OPTIMASI METODE ANALISIS ZINC PYRITHIONE DENGAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI. Syarif Hamdani, Adang Firmansyah, Yuanita Permana

JSTFI Indonesian Journal of Pharmaceutical Science and Technology Vol.III, No 2, Juli 2014

OPTIMASI METODE ANALISIS ZINC PYRITHIONE DENGAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI Syarif Hamdani, Adang Firmansyah, Yuanita Permana Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia

Abstrak Zinc Pyrithione (ZnPT) dapat dianalisis kadarnya dengan berbagai metode, salah satunya dengan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT). Peneliti terdahulu telah mengembangkan metode analisis ZnPT dengan KCKT fase terbalik sebagai kompleks copper pyrithione (CuPT), tetapi setelah diaplikasikan di laboratorium, metode ini tidak memenuhi syarat kesesuaian sistem karena koefisien variasi area lebih dari 2%. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan kondisi optimum untuk menentukan kadar ZnPT dalam sediaan sampo dengan metode KCKT melalui variasi perbandingan komposisi dan pH fase gerak, variasi laju alir, dan variasi suhu kolom. Dari hasil penelitian diperoleh bahwa kondisi optimum untuk analisis ZnPT dilakukan pada panjang gelombang 240 nm, menggunakan kolom Licrocart Lichrospher RP-18, fase gerak campuran larutan dapar fosfat 0,2 M pH 6,0 : asetonitril (60 : 40), laju alir 1,0 mL/menit, suhu kolom 25°C dan volume injeksi 10 µL. Hasil validasi metode analisis pada kondisi optimum mempunyai selektivitas yang baik dan menunjukkan hubungan yang linear antara luas area dibawah kurva dengan konsentrasi pada rentang 3,08-24,62 µg/mL dan koefisien korelasi (r2) sebesar 0,995. Perolehan kembali hasil uji akurasi sebesar 99-101% pada konsentrasi CuPT diatas 12,31 µg/mL dan simpangan baku relatif hasil uji presisi sebesar 0,65%. Kondisi optimum ini efektif digunakan untuk analisis ZnPT dalam sediaan sampo dengan konsentrasi diatas 12,31 µg/mL.. Kata kunci: zinc pyrithione, copper pyrithione, kromatografi cair kinerja tinggi, sampo anti ketombe Abstract Zinc pyrithione (ZnPT) levels can be analyzed by various methods, one of common method is using high performance liquid chromatography (HPLC). Previous researchers had developed a method of ZnPT analysis by reverse phase HPLC as copper pyrithione complex (CuPT), but when applied in the laboratory, this method did not qualified because coefficient variation of the system suitability of an area more than 2%. The aims of this study was to determine optimum conditions for determining dosage levels in shampoo ZnPT by HPLC through a variety of comparison methods and pH of mobile phase composition, flow rate variations, and column temperature variations. Result shown that optimum conditions for ZnPT analysis performed at a wavelength of 240 nm, used Licrocart LiChrospher RP-18 column, mixture of 0.2 M phosphate buffer pH 6.0: acetonitrile (60 : 40) as a mobile phase, flow rate at 1.0 mL/min, column temperature 25°C and injection volume 10 mL. Validation analysis at optimum conditions has a good selectivity and shown a linear relationship between area under curve with a concentration at range of 3.08-24.62 µg/mL and correlation coefficient (r2) of 0.995. Retrieval of test results accuracy of 99-101% at concentrations above CuPT 12.31 µg/mL and a standard deviation of the relative precision of test results by 0.65%. The optimum condition was effectively used for analysed shampoo contented ZnPT at concentration above 12.31 µg/mL. . Keywords: zinc pyrithione, copper pyrithione, high performance liquid chromatography, antidandruff shampoo

22


Saat ini penggunaan ZnPT dalam

PENDAHULUAN Sampo adalah sediaan kosmetika

formulasi sediaan sampo menurut Peraturan

yang digunakan untuk maksud keramas

Kepala Badan POM No. HK.00.05.42.1018

rambut, sehingga setelah itu kulit kepala

tidak boleh lebih dari 2 %. Karena

dan rambut menjadi bersih, dan sedapat

penggunaan ZnPT secara berlebihan dapat

mungkin rambut menjadi lembut, mudah

menyebabkan dermatitis pada kulit kepala

diatur dan berkilau. Sampo anti ketombe

dan kerusakan pada rambut seperti rambut

merupakan sampo yang memiliki zat aktif

rontok, berubah warna dan patah–patah.

dan

kereaktifan

Oleh sebab itu, diperlukan suatu metode

bakterisida, fungisida dan kontra iritan,

analisis untuk mengontrol kandungan ZnPT

mengurangi

pada

mempunyai

atau

sifat

menghalangi

sekresi

produk

sampo

untuk

menjamin

kelenjar minyak secara berlebihan (BSN,

keamanan produk (BPOM, 2009; BSN

1992).

