PCR DIAGNOSTIKA INFEKČNÍCH AGENS V EXTRAVASKULÁRNÍCH
TEKUTINÁCH MUDr. Zuzana Bílková
ZÁKLADNÍ DG ALGORITMUS
Základní dg algoritmus vychází:
klinický obraz, epikrízaě odbĜr biologického materiálu cytologický obraz (kvantitativní + kvalitativní) základní biochemická vyšetření (CB,glu+lak=energetika/KEB) imunologické parametry (cytokiny, TNF)
Dg. floridního zánětlivého procesu
přímý průkaz patogenu (kultivační vyšetření, PCR) nepřímý průkaz – stanovení specifických protilátek
KULTIVACE
Výhody
Široké spektrum zachycených mikrorg. na dg pķdách (selektivní dg pķdy) Možnost další práce s vykultivovaným kmenem (identifikace, aglutinace, sérotypizace, citlivost k atb)
Nevýhody problémy s rķstem bc na kult. pķdách (po ATB) časová náročnost nemožnost kultivace nĜkterých agens (rutinnĜ se neprovádí u virķě leptospiryě borelie (spirochety), toxoplasma, chlamydie, mykoplazmy)
PCR
Výhody
rychláě citliváě prķkaz nekultivovatelných a obtížnĜ kultivovatelných patogenķ u kritických pacientķě riziko prodleníě empirická th, eskalační - deeskalační th MOŽNOST PRĶKAZU I VIRĶ (resp. „libovolného“ mikrobiálního agens)
Nevýhody
nelze dále pracovat s kmenem dg spektrum (možnost multiplexķ) vyšší cena
Vhodné obĜ možnosti diagnostiky kombinovat.
KAZUISTIKA Č. 1 83-letá pacientka přijatá na neurol. JIP 8.1.2015 (čt); likvor zaslán TOPELEX + OKM ÚVN
epikríza: meningeální syě porucha vĜdomíě TT 38 st.C, susp. neuroinfekce cytologie: Elementy: 680; Barvení: M-G: granulocytární pleocytóza s aktivací lymfocytķ; ůRAM: drobné gĚ tyčkyě kokovité formy
KEB: -101,68 – v záporných hodnotách – oxidační vzplanutí profesionálních fagocytķ (granulocytķ) - susp. bakteriální infekce PCR: LIMO pozitivní prķkaz 9.1.2015 (pátek dopoledne) empirická léčba AMP kultivačnĜ prķkaz LIMO 10.1.2015 a nasazeny testy citlivosti (so+ne) Th: AMP lék volby, dop. doplnit Gen
KAZUISTIKA Č. 2 54-letý pacient,hospitalizován na neurologickém odd. epikríza: ICMP s pravostrannou symptomatologií, horní meningeální sy, febrilní, kortikoterapie v reumatolog. záležitosti cytologie: ELE: 109; granulocytární pleocytóza s lymfocytární a ojed. monocytární lipofagickou reakcí, ré: počínající fáze serózního zánĜtu
KEB: 24,3 v mezích serózního zánĜtu PCR: I.bĜh se standardním objemem likvoru (200 mikrol): LIMO negativníě II. bĜh objem 500mikrol: PCR LIMO: POZITIVNÍ! (nízká bakteriální náložě chyba inokula) kultivace: z likvoru neprovedena, v HK- LIMO Th: Amp+Gen
KAZUISTIKA Č. 3 39-letá pacientka, hosp. na neurochirurgii, likvor zaslán 2.6.2015
epikríza: 4 mĜsíce po resekci kraniofaryngeomu, opakovaná likvorea,hydrocefalus, zavedený shuntě mok kultivačnĜ negativníě susp. neuroinfekce cytologie: 2.6. – Elementy: 200 ; Barvení: M-ů: převaha neutrof. granulocytķě přítomny známky aktivace v lymfocytární řadĜě v monocytární řadĜ bez substrátu fagocytózy; ůRAM: bez prķkazu bakteriálních a mykotických partikulí. KEB : -125,13 – oxidační vzplanutí profesion. fagocytķ
PCR: Candida albicans
kultivačnĜ bez nálezu (sonifikace)
KAZUISTIKA Č. 3 POKRAČ. 8.6.: ELE: 206; trvající převaha granulocytķ, plazmocyty;v monocyt. řadĜ ojed. pĜnité buňky; KEB: 4ě86; PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn 14.6.: ELE: 115; granulocytátní pleocytóza, lymfocytární reakce; KEB: -14,35; PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn 17.6.: ELE 275; granulocytární pleocytózaě zhoršení nálezu KEB: 3ě38ě PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn 23.6.: ELE: 180; trvající granulocytární pleiocytóza s plazmocytární reakcí, trvající obraz hnisavého zánĜtu KEB: 2ě12; PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn 30.6.: ELE: 11; KEB: 22,37; PCR: CAAL- NEGATIVNÍ Th: Diflucan
KAZUISTIKA Č. 4 6-ti mĜsíční holčičkaě indikovaný předčasný porod s.c., v dobĜ porodu matka nemocnáě užívala atbě otec přenašeč m. Wilson epikríza: přetrvává výrazná elevace zánĜtlivých parametrķě v HK E.coli cytologie: ELE: 7253; M-ů: převaha neutrof.granulocytķě četná vakuolizace v monocyt. řadĜěreaktivní lymfoplasmocytyě masivní nálož bakterií; ůRAM: gpolymorfní tyče KEB: -1516
PCR: Enterobacteriaceae POZITIVNÍ
Th: cef.3. gen +Gen, Meronem
KAZUISTIKA Č. 4 (TABULKA)
172 ELE
2259
215
487
152
57
(KP, plazmocyt 0)
10
KEB -1948
-158
-31,87
-6,1
15,74
15,95
15,63
PCR pozit. pozit. pozit. pozit. NEG.
NEG.
NEG.
Tab.: Vývoj infekce v laboratorních parametrech
ZÁVěR
Vhodné je metody přímého prķkazu kombinovat PřípadnĜ se rozhodnout pro tuě která je pro konkrétní případ: •vhodnĜjší (např. PCR pro obtížnĜ kultivovatelné agens) •má vĜtší přínos (mám podezření na určitý patogeně potřebuji co nejrychleji informaciě potvrdím nebo vyloučím PCR)
