PENETAPAN KADAR CIPROFLOXACIN DALAM SEDIAAN KAPLET DENGAN NAMA DAGANG DAN GENERIK SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI SKRIPSI OLEH:

PENETAPAN KADAR CIPROFLOXACIN DALAM SEDIAAN KAPLET DENGAN NAMA DAGANG DAN GENERIK SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI

SKRIPSI

OLEH: FAHMA SARI NIM: 071524022

PROGRAM EKSTENSI SARJANA FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN 2009

Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

KATA PENGANTAR Puji dan syukur

kepada ALLAH SWT yang senantiasa memberikan

rahmat dan kasih karunia-Nya sehingga penulis dapat meyelesaikan praktikum biofarmasi dan penulisan Skripsi ini. Melalui tulisan ini penulis mengucapkan terima kasih yang sebesarbesarnya kepada: 1. Prof.Dr.Effendy De Lux PutraSU.,Apt selaku pembimbing I yang telah membimbing saya dari awal penelitian hingga selesainya skripsi ini. 2. Drs.Muchlisyam,Msi.,Apt selaku pembimbing II yang telah membimbing saya dari awal penelitian hingga selesainya skripsi ini. 3. Prof.Dr.Sumadio Hadisahputra,Apt selaku dekan Fakultas Farmasi USU, yang telah memberikan saya kesempatan untuk melakukan penelitian ini. 4. M.Akhir dan fatimah selaku orang tua saya yang selalu memberikan kasih sayang dan semangat buat saya dalam menyelesaikan skripsi ini. 5. Rekan-rekan mahasiswa jurusan Farmasi khususnya stambuk 2007 yang tidak dapat disebutkan satu per satu atas bantuan dan kerjasama yang baik sehingga dapat menyelesaikan praktikum dan penulisan laporan ini. Akhirnya penulis berharap semoga Skripsi ini dapat menjadi sumbangan yang berarti bagi ilmu pengetahuan pada umumnya dan ilmu farmasi pada khususnya.

Medan, Agustus 2009

(Fahma Sari) Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

Penetapan kadar Ciprofloxacin dalam sediaan kaplet dengan nama dagang dan generik secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Abstrak Ciprofloxacin

adalah

antibiotik

yang

berasal

dari

golongan

Fluoroquinolon. Ciprofloxacin diindikasikan untuk pengobatan infeksi saluran kemih yang disebabkan oleh kuman - kuman yang multi resisten dan Pseudomonas Auroginosa. Kadarnya dapat ditentukan secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Dalam penelitian ini dilakukan penetapan kadar Ciprofloxacin dalam sediaan kaplet dengan nama dagang dan generik secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi ( KCKT ) metode fase balik menggunakan kolom VP-ODS ( 4,6 mm x 25 cm ), fase gerak yang digunakan campuran larutan asam fosfat 0,025 M : Acetonitril ( 80:20 ), laju alir 1,5 ml/menit dan pengukuran dilakukan pada panjang gelombang 278 nm. Hasil uji identifikasi yang dilakukan terhadap Ciprofloxacin HCl BPFI, kaplet Ciprofloxacin dengan nama dagang dan generik diperoleh puncak dengan waktu tambat rata-rata 2,9 menit. Luas puncak dengan konsentrasi, pada berbagai konsentrasi dengan koefisien korelasi (r) = 0,9993 dan dari hasil perhitungan diperoleh persamaan regresi Y = 76080,88 X + 2385291,75. Hasil penelitian diperoleh kadar Ciprofloxacin sebenarnya berdasarkan luas puncak dari sediaan kaplet dangan nama dagang produksi Industri Farmasi : 104,51 ± 1,37% ( PT. Indofarma ), 104,03 ± 0,52% ( PT. Novell ), 104,02 ± 0,33% ( Sanbe ), dan dengan dagang Floxigra 95,11 ± 0,02% ( PT. Grahafarma ), Floxifar 103,09 ± 1,12% ( PT. Ifars ), Lapiflok 105,25 ± 0,73% ( PT. Lapi ), Viflox 107,12 ± 0,89% ( PT. Tropicana Mas Pharmaceutical ). Kadar yang diperoleh dari hasil percobaan untuk sediaan kaplet yang ditentukan berdasarkan pengukuran luas puncak keseluruhannya memenuhi persyaratan kadar yang tertera dalam USP 30.

Kata Kunci : Ciprofloxacin, Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

The determine of Ciprofloxacin grade in caplet with brand and generic name by High Performance Liquid Chromatography.

Abstract Ciprofloxacin is an antibiotic of fluoroquinolon group. Ciprofloxacin is indicated to cure track infection caused by bacterials, that multi resisten and Pseudomonas Auroginosa, the grade could be determined by high performance liquid chromatography. This research is done determine grade of Ciprofloxacin in caplet with brand and generic name by high performance liquid chromatography, ( KCKT ) with reverse phase method use column VP-DOS ( 4,6 mm x 25 cm ) mobile phase is used mix phosfat acid 0,025 M : Acetonitril ( 80:20 ) , Flow rate 1,5 ml/menit and measuring is done at λ ; 278 nm. The result of identification test is done for Ciprofloxacin HCl BPFI caplet Ciprofloxacin with brand and generic name is gotton peak with retention time average 2,9 minutes. Peak area with concentration at several concentration with coorelation coefision (r) = 0,9993 and the result of account is gotten regression aquation Y= 76080,88 X + 2385291,75. The result of research is gotten truly Ciprofloxacin grade base on peak are or caplet with generic pharmacy Industrial production : 104,51 ± 1,37% (PT. Indofarma), 104,03 ± 0,52% ( PT. Novel ), 104,02 ± 0,33% (PT. Sanbe ), and with brand name Floxigra 95,11 ± 0,02% ( PT. Graha farma ), Floxifar 103,09 ± 1,12% ( PT. Ifars ), Lapiflox 105,25 ± 0,739% ( PT. Lapi ) piflox 107,12 ± 0,89% ( PT. Tropica Mas Pharmaceutical ). The grade is gotten of practical result for tablet that determinedbased on measuring all peak area is suitable in USP 30 condition.

Key Words : Ciprofloxacin, High Performance Liquid Chromatography


DAFTAR ISI

Halaman

JUDUL ..................................................................................................

i

LEMBAR PENGESAHAN ...................................................................

ii

ABSTRAK.............................................................................................

iii

ABSTRACT ..........................................................................................

iv

DAFTAR ISI .........................................................................................

v

DAFTAR TABEL .................................................................................

vii

DAFTAR GAMBAR .............................................................................

viii

DAFTAR LAMPIRAN .........................................................................

xi

BAB I PENDAHULUAN ......................................................................

1

1.1

Latar Belakang .........................................................................

1

1.2

Perumusan Masalah ..................................................................

3

1.3

Hipotesis ..................................................................................

3

1.4

Tujuan ......................................................................................

3

1.5

Manfaat ....................................................................................

4

BAB II METODOLOGI PENELITIAN ..............................................

5

2.1 Waktu dan Tempat Penelitian ...................................................

5

2.2 Alat - alat .................................................................................

5

2.3 Bahan - bahan...........................................................................

5

2.4

Pengambilan Sampel dan Pengolahan Sampel ..........................

5

2.6 Pola Penelitian...........................................................................

6

2.5.1 Pembuatan Fase Gerak Asam Posfat 0,25 M : Acetonitrril .................................

6

2.5.2 Penyiapan Alat Kromatografi Cair Kinerja Tinggi ........

6


2.5.3 Penentuan Garis Alas ....................................................

6

2.5.4 Penentuan Kualitatif......................................................

6

2.5.5

7

Penentuan Kuantitatif.................................................... 2.5.5.1 Pembuatan Larutan Induk Baku Ciprofloxacin HCl BPFI .......................................

7

2.5.5.2 Pembuatan Kurva Kalibrasi Ciprofloxacin HCl BPFI .......................................

7

2.5.5.3 Penetapan Kadar Sampel ......................................

7

2.5.5.4 Penentuan Limit Of Detection (LOD) dan Limit Of Quantitation (LOQ) .........................

8

2.5.5.5 Analisa Statistik ...................................................

8

BAB III HASIL DAN PEMBAHASAN ...............................................

10

BAB IV KESIMPULAN DAN SARAN................................................

16

4.1 Kesimpulan ..............................................................................

16

4.2

Saran ........................................................................................

16

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................

17

LAMPIRAN ..........................................................................................

18


DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1 Nilai Qkritis pada Taraf Kepercayaan 99% ........................................

9

Tabel 2 Hasil Pengolahan Data dari Sediaan Tablet Ciprofloxacin ..............

14

Tabel 3 Data Kadar Ciprofloxacin dalam Sediaan Tablet dengan Nama Dagang dan Generik yang Ditentukan Berdasarkan Luas Puncak ....

15


DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1 Kromatogram dari Larutan Ciprofloxacin HCl BPFI pada Konsentrasi 200 mcg/ml yang dianalisa secara KCKT pada λ 278 nm, kolom VP – ODS (4,6 mm x 25 cm), Fase Gerak Larutan Asam Posfat pH 3 dan Acetonitril (80:20), Laju Alir 1,5 ml/menit ..............................................................

11

Gambar 2 Kurva Kalibrasi Ciprofloxacin HCl BPFI Konsentrasi versus Luas Puncak ...............................................

