Biofizika 2 Fizika-Biofizika

Biofizika 2 Fizika-Biofizika 2

2013.

AJÁNLOTT HONLAPOK 1.

http://www.olympusmicro.com/index.html

http://www.microscopyu.com/

http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/index.html

Biofizika 2. Fizika-Biofizika 2. 2013. 02. 25. & 26. Dr. Bugyi Beáta - PTE ÁOK – Biofizikai Intézet

AJÁNLOTT HONLAPOK 2. MIKROSZKÓPIA - MÉRFÖLDKÖVEK

KÉTFOTON MIKROSZKÓPIA INTRAVITÁLIS MIKROSZKÓPIA élı egérben véráram a májban

http://www.nature.com/milestones/milelight/index.html

FÁZIS KONTRASZT MIKROSZKÓPIA Listeria monocytogenes PtK2 sejtben forrás Julie Theriot, Dan Portnoy

TIRF MIKROSZKÓPIA aktin filamentumok in vitro forrás Bugyi Beáta

3D KONFOKÁLIS MIKROSZKÓPIA tengeri csillag petesejt, meiozis forrás Péter Lénárt

FLUORESZCENCIA MIKROSZKÓPIA EGFP aktint expresszáló B16 melanoma sejt

FRAP lamellipodium aktin dinamikája EGFP aktin expresszló B16-F1 sejtekben

forrás Klemens Rottner

http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/articles/basics/historical.html http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/tutorials/axioobserver/index.html

forrás Lai et al. EMBO Journal 2008

HISZEM, HA LÁTOM

BIOLÓGIA KÉPALKOTÓ TECHNIKÁK Abbe elv

!

emberi szem

? PET, SPECT MRI, CT, ultrahang optikai koherencia tomográfia (OCT)

íííííííííííííííí széleslátóterő, evaneszcens mikroszkópia konfokális mikroszkópia 4Pi, I5M

Az emberi szem felbontóképességének (α α) hullámoptikai határa:

~ ~0.8’-1.68’ ≈ 0.1 mm a tisztánlátás távolságából (25 cm)

a fény hullámhossza: λ a pupilla átmérıje: d

high resolution structured illumination (hrSIM)

MIKROSZKÓPIA

ground state depletion (GSD) saturated structured illumination (sSIM) stimulated emission depletion (STED) egyedi molekula lokalizáció (PALM, STORM) közeli mezı optikai mikroszkópia (NSOM)

Emlékeztető: I. félév 9. előadás - Látás

elektron mikroszkópia (EM)

1


2013.

MIKROSZKÓPIA - MIKROSZKÓP

OPTIKAI - FÉNYMIKROSZKÓPIA Képalkotás: látható fény (λ = 400 – 700 nm) üvegbıl készült lencsék

MIKRO SZKÓPIA (görög)= MIKRON = kicsi + SZKOPEIN = nézni az emberi szem számára láthatatlan, apró vizsgálati objektumok megjelenítése, „láthatóvá tétele” eszköze: mikroszkóp

A mikroszkópia segítségével láthatóvá tehetjük az élı rendszerek különbözı szervezıdési szintjeit: szervektıl (cm 10-2m) egyedi molekulákig (nm 10-9m). 7 nagyságrend!!!!

NA = 0.04 – 1.45

„EGYSZERŐ” MIKROSZKÓP – LUPE (1 GYŐJTİLENCSE)

„ÖSSZETETT” MIKROSZKÓP (2 GYŐJTİLENCSE)

retina szem

OKULÁR - szemlencse GYŐJTİLENCSE

KÉP 1: objektív TÁRGY

fókusztávolságon belül

nagyított valódi fordított állású

OBJEKTÍV - tárgylencse TÁRGY KÉP

nagyított egyenes állású látszólagos

KÉP 2: okulár

Emlékeztető: Geometriai optika

MODERN FÉNYMIKROSZKÓP

nagyított egyenes állású látszólagos

MODERN FÉNYMIKROSZKÓP – LEGFONTOSABB OPTIKAI ELEMEK FÉNYFORRÁS

OBJEKTÍV (tárgylencse, 1db)

KONDENZOR

a tárgyhoz közelebb esı lencserendszer nagyítás

OKULÁR (szemlencse, 2db)

OKULÁR

KONDENZOR

a megfigyelıhöz közelebb esı lencserendszer nagyítás

TÁRGY minta KÉP DETEKTOR:SZEM

KONDENZOR

OBJEKTÍV

a fényforrás fényének összegyőjtésére és a tárgyra fókuszálására szolgáló lencserendszer egyenletes megvilágítás

OBJEKTÍV

OKULÁR (2db) SZŐRİK TÜKRÖK VÁZ http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/tutorials/axioobserver/index.html

KÉP DETEKTOR:KAMERA

12

2


MEGVILÁGÍTÁS - transzmissziós

2013.

