LAPORAN AKHIR PENELITLlli
Uji Positifitas Mikrometastasis KeJenjar Getah Beuing Karsinoma Mammae dengan Metode Reverse Transkriptasc ·PeR dan Metode Imunohistokimia Mammaglobin pada Formalin Fixed Parafin Embedded Tissue
I
Tohizn1 Dessi Arisanty
:Faln1ltas KedoJ,teran llni"'��·sihts Andalas f'�da'�g 2(1 t1
LAPORAN AKHIR PENELITIAN
Uji Positifitas Mikrometastasis Kelenjar Getah Bening Karsinoma Mammae dengan Metode Reverse Transkriptase PCR dan Metode lmunohistokimia Mammaglobin pada Formalin Fixed Parafin Embedded Tissue
Tofrizal Dessi Arisanty
Fakultas Kedolderan Universitas Andalas Padang 2011
KATAPENGANTAR
Puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa, �arena atas berkat dan rahmatNya jualah, penelitian ini dapat diselesaikan.
Penghargaan dan
ucapan
terimakasih khusus kepada Prof DR.dr Yanwirasti, PA(K) atas perhatian, bimbingan, arahan dan dorongan serta waktu yang diberikan kepada Penulis, selama proses persiapan proposal, seminar, pelaksanaan penelitian, sampai dengan akhir penulisan laporan penelitian ini. Penulis
mengucapkan
terimakasih
kepada
RISBIN
IPTEKDOK
atas
pembiayaan terhadap pene1itian ini serta segala bantuan baik moril maupun materil sebagai badan penyelenggara riset pembinaan ini. Penulis mengucapkan tetimakasih kepada para Reviewer RISBIN IPTEKDOK atas bantuan, kritikan dan segala masukanya agar penelitian ini dapat dilaksanakan sebagaimana mestinya. Ucapan terimakasih Penulis Kepala Laboratorium Biomedik FK UNAND serta Kepala Bagian Patologio Anatomic FK UNAND , beserta semua jajaran staf labonitorium tempat penelitian ini dilaksanakan. terimakasih atas arahan, kepedulian dan bantuannya. Semoga Allah SWT memberikan rahmat dan hidayahNya kepada kita semua.
Padang, February 2012
•
Penulis
ii
LEMBAR PENGESAHAN
Judul
:
Uj i
Positifttas
Mikrometastasis
Kelenj ar
Getah
Bening
Karsinoma Mammae dengan Metode Reverse Transkriptase PCR dan Metode Imunohistokimia Mammaglobin pada Parafin Embedded Formalin Fixed Tissue
Nama peneliti
: Tofrizal
: Dessi Arisanty, SSi.MSc
Kategori
: Tlmu Pengetahuan Terapan
Penelitian ini telah dilaksanakan dengan dana RISBIN IPTEKDOK 2011 dan telah diselesaikan February 2012
TOFRIZAL
DR Dr Masrul,M. NIP: 19561226 19871
•
DAFTARISI DAFTAR lSI ............................................................................................................. ii DAFTAR GAMBAR ................................................................................................ iv DAFTAR TABEL ..................................................................................................... v . 1 ABSTRAK ABSTRACT .............................................................................................................. 2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
BAB I PENDAHULUAN ......................................................................................... 3 1 . 1 Latar Belakang ........................................................................................ 7 1.2 Rumusan Masalah ................................................................................... 7 1.3 Tujuan Peneltian ..................................................................................... 9 1.3.1 Tujuan Umum .......................................................................... 9 1.3.2.Tujuan Khusus.......................................................................... 9 1.4 Manfaat Penelitian ................................................................................... 9 BAB II TlNJAUAN PUSTAKA ............................................................................... 11 2.1 Karsinoma Mammae ............................................................................... 11 2.2 Mikro Metastasis ..................................................................................... 22 BAB Ill KERANGKA KONSEPTUAL DAN HIPOTESTS PENELITIAN ............ 25 3. 1 Kerangka Konseptual .............................................................................. 26 3.2 Hipotesis Penelitian ................................................................................ 26 BAB I.V METODE PENELITIAN ........................................................................... 26 4.1 Jen is dan Desain Penelitian ..................................................................... 26 4.2 Populasi ................................................................................................... 27 4.3 Sampel dan Besar Sampel ....................................................................... 27 4.4 Teknik Pengambilan Sampel ................................................................... 28 4.9 Kerangka Operasional Penelitian ........................................................... 29 4.10 Prosedur a tau Pengumpulan Data.......................................................... 29 4.11 Persetujuan Etik ..................................................................................... 31 4.1 lAnalisa Data .......................................................................................... 35 BAB V HASIL PENELITIAN .................................................................................. 32 •
BAB VI PEMBAHASAN ........................................................................................ 37 BAB VII KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................. 42 DAFT AR PUST AKA ............................................................................................... 43 LAMPIRAN
ii
DAFTAR GAMBAR
No Gambar
Halaman
2.1
Histopatologi invasive ductal carcinoma dan invasive lobular
2.2.
FotomikrografMikro metastasis pada kelenjar limfe .........................
51 5.3 5.4
Distribusi frekuensi mikrometastasis immunohistokimia ....................
carctnotna .
...................... .......................................................................
Visualisasi RT-PCR MGB 1 sampel positif. ....................................... Distribusi frekuensi RT-PCR .............................................................
..
iii
.
.
.
17 14 32 33 35
DAFTAR TABEL
No Gambar
Halaman
2.1
Grading h:istopatologik karsinoma
5.1
Karakteristik Subjek Penelitian ........................................................... Perbandingan mikrometastasis kelenjar getah bening berdasarkan
5.2
mam mae
berdasarkan WHO ........
.
.
teknik IHK dan RT-PCR .....................................................................
.
