N:

cobas® HIV-1 Mennyiségi nukleinsavteszt cobas® 4800 rendszeren való használatra

In vitro diagnosztikai célra

cobas® HIV-1

120 Tests

P/N: 06979599190

cobas® HBV/HCV/HIV-1 Control Kit

10 Sets

P/N: 06979572190

cobas® 4800 System Sample Preparation 240 Tests Kit 2 960 Tests

P/N: 06979513190 P/N: 06979521190

cobas® 4800 System Wash Buffer Kit

240 Tests 960 Tests

P/N: 05235863190 P/N: 05235871190

cobas® 4800 System Specimen Diluent 2

240 Tests

P/N: 06979556190

cobas® 4800 System Lysis Kit 2

240 Tests 960 Tests

P/N 06979530190 P/N 06979548190

®

cobas HIV-1

TARTALOMJEGYZÉK A felhasználás célja A teszt összegzése és ismertetése Háttér ................................................................................................................................................... 4 A HIV-1-tesztelés elméleti alapjai ........................................................................................................ 4 A vizsgálat háttere................................................................................................................................ 5 Az eljárás alapelvei .............................................................................................................................. 5 Anyagok és reagensek Reagensek ........................................................................................................................................... 7 A reagensek tárolási és kezelési feltételei ......................................................................................... 12 További szükséges anyagok .............................................................................................................. 12 Szükséges, de nem biztosított eszközök és szoftverek ..................................................................... 13 Óvintézkedések és kezelési követelmények Figyelmeztetések és óvintézkedések ................................................................................................ 13 Helyes laboratóriumi gyakorlat ........................................................................................................... 14 Reagensek kezelése .......................................................................................................................... 14 Szennyez dés .................................................................................................................................... 14 Felhasználhatóság ............................................................................................................................. 15 Hulladékkezelés ................................................................................................................................. 15 Kiömlés és tisztítás ............................................................................................................................ 15 Minták levétele, szállítása és tárolása ............................................................................................... 16 Mintavétel .................................................................................................................................. 16 Minták szállítása, tárolása és stabilitása ................................................................................... 16 Használati utasítás A teszt futtatása ................................................................................................................................. 17 Mintafeldolgozási térfogat ......................................................................................................... 17 Munkafolyamat .......................................................................................................................... 17 Futtatási mennyiség .................................................................................................................. 18 Munkafolyamat .......................................................................................................................... 18 Eredmények Min ségellen rzés és az eredmények érvényessége ....................................................................... 20 Kontrolljelz k ...................................................................................................................................... 20 Az eredmények értelmezése ............................................................................................................. 21 Az eljárással kapcsolatos korlátozások ............................................................................................. 22 A nem klinikai teljesítmény értékelése A fontosabb teljesítményjellemz k..................................................................................................... 23 07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

2

®

cobas HIV-1

WHO Nemzetközi standard ...................................................................................................... 23 Lineáris tartomány .................................................................................................................... 24 Pontosság – laboratóriumon belül ............................................................................................ 26 Csoport/altípus ellen rzése ...................................................................................................... 27 Specificitás ................................................................................................................................ 28 Módszerkorreláció ..................................................................................................................... 30 Teljes rendszerhiba ................................................................................................................... 30 Keresztszennyez dés ............................................................................................................... 30 További információk A teszt legfontosabb tulajdonságai .................................................................................................... 31 Szimbólumok...................................................................................................................................... 32 Gyártó és forgalmazók ....................................................................................................................... 33 Védjegyek és szabadalmak ............................................................................................................... 33 Szerz i jog ......................................................................................................................................... 33 Hivatkozások ...................................................................................................................................... 34 Dokumentumverzió ............................................................................................................................ 35

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

3

®

cobas HIV-1

A felhasználás célja A cobas® HIV-1 egy in vitro nukleinsav-amplifikációs teszt a humán immundeficiencia vírus 1. típusának (HIV-1) kimutatására HIV-1-fert zött egyének EDTA-s plazmájában. A teszt a klinikai megjelenéssel és a betegség progressziójának egyéb laboratóriumi markereivel együtt a HIV-1-fert zött betegek orvosi kezelésében nyújthat segítséget. A teszt a HIV-1-fert zés jelenlétének meger sítésére használható ellenanyagra reaktív betegeknél, valamint a beteg prognózisának megállapítására a kiindulási HIV-1-szint mérésével. Ezen felül az antiretrovirális kezelés hatása a HIV-1 RNS-szint változásainak mérésével monitorozható.

A teszt összegzése és ismertetése Háttér A HIV a szerzett immunhiányos tünetegyüttes (Acquired Immunodeficiency Syndrome – AIDS)] kórokozója. A szerokonverziót követ en a fert zött egyének általában klinikailag stabil, viszonylag tünetmentes fázisba kerülnek, ami évekig tarthat. A tünetmentes id szakot a fert zött egyén genetikájától és a fokozatosan kialakuló CD4+ T-limfocitahiánytól függ en folytonos plazmavirémia jellemzi. Bár a fert zés tünetmentes fázisában a vírusszintek a perifériás vérben viszonylag alacsonyak, úgy t nik, hogy a vírus szaporodása és ürülése dinamikus folyamat, amelynek során a nagyfokú vírustermelés és a CD4+ sejtek által mutatott fert zés egyensúlyban van a nagyfokú vírusürüléssel, a fert zött sejtek pusztulásával és a CD4+ sejtek utánképz désével, és így a HIV-fert zéssel él átlagos betegnél mind a plazmavirémia, mind a CD4+ sejtek mintegy 8 éven keresztül viszonylag stabil szinten maradnak. A plazmában megfigyelhet HIV-virémia mennyiségi mérései azt mutatták, hogy a magasabb vírusszintek a HIV-betegség gyorsabb progressziójával vannak összefüggésben.1, 2 Ezen felül a klinikai kutatások majdnem két évtizede után megállapítható, hogy amikor antiretrovirális kezelés (ART) hatására a plazmában csökkennek a vírusszintek, jelent sen csökken a betegség progressziója, beleértve a haláleseteket, az AIDS kialakulását, az opportunista fert zéseket és a HIV-hez kapcsolódó morbiditás kockázatát.3 A HIVvíruskoncentráció a HIV átvitelének kockázatával is összefügg, és randomizált, kontrollált klinikai vizsgálatok során megállapították, hogy a korán kezdett ART és a víruskoncentráció csökkentése 96%-kal csökkenti a HIV átvitelét.4

A HIV-1-tesztelés elméleti alapjai Pillanatnyilag sok antiretrovirális gyógyszer áll rendelkezésre, amelyek a vírus proteázát, integrázát, burkát és reverz transzkrpitázát célozzák. Különböz kládokba tartozó vírusok genotípus-elemzései a HIV-1 polimeráz (pol) gén reverz transzkriptáz, integráz és proteáz régióiban természetesen el forduló és gyógyszer miatti nukleotidváltozásokat, polimorfizmusokat és másodlagos mutációkat mutattak. A rezisztencia vizsgálata fontos diagnosztikai eszközzé vált a HIV-1-fert zések kezelésében. Akkor végzik, amikor a beteg víruskoncentrációja szekvenálással kimutatható szint lesz. A víruskoncentráció monitorozásának legfontosabb szerepe, hogy bizonyítottan csökkenti a gyógyszer-rezisztencia kockázatát, és klinikailag a kezelésben részesül betegeknél els ként jelzi az aktív vírusszaporodást.5,6 Ezért számos országos és nemzetközi irányelv ajánlja a HIV-1 víruskoncentráció mérését.3,7-9

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

4

®

cobas HIV-1

Az irányelvek jó néhány éven át azt t zték ki a kezelés fontos céljául, hogy a HIV-1 víruskoncentráció egy teszt kimutatási határa (pl. 50 kópia/ml) alá csökkenjen. 2011-t l az Egyesült Államok HIV-kezelési irányelvei egyre inkább azt tartalmazták, hogy az ART kezelésben részesül betegeknél a legfeljebb 200 kópia/ml-es víruskoncentráció-eredmények nem feltétlenül jelentik a kezelés sikertelenségét.3 Az európai irányelvekben továbbra is az 50 kópia/ml küszöbérték szerepel a kezelés sikertelenségének meghatározásánál.7 Még nem végeztek szabályos klinikai vizsgálatot a használandó küszöbérték meghatározására. A víruskoncentrációt mér tesztek alsó határai közötti különbségek fontos eltérésekhez vezethetnek a víruskoncentrációeredmények klinikai értelmezésében a betegek kezelésre adott reakciói monitorozásakor10,11, mivel a kezelés célja a víruskoncentráció olyan szintre csökkentése, amely mellett a legkevésbé valószín , hogy gyógyszerrezisztencia alakul ki. Az irányelvek a víruskoncentráció mérését a kezelésre adott reakciók monitorozása mellett annak meghatározására is ajánlják, hogy a > 500 sejt/mm3 CD4+ sejtszámú (víruskoncentráció > 100 000 kópia/ml) betegnél kell-e ART kezelést kezdeni, és annak biztosítására, hogy a gyógyszerrezisztencia-szekvenálás sikeres legyen a megfelel betegeknél (akik víruskoncentrációja > 1000 kópia/ml vagy az ART az optimálisnál gyengébb víruskoncentráció-reakciót eredményez). A víruskoncentráció mérését a szülést megel en is ajánlott végrehajtani annak meghatározására, hogy szükség van-e császármetszésre az anya-gyermek HIV-fert zés elkerülésére (olyan várandós n knél, akiknek a víruskoncentrációja > 1000 kópia/ml).

A vizsgálat háttere A cobas® HIV-1 a cobas® 4800 rendszeren végzett mennyiségi nukleinsavteszt. A cobas® HIV-1 lehet vé teszi a HIV RNS kimutatását és mennyiségi meghatározását fert zött betegek EDTA-s plazmájában. A kimutatás és a mennyiségi meghatározás két próba használatával történik, amely nem különbözteti meg az M, N és O csoportokba tartozó altípusokat. A teszt a víruskoncentrációt egy HIV ellen („Armored” technológiával) nem felvértezett RNS mennyiségi standardhoz (RNA QS) képest méri, amelyet az egyes mintákhoz kell adni a minták feldolgozásakor. Az RNA QS bels kontrollként m ködik a teljes mintael készítés és PCR-amplifikálás monitorozására. Ezen felül a teszt három küls kontrollt használ: egy magas titer pozitívot, egy alacsony titer pozitívot és egy negatívot.