MEGVILÁGÍTÁS - epi

ÁTESİFÉNY - TRANSZMISSZIÓS

EPI

FÉNYFORRÁS

TÁRGY

TÁRGY

KÉP DETEKTOR

KÉP DETEKTOR

FÉNYFORRÁS

http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/tutorials/axioobserver/index.html

http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/tutorials/axioobserver/index.html

MIKROSZKÓPVÁZ – upright / inverted

KÉPALKOTÁS: TÁRGY → KÉP SZEM

↑

TÁRGY-PONT

FOTON

↓ DIGITÁLIS JEL KÉP-”PONT” PIXEL

INTENZITÁS TÉRKÉP

http://www.olympusmicro.com/primer/digitalimaging/digitalimagebasics.html http://www.olympusmicro.com/primer/java/digitalimaging/processing/spatialresolution/index.html

A KÉPALKOTÁS LEGFİBB KÖVETELMÉNYEI

1. NAGYÍTÁS NAGYÍTÁS: N

é é á é

1. NAGYÍTÁS elég nagy legyen

v

2. FELBONTÁS

minden érdekes részlet láthatóvá váljon milyen kicsi dolgokat láthatunk?

3. KONTRASZT

minden érdekes részlet jól elkülönüljön a környezetétıl

OBJEKTÍV: Nobjektív ≈ 2.5 – 150x OKULÁR: Nokulár ≈ 10 – 25x

MIKROSZKÓP NAGYÍTÁSA: ó! "#$%í' ∗ )*á Nmikroszkóp ≈ 50x – 1200x

3


2013.

2. FELBONTÁS

FELBONTÓKÉPESSÉG – DIFFRAKCIÓ (ELHAJLÁS)

FELBONTÓKÉPESSÉG: d az a legkisebb távolság, amelyre lévı két tárgypont képe még megkülönböztethetı egymástól a képen

KÉP

DESTRUKTÍV -2 -1

0 +1

kioltás - sötét

+2

kép INTERFERENCIA

KONSTRUKTÍV erısítés - világos

… nem olyan egyszerő, mint amilyennek tőnik

objektív

ELHAJLÁS DIFFRAKCIÓ

elhajlási irány

az 1D-s pont képe nem pont, hanem egy 3D-s mintázat

optikai rács

TÁRGY

fényáteresztı képesség periódikusan változik

tárgy OPTIKAI RÁCS

kondenzor

fényrekesz http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/articles/basics/imageformation.html

Emlékeztető: I. félév 18. előadás – EM hullámok tulajdonságai: diffrakció, interferencia

FELBONTÓKÉPESSÉG – AIRY MINTÁZAT

FELBONTÓKÉPESSÉG – AIRY MINTÁZAT

George Biddel Airy (1801-1892)

AIRY MINTÁZAT: egyetlen tárgypont elhajlási képe

egyetlen tárgypontról képpont helyett koncentrikus körök formájában megjelenı erısítési és kioltási helyek sorozata alakul ki elhajlási kép TÁRGY 1D

POINT SPREAD FUNCTION

erısítés

KÉP 3D

1. minimum

d maximum

kioltás

3 0 Airy korong

2 1

nem felbontott

felbontott

Az egyik maximuma éppen a másik elsı minimumába esik. AIRY MINTÁZAT

OBJEKTÍV – NUMERIKUS APERTÚRA

http://www.microscopyu.com/articles/formulas/formulasresolution.html http://www.olympusmicro.com/primer/anatomy/image.htm

OBJEKTÍV – NUMERIKUS APERTÚRA

APERTÚRA SZÖG (α) az objektív által összegyőjtött fénysugarak félkúpszöge

NUMERIKUS APERTÚRA (NA) az optikai lencserendszerek fénygyőjtı képességének egység nélküli mérıszáma az objektív mekkora szögben (α) képes begyőjteni az egy tárgypontból érkezı sugarakat

+ , ∗ -., objektív apertúra szöge: α a minta és az objektív közötti közeg törésmutatója: n ,/,1 NA = 0.04 – 1.7

http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/articles/basics/resolution.html http://www.microscopyu.com/articles/formulas/formulasna.html http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/articles/basics/resolution.html

sin 56-é-.7 sin 5öé-.7

IMMERZIÓS KÖZEG

törésmutató: n

levegı

1.0002

olaj

1.5

glicerin

1.4695

víz

1.3333

Emlékeztető: Geometriai optika

4


2013.