1992). Berbagai zat anti ketombe seperti

Metode standar untuk penetapan

selenium sulfida (SeS2), zinc pyrithione,

kadar ZnPT dalam sediaan sampo tidak

asam salisilat, sulfur, dan pirokton olamin

tercantum dalam buku-buku resmi, seperti

telah digunakan sebagai zat tambahan

Farmakope

Indonesia,

dalam sediaan sampo yang mengandung

Pharmacopoeia

(BP),

sabun atau deterjen sebagai zat utama.

Pharmacopoeia

(USP),

Tetapi zat anti ketombe yang paling banyak

Pharmacopoeia, tetapi hanya terdapat pada

digunakan secara komersil adalah zinc

jurnal-jurnal ilmiah.

pyrithione (BPOM, 2009; Lodewyk, 2003). Zinc

pyrithione

(bis(1-hydroxy-

British

United dan

State

Japanese

Berbagai penelitian telah dilakukan untuk

menganalisis

diantaranya

2(H)-pyridethionato-O,S)-T-4 Zinc, ZnPT)

dengan

merupakan koordinasi kompleks seng, yang

kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT)

berwujud cairan putih dan berbau khas

dan kromatografi cair kinerja tinggi–mass

yang hampir tidak larut dalam air. ZnPT

spektrofotometri (KCKT-MS).

sering digunakan sebagai zat aktif anti

Pengembangan

ketombe

karena

dapat

metode

ZnPT

spektrofotometri,

metoda

analisis

menghambat

untuk penetapan kadar ZnPT dengan

pertumbuhan bakteri dan fungi pada infeksi

metode spektrofotometri telah dilakukan

kulit. Selain sebagai anti bakteri dan anti

oleh Revlon Research Center-Bronx, tetapi

fungi, ZnPT terbukti sebagai cytostatic

mempunyai tahapan preparasi yang rumit

agent, yang mengurangi laju pergantian

dan memerlukan waktu analisis yang lama,

epidermis, sehingga mengurangi timbulnya

sehingga kurang efektif dan efisien untuk

ketombe (Martindle, 1982; Yamaguchi,

diterapkan, terutama di dunia industri.

2006).

23


Pengembangan

metode

untuk penetapan kadar ZnPT

analisis

optimum KCKT untuk menetapkan kadar

dengan

ZnPT yang terkandung dalam sediaan

metode KCKT-MS telah dilakukan oleh

sampo

beberapa peneliti di National Maritime

komposisi dan pH fasa gerak, variasi laju

Reseach

alir, dan variasi suhu kolom,

Institute-Osaka

City

Institute

melalui

variasi

perbandingan

sehingga

Japan, mempunyai proses analisis yang

diperoleh hasil kesesuaian sistem yang

relatif mudah tetapi memerlukan sistem

memenuhi persyaratan, pemisahan puncak

instrumen yang canggih dan biaya yang

yang baik dan waktu analisis yang relatif

tinggi untuk penyediaan alat, sehingga

singkat.

hanya

pihak

tertentu

yang

dapat

menerapkannya.

METODOLOGI

Pengembangan

metode

analisis

Alat

untuk penetapan kadar ZnPT dengan metode

KCKT

telah di

dilakukan

beberapa

peneliti

Scienze

Farmaceutiche-Universita

oleh

Dipartimento

Alat yang digunakan antara lain Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (Hitachi

di

LC-2010), timbangan

analitik (Mettler

di

Toledo, ketelitian d=0,1 mg), sentrifuge

Modena Italy. Dengan cara mengubah

(Hettich), syringe, spatel, kertas timbang,

ZnPT menjadi kompleks yang lebih stabil,

penyaring miliphore whatman (d=0,2 dan

yaitu kompleks copper pyrithione (CuPT)

0,45 µm), penyaring buchner, ultrasonik

sebelum disuntikkan dalam KCKT. Metode

(Branson), alat-alat gelas laboratorium

ini berpotensi untuk diadopsi karena biaya yang diperlukan untuk penyediaan alat

Bahan

KCKT relatif lebih murah dibandingkan

Bahan

yang

digunakan

untuk

dengan penyediaan alat KCKT-MS, dan

proses penelitian ini adalah zinc pyrithione

mempunyai tahapan preparasi yang lebih

(ZnPT)

sederhana dibandingkan dengan metode

cosmetic grade (ARCH), copper sulfate

spektrofotometri.

pentahydrat (CuSO4.5H2O) GR for analysis

PT.