Az eljárás alapelvei A cobas® HIV-1 teszt teljesen automatizált minta-el készítésen (nukleinsav-extrahálás és tisztítás) alapul, amelyet PCR-amplifikálás és kimutatás követ. A cobas® 4800 rendszer a cobas x 480 minta-el készít készülékb l és a cobas z 480 valós idej PCR-analizátorból áll. Az automatizált adatkezelést a cobas® 4800 szoftver végzi, amely az összes teszthez a következ eredmények egyikét rendeli: „target not detected” (nem kimutatható target), „< LLoQ” (alsó mennyiségi meghatározási határ), „> ULoQ” (fels mennyiségi meghatározási határ) vagy „HIV RNA detected” (HIV RNS kimutatható), egy érték a LLoQ × ULoQ lineáris tartományban. Az eredményeket át lehet tekinteni közvetlenül a rendszer képerny jén, de exportálhatók vagy jelentésként nyomtathatók is. A rendszer a betegek mintáiból származó nukleinsavakat, küls kontrollokat és RNA QS molekulákat egyszerre extrahálja. Összegezve, a mintába proteináz és lízisreagens kerül, és ennek hatására a vírus nukleinsavai felszabadulnak. A felszabadult nukleinsavak a hozzáadott mágneses üvegpartikulumok szilikonfelületéhez kötnek. A kötetlen anyagokat és szennyez déseket, például a denaturált fehérjéket, sejttörmeléket és lehetséges PCR-inhibitorokat az ezt követ mosóreagens-lépések eltávolítják, és egy eluáló puffer magasabb h mérsékleten eluálja a tisztított nukleinsavakat a mágneses üvegpartikulumokból.

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

5

®

cobas HIV-1

A teszt a mintában a célnukleinsavak szelektív amplifikálását a célvírusra specifikus forward és reverz primerekkel éri el, amelyeket a HIV nagy fokban konzervált régióiból választ. A HIV-1 gag gén és a HIV-1 LTR régió kett s targetjét a cobas® HIV-1 teszt amplifikálja. Az RNA QS szelektív amplifikálását a teszt szekvenciaspecifikus forward és reverz primerekkel éri el, amelyeket úgy választ, hogy ne legyenek homológok a HIV genomjával. A teszt mind a reverz transzkripcióhoz, mind a PCR-amplifikáláshoz h stabil DNS-polimeráz enzimet használ. A target és RNA QS szekvenciákat egyszerre amplifikálja egy univerzális PCR-amplifikáló profillal, amely tartalmazza az el re meghatározott h mérséklet-lépcs ket és a ciklusok számát. A Master Mix dezoxitimidin-trifoszfát (dTTP) helyett dezoxiuridin-trifoszfátot (dUTP) tartalmaz, amely beépül az újonnan szintetizált DNS-be (amplikon).12–14 A PCR els hevítési lépése során a PCR Master Mix reagensben lév AmpErase enzim az el PCR-futtatásokból származó minden szennyez amplikont inaktivál. Az újonnan kialakuló amplikonokat viszont nem inaktiválja, mert az 55 °C-ot meghaladó h mérséklet miatt az AmpErase enzim maga is inaktív lesz. A cobas® HIV-1 Master Mix a HIV-1-targetszekvenciákra specifikus két kimutatási próbát tartalmaz, valamint egyet az RNA QS-hez. A próbákat fluoreszcens targetspecifikus jelz festékek jelölik, ami lehet vé teszi a HIV-1-target és az RNA QS egyszerre történ kimutatását két különböz kimutatási csatornán.15,16 Amikor az érintetlen próba fluoreszcens jelei nem köt dnek a targetszekvenciához, azokat egy blokkolófesték elnyomja. A PCR-amplifikálás minden egyes lépése során a próbák a specifikus, egyszálú DNS-templáthoz hibridizálnak. Ennek eredményeként a próbát a DNS-polimeráz 5'–3'-exonukleáz-aktivitása hasítja, így a jelz festék és a blokkolófesték elválik, és fluoreszcens jel keletkezik. Minden PCR-ciklus során megn a hasított próbák mennyisége, és így növekszik a jelz festékb l származó összesített jel is. A PCR-termékek valós idej kimutatása és megkülönböztetése a felszabadult, vírustargeteket és RNA QS-t reprezentáló jelz festékek fluoreszcencenciájának mérésével megy végbe.

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

6

®

cobas HIV-1

Anyagok és reagensek Reagensek Minden felbontatlan reagenst és kontrollt A reagensek tárolási és kezelési feltételei táblázat ajánlásai szerint tároljon. Készlet

Összetev k és reagensek MMX R1 ® (cobas Master Mix reagens 1) Mangán-acetát, kálium-hidroxid, < 0,1% nátrium-azid

Készletenkénti mennyiség

N/A 10 × 1,75 ml

HIV-1 MMX R2 ® (cobas HIV-1 Master Mix reagens 2)

®

cobas HIV-1 120 teszt (P/N: 06979599190)

Tricin puffer, kálium-acetát, 18% dimetilszulfoxid, glicerin, < 0,1% Tween 20, EDTA, < 0,12% dATP, dCTP, dGTP, dUTP-k, < 0,01% HIV-primerek, < 0,01% Quantitation Standard (mennyiségi standard) forward és reverz primerek, < 0,01% fluoreszcensen jelölt, a HIV-re és a mennyiségi standardra specifikus oligonukleotid-próbák, < 0,01% oligonukleotid aptamer, < 0,01% Z05D DNS-polimeráz (mikrobiális), < 0,01% AmpErase (uracil-N-glikoziláz) enzim (mikrobiális), < 0,1% nátrium-azid

N/A

10 × 0,5 ml

RNA QS ® (cobas RNA mennyiségi standard) Trisz puffer, < 0,05% EDTA, < 0,001% nem HIV-hez kapcsolódó Armored RNSkonstrukció primer és próbaspecifikus szekvenciarégiókkal (nem fert RNS MS2 bakteriofágban), < 0,1% nátrium-azid

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

a

Biztonsági jelzés és figyelmeztetés

N/A

10 × 1,75 ml

7

®

cobas HIV-1

Készlet

Összetev k és reagensek

Készletenkénti mennyiség

HBV/HCV/HIV-1 L(+)C ® (cobas HBV/HCV/HIV-1 alacsony pozitív kontroll) < 0,001% szintetikus (Armored) HIV-1 M csoport RNS MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva, < 0,001% szintetikus (plazmid) HBV DNS Lambda bakteriofág burokfehérjébe csomagolva, < 0,001% szintetikus (Armored) 10 × 0,75 ml HCV RNS MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva, normál humán plazma, engedélyezett vizsgálatok alapján nem reaktív HIV 1/2, HCV-, HBsAg-, valamint HBc-antitestre; a HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS nem mutatható ki PCR-eljárásokkal. ® 0,1% ProClin 300 tartósítószer HBV/HCV/HIV-1 H(+)C ® (cobas HBV/HCV/HIV-1 magas pozitív ® cobas HBV/HCV/HIV-1 kontroll) < 0,001% szintetikus (Armored) HIV-1 Control Kit M csoport RNS MS2 bakteriofág 10 készlet burokfehérjébe csomagolva, (P/N: 06979572190) < 0,001% szintetikus (plazmid) HBV DNS Lambda bakteriofág burokfehérjébe csomagolva, < 0,001% szintetikus (Armored) 10 × 0,75 ml HCV RNS MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva, normál humán plazma, engedélyezett vizsgálatok alapján nem reaktív HIV 1/2, HCV-, HBsAg-, valamint HBc-antitestre; a HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS nem mutatható ki PCR-eljárásokkal. ® 0,1% ProClin 300 tartósítószer

a

Biztonsági jelzés és figyelmeztetés

Figyelem H317 Allergiás b rreakciót válthat ki. P261 Kerülje a por/füst/gáz/köd/g zök/ permet belélegzését. P272 Szennyezett munkaruhát tilos kivinni a munkahely területér l. P280 Véd keszty használata kötelez . P333 + P313 B rirritáció vagy kiütések megjelenése esetén: orvosi ellátást kell kérni. P362 + P364 A szennyezett ruhát le kell vetni és az újbóli használat el tt ki kell mosni. P501 A tartalom/edény elhelyezése hulladékként: jóváhagyott hulladékkezelési üzemben. 55965-84-9 keverék: 5-klór-2-metil-4izotiazolin-3-on [EC 247-500-7] és 2-metil2H-izotiazol-3-on [EC 220-239-6] (3:1)

(–) C ®

(cobas negatív kontroll 2) Normál humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HIV 1/2, HCV-, HBsAg-, 10 × 0,75 ml valamint HBc-antitestre; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCReljárásokkal nem mutatható ki ® 0,1% ProClin 300 tartósítószer

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

8

®

cobas HIV-1

Készlet

Összetev k és reagensek

Készletenkénti mennyiség

MGP 2

a

Biztonsági jelzés és figyelmeztetés N/A

®

(cobas 4800 MGP reagens 2) ®

cobas 4800 System Sample Preparation Kit 2 240 teszt (P/N: 06979513190)

Mágneses üvegpartikulumok, trisz puffer, 10 × 8 ml 0,1% metil-4-hidroxibenzoát, < 0,1% nátrium-azid EB 2 ®

(cobas 4800 eluáló puffer 2)

10 × 17 ml

Trisz puffer, 0,2% metil-4-hidroxi-benzoát MGP 2 ®

(cobas 4800 MGP reagens 2) ®

cobas 4800 System Sample Preparation Kit 2 960 teszt (P/N: 06979521190)

Mágneses üvegpartikulumok, trisz puffer, 10 × 16 ml 0,1% metil-4-hidroxibenzoát, < 0,1% nátrium-azid EB 2 ®

(cobas 4800 eluáló puffer 2)

10 × 17 ml

Trisz puffer, 0,2% metil-4-hidroxi-benzoát ®

cobas 4800 System Wash Buffer Kit 240 teszt (P/N: 05235863190) ®

cobas 4800 System Wash Buffer Kit 960 teszt (P/N: 05235871190)

WB

N/A ®

(cobas 4800 rendszer mosópuffer)Nátrium-citrát-dihidrát, 0,05% N-metilizotiazolon-HCl

