Tematika Bevezetés. Az élő anyag szerkezete. Sugárzások. Lumineszcencia Röntgensugárzás Radioaktivitás, dozimetria. Hang, ultrahang.
Kellermayer Miklós Biomolekuláris rendszerek vizsgálata. Termodinamika, transzportfolyamatok. A vérkeringés és szívműködés biofizikája.
Komplexitás
Orvosi Biofizika
Bioelektromos jelenségek. Szenzoros működés. A látás és hallás biofizikája. Izomműködés. A biológiai mozgás molekuláris alapjai. Biofizikai kutatások az orvostudományban.
Biomolekuláris rendszerek mérettartománya
A tudományos igazság alapja
1023 Atom
Hangya
Milliskála
Termodinamika
1 milliméter
„bármely igazság próbaköve a kísérlet”
Poratka
Mikroskála
Emberi hajszál
Vörösvértest, fehérvérsejt
1010 Atom
Látható spektrum
Mezoskála
Nanoskála
103 Atom DNS
101 Atom
Kvantumkémia Kvantumfizika
5 db Si atom
100 Atom
Tudományos módszer:
Tudományos lelkület:
Megfigyelés Megfontolás Kísérlet
Rácsodálkozás Kritikus gondolkodás Kérdezés és kétkedés
A természettudomány alapállításai >Atomelmélet< A természet részecskékből áll, amelyek állandó mozgásban vannak, és vonzzák-taszítják egymást.
Orvosi Biofizika
Az “élő” folyamatokat egyszerűsíti, számszerűsíti
A természet folyamatai leírhatók a részecskék segítségével. A természeti törvények statisztikus jellegűek (példa: dobhártya)
Biológiai jelenség fizikai leírása
Cél: Orvosi és biológiai jelenségek, folyamatok fizikai leírása
A spermatocita által érzékelt közegellenállás Stokes törvény:
F = γv = 6rπηv γ = 6rπη = 6 ⋅1.6 ×10−6(m)⋅ π ⋅10−3(Pas) = 3 ×10−8 Ns/m F = γv = 3 ×10−8 Ns/ m ⋅ 5 × 10−5 m /s = 1.5 × 10−1 2N = 1.5 pN
Spermatocita motilitás molekuláris mechanizmusa? “In vitro motilitási próba” Dynein
MT
Újsághír Az Eagle Rock középiskola diákja nyerte el az első díjat az április 26-án megrendezett Idaho Falls középiskolai Tudományos Konferencián. Dolgozatával azt akarta bemutatni, mennyire ráhangolódtak az emberek a tudománnyal való handabandázásra és a környezet lerombolásától való félelemre. Elkészített egy felhívást a "dihidrogén monoxid" vegyület betiltására, és ezt követően megvizsgálta, mennyire tudja meggyőzni az embereket, hogy aláírásukkal támogassák. A betiltás támogatására a következő okokat hozta fel:
Mikroszkóp fedőlemez
Fluoreszcencia mikroszkópia Lépés: 8 nm (Minden második tubulin alegység közötti távolság)
1. a vegyület erőteljes izzadást és hányást képes okozni 2. a savas esők egyik fő komponense 3. gáznemű halmazállapotban égési sérüléseket okozhat 4. nagy mennyiségű belélegzése fulladást okoz 5. hozzájárul a természet eróziójához 6. erősen csökkenti az autófékek hatékonyságát 7. kimutatták rákos daganatokban. A diák 50 embert kért fel a betiltást sürgető felhívás aláírására. Negyvenhárom (43) aláírta. Hat (6) azt mondta, még gondolkodik.
Egy (1) tudta mindössze, hogy a vízről van szó. . .
Víz • Egyetlen vegyület, mely a (földi)
A víz biofizikája
természetben folyadék
• Egyetlen vegyület, mely a természetben mindhárom halmazállapotban megtalálható
• Szervetlen, de a szerves élet számára létfontosságú
A vízmolekula szerkezete I.
A vízmolekula szerkezete II. • Tetraéder szerkezet • sp3 hibridizáció (Hibridizáció: azonos
Egyik legkisebb molekula: alig nagyobb, mint egy atom
főkvantumszámú, de különböző szimmetriájú állapotok kombinációja)
Oxigén: 2s2p4
O H
109.47˚ 0.96-0.99 Å (jég - vízgőz)
H nem-kötő elektronpárok
A vízmolekula szerkezete III.
van der Waals sugár: ~ 3.2 Å Nem gömb alakú
Nagy állandó dipólmomentum izolált molekulában:
+
104.45˚
-
A vízmolekula szerkezete IV.