13


DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 Gambar Alat KCKT dan Syringe 100 µl ................................ 18

Lampiran 2

Gambar Alat ultrasonoc cleaner dan penyaring ...................... 19

Lampiran 3 Kromatogram dari Larutan Ciprofloxacin HCl BPFI Konsentrasi 200 mcg/ml, Fase Gerak Asam Posfat : Acetonitril (87:13) ........................................... 20

Lampiran 4 Kromatogram dari Larutan Ciprofloxacin HCl BPFI Konsentrasi 200 mcg/ml, Fase Gerak Asam Posfat : Acetonitril (80:20) ........................................... 21

Lampiran 5 Kromatogram dari Larutan Ciprofloxacin HCl BPFI Konsentrasi 50 mcg/ml .......................................................... 22

Lampiran 6 Kromatogram dari Larutan Ciprofloxacin HCl BPFI Konsentrasi 100 mcg/ml ........................................................ 22



Lampiran 9 Perhitungan Persamaan Regresi dari Kurva Kalibrasi Ciprofloxacin HCl BPFI yang Diperoleh seccara KCKT pada λ 278 nm ....................................................................... 24 Lampiran 10 Perhitungan Limit Of Detection (LOD) Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

dan Limit Of Quantitation (LOQ) Ciprofloxacin .................... 26

Lampiran 11 Kromatogram dari Larutan Tablet Ciprofloxacin (PT Indofarma) ...................................................................... 27

Lampiran 12 Analisa Data Statistik untuk Mencari Kadar Sebenarnya dari Penyuntikan Larutan Ciprofloxacin (PT Indofarma) secara KCKT ......................................................................... 30

Lampiran 13 Kromatogram dari Larutan Tablet Ciprofloxacin (PT Novell)

31

Lampiran 14 Analisa Data Statistik untuk Mencari Kadar Sebenarnya dari Penyuntikan Larutan Ciprofloxacin (PT Novell) secara KCKT ......................................................................... 34

Lampiran 15 Kromatogram dari Larutan Tablet Ciprofloxacin (PT Sanbe) . 35 Lampiran 16 Analisa Data Statistik untuk Mencari Kadar Sebenarnya dari Penyuntikan Larutan Ciprofloxacin (PT Sanbe) secara KCKT ......................................................................... 38

Lampiran 17 Kromatogram dari Larutan Tablet Floxigra (PT Graha Farma) ................................................................. 39

Lampiran 18 Analisa Data Statistik untuk Mencari Kadar Sebenarnya dari Penyuntikan Larutan Floxigra (PT Graha Farma) secara KCKT ......................................................................... 42

Lampiran 19 Kromatogram dari Larutan Tablet Floxifar (PT Ifars)............. 43

Lampiran 20 Analisa Data Statistik untuk Mencari Kadar Sebenarnya dari Penyuntikan Larutan Floxifar (PT Ifar) secara KCKT ......................................................................... 46 Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

Lampiran 21 Kromatogram dari Larutan Tablet Lapiflok (PT Lapi) ............ 47

Lampiran 22 Analisa Data Statistik untuk Mencari Kadar Sebenarnya dari Penyuntikan Larutan Floxifar (PT Lapi) secara KCKT ......................................................................... 50

Lampiran 23 Kromatogram dari Larutan Tablet Viflox (PT Tropika Mas Parmaceutikal) ........................................... 51

Lampiran 24 Analisa Data Statistik untuk Mencari Kadar Sebenarnya dari Penyuntikan Larutan Viflox (PT Tropika Mas Parmaceutical ) .......................................... 54 secara KCKT

Lampiran 25 Contoh Perhitungan Penimbangan Sampel............................. 55

Lampiran 26 Contoh Perhitungan Mencari Kadar Ciprofloxacin................. 56

Lampiran 27 Daftar Spesifikasi Sampel ..................................................... 57


BAB I PENDAHULUAN

I.1.

Latar Belakang Antibiotik adalah zat-zat kimia yang dihasilkan oleh fungi dan bakteri

yang memiliki khasiat mematikan atau menghambat pertumbuhan kuman, sedangkan toksisitasnya bagi manusia relatif kecil. Menurut USP 30 (2007) kaplet Ciprofloxacin ditentukan secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi menggunakan kolom VP-ODS (4,6mm x 25cm) Dengan fase gerak campuran asam fosfat dan asetonitril (87:13) volume penyuntikan 10 µl dan deteksi dilakukan pada panjang gelombang 278 nm. Masih adanya anggapan masyarakat yang cenderung menilai kualitas obat dengan melihat harganya, dimana mereka beranggapan bahwa obat yang mahal lebih baik kualitasnya dibandingkan obat yang murah harganya. Untuk mengatasi hal tersebut, Departemen kesehatan telah menetapkan peningkatan penggunaan obat generik yang didukung dengan peraturan mentri kesehatan NO. 085/Menkes/Per/I/1989, tanggal 28 januari 1989 tentang kewajiban menulis resep dan atau menggunakan obat generik di fasilitas pelayanan kesehatan pemerintah. (Depkes, 1989) Kromatografi cair kinerja tinggi merupakan sistem pemisahan dengan kecepatan dan efisiensi yang tinggi karena didukung oleh kemajuan dalam teknologi kolom, sistem pompa tekanan tinggi, dan detektor yang sangat sensitif dan beragam sehingga mampu menganalisa berbagai cuplikan secara kualitatif


maupun kuantitatif, baik dalam komponen tunggal maupun campuran. (Ditjen POM, 1995 ) Persyaratan kadar untuk sediaan kaplet Ciprofloxacin menurut USP 30 yaitu mengandung Ciprofloxacin tidak kurang dari 90,0 % dan tidak kebih dari 110,0% dari jumlah yang tertera pada etiket. Berdasarkan hal tersebut diatas, peneliti tertarik menggunakan metode KCKT menggunakan kolom shimpack VP-ODS (4,6mm x 25cm),dengan memodifikasi fase gerak asam fosfat dan asetonitril,

untuk menetapkan kadar

Ciprofloxacin dalam sediaan kaplet dengan nama dagang dan generik yang beredar dipasaran dan membandingkan hasil yang diperoleh dengan persyaratan yang tercantum dalam USP 30. 1.2

Perumusan Masalah 1. Apakah penetapan kadar kaplet Ciprofloxacin dapat dilakukan secara kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT), menggunakan kolom VP-ODS (4,6 mm x 25 cm) dan dengan memodifikasi fase gerak campuran larutan asam fosfat dan acetonitril 2. Apakah kadar kaplet Ciprofloxacin dengan nama dagang dan generik memenuhi persyaratan yang ditetapkan USP 30.

1.3

Hipotesis 1. Diduga penetapan kadar kaplet Ciprofloxacin dapat dilakukan secara kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) dengan memodifikasi fase gerak. 2. Diduga kadar Ciprofloxacin dalam sediaan kaplet memenuhi persyaratan yang ditetapkan USP 30.


1.4

Tujuan Penelitian 1. Melakukan penetapan kadar kaplet Ciprofloxacin secara kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) menggunakan kolom VP-ODS (4,6 mm x 25 cm) dan dengan memodifikasi fase gerak campuran larutan asam fosfat dan acetonitril. 2. Melakukan pengujian hasil yang diperoleh dengan persyaratan kadar yang ditetapkan USP 30.

1.5

Manfaat Penelitian 1. Pengembangan ilmu bahwa penetapan kadar Ciprofloxacin dalam sediaan kaplet dapat juga dilakukan dengan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) menggunakan kolom VP-ODS (4,6 mm x 25 cm). 2. Aplikasi dilapangan untuk industri farmasi dan Badan Pengawas Obat dan Makanan (BPOM).


BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Ciprofloxacin 2.1.1 Sifat Fisikokimia Rumus struktur

:

Nama Kimia

: 1- cyclopropyl-6 fluoro1,4 dihydro- 4- oxo-7- (1- piperazin yl)-3- quinoline carboxylic acid

Rumus Molekul

: C17H18FN3O3

Berat Molekul

: 331,346

Pemerian

: serbuk dengan kekuningan hingga bewarna kuning

Kelarutan

: mempunyai kelarutan dalamair pada suhu 25 0 C.Pka obat 6 dan 8,8

2.1.2 Farmakokinetik A. Absorpsi Ciprofloxacin

oral diserap

dengan

baik

melalui

saluran

cerna.

Bioavailabilitas absolut adalah sekitar 70%, tanpa kehilangan yang bermakna dari metabolisme fase pertama. Berikut ini adalah konsentrasi serum maksimal dan area di bawah kurva (area under the curve, AUC) dari Ciprofloxacin yang diberikan pada dosis 250 ~ 1000 mg. Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

Tabel . Konsentrasi serum maksimum dan area di bawah kurva dari Ciprofoxacin Dosis

Konsentrasi serum

Area di bawah kurva

(mg)

maksimal (ug/mL)

(mg.hr/mL)