5.3
18 32 35
Perbandingan mikrometastasis kelenjar getah bening berdasarkan teknik lliK dan RT-PCR berdasarkan ukuran kelenjar getah bening grading histopatologik
. .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
•
iv
36
DAFTAR ISI DA�FTAR ISI ............................................................................................................. ii. DAFTAR GAMBAR DAFTAR TABEL .
............
......
DABSTRAK ABSTRACT
.........
.
.....
.
.
.......
.. .
.......
.
......
.. .. .
..............
...............................
.
..........
.
..
......
. . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . .
.............
..
...
.
.
.....
.....
.
.
............................
. . . ..
..
. .
. . . . . .................
·�· . . . . . . . . . . .
. .. . . .
iv
. ....
.
....
..
..
....
v
.
1
.
..........
..
.
......
...
. . . . . . . . .............................. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2
BAB I PENDAHULUAN ......................................................................................... 3 1. 1 Latar Belakang ........................................................................................ 7 1.2 Rwn.usan Masalah ................................................................................... 7 1.3 Tujuan Peneltian ..................................................................................... 9 1.3.1 T4iuan Umum .......................................................................... 9 1.3.2.Tujuan Khusus.......................................................................... 9 1.4 Manfaat Penelitian................................................................................... 9 BAB
II TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................... 11 2.1 Karsinoma Mammae ............................................................................... 11 2.2 Milrro Metastasis ..................................................................................... 22
BAB III KERANGKA KONSEPTUAL DAN HIPOTESIS PENELITIAN ............ 25 3.1 Kerangka Konseptual .............................................................................. 26 3.2 Hipotesis Penelitian ................................................................................ 26 BAB IV METODE PENELITIAN ........................................................................... 26 4.1 Jenis dan Desain Penelitian ..................................................................... 26
4.2 Populasi ................................................................................................... 27 4.3 Sampel dan Besar Sampel . .. . . . . 27 4.4 Teknik Pengambilan Sampel................................................................... 28 ....
............
..............
..........
. .•. . . . . . . . . . .
...
........
4.9 Kerangka Operasiona] Penelitian ........................................................... 29 4.10 Prosedur atau Pengumpulan Data .......................................................... 29 4.11 Persetujuan Etik.................... ................................................................. 31 4.11A1lalisa Data .......................................................................................... 35 BAB V HASIL PENELITIAN .................................................................................. 32 ,.
BAB VI PEMBAHASAN ........................................................................................ 37 BAB
VU KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................. 42
DAFTAR PUSTAKA
.................
.
......
.
.... . . . . . . . . .
LAMPIRAN
ii
..
......
.
..............
.
.............
..
......
.
..........
. 43
DAFTAR GAMBAR
No Gambar
2.1
Histopatologi invasive ductal carcinoma dan invasive lobular carctnotna
2.2.
Halaman
. . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Fotomikrograf Mikro metastasis pada kelenj ar limfe .........................
5.1
Distribusi frekuensi mikrometastasis immunohistokimia ...................
5.3
Visualisasi RT-PCR MGB
5.4
Distribusi frekuensi RT-PCR ............................................................
1 sampel positif.......................................
•
iii
.
.
..
..
17 14 32 33 35
DAFTAR TABEL
No Gambar
Halaman
2.1
Grading histopatologik karsinoma mammae berdasarkan WHO ........
5.1
Karakteristik Subjek Penelitian ........................................................... Perbandingan mikrometastasis kelenjar getah bening berdasarkan
5.2
teknik IHK dan RT-PCR ..................................................................... 5.3
.
.
.
18 32 35
Perbandingan mikrometastasis kelenjar getah bening berdasarkan teknik IHK. dan RT-PCR berdasarkan ukuran kelenjar getah bening grading histopatologik
..........................................................................
•
iv
36
DAFTAR lSI DAFTAR ISI .
.............................
.. . . . . . . . . . . . . . . .
. . . ..
..
......
.
.......
.
.......
. . . . · .. . . . . . . . . . . . . . .
.
...........
.
ii
DAFTAR GAMBAR ................................................................................................ iv DAFTAR TABEL ..................................................................................................... v DABSTRAK ABSTRACT
.......................
.
......
. . ..
.........
.
........................
�
.....
.. . . . . . . . .
. .. ..
.......
.
.........
. I ..
. . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2
BAB I PENDAHULUAN ......................................................................................... 3 1. 1 Latar Belakang ........................................................................................ 7
1.2 Rumusan Masalah ................................................................................... 7 1.3 Tujuan Peneltian ..................................................................................... 9 1.3.1 Tujuan Umum ........................................................................... 9 1.3.2. Tujuan Khusus .......................................................................... 9 1.4 Manfaat Penelitian....................................................................: .............. 9 BAB II TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................... 11 2.1 Karsinoma Mammae ............................................................................... 11 2.2 Mikro Metastasis ..................................................................................... 22 BAB III KERANGKA KONSEPTUAL DAN HTPOTESIS PENELITTAN ............ 25 3.1 Kerangka Konseptual .............................................................................. 26 3.2 Hipotesis Penelitian ................................................................................ 26
BAB IV METODE PENELITIAN ........................................................................... 26 4.1 Jenis dan Desain Penelitian ..................................................................... 26 4.2 Populasi ................................................................................................... 27 4.3 Sampel dan Besar Sampel ....................................................................... 27 4.4 Teknik Pengambilan Sampel ................................................................... 28 4.9 Kerangka Operasional Penelitian ........................................................... 29 4.10 Prosedur atau Pengumpulan Data.......................................................... 29 4.11 Persetujuan Etik..................................................................................... 31 4.11Analisa Data ............ .............................................................................. 35 BAB V HASIL PENELITIAN .................................................................................. 32 •
BAB VI PEMBAHASAN ........................................................................................ 37 BAB VII KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................. 42 DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................... 43 LAMPIRAN
ii
DAFTAR GAMBAR
No Gambar
2. 1
Histopatologi invasive ductal carcinoma dan invasive lobular carcJnoina
2.2.