FELBONTÓKÉPESSÉG – ABBE ELV – DIFFRAKCIÓS LIMIT

NUMERIKUS APERTÚRA - FELBONTÓKÉPESSÉG

Ernst Abbe (1840-1905)

XY irányban – a minta síkjában

9:,;

Z irányban – optikai tengely mentén

1 = ∗ 2 +

9 2 ∗

= 5 +7/

megvilágítás hullámhossza: λ objektív numerikus apertúrája: NA (NA = n*sinα α)

Annál jobb a mikroszkóp felbontása, minél kisebb d, azaz: megvilágítás hullámhossza: λ ↓ apertúra szög: α ↑ a minta és az objektív közötti közeg törésmutatója: n ↑

Fénymikroszkóp felbontása: dx,y ~ 200 nm és dz ~ 1000 nm

3. KONTRASZT

http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/tutorials/basics/numericalapertureimageresolution/index.html

FÁZIS-KONTRASZT MIKROSZKÓPIA 1953. Frits Zernike Fizikai Nobel-Díj

KONTRASZT a tárgynak a leképezés szerinti inhomogenitását erısítjük fel (azt a tulajdonságát használjuk ki, ami megkülönbözteti a környezetétıl) például: OPTIKAI INHOMOGENITÁS miatt fényelnyelés törésmutató alak szín a tárgyon áthaladó FÉNYSUGARAK SAJÁTSÁGAI MEGVÁLTOZHATNAK irány sebesség fázis polarizáltság hullámhossz…

,

>? >

törésmutatóbeli eltérések fázisbeli különbségek intenzitásbeli különbségek fényeslátóterő

n↑ c↓

fázis-kontraszt

technikák: fázis-kontraszt-, differenciál-interferencia kontraszt- (DIC), Hoffman-modulációs kontraszt-, sötétlátóterő-, polarizált fény-, fluoreszcencia- mikroszkópia NA = 0.04 – 1.45 emberi glia agysejtek egyrétegő kultúrában

http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/articles/basics/contrast.html

http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/articles/basics/contrast.html

FÁZIS-KONTRASZT MIKROSZKÓPIA

SZTEREOMIKROSZKÓPIA – 3D KÉP két mikroszkóptubus 14o 2 objektív + 2 okulár NE KEVERJÜK BINOKULÁRRAL!!!

Listeria monocytogenes PtK2 sejtben forrás Julie Theriot, Dan Portnoy

sejtmozgás forrás Vic Small

14o

ÖSSZE

A

TÁRGY ↓ két 2D kép (bal - jobb) ↓ egy 3D KÉP alkalmazás: mikrosebészet

aktin hálózat modell rendszerben forrás Bugyi Beáta

5


2013.

FLUORESZCENCIA MIKROSZKÓPIA

FLUOROFÓROK

Képalkotás: a mintának a megvilágító fény által kiváltott fluoreszcencia emissziója üvegbıl készült lencsék nem invazív

BELSİ (INTRINSIC) FLUOROFÓR: korlátozott klorofil KÜLSİ (EXTRINSIC) FLUOROFÓR: széles spektrális lehetıségek szintetikus festékek kvantum gyöngy fehérje GFP (zöld fluoreszcens fehérje) és változatai

1904. August Köhler: UV mikroszkóp 1911. Oskar Heimstadt: fluoreszcencia mikroszkóp

2008. Kémiai Nobel-díj: Osamu Shimomura, Martin Chalfie and Roger Tsien

antitest 1942. immunofluoreszcencia direkt (target-antitest*fluorofór) Indirekt (target-elısdleges antitest-másodlagos antitest*fluorofór)

http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/print/basics/fluorescence-print.html

Emlékeztető: II. félév 2. előadás – Fluoreszcencia spektroszkópia

http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/articles/superresolution/palm/introduction.html