250

1.2

4.8

500

2.4

11.6

750

4.3

20.2

1000

5.4

30.0

Konsentrasi serum maksimal dicapai 1 sampai 2 jam setelah dosis oral. Konsentrasi rata-rata 12 jam setelah dosis 250, 500 dan 750 mg adalah 0,1; 0,2 dan 0,4 mg/mL. B. Distribusi Ikatan siprofloxacin terhadap protein serum adalah 20-40% sehingga tidak cukup untuk menyebabkan interaksi ikatan protein yang bermakna dengan obat lain. Setelah administrasi oral, Ciprofloxacin didistribusikan ke seluruh tubuh. Konsentrasi jaringan seringkali melebihi konsentrasi serum, terutama di jaringan genital, termasuk prostat. Ciprofloxacin ditemukan dalam bentuk aktif di saliva, sekret nasal dan bronkus, mukosa sinus, sputum cairan gelembung kulit, limfe, cairan peritoneal, empedu dan jaringan prostat. Ciprofloxacin juga dideteksi di paru-paru, kulit, jaringan lemak, otot, kartilago dan tulang. Obat ini berdifusi ke cairan serebro spinal, namun konsentrasi di CSS adalah kurang dari 10%


konsentrasi serum puncak Ciprofloxacin juga ditemukan pada konsentrasi rendah di aqueous humor dan vitreus humor. C. Metabolisme Empat metabolit Ciprofloxacin yang memiliki aktivitas antimikrobial yang lebih rendah dari Ciprofloxacin bentuk asli telah diidentifikasi di urin manusia sebesar 15% dari dosis oral. D. Ekskresi Waktu paruh eliminasi serum pada subjek dengan fungsi ginjal normal adalah sekitar 4 jam. Sebesar 40-50% dari dosis yang diminum akan diekskresikan melalui urin dalam bentuk awal sebagai obat yang belum diubah. Ekskresi Ciprofloxacin melalui urin akan lengkap setelah 24 jam . Dalam urin semua fluorokuinolon mencapai kadar yang melampaui konsentrasi hambat minimal (KHM) untuk kebanyakan kuman patogen selama minimal 12 jam. Klirens ginjal dari Ciprofloxacin, yaitu sekitar 300 mL/menit, melebihi laju filtrasi glomerulus yang sebesar 120 mL/menit. Oleh karena itu, sekresi tubular aktif memainkan peran penting dalam eliminasi obat ini. Pemberian Ciprofloxacin bersama probenesid berakibat pada penurunan 50% klirens renal Ciprofloxacin dan peningkatan 50% pada konsentrasi sistemik. E. Efek Samping Seperti obat lain ciprofloxacin juga dapat menimbulkan efek samping, Bila overdosis akan beresiko menimbulkan efek toksik dan sebaiknya dosis terapi yang diberikan diturunkan atau dihentikan,tanda-tanda overdosis yang paling sering terlihat antara lain adalah pucat,masalah urinasi dan dalam penggunaan obat ini terkadang juga dapat menimbulkan efek samping lain yang lebih serius antara lain Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

seperti tanda-tanda yang terlihat seperti reaksi alergi,Sulit untuk bernafas,Pucat pada

bibir

dan

wajah,

Diare

dan

pengeluaran

urin

berlebihan

,Halusinasi,depresi,kadang terdapat nyeri yang didapti pada berbagai tempat yang berbeda. Pada efek samping yang lebih serius akan didapati gejala sebagai berikut antara lain insomnia, nyeri otot, Pandangan yang berkunang-kunang, Sangat sensitif terhadap sinar matahari, diare berat, nyeri perut dan anafilaksis (shok). F. Bentuk Sediaan Menurut USP 30 (2007) Ciprofloxacin dapat ditetapkan kadarnya secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Selain itu menurut Clarke’s Ciprofloxacin dapat ditentukan kadarnya dengan Spektrofotometri. 2.1.3 Kegunaan Ciprofloxacin merupakan antibiotik yang sering disebut atau digolongkan sebagai fluoroquinolones, ciprofloxacin bekerja dengan melawan bakteri yang ada pada tubuh yaitu dengan menghentikan multiplikasi bakteri dengan cara menghambat reproduksi dan perbaikan materi genetik atau DNA. Pengobatan Ciprofloxacin digunakan dengan berbagai tipe sesuai dengan jenis bakteri yang berbeda-beda. 2.2 Kromatografi Kromatografi adalah suatu terminologi umum yang digunakan untuk bermacam- macam teknik pemisahan yang didasarkan atas partisi cuplikan diantara suatu fase gerak yang bisa berupa gas ataupun cairan, dan fase diam yang juga bisa berupa cairan atau padatan.


Kromatografi dapat dibedakan atas berbagai macam tergantung pada pengelompokannya. Berdasarkan pada mekanisme pemisahannya, kromatografi dibedakan menjadi : a) Kromatografi adsorbsi b) Kromatografi partisi c) Kromatografi pasangan ion d) Kromatografi penukar ion e) Kromatografi eksklusi ukuran, dan f) Kromatografi afinitas A. Penggunaan Kromatografi 1. Pemakaian untuk tujuan kualitatif mengungkapkan ada atau tidak adanya senyawa tertentu dalam cuplikan 2. Pemakaian untuk tujuan kuantitatif menunjukkan banyaknya masing-masing komponen campuran 3. Pemakaian untuk tujuan preparatif untuk memperoleh komponen campuran dalam jumlah memadai dalam keadaan murni. (Gritter, dkk., 1991) Profil puncak dan pelebaran puncak Selama pemisahan kromatografi, solut individual akan membentuk profil konsentrasi yang simetris atau dikenal juga dengan profil Gaussian dalam arah aliran fase gerak. Profil dikenal juga dengan punak atau pita, secara perlahan lahan akan melebar dan sering juga membentuk profil yang asimetrik karena solut – solut melanjutkan migrasinya ke fase diam.


Puncak asimetris Profil konsentrasi solut yang bermigrasi akan simetris jika rasio distribusi solut (D) konstan selama dikisaran konsentrasi keseluruhan puncak, sebagaimana ditunjukkan oleh isoterm sorpsi yang linear yang merupakan plot konsentrasi solut dalam fase diam (Cs) terhadap konsentrasi solut dalam fase gerak(Cm). Meskipun demikian, kurva isot erm akan berubah menjadi 2 jenis puncak asimetris yakni membentuk puncak yang berekor (tailing) dan adanya puncak pendahulu (fronting) jika ada perubahan rasio distribusi solut yang lebih besar.


Untuk kromatografi yang melibatkan kolom, kuantifikasi dapat dilakukan dengan luas puncak atau tinggi puncak. Tinggi puncak atau luas puncak berbanding langsung dengan banyaknya solut yang dikromatografi, jika dilakukan pada kisaran detektor yang linier. 1.

Metode tinggi puncak Metode yang paling sederhana untuk pengukuran kuantitatif adalah

dengan tinggi puncak. Tinggi puncak diukur sebagai jarak dari garis dasar ke puncak maksimum seperti puncak 1, 2, dan 3 pada gambar 3. Penyimpangan garis dasar diimbangi dengan interpolasi garis dasar antara awal dan akhir puncak.

Gambar 1. Pengukuran tinggi puncak Metode tinggi puncak hanya digunakan jika perubahan tinggi puncak linier dengan konsentrasi analit. Kesalahan akan terjadi jika metode ini digunakan pada puncak yang mengalami penyimpangan (asimetris) atau jika kolom mengalami kelebihan muatan. 2.

Metode luas puncak Prosedur penentuan luas puncak serupa dengan tinggi puncak. Suatu

teknik untuk mengukur luas puncak adalah dengan mengukur luas puncak sebagai hasil kali tinggi puncak dan lebar pada setengah tinggi (W1/2). Teknik ini hanya dapat digunakan untuk kromatografi yang simetris atau yang mempunyai bentuk serupa (Johnson, 1991). Saat ini integrator elektronik telah banyak digunakan untuk mengukur luas puncak pada kromatografi cair kinerja tinggi dan pada kromatografi gas. Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

Integrator digital mengukur luas puncak dan mengubahnya dalam bentuk angka (Rohman, 2007). Baik tinggi puncak maupun luasnya dapat dihubungkan dengan konsentrasi. Tinggi puncak mudah diukur, akan tetapi sangat dipengaruhi perubahan waktu retensi yang disebabkan oleh variasi suhu dan komposisi pelarut. Oleh karena itu, luas puncak dianggap merupakan parameter yang lebih akurat untuk pengukuran kuantitatif (Ditjen POM, 1995). 2.3 Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) Kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) merupakan sistem pemisahan dengan kecepatan dan efisiensi yang tinggi. Hal ini karena didukung oleh kemajuan dalam teknologi kolom, sistem pompa tekanan tinggi, dan detektor yang sangat sensitif dan beragam. KCKT mampu menganalisa berbagai cuplikan secara kualitatif maupun kuantitatif, baik dalam komponen tunggal maupun campuran (Ditjen POM, 1995). KCKT merupakan teknik pemisahan yang diterima secara luas untuk analisis dan pemurnian senyawa tertentu dalam suatu sampel pada sejumlah bidang antara lain; farmasi, lingkungan dan industri-industri makanan. Kegunaan umum KCKT adalah untuk pemisahan sejumlah senyawa organik,

anorganik,

maupun

senyawa

biologis,

analisis

ketidakmurnian

(impurities) dan analisis senyawa-senyawa yang tidak mudah menguap (nonvolatil). KCKT paling sering digunakan untuk: menetapkan kadar senyawasenyawa tertentu seperti asam-asam amino, asam-asam nukleat dan proteinprotein dalam cairan fisiologis, menentukan kadar senyawa-senyawa aktif obat dan lain-lain. Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