Halaman
. . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Fotomikrograf Mikro metastasis pad.a kelenjar limfe ........................
..
17 14
5.1
Distribusi frekuensi mikrometastasis immunohistokimia ....................
32
5.3
Visualisasi RT-PCR MGB 1 sampel positif....................................... .
5.4
Distribusi frekuensi RT-PCR ............................................................
33 35
.
•
iii
..
DAFTAR TABEL
No Gambar
Halaman
2.1
Grading histopatologik karsinoma mammae berdasarkan WHO.........
18
5.1 5.2
Karakteristik Subjek Penelitian......................... ........... .. ................... Perbandingan mikrometastasis kelenjar getah bening berdasarkan
32
teknik fHK dan RT-PCR ...................................................................... Perbandingan mik:rometastasis kelenjar getah bening berdasarkan
35
5.3
.
teknik
.
.
IHK dan RT-�CR berdasarkan ukuran kelenjar getah bening
grading histopatologik .......... ... ....... .
.
•
iv
....
. ... .. ........... ...... .
.
.
.
"·······
...... ......
36
ABSTRAK lLa.tar Belakang
Kanker payudara adalah kanker paling sering ditemui pada wanita, meliputi 20% dari � keganasan pada wanita. Keberhasilan terapi sangat ditentukan oleh pilihan terapi dan ·urn
penyakit. Metastasis merupakan salah satu faktor yang sangat menentukan stadium serta
prlihan terapi yang akan diambil. Pada fase dini
metastasis,
dimana jumlah sel yang
bennetastasis sangat sedikit, sulit untuk mengidentifikasi sel tumor diantara jaringan limfoid :::OOa pewamaan rutin :mem bantu
HE. Metoda imunohistokimia dan metoda reverse transkriptase PCR dapat
menemukan mikrometastasis. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan apakah
c.;nlapat perbedaan angka positifitas mikrometastasis menggunakan kedua teknik tersebut. Cara
Penelitian dilakukan terhadap kasus karsinoma payudara dengan metastasis kelenjar � bening negatif yang telah didiagnosis di laboratorium Patologi Anatomi (PA) FK :...�, Padang, dari february sampai oktober 2011. Slide HE dilakukan review ulang. Blok
;mafin kelenjar getah bening dibagi dua bagian , satu bagian dilakukan pemotongan ulang dan ;.ewamaan imunohistokimia dengan antibody mammaglobin dan bagian lain di lakukan reverse uans kripsi PCR terhadap gen MGBl
untuk mendeteksi adanya mikrometastasis. Analisa
perbedaan hasil positifitas mikrometastasis kelenjar limfe dengan uji statistik Chi-Square. H.asiJ Rata-rata umur penderita kasus karsinoma payudara dengan metastasis kelenjar getah �ng yang negatif adalah kelompok umur 41-50 tahun dengan rentang umur 62
tahun.
rlidapatkan
Pada
pemeriksaan
proporsi
angka
mikrometastasis
positif
sebesar
menggunakan
14,3%.,
Proporsi
teknik
36 sampai dengan
immunohistokimia
mikrornetastasis
dengan
r:1enggunakan teknik RT-PCR adalah sebesar 4 2%. , Kesimpulan
Kesimpulan dari penelitian ini adalah Hasil penelitian adalah ini terdapat perbedaan bermakna antara angka positifitas mikrometastasis kelenjar getah bening karsinoma payudara menggunakan metode irnmunohistokimia dan metode reverse transkriptase PCR terhadap gen "
MGBl pacta sediaan blok paraffin, dimana angka positifitas mikrometastasis kelenjar getah bening
karsinoma
mammae
menggunakan
teknik
immunohistokimia
jauh
lebih
tinggi
dibandingkan dengan metode reverse transkriptase PCR pacta sediaan blok parafin Kata
kunci
:
Karsinoma
payudara,
mikrometastasis,
mammaglobin, MGB 1
1
immunohistokimia
RT-PCR,
ABSTRACT 1Rao:kground
Breast cancer is the most common cancer among female, accounting for approximately -
•o of all cancers in female. The success of treatment rely on therapeutic method chosen, and
:i2d.ium of disease. Metastatic status of tumors are one of the most important factors that . :::lfluence the treatment. In the event of early metastasis where the amount of cells are minute it is :5fficult to detennine whether metastasis is present on routinely stained slide with Hematoxilin eosin. Immunohistochemistry and reverse transcriptase polimerase chain reaction are methods :..::Jat can be used to detect micrometastasis. This study aimed to determine possitivity rate
::5fferences of micrometastasis on limph gland between thoose two methods _lethod
This study has been done on paraffin block of breast cancer case with negative metastasis ;:reviously diagnosed at three pathological laboratory which are pathologjcal labo.ratory of FK L�AND, Padang, laboratory of PA RSUP M Djamil, Padang and laboratory of PA RS. Achmad
rfuchtar, Bukittinggi between February to Oktober 2011. par.rafin block were devided into two �� parts wich ahalf being subject to immunohistochemistry using mam.maglobin antibody and � RT-PCR using MGBl gene were performed to other half to detect micrometastasis.