FLUOROFÓROK

MIKROSZKÓPVÁZ – EPIFLUORESZCENS ELRENDEZÉS

FOTOSZABÁLYOZHATÓ FLUOROFÓROK: speciális alkalmazások

DETEKTOR

STANDARD OKULÁR

FOTOAKTIVÁLHATÓ

EMISSZIÓS SZŐRİ

DIKROIKUS TÜKÖR FÉNYFORRÁS GERJESZTÉSI SZŐRİ

FOTOKAPCSOLHATÓ

OBJEKTÍV

MINTA http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/print/superresolution/palm/practicalaspects-print.html

http://en.wikipedia.org/wiki/Fluorescence_microscope

FÉNYFORRÁS

SZŐRİK, TÜKRÖK

higanygız lámpa

ADOTT HULLÁMHOSSZ lézer

xenon lámpa

fém halogenid

ALULÁTENGEDİ

SÁV

FELÜLÁTENGEDİ

DIKROIKUS SZŐRİ/TÜKÖR

TRANSZMITTANCIA (%)

HULLÁMHOSSZTARTOMÁNY

LED HULLÁMHOSSZ (nm)

http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/articles/lightsources/index.html Emlékeztető: I. félév 23. előadás - Lézer

http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/print/basics/fluorescence-print.html

6


2013.

SZŐRİKOCKA

DETEKTOROK - PMT (photomultiplier tube): FOTOELEKTRON SOKSZOROZÓ GERJESZTÉS

1921. Albert Einstein Fizikai Nobel-díj

EMISSZIÓ

vákuumcsı

dinódalánc – fém elektród másodlagos emisszió

fotokatód foton

anód

e-

elektromos jel fókuszáló elektróda

emissziós szőrı

SZŐRİ KOCKA

dikroikus tükör

+

fotoelektromos hatás foton elektron

gerjesztési szőrı

http://www.olympusmicro.com/primer/techniques/confocal/pmtintro.html

Emlékeztető: I. félév 19. előadás – Fényelektromos hatás

http://www.olympusmicro.com/primer/techniques/fluorescence/anatomy/fluoromicroanatomy.html

DETEKTOROK - CCD (charge-coupled device): TÖLTÉS-CSATOLT ESZKÖZ 2009. Boyle és Smith megosztott Fizikai Nobel-díj

foton

eegymáshoz csatolt kondenzátorok

elektromos jel fotoelektromos hatás foton elektron

Biofizika 2. Fizika-Biofizika 2. 2013. 03. 04. & 05. Dr. Bugyi Beáta - PTE ÁOK – Biofizikai Intézet

http://learn.hamamatsu.com/articles/ccdanatomy.html http://learn.hamamatsu.com/articles/fullframe.html http://www.microscopyu.com/articles/digitalimaging/ccdintro.html http://hu.wikipedia.org/wiki/F%C3%A1jl:CCD_charge_transfer_animation.gif

MODERN MIKROSZKÓPIAI MÓDSZEREK

BIOLÓGIA KÉPALKOTÓ TECHNIKÁK ABBE ELV

KÖVETELMÉNYEK

emberi szem

PET, SPECT MRI, CT, ultrahang optikai koherencia tomográfia (OCT)

térbeli felbontás növelése („apró” objektumok láthatóvá tétele) idıbeli felbontás növelése (gyors folyamatok megfigyelése) behatolóképesség növelése („deep tissue imaging”, szövetek vizsgálata) non-invazív (károsítás nélkül, „intravital imaging” – élı rendszerekben történı vizsgálatok) egyszerre több komponens vizsgálata

íííííííííííííííí széleslátóterő, evaneszcens mikroszkópia konfokális mikroszkópia 4Pi, I5M high resolution structured illumination (hrSIM)

MIKROSZKÓPIA

ground state depletion (GSD) saturated structured illumination (sSIM) stimulated emission depletion (STED) egyedi molekula lokalizáció (PALM, STORM) közeli mezı optikai mikroszkópia (NSOM) elektron mikroszkópia (EM)

7


2013.