49,18

%

aqueous

dispersion

Departemen Quality Control-CHC

(merck), potassium dihydrogen phosphate

Rohto

(KH2PO4) GR for analysis (merck), sodium

Laboratories

Indonesia

mengadopsi metode analisis ini untuk

hydroksida

menentukan kadar ZnPT dalam sediaan

(merck), phosphoric acid (H3PO4) 85% GR

sampo yang mereka produksi, tetapi hasil

for analysis (merck), aqua DM, asetonitril

uji

grade for liquid chromatography (merck),

kesesuaian

sistem

KCKT

tidak

(NaOH)

GR

for

analysis

memenuhi syarat, karena nilai koefisien

dikhlorometan

grade

for

liquid

variasi areanya lebih dari 2%, sehingga

chromatography

(merck),

dan

plasebo

pada penelitian ini akan diteliti kondisi

sampo.

24


Pemilihan Kondisi Optimum KCKT

campuran, kemudian divortex selama 5

a.

Pembuatan larutan standar

menit dan disentrifuge selama 15 menit

Tahap pertama yang dilakukan

pada kecepatan 3000 rpm. Kemudian, fasa

sebelum menentukan kondisi pengukuran

diklorometan disaring dengan membran

yang optimum adalah membuat larutan

filter 0,45 µm (konsentrasi CuPT 15.38

standar dispersi ZnPT 2% dan Copper

µg/mL).

Pyrithione (CuPT). Larutan standar dispersi ZnPT dibuat dengan menimbang sebanyak

b.

2000,00 mg ZnPT 49,18% dalam labu ukur

dan pH Fase Gerak

100 mL. Ditambahkan air sedikit demi sedikit

Variasi Perbandingan Komposisi

Fasa gerak terdiri dari campuran

sampai tanda batas, kemudian

larutan dapar fosfat 0,2 M dan asetonitril

dikocok sampai homogen. Larutan standar

yang dibuat dengan variasi perbandingan

Copper Pyrithione (CuPT) dibuat dengan

komposisi dan pH seperti tercantum dalam

mencampurkan larutan dispersi ZnPT 2%

tabel 1. Kemudian dilakukan uji kesesuaian

standar sebanyak 500,00 mg dalam labu

sistem dengan cara menyuntikkan larutan

ukur 50 mL, ditambahkan aqua DM sampai

standar CuPT 15,38 µg/mL sebanyak 5 kali

tanda batas kemudian dikocok hingga

pada kondisi pengukuran KCKT yang

homogen. Dipipet 1,00 mL larutan

ke

tercantum dalam tabel 2. Hasil kesesuaian

kemudian

sistem memenuhi syarat, jika memenuhi

tambahkan 2,00 mL larutan CuSO4 13 mM,

kriteria parameter uji kesesuaian sistem

divortex selama 5 menit. Ditambahkan

seperti yang tercantum pada tabel 3.

dalam

tabung

sentrifuge,

diklorometan sebanyak 10,00 mL ke dalam Tabel 1. Tabel Variasi Perbandingan Komposisi dan pH Fase Gerak (Larutan Dapar Fosfat : Asetonitril) FG pH 1 2 3 4

(pH 4) (pH 5) (pH 6) (pH 7)

A (45 : 55)

B (50 : 50)

C (55 : 45)

D (60 : 40)

E (65 : 35)

A1 A2 A3 A4

B1 B2 B3 B4

C1 C2 C3 C4

D1 D2 D3 D4

E1 E2 E3 E4

25


Tabel 2. Kondisi Pengukuran KCKT No

Parameter

1

Fase Diam (Kolom)

2

Fase Gerak

3 4 5

Laju Alir Detektor Volume Injeksi

Spesifikasi Licrocart Lichrospher 100 RP 18 (250 x 4,6 mm), oktadesil (C18), ukuran partikel isi 5μm. (Merck) Campuran larutan dapar fosfat : acetonitril sesuai tabel III.1 1 mL/menit UV-Vis (λ = 240 nm) 10 µL

Tabel 3. Parameter Uji Kesesuaian Sistem No 1 2 3 4 5 c.

Parameter Retention Time Area Asimetri Resolusi Teoritical plate

Variasi Laju Alir

Kriteria Penerimaan < 20 menit RSD < 2 % 0,8–1,5 >1,5 >1000 a.

Larutan standar

Uji Slektivitas (Spesifisitas)

CuPT 15,38

Plasebo sampo ditimbang sebanyak

µg/mL, disuntikan pada sistem KCKT

500,00 mg dalam labu ukur, kemudian

dengan variasi laju alir 0,6 mL; 0,8 mL; 1,0

ditambah air sampai tanda batas, kemudian

mL dan 1,2 mL, kemudian dicatat hasil

dikocok sampai homogen. Dipipet 1,00 mL

yang diperoleh, meliputi retention time,

larutan

area, asimetri, resolusi, dan teoritical plate.

kemudian tambahkan 2,00 mL larutan

ke dalam tabung sentrifuge,

CuSO4 13 mM, divortex selama 5 menit. d.