Kelebihan KCKT antara lain: − Mampu memisahkan molekul-molekul dari suatu campuran − Resolusinya baik − Mudah melaksanakannya − Kecepatan analisis dan kepekaannya tinggi − Dapat dihindari terjadinya dekomposisi/kerusakan bahan yang dianalisis − Dapat digunakan bermacam-macam detektor − Kolom dapat digunakan kembali − Mudah melakukan rekoveri cuplikan − Tekniknya

tidak

begitu

tergantung

pada

keahlian

operator

dan

reprodusibilitasnya lebih baik − Instrumennya memungkinan untuk bekerja secara automatis dan kuantitatif − Waktu analisis umumnya singkat − Kromatografi cair preparatif memungkinkan dalam skala besar − Ideal untuk molekul besar dan ion. Keterbatasan metode KCKT adalah untuk identifikasi senyawa, kecuali jika KCKT dihubungkan dengan spektrometer massa (MS). Keterbatasan lainnya adalah jika sampelnya sangat kompleks, maka resolusi yang baik sulit diperoleh (Munson, 1991). 2.3.1 Cara Kerja KCKT Kromatografi merupakan teknik yang mana solut atau zat-zat terlarut terpisah oleh perbedaan kecepatan elusi, dikarenakan solut-solut ini melewati suatu kolom kromatografi. Pemisahan solut-solut ini diatur oleh distribusi dalam fase gerak dan fase diam. Penggunaan kromatografi cair membutuhkan Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

penggabungan secara tepat dari berbagai macam kondisi operasional seperti jenis kolom, fase gerak, panjang dan diameter kolom, kecepatan alir fase gerak, suhu kolom, dan ukuran sampel (Rohman, 2007). 2.3.2 Komponen KCKT

detektor

injektor pompa

kolom oven

Wadah

Data processor

Gambar 2. Bagan alat KCKT


2.3.2.1 Wadah Fase Gerak Wadah fase gerak harus bersih dan lembam (inert). Wadah pelarut kosong ataupun labu laboratorium dapat digunakan sebagai wadah fase gerak. Wadah ini biasanya dapat meampung fase gerak antara 1 sampai 2 liter pelarut.Fase gerak sebelum digunakan harus dilakukan degassing(penghilangan gas) yang ada pada fase gerak, sebab adanya gas akan berkumpul dengan komponen lain terutama dipompa dan detektor sehingga akan mengacaukan analisis. (Rohman, 2007) 2.3.2.2 Pompa Pompa yang cocok digunakan untuk KCKT adalah pompa yang mempunyai syarat sebagaimana syarat wadah pelarut yakni pompa harus inert terhadap fase gerak. Bahan yang umum dipakai untuk pompa adalah gelas, baja tahan karat, Teflon, dan batu nilam. Pompa yang dgunakan sebaiknya mampu memberikan tekanan sampai 5000 psi dan mampu mengalirkan fase gerak dengan kecepatan alir 3 ml/ menit. 2.3.2.3 Injektor Cuplikan harus dimasukkan kedalam pangkal kolom (kepala kolom), diusahakan agas sesedikit mungkin terjadi gangguan pada kemasan kolom. Ada tiga jenis dasar injektor, yaitu: a. Hentikan aliran/stop flow: aliran dihentikan, injeksi dilakukan pada kinerja atmosfir, sistem tertutup, dan aliran dilanjutkan lagi. Teknik ini bisa digunakan karena difusi di dalam aliran kecil dan resolusi tidak dipengaruhi. b. Septum: injektor-injektor langsung ke aliran fase gerak umumnya sama dengan yang digunakan pada kromatografi gas. Injektor ini dapat digunakan pada kinerja sampai 60-70 atmosfir. Tetapi septum ini tidak tahan dengan Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

semua pelarut-pelarut kromatografi cair. Disamping itu, partikel kecil dari septum yang terkoyak (akibat

jarum injektor) dapat

menyebabkan

penyumbatan. c. Katup putaran (loop valve): ditunjukkan secara skematik dalam Gambar 5, tipe injektor ini umumnya digunakan untuk menginjeksi volume lebih besar daripada 10 µl dan sekarang digunakan dengan cara otomatis (dengan adaptor khusus, volume-volume lebih kecil dapat diinjeksikan secara manual). Pada posisi LOAD, sampel loop (cuplikan dalam putaran) diisi pada tekanan atmosfir. Bila katup difungsikan, maka cuplikan di dalam putaran akan bergerak ke dalam kolom.

Gambar 3. Tipe injektor katup putaran 2.3.2.4 Kolom Kolom adalah jantung kromatografi. Berhasil atau gagalnya suatu analisis tergantung pada pemilihan kolom dan kondisi percobaan yang sesuai. Kolom dapat dibagi menjadi dua kelompok: 1. Kolom analitik: diameter khas adalah 2-6 mm. Panjang kolom tergantung pada jenis kemasan. Untuk kemasan pelikel biasanya panjang kolom 50-100 cm. Untuk kemasan mikropartikel berpori, umumnya 10-30 cm. Dewasa ini ada yang 5 cm. Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

2. Kolom preparatif: umumnya memiliki diameter 6 mm atau lebih besar dan panjang kolom 25-100 cm. Kolom umumnya dibuat dari stainless steel dan biasanya dioperasikan pada temperatur kamar, tetapi bisa juga digunakan temperatur lebih tinggi, terutama untuk kromatografi penukar ion dan kromatografi eksklusi. Kemasan kolom tergantung pada mode KCKT yang digunakan. 2.3.2.5 Detektor Suatu detektor dibutuhkan untuk mendeteksi adanya komponen cuplikan dalam aliran yang keluar dari kolom. Detektor-detektor yang baik memiliki sensitifitas yang tinggi, gangguan (noise) yang rendah, kisar respons linier yang luas, dan memberi tanggapan/respon untuk semua tipe senyawa. Suatu kepekaan yang rendah terhadap aliran dan fluktuasi temperatur sangat diinginkan, tetapi tidak selalu dapat diperoleh. Detektor yang paling banyak digunakan dalam kromatografi cair modern kecepatan tinggi adalah detektor spektrofotometer UV 254 nm. Bermacam-macam detektor dengan variasi panjang gelombang UV-Vis sekarang menjadi populer karena mereka dapat digunakan untuk mendeteksi senyawa-senyawa dalam rentang yang luas. Detektor indeks refraksi juga secara luas digunakan, terutama dalam kromatografi eksklusi, tetapi umumnya kurang sensitif dari pada detektor spektrofotometer UV. Detektor lainnya, antara lain: detektor fluometer, detektor ionisasi nyala, detektor elektrokimia dan lain-lain juga telah digunakan. 2.3.2.6 Pengolahan Data Komponen yang terelusi mengalir ke detektor dan dicatat sebagai puncakpuncak yang secara keseluruhan disebut sebagai kromatogram. Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

Rt Area H W1/2

H1/2

W Gambar 4. Kromatogram Guna kromatogram: 1. Kualitatif Waktu retensi selalu konstan dalam setiap kondisi kromatografi yang sama dapat digunakan untuk identifikasi. 2. Kuantitatif Luas puncak proporsional dengan jumlah sampel yang diinjeksikan dan dapat digunakan untuk menghitung konsentrasi. 3. Kromatogram dapat digunakan untuk mengevaluasi efisiensi pemisahan dan kinerja kolom (kapasitas ‘k’, selektifitas ‘α’, jumlah pelat teoritis ‘N’, jarak setara dengan pelat teoritis ‘HETP’ dan resolusi ‘R’). 2.3.2.7 Fase Gerak Fase gerak atau eluen biasanya terdiri atas campuran pelarut yang dapat bercampur yang secara keseluruhan berperan dalam daya elusi dan resolusi. Daya elusi dan resolusi ini ditentukan oleh polaritas keseluruhan pelarut, polaritas fase diam, dan sifat komponen-komponen sampel (Johnson & Stevenson, 1991). Dalam kromatografi cair komposisi pelarut atau fase gerak adalah satu variabel yang mempengaruhi pemisahan. Terdapat keragaman yang luas dari fase Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

gerak yang digunakan dalam semua mode KCKT, tetapi ada beberapa sifat-sifat yang diinginkan yang mana umumnya harus dipenuhi oleh semua fase gerak. Fase gerak harus: • Murni; tidak ada pencemar/kontaminan • Tidak bereaksi dengan pengemas • Sesuai dengan detektor • Melarutkan cuplikan • Mempunyai viskositas rendah • Mudah rekoveri cuplikan, bila diinginkan • Tersedia diperdagangan dengan harga yang pantas Umumnya, pelarut-pelarut dibuang setelah digunakan karena prosedur pemurnian kembali membosankan dan mahal. Dari semua persyaratan di atas, 4 persyaratan pertama adalah yang paling penting. Gelembung udara (degassing) yang ada harus dihilangkan dari pelarut, karena udara yang terlarut keluar melewati detektor dapat menghasilkan banyak noise sehingga data tidak dapat digunakan (Putra, 2007). Elusi Gradien dan Isokratik Elusi pada KCKT dapat dibagi menjadi dua sistem yaitu: 1. Sistem elusi isokratik. Pada sistem ini, elusi dilakukan dengan satu macam atau lebih fase gerak dengan perbandingan tetap (komposisi fase gerak tetap selama elusi). 2. Sistem elusi gradien. Pada sistem ini, elusi dilakukan dengan campuran fase gerak yang perbandingannya berubah-ubah dalam waktu tertentu (komposisi fase gerak berubah-ubah selama elusi). Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

Elusi gradien didefinisikan sebagai penambahan kekuatan fase gerak selama suatu analisis kromatografi berlangsung. Digunakan untuk meningkatkan resolusi campuran yang kompleks terutama jika sampel mempunyai kisaran polaritas yang luas. Pengaruh yang menguntungkan dari elusi gradien adalah memperpendek waktu analisis senyawa-senyawa yang secara kuat ditahan di dalam kolom (Putra, 2007). Tipe kromatografi a. Kromatografi fase normal Kromatografi fase normal (fase diam lebih polar daripada fase gerak), kemampuan elusi meningkat dengan meningkatnya polaritas pelarut. Fase gerak ini biasanya tidak polar. Dietil eter, benzen, hidrokarbon lurus seperti pentana, heksana, heptana maupun iso-oktana sering digunakan. Halida alifatis seperti dikloro metana, dikloroetana, butilklorida dan kloroform juga digunakan. Umumnya gas terlarut tidak menimbulkan masalah pada fase normal. Tekanan rendah diperlukan untuk menjaga kecepatan aliran yang memadai, karena pelarut ini kebanyakan kurang kental (Munson, 1991). Fase diam yang digunakan dapat dilihat pada gambar dibawah ini:

Gambar 5. Jenis-jenis fase diam untuk tipe kromatografi fase normal


b. Kromatografi fase terbalik Kromatografi fase terbalik (fase diam kurang polar daripada fase gerak), kemampuan

elusi

menurun

dengan

meningkatnya

polaritas

pelarut.