A FELBONTÓKÉPESSÉG JAVÍTÁSA A fénymikroszkóp felbontása: Abbe elv, diffrakciós limit

dz ~ 1000 nm Z

dx,y ~ 200 nm Y

emisszió

1961. Marvin Minsky 1987. elsı konfokális mikroszkóp

VIZSGÁLT SÍK

µm X gerjesztés HÁTTÉRFLUORESZCENCIA

AIRY MINTÁZAT

KONFOKÁLIS MIKROSZKÓPIA MULTIFOTON MIKROSZKÓPIA EVANESZCENS MEZİ MIKROSZKÓPIA

STIMULÁTL EMISSZIÓ (STED) EGYEDI MOLEKULA LOKALIZÁCIÓ (PALM, STORM)

KONFOKÁLIS MIKROSZKÓPIA – ALAPELVEK SZÉLESLÁTÓTERŐ MIKROSZKÓPIA

detektor

KONFOKÁLIS MIKROSZKÓPIA – ALAPELVEK KONFOKÁLIS MIKROSZKÓPIA

detektor

egy sík van fókuszban

APERTÚRA

egy sík van fókuszban

↓ APERTÚRA (rés)

mégis az összes sík hozzájárul a képhez

térbeli szőrés egy sík járul hozzá a képhez az apertúra „kiszőri a többit”

APERTÚRA fókuszpontból fókuszponton kívüli fókuszponton kívüli

KONJUGÁLT SÍK KONJUGÁLT FOKALITÁS

objektív

objektív

minta fókuszsík

minta fókuszsík

KONFOKÁLIS MIKROSZKÓPIA

KONFOKÁLIS MIKROSZKÓPIA – OPTIKAI SZELETELÉS

HAGYOMÁNYOS

apertúra mérete: 1 Airy egység Airy egység:Airy korong átmérıje

KONFOKÁLIS

minta „felszeletelése” optikai szeletek TÁRGY ↓ sok 2D kép összefőzése ↓ 3D KÉP

felbontás

hagyományos

XY, nm

200

180

Z, nm

1000

500 !!

http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/tutorials/opticalsectioning/confocalwidefield/index.html

konfokális

http://www.olympusmicro.com/primer/techniques/confocal/confocalintro.html

pollen autofluoreszcencia

8


2013.

KONFOKÁLIS MIKROSZKÓPIA – 4D: 3D + idı

tengeri csillag petesejt meiozis kromoszómák aktin mikrotubulusok

TIRFM - ALAPELVEK

TIRFM HAGYOMÁNYOS

TELJES BELSİ VISSZAVERİDÉS - EVANESZCENS MEZİ ,/,1

sin 56-é-.7

sin 5öé-.7

TIRFM

exponenciális lecsengés hagyományos

B16/F1 melanoma sejt

V

MO P MN

TIRFM T ~NSS MU

MO Q RS

MN

FGHIJIGKL

S

W5V7 WS W V X

Aktin filamentumok

WS

A @5A7 @? exp 5E 7 9

Emlékeztető: Optika, Refraktometria gyakorlat

felbontás

hagyományos

XY, nm

200

TIRFM 200

Z, nm

1000

100 !!

TÖBB-FOTON MIKROSZKÓPIA - ALAPELVEK „EGY-FOTON” MIKROSZKÓPIA gerjesztés: 1 db foton abszorpció: t = 10-15 s E = Egerjesztett – Ealap → a foton hullámhossza: λ „KÉT-FOTON” MIKROSZKÓPIA gerjesztés: 2 db foton E = Egerjesztett – Ealap → a fotonok hullámhossza: 2*λ λ

Y

Z> =

Feltétele: két foton „egyidejő” abszorpciója (t = 10-18 s) kis valószínőség nagy fotonsőrőség lézernyaláb fókuszálása mode-locked lézer (*106 fotonsőrőség)

http://www.microscopyu.com/articles/fluorescence/multiphoton/multiphotonintro.html

Emlékeztető: I. félév 23. előadás – Lézer, II. félév . 2 előadás Fluoreszcencia – nemlineáris jelenségek

9


2013.