10 × 55 ml

WB

N/A ®

(cobas 4800 rendszer mosópuffer)Nátrium-citrát-dihidrát, 0,05% N-metilizotiazolon-HCl

10 × 200 ml

®

cobas 4800 System Specimen Diluent 2 240 teszt (P/N: 06979556190)

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

SD 2

N/A

Trisz puffer, 0,1% metil-4-hidroxibenzoát, 10 × 8 ml < 0,1% nátrium-azid

9

®

cobas HIV-1

Összetev k és reagensek

Készlet

Készletenkénti mennyiség

P2 ®

(cobas 4800 proteáz 2) Trisz puffer, < 0,05% EDTA, kalcium-klorid, kalcium-acetát, 8% (m/V) proteináz

10 × 1,0 ml

®

cobas 4800 System Lysis Kit 2 240 teszt (P/N: 06979530190)

LYS 2 ®

(cobas 4800 lízispuffer 2) 43% (m/V) guanidin-tiocianát, 5% (m/V) polidokanol, 2% (m/V) ditiotreitol, nátrium-citrát-dihidrát

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

10 × 27 ml

a

Biztonsági jelzés és figyelmeztetés

Veszély H302+H332 Lenyelve vagy belélegezve ártalmas. H315 B rirritáló hatású. H318 Súlyos szemkárosodást okoz. H334 Belélegezve allergiás és asztmás tüneteket, és nehéz légzést okozhat. H412 Ártalmas a vízi él világra, hosszan tartó károsodást okoz. EUH032 Savval érintkezve nagyon mérgez gázok képz dnek. P261 Kerülje a por/füst/gáz/köd/g zök/ permet belélegzését. P280 Véd keszty /szemvéd /arcvéd használata kötelez . P284 Légzésvédelem használata kötelez . P305 + P351 + P338 + P310: SZEMBE KERÜLÉS ESETÉN: Több percig tartó óvatos öblítés vízzel. Adott esetben a kontaktlencsék eltávolítása, ha könnyen megoldható. Az öblítés folytatása. Azonnal forduljon TOXIKOLÓGIAI KÖZPONTHOZ vagy orvoshoz. P342 + P311 Légzési problémák esetén: Forduljon TOXIKOLÓGIAI KÖZPONTHOZ vagy orvoshoz. P362 + P364 A szennyezett ruhát le kell vetni és az újbóli használat el tt ki kell mosni.

10

®

cobas HIV-1 Összetev k és reagensek

Készlet

Készletenkénti mennyiség

a

Biztonsági jelzés és figyelmeztetés

Veszély P2 ® (cobas 4800 proteáz 2) Trisz puffer, < 0,05% EDTA, kalcium-klorid, kalcium-acetát, 8% (m/V) proteináz

H302+H332 Lenyelve vagy belélegezve ártalmas. 10 × 1,0 ml

H315 B rirritáló hatású. H318 Súlyos szemkárosodást okoz. H334 Belélegezve allergiás és asztmás tüneteket, és nehéz légzést okozhat. H412 Ártalmas a vízi él világra, hosszan tartó károsodást okoz. EUH032 Savval érintkezve nagyon mérgez gázok képz dnek.

®

cobas 4800 System Lysis Kit 2 960 teszt (P/N: 06979548190)

LYS 2 ®

(cobas 4800 lízispuffer 2) 43% (m/V) guanidin-tiocianát, 5% (m/V) polidokanol, 2% (m/V) ditiotreitol, nátrium-citrát-dihidrát

a

10 × 84 ml

P261 Kerülje a por/füst/gáz/köd/g zök/ permet belélegzését. P280 Véd keszty /szemvéd /arcvéd használata kötelez . P284 Légzésvédelem használata kötelez . P305 + P351 + P338 + P310: SZEMBE KERÜLÉS ESETÉN: Több percig tartó óvatos öblítés vízzel. Adott esetben a kontaktlencsék eltávolítása, ha könnyen megoldható. Az öblítés folytatása. Azonnal forduljon TOXIKOLÓGIAI KÖZPONTHOZ vagy orvoshoz. P342 + P311 Légzési problémák esetén: Forduljon TOXIKOLÓGIAI KÖZPONTHOZ vagy orvoshoz. P362 + P364 A szennyezett ruhát le kell vetni és az újbóli használat el tt ki kell mosni.

A termék biztonsági címkéi megfelelnek az EU GHS el írásainak.

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

11

®

cobas HIV-1

A reagensek tárolási és kezelési feltételei Tárolási mérséklet

Reagens

Tárolási id

cobas HIV-1

®

2–8 °C

A jelölt lejárati dátumig stabil

®

2–8 °C

A jelölt lejárati dátumig stabil

®

2–8 °C

A jelölt lejárati dátumig stabil

®

15–25 °C

A jelölt lejárati dátumig stabil

®

2–8 °C

A jelölt lejárati dátumig stabil

®

2–8 °C

A jelölt lejárati dátumig stabil

cobas HBV/HCV/HIV-1 Control Kit cobas 4800 System Sample Preparation Kit 2 cobas 4800 System Wash Buffer Kit cobas 4800 System Specimen Diluent 2 cobas 4800 System Lysis Kit 2 Ne fagyassza le a reagenseket.

További szükséges anyagok Anyagok

P/N

®

06884008001

®

cobas 4800 rendszer AD (kislyukú) lemeze, 0,3 ml

05232724001

Zárófólia-felhelyez

04900383001

CORE hegyek, 1000 µl, 96-os állványban

04639642001

200 ml-es reagenstároló

05232759001

50 ml-es reagenstároló

05232732001

24-pozíciós hordozó

04639502001

32-pozíciós hordozó

04639529001

Szilárdhulladék-zacskó

05530873001 (kicsi) vagy 04691989001 (nagy)

Hamilton STAR m anyag csúsztató

04639669001

Egyszer használatos keszty k, púdermentes

Bármely púdermentes egyszer használatos keszty elfogadható.

Vortex kever (egycsöves)

Bármely vortexkever elfogadható.

Centrifuga, kilendül fejes rotorral, minimum 1500 RCF

Bármely megfelel centrifuga elfogadható.

cobas 4800 rendszer kivonási (mély lyukú) lemeze, 2,0 ml

A külön beszerezhet anyagokkal kapcsolatos további információkért forduljon a Roche helyi képvisel jéhez.

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

12

®

cobas HIV-1

Szükséges, de nem biztosított eszközök és szoftverek Szükséges, de nem biztosított eszközök és szoftverek ®

cobas 4800 rendszer cobas x 480 készülék cobas z 480 analizátor Vezérl egység ®

cobas 4800 System Application Software (Core) 2.1.0-ás vagy újabb verzió ®

®

cobas 4800 rendszer cobas HIV-1 AP 1.0.0-ás vagy újabb verziója A készülékeken használható els dleges és másodlagos mintacsövekkel ® kapcsolatos további információkat a cobas 4800 rendszer kézikönyve – 2.1-es ® ® vagy újabb szoftver, cobas HIV-1 a cobas 4800 rendszerrel való használattal ® ® (innent l röviden: „cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HIV-1-hez”) cím kiadványban találja. Megjegyzés: A készülékekkel használható mintaállványok, hegyállványok, reagensállványok és lemezhordozók részletes megrendel listájáért forduljon a Roche helyi képvisel jéhez.

Óvintézkedések és kezelési követelmények Figyelmeztetések és óvintézkedések Mint minden teszteljárásnál, a helyes laboratóriumi gyakorlat alapvet a teszt megfelel kivitelezéséhez. A vizsgálat nagy analitikai érzékenysége miatt ügyeljen arra, hogy a reagensek, minták és amplifikálási keverékek szennyez dést l mentesek maradjanak. Csak in vitro diagnosztikai célra. A cobas® HIV-1 tesztet nem értékelték ki HIV-1 sz

tesztként vérben vagy vérkészítményekben.

Minden betegt l származó mintát fert ként, megfelel biztonságos laboratóriumi eljárásokat alkalmazva kell kezelni. Ilyeneket ír le a Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories és a CLSI Document M29-A4.17,18 Ezt a vizsgálatot csak a fert anyagok kezelésében és a cobas® HIV-1 és cobas® 4800 rendszer használatában jártas személy végezheti. Minden humán eredet anyagot potenciálisan fert szerint kezelni.

nek kell tekinteni, és az általános óvintézkedések

A cobas® HBV/HCV/HIV-1 kontrollkészlet emberi vérb l származó plazmát tartalmaz. A forrásanyagot engedélyezett antitest-vizsgálattal tesztelték, és nem bizonyult reaktívnak HCV-, HIV-1/2, HBsAg- és HBc-antitest jelenlétére. A PCR-eljárásokkal történ tesztelés során HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS vagy HBV DNS nem volt kimutatható. Egyetlen ismert vizsgálati módszer sem nyújthat teljes garanciát arra, hogy a humán vérkészítményekben nincs jelen fert anyag. Ügyeljen rá, hogy a mágneses üvegpartikulumok ne kerüljenek mágneses mez k közelébe. Ne fagyassza a teljes vért és az els dleges csövekben tárolt mintákat. Az optimális vizsgálati feltételek biztosítása érdekében csak a szállított vagy a megadott szükséges fogyóeszközöket alkalmazza. A biztonsági adatlapok (SDS) igény esetén hozzáférhet ek a Roche helyi irodájában.

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

13

®

cobas HIV-1

A vizsgálat helyes kivitelezésének biztosítása végett szigorúan tartsa be a megadott eljárásokat és irányelveket. A megadott eljárásoktól és irányelvekt l való bármilyen eltérés befolyásolhatja a vizsgálat teljesítményét. Álpozitív eredmények fordulhatnak el , ha a minták átvitelét a mintakezelés és -feldolgozás során nem kontrollálják megfelel en. A cobas x 480 készülék, illetve cobas z 480 analizátor fert zési kockázatának csökkentésére vonatkozó további figyelmeztetéseket, óvintézkedéseket és eljárásokat a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HIV-1-hez” cím kiadványban találja. Ha felmerül a szennyez dés gyanúja, végezzen tisztítást és heti karbantartást a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HIV-1-hez” és a cobas® 4800 rendszer kézikönyve szerint. Megjegyzés: A konkrét utasításokat a „Minták levétele, szállítása és tárolása” cím részben találja.

