METODE CEPAT UNTUK KUANTIFIKASI RESERPIN DALAM OBAT DAN EKSTRAK Rauwolfia serpentina SECARA SPEKTROFOTOMETRI DERIVATIF ULTRAVIOLET
WORO DINA RACHMANTI
DEPARTEMEN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2006
ABSTRAK WORO DINA RACHMANTI. Metode Cepat untuk Kuantifikasi Reserpin dalam Obat dan Ekstrak Rauwolfia serpentina secara Spektrofotometri Derivatif Ultraviolet. Dibimbing oleh ELLY SURADIKUSUMAH dan LATIFAH KOSIM DARUSMAN. Reserpin merupakan salah satu komponen aktif utama yang terdapat dalam Rauwolfia serpentina dan banyak digunakan untuk obat antihipertensif. Metode cepat dan dapat dipercaya sangat dibutuhkan untuk mendukung pemeriksaan formula obat dan pengawasan mutu di industri farmasi. Spektrofotometri derivatif ultraviolet (SDUV) digunakan sebagai metode alternatif untuk menentukan kadar reserpin dalam akar R. serpentina dan tablet obat tanpa penambahan reagen pembentuk warna kemudian hasilnya dibandingkan dengan spektrofotometri konvensional sebagai metode rujukan. Metode SDUV dilakukan berdasarkan pengukuran amplitudo puncak spektrum dari garis dasar (Dz) pada turunan pertama di panjang gelombang 277.4 nm untuk tablet obat dan 312 nm untuk ekstrak akar. Hasil analisis secara SDUV untuk obat dan akar menunjukkan kadar reserpin berturut-turut sebesar 0.2202 mg per tablet dan 3.1122 mg per gram serbuk akar. Hasil analisis secara spektrofotometri konvensional untuk obat dan akar menunjukkan kadar reserpin berturut-turut sebesar 0.2289 mg per tablet dan 5.3741 mg per gram serbuk akar. Analisis statistika yang dilakukan dengan uji-t dan F menunjukkan kedua metode berbeda nyata pada limit kepercayaan 95% untuk analisis akar, sedangkan analisis obat menunjukkan hasil kedua metode tersebut tidak berbeda nyata. Validasi metode SDUV pada tablet obat dilakukan pada beberapa parameter. Metode SDUV menghasilkan koefisien korelasi (r) sebesar 0.9998 pada kisaran 10-50 mg/l, ketelitian sebesar 1.68% yang dinyatakan sebagai simpangan baku relatif, ketepatan perolehan kembali sebesar 60.34–94.61%, limit deteksi sebesar 1.1890 mg/l, dan limit kuantisasi 3.9634 mg/l.
ABSTRACT WORO DINA RACHMANTI. A Rapid Method for Quantification of Reserpin in Tablet and Rauwolfia serpentina Extract by Ultraviolet Derivative Spectrophotometry. Supervised by ELLY SURADIKUSUMAH and LATIFAH KOSIM DARUSMAN. Reserpine is one of major active compounds in Rauwolfia serpentina and is widely used as an antihypertensive agent. A fast and reliable method for determination of reserpine is highly desirable to support formula checking and quality control in pharmaceutical industries. Ultraviolet derivative spectrophotometry (UVDS) was performed to determine reserpine in the root of R. serpentina and the corresponding tablet without chromogenic reagent and was compared with conventional spectrophotometry as a reference method. UVDS method is based on the measurement of peak to baseline amplitude (Dz) in first derivative spectra at 277.4 nm for tablet and at 312 nm for R. serpentine. UVDS method showed the concentration reserpine in tablet was 0.2202 mg per tablet and 3.1122 mg per gram of root powder. Conventional spectrophotometry showed the concentration of reserpine in tablet was 0.2289 mg per tablet and 5.3741 mg per gram of root powder. Statistical analysis by t-test and F at 95% confidence level showed a significant difference between the results of the two methods for root analysis whereas for tablet analysis did not show significant difference between the results of the two methods. Validation of UVDS method were determined in tablet analysis for several parameters. UVDS method gave a correlation coefficient (r) of 0.9998 in the range of 10–50 mg/l, precision of 1.68% as relative standard deviation, recovery of 60.34–94.61%, limit of detection of 1.1890 mg/l, and limit of quantitation of 3.9634 mg/l.
