirements of levels according to the Indonesian Pharmacopoeia Edition IV . Keywords : validation , chloramphenicol , HPLC , eye drops
xiv