:ffferences between proportion of positiv number of micrometastasis were analyzed using Chi Square Results
The average age of the breast cancer ·without Jimph gland were at the age group of 41-50, lrith ages ranging between 36 to 62 years. There is 14,3% micrometastasis found in this study
nsing immunohistochemistry. as opposed to 4,2%. using RT PCR technique. There are significant difference between micrometastasis proportion using the two methods on parrafin embedded tissue Conclusion
In conclusion,
there are significant difference between proportion of positivity of
micrometastasis on breast cancer using immunohistochemistry mammaglobin and RT-PCR MGB1
in vvich
the
positiv
result were
much higher
on im.munohstochemistry
using
mammaglobin on parrafin embedded tissue.. Keywords
:
breast cancer, micrometastasis, immunohjstochemistry
MGBl
2
RT-PCR, mammaglobin,
BAB I PENDAHULUAN
_l
Latar Belakang
Kanker payudara adalah kank:er paling sering ditemui pada wanita, meliputi 20% dari seluruh keganasan pada wanita, dan menjadi penyebab terbanyak kematian pada wanita usia 35-55 tahun. (Baum et al., 2008). Terdapat 205 000 kasus baru pertahun diseluruh dunia. Insiden tertinggi di Amerika Serikat yak:ni 90/100.000 wanita pertahun dengan angka mortalitas 27/100.000 atau 18 % dari kematian pada wanita. (Bray, et al.,2008). Angka kejadian kanker payudara pada negara maju kurang lebih 6% dari semua wanita usia dibawah 75 tahun, angka ini lebih rendah pada negara-negara di sub-Sahara dan Asia, namun pada dekade terakhir terdapat kecenderungan peningkatan yang signifikan, terutama pada negara berkembang.(Tavassoli, 2007). Insiden kanker payudara di Indonesia menempati urutan ke dua tertinggi setelah kanker mulut rahitn, dengan insiden 12 per 100.000 pendudu.k, dan terdapat kecenderungan peningkatan angka kejadian dari tahun ketahun. Berdasarkan "Pathological Based Registration" insiden minimal di Indonesia setidaknya terdapat 20.000 kasus baru pertahun, 50% kasus ditemu.kan dalam stadium lanjut. (Badan Registrasi kanker IAPI 2003) Keberhasilan terapi kanker payudara sangat bergantung pada stadium klinis, ketepatan diagnosis, pilihan terapi yang digunakan, jenis histopatologik, grading dan ,.
staging, serta respon biologik sel kanker terhadap terapi (Till, 2006). Pilihan terapi sangat bergantung pada stadi wn klinis penyakit, sedangkan salah satu faktor yang menentukan stadium adalah adanya metastasis. Adanya metastasis akan meningkatkan stadium klinis, yang kemudian akan merubah pili han terapi yang akan digunakan, pilihan terapi yang tepat akan sangat mempengaruhi keberhasilan pengobatan (Brennan, et al., 2006). 3
Rekurensi merupakan salah satu masalah dalam pengobatan penderita kanker payudara yakni timbulnya pertmnbuhan sel kanker setelah terapi inisial baik regional maupun pada organ jauh, Salah satu penelitian mencatat angka rekurensi 13 % dalam
5
tahun pada penderita stadium I. salah satu penyebabnya adal�h metastasis yang gagal di deteksi. Metastasis menggunakan
kanker
mikroskop
ditentukan cahaya
dengan
dan
pemeriksaan
pewarnaan
histopatologik
dengan
hematokrsihn-eosin (HE) sebagai
pewarnaan rutin. Metoda rutin ini kadang kala sukar untuk menentukan adanya metastasis hila kumpulan sel tumor pada kelenjar 1imfe sangat sedikit atau berada dalam fase awal metastasis, dimana hanya terdapat beberapa sel tumor. Masalah ini menimbulkan kesalahan dalam penetapan stadium penyakit yakni terdapatnya hasil negatif palsu� keadaan ini dimana sel tumor tidak terdeteksi dengan pemeriksaan rutin disebut mikrometastasis (Bear
2008). Dengan perkembangan teknik diagnostik saat ini maka adanya mikrometastasis dapat dideteksi dengan metoda immunohistokimia, atau metoda PCR (Lindsay,
2007). Metoda
PCR dan immunohistokimia merupakan metoda yang sangat spesifik dimana keduanya bekerja atas dasar diferensiasi sel target secara spesifik. Prajna pada tahun
2007
menemukan angka proporsi mikrometastasis sebesar 23% dari kasus karsinoma mammae Belum ada gold
yang direview selama satu tahun. mikrometastasis
kanker
payudara,
namun
kedua
standard dalam pemeriksaan
teknik
diatas dikatakan
memiliki
sensitifitas dan spesifisitas yang tinggi. Metoda immunohistokimia didasarkan atas perbedaan antigen yang dimiliki oleh sel tumor yang membedakannya dengan antigen yang terdapat pada lingkungan sek .itarnya,
4
sehingga sel tumor dapat dengan mudah terlihat diantara sel lain dan metastasis dapat diketahui dengan mudah. Dengan metoda imunohistokimia maka sel tumor dengan antigen khusus akan terwarnai coklat dan dapat dengan mudah teridentifikasi diantara sel lain termasuk sel jaringan limfoid yang tidak terwamai. Sel kanker payudara berasal dari sel epitel duktuli. yang merupakan kelompok epitelial. Sel epitel secara histologik terpisah dari kelompok sel mesenkhim sejak rnasa diferensiasi embrionik sehingga memiliki antigen spesifik yang berbeda dengan antigen sel mesenkhim, Metoda deteksi mikrometastasis pada teknik PCR didasarkan atas adanya ekspresi gen yang spesifik terhadap kelo.mpok sel tertentu dan negatif pada kelornpok sel jaringan normal. Secara genetik setiap sel nonnal dalam tubuh memiliki gen yang sama, namun sel tertentu akan mengekspresikan gen yang berbeda dengan sel yang lain, sel kanker payudara berasal d�i epitel duktuli kelenjar payudara yang memiliki ekspresi gen berbeda dengan sel jaringan limfe. gen mammaglobin adalah gen yang hanya aktif pada sel epitel duktuli kelenjar payudara termasuk sel epitel yang telah berubah jadi sel kanker, gen ini tidak aktif pada sel limfoid, akibatnya
mRNA
mammaglobin hanya terdapat pada sel tumor dan tak
terdapat pada jaringan limfoid. Dengan mendeteksi adanya mRNA mammoglobin maka mikrometastasis pada kelenjar limfe dapat dilacak. Keuntungan dari metoda immunohistokimia adalah metode ini sangat spesifik karena bekerja berdasarkan reaksi antigen-antibody yang spesifik. Keunttmgan lain karena metoda ini relatif mudah dilakukan dan membutuhkan peralatan yang tidak terlalu banyak. Metoda immunohistokimia relatif murah, namun pada deteksi mikrometastasis jumlah sel yang akan dilacak sangat sedikit dan berada di dalam kelenjar limfe pada lokasi yang tidak tampak secara 5
� -=- �:;:__ = �- =-�==::-=--:-- -=--=-
-=� -=-= ==== = = =-
----
��
�
;.