A vízmolekula szerkezete V.
A vízmolekula forgó-rezgő mozgása
Víz dimér: H-kötés a proton és nem-kötő elektronpár között
Abszorpció az infravörös, vörös tartományban -> természetes vízek “kék” színe
A jég szerkezete Hidrogénkötés vízben Víz pentamer kialakulása
• 9 módosulat • Közönséges jég: hexagonális szerkezet • Koordinációs szám: 4 (minden molekula 4 másikat koordinál) • Interstitium: elférne benne egy vízmolekula
A cseppfolyós víz szerkezete
A víz fizikai tulajdonságai I. Nagy dipólmomentum:
Clusterekből hálózat: 280 molekulából ikozaéder szerkezet
H-híd: kohézió + taszítás Cluster képződés: biciklo-oktamer
Jó oldószer Elektrolit oldatok
Anomális sűrűséghőmérséklet függvény ρ (g/cm3) 1.00
(ikozaéder: 20 azonos egyenlő oldalú háromszöggel határolt szabályos téridom)
+ Térbeli hálózatos szerkezet: magyarázhatja a víz anomális tulajdonságait Nem-kötött kölcsönhatások
4
Mikrohullámú sütő!
H-kötött kölcsönhatások
Élet a befagyott tóban!
A víz fizikai tulajdonságai II. Hidratáció
Fázisdiagram •Fázisgörbe: két fázis egyensúlyban •Fázisgörbékközötti terület: egyetlen fázis van jelen •Metszéspont: hármaspont
P (kPa)
•
Elektrolit oldatok
•
Nem elektrolit oldatok, apoláros molekula: hidrofób hidratáció
•
Fehérje hidratáció Szerkezet fenntartás Polarizált “multilayer”
•
Nukleinsavak Bázispárok
olvadáspont görbe forráspont görbe
JÉG
VÍZ
Fehérje
Ligandum
Mikrogyöngy exklúzió víz multilayerrel?
hármaspont
101 0.61
2 μm latex gyöngyök
szublimációs görbe
-273
GŐZ Bázispárosodás
0.0076
100
víz
T (˚C)
Víz “multilayer” Nafion polimer
T (˚C)
“Floating water bridge”
Makromolekulák
5 kV
Elmar Fuchs, Wetsus
A biológiai makromolekulák HATALMAS molekulák
A biológiai makromolekulák IZGALMAS molekulák
Hemoglobin alegység térszerkezeti modellje DNS dupla hélix
Bakteriofágból kiszabaduló DNS fonal
Újonnan termelődő fehérje (selyemfibroin)
A makromolekulák tömeg szerinti mennyisége a sejtben NAGY
Biológiai makromolekulák: biopolimérek Polimérek: Építőkockákból, monomerekből felépülő láncok
Ionok, kismolekulák (4%)
Monomerek száma: N>>1; Típusosan, N~102-104, de DNS: N~109-1010
Foszfolipidek (2%) DNS (1%)
30 % egyéb vegyületek
RNS (6%)
Fehérjék 15%)
Baktériumsejt
MAKROMOLEKULÁK
70 % Víz
Poliszacharidok (2%)
Biopolimérek alakja
Biopolimer
Alegység
Kötés
Fehérje
Aminosav
Kovalens (peptidkötés)
Nukleinsav (RNS, DNS)
Nukleotid (CTUGA)
Kovalens (foszfodiészter)
Poliszacharid (pl. glikogén)
Cukor (pl. glukóz)
Kovalens (pl. α-glikozid)
Fehérjepolimer (pl. mikrotubulus)
Fehérje (pl. tubulin)
Másodlagos
A polimérek alakja a bolyongó mozgásra emlékeztet
1. Lineáris 2. Elágazódó
Brown-mozgás - “random walk” rN
3. Cirkuláris
“Négyzetgyök törvény”:
R 2 = Nl 2 = Ll R
A polimérlánc alakja dinamikusan változik. Lehetséges mechanizmusok: 1. C-C kötések körüli rotáció
2. Súrlódásmentes pántokkal összekapcsolt merev rudak (FJC)
R = vég-vég távolság N = elemi vektorok száma
3. Kötés torzulás, hajlítás (WLC)
r1
l = ri = korrelációs hossz ri = elemi vektor Nl = L = kontúrhossz l összefüggésben van a hajlítómerevséggel.