Ditambahkan diklorometan sebanyak 10,00

Variasi Suhu Kolom Larutan

standar

CuPT

15,38

mL ke dalam campuran, kemudian divortex

µg/mL, disuntikan pada sistem KCKT

selama 5 menit dan disentrifuge selama 15

dengan variasi suhu kolom 25°C; 30°C;

menit pada kecepatan 3000 rpm. Kemudian,

35°C dan 40°C kemudian dicatat hasil yang

fasa

diperoleh, meliputi retention time, area,

membran

asimetri, resolusi, dan teoritical plate.

disuntikkan pada kondisi optimum KCKT.

diklorometan filter

Dilakukan

analisis

yang

validasi

dilakukan

0,45

dengan

µm.

penyuntikan

Larutan

terhadap

larutan sampel dan pelarut diklorometan

Validasi Metode Analisis Parameter

pula

disaring

metode

meliputi,

yang digunakan. Kriteria penerimaan :

uji

Larutan plasebo dan diklorometan tidak

selektivitas (spesifisitas), uji linearitas, uji

memberikan nilai waktu retensi yang sama

akurasi (kecermatan),presisi(keseksamaan),

dengan

dan uji robustness (ketegaran).

memiliki keterpisahan yang baik.

CuPT.

Larutan

sampel

harus

26


b.

kemudian tambahkan 2,00 mL larutan

Uji Linearitas Dispersi

ZnPT

2%

standar

CuSO4 13 mM, divortex selama 5 menit.

ditimbang sebanyak 100,00 mg; 200,00 mg;

Ditambahkan diklorometan sebanyak 10,00

300,00 mg; 400,00 mg; 500,00 mg; 600,00

mL ke dalam campuran, kemudian divortex

mg; 700,00 mg; 800,00 mg dalam labu ukur


50,00 mL.

menit pada kecepatan 3000 rpm. Kemudian,

Ditambahkan 500,00 mg

plasebo sampo, kemudian ditambah air

fasa

sampai

membran filter 0,45 µm (diperoleh sampel

tanda batas, kemudian

kocok

diklorometan

disaring

dengan

sampai homogen. Dipipet 1,00 mL larutan

dengan konsentrasi

CuPT 12,31; 15,38;

ke dalam tabung sentrifuge, kemudian

18,46 µg/mL). Masing-masing konsentrasi


disuntikkan pada kondisi optimum KCKT,


dan dicatat luas area yang diperoleh.

diklorometan sebanyak 10,00 mL ke dalam

Kriteria penerimaan : Persen perolehan

campuran, kemudian divortex selama 5

kembali berada dalam rentang 98-102% .

menit dan disentrifuge selama 15 menit pada kecepatan 3000 rpm. Kemudian, fasa

d.


Dispersi ZnPT 2% standar ditimbang

filter 0,45 µm (diperoleh sampel dengan

sebanyak 500,00 mg dalam labu ukur 50,00

konsentrasi CuPT 3,08; 6,15; 9,23; 12,31;

mL (6 replikasi). Ditambahkan 500,00 mg

15,38; 18,46; 21,54; 24,62 µg/ml). Masing-


masing

sampai

konsentrasi

disuntikkan

pada

Uji Presisi (Keseksamaan)

tanda batas, kemudian

kocok

kondisi optimum KCKT, dan dicatat luas

sampai homogen. Dipipet 1,00 mL larutan

area yang diperoleh. Kriteria penerimaan :

ke dalam tabung sentrifuge, kemudian

Hubungan yang linear antara luas area


dengan konsentrasi, dan koefisien korelasi


(r ) kurva ≥ 0,98.

diklorometan sebanyak 10,00 mL ke dalam

2

campuran, kemudian divortex selama 5 c.

menit dan disentrifuge selama 15 menit

Uji Akurasi (Kecermatan) Dispersi

ZnPT

2%

standar

pada kecepatan 3000 rpm. Kemudian, fasa

ditimbang sebanyak masing-masing 400,00


mg; 500,00 mg; dan 600,00 mg dalam labu

filter 0,45 µm (diperoleh sampel dengan

ukur 50,00 mL (3 replikasi). Ditambahkan

konsentrasi CuPT 15,38 µg/ml). Masing-

500,00 mg plasebo sampo, kemudian

masing

ditambah air sampai tanda batas, kemudian

kondisi optimum KCKT, dan dicatat luas

kocok sampai homogen. Dipipet 1,00 mL

area yang diperoleh. Kriteria penerimaan :

larutan

RSD dari semua konsentrasi maksimal 2%.

ke dalam tabung sentrifuge,

konsentrasi

disuntikkan

pada

27


e.