KÉT-FOTON MIKROSZKÓPIA - ALAPELVEK

KÉT-FOTON MIKROSZKÓPIA – INTRAVITÁLIS MIKROSZKÓPIA (IVM)

endocitózis (élı egér májában) Dextran – 70 kDa (Texas Red) Dextran - 500 kDa (FITC) Texas Red-Dextran internalizációja a nyálmirigyek sztrómális sejtei által

véráram a májban (élı egérben) Dextran (TexasRed) Hepatociták (endogén fluoreszcencia)

Elınyei: Z irányú felbontás növelése „deep-tissue” imaging: képalkotás mélyebb rétegekben is konfokális: ≈ 100 µm két-foton ≈ 1000 µm kevésbé károsítja a mintát (alacsony fototoxicitás) képalkotás élı szövetekben, élı állatokban makorfágok migárciója tumor sejtekben (élı egérben) nukleusz (Hoechst)

http://www.nidcr.nih.gov/Research/NIDCRLaboratories/OralPharyngeal/I

STED - ALAPELVEK FLUORESZCENCIA EMISSZIÓ STIMULÁLT GYENGÍTÉSE

gerjesztés gerjesztett állapot - fluoreszcencia

nem lineáris le-gerjesztés alapállapot - nonfluoreszcens

2000. Stefan Hell

maradék fluoreszcencia Emlékeztető: I. félév 23. előadás – Lézer

STED - ALAPELVEK

STED

fázislemez

gerjesztés

HAGYOMÁNYOS

gyengítés

STED

gyengítı lézer STED lézer

red shift

gerjesztı lézer

dikroikus tükrök

objektív

Aktin filamentumok

minta

felbontás

hagyományos

STED

XY, nm

200

20 !!!!

Z, nm

1000

50 !!!!

http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/tutorials/superresolution/stedfundamentals/index.html

10


2013.

PALM - ALAPELVEK

„fotoativálható fluorofór

2006. http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/print/superresolution/palm/practicalaspects-print.html http://www.nature.com/nmeth/journal/v6/n2/fig_tab/nmeth0209-124_F1.html

Emlékeztető: II. félév 5. előadás –Fluoreszcencia mikroszkópia – fotoaktiválható fluorofórok

PALM

felbontás

hagyományos

PALM

XY, nm

200

10-20 nm !!!

Z, nm

1000

10-20 nm !!!

FRAP – „PHOTOBLEACHING”: fotohalványodás

FRAP – ALAPELVEK INTENZÍV LÉZERIMPULZUS fluoreszcencia kioltás

FOTOHALVÁNYODÁS, KIFEHÉREDÉS a fluorofór irreverzibilis fotokémiai destrukciója a gerjesztı fény tönkreteszi a fluoreszcens molekulát

DIFFÚZIÓ

elıtte

utána visszatérés kioltás

HÁTRÁNY: anti-photobleaching oldat (pl. glükóz oxidáz – kataláz – merkaptoetanol) expoziciós idı csökkentése pulzusszerő gerjesztés alacsonyabb intenzitású gerjesztı fény ellenállóbb fluorofór

ELİNY: háttér eliminálása autoquenching FRAP, FLIP http://en.wikipedia.org/wiki/Fluorescence_loss_in_photobleaching http://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/fluorescence/photobleaching/

fluoreszcens molekulák

mobilis fluoreszcens molekulák nem-fluoreszcens molekulák

nem-fluoreszcens molekulák

fluoreszcencia intenzitás

visszatérés

mobilis 50%

50%

immobilis immobilis

idı (t)

idı (t)

11


2013.

FRAP

FRAP fluoreszcencia kioltás fluoreszcencia visszatérése

LAMELLIPODIUM DINAMIKÁJA visszatérés

Fluoreszcencia intenzitás

Lai és mtsai EMBO Journal 2008

visszatérés

kioltás

kioltás mobilis

mobilis

50%

50%

immobilis

immobilis

idı

B16-F1 sejt EGFP-aktin

idı (t)

ELEKTRONMIKROSZKÓPIA (EM) 1986. Ernst Ruska Nobel-díj

ELEKTRONMIKROSZKÓPIA (EM)

OPTIKAI - FÉNY

EM

képalkotás

fénynyaláb üveg lencsék

elektronnyaláb elektromágnes

hullámhossz, nm

400 – 600

0.004 – 0.006

felbontás, nm

200

0.2

nagyítás

1000 x

1000 - 100000 x

TRASZMISSZIÓS ELEKTRON MIKROSZKÓPIA (TEM) áteresztett ePÁSZTÁZÓ ELEKTRON MIKROSZKÓPIA (SEM) visszafelé szórt e rendszámbeli különbségek, nehézatomok másodlagos e felület topográfiája Auger e karakterisztikus rtg sugárzás spektruma felület kémiai összetétele

SEM

TEM

NA = 0.04 – 1.45

12

Biofizika 2 Fizika-Biofizika

Recommend Documents