Kandungan utama fase gerak fase terbalik adalah air. Pelarut yang dapat campur dengan air seperti metanol, etanol, asetonitril, dioksan, tetrahirofuran dan dimetilformamida ditambahkan untuk mengatur kepolaran fase gerak. Dapat ditambahkan pula asam, basa, dapar dan/atau surfaktan. Mutu air harus tinggi baik air destilasi maupun awamineral. Fase diam yang digunakan dapat dilihat pada gambar dibawah ini :

Gambar 6. Jenis-jenis fase diam untuk tipe kromatografi fase terbalik Adsorpsi solut oleh fase diam atau adsorben sangat tergantung pada: 1. Struktur kimia solut atau adanya gugus aktif tertentu yang berinteraksi dengan adsorben. 2. Ukuran partikel adsorben. Semakin kecil ukuran partikel adsorben, maka luas permukaannya semakin luas sehingga interaksinya dengan solut juga semakin luas. 3. Kelarutan solut dalam fase gerak. Solut yang makin mudah larut dalam fase gerak akan semakin mudah lepas


BAB III METODOLOGI PENELITIAN

3.1

Waktu dan tempat penelitian Penelitian dilakukan dilaboratorium kimia farmasi kuantitatif Fakultas

Farmasi Universitas Sumatera Utara Medan pada bulan juni tahun 2009. 3.2

Alat-alat Alat-alat yang digunakan adalah satu unit alat KCKT (Shimadzu) yang

terdiri dari vacum desagger(06 U – 20 As), pompa( LC – 20 AD), UV/Vis detector (dilengkapi dengan komputer dan printer) , kolom Shimpac VPODS (4,6 mm x 30 cm), wadah fase gerak, penyuntik µl (100µl), membran filter 0,45 µm, dan 0,2µm, neraca listrik dan alat gelas lainnya. 3.3

Bahan-bahan Bahan – bahan yang digunakan adalah asam posfat p.a (Merck) ,

asetonitril p.a (Merck) , aquabidestilata (PT. Ikapharmindo Putramas), trietylamin p.a (Merk),

Ciprofloxacin (Badan POM RI), kaplet Ciprofloxacin (PT.

Indofarma), Ciprofloxacin (PT. Novell), Ciprofloxacin (PT. Sanbe),

Floxigra

(PT. Graha Farma), Floxifar (PT. Ifar), Lapiflok (PT. Lapi) Viflox (PT. Tropica Mas Pharmaceutical). 3.4

Pengambilan Sampel Pengambilan

membandingkan

sampel

dilakukan

secara

purposif

yaitu

tanpa

satu tempat dengan tempat yang lain karena tempat

pengambilan sampel dianggap homogen. Dari hasil sampling diperoleh kaplet Ciprofloxacin (PT. Indofarma), Ciprofloxacin (PT. Novell), Ciprofloxacin (PT. Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

Sanbe), Floxigra (PT. Graha Farma), Floxifar (PT. Ifars), Lapiflok (PT. Lapi), Viflox (PT. Tropica Mas Pharmaceutical). 3.5

Pola penelitian

3.5.1 Pembuatan fase gerak Asam Posfat 0,025 M : Acetonitril Tambahkan 0,85 ml asam posfat 85 % kedalam labu 500 ml, kemudian ditambahkan 450 ml aquabidestilata dan diatur

pH hingga 3,0 dengan

penambahan trietylamin lalu di cukupkan hingga garis tanda. dibuat campuran asam posfat : acetonitril (80:20). 3.5.2 Penyiapan alat Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Masing - masing unit diatur, menggunakan kolom shimpac VP-ODS (4,6 mm x 25 cm). Sensitivitas 0,01 AUFS dan pengukuran menggunakan detektor UV/Vis pada panjang gelombang 278 nm. Pada pompa dipilih mode aliran tetap dengan laju aliran 1,5 ml/menit. 3.5.3 Penentuan garis alas Setelah diperoleh kondisi

seperti 2.5.2 maka pompa dijalankan, Fase

gerak dibiarkan mengalir selama 30 menit diperoleh garis alas yang cukup lurus yang menandakan sistem tersebut telah stabil. 3.5.4 Penentuan kualitatif Ciprofloxacin HCl BPFI dan Ciprofloxacin dalam sedian kaplet dengan nama dagang dan generik dengan konsentrasi 0,2 mg/ml masing-masing disuntikkan ke sistem KCKT dengan volume penyuntikan 20 µl. Puncak yang ditunjukkan diperhatikan dan dicatat waktu tambatnya kemudian waktu tambat masing-masing kaplet dibandingkan dengan waktu tambat Ciprofloxacin HCl BPFI. Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

3.5.5 Penentuan kuantitatif 3.5.5 .1 Pembuatan larutan induk baku Ciprofloxacin HCl BPFI Ditimbang Seksama

sejumlah 10,0 mg Ciprofloxacin HCl BPFI,

dimasukkan kedalam labu tentukur 50 ml, dilarutkan dan diencerkan dengan aquabidestilata hingga garis tanda sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 200 mcg/ml, disaring. Filtratnya digunakan sebagai larutan induk. 3.5.5.2 Pembuatan Kurva Kalibrasi Ciprofloxacin HCl BPFI Dipipet larutan induk baku Ciprofloxacin sebanyak 0,5; 1; 2; 2,5 ml, masing-masing dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml, diencerkan dengan aquabidestilata hingga garis tanda sehingga diperoleh konsentrasi 50, 100, 200, 250 mcg/ml, kemudian masing-masing konsentrasi diinjeksikan sebanyak 6 kali ke sistem KCKT dengan volume penyuntikan 20 µl. diukur pada panjang gelombang 278 nm dengan laju alir 1,5 ml/menit, lalu dicatat luas dan tinggi puncaknya yang ditunjukkan pada kromatogram dan dibuat kurva kalibrasi serta dihitung persamaan garis regresinya. 3.5.5.3 Penetapan kadar sampel Ditimbang 5 kaplet untuk masing – masing jenis kaplet, kemudian digerus sejumlah serbuk dan ditimbang seksama sejumlah kaplet setara dengan lebih kurang 50 mg Ciprofloxacin, masukkan kedalam labu tentukur 50 ml, dilarutkan dan diencerkan dengan aquabidestilata hingga garis tanda sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 1000 mcg/ml, kocok selama 15 menit dan disaring, filtar pertama dibuang dan filtrat selanjutnya ditampung. Filtrat yang jernih digunakan sebagai larutan uji. Kemudian

dari larutan ini dipipet 2 ml dan

dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml. ditambahkan dengan aquabidestilata Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

hingga garis tanda sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 200 mcg/ml. Diinjeksikan 6 kali ke sistem KCKT dideteksi pada panjang gelombang 278 nm, laju alir 1,5 ml/menit kemudian dihitung kadarnya. 3.5.5.4 Penentuan Limit of Detection (LOD) dan Limit of Quantitation (LOQ) Batas deteksi atau Limit of Detection (LOD) adalah jumlah terkecil analit dalam sampel yang dapat dideteksi. Batas kuantitasi atau Limit of Quantitation (LOQ) merupakan kuantitas terkecil analit dalam sampel. Batas deteksi dapat dihitung berdasarkan pada Standar Deviasi (SD) dari kurva antara respon dan kemiringan (slope) dengan rumus : _

SD =

LOD =

∑ (X − X )2 n −1

3 x SD slope

Sedangkan untuk penentuan batas kuantitasi dapat digunakan rumus : LOQ =

10 x SD slope

(Harmita, 2004)

3.5.5.5 Analisis Statistik Penolakan Hasil Pengamatan Kadar Ciprofloxacin sebenarnya dalam sampel dapat diketahui dengan menggunakan uji Q test. Cara untuk melakukan analisis terhadap data yang menyimpang adalah dengan Dixon’s Q-test yang dirumuskan sebagai berikut: Qhitung =

nilai yang dicurigai − nilai yang terdekat nilai tertinggi − nilai terendah


Jika nilai Qhitung lebih kecil dari nilai Qkritis maka hipotesis nol diterima berarti tidak ada perbedaan antara nilai yang dicurigai dengan nilai-nilai yang lain (Rohman, 2007). Hasil pengujian atau nilai Q yang diperoleh ditinjau terhadap daftar harga Q pada Tabel 1, apabila Q>Q0,99 maka data tersebut ditolak. Tabel 1. Nilai Qkritis pada Taraf Kepercayaan 99% Banyak data

Nilai Qkritis

4

0,926

5

0,821

6

0,740

7

0,680

8

0,634


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

Menurut USP 30 (2007) penetapan kadar Ciprofloxacin dalam sediaan kaplet dilakukan secara KCKT menggunakan kolom VP-ODS (Oktadesil silan 4,6 mm x 25 cm), fase gerak larutan asam fosfat pH 3 dan asetonitril (87:13). laju alir 1,5 ml/menit, volume penyuntikan 20 µl dan deteksi pada panjang gelombang 278 nm sehingga diperoleh kromatogram tunggal dari Ciprofloxacin. Hasil

orientasi identifikasi BPFI Ciprofloxacin pada konsentrasi 200

mcg/ml diperoleh waktu tambat 11,17 menit, dengan menggunakan fase gerak asam fosfat pH 3 dan acetonitril (87:13), oleh karena waktu tambatnya lebih besar dari 10 menit maka peneliti melakukan modifikasi fase gerak untuk memperoleh waktu tambat

yang optimum, dan dari hasil orientasi berikutnya diperoleh

perbandingan fase gerak asam fosfat dan asetonitril (80:20) dengan waktu retensi 2,96 menit. Pada kondisi yang sama untuk sampel Kaplet diperoleh waktu tambat rata-rata sebagai berikut: kaplet Ciprofloxacin (PT. Indofarma) mempunyai waktu tambat rata-rata 2,96 menit, kaplet Ciprofloxacin (PT. Novell) mempunyai waktu tambat rata-rata 2,95 menit, kaplet Ciprofloxacin (PT. Sanbe) mempunyai waktu tambat rata-rata 2,86 menit, kaplet Floxifar mempunyai waktu tambat rata-rata 2,96 menit, kaplet Floxigra mempunyai waktu tambat rata-rata 2,97 menit, kaplet Lapiflok mempunyai waktu tambat rata-rata 2,87 menit, dan kaplet Viflox mempunyai waktu tambat 3,12 menit.