Uji Robustness (Ketegaran)

disimpan selama 24 jam pada suhu ruang,

Dispersi

kemudian

ZnPT

2%

standar

disuntikkan

pada

kondisi

ditimbang sebanyak 500,00 mg dalam labu

optimum KCKT. Kriteria penerimaan :

ukur 50,00 mL. Ditambahkan 500,00 mg

waktu penyimpanan tidak mempengaruhi


perolehan kembali hasil uji.

sampai tanda batas, kemudian kocok. Dipipet 1,00 mL larutan ke dalam tabung

HASIL DAN PEMBAHASAN

sentrifuge, kemudian tambahkan 2,00 mL

Hasil

larutan CuSO4 13 mM, divortex selama 5

KCKT

menit.

Ditambahkan

Pemilihan

Kondisi

Optimum

diklorometan

Berdasarkan percobaan yang telah

sebanyak 10,00 mL, kemudian divortex

dilakukan terhadap variasi fase gerak,


diperoleh data rata-rata hasil uji kesesuaian

menit pada kecepatan 3000 rp, fasa

sistem dalam tabel 4.

diklorometan disaring dengan membran filter 0,45 µm (diperoleh sampel dengan konsentrasi CuPT 15,38 µg/ml), Tabel 4. Data Hasil Uji Kesesuaian Sistem Parameter Fase

Retention

Gerak

Teoritical

Hasil

Asimetri

Time

RSD Area

A1

5,138

1,789

0,856

1,611

885

System is not suitable

A2

5,269

2,043

0,843

1,923

963


A3

4,874

0,690

1,075

2,444

1379

System is suitable

A4

4,715

0,884

1,307

1,908

1256

System is suitable

B1

5,571

1,475

1,167

2,113

1023

System is suitable

B2

5,622

1,545

1,463

2,351

1341


B3

5,682

0,688

1,464

2,676

1430

System is suitable

B4

5,765

2,536

1,045

3,048

1819

System is suitable

C1

7,263

1,331

1,058

3,064

1313

System is suitable

C2

7,324

0,800

1,205

3,020

1209

System is suitable

C3

7,193

1,676

1,629

3,583

1738


C4

7,823

0,992

1,218

4,161

2205

System is suitable

D1

10,070

2,921

1,124

4,195

1297


D2

10,809

5,844

1,014

5,211

2003


D3

10,205

1,200

1,061

4,607

1523

System is suitable

D4

9,663

2,865

1,020

4,180

1406


E1

14,268

12,460

1,022

6,617

1733


E2

16,735

7,788

1,138

1,138

1996


E3

16,499

2,101

1,094

8,134

2474


E4

14,359

3,872

1,048

7,598

2907


Resolusi

Plate

28


Fase gerak D3 memberikan hasil resolusi

mL/menit dan 0,8 mL/menit. Keduanya

(pemisahan puncak) yang paling optimal,

memberikan nilai resolusi, teoritical plate

sehingga fase gerak D3 akan digunakan

dan

untuk proses analisis selanjutnya.

mempunyai waktu retensi yang lama, yaitu

Variasi terhadap laju alir dilakukan

area

yang

paling

besar,

16,7 menit dan 12,5 menit,

tetapi

sehingga

untuk mendapatkan waktu analisis yang

kurang efektif jika digunakan untuk proses

paling efektif dan pemisahan yang baik,

analisis. Laju alir 1,2 ml/menit memberikan

Data hasil percobaan tercantum pada tabel

waktu retensi yang cepat, yaitu 8,4 menit

5.

dan mempunyai resolusi yang baik, tetapi Laju alir yang paling efektif yaitu

laju alir yang tinggi, menyebabkan pompa

1,0 mL/menit, karena mempunyai waktu

KCKT bekerja lebih keras, menyebabkan

retensi yang tidak terlalu lama yaitu 9,9

peningkatan pada tekanan pompa, dan

menit, resolusi baik, dan volume fase gerak

volume fase gerak yang masuk ke kolom

yang masuk pada kolom tidak terlalu

semakin

banyak,

dibandingkan

.Laju alur 0,6

banyak,

hal

ini

dapat

menyebabkan masa pakai kolom berkurang

Tabel 5. Data Hasil Uji Variasi Laju Alir Laju Alir (mL/menit) 0,6 0,8 1,0 1,2 Untuk

Parameter Retention Time 16,707 12,540 9,927 8,353 mendapatkan

Area

Asimetri

Resolusi

536920 438369 356066 315325

1,31200 1,28175 1,29021 1,26862

5,93396 5,72393 5,56645 5,59300

pemisahan

yang lebih efisisen, maka dilakukan variasi

Teoritical Plate 2528 2284 2127 2112

terhadap suhu kolom KCKT. Data hasil percobaan tercantum pada tabel 6.