Bolyongó (diffúzióvezérelt) mozgás esetén R=elmozdulás, N= elemi lépések száma, L=teljes megtett út, és l=átlagos szabad úthossz.
Biopolimérek mechanikája Entrópikus rugalmasság
Biopolimérek rugalmassága l = korrelációs hossz (hajlítómerevséget jellemzi) L = kontúrhossz
Termikus gerjesztésre a polimerlánc random, ide-oda hajló fluktuációkat végez.
Merev lánc l>>L
Nő a lánc konformációs entrópiája (elemi vektorok orientációs rendezetlensége).
Szemiflexibilis lánc l~L
Mikrotubulus
Aktin filamentum
Az entrópiamaximumra törekvés miatt a polimerlánc rövidül.
Flexibilis lánc l<
DNS molekula
Csomókötés egyetlen DNS láncra
mikrogyöngy mozgatható lézercsipeszben Fáziskontraszt kép
Fluoreszcencia kép
Fehérjetekeredés mikrogyöngy stacionárius lézercsipeszben Kinosita Group
A peptid kötés Fehérjék szerkezete
Víz felszabadulással járó kondenzációs reakció
Fehérjeszerkezet megjelenítése
Elsődleges
Másodlagos
Harmadlagos
Aminosavsorrend
α-hélix β-lemez β-kanyar
Egyláncú fehérje teljes térszerkezete
α-hélix: • jobbmenetes • 3.4 aminosav/ emelkedés • H-hidak
β-lemez: • parallel v. antiparallel • H-hidak távoli aminosavak között
Fehérjeszerkezetet összetartó kölcsönhatások
1. Diszulfid híd: cisztein aminosavak között drótváz
térkitöltő
2. Hidrogén híd: megosztott proton 3. Sókötés: ellentétesen töltött részek között
gerincváz
szalag
Miozin S-1
4. Hidrofób kölcsönhatás: hidrofób molekularészek között (molekula belsejében)
Fehérjeszerkezeti osztályok 1. Tiszta alfa
Hogyan alakul ki a fehérje térszerkezete?
calmodulin
Anfinsen: spontán folding Levinthal-féle paradoxon: Kipróbálja-e a fehérje az összes lehetséges konfigurációt?
2. Tiszta béta
A lehetséges konfigurációk száma:
porin
in
(3. Alfa-béta)
4. Multidomén
Peptidkötés által meghatározott planáris peptidcsoport
i: az egy peptidcsoporthoz tartozó leheteséges konfigurációk száma
miozin
Levinthal-féle paradoxon: Kipróbálja-e a fehérje az összes lehetséges konfigurációt?
n: aminosavak száma
„Folding tölcsér” Fehérjetekeredési rendellenességek Pathológia: -Alzheimer kór, -Familialis amiloidotikus neuropátia (FAP)
Az élő sejt chaperon fehérjékkel segíti a tekeredést
Béta-fibrillumok: oldhatatlan precipitátum
Fehérjekitekerési módszerek • • •
Hő Kémiai ágens Mechanikai erő
Béta-hordó szerezetű fehérje mechanikai kitekerése A mechanikai kitekerés számítógéppel modellezett lépései
Egyetlen fehérjemolekula mechanikai kitekerése atomerőmikroszkóppal
Erő (pN)
A mechanikai stabilitás alapja: Az Ig domén első és utolsó ß-láncait összetartó H-hidak
140 120 100 80 60 0.22
0.24
0.26
0.28
0.3
0.32
0.34
Megnyúlás (μm)
Titin immunglobulin domén kitekerése Mechanikai stabilitás alapja: nyíróerő irányába álló H-híd csoport
Erő spektrum
C2A domén mechanikai kitekerése Alacsony mechanikai stabilitás a H-hidak “zippzár” geometriája miatt
C2A domén erőspektruma
Carrion-Vazquez et al. 2000 Carrion-Vazquez et al. 2000
Mechanikai stabilitás mechanizmusa Kölcsönhatások párhuzamos csatolása
Alkalmazás:
Gecko talp tapadása: Párhuzamosan csatolt sertékkel
Mesterséges gecko talp