- ;-- --�----
-
-��-==�
---
---
.=Jill
c::akr oskopis, akibatnya pemulasan imunohistokimia harus dilakukan pada sangat banyak porongan, bahkan mungkin selumh jaringan harus d.ipotong tipis dan diwarnai, hal ini t::engakibatkan pemakaian antibody dan reagen menjadi boros dan kadang jumlah reagen yang dperlukan tak pasti.
Metoda Reverse Transkriptase PCR untuk deteksi mikrometastasis relatif baru, metoda - sangat spesifik. Keuntungan lain metoda PCR adalah pemeriksaan terhadap spesimen cukup S!ltn kali dimana pada sampel yang tak terlalu besar sampel dapat digerus seluruhnya dan
Clal-uk:an deteksi dalam satu kali pemeriksaan, hal ini akan sangat menghemat biaya dan waktu yang diperlukan, adapun kelemahan metoda iru adalah proses yang harus sangat teliti dan :::!embutuhkan
peralatan yang lebih mutakhir.
�a sensitifitas mendekati
100%
Beberapa pene1itian sebelumnya menemukan
terhadap metoda reverse transkriptase PCR dengan
oehl'Ukan pengenceran sel tumor dalam larutan. (Prajna ,2007)
Penilitian mikrometastasis dengan metode reverse transkriprtase PCR yang dilakukan �ya menggunakan sampel jaringan kelenjar limfe yang tidak difiksasi melainkan dibekukan, ml ini baik dipakai pada penelitian atau study eksperimental, namun tidak aplikatif bila akan
.:5pakai pada pemeriksaan guna kepentingan diagnostik terapan. Sampel jaringan yang diangkat � operasi atau biopsi secara umum akan segera di fiksasi dalam larutan formalin, hal ini _,erupakan prosedur tetap yang lazim dipakai pada berbagai rumah sakit, sampel kemudian Cikirim
kelaboratorium
pemeriksaan
patologi
histopatologik
rutin
anatomi dengan
guna
pemeriksaan
hematoksilin-eosin
histopatologik ternyata
rutin.
negatif
Jika
barulah
=rikrometastasis akan dideteksi.
6
.!'s.l! ..U.. _.:: �-- =._ �� lJ±;:!! �-=---=--=--= --- - ==--=----=±. � -
- �� -�-
-----
_
�----
::11:::
------==----
-
-
�I I
-!-=:.. ---:;._=-
I'
Belum pernah dilakukan sebelumnya penelitian yang membandingkan tingkat positifitas ometastasis kelenjar getah bening karsinoma mammae pada jaringan biopsi yang sama yang � difiksasi formalin dan ditanam dalam parafin. Untuk dapat memilih prosedur mana yang emh baik dipakai dimasa depan guna menentukan adanya rnikr�metastasis dalam prosedur c..:.:3gilOstik
rutin terapan,
maka perlu dilakukan
uji perbandingan
tingkat positifitas
�metastasis menggunakan kedua metoda diatas pada sampel jaringan yang sama. U
Rumusan Masalah
Elmnusan Permasalahan 1.
Berapa besarkah tingkat positifitas mikrometastasis kelenjar getah bening karsinoma mammae pada metoda reverse transcriptase PCR mammaglobin?
2. Berapa besarkah tingkat positifitas mikrometastasis kelenjar getah bening karsinoma mammae pada metoda immunohistokirnia mammaglobin? 3. Apakah terdapat perbedaan yang bermakna antara tingkat positifitas mikrometastasis kelenjar getah bening karsinoma mammae metoda reverse transcriptase PCR terhadap metoda immunohistokimia AE 113 dengan marker mammoglobin pada jaringan yang difiksasi formalin dan ditanam dalam para fin?
..
7
--
�::-__: �-==:: :;;;; :::;;::
_ ..
KERANGKA TEORITIK
.
Epitel kelenjar mammae normal
Sel kanker pada jaringan mammae
(mammaglobin(+)),
.. I
�
��
ka sino g enesis �--- _ r _ _ _ _ __ _ _ _ ---�
,
+
,
_____________________________
I nvasi vas kula r, emboli
_
�
uno histokimia mammaglobin (+)
1--
�..:overse Transkriptase PCR mammaglobin (+)
�
Mikrometastasis histopatologik rutin sel tumor (-)
l' Proliferasi dan kol onisasi sel tumor
Frank Metastasis
histopatologik rutin sel tumor (+)
8
:: � d±:! -o ' �-===-
- - ----_ ;:o;:� =----
=== -=----=.
__ _ _ ----=;: ::::o ==:: � ---=---=--=--
-
-
•
----=-----
-- -------- ------ ···
�-�==..u. --------'.!1 ll .::i � � -
ffipotesis
Terdapat perbedaan bennakna antara tingkat positifitas mikrometastasis kelenjar getah bening karsinoma mammae metoda Reverse Transcriptase PCR dengan metoda immunohistokimia dengan mammaglobin pacta jaringan yang Bifiksasi formalin dan ditanam dalam paraffin L3 1.3
Tujuan Penelitian
.1
Tujuan Umum
mengetahui perbedaan proporsi positivitas mikrometastasis kelenjargetah bening kank.er payudara
dengan
metode
immunohistokimia
mammaglobin
dan
metoda
reverse
transkriptase PCR dengan menggunakan gen MT.B 1.