Tabel 6. Data Hasil Uji Variasi Suhu Kolom Suhu Kolom (°C) 25,0 30,0 35,0 45,0

Parameter Retention Time 9,807 9,113 8,507 7,967

Area

Asimetri

Resolusi

296315 320188 328390 306369

1,28449 1,38547 1,61314 1,65428

5,68565 5,03435 4,98231 4,44498

Teoritical Plate 2327 2261 2286 2249

29


Pada suhu kolom 35°C dan 40°C, waktu retensi analit cepat, tetapi terjadi pengekoran pada puncak dan resolusi analit rendah, sedangkan pada suhu kolom 25°C dan 30°C, memberikan waktu retensi yang lebih lama, tapi tidak terjadi pengekoran pada puncak dan resolusi lebih jauh,

Gambar Sampo

2.

Kromatogram

Plasebo

sehingga untuk mendapatkan puncak yang baik

dan

memudahkan

dalam

proses

analisis (tidak memerlukan kolom oven), maka analisis dilakukan pada suhu 25°C (suhu ruang). Hasil Validasi Metode Analisis Parameter validasi metode analisis yang

dilakukan

ini

Metode analisis ZnPT memenuhi

meliputi, uji selektivitas, uji linearitas, uji

parameter uji selektivitas, karena hasil

akurasi, uji presisi dan uji robustness

kromatogram diklorometan dan plasebo

(ketegaran).

Pada

uji

sampo tidak memberikan puncak pada

selektivitas

dilakukan

dengan

cara

waktu retensi CuPT (memberikan hasil

pelarut

sampel

yang

negatif CuPT), dan pada kromatogram

digunakan yaitu diklorometan, plasebo

plasebo yang mengandung zat aktif ZnPT,

sampo (terdiri dari acasia, sodium lauryl

muncul

ether

compound,

retensinya (memberikan hasil positif CuPT)

bacteriostat, ethylene glycol monostearate,

dan puncak mempunyai resolusi yang baik.

glyceryl monoricinoleat, comperland) serta

Hal

plasebo sampo yang mengandung ZnPT.

diklorometan maupun plasebo sampo tidak

Gambar kromatogram setiap penyuntikan

mengintervensi pemisahan kompleks CuPT.

menyuntikkan

sulfate,

pada

percobaan

Gambar 3. Gambar Plasebo Sampo dan ZnPT

percobaan

aculyn,

oil

ini

puncak

ini

CuPT

pada

mengindikasikan

waktu

bahwa

dapat dilihat pada gambar 1, gambar 2 dan gambar 3.

Gambar 1. Kromatogram Diklorometan

Gambar 4. Kurva Hasil Uji Linearitas

30


Uji linearitas dilakukan pada rentang

memenuhi syarat uji linearitas dari rentang

konsentrasi CuPT 3,08 sampai 24,62

konsentrasi

3,08-24,62

µg/mL

karena

2

µg/mL. Data hasil percobaan uji linearitas

menghasilkan koefisien korelasi (r ) sebesar

tercantum pada tabel 7. Hasil pengujian

0,995. Kurva hasil uji linearitas pada

menunjukkan bahwa metode analisis ZnPT

gambar 4.

Tabel 7. Data Hasil Uji Linearitas Konsentrasi CuPT (µg/mL)

Massa (mg)

Luas Area

3,08 6,15 9,23 12,31 15,38 18,46 21,54 24,62

115,60 210,80 312,10 406,50 504,70 601,70 708,00 809,90

47047 110949 193330 271839 353912 451966 534878 651960

Uji akurasi menunjukkan derajat hasil

dan 18,46 µg/mL

sebanyak 3 replikasi,

kedekatan hasil analisis dengan kadar analit

kemudian

yang sebenarnya. Uji akurasi dilakukan

kembalinya (recovery). Data hasil uji

dengan cara menguji 3 larutan dengan

akurasi tercantum pada tabel 8, 9, dan 10 .

dihitung

hasil

perolehan

konsentrasi 12,31 µg/mL, 15,38 µg/mL

Tabel 8. Data Hasil Uji Akurasi Konsentrasi 12,31 µg/mL Konsentrasi CuPT (µg/mL)

Perolehan Kembali/PK (%) 404,60 129840 88,32 12,31 406,00 148464 100,64 404,50 142297 96,82 Luas Area Standar = 226217, massa = 506,4 mg, kadar = 49,18% Massa (mg)

Luas Area

Rata-rata PK (%) 95,26 ± 6,62



Luas Area

Rata-rata PK (%) 100,2 ± 0,82

31




Rata-rata PK (%)

Luas Area

99,18 ± 1,23

Berdasarkan tabel diatas, hasil uji akurasi

15,38 µg/mL, sebanyak 6 replikasi. Metode

konsentrasi

dianggap presisi jika

CuPT

12,31

µg/mL,

simpangan baru

mempunyai rata-rata perolehan kembali

relatif (SBR) perolehan kembali < 2%.