Helyes laboratóriumi gyakorlat Ne pipettázzon szájjal. Ne egyen, igyon vagy dohányozzon a laboratórium területén. Alaposan mosson kezet a minták és a készlet reagenseinek kezelése és keszty levétel után. Viseljen szemvéd t, véd ruhát és egyszer használatos véd keszty t minden reagens kezelése közben. Ezen anyagok b rrel, szemmel és nyálkahártyával való érintkezése kerülend . Ha mégis érintkezésbe kerülnek, azonnal öblítse le b vízzel. Ellenkez esetben égés jelentkezhet. A reagenseket kiömlés esetén szárazra törlés el tt hígítsa vízzel. Gondosan tisztítson meg, és desztillált vagy ioncserélt vízb l frissen készített 0,5%-os nátriumhipoklorit oldattal (1:10 arányban hígított háztartási fehérít szer) fert tlenítsen minden laboratóriumi munkafelületet. Ezután törölje át 70%-os etanollal a felületet.

Reagensek kezelése A minták és kontrollok átvitelének elkerülése érdekében minden reagenst, kontrollt és mintát a helyes laboratóriumi gyakorlat szerint kezeljen. Felhasználás el tt szemrevételezzen minden reagensüveget és csövet, hogy nem tapasztal-e szivárgásra utaló jeleket. Szivárgás esetén azt az anyagot ne használja fel a vizsgálathoz. A cobas® 4800 lízispuffer 2 guanidin-tiocianátot tartalmaz, ami potenciálisan veszélyes vegyület. Kerülje a reagensek b rrel, szemmel vagy nyálkahártyával való érintkezését. Ha mégis el fordul érintkezés, azonnal mossa le b vízzel, mert ellenkez esetben égés történhet. A cobas® HIV-1, cobas® 4800 minta-el készít készlet 2 és a cobas® 4800 rendszer mintaoldószer 2 oldata tartósítószerként nátrium-azidot tartalmaz. Kerülje a reagensek b rrel, szemmel vagy nyálkahártyával való érintkezését. Ha mégis el fordul érintkezés, azonnal mossa le b vízzel, mert ellenkez esetben égés történhet. Ha a reagensek kiömlenek, szárazra törlés el tt hígítsa ket vízzel. Ügyeljen rá, hogy a guanidin-tiocianát tartalmú cobas® 4800 lízispuffer 2 ne lépjen érintkezésbe nátrium-hipoklorit-oldattal (fehérít ). Az ilyen keverékb l er sen mérgez gáz fejl dhet.

Szennyez dés Viseljen keszty t, és a minták, valamint a cobas® HIV-1-reagensek kezelése között váltson keszty t. A minták és kontrollok kezelése során ügyeljen a keszty k szennyezésének elkerülésére. A minták és a készlet reagenseinek kezelése közben viseljen keszty t, köpenyt és szemvéd t. Kerülje a reagensek mikrobiális és ribonukleáz-szennyezését. Álpozitív eredmények fordulhatnak el , ha a mintakezelés során nem ügyel a minták átvitelének elkerülésére. 07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

14

®

cobas HIV-1

Felhasználhatóság Ne használja a készleteket a lejárati id után. Ne öntse össze a reagenseket. Ne használjon egyszer használatos anyagokat a lejárati id után. Az egyszer használatos anyagokat csak egyszer szabad felhasználni. Ne használja újra azokat. Valamennyi felszerelést a gyártó utasításai szerint megfelel en karban kell tartani.

Hulladékkezelés A cobas® HIV-1, cobas® 4800 minta-el készít készlet 2 és a cobas® 4800 rendszer mintaoldószer 2 oldata nátrium-azidot tartalmaz (lásd: „Figyelmeztetések és óvintézkedések”). A nátrium-azid az ólom- és rézcsövekkel reakcióba lépve er sen robbanékony fém-azidokat képezhet. Amikor nátriumazid tartalmú oldatot önt ki a laboratóriumi mosogatóba, az azidlerakódás megakadályozása céljából nagy mennyiség hideg vízzel öblítse le a lefolyót. A fel nem használt reagensek és hulladék kezelésének összhangban kell lennie a megfelel országos, szövetségi, állami és helyi szabályozásokkal. Megjegyzés: A folyékony hulladék megfelel hulladékkezelésének leírását a megfelel cobas® 4800 rendszer felhasználói kézikönyvében találja.

Kiömlés és tisztítás A cobas® 4800 lízispuffer 2 guanidin-tiocianátot tartalmaz. Ha guanidin-tiocianátot tartalmazó folyadék ömlik ki, megfelel laboratóriumi tisztítószerrel és vízzel tisztítsa fel. Ha potenciálisan fert anyagot tartalmazó folyadék ömlik ki, EL SZÖR laboratóriumi tisztítószerrel és vízzel, majd 0,5%-os nátriumhipoklorit oldattal tisztítsa meg az érintett területet. Ha a cobas x 480 készülékre folyadék ömlik, a készüléket a megfelel cobas® 4800 rendszer kézikönyvének utasításai alapján tisztítsa meg. Ne használjon nátrium-hipoklorit oldatot (fehérít szert) a cobas x 480 készülék vagy a cobas z 480 analizátor tisztításához. A cobas x 480 készüléket vagy a cobas z 480 analizátort a megfelel cobas® 4800 rendszer kézikönyvének utasításai szerint tisztítsa meg.

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

15

®

cobas HIV-1

Minták levétele, szállítása és tárolása Megjegyzés: Valamennyi mintát fert

ágensek átvitelére alkalmasként kell kezelni.

Az összes mintát az el írt h mérséklettartományban tárolja. A minták stabilitását a magasabb h mérséklet befolyásolja. Ha a másodlagos csövekben fagyasztott mintákat használ, tartsa ket szobah mérsékleten (15–30 °C), amíg teljesen ki nem olvadnak, majd rövid ideg keverje (pl. 3–5 másodpercig vortexelje) és utána centrifugálja, hogy a minta teljes térfogata a cs aljára kerüljön.

Mintavétel A vért molekulárdiagnosztikai tesztmódszerekhez való BD Vacutainer® PPT™ plazma-el készít csövekbe vagy EDTA véralvadásgátlót tartalmazó steril csövekbe vegye le. Megjegyzés: A felhasználó a szérum vagy plazma el készítése során mindig kövesse a csövek gyártójának utasításait.

Minták szállítása, tárolása és stabilitása A molekulárdiagnosztikai tesztmódszerekhez való BD Vacutainer® PPT™ plazma-el készít csövekbe vagy EDTA véralvadásgátlót tartalmazó steril csövekbe levett teljes vért 24 órán belül 2 °C és 25 °C között lehet tárolni és/vagy szállítani a plazma-el készítés és az azt követ vizsgálat el tt. A plazmamintákat a másodlagos csövekben legfeljebb 24 órán át 2 °C és 30 °C között, legfeljebb 72 órán át 2 °C és 8 °C között vagy legfeljebb 6 héten át –18 °C h mérsékleten lehet tárolni. Az elválasztott plazmaminták a másodlagos csövekben –18 °C h mérsékleten történ tárolás esetén legfeljebb három fagyasztás–olvasztás ciklusban maradnak stabilak fagyasztva. Ha a mintákat szállítani kell, a minták és kórokozó anyagok szállítására vonatkozó országos és/vagy nemzetközi el írásoknak megfelel en kell csomagolni és címkézni.

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

16

®

cobas HIV-1

Használati utasítás A teszt futtatása Mintafeldolgozási térfogat A cobas® HIV-1 alapértelmezett mintafeldolgozási térfogata 400 µl. Kis térfogatú minták esetén választható a 200 µl-es mintafeldolgozási térfogat. Csak ebben az esetben a cobas® 4800 rendszer mintaoldószer 2 oldatát további reagensként a rendszerbe kell tölteni. A felhasználót a szoftver varázslója erre felszólítja, ha a munkasorrend létrehozásakor a „Diluted plasma” (oldott plazma) lehet séget választotta.

Munkafolyamat ®

1. ábra:

A cobas HIV-1 munkafolyamata 1

A rendszer indítása

2

A készülék karbantartásának elvégzése

3

A tárolt minták és reagensek el vétele

4

A futtatás indítása

5

A paraméterkártyák olvasása

6

A minták betöltése

7

LIS esetén: a munkasorrend jóváhagyása LIS nélkül: a munkasorrend létrehozása

8

A fogyóeszközök (mély lyukú lemez, mikrolemez, hegyállványok) betöltése

9

A reagensek betöltése

10

A minta-el készítési futtatás indítása

11

A mikrolemez eltávolítása és lezárása

12

A mikrolemez analizátorba helyezése

13

A minták, használt reagensek és mély lyukú lemez eltávolítása

14

Az eredmények áttekintése

15

LIS esetén: az eredmények LIS-be küldése

16

Az eszközök és anyagok kivétele az analizátorból

Megjegyzés: A részletes használati utasításokat a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HIV-1hez” cím kiadványban találja.

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

17

®

cobas HIV-1

Futtatási mennyiség A cobas® HIV-1 teszt a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HIV-1-hez” cím kiadványban ismertetett minimálisan szükséges mintatérfogatokkal futtatható. A cobas® 4800 rendszer támogatja a vegyes mintacsoportok futtatását. A generikus minta-el készítési reagensek (cobas® 4800 rendszer minta-el készít készlet 2, cobas® 4800 rendszer líziskészlet 2 és cobas® 4800 rendszer mosófolyadék-készlet) kétféle méret készletben érhet k el. Mindkett 10 futtatásra alkalmas, egyszerre legfeljebb 24, illetve 96 mintával, amibe beletartoznak a futtatandó kontrollok és minták. A cobas® HIV-1 egyféle méret készletben érhet el, és legfeljebb 120 (10×12) minta tesztelésére alkalmas (beleértve a kontrollokat és mintákat is). Minden mintacsoporthoz egy HBV/HCV/HIV-1 alacsony pozitív kontrollt, egy HBV/HCV/HIV-1 magas pozitív kontrollt és egy negatív kontrollt kell használni. Egy tesztfuttatásban legfeljebb 93 minta és 3 kontroll megengedett. A teszteljárást részletes ismertetését a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HIV-1-hez” tartalmazza. A(z) 1. ábra összefoglalja az eljárást. Megjegyzés: A reagensek optimális felhasználása érdekében a generikus minta-el készítési reagenseket összesen 1–21 mintát tartalmazó futtatáshoz lehet használni (10 × 24-es tesztkészlet-méret) vagy összesen 1–93 mintához (10 × 96-os tesztkészlet-méret). A cobas® 4800 rendszer mosófolyadék-készlet, a cobas® 4800 rendszer minta-el készít készlet 2 és a cobas® 4800 rendszer líziskészlet 2 különböz méretei azonban nem kombinálhatók. Ha például a futtatás kezdetén a 96-tesztes mosópuffer reagensüvegét olvassa be, a többi minta-el készítési reagenskészletb l is 96 teszthez való reagenseket használjon.