Adanya perbedaan waktu tambat pada kromatogram yang dihasilkan karena perbedaan waktu penyuntikan analit sehingga kondisi analisis tidak sama. Hal ini disebabkan pula karena adanya penyimpanan analit yang akan diinjeksikan dalam waktu yang cukup lama. Waktu tambat dapat dipakai untuk mengidentifikasi suatu senyawa dengan cara membandingkannya dengan waktu tambat senyawa yang dikenal. Agar perbandingan tersebut sahih, kondisi analitik yang dipakai untuk memperoleh waktu tambat, yaitu suhu, laju alir, beban kolom, dapar dan sebagainya harus sama serta perbedaan waktu pengoperasian diusahakan mungkin (Rohman, 2007). Menurut Adnan (1997), untuk menghasilkan waktu retensi yang diharapkan maka aliran pelarut diharapkan dapat konstan. Hal ini dapat tercapai, bila sistem pemompaan dapat diandalkan. Waktu retensi berbeda oleh faktor lain dari alatnya, misalnya panjang kolom, jenis fase diam serta banyaknya yang digunakan pada lapisan penyangga padat, dan banyaknya sampel yang diinjeksikan. Contoh kromatogram waktu tambat BPFI Ciprofloxacin pada konsentrasi 200 mcg/ml dapat dilihat pada gambar berikut ini dan kromatogram lainnya dapat dilihat pada lampiran 4.


Gambar 1. Kromatogram dari larutan Ciprofloxacin HCl BPFI pada konsentrasi 200 mcg/ml, yang dianalisa secara KCKT pada λ 278 nm, kolom VP-ODS (4,6 mm x 25 cm), fase gerak larutan asam fosfat pH 3 dan acetonitril (80:20), laju aliran 1,5 ml/menit. Penentuan linieritas kurva kalibrasi BPFI Ciprofloxacin ditentukan berdasarkan luas puncak pada

konsentrasi 50, 100, 200 dan 250

mcg/ml,

diperoleh hubungan yang linier dengan koefisien korelasi (r) = 0,9993 dan persamaan garis regresi Y = 76080,88 X + 2385291,75 dengan data penyuntikan larutan baku ciprofloxacin dapat dilihat pada lampiran 9. Menurut Johnson & Stevenson (1991), penentuan kadar dapat dilakukan dengan mengukur luas puncak atau tinggi puncak. Luas puncak dapat dipakai untuk pengkuantitatifan jika kita dapat mengendalikan laju alir dengan baik karena luas puncak tidak begitu bergantung pada keragaman operator dan instrumen. Menurut Snyder & Kirkland (1979), penentuan kadar lebih baik dengan cara pengukuran luas puncak dibanding cara pengukuran tinggi puncak. Baik tinggi puncak maupun luasnya dapat dihubungkan dengan konsentrasi. Tinggi puncak mudah diukur, akan tetapi sangat dipengaruhi Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

perubahan waktu retensi yang disebabkan oleh variasi suhu dan komposisi pelarut. Oleh karena itu, luas puncak dianggap merupakan parameter yang lebih akurat untuk pengukuran kuantitatif. (Ditjen POM, 1995)


Hasil linieritas kurva kalibrasi larutan Ciprofloxacin HCl BPFI ditentukan berdasarkan luas puncak pada berbagai konsentrasi dapat dilihat pada gambar 2.

Gambar 2. Kurva kalibrasi baku Ciprofloxacin konsentrasi versus luas puncak pada konsentrasi 50, 100, 200, 250 mcg/ml yang dianalisa secara KCKT pada λ 278 nm, kolom VP-ODS (4,6 mm x 30 cm), fase gerak larutan asam fosfat pH 3 dan acetonitril (80:20), laju aliran 1,5 ml/menit.


Dari pengolahan data dapat dihitung kadar Ciprofloxacin berdasarkan luas puncak yang terdapat dalam sediaan kaplet Ciprofloxacin. Hasilnya dapat dilihat pada tabel 2. Tabel 2. Hasil pengolahan data dari sediaan kaplet Ciprofloxacin No

Sampel

1 Kaplet Ciprofloxacin 500 mg (PT. Indofarma)

2 Kaplet Ciprofloxacin 500 mg (PT. Novell)

3 Kaplet Ciprofloxacin 500 mg (PT. Sanbe)

4 Kaplet Floxifar 500 mg (PT. Ifars)

5 Kaplet Floxigra 500 mg (PT. Graha Farma)

6 Kaplet Lapiflok 500 mg (PT. Lapi)

7

Perlakuan

Luas Puncak

1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 1

18288731 18533504 18556158 18581659 18633359 18631713 18470100 18497617 18475627 18441358 18391650 18466128 18429592 18437000 18452140 18491889 18450327 18508245 18429435 18349220 18388577 18346932 18272796 18132748 17067454 17097816 17067629 17094987 17084408 17099982 18538495 18601267 18679135 18714052 18684932 18698094 18890962

Kadar (%) 102,90 104,48 104,63 104,79 105,17 105,12 104,07 104,52 104,11 103,88 103,56 104,04 103,81 103,86 103,95 104,21 103,94 104,32 103,81 103,29 103,54 103,27 102,79 101,89 94,99 95,19 94,99 95,17 95,10 95,20 104,51 104,92 105,42 105,65 105,46 105,55 106,79


Kaplet Viflox 500 mg (PT.TropicaMaspharmaceutical)

2 18836993 106,44 3 18903570 106,87 4 18972793 107,32 5 18977614 107,35 6 19073339 107,97 Berdasarkan pada hasil pengolahan data dan perhitungan statistik

diperoleh kadar Ciprofloxacin dalam sediaan kaplet seperti pada tabel 3. di bawah ini. Tabel 3. Data kadar Ciprofloxacin dalam sediaan kaplet yang ditentukan berdasarkan luas puncak Kadar

No.

Nama Sediaan

1.

Kaplet Ciprofloxacin (PT.Indofarma)

104,51± 1,37%

2.

Kaplet Ciprofloxacin (PT.Novell)

104,03± 0,52%

3.

Kaplet Ciprofloxacin (PT.Sanbe)

104,02±0,33 %

4.

Kaplet Floxigra

95,11±0,02 %

5.

Kaplet Floxifar

103,09±1,12%

6.

Kaplet Lapiflok

105,52±0,73%

7.

Kaplet Viflox

107,12±0,89%

Ciprofloxacin

Sediaan kaplet Ciprofloxacin yang ditentukan kadarnya berdasarkan luas puncak, keseluruhannya memenuhi persyaratan yang ditetapkan USP 30 (2007) yaitu mengandung Ciprofloxacin, C17H18FN3O3, tidak kurang dari 90,0% dan tidak lebih dari 110,0% dari jumlah yang tertera pada etiket


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

5.1

Kesimpulan Ciprofloxacin dapat ditentukan kadarnya secara Kromatografi Cair Kinerja

Tinggi menggunakan kolom L1 (Oksadetil silana) dengan fase gerak Asam posfat : acetonitril (80:20). Hasil penelitian yang dilakukan menunjukkan kadar Ciprofloxacin dalam sediaan

kaplet

yang

ditentukan

berdasarkan

pengukuran

luas

puncak

keseluruhannya sesuai dengan persyaratan kadar yang tertera dalam USP 30 (2007), yaitu mengandung Ciprofloxacin C17H18FN3O3 tidak kurang dari 90,0% dan tidak lebih dari 110,0% dari jumlah yang tertera pada etiket. 5.2

Saran Disarankan agar dilakukan penelitian lebih lanjut kadar Ciprofloxacin

secara KCKT menggunakan baku internal dan menggunakan kolom fase normal.


DAFTAR PUSTAKA

Anief, M. (2004). Ilmu Meracik Obat. Cetakan Kesebelas. Yogyakarta. Gadjah Mada University Press. Hal. 13. Badan Pengawasan Obat dan Makanan.(2003). Cara Pembuatan Obat yang Baik.Badan pengawasan Obat dan Makanan. Bandung. Hal 1-21 De Lux Putra, E. (2007). Dasar-dasar Kromatografi Gas & Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Fakultas Farmasi USU-Medan. Hal. 88-91. Ganiswarna,S.(2007).