1.3.2.Tujuan Khusus 1.
mengetahui proporsi mikrometastasis kelenjar getah bening kanker payudara dengan metode immunohistokimia mammaglobin
2. mengetahui proporsi mikrometastasis kelenjar getah bening kanker payudara dengan metode reverse transkriptase PCR dengan menggunakan gen MIB 1. 3.
mengetahui perbedaan proporsi positivitas mikrometastasis kelenjar getah bening kanker payudara dengan rnetode irnmunohistokimia mammaglobin dan metoda reverse transkriptase PCR dengan menggunakan gen MIB 1 .
4 . Mengetahui perbedaan angka kejadian mikrometastasis kelenjar limfe
ukuran kelenjar limfe.
1.4 Manfaat Penelitian 1.4.1
Manfaat Terbadap Ilmu Pengetahuan
9
berdasarkan
1. Menjadi data dasar epidemiologi mikrometastasis karsinoma mammae di Sumatera Barat.
2. Peningkatan pemahaman terhadap mikrometastasis karsinoma mammae. 3. 1A.2
Dasar dari penelitian selanjutnya terhadap mikrometastasi � karsinoma mammae.
Manfaat Terhadap Praktisi
Penelitian ini diharapkan dapat menjadi salah satu masukan bagi praktisi dalam tata laksana penderita karsinorna mammae khususnya dalam diagnosis dan penetapan stadium terutama sebagai pedoman tmtuk kelenjar getah bening kanker payudara .
10
pemilihan pemeriksaan mikrometastasis
AAwcum"·
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA U Karsinoma Payudara :..1.1 Definisi
Karsinoma payudara atau adalah tumor ganas yang beras al dari sel-epitel ltunen unit
�al-lobular kelenjar payudara. Karsinoma payudara dibagi atas karsinoma invasif dan non -msif.
Karsinoma non invasif merupakan keganasan epitel kelenjar yang tumbuh intraluminal
.:an tidak menembus membran basalis kelenjar maupun struktur dibawahnya. Karsinoma
non
=vas if karena tidak meyebar ke jaringan lain, maka tidak menimbulkan ancaman tehadap lelangsungan hidup penderi.ta. Karsinoma invasiv adalah karsinoma yang tumbuh
menembus
=rembran basal kelenjar, tumbuh destruktif atau infiltratif dalam stroma payudara, dan mampu -ermetastasis ke jaringan lain.
Sel karsinoma bermetastasis terutama melalui pembuluh limfe, namun dapat pula melalui _?embuluh darah. Karsinoma tipe invasif rnerupakan jenis yang lebih sering ditemukan dan seringkali ditemui pada stadium lanjut (Robbins, 1995). �.2 Epidemiologi
Karsinoma payudara merupakan neoplasma tersering pada wanita dan merupakan xnyebab utama kematian akibat kanker pada wanita berusia 40-45 tahun. Kanker payudara .=:1eliputi 26% dari semua kanker wanita
dan merupakan 18%
oerhubungan dengan kanker pada wanita (Donegan,
penyebab kematian yang
2004).
Insiden karsinoma mammae tertinggi di Amerika Serikat dan Eropa dan rendah pada iiawasan Afrika dan Asia, insiden di Amerika Utara dan Eropa 4-5 kali lebih tinggi dibanding Afrika dan Asia (Hortobagyi et.al., 1995).
11
Jumlah penderita kanker payudara di Amerika pada tahun 2005 diperkirakan 211.240 ;x:nderita dengan kematian tercatat 40.410 wanita dan 460 pria, sedangkan di Eropa angka kematian adalah 2000-3000 pertahun. Umur yang dikenai antara 35-65 tahun (Nixon, 1994: ?raumeni et al l997). Pada tahun 2003 di Indonesia insiden karsinoma payudara adalah 12 per 100.000 populasi wanita. Kanker ini menempati urutan kedua (11,63%) setelah kanker mulut rahim. Kanker payudara di Sumatera Barat menempati umtan tertinggi dari seluruh keganasan setiap :ahunnya (Badan Registrasi Kanker IAPI, 2003). 1.1.3. Etiologi dan Faktor Risiko
Etiologi pasti karsinoma payudara belum diketahui pasti, namun terdapat berbagai taktor :isiko yang berperan.
Karsinoma payudara memiliki banyak faktor risiko
yang
sating
herinteraksi satu sama lain atau bersifat multifaktorial (Lidyard, 2005; Roezin 2003), diantara herbagai faktor 1.
�siko tersebut antara lain:
Umur, usia lebih dari 30
tahun mempunyai kemungkinan lebih besar terkena
karsinoma payudara, risiko akan meningkat sampai umur 50 tahun dan setelah
menopause. 2.
Tidak kawin atau nullipara, risikonya meningkat 2-4 kali lebih tinggi daripada wanita yang kawin dan punya anak.
3.
Anak pertama lahir setelah usia 35 tahWJ, risiko meningkat 2 kali lebih besar.
,.
4. Menarche kurang dari usia 12 tahun, risiko meningkat 1 ,7-3,4 kali lebih besar. 5.
Menopause terlambat dari 55 tahun, risiko meningkat 2, 5 kali lebih tinggi.
6.
Pernah menga1ami infeksi payudara, meningkat 3,9 kali lebih besar.
12
trauma atau operasi tumor jinak,
risiko
7.
Riwayat keluarga menderita kanker payudara pada ibu, atau saudara perempuan.
8. Kanker payudara kontra lateral, risiko meningkat 3,9 kali lebih besar. 9. Pernah mengalami operasi ginekologis tumor ovarium, risiko meningkat 3-4 kali lebih besar. 10. Pernah mengalami radiasi dinding dada, risiko meningkat 3 kali lebih besar. 11.