Munkafolyamat A cobas® HIV-1 teszt kivitelezése a cobas® 4800 szoftver teljes munkafolyamatának használatával történik. Ez minta-el készítési lépésb l áll a cobas x 480 készüléken, amit amplifikálási/kimutatási lépés követ a cobas z 480 analizátoron. A futtatás lehet csak HIV-1 vagy vegyes mintacsoport olyan tesztekkel, amelyek ugyanazt az automatizált mintaextrahálási eljárást és PCR-profilt igénylik az amplifikáláshoz és kimutatáshoz. A szoftver tesztkiválasztó lépésében megjelennek azok a tesztek, amelyek alkalmasak a cobas® HIV-1 teszttel együtt történ futtatásra. A részleteket a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HIV-1-hez” cím kiadványban találja. 1. Végezze el a rendszer indítását és karbantartását a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HIV-1hez” cím kiadvány „A készülék karbantartása” cím részében leírtak szerint. 2. Készítse ki az összes szükséges reagenst és fogyóeszközt. A HIV-1 MMX R2 és MMX R1 kivételével a cobas x 480 készülékbe történ betöltés el tt minden reagensnek szoba-h mérséklet nek kell lennie. A HIV-1 MMX R2 és MMX R1 reagenst a 2–8 °C-os tárolásból közvetlenül is kiveheti, mert a folyamatban való felhasználásuk el tt a cobas x 480 készülékben töltött id alatt felveszik a szobah mérsékletet. Megjegyzés: Minden reagens és reagenstároló vonalkóddal van ellátva, és egyszeri használatra tervezve. A cobas® 4800 szoftver nyomon követi a reagensek és reagenstárolók felhasználását, és nem fogadja el a korábban már használt reagenseket és reagenstárolókat. 3. Indítson új futtatást, és válassza a HIV-1 munkafolyamat-típust. Háromféleképpen hozhat létre munkasorrendet: A mintaszerkeszt használatával, miel tt a mintaállványt a cobas x 480 készülékbe helyezi („Editor” gomb a f menü jobb oldalán). A munkasorrendeket szükség szerint mentheti, szerkesztheti és újratöltheti.

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

18

®

cobas HIV-1

A szoftvervarázsló új futtatáshoz történ használatával. Ebben az esetben a mintákat akkor tölti be a cobas x 480 készülékbe, amikor a varázsló erre felszólítja. A rendszer automatikusan beolvassa a minták vonalkódjait, és minden mintához meg kell határozni a kért eredményeket. Az intézmény LIS rendszerének használatával. A további részleteket a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HIV-1-hez” cím kiadványban találja. A kért eredmények kiválasztásakor jelölje be a „HIV-1” lehet séget. 4. Töltse be a mintákat, és határozzon meg vagy válasszon egy munkasorrendet, illetve használja a LIS-t. A minimális mintatérfogat a cs típusától és méretét l függ. A további részleteket a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HIV-1-hez” cím kiadványban találja. 5. Kövesse a szoftvervarázsló utasításait, és töltse be a fogyóeszközöket. Ne töltsön be vagy távolítson el külön hegyeket részben használt hegyállványra vagy hegyállványról, mivel a szoftver nyomon követi a fennmaradó hegyek számát. Ha nincs elég hegy az adott futtatáshoz, a szoftver figyelmezteti a felhasználót. 6. Töltse be a minta-el készítési reagenseket a vonalkóddal ellátott reagenstárolókba. A reagenstárolók két méretben állnak rendelkezésre: 200 ml és 50 ml. Kövesse a szoftvervarázslót a reagenstárolók megfelel méretének kiválasztásához. A reagenstároló vonalkódja a hordozó jobb oldala felé kell, hogy nézzen. „Beolvas-beolvas-beönt-behelyez” módszerrel töltse be a minta-el készítési reagenseket: Olvassa be a reagensüveg vonalkódját. Olvassa be a reagenstároló vonalkódját. Öntse be a reagenst a tárolóba. Helyezze be a feltöltött reagenstárolót a reagenshordozó megfelel pozíciójába. Megjegyzés: A cobas® 4800 rendszer bels órával méri a reagensek készülékben töltött idejét. A LYS 2 vagy WB reagens beolvasásától számítva 1 óra áll rendelkezésre a betöltési eljárás elvégzésére és a „Start” gomb megnyomására. A „Workplace” lapon visszaszámláló jelenik meg. A rendszer a bels id korlát letelte után nem engedi a futtatás indítását. Megjegyzés: Az MGP pontos átvitelének érdekében közvetlenül a reagenstárolóba mérés el tt vortexelje vagy alaposan rázza fel az MGP-reagenscsövet. 7. Töltse be az amplifikálási/kimutatási reagenscsöveket (HIV-1 MMX R2, MMX R1 és RNA QS), a kontrollcsöveket [HBV/HCV/HIV-1 L(+)C, HBV/HCV/HIV-1 H(+)C és (–) C] és a generikus reagenscsöveket (P2 és SD2, szükség szerint) közvetlenül a reagenshordozóba. A futtatás felesleges megszakítása és a szennyez dés megel zése érdekében pöccintse meg a reagenscsöveket, hogy ne képz djenek buborékok vagy folyadékfilmek, és a pozitív kontrollok kezelése után váltson keszty t. 8. A sikeres minta-el készítési futtatás után m köd képes lesz a „Sample Preparation results” (mintael készítés eredményei) és az „Unload” (eltávolítás) gomb. Ha kívánja, a „Sample Preparation results” gomb kiválasztásával áttekintheti az eredményeket, majd válassza ki az „Unload” gombot a lemezhordozók eltávolításához. Az eredmények áttekintése nélkül is eltávolíthatja a lemezhordozót, ha kiválasztja az „Unload” gombot. További információkat a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HIV-1-hez” cím kiadványban talál. 9. Kislyukú lemez lezárása és a lemez cobas z 480 analizátorba vitele, valamint az amplifikálási és kimutatási futtatás indítása során kövesse a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HIV-1-hez” cím kiadvány utasításait.

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

19

®

cobas HIV-1

Megjegyzés: A cobas® 4800 rendszer bels órával méri az el készített minták aktivált Master Mix reagenshez adása óta eltelt id t. Az amplifikálást és kimutatást minél hamarabb, de nem kés bb mint 40 perccel a cobas x 480 készülék futásának befejezése után meg kell kezdeni. A „Workplace” lapon visszaszámláló jelenik meg. A rendszer a visszaszámláló lejárta után megszakítja a futtatást. 10. Miután egy amplifikálási és detektálási futás befejez dött, távolítsa el a kislyukú lemezt a cobas z 480 analizátorból. 11. Az eredmények áttekintése és elfogadása során kövesse a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HIV-1-hez” cím kiadvány utasításait.

Eredmények A cobas® 4800 rendszer automatikusan meghatározza a minták és kontrollok HIV-1 RNS koncentrációját. A HIV-1 RNS koncentráció mértékegysége a milliliterenkénti kópia (cp/ml) vagy a a milliliterenkénti nemzetközi egység (IU/ml). A cobas® HIV-1 teszt váltószáma 0,6 cp/IU.

Min ségellen rzés és az eredmények érvényessége Minden feldolgozott mintacsoportba tartozik egy negatív kontroll (–) C és két pozitív kontroll, egy alacsony pozitív kontroll HBV/HCV/HIV-1 L(+)C és egy magas pozitív kontroll HBV/HCV/HIV-1 H(+)C. A cobas® 4800 szoftverben és/vagy jelentésben ellen rizze, hogy a csoport érvényes-e. A cobas® 4800 automatikusan érvényteleníti az eredményeket a negatív és pozitív kontrollok helytelen jelz i alapján.

Kontrolljelz k 1. táblázat:

A negatív és pozitív kontrollok kontrolljelz i

Negatív kontroll

Jelz azonosítója

Eredmény

Magyarázat

(–) C

R4803, R4804 (A kontrollcsoport sikertelen)

Invalid

Érvénytelen eredmény, vagy a negatív kontroll számított titereredménye nem negatív.

Pozitív kontroll

Jelz azonosítója

Eredmény

Magyarázat

HBV/HCV/HIV-1 L(+)C

R4803, R4804 (A kontrollcsoport sikertelen)

Invalid

Érvénytelen eredmény vagy az alacsony pozitív kontroll számított titer eredménye nem esik a megadott tartományba.

HBV/HCV/HIV-1 H(+)C

R4803, R4804 (A kontrollcsoport sikertelen)

Invalid

Érvénytelen eredmény vagy a magas pozitív kontroll számított titer eredménye nem esik a megadott tartományba.

Ha a mintacsoport érvénytelen, ismételje meg az egész csoport (mind a minták, mind a kontrollok) tesztelését.

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

20

®

cobas HIV-1

Az eredmények értelmezése Megjegyzés: Minden vizsgálat és mintacsoport érvényességét a cobas® 4800 szoftver határozza meg. Megjegyzés: Egy érvényes csoport érvényes és érvénytelen mintaeredményeket is tartalmazhat. A szoftver az érvényes csoporthoz a minták eredményeit a 2. táblázat szerint értelmezi. 2. táblázat:

Az egyes céleredmények értelmezése ®

cobas HIV-1 Target Not Detected

< Titer Min

Titer

> Titer Maxa

Eredményjelentés és -értékelés Nincs kimutatott HIV RNS. Az eredmény a jelentésben „HIV not detected” (nincs kimutatható HIV). A számított titer a vizsgálat alsó mennyiségi meghatározási határa (LLoQ) alatt van. Az eredmény a jelentésben „HIV detected, less than (Titer Min)” (a kimutatott HIV titere nem éri el a minimális értéket). Titer min = 2,00E+01 cp/ml és 3,33E+01 IU/ml (400 µl) Titer min = 6,00E+01 cp/ml és 1,00E+02 IU/ml (200 µl) A számított titer a teszt lineáris tartományába esik: legalább Titer Min, és legfeljebb Titer Max. Az eredmény a jelentésben: „(Titer) of HIV-1 detected” (adott titer HIV-1 mutatható ki). A számított titer a vizsgálat fels mennyiségi meghatározási határa (ULoQ) fölött van. Az eredmény a jelentésben „HIV detected, greater than (Titer Max)” (a kimutatott HIV titere meghaladja a maximális értéket). Titer max = 1,00E+07 cp/ml és 1,67E+07 IU/ml (400 µl és 200 µl)

a

A „minta eredménye > Titer Max” olyan kimutatott HIV-1-pozitív titert jelent, ami meghaladja a fels mennyiségi meghatározási határt (ULoQ). Ha mennyiségi eredményre van szükség, hígítsa az eredeti mintát HIV-1-negatív EDTA-s plazmával, és tesztelje újra. Szorozza meg a mért eredményt a hígítási faktorral.