METODE CEPAT UNTUK KUANTIFIKASI RESERPIN DALAM OBAT DAN EKSTRAK Rauwolfia serpentina SECARA SPEKTROFOTOMETRI DERIVATIF ULTRAVIOLET
WORO DINA RACHMANTI
Skripsi sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains pada Departemen Kimia
DEPARTEMEN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2006
Judul Skripsi
Nama NIM
: Metode Cepat untuk Kuantifikasi Reserpin dalam Obat dan Ekstrak Rauwolfia serpentina secara Spektrofotometri Derivatif Ultraviolet : Woro Dina Rachmanti : G44201065
Menyetujui:
Pembimbing I,
Pembimbing II,
Ir. Elly Suradikusumah, M.S. NIP 130350043
Prof. Dr. Latifah K. Darusman, M.S. NIP 130536681
Mengetahui: Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor
Dr. Ir. Yonny Koesmaryono, M.S. NIP 131473999
Tanggal Lulus:
PRAKATA Alhamdulillahi robbil’aalamin, puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT atas segala karunia-Nya sehingga karya ilmiah ini dapat diselesaikan. Laporan ini disusun berdasarkan hasil penelitian yang dilaksanakan mulai tanggal 8 Juni 2005 sampai 12 Januari 2006 di Laboratorium Kimia Analitik dan Pusat Studi Biofarmaka, Bogor dengan judul Metode Cepat untuk Kuantifikasi Reserpin dalam Obat dan Ekstrak Rauwolfia serpentina secara Spektrofotometri Derivatif Ultraviolet . Skripsi ini ditulis berdasar pada data yang diperoleh selama penelitian baik melalui pengujian di laboratorium, wawancara, maupun studi pustaka. Penulis mengucapkan terima kasih kepada Ir. Elly Suradikusumah, MS. dan Prof. Dr. Ir. Latifah K. Darusman selaku pembimbing atas segala arahan, perhatian selama penelitian dan penulisan laporan ini, Hibah Penelitian A2 atas bantuan dana yang diberikan, Lab Pusat Studi Biofarmaka atas fasilitas yang diberikan, dan Mohamad Rafi, S.Si. yang telah banyak membantu mengatasi kesulitan penulis.Terima kasih penulis ucapkan kepada kedua orang tua tercinta atas segala kasih sayang dan didikan yang diberikan serta kepada Mas Arief, untuk kebersamaan dan kasih sayangnya. Penghargaan dan terima kasih penulis sampaikan kepada Om Em atas bantuan dan semangat yang diberikan kepada penulis, Kak Budi atas diskusi-diskusi yang berharga, Bapak Rudi, Ibu Irmanida, Kak Atep, Mbak Salina, Ibu Nunuk, Ibu Enung, Bapak Ridwan, Bapak Manta, dan Bapak Kosasih. Ungkapan terima kasih juga disampaikan untuk Agung Nugraha yang merelakan hati, telinga, dan dirinya menemani penulis setiap saat. Sahabat satu tim (Ira, Novie, Nersy, Wiji, dan Egun), Dewi, Anie, Sekar, Maya, Putri, Rachmanita, Steven, Mas Heri, dan semua teman-teman Kimia angkatan 38 atas kebersamaan, semangat, bantuan, dan dorongannya, dan semua pihak yang tidak dapat disebut satu per satu. Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.
Bogor, Februari 2006
Woro Dina Rachmanti
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Jakarta pada tanggal 27 Agustus 1983 dari ayah Suyudi dan ibu Dra. Amien Widjijati. Penulis merupakan putri kedua dari dua bersaudara. Tahun 2001 penulis lulus dari SMA negeri 61 dan pada tahun yang sama lulus seleksi masuk IPB melalui jalur Ujian Masuk Perguruan Tinggi Negeri. Penulis memilih Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Selama mengikuti perkuliahan, penulis menjadi asisten mata kuliah Kimia Dasar pada tahun ajaran 2003/2004, Kimia D3 Analisis Lingkungan pada tahun ajaran 2004/2005, Kimia Analitik Teknik Pangan dan Gizi pada tahun 2004/2005, dan Kimia Analitik III pada tahun ajaran 2005/2006. Tahun 2004 Penulis melaksanakan Praktik Lapangan di laboratorium Sucofindo, Cibitung.
