PENGARUH SUBSTRAT, INHIBITOR, DAH AKTBVATOR BE6(HA83&p PROTEASE B ~ C J / / L Ipumiius S Y1 dan XenShomonas campestris paihovar glycines 1FL dan YR32
Oleh
TEGUH HANDOKO SANTOSO F 29. 1109
1 9 9 6
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTlTUT PERTANIAN BOGOR B O G O R
I'EGUH HANDOKO SANTOSO. F 29.1 109. Pengaruh Substrat, Inhibitor, dan Aktivator Terhadap Protease Bacillus pumrlus Y1 dan Xantlromonas campestrrs pathovar g(vcrrtes 1 FL dan YR32. Di bawah bimbingan Maggy T. Suhartono.
RINGKASAN
lnfonnasi sifat-sifat biokimiawi enzim seperti ketahanan terhadap lingkungan, pH dan suhu optimum, dan sifat biokimiawi lain seperti substrat yang cocok bagi enzim, aktivator, inhibitor, nilai KM dan Vmax, diperlukan untuk pemanfaatan enzim secara optimal tnaupun untuk studi molekular. Penelitian ini menggunakan tiga isolat bakteri yang menunjukkan aktivitas proteolitik yang tinggi pada studi pendahuluan. Ketiga isolat yang digunakan adalah Nucrlltcs pz~milusY1 yang diisolasi dari limbah cair tahu, Xan/homonu,v campe.vlris pathovar g!vcrtzes YR32 dan ,Yunilzomot~us cumnpevfris pathovar glycines IFL keduanya diisolasi dari daun kedelai sakit. Tujuan penelitian ini adalah untuk melihat pengaruh substrat, senyawa aktivator, dan senyawa inhibitor terhadap aktivitas protease yang disekresikan oleh ketiga isolat di atas. Aktivitas protease Y I terhadap substrat hemoglobin (yang sudah didenaturasi) ternyata lebth tinggi dari aktivitas kontrol (kasein) pada konsentrasi yang sama. Hal yang sama tidak ditunjukkan oleh protease IFL dan YR32.
Aktivitas protease
terhadap substrat lain sangat bervariasi. Aktivitas protease Y 1 terhadap substrat yang diuji adalah berturut-turut hemoglobin > elastin > albumin
kolagen > keratin.
Aktivitas proteasc I FL bcrturut-turut hemoglobin > albumin > elastin > keratin > kolagen, sedangkan protease YR32 berturut-turut hemoglobin> keratin > kolagen > elastin > albumin. Senyawa urea dan SDS (sodium dodesil sulfat) ternyata meningkatkan aktivitas protease Y 1 pada konsentrasi <5%, sedangkan pada protease I FL dan YR32 ternyata menunjukkan penurunan aktivitas.
Sedangkan senyawa Triton X-100
PKNGARUH SIIBSI'I
sebitgai salah satu syarat untuk memperolch gelelar SAR.JANA TEKNO1,OGI PERTANIAN pada Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi Fakultas 'Teknologi Pertanian lnstitut Pertanian Bogor
JLIKIISAN TEKNO1,OGI PANGAN DAN GI%] FAKIJLTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
WSTITIJT PERTANIAN BOGOR BOGOR
INSTITUT PERTANIAN BOGOR FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
PENGARUH SUBSTRAT, WRIBITOR, DAN AKTIVATOR TERHADAP PROTEASE Baci[lus pumifus Y 1 dan Xanthomonas campestris pathovar glycines 1FL dan YR32
Oleh :
TEGUH HANDOKO SANTOSO F 29.1109
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN pada Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi Fakultas Teknologi Pertanian Institut Pertanian Bogor
Dilahirkan tanggal 16 Januari 1974 di Pekalongan Tanggal Lulus : 27 September 1996
Puji syukur kepada Tuhan Vang Maha kasih atas segala penyertaan-Nya serta rahtnat kasih-Nya kepada penulis selatna penelitian ini herfangsung sampai selesainya skripsi ini. Adapun penelitian ini merupakan kelanjutan dari beberapa penelitian pendahuluan dan dilaksanakan di Laboratoriu~n Mikrobiologi dan Riokimiawi, Pusat Antar ilniversitas Bioteknologi, Institut Pertanian Bogor. Pada kesempatan ini penulis ingin tnenya~npaikanrasa terima kasih kepada :
1. Dr. Ir. Maggy T. Suhartono, selaku dosen pembimbing, yang telah banyak memberikan bimbingan dari awal penelitian ini sampai selesainya skripsi ini. 2. Dr. Ir. Katih Dewanti .MSc. dan lr. Sutrisno Koswara yang telah bersedia inenguji
dan memberikan masukan untuk menyempumakan skripsi ini. 3. Papa, Mama, lng, Bing, dan San yang telah banyak mendoakan dan memberikan dorongan moril dan kecukupan materiil. 4. Rekan-rekan satu lab. : Cie Siska dan Mbak Inn ,atas segala masukan dan ., Medi, Juliana, Vincent, bantuannya, Cie Eli, Cie Lili, Bang Wenu, Pak Trisno,
Yuri, Cath, Irawan, Cecil, Amel, Pak Slamet, Ibu Benika, Kang,,Y.aya, Pak Bowo, Mbak Novi, Mbak Munti, Pak Iman, atas kebersamaannya serta para laboran Ibu ika, Ibu Eni dan Pudin yang telah banyak lnembantu penulis dalam hal-ha1 teknis. 5. Rekan-rekan satu kos : Gunawan, Sonny, Andries, Danny, Oentari dan rekan-rekan
lain yang tidak dapat disebutkan satu per satu
6 . Scluruh anggota Keluarga Eks Kolese Loyola Kornisariat Bogor dan selnua pihak
yang tidak dapat disebutkan satu per satu. Akhir kata saran dan kritik yang membangun dari peinbaca sangat diharapkan untuk menyempumakan rangkaian penelitian selanjutnya dan semoga skripsi ini dapat bennanfaat bagi kita semua
Penulis
DAFTAK 1st
Hal.