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

21

®

cobas HIV-1

Az eljárással kapcsolatos korlátozások 1. A cobas® HIV tesztet csak a cobas® HBV/HCV/HIV-1 kontrollkészlettel, cobas® 4800 rendszer mintael készít készlet 2, cobas® 4800 rendszer líziskészlet 2, cobas® 4800 rendszer mosófolyadék-készlet és cobas® 4800 rendszer mintaoldószer 2 oldatokkal együtt használva vizsgálták. 2. A megbízható eredmény a megfelel mintalevételen, szállításon, tároláson és feldolgozáson múlik. Kövesse a jelen használati útmutatóban és a megfelel „cobas® 4800 rendszer kézikönyve a cobas® HIV-1-hez” cím kiadványban leírt eljárásokat. 3. Ezt a tesztet csak EDTA-s plazmával való használatra validálták. Más típusú minták tesztelése pontatlan eredménnyel járhat. 4. A HIV-1 RNS mennyiségi meghatározása a mintában jelenlév víruspartikulumoktól függ, ezért befolyásolhatják a mintavételi módszerek, betegfaktorok (azaz kor, tünetek megléte) és/vagy a fert zés stádiuma. 5. Ritkán bár, de el fordulhat, hogy a cobas® HIV-1 primerei és/vagy próbái által lefedett virális genom nagy fokban konzervált régióiban lév mutációk következtében a vírusmennyiség kevesebbnek adódik, vagy a vírus kimutatása sikertelen lesz. 6. A vizsgálat prediktív értéke a betegség el fordulási arányától függ az adott populációban. 7. Az AmpErase enzim hozzáadása a cobas® HIV-1 Master Mixhez lehet vé teszi a targetnukleinsav szelektív amplifikálását, ugyanakkor a reagensek és amplifikálási keverékek szennyez désének elkerüléséhez a helyes laboratóriumi gyakorlat és ezen használati utasításban meghatározott eljárások gondos betartása szükséges. 8. A terméket csak a PCR-technikák alkalmazására és a cobas® 4800 rendszer használatára kiképzett dolgozók használhatják. 9. Csak a cobas x 480 készüléket és a cobas z 480 analizátort validálták a termékkel való használatra. A termékkel nem használható más minta-el készít készülék vagy PCR rendszer. 10. A technológiák különböz sége miatt javasolt, hogy az egyik technológiáról a másikra való áttéréskor a felhasználók végezzenek korrelációs laboratóriumi vizsgálatokat, hogy a technológiák közötti különbség min síthet legyen. A felhasználóknak a helyi specifikus irányelveket/eljárásokat kell követniük. 11. A keresztszennyez dés álpozitív eredményeket okozhat. A cobas® HIV-1 tesztnél a minták közötti keresztszennyez dés arányát egy nem klinikai vizsgálatban 0,0%-osnak találták. Nem figyeltek meg futtatások közötti keresztszennyez dést. 12. A cobas® HIV-1 tesztnek nem célja a HIV-1 vérben vagy vértermékekben való sz rése.

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

22

®

cobas HIV-1

A nem klinikai teljesítmény értékelése A fontosabb teljesítményjellemz k Kimutatási határ (LoD) WHO Nemzetközi standard A cobas® HIV-1 kimutatási határát az NIBSC-t l származó WHO HIV-1 RNS nemzetközi standard szerinti (WHO International Standard for HIV-1 RNA for Nucleic Acid Amplification Technology Assays – 2. WHO nemzetközi standard), M csoport, B altípus sorozathígításának elemzésével állapították meg, amelyet HIV-negatív EDTA-s plazmában vizsgáltak 400 µl-es és 200 µl-es mintafeldolgozási térfogattal. Hat koncentrációszintb l és egy negatív kontrollból álló paneleket teszteltek a cobas® HIV-1 reagensek három gyártási tételével, több futtatásban, napon, kezel vel és készüléken. A 3. táblázat és a 4. táblázat a két mintafeldolgozási térfogat EDTA-s plazmaeredményeit tartalmazza. A vizsgálat eredménye szerint a cobas® HIV-1 a HIV-1 RNS-t 400 µl-es mintafeldolgozási térfogatnál 14,2 cp/ml (23,7 IU/ml) koncentrációban mutatta ki, 200 µl-es mintafeldolgozási térfogatnál pedig 43,9 cp/ml (73,4 IU/ml) koncentrációban 95%-os PROBIT találati aránnyal 3. táblázat : Kimutatási határ EDTA-s plazmában (400 µl) Bemeneti titer koncentrációja (HIV-1 RNS, cp/ml)

Bemeneti titer koncentrációja (HIV-1 RNS, IU/ml)

Érvényes ismétlések száma

Pozitívok száma

Találati arány

60,0

100,0

252

252

100,0%

30,0

50,0

251

251

100,0%

20,0

33,3

252

247

98,0%

10,0

16,7

252

227

90,1%

5,0

8,3

252

160

63,5%

2,0

3,3

252

86

34,1%

0,0

0,0

71

0

0,0%

LoD PROBIT szerinti 95% találati arány mellett

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

14,2 cp/ml; 95% konfidenciaintervallum: 12,5–16,6 cp/ml 23,7 IU/ml; 95% konfidenciaintervallum: 20,8-27,7 IU/ml

23

®

cobas HIV-1

4. táblázat:

Kimutatási határ EDTA-s plazmában (200 µl)

Bemeneti titer koncentrációja (HIV-1 RNS, cp/ml)

Bemeneti titer koncentrációja (HIV-1 RNS, IU/ml)

100,0

166,7

251

251

100,0%

60,0

100,0

251

249

99,2%

30,0

50,0

251

227

90,4%

15,0

25,0

250

172

68,8%

7,0

11,7

250

110

44,0%

3,5

5,8

250

83

33,2%

0,0

0,0

68

0

0,0%

LoD PROBIT szerinti 95% találati arány mellett

Érvényes ismétlések száma

Pozitívok száma

Találati arány

43,9 cp/ml; 95% konfidenciaintervallum: 37,7-52,7 cp/ml 73,4 IU/ml; 95% konfidenciaintervallum: 62,9-88,1 IU/ml

Lineáris tartomány A cobas® HIV-1 linearitását egy 12 tagú és egy 11 tagú panellal vizsgálták (400 µl-es, illetve 200 µl-es mintafeldolgozási térfogattal), ahol a predomináns HIV-1 (M csoport, B altípus) lefedte a teszt lineáris tartományát. A paneltagokat magas titer , HIV-1 RNS-re pozitív sejttenyészet felülúszó mintájából készítették. 400 µl-es mintafeldolgozási térfogatnál a cobas® HIV-1 lineáris volt a 20,0 cp/ml–1,00E+07 cp/ml (33,3 IU/ml– 1,67E+07 IU/ml) tartományban, és a maximális eltérés a jobban illeszked nemlineáris regressziótól kisebb volt, mint ± 0,07 log10 (lásd: 2. ábra). A lineáris tartományban a teszt pontossága ± 0,18 log10 értéken belül volt. 200 µl-es mintafeldolgozási térfogatnál a cobas® HIV-1 lineáris volt a 60,0 cp/ml–1,00E+07 cp/ml (100,0 IU/ml–1,67E+07 IU/ml) tartományban, és a maximális eltérés a jobban illeszked nemlineáris regressziótól kisebb volt, mint ± 0,08 log10 (lásd: 3. ábra). A lineáris tartományban a teszt pontossága ± 0,19 log10 értéken belül volt.

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

24

®

cobas HIV-1

Megfigyelt logaritmikus titer [koncentrációegység]

2. ábra:

A lineáris tartomány meghatározása EDTA-s plazmában (400 µl) Megfigyelések Az adott tartományban Regressziós egyenes Az eltérés fels határa Az eltérés alsó határa

Megadott logaritmikus titer [koncentrációegység]

Megfigyelt logaritmikus titer [koncentrációegység]

3. ábra:

A lineáris tartomány meghatározása EDTA-s plazmában (200 µl) Megfigyelések Az adott tartományban Regressziós egyenes Négyzetes modell Az eltérés fels határa Az eltérés alsó határa

Megadott logaritmikus titer [koncentrációegység]

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

25

®

cobas HIV-1

Pontosság – laboratóriumon belül A cobas® HIV-1 pontosságát egy magas HIV-1-pozitív minta (M csoport, B altípus, tenyésztett vírus) sorozathígításainak elemzésével határozták meg HIV-negatív EDTA-s plazmában. Hét hígítási szintet (400 µles mintafeldolgozási térfogat) és öt hígítási szintet (200 µl-es mintafeldolgozási térfogat) vizsgáltak szintenként és mintafeldolgozási térfogatonként 16 párhuzamosban a cobas® HIV-1 reagensek három gyártási tételével, három készüléken és négy kezel vel, 12 napon keresztül. Az eredményeket az 5. táblázat és a 6. táblázat tartalmazza. A cobas® HIV-1 kiváló pontosságot mutatott három reagens-gyártásitételnél, amelyeket a 60,0 cp/ml– 2,00E+07 cp/ml koncentrációtartományon vizsgáltak 400 µl-es mintafeldolgozási térfogatnál, és az 1,00E+04 cp/ml–2,00E+07 cp/ml tartományon 200 µl-es mintafeldolgozási térfogatnál. 5. táblázat:

®

A cobas HIV-1 laboratóriumi pontosságán belül (EDTA-s plazmaminták – 400 µl-es mintafeldolgozási térfogat)*