Kontrasepsi oral pada kelainan jinak seperti fibrokistik, akan meningkatkan risiko keganasan
11
kaJi lebih tinggi.
2.1.3.1 Faktor Genetik
Telah lama diketahui bahwa faktor genetik berperan terhadap timbulnya karsinoma payudara. Terdapat berbagai gen terkait yang menjadi faktor kanker payudara, diantaranya gen 3RCA
1
dan BRCA 2 selain gen onkogen lainnya. Seseorang dengan riwayat keluarga menderita
kank:er payudara akan .meningkatkan risiko terkena kanker payudara 2-3 kali Jebih tinggi (Talukdar, 200�). Berbagai faktor lingkungan berperan dalam timbulnya karsinoma payudara mulai dari faktor fisik, polutan, makanan, dan faktor kimiawi lainnya. Faktor lingkungan bersama-sama dengan kerentanan genetik akan mempermudah timbulnya kanker payudara. 2.1.4 Gambaran Klinis
Gejala klinis karsinoma payudara dapat berupa benjolan pada payudara, erosi, eksema papilla, adanya perdarahan atau discharge pada puting susu. Gajala paling umum adalah adanya benjolan tidak nyeri pada payudara. Benjolan awalnya kecil kemudian membesar, timbul pembesaran payudara asimetris, lalu timbul perlekatan pada kulit diatasnya atau pada dasar dan timbul perubahan pada kulit payudara atau pada puting susu. Kulit atau puting susu akan timbul retraksi, bewarna merah muda atau kecoklatan, dapat timbul udema hingga kulit terlihat seperti
13
kulit jeruk (peau d'orange ). Dapat pula timbul ulkus pada kulit diatas benjolan, bila terdapat ulk us, ulkus yang timbul akan mudah berdarah, berbau busuk (Robbins, 1995). Rasa nyeri biasanya baru timbul kalau tumor sudah besar, telah timbul ulcus, l adanya metastasis atau invasi neural. Gejala metastasis dapat ditemui pembesaran kelenjar getah bening Ci ketiak dan metastasis jauh pada organ lain (Pane, 2003).
2.1.5 Diagnosis Untuk menegakkan diagnosis karsinoma payudara prosedur yang harus dilalui adalah
1.
Anamnesis
harus diketahui riwayat keluhan benjolan di payudara, telah berapa
lama, kecepatan tumbuh,
rasa nyeri, discharge,
kelainan kulit, benjolan
diketiak, keluhan ditempat lain berupa nyeri tulang, batuk dan sesak nafas, sakit kepala hebat dan lain- lain. Faktor risiko berupa usia, paritas, riwayat kontrasepsi, riwayat penyakit keluarga dan sebagainya harus dicari. 2.
t: emeriksaan fisik meliputi
status generalis dan status lokalis payudara bilateral,
meliputi pemeriksaan massa tumor, lokasi, tlkuran, konsistensi, permukaan, jumlah benjolan, fiksasi jaringan, perubahan pada kulit dan puting susu, status kelenjar getah bening serta tanda metastasis pada daerah yang dicurigai. 3.
Pemeriksaan radiodiagnostik/imaging tennasuk mammografi dan pemeriksaan radiologi guna mengetahui adanya tanda-tanda metastasis.
4.
Pemeriksaan patologi anatmni meliputi pemeriksaan pre- operatif seperti biopsi jarum halus, maupun pemeriksaan post operatif jaringan yang dieksisi serta kelenjar limfe guna penentuan adanya metastasi.
5.
Pemeriksaan laboratorium lainnya.
14
2.1.7 Histopatologi
Berdasarkan gambaran histopatologi, WHO membagi karsinoma payudara atas: 1 . Karsinoma non invasif Sel tumor tumbuh intraluminal tidak terdapat bukti mvas1 kedalam
stroma
menembus membra n basalis. Terdiri atas: Ductal carcinoma in situ / Intra ductal carcinoma Intra ductal papillary carcinoma Lobular carcinoma in situ
2 . Karsinoma lnvasif Terdapat invasi sel tumor menembus
membran basa lis
dan sel tumor tumbuh
infiltratif didalam stroma jaringan ikat Invasive ducta l carcinoma Invasive lobular carcinoma Medullmy carcinoma Colloid carcinoma/mucinous carcinoma Squamous cell carcinoma/metaplastic carcinoma Tubular carcinoma Adenoid cystic carcinoma Invasive papillary carcinoma
Dari berbagai tipe tipe
histologtk
invasive ducta l carcinoma
karsinoma payudara invasif subtipe tersering adalah
(85%) dan
invasive lobular carcinoma
(10%) sedangkan
subtipe lainya kurang lebih 5% dari keseluruhan karsinoma payudara (Tavassoli, 2002).
15
Invasive ductal carcinoma:
merupakan
subtipe tersering dari karsinoma payudara,
meliputi 75-85%
karsinoma payudara. Secara klinis terdapat massa tumor dengan batas tidak jelas, konsistensi keras sehingga sering disebut invasive ductal carcinoma
schirrous carcinoma. Histopatologik .
didefinisikan sebagai karsinoma payudara dengan
gambaran sel yang polim01.f dan tidak menunjukkan gambaran spesifik tipe lain, sel polimorf besar, inti duktuli irregular, dan
garnbaran
tra becula r
vesikuler,
sel tersusun membentuk susunan menyerupai
adanya tanda invasif Sel tmnor dapat pula tumbuh dalam atau pertumbuhan
solid.
Invasive
ductal
carcinoma
seringkali bermetastasis ke paru selain ke kelenjar getah bening. Invasive lobular carcinoma
Pada tipe
invasive lobula r carcinoma
klinis terdapat massa dengan konsistensi
s�perti karet dan batas tidak tegas, histologik sel tumor lebih monomorf, bulat, sel berukuran lebih kecil dengan inti
h1perkromatik,
sel tumor biasanya tumbuh
dengan gambaran single file, infiltratif dalam stroma jaringan ikat. Pola metastasis pada
invasive lobular carcinoma
traktus gastro intestinal, meningen genitalia
meliputi ovarium dan uterus.