DAFTAR ISI Halaman DAFTAR TABEL .......................................................................................................... viii DAFTAR GAMBAR ...................................................................................................... viii DAFTAR LAMPIRAN..................................................................................................... ix PENDAHULUAN ............................................................................................................. 1 TINJAUAN PUSTAKA Spektrofotometri ...................................................................................................... 1 Spektrofotometri Derivatif....................................................................................... 2 Reserpin ................................................................................................................... 3 Validasi Metode Analisis......................................................................................... 3 BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat ........................................................................................................ 5 Metode Penelitian .................................................................................................... 5 HASIL DAN PEMBAHASAN Penentuan Kondisi Optimum................................................................................... 6 Pengukuran Reserpin dengan Metode Spektrofotometri UV-VIS......................... 10 Perbandingan Metode SDUV dan Spektrofotometri UV-VIS............................... 11 Validasi Metode Spektrofotometri Derivatif ......................................................... 11 SIMPULAN DAN SARAN Simpulan................................................................................................................ 13 Saran ...................................................................................................................... 13 DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................................... 12 LAMPIRAN..................................................................................................................... 15
DAFTAR TABEL Halaman 1 Kondisi optimum pada analisis reserpin dengan metode SDUV.................................. 9 2 Hasil uji statistik metode SDUV dan metode rujukan dalam obat ............................. 10 3 Hasil uji statistik metode SDUV dan metode rujukan dalam akar ............................. 10 4 Persamaan kurva standar sebanyak tiga kali ulangan ................................................. 11 5 Parameter statistika kurva standar rata-rata ................................................................ 11 6 Data ketelitian reserpin dalam tablet obat menggunakan metode SDUV .................. 12 7 Data perolehan kembali reserpin dalam tablet obat dengan metode SDUV............... 12
DAFTAR GAMBAR Halaman 1 Prinsip hukum Beer ...................................................................................................... 1 2 Spektrum turunan dari absorbans pita Gauss................................................................ 2 3 Macam-macam amplitudo (a) Ds, (b) DL, dan (c) Dz .................................................... 3 4 Struktur reserpin ........................................................................................................... 3 5 Spektrum standar pada turunan ke nol (a) dan turunan pertama (b) ............................. 7 6 Spektrum standar reserpin dan akar R. serpentina pada turunan ke nol (a), pertama (b), dan kedua (c) ............................................................................................ 8 7 Spektrum turunan standar reserpin (−), contoh obat Serpasil® (−), dan contoh ekstrak akar Rauwolfia serpentina (−) ........................................................................ 9 8 Kurva standar reserpin untuk obat (a) dan akar (b) .................................................... 10 9 Kurva standar reserpin dalam analisis tablet obat....................................................... 10 10 Kurva standar reserpin dalam analisis akar R. serpentina ......................................... 10 11 Kurva standar reserpin 10–50 mg/l............................................................................. 12
DAFTAR LAMPIRAN Halaman 1 Diagram alir penelitian ............................................................................................... 16 2 Spektrum serapan standar reserpin dan contoh obat turunan ke nol pada ulangan (a)1, (b) 2, (c) 3, (d) 4, (e) 5, (f) 6, (g) 7, (h) 8, (i) 9 .................................... 17 3 Spektrum serapan standar reserpin dan contoh akar turunan ke nol pada ulangan (a)1, (b) 2, (c) 3, (d) 4, (e) 5, (f) 6, (g) 7, (h) 8, (i) 9 .................................... 18 4 Spektrum serapan standar reserpin pada kecepatan penyapuan 200 nm/menit dan penghalusan kedua...................................................................................................... 19 5 Spektrum serapan standar reserpin dan contoh obat pada kondisi optimum ulangan (a)1, (b) 2, (c) 3, (d) 4, (e) 5, (f) 6, (g) 7, (h) 8, (i) 9 .................................... 20 6 Spektrum serapan standar reserpin dan contoh akar pada kondisi optimum ulangan (a)1, (b) 2, (c) 3, (d) 4, (e) 5, (f) 6, (g) 7, (h) 8, (i) 9 .................................... 22 7 Persamaan kurva standar dan kadar reserpin dalam obat untuk penentuan kondisi optimum ......................................................................................................... 24 8 Penentuan kadar reserpin dalam obat menggunakan metode SDUV ......................... 31 9 Penentuan kadar reserpin dalam akar menggunakan metode SDUV ......................... 32 10 Penentuan kadar reserpin dalam obat menggunakan metode spektrofotometri UV-VIS....................................................................................................................... 33 11 Penentuan kadar reserpin dalam akar mengguankan metode spektrofotometri UV-VIS....................................................................................................................... 34 12 Penentuan uji t dan uji F antara metode SDUV dan spektrofotometri UV-VIS (rujukan) ....................................................................................................... 35 13 Penentuan parameter statistika kurva standar rata-rata metode SDUV..................... 36 14 Penentuan presisi kadar reserpin dalam obat metode SDUV .................................... 37 15 Penentuan perolehan kembali (recovery) kadar reserpin dalam obat metode SDUV ........................................................................................................... 38