Névleges koncentráció (cp/ml) 2,0E+07 1,0E+06 1,0E+05 1,0E+04 1,0E+03 4,0E+02 6,0E+01

Megadott koncentráció (cp/ml) 1,54E+07 7,70E+05 7,70E+04 7,70E+03 7,70E+02 3,08E+02 7,70E+01

Forrásanyag Sejttenyészet Sejttenyészet Sejttenyészet Sejttenyészet Sejttenyészet Sejttenyészet Sejttenyészet

1. tétel SD 0,05 0,05 0,05 0,04 0,09 0,08 0,18

2. tétel SD 0,05 0,05 0,05 0,06 0,10 0,10 0,24

EDTA-s plazma 3. tétel Minden gyártási tétel SD Poolozott SD 0,04 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,07 0,06 0,07 0,09 0,09 0,09 0,15 0,19

* A titeradatokat logaritmikusan normál eloszlásúnak tekintették, és log10 transzformáció után elemezték. A szórás (standard deviation – SD) oszlopok a logaritmikusan transzformált titerek összesítését tartalmazzák mind a három reagenstételre. 6. táblázat:

®

A cobas HIV-1 laboratóriumi pontosságán belül (EDTA-s plazmaminták – 200 µl-es mintafeldolgozási térfogat)*

Névleges koncentráció (cp/ml) 2,0E+07 1,0E+07 1,0E+06 1,0E+05 1,0E+04

Megadott koncentráció (cp/ml) 1,54E+07 7,70E+06 7,70E+05 7,70E+04 7,70E+03

Forrásanyag Tenyésztett vírus Tenyésztett vírus Tenyésztett vírus Tenyésztett vírus Tenyésztett vírus

1. tétel SD 0,04 0,04 0,03 0,04 0,05

2. tétel SD 0,04 0,04 0,04 0,05 0,04

EDTA-s plazma 3. tétel Minden gyártási tétel SD Poolozott SD 0,04 0,04 0,04 0,04 0,05 0,04 0,03 0,04 0,04 0,04

* A titeradatokat logaritmikusan normál eloszlásúnak tekintették, és log10 transzformáció után elemezték. A szórás (standard deviation – SD) oszlopok a logaritmikusan transzformált titerek összesítését tartalmazzák mind a három reagenstételre.

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

26

®

cobas HIV-1

Csoport/altípus ellen rzése A cobas® HIV-1 teljesítményét az M HIV-1 csoport altípusai és az O és N csoportok kimutatására a következ kkel ellen rizték: • Az M csoport altípusaihoz, valamint az O és N csoportokhoz tartozó kimutatási határ ellen rzése • Az M csoport altípusaihoz, valamint és az O és N csoportokhoz tartozó linearitás ellen rzése • A titermeghatározást a cobas® HIV-1 teszttel végezték. Az M csoport altípusaihoz, valamint az O és N csoportokhoz tartozó kimutatási határ ellen rzése

Tenyésztett HIV-1 mintákat (M csoport, A, C, D, F, G, H, CRF01_AE, CRF02_AG), valamint HIV-1O-t és HIV-1N-t hígítottak EDTA-s plazmában a predomináns csoport, illetve altípus (HIV-1 M, B altípus) kimutatási határának megfelel koncentrációra a 95%-os találati arányú kimutatásihatár-elemzés szerint (20,0 cp/ml). A találati arány elemzését minden csoportra és altípusra 42 párhuzamosban végezték. Az eredmények alátámasztják, hogy a cobas® HIV-1 teszt HIV-et mutatott ki a HIV-1M (A, C, D, F, G, H, CRF01_AE, CRF02_AG), HIV-1 O és HIV-1N csoportoknál 20 cp/ml koncentráció esetén, és a fels egyoldali 95%-os konfidenciaintervallum nagyobb volt a várt 95%-os találati aránynál. 7. táblázat:

A HIV-1 M csoport altípusai és az O, illetve N csoportok kimutatási határának ellen rzése 400 µl EDTA-s plazmában

Csoport Altípus

M

Pozitív párhuzamosok száma

Tesztelt koncentráció: 20,0 cp/ml Találati arány (%) Érvényes ismétlések (fels egyoldali 95%-os CI) száma

A

39

42

92,86% (98,02%)

C

42

42

100% (100%)

D

41

42

97,62% (99,88%)

F

39

42

92,86% (98,02%)

G

38

42

90,48% (96,68%)

H

41

42

97,62% (99,88%)

CRF01_AE

40

42

95,24% (99,15%)

CRF02_AG

41

42

97,62% (99,88%)

O

39

42

92,86% (98,02%)

N

41

42

97,62% (99,88%)

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

27

®

cobas HIV-1

Az M csoport altípusaihoz, valamint az O és N csoportokhoz tartozó lineáris tartomány ellen rzése

A cobas® HIV-1 altípusok linearitási vizsgálatában használt hígítási sorozat hét paneltagból áll, amelyek lefedik a lineáris tartományt. A paneltagokat a megfelel csoport/altípus magas titer , HIV-1 RNS-re pozitív sejttenyészet felülúszó mintáiból készítették. A cobas® HIV-1 tesztelt lineáris tartománya az alsó mennyiségi meghatározási határtól (LLoQ, 20,0 cp/ml 400 µl-es mintafeldolgozási térfogatnál) a fels mennyiségi meghatározási határig (ULoQ, 1,0E+07 cp/ml) tartott, és legalább két orvosi döntési pontot tartalmazott. Szintenként tizenkét ismétlést teszteltek EDTA-s plazmában. A cobas® HIV-1 lineáris tartományát az M csoport altípusaira, illetve az O és N csoportra vizsgálták. A lineáris regresszió és a jobban illeszked nemlineáris regresszió közötti maximális eltérés kisebb volt 0,12 log10-nél.

Specificitás A cobas® HIV-1 specificitását különböz donoroktól származó HIV-negatív EDTA-s plazmaminták elemzésével határozták meg. Hatszáztizennégy különböz EDTA-s plazmamintát teszteltek a cobas® HIV-1 reagensek három gyártási tételével. Valamennyi minta negatív eredményt adott HIV-1 RNS-re. A tesztpanelban a cobas® HIV-1 specificitása 100,0% volt [a 95%-os egyoldali konfidenciaintervallum (Clopper Pearson) alsó határa 99,5% volt]. Analitikai specificitás

A cobas® HIV-1 analitikai specificitását egy kórokozópanel (8. táblázat) hígításával vizsgálták HIV RNS-pozitív és HIV RNS-negatív EDTA-s plazmával. A kórokozókat negatív EDTA-s plazmához adták, és HIV RNS-sel, illetve nélküle tesztelték. A nem HIV kórokozók egyike sem zavarta a teszt teljesítményét. Minden HIV-1-target nélküli kórokozómintára negatív eredményt kaptak a cobas® HIV-1 teszttel, és minden HIV-1-targetet tartalmazó kórokozómintára pozitív lett az eredmény. Ezen felül a potenciálisan keresztreagáló organizmusokat tartalmazó pozitív HIV-1-minták mindegyikének az átlagos log10 titer értéke ± 0,32 log10 eltérésen belül volt az adott pozitívre oltott minta átlagos log10 titeréhez képest. 8. táblázat:

Keresztreaktivitásra vizsgált kórokozók Vírusok

Adenovírus 5-ös típus

1-es és 2-es típusú herpes

Baktériumok

Sarjadzógomba

Propionibacterium acnes

Candida albicans

simplex vírus Cytomegalovírus

Humán papillomavírus

1-es, 2-es, 3-as, 4-es típusú dengue vírus

Influenzavírus A

Epstein-Barr vírus

Murray Valley encephalitis vírus

FSME vírus (HYPR törzs)

St. Louis encephalitis vírus

Hepatitis A vírus

Varicella-zoster vírus

Hepatitis B vírus

West Nile vírus

Hepatitis C vírus

Sárgalázvírus

1-es és 2-es típusú humán T-sejtes

Zika vírus

Staphylococcus aureus

lymphotrop vírus 6-os típusú humán herpeszvírus

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

28

®

cobas HIV-1

Analitikai specificitás – zavaró anyagok

Magas triglicerid (27,9–29,0 g/l), konjugált bilirubin (0,18–0,22 g/l), nem konjugált bilirubin (0,19–0,2 g/l), albumin- (57,8–60,6 g/l), hemoglobin (1,8–2,3 g/l) és humán DNS (2 mg/l) tartalmú mintákat teszteltek HIV RNS jelenlétében, illetve hiányában. A vizsgált anyagok nem mutattak zavaró hatást a cobas® HIV-1 teszt teljesítményével. Ezen felül a szisztémás lupus erythematosus (SLE) és rheumatoid arthritis (RA) autoimmun betegségek markerei, illetve az antinukleáris antitest (ANA) jelenlétét is vizsgálták. A 9. táblázatban felsorolt gyógyszervegyületeket is vizsgálták a Cmax háromszorosánál, HIV RNS jelenlétében, illetve hiányában. A vizsgálat minden potenciálisan zavaró anyagról kimutatta, hogy nincs hatással a teszt teljesítményére. A cobas® HIV-1 teszttel minden HIV-target nélküli mintára negatív eredményt kaptak, és minden HIV-1targetet tartalmazó mintára pozitív lett az eredmény. Ezen felül a potenciálisan zavaró anyagokat tartalmazó pozitív HIV-1-minták mindegyikének az átlagos log10 titer értéke ± 0,20 log10 eltérésen belül volt az adott pozitívre oltott minta átlagos log10 titeréhez képest. 9. táblázat:

®

A cobas HIV-1 teszt HIV RNS mennyiségi meghatározását esetlegesen zavaró gyógyszervegyületek vizsgálata