Farmakologi

dan

Terapi.

Edisi

kelima.

Bagian

Farmakologi FKUI. Jakarta. Universitas Indonesia Press. Hal. 720-721 Gritter, R.J, Bobbit, J.M, dan Schwarting, A.e. (1985). Introduction of Chromatograpy. Penerjemah: K. Padmawinata. Pengantar Kromatografi.Edisi III.Bandung: Penerbit ITB. Hal 186 Moffat, A. C., dkk. (2004). Clarke’s Analysis of Drugs and Poisons.Third Edition. Volume 1. London . The pharmaceutical Press. Hal 808-810 Pharmacopeia USP, (2007). The National Formulary. Edition 30 . The United States Pharmacopeial Convention. Page. 1759 – 1760. Rohman, A. (2007). Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta. Penerbit Pustaka Pelajar. Hal. 378- 379, 406.

Snyder, L. R., and Kirkland, J. J. (1979). Introduction to Modern Liquid Chromatography. 2nd edition, By Jhon Wiley and Son. London. Page. 554.

Stevenson, R., Johnson, E. (1991). Dasar Kromatografi Cair. Bandung. Penerbit ITB. Hal. 99, 170 – 177.

Sudjana, (2002). Metoda Statistika. Edisi Keenam. Penerbit Tarsito. Bandung. Hal. 165, 229, 491. Tjay & Rahardja. (2002). Obat-Obat Penting. Edisi kelima. Jakarta. Penerbit PT. Elex Media Komputindo. Hal. 140. Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

WHO. (1992). Validation of Analytical Procedures Used in the Examination of Pharmaceutical Materials. WHO Technical Report Series. No. 823. Hal.117


Lampiran 1. Gambar Alat KCKT dan Syringe 100 µl

Alat KCKT


Lampiran 2. Gambar alat ultrasonic cleaner dan penyaring

Alat Penyaring


Lampiran 3 Kromatogram dari Larutan Ciprofloxacin HCl BPFI, Fase Gerak Asam Posfat : Acetonitril (87:13)



Lampiran 5 Kromatogram dari larutan Ciproflocaxin HCl BPFI Konsentrasi 50 mcg/ml


Lampiran 6 Kromatogram dari larutan Ciprofloxacin HCl BPFI Konsentrasi 100 mcg/ml


Lampiran 7 Kromatogram dari larutan Ciprofloxacin HCl BPFI Konsentrasi 200 mcg/ml


Lampiran 8 Kromatogram dari Ciprofloxacin HCl BPFI Konsentrasi 250 mcg/ml


Lampiran 9. Perhitungan persamaan regresi dan kurva kalibrasi Ciprofloxacin HCl BPFI yang diperoleh secara KCKT pada λ 278 nm Tabel 1.Data Kalibrasi Ciprofloxacin Konsentrasi (X) terhadap Luas Puncak (Y) No. 1. 2. 3. 4. Σ

X (mcg/ml) 50 100 200 250 600

Y

XY

X2

Y2

5941483 10268037 17768907 21211268 55189665

297074150 1026803700 3553781400 5302817000 1080476250

2500 10000 40000 62500 115000

35301220240000 105432583800000 315734056000000 449917890200000 906385750200000

a=

(∑ xy ) − (∑ x )(∑ y ) / n (∑ x 2 ) − (∑ x )2 / n

a=

(10180476250) − (600)(55189665) / 4 (115000) − (600) 2 / 4

a=

10180476250 − 8278454250 115000 − 90000

a=

1902022000 25000

a = 76080,88 Y = ax + b b=Y–ax b = 13797423,75 – 76080,88 x 150 b = 13797423,75 - 11412132 b = 2385291,75 Y = aX + b Sehingga diperoleh persamaan regresi Y = 76080,88 X + 2385291,75 Untuk mencari hubungan kadar (X) dengan luas puncak (Y) digunakan pengujian koefisien korelasi (r) Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

r=

r=

r=

r=

[(∑ x

2

(∑ xy ) − (∑ x )(∑ y ) / n ) − (∑ x )2 / n] [(∑ y 2 ) − (∑ y )2 / n] (10180476250) − (600)(55189695) / 4

[(115000) − (600) / 4][(906385750200000) − (55189695) / 4] 2

2

1902022000

[25000] [906385750200000 − (55189695) 2 / 4] 1902022000 1903354025

r = 0,9993


Lampiran 10. Perhitungan Limit of Detection (LOD) dan Limit of Quantitation (LOQ) Ciprofloxacin

Persamaan garis regresi Ciprofloxacin BPFI: y = aX + b y = 76080,88 X + 2385291,75 No Konsentrasi(X) 1 2 3 4

50 100 200 250 ∑X = 600 X = 150

_

SD =

∑(X − X ) n −1

2

=

X - X -100 -50 50 100

( X - X )² 10000 2500 2500 10000 Σ((X-X)² = 25000

25000 = 91,29 3

LOD =

3 x SD slope

LOQ =

10 x SD 10 x 91, 26 = = 0,0119 mcg/ml 76080,88 slope

=

3 x 91, 26 = 0,0035 mcg/ml 76080,88


Lampiran 11. Kromatogram dari Larutan Tablet Ciprofloxacin (PT. Indofarma) (a)


(b)


(c)


(d)


(e)


(f)

a, b, c, d, e, dan f merupakan kromatogram penyuntikan 6 kali dari larutan kaplet Ciprofloxacin (PT. Indofarma) pada konsentrasi 200 mcg/ml yang dianalisa secara KCKT menggunakan kolomVP-ODS (4,6 mm x 25 cm), fase gerak campuran Asam fosfat dan acetonitril (80:20), volume penyuntikan 20 µl. Laju alir 1,5 ml/menit pada λ 278 nm.


Lampiran 12 Analisa data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan CIPROFLOXACIN ( PT. Indofarma ) secara KCKT

Kadar (%)

Area

X

Y

1.

102,90*

18288731

-1,61

2,5921

2.

104,48

18533504

-0,03

0,0009

3.

104,63

18556158

4.

104,79

18581659

0,28

0,0784

5.

105,13

18633359

0,62

0,3844

6.

105,12

18631713

0,61

0,3721

(X − X )

No.

(X − X )

2

0,12

∑ X = 627,06

0,0144

(

∑ X −X

X = 104,51

SD =

(

∑X −X n −1

)

2

=

)

2

= 3,4423

3,4423 = 0,8297 5

Dari 6 data yang diperoleh, data ke 1 adalah yang paling menyimpang sehingga diuji dengan uji Q. 102,90 - 104,48 Q=

= 0,7085 105,13 – 102,90

nilai Q yang diperoleh tidak melebihi nilai Q0,99 yaitu 0,740 maka semua data diterima.


µ = X ± t(1-1/2 α).dk ×

SD n

µ = 104,51 ± 4,0321 ×

0,8297 6

µ = 104,41 ± 1,37 103,14% ≤ μ ≤ 105,88% Lampiran 13

Kromatogram dari larutan tablet Ciprofloxacin (PT. Novell)

(a)

(b)


(c)


(d)

(e)


(f)

(f)


a, b, c, d, e, dan f merupakan kromatogram penyuntikan 6 kali dari larutan kaplet Ciprofloxacin (Novell)

pada konsentrasi 200 mcg/ml yang dianalisa secara KCKT

menggunakan kolomVP-ODS (4,6 mm x 25 cm), fase gerak campuran Asam fosfat dan acetonitril (80:20), volume penyuntikan 20 µl. Laju alir 1,5 ml/menit pada λ 278 nm. Lampiran 14. Analisa data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan CIPROFLOXACIN (PT. Novell ) secara KCKT Kadar (%)

Area

X

Y

No.

(X − X )

(X − X )

2


1.

104,07

18533504

0,04

0,0016

2.

104,52*

18556158

0,49

0,2401

3.

104,11

18581659

0,08

0,0064

4.

103,88

18633359

-0,15

0,0225

5.

103,56

18631713

-0,47

0,2209

6.

104,04

18466128

0,01

0,0001

∑ X = 624,18

(

∑ X −X

X = 104,03

SD =

(

∑X −X n −1

)

2

=

)

2

= 0,4916

0,4916 = 0,3135 5


= 0,4271 104,52 - 103,56

nilai Q yang diperoleh tidak melebihi nilai Q0,99 yaitu 0,740 maka semua data diterima. µ = X ± t(1-1/2 α).dk ×

SD

µ = 104,03 ± 4,0321 ×

n 0,3125 6

µ = 104,03 ± 0,52 103,51% ≤ μ ≤ 104,55%


Lampiran 15 Kromatogram dari Larutan Tablet Ciprofloxacin (PT. Sanbe)

(a)


(b)


(c)


(d)


(e)

(f)


a, b, c, d, e, dan f merupakan kromatogram penyuntikan 6 kali dari larutan kaplet Ciprofloxacin (PT. Sanbe) pada konsentrasi 200 mcg/ml yang dianalisa secara KCKT menggunakan kolomVP-ODS (4,6 mm x 25 cm), fase gerak campuran Asam fosfat dan acetonitril (80:20), volume penyuntikan 20 µl. Laju alir 1,5 ml/menit pada λ 278 nm. Lampiran 16.

Analisa data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan Ciprofloxacin ( PT. Sanbe ) secara KCKT


Kadar (%)

Area

No.

(X − X )

(X − X )

2

X

Y

1.

103,81

18429592

-0,21

0,0441

2.

103,86

18437000

-0,16

0,0256

3.

103,95

18452140

-0,07

0,0049

4.

104,21

18491889

0,19

0,0361

5.

103,94

18450327

-0,08

0,0064

6.

