Mikroteknik (Mikroskop, Jenis Mikrotom dan Reagen)
Gamaliel Septian Airlanda, M.Pd
Mikrotom Mikrotom adalah sebuah alat yang digunakan untuk memotong secara tipis sebuah jaringan hewan/tumbuhan. Microtome is the instrument which is used to cut thin section of tissue. Microtome are machines that will advance an object for a predetermined distance then slide the object to the cutting tool.
Jenis-jenis Mikrotom Ada beberapa tipe mikrotom yang dibuat atau di desain berdasarkan tujuan tertentu dan memiliki fungsi sesifik. Beberapa mikrotom ini diberi nama sesuai dengan cara penggunaannya, yaitu: 1. Rotary microtome
2. Rocking microtome 3. Rotary rocking microtome 4. Base sledge microtome
5. Sliding microtome 6. Freezing microtome
Tipe-tipe Pisau pada Microtome berdasarkan kemiringannya 1. Planar Concave Sangat tajam tetapi dapat menghasilkan potongan sampel yang sangat lembut dan tipis. 2. Wedge Profile Knives Bentuknya lebih seimbang dan digunakan untuk memotong sampel yang cukup keras 3. Chisel Profile memiliki bentuk mata pisau yang tumpul namun memiliki kestabilan bentuk potongan. Pisau ini menghasilkan potongan dengan ukuran relatif besar
Tipe-tipe Pisau pada Microtome berdasarkan bahan dasarnya 1. Glass Microtome Blades digunakan untuk memotong sampel yang akan diamati dibawah mikroskop cahaya 2. Diamond Blades i. Industrial grade blades digunakan untuk memotong sampel yang sangat keras seperti gigi dan tulang. ii. Gem quality blades digunakan untuk sampel yang khusus diamati dibawah mikroskop elektron
Rotary Microtome Mikrotom yang digunakan untuk memotong sampel yang akan terlihat dibawah mikroskop cahaya. Biasanya dioperasikan secara manual dengan memutar handel hingga mendekati mata pisau. Rotary microtome dapat memotong sampel yang keras (biasanya sampel jaringan dilapisi parafin). Ketebalan yang dihasilkan antara 0,5 m hingga 60 m
Bagian-bagian Rotary Microtome 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.
Block holder Knife clamps screws Knife clamps Block adjustment Thickness gauge Angle of tilt adjustment Operating handle Internal and external lock
Karakteristik Rotary Microtome Disebut dengan nama The rotary microtome karena penggunaannya dengan cara diputar Mikrotom jenis ini adalah yang paling sering digunakan dalam berbagai penelitian dasar Pergerakan pisau pemotong secara vertikal Biasanya menggunakan tipe wedge knife Tingkat ketebalan ditentukan oleh micrometer screws Mikrotom jenis ini membutuhkan bantuan parafin sebagai pelapis sampel agar tidak rusak pada saat dipotong.
Keuntungan Menggunakan Rotary Microtome Tidak lebih berat daripada rocking microtome Tidak ada gelombang yang terjadi pada hasil potongan Dapat digunakan untuk memotong jaringan yang cukup keras Sudut kemiringan pisau dapat disesuaikan Pisau mudah dipindahkan atau diatur The ability to cope with very hard tissues , together with cutting good accurate section at 3mm gives the flexibility that is now required. Electrically driven microtome can be used when the necessary to produce ribbons for serial reactions required. This microtome are employed to their best advantage with resign embedded tissues. Manual or electrically driven rotary microtome are successfully used in cryostats.
Rocking Microtome • Tipe mikrotom yang paling tua • Namanya didasarkan dari cara penggunaan handel mikrotom secara mengayun (rocking action of the handle) • Metode pemotongan menghasilkan bagian dari permukaan sedikit silinder • Efektif untuk memproduksi serangkaian berkualitas baik 6-20 mikron • Mikrotom ini tidak dapat memotong sampel yang keras seperti kayu atau tulang
• Menggunakan pisau biconcave yaang sangat tajam namun juga mudah tumpul
Bagian-bagian Rocking Microtome
Kelemahan Ukuran sampel yang dilapisi blok parafin terbatas (kecil) Mikrotom ini cenderung menghasilkan gelombang pada hasil pita (potongan). Sudut kemiringan pisau tidak dapat diatur Bentuk pita hasil potongan menyerupai busur
Sledge Microtome Merupakan mikrotom yang digunakan untuk memotong sampel yang lebar dan dapat digunakan untuk sampel kasar seperti kayu dan tulang. Digunakan untuk memotong blok parafin yang besar seperti sampel: bola mata, otak, paru-paru dan jaringan yang keras Mikrotom ini ukurannya cukup besar dan berat Jenis pisau yang digunakan adalah wedge atau planar Ketebalan potongan dapat diatur melalui micrometer yang ada di bagian bawah
Cara Menggunakan 1. Mengatur ketebalan potongan dengan micormeter yang ada di bagian bawah
2. Meletakkan sampel / blok parafin
Cara Menggunakan 3. Mengatur letak pisau dan memastikan holder pada pisau telah diputar
4. Mulai memotong sampel dengan memaju mundurkan pisau
Ultra Microtome Ultra mikrotom adalah alat yang digunakan untuk memotong sampel dengan metode ultramicrotomy. Metode ini adalah cara memotong yang sangat tipis dan disiapkan untuk pengamatan pada mikroskop elektron. Ketebalan blok parafin yang dapat digunakan tidak lebih dari 0,7 mm.
Jenis pisau yang digunakan adalah diamond knives
FREEZING MICROTOME Sering digunakan untuk penyayatan jaringan yang tidak ditanam dalam paraffin maupun dalam celloidin, jadi jaringan yang disayat adalah jaringan yang tidak di tanam tetapi dibekukan dengan memakai gas CO2. Keuntungan dari mikrotom ini adalah waktu yang dipakai lebih pendek, karena langsung disayat setelah proses fiksasi. Kerugiannya adalah bila temperature kamar tinggi, objek menjadi lunak sehingga sulit dipotong.
VIBRATING MICROTOME – Instrumen dengan silet bergetar untuk memotong jaringan. Pengguna dapat memanipulasi amplitudo getaran, kecepatan, dan sudut pisau. potongan jaringan tetap segar karena tertanam dalam agarose dengan suhu rendah.
Keuntungan – membran sel tidak patah atau rusak, sitosol tetap dalam sel.
– Dapat menjaga sel-sel hidup karena Jaringan mendapat oksigen di dalam media agar saat pemotongan.