Gyógyszerosztály

Gyógyszer generikus neve

Immunmodulátorok

Peginterferon -2a

HIV entry inhibitor

Peginterferon -2b Maraviroc

HIV-integráz inhibitorok

Elvitegravir/kobicisztát

Raltegravir

Non-nukleozid HIV reverz transzkriptáz inhibitorok

Efavirenz

Nevirapin

Etravirin

Rilpivirin

HIV-proteáz inhibitorok

Atazanavir

Nelfinavir

Darunavir

Ritonavir

Fosamprenavir

Saquinavir

Lopinavir

Tipranavir

Boceprevir

Telaprevir

HCV-proteáz inhibitorok

Ribavirin

Simeprevir Reverz transzkriptáz vagy DNSpolimeráz inhibitorok

Opportunista fert zések kezelésére szolgáló vegyületek

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

Abacavir

Ganciclovir

Aciclovir

Lamivudin

Adefovir dipivoxil

Sofosbuvir

Cidofovir

Telbivudin

Emtricitabin

Tenofovir

Entecavir

Valganciclovir

Foscarnet

Zidovudin

Azitromicin

Pyrazinamid

Klaritromicin

Rifabutin

Etambutol

Rifampicin

Flukonazol

Sulfamethoxazol

Isoniazid

Trimethoprim

29

®

cobas HIV-1

Módszerkorreláció ®

®

®

®

A cobas HIV-1 teljesítményének értékelése a COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 teszt 2.0-ás változatával összevetve

A cobas® HIV-1 tesztet és a COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HIV-1 teszt 2.0-ás változatát (TaqMan® HIV-1 teszt, v2.0) HIV-1-fert zött betegek 243 EDTA-s plazmamintájának összehasonlításával végezték. A HIV-1 mintákat (M csoport, A–D, F–H, F/B, CRF01_AE, CRF02_AG, valamint HIV-1O) küls helyszínen, két-két párhuzamos mintával tesztelték. A Deming-regressziós analízist logaritmikusan transzformált titerekkel végezték. A Deming-regressziós analízis eredményeit a 4. ábra tartalmazza. Az ábrákon a * jel az egyéni meghatározást jelenti. A szín az altípust jelöli. 4. ábra:

®

®

A cobas HIV-1 teszt és a TaqMan HIV-1 teszt 2.0-ás verziójának regressziós analízise EDTA-s plazmamintákban Szubtípus

Átlagos log10 titer, cobas® HIV-1

y = 1,06x + 0,05 2 R = 0,98

Átlagos log10 titer, COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HIV-1 teszt, 2.0 verzió

Teljes rendszerhiba A cobas® HIV-1 teljes rendszerhiba-arányát a HIV-1 M csoportú és B altípusú targetjével oltott EDTA-s plazma 100 párhuzamosával határozták meg. Ezeket a mintákat körülbelül 3 × kimutatási határ célkoncentrációnál vizsgálták. A vizsgálat eredményei szerint az összes párhuzamos érvényes és a HIV-1 targetre pozitív volt, vagyis a teljes rendszerhiba aránya 0,0% volt. A kétoldalú 95%-os pontos konfidenciaintervallum 0,0% volt az alsó határra, és 3,6% a fels határra [0%: 3,6%].

Keresztszennyez dés A cobas® HIV-1 keresztszennyez dési arányát HIV-negatív EDTA-s plazmaminták 230 párhuzamosával és egy magas titer (1,9E+07 cp/ml) HIV-1-minta 235 párhuzamosával határozták meg. Összesen öt futtatást végeztek pozitív és negatív mintákkal, sakktáblaszer konfigurációban. A negatív minták mind a 230 párhuzamosa negatív volt, vagyis a keresztszennyez dési arány 0,0% volt egyoldali, fels , 1,3%-os 95%-os konfidenciaintervallummal. 07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

30

®

cobas HIV-1

További információk A teszt legfontosabb tulajdonságai Minta típusa

Mintafeldolgozási térfogat

EDTA-s plazma ® ® További információkat a „cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HIV-1hez” cím kiadványban talál. 400 µl vagy 200 µl

Analitikai érzékenység

14,2 cp/ml (400 µl)

Minimálisan szükséges mintamennyiség

43,9 cp/ml (200 µl) Lineáris tartomány

400 µl: 20,0 cp/ml–1,0E+07 cp/ml 200 µl: 60,0 cp/ml–1,0E+07 cp/ml

Specificitás

100% (egyoldalú 95%-os konfidenciaintervallum: 99,5%)

Kimutatott genotípusok

HIV-1M (A–D, F–H, CRF01_AE, CRF02_AG), HIV-1O, HIV-1N

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

31

®

cobas HIV-1

Szimbólumok A következ szimbólumok használatosak a Roche PCR diagnosztikai termékek jelölésére. 10. táblázat: A Roche PCR diagnosztikai termékek címkéjén használt szimbólumok

Segédszoftver

In vitro diagnosztikai felhasználásra

Meghatalmazott képvisel az Európai Közösségben

Megadott tartomány alsó határa

Vonalkód adatlap

Gyártó

Lotszám

Sötétben tárolandó

Biológiai veszély

Tartalma vizsgálathoz elegend

Katalógusszám

Tárolási h mérséklet

Olvassa el a használati útmutatót

Vizsgálatdefiníciós fájl

A csomag tartalma

Megadott tartomány fels határa

Forgalmazó

Lejárat dátuma

Csak IVD teljesítmény értékelésre

Globális kereskedelmi cikkszám

Ez a termék eleget tesz az in vitro diagnosztikai orvostechnikai eszközökr l szóló 98/79 EK irányelv el írásainak.

Felhasználói technikai segítségnyújtás az Egyesült Államokban 1-800-526-1247

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

32

®

cobas HIV-1

Gyártó és forgalmazók 11. táblázat: Gyártó és forgalmazók

Készült az Amerikai Egyesült Államokban Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 68305 Mannheim, Germany www.roche.com Roche Diagnostics (Schweiz) AG Industriestrasse 7 6343 Rotkreuz, Switzerland Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 68305 Mannheim, Germany Roche Diagnostics, SL Avda. Generalitat, 171-173 E-08174 Sant Cugat del Vallès Barcelona, Spain Roche Diagnostica Brasil Ltda. Av. Engenheiro Billings, 1729 Jaguaré, Building 10 05321-010 São Paulo, SP Brazil

Roche Diagnostics 201, Boulevard Armand-Frappier H7V 4A2 Laval, Québec, Canada (For Technical Assistance call: Pour toute assistance technique, appeler le: 1-877-273-3433) Roche Diagnostics 2, Avenue du Vercors 38240 Meylan, France Distributore in Italia: Roche Diagnostics S.p.A. Viale G. B. Stucchi 110 20052 Monza, Milano, Italy Distribuidor em Portugal: Roche Sistemas de Diagnósticos Lda. Estrada Nacional, 249-1 2720-413 Amadora, Portugal

Védjegyek és szabadalmak Lásd: http://www.roche-diagnostics.us/patents

Szerz i jog ©2016 Roche Molecular Systems, Inc.

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

33

®

cobas HIV-1

Hivatkozások 1. Mellors JW, Munoz A, Giorgi JV, et al. Plasma viral load and CD4+ lymphocytes as prognostic markers of HIV-1 infection. Ann Intern Med. 1997;126(12):946-954. 2. Mellors JW, Margolick JB, Phair JP, et al. Prognostic value of HIV-1 RNA, CD4 cell count, and CD4 Cell count slope for progression to AIDS and death in untreated HIV-1 infection. JAMA. 2007;297(21):23492350. 3. Guidelines for the use of antiviral agents in HIV-1-infected adults and adolescents. Department of Health and Human Services (DHHS); 2015. 4. Cohen MS, Chen YQ, McCauley M, et al. Prevention of HIV-1 infection with early antiretroviral therapy. N Engl J Med. 2011;365(6):493-505. 5. Phillips AN, Pillay D, Garnett G, et al. Effect on transmission of HIV-1 resistance of timing of implementation of viral load monitoring to determine switches from first to second-line antiretroviral regimens in resource-limited settings. AIDS. 2011;25(6):843-850. 6. Sigaloff KC, Hamers RL, Wallis CL, et al. Unnecessary antiretroviral treatment switches and accumulation of HIV resistance mutations; two arguments for viral load monitoring in Africa. J Acquir Immune Defic Syndr. 2011;58(1):23-31. 7. European AIDS Clinical Society 2013 Guidelines. http://www.eacsociety.org/Guidelines.aspx. 8. Consolidated guidelines on the use of antiretroviral drugs for treating and preventing HIV infection – Recommendations for a public health approach. World Health Organization HIV/AIDS Programme, Geneva. June 2013. 9. Günthard HF, Aberg JA, Eron JJ, et al.; Antiretroviral treatment of adult HIV infection: 2014 recommendations of the International Antiviral Society – USA panel. JAMA. 2014;312:410-25. 10. Do T, Duncan J, Butcher A, Liegler T. Comparative frequencies of HIV low-level viremia between real-time viral load assays at clinically relevant thresholds. J Clin Virol. 2011;52 Suppl 1:S83-S89. 11. Paba P, Fabeni L, Ciccozzi M, Perno CF, Ciotti M. Performance evaluation of the COBAS/TaqMan HIV-1 v2.0 in HIV-1 positive patients with low viral load: a comparative study. J Virol Methods. 2011;173(2):399402. 12. Longo MC, Berninger MS, Hartley JL. Use of uracil DNA glycosylase to control carry-over contamination in polymerase chain reactions. Gene. 1990;93:125-128. 13. Savva R, McAuley-Hecht K, Brown T, Pearl L. The structural basis of specific base-excision repair by uracil-DNA glycosylase. Nature. 1995;373:487-493. 14. Mol CD, Arvai AS, Slupphaug G, et al. Crystal structure and mutational analysis of human uracil-DNA glycosylase: structural basis for specificity and catalysis. Cell. 1995;80:869-878. 15. Higuchi R, Dollinger G, Walsh PS, Griffith R. Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences. Biotechnology (NY). 1992;10:413-417. 16. Heid CA, Stevens J, Livak JK, Williams PM. Real time quantitative PCR. Genome Res. 1996;6:986-994. 17. Center for Disease Control and Prevention. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, 5th ed. U.S. Department of Health and Human Services, Public Health Service, Centers for Disease Control and Prevention, National Institutes of Health HHS Publication No. (CDC) 21-1112, revised December 2009. 18. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections. Approved Guideline-Fourth Edition. CLSI Document M29-A4:Wayne, PA;CLSI, 2014. 07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

34

®

cobas HIV-1

Dokumentumverzió Dokumentum verzióinformációi Doc Rev. 2.0 11/2016

07529708001-02HU Doc. Rev. 2.0

Frisstett megjegyzés a Szükséges, de nem biztosított eszközök és szoftverek táblázathoz. Új keverési lépés a Minták levétele, szállítása és tárolása részben. A Roche www.roche.com webcímének hozzáadása. Esetleges kérdésével forduljon a Roche helyi képvisel jéhez.

35