104,32*

18508245

0,3

∑ X = 624,09

0,09

(

∑ X −X

X = 104,02

SD =

(

∑X −X n −1

)

2

)

2

= 0,2071

0,2071 = 0,2035 5

=


= 0, 2156 104,32 – 103,81


SD n

µ = 104,02 ± 4,0321 ×

0, 2035 6

µ = 104,02± 0,33 103,69% ≤ μ ≤ 104,35% Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

Lampiran 17. Kromatogram dari larutan Tablet Floxigra (PT. Graha Farma)

(a)

(b)


(c)


(d)


(e)

(f)


a, b, c, d, e, dan f merupakan kromatogram penyuntikan 6 kali dari larutan kaplet Floxigra pada konsentrasi 200 mcg/ml yang dianalisa secara KCKT menggunakan kolom VP-ODS (4,6 mm x 25 cm), fase gerak campuran Asam fosfat dan acetonitril (80:20), volume penyuntikan 20 µl. Laju alir 1,5 ml/menit pada λ 278 nm. Lampiran 18

Analisa data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan FLOXIGRA ( PT. Graha Farma ) secara KCKT

Kadar (%)

Area

X

Y

1.

94,99*

2.

(X − X )

(X − X )

17067454

-0,12

0,0144

95,19

17097816

0,08

0,0064

3.

94,99

17067629

-0,12

0,0144

4.

95,17

17094987

0,06

0,0036

5.

95,10

17084408

-0,01

0,0001

6.

95,20

17099982

0,09

0,0081

No.

∑ X = 570,64

2

(

∑ X −X

X = 95,11

SD =

(

∑X −X n −1

)

2

=

)

2

= 0,047

0, 047 = 0,0094 5

Dari 6 data yang diperoleh, data ke 1 adalah yang paling menyimpang sehingga diuji dengan uji Q. 94,99 -- 95,10 Q=

= 0, 5238 95,20 – 94,99



SD

µ = 95,11 ± 4,0321 ×

n

0, 0094 6

µ = 95,11± 0,02 95,09% ≤ μ ≤ 95,13%

Lampiran 19

Kromatogram dari larutan tablet Floxifar (PT. Ifar) (a)


(b)


(c)

(d)


(e)


(f)

a, b, c, d, e, dan f merupakan kromatogram penyuntikan 6 kali dari larutan kaplet Floxifar pada konsentrasi 200 mcg/ml yang dianalisa secara KCKT menggunakan kolom VP-ODS (4,6 mm x 25 cm), fase gerak campuran Asam fosfat dan acetonitril (80:20), volume penyuntikan 20 µl. Laju alir 1,5 ml/menit pada λ 278 nm.

Lampiran 20. Analisa data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan FLOXIFAR ( PT. IFARS) secara KCKT

Kadar (%)

Area

X

Y

1.

103,81

2.

(X − X )

(X − X )

18429435

0,72

0,5184

103,29

18349220

0,2

0,04

3.

103,54

18388577

0,45

0,2025

4.

103,27

18346932

0,18

0,0324

No.

2


5.

102,79

18272796

-0,3

0,09

6.

101,89*

18132748

-1,2

1,44

∑ X = 618,59

(

∑ X −X

X = 103,09

SD =

(

∑X −X n −1

)

2

=

)

2

= 2,3233

2,3233 = 0,6816 5

= 0,6816


= 0,4687 103,81 - 101,89


SD n

µ = 103,09 ± 4.0321 ×

0, 6816 6

µ =103,09 ± 1,12 101,97% ≤ μ ≤104,21%

Lampiran 21. Kromatogram dari larutan tablet Lapiflok (PT. Lapi)


(a)

(b)


(c)


(d)


(e)

(f)


a, b, c, d, e, dan f merupakan kromatogram penyuntikan 6 kali dari larutan kaplet Lapiflok pada konsentrasi 200 mcg/ml yang dianalisa secara KCKT menggunakan kolom VP-ODS (4,6 mm x 25 cm), fase gerak campuran Asam fosfat dan acetonitril (80:20), volume penyuntikan 20 µl. Laju alir 1,5 ml/menit pada λ 278 nm. Lampiran 22.

Analisa data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan LAPIFLOK (PT. Lapi) secara KCKT

Kadar (%

Area

X

Y

1.

104,51*

18538495

-0,74

0,5476

2.

104,92

18601267

-0,33

0,1089

3.

105,42

18679135

0,17

0,0289

4.

105,65

18714052

0,4

0,16

5.

105,46

18684932

0,21

0,0441

6.

105,55

18698094

0,3

0,09

No.

(X − X ) (X − X )

2

∑ X = 631,51 ∑ = 0,9795

X = 105,25

SD =

(

∑X −X n −1

)

2

=

0,9795 = 0,4426 5


= 0,3596 105,65 - 104,51



SD n

µ = 105,25 ± 4.0321 ×

0, 4426 6

µ =105,25 ± 0,73 104,52% ≤ μ ≤105,98%

Lampiran 23. Kromatogram dari larutan tablet Viflok (PT. Tropika Mas Parmaceutical) (a)


(b)

(c)


(d)


(e)


(f)

a, b, c, d, e, dan f merupakan kromatogram penyuntikan 6 kali dari larutan kaplet Viflox pada konsentrasi 200 mcg/ml yang dianalisa secara KCKT menggunakan kolom VP-ODS (4,6 mm x 25cm), fase gerak campuran Asam fosfat dan acetonitril (80:20), volume penyuntikan 20 µl. Laju alir 1,5 ml/menit pada λ 278 nm Lampiran 24.

Analisa data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan VIFLOX (PT.Tropica Mas Pharmaceutical) secara KCKT

Kadar (%)

Area

X

Y

106,79

18890962

No.

1.

(X − X )

(X − X )

-0,33

0,1089

2


2.

106,44

18836993

-0,68

0,4624

3.

106,87

18903570

-0,25

0,0625

4.

107,32

18972793

0,2

0,04

5.

107,35

18977614

0,23

0,0529

6.

107,97*

19073339

0,85

0,7225

∑ X = 642,74

(

∑ X −X

X = 107,12

SD =

(

∑X −X n −1

)

2

)

2

= 1,4492

1, 4492 = 0,5384 5

=


= 0,4052 107,97 - 106,44


SD n

µ = 107,12 ± 4,0321 ×

0,5384 6

µ = 107,12 ± 0,89 106,23% ≤ μ ≤ 108,01%


Lampiran 25

Contoh Perhitungan Penimbangan Sampel

Diketahui: Berat 5 tablet = 3,7133 g = 0,3713 mg Kandungan Ciprofloxacin tiap tablet yang tertera di etiket= 500 mg Ditanya: Dibuat larutan uji dengan kadar lebih kurang 200 mcg/ml. Ditimbang serbuk setara dengan 50 mg, maka: Berat penimbangan sampel =

3713,3 mg × 50 mg 5 × 500 mg

= 74,266 mg Sampel yang telah ditimbang dimasukkan kedalam labu tentukur 50 ml, lalu dilarutkan ke dalam pelarut dan dicukupkan sampai garis tanda dengan aquabidestilata. Kadar larutan uji =

50 mg 50000 mcg = = 1000 mcg/ml 50 ml 50 ml

Kemudian dipipet 2,0 ml larutan, dimasukkan kedalam labu tentuku 10 ml dan dicukupkan sampai sampai garis tanda dengan aquabidestilata. Kadar larutan uji =

2, 0 ml × 1000 mcg / ml = 200 mcg/ml 10 ml

Lampiran 26. Contoh Perhitungan Untuk Mencari Kadar Ciprofloxacin Perhitungan kadar sampel Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

Y = = 76080,88 x + 2385291,75 Luas puncak =18288731 X=

18288731 − 2385291, 75 76080,88

X = 209,03 Kadar =

209, 03 × 98, 45% 200

= 102,90%

Lampiran 27. Daftar spesifikasi sampel 1. CIPROFLOXACIN 500 mg No. Bets

: 0811121


Produsen

: PT. Indo Farma

No. Pendaftaran

: DKL 9320916717 B1

Tgl. Daluarsa

: 10 2009

2. CIPROFLOXACIN 500 mg No. Bets

: P210-1

Produsen

: PT. Sanbe

No. Pendaftaran

: DKL9922227817 B1

Tgl. Daluarsa

: Juni 2012

3. CIPROFLOXACIN 500 mg No.Bets

: E2DO80B

Produsen

: PT.Novell

No. Pendaftaran : GKL0333507809 B1 Tgl.Daluarsa

: 04 2012

4. LAPIFLOK® 500 mg No. Bets

: YT 34122

Produsen

: PT. Lapi

No. Pendaftaran

: DKL 9413304517 B1

Tgl. Daluarsa : Des 13

5. VIFLOX® 500 mg No. Bets

: CB07411

Produsen

: PT. Tropica Mas Pharmaceutical

No. Pendaftaran

: DKL 0226007409 A1


Tgl. Daluarsa

: 02 2010

6. FLOXIGRA® 500 mg No. Bets

: YG 2446

Produsen

: PT. Graha Farma

No. Pendaftaran

: DKL 9431104610 B1

Tgl. Daluarsa

: 2011

7. FLOXIFAR® 500 mg No. Bets

: JE9816 B

Produsen

: PT. Ifars

No. Pendaftaran

: DKL 9709207104 B1

Tgl. Daluarsa

: 02 2010




PENETAPAN KADAR CIPROFLOXACIN DALAM SEDIAAN KAPLET DENGAN NAMA DAGANG DAN GENERIK SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI SKRIPSI OLEH:

Recommend Documents