PCR DIAGNOSTIKA INFEKČNÍCH AGENS
V LIKVORU MUDr. Zuzana Bílková MUDr. Ondřej Sobek, CSc.
ZÁKLADNÍ DG ALGORITMUS
Základní dg algoritmus vychází:
klinický obraz, epikrízaě odbĜr biologického materiálu cytologický obraz (kvantitativní + kvalitativní) základní biochemická vyšetįení (CB,glu+lak=energetika/KEB) imunologické parametry (cytokiny, TNF)
Dg. floridního zánětlivého procesu
přímý průkaz patogenu (kultivační vyšetření, PCR) nepřímý průkaz – stanovení specifických protilátek
KULTIVACE
Výhody
Široké spektrum zachycených mikrorg. na dg pķdách (selektivní dg pķdy) Možnost další práce s vykultivovaným kmenem (identifikace, aglutinace, sérotypizace, citlivost k atb)
Nevýhody problémy s rķstem bc na kult. pķdách (po ATB) časová náročnost nemožnost kultivace nĜkterých agens (rutinnĜ se neprovádí u virķě leptospiryě borelie (spirochety), toxoplasma, chlamydie, mykoplazmy)
PCR Výhody • rychláě citliváě prķkaz nekultivovatelných a obtížnĜ kultivovatelných patogenķ • u kritických pacientķě riziko prodleníě empirická th, eskalační - deeskalační th • MOŽNOST PRĶKAZU I VIRĶ (resp. „libovolného“ mikrobiálního agens)
Nevýhody • nelze dále pracovat s kmenem • dg spektrum (možnost multiplexķ) • vyšší cena
Vhodné obĜ možnosti diagnostiky kombinovat.
KAZUISTIKA Č. 1 83-letá pacientka pįijatá na neurol. JIP 8.1.2015 (čt); likvor zaslán TOPELEX + OKM ÚVN epikríza: meningeální syě porucha vĜdomíě TT 38 st.C, susp. neuroinfekce cytologie: Elementy: 680; Barvení: M-G: granulocytární pleocytóza s aktivací lymfocytķ; ůRAM: drobné gĚ tyčkyě kokovité formy KEB: -101,68 – v záporných hodnotách – oxidační vzplanutí profesionálních fagocytķ (granulocytķ) - susp. bakteriální infekce PCR: LIMO pozitivní prķkaz 9.1.2015 (pátek dopoledne) empirická léčba AMP kultivačnĜ prķkaz LIMO 10.1.2015 a nasazeny testy citlivosti (so+ne) Th: AMP lék volby, dop. doplnit Gen
KAZUISTIKA Č. 2 39-letá pacientka, hosp. na neurochirurgii, likvor zaslán 2.6.2015
epikríza: 4 mĜsíce po resekci kraniofaryngeomu, opakovaná likvorea,hydrocefalus, zavedený shuntě mok kultivačnĜ negativníě susp. neuroinfekce cytologie: 2.6. – Elementy: 200 ; Barvení: M-ů: pįevaha neutrof. granulocytķě pįítomny známky aktivace v lymfocytární įadĜě v monocytární įadĜ bez substrátu fagocytózy; ůRAM: bez prķkazu bakteriálních a mykotických partikulí.
KEB : -125,13 – oxidační vzplanutí profesion. fagocytķ
KAZUISTIKA Č. 2 POKRAČ. PCR: Candida albicans
kultivačnĜ bez nálezu (sonifikace) 8.6.: ELE: 206; trvající pįevaha granulocytķě plazmocyty;v monocyt. įadĜ ojed. pĜnité buňky; KEB: 4,86; PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn 14.6.: ELE: 115; granulocytátní pleocytóza, lymfocytární reakce; KEB: -14,35; PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn
KAZUISTIKA Č. 2 POKRAČ. 17.6.: ELE 275; granulocytární pleocytózaě zhoršení nálezu KEB: 3,38, PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn 23.6.: ELE: 180; trvající granulocytární pleiocytóza s plazmocytární reakcíě trvající obraz hnisavého zánĜtu KEB: 2,12; PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn
30.6.: ELE: 11; KEB: 22,37; PCR: CAAL- NEGATIVNÍ
Th: Diflucan
KAZUISTIKA Č. 3 6-ti mĜsíční holčičkaě indikovaný pįedčasný porod s.c., v dobĜ porodu matka nemocnáě užívala atbě otec pįenašeč m. Wilson epikríza: pįetrvává výrazná elevace zánĜtlivých parametrķě v HK E.coli cytologie: ELE: 7253; M-ů: pįevaha neutrof.granulocytķě četná vakuolizace v monocyt. įadĜěreaktivní lymfoplasmocytyě masivní nálož bakterií; ůRAM: gpolymorfní tyče KEB: -1516
PCR: Enterobacteriaceae POZITIVNÍ
Th: cef.3. gen +Gen, Meronem
KAZUISTIKA Č. 3 (TABULKA)
172 ELE
2259
215
487
152
57
(KP, plazmocyt 0)
10
KEB -1948
-158
-31,87
-6,1
15,74
15,95
15,63
PCR pozit. pozit. pozit. pozit. NEG.
NEG.
NEG.
Tab.: Vývoj infekce v laboratorních parametrech
KAZUISTIKA Č. 4
EPIKRÍZA: • 40-ti letá ženaě 4 dny trvající cefalea, nauzea, vomitusě klin. vyjádįený meningeální sy, susp. serózní neuroinfekce
Cytologie: • Kvantitativní: elementy: 357/mikroliltr • Kvalitativní: pįevaha aktivovaných lymfocytķě pįítomny nečetné plazmocyty; Ré: obraz serózního zánĜtu
KEB: 22,79 v mezích serózního zánĜtu
KAZUISTIKA Č. 4 POKRAČ. Zánětl. markery: elevace: IL6, IL8, IL10, CXCL13, BMG, AAG Destrukční markery:
elevace S-100- známky bunĜčné léze Serologie: Anti- HSV1+2,-VZV,-CMV,-EBV zvýšená hladina ve tįídĜ IgG, IgM bez nálezu, v.s. anamnestické protilátky PCR: POZITIVNÍ PRŮKAZ PĮÍTOMNOSTI DNA VIRU HSV2!
ZÁVěR Vhodné je metody přímého průkazu kombinovat Případně se rozhodnout pro tu, která je pro konkrétní případ:
• vhodnĜjší (napį. PCR pro obtížnĜ kultivovatelné agens) • má vĜtší pįínos (mám podezįení na určitý patogeně potįebuji co nejrychleji informaciě potvrdím nebo vyloučím PCR) www.likvor.cz