...
KATA PENGANTAR
111 ,.
DAFTAR IS1 ............................ . . ..... . ........................................................... ,
v
DAFTAR GAMBAR
vii
DAFTAR TABEL
ix
DAFTAR LAMPIRAN
x
I'ENDAHULUAN
i
1
4
11. TINJAUAN PUSTAKA
'
I . I'IIO'I'EASE MlKlIOBA
4
2. PROTEASE Hacillus s
6
3. PROTEASE Xatttlton~onussp
8
4. PENGARUH SENYAWA PENGUBAH AKTIVITAS E N Z M ................. 111. BAHAN DAN METODE 1 . BAHAN DAN ALAT
7 . METODE PENELITLAN A. Persiapan kultur Hacillus puntifus Y 1 ..... ..... ........
........... ..
8. Persiapan kultur Xantlzonzottus curnpes/ri.s
C. Pengendapan enzim Y 1 .... ........... ........... D. Aktivitas enzim pada berbagai substrat
...... ...... ........... ........... ....... ...
E . Pengaruh inhibitorlaktivator terhadap aktivitas enzim .......... F . Analisa aktivitas protease dengan metode Rergmeyer (1 983) ............... 1V. PEMBAHASAN ............................................................................................
I . PROSES PRODUKSI ................................................................................ 2 . AKTIVITAS ENZIM TERHADAP BERBAGAI SUBSTRAT .................. 3. PENGARUH SENYAWA SDS. UREA DAN TRITON X-100 TERtIADAP AKTIVITAS PROTEASE .................... . . ........................ .
.
. . . . .
4 . PENGARUH INHIBITOR TERHADAP AKTIVITAS PROTEASE ..... 5 . PENGARUH SENYAWA PEKEDUKSI TERHADAP AKTlVITAS
PROTEASE ..............................................................................................
6 . PENGARUH DIMETILFORMAMID DAN DIMETILSULFOXID TERHADAP AKTIVITAS PROTEASE .......................................
V . KESlMPULAN DAN SARAN .......................................................................
DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN
Hal Gambar
I. Klasitikasi enzim protease yang dihasilkan oleh mikroba
Gambar
2. lsolat Hucill~rspun~ilusY 1 pada media LA+skim 2% dengan waktu inkubasi 12 jam suhu 37OC ...
Gambar 3. Isolat Xu~r//zomona.scut?zpes/ri.spv. glycines YR32 dan 1FL pada media LA+skim 2% dengan waktu inkubasi 2 hari suhu 30°C .... Gambar 4. Perbandingan aktivitas protease YI pada media LAtskim 2% dengan media LA + gelatin 2% ( setelah diwarnai dengan Coonnu.sie Rrilliun~Blue) setelah inkubasi 12 jam suhu 37°C ......... Gambar 5. Perbandingan aktivitas protease YR32 dan IFL pada media LA+ skim 2% dengan media LA+gelatin 2% (setelah diwarnai dengan ( 'oonrusre HrnNrctnt Nlrrc) seteiah inkubasi 2 hari suhu 30 "C ......... (;antbar
..
.
6 . Aktivitas enzim krhadap herhagat jcnis substrat .............................
Gambar 7. Pengaruh urea terhadap aktivitas protease ....................................... Ga~nbar 8. Reaksi antara urea dan protein Gambar 9. Pengaruh SDS terhadap aktivitas protease .................................. Gambar 10. Pengaruh triton X-100 terhadap aktivitas protease ........................ Gambar 1 1. Pengaruh PMSF terhadap aktivitas protease .......................... . . ..... Gambar 12. Pengaruh iodoasetat terhadap aktivitas protease .............................. Gambar 13. Pengaruh dithiotreitoi terhadap aktivitas protease Gambar 14. Pengaruh P-merkaptoetanol terhadap aktivitas protease ................. Gambar 15. Pengaruh dimetilfonnamid terhadap aktivitas protease ...................
5
Gambar 16. Pengaruh dimetiisulfoxid terhadap aktivitas protease .....................
46
(;ambar 17. Pengaruh NaCl terhadap aktivitas protease
.;.......
47
.
48
Gambar IS. Pengaruh KCI terhadap aktivitas protease