95,26 ± 6,62, konsentrasi CuPT 15,38

Berdasarkan percobaan, metode analisis

µg/mL mempunyai rata-rata perolehan

ZnPT memenuhi syarat uji presisi karena

kembali 100,2 ± 0,82, konsentrasi CuPT

diperoleh nilai SBR perolehan kembali

18,46

sebesar 0.65%.

µg/mL

mempunyai

rata-rata

perolehan kembali 99,18 ± 1,23. Metode

(ketegaran)

menunjukkan kapasitas prosedur analitik

memenuhi parameter akurasi karena pada

untuk tidak terpengaruh oleh variasi kecil

konsentrasi 12,31 µg/mL, hasil perolehan

dalam parameter metode. Pada percobaan

kembali tidak berada pada rentang 98%–

ini, uji ketegaran dilakukan dengan cara

120 %, hal ini bisa disebabkan batas

menyimpan

kuantisasi metode analisis hanya dapat

konsentrasi CuPT 15,38 µg/mL selama 24

dilakukan pada konsentrasi CuPT diatas

jam sebelum disuntikkan pada KCKT,

CuPT 12,31 µg/mL, sehingga metode

prosedur dianggap handal jika waktu

analisis tidak bisa digunakan untuk sampel

penyimpanan

sampo dengan konsentrasi CuPT dibawah

perolehan

12,31 µg/mL, meskipun pada uji linearitas

percobaan menunjukkan nilai perolehan

metode analisis masih dapat mendeteksi

kembali hanya sebesar 85,98% dengan SBR

sampel dengan konsentrasi CuPT 3,08

4,74%, hal ini mengindikasikan bahwa

µg/mL.

metode presisi

ZnPT

robustness

tidak

Uji

analisis

Uji

(keseksamaan)

larutan

tidak

kembali

analisis

terpengaruh

sampel

oleh

dengan

mempengaruhi hasil

uji.

Hasil

tidak

handal

dan

waktu

penyimpanan.

menunjukkan derajat kesesuaian antara

Berkurangnya hasil perolehan kembali

hasil uji individual, jika metode analisis

sebesar ± 15%, dapat disebabkan kompleks

dilakukan berulang terhadap sampel yang

CuPT bereaksi dengan plasebo sambo yang

diambil dari campuran yang homogen. Uji

masih terbawa dalam larutan sampel selama

presisi dilakukan dengan cara menguji

penyimpanan

larutan sampel dengan konsentrasi CuPT

terionisasi. Oleh sebab itu, agar diperoleh

membentuk

pyrithione

32


hasil yang optimal, sebaiknya analisis

DAFTAR PUSTAKA

dilakukan

Badan Pengawas Obat dan Makanan, 2009,

segera

setelah

sampel

“Anti Ketombe”, Natura Kos, IV

dipreparasi.

(11) : 2-4. Departemen Kesehatan Republik Indonesia,

SIMPULAN Zinc sediaan

pyrithione

sampo

(ZnPT)

dapat

dalam

dianalisis

menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi

(KCKT)

kompleks

fase

copper

1995, Farmakope Indonesia, Edisi

terbalik

pyrithione

IV, Jakarta : 7-8, 487-488. Ferioli,

V,

et

al,

1995,”Analysis

of

sebagai

Pyrithione by Reserved Phased

(CuPT).

High

Performance

Liquid

Kondisi optimum metode analisis ZnPT

Chromatography”,

dilakukan pada panjang gelombang 240

Chromatographia, 40 (11/12) :

nm, menggunakan fase diam (kolom)

669-673.

Licrocart Lichrospher 100 RP 18 (250 x 4,6

Gandjar, Ibnu Gholib dan Abdul Rohman,

mm) oktadesil (C18), ukuran partikel isi

2007,

5μm (Merck), fase gerak variasi D3 yaitu

Analisis,Yogyakarta,

campuran larutan dapar fosfat 0,2 M pH 6,0

Pelajar : 325-346, 378-406.

: asetonitril (60 : 40), laju alir 1 ml/menit, suhu 25°C dan volume injeksi 10 µL.

optimum,

memenuhi

R.J., et

al,

uji

Terjemahan

Farmasi Pustaka

1991,

Kromatografi,

Hasil validasi metode analisis pada kondisi

Gritter

Kimia

Edisi K.

Pengantar kedua,

Padmawinata,

Bandung, ITB : 186-230.

selektivitas, uji linearitas pada rentang

Ibrahim, S., 1995, “Pengembangan dan

konsentrasi CuPT 3,08 sampai 24,62

Validasi Metode Analisis Kimia

µg/mL dengan koefisien korelasi (r2)

dalam Bidang Farmasi “, Seminar

sebesar

kimia analitik, Bandung, Dept.

0,995,

dan

uji

presisi

(keseksamaan) dengan nilai koefisien variasi

0,65%.

Pada

uji

Farmasi FMIPA ITB.

akurasi

Johnson, E. L. dan R, Stevenson, 1991,

(kecermatan) perolehan kembali sampel

Dasar

dengan

Terjemahan

konsentrasi

CuPT

12,31-15,38

Kromatografi

Cair,

Padmawinata,

µg/mL berada pada rentang 99–101%,

Bandung, ITB : 1-54, 230-255,

sedangkan

perolehan

300-301.

konsentrasi

12,31 µg/ml berada diluar

Kabacoff, B.L. dan C.M Fairchild, 1975,

rentang 98-102%. Hasil uji robustness

“Determination of zinc Pyrithione

(ketegaran) memberikan rata-rata perolehan

by Chelate Exchange”, Journal

kembali sebesar 85,98 % dengan nilai

Soc. Cosmet. Chem, 26 : 453-459.

kembali

pada

koefisien variasi 4,74%.

33


Lodewyk, 2003, Uji Daya Anti Fungi Beberapa Sampo Anti Ketombe yang

Beredar

Bandung,

Dept.

Farmasi

FMIPA

ITB,

Bandung : 5-7.

di

Kotamadya

Snyder, L. R., et al, 1988. Practical HPLC

Skripsi.

Universitas

Method Development, New York,

Padjadjaran, Bandung

John Willey & Sons : 15-49.

Martindle,1982, Text Book of The Axtro

Society of Japanese Pharmacopoeia, 1994,

Pharmacopoeia, Edisi 28, London,

The

Pharmaceutical Press : 500.

Codex (JPC) 1993, Part I, Jepang,

Menteri Kesehatan, 1988, SK Menkes RI No.

43/MENKES/SK/II/1988

Japanese

Pharmaceutical

Yakugyo Jiho, Co., Ltd : 1246. Skoog, D.A., et al, 1985, Principle of

tentang Cara Pembuatan Obat

Instrumental Analysis,

5th ed.,

yang Baik, Jakarta.

Philadelphia,

College

Mulja. M dan Suharman, 1995, Analisis

Sounders

Publishing : 334-345.

Instrumental, Surabaya, Airlangga

The British Pharmacopoeia Commission,

University Press : 236-259, 279-

2008, British Pharmacopoeia 2008,

285.

Vol IV, London, The Stationery

Munson, W. James, 1981, Analisis Farmasi Metode

Modern,

Parwa

Office : A142, A166

B,

The European Pharmacopoeia Commission,

Terjemahan Sarjono Kisman dan

2005, European Pharmacopoeia,

Slamet

5th ed, Strasbourg, 71-72.

Ibrahim,

Surabaya,

Airlangga University Press : 1757.

Product and Non Products Intended

Permanasari, Anna, 2005, Kromatografi Cair

The Scientific Committee on Cosmetic

Kinerja

Bandung,

Tinggi

Laboratorium

(KCKT), Kimia

Instrumen UPI.

for Consumers (SNCCNFP), 2002, “Zinc Pyrithione”, Plenary Meeting Colipa P 81. Tranggono, Rewtno Iswan dan Fatma

Okamura, Hideo, et al., 2006, “Toxicity

Latifah, 2007, Buku Pegangan Ilmu

Reduction of Metal Pyrithione by

Pengetahuan

Near

Gramedia Pustaka Utama : 68-74.

Ultraviolet

Irradiation”,

Kosmetik,

Jakarta,

Journal Environmental Toxicology, 21(4) : 305-309. Rengganingati,

Sekarsari,

Pengembangan

Formula

2004, Sabun

Cair Ekstrak Daun Sirih (Piper betle L., piperaceae) dan Uji Aktivitas Antimikrobanya, Skripsi,

34

OPTIMASI METODE ANALISIS ZINC PYRITHIONE DENGAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI. Syarif Hamdani, Adang Firmansyah, Yuanita Permana

Recommend Documents