16
lebih sering melibatkan tulang,
dan susunan syaraf pusat, serta
tra ktus
Medullary carcinoma
Tipe karsinoma ini secara mikroskopik ditandai dengan pola pertumbuhan
solid
dengan sel yang besar-besar tumbuh padat tanpa pembentukan struktur kelenjar, adanya daerah nekrosis luas, dan sebukan limfosit difus. Mucinous carcinoma
Tipe karsinoma dengan sel yang relatif kecil, mengandung banyak musin, dim ana sel tumor sebagi.an tersusWl membentuk kelenjar, dapat pula ditemui gambaran signet ring cell.
Squamous cell carcinoma/metaplastic carcinoma Menyerupai karsinoma skuamosa pada kulit, dengan sel tumor menyerupai epitel gepeng
atypic.
Tubular carcinoma
Karsinoma dengan sel tumor tersusun dalam pola Secara klinis memiliki prognosis yang baik. Adenoid cystic carcinoma
17
tubular,
berdiferensiasi baik.
Karsinoma dengan sel kecil hiperkromatik tersusun membentuk gambaran menyerupai kelenjar dengan rongga-rongga kistik. Invasive papillary carcinoma
Sel tumor tumbuh dengan susunan papillary, stroma.fi.brovaskular dan komponen invasif. 2.1.8 Grading
Grading histopatologik berdasarkan WHO 2002 di dasarkan atas grading menurut
Ellston dan Ellis.
Penilaian grade histopatologik di dasarkan atas
pembentukan tubular,
p/eomorfisme inti dan indeks mitosis (Tavassoli, 2002).
Tabel 2 . 1 Grading histopatologik karsinoma mammae berdasarkan WHO 2002 (Sumber Tavassoli, 2002). Kriteria Pembentukan tubular
Skor Sebagian kecil Sedang
Pleomorfisme inti
•
(<10%)
1
(10-75%)
2
Mayoritas tumor (>75%)
.)
Kecil, uniform
1
Ukuran sedang, pleomorfik sedang
2
Sangat pleomorfik
3
,..
1
Indeks mitosis : angka mitosis per 0-5 lapang pandang besar 6-10
2 3
:.?:: 1 1
18
Tumor dengan skor 3 sampai 5 tennasuk grade I,
skor
6 dan 7 termasuk grade 2,
sedangkan tumor dengan skor 8 dan 9 digolongkan dalam grade 3 .
2.1.9 Stadium
Stadium kanker payudara berdasarkan American Joint Committee on Cancer and International Union Againts Cancer di tetapkan dengan system TNM (T= tumor, N=metastasis
kelenjar getah bening, dan M=metastasis jauh) (Tavassol i, 2002). T=ukuran tumor primer Tx : Tumor primer tidak dapat dinilai. TO : Tidak terdapat tumor primer. Tis : Karsinoma in situ. T l : Tumor dengan ukuran 0 terbesar 2cm atau �2 : Tumor dengan ukuran 0 terbesar > dari 2 T3 : Tumor dengan ukuran 0 terbesar > dari
-
5 em.
5 em.
T4 : Ekstensi Jangsung ke dinding dada atau kulit. N = Kelenjar getah bening regional . Nx : Kelenjar getah bening regional tak bisa dinilai NO : Tidak terdapat metastasis kelenjar getah bening. N l : Metastasis kelenj ar getah bening aksila ipsilateral yang mobil. "
N2 : Metastasis kelenjar getah bening aksila ipsilateral terfiksir, berkonglomerasi, atau adanya pembesaran kelenjar getah bening mamaria interna ipsilateral tanpa ada metastasis ke kelenjar getah bening aksila. N3 : Metastasis pada kelenjar getah bening infraklavikular ipsilateral dgn atau
19
tanpa metastasis kelenjar getah bening aksila atau klinis terdapat metastasis pd kelenjar getah bening mamaria interna ipsilateral dan metastasis pada kelenjar getah bening aks·ila ; atau metastasis pada kelenjar getah bening supraklavikula
ipsilateral dengan atau tanpa metastasis pada kelenjar �etah bening aksila/mamaria interna. M : metastasis jauh. Mx : �M�etastasis jauh belrun dapat dinilai. MO : Tidak terdapat metastasis jauh. M l : Terdapat metastasis jauh. Grup stadium : Stadium 0 Stadium
:
Tis NO MO
1 : Tl NO MO
Stadiwn ITA : TO N l MO Tl Nl MO T2NOMO Stadium liB : T2 Nl MO T3 NO MO Stadium IliA
:
TO N2 MO
Tl N2 MO "
T2 N2 MO T3 Nl MO T3 N2 MO Stadium IDB : T4 NO MO
20
T4 NI MO T4 N2 MO Stadium Tile : tiap T N3 MO Stadimn IV : tiap T tiap N Ml
2.1.10 Terapi
Terapi karsinoma payudara banyak bergantung pada stadiwn penyakit (Donegan, 2004). 1.
Pengobatan pada stadium 0: ;- breast conserving surgery - simple mastektomi
2. Pengobatan pada stadium dini: - breast conserving .<;,·urgery - radical mastektomi - radical mastektomi modifikasi
Terapi adjuvant :
Radiasi Kemoterapi Terapi hormonal
3.
Pengobatan pada stadium lokal lanjut: - operable : simple mastektomi atau modifikasi radikal + radiasi kuratif + kemoterapi +
"
terapi hormonal. - inoperable : radiasi kuratif + kemoterapi + terapi hormonal.
4. Pengobatan pada stadium lanjut metastasis jauh:
- ="� � ----"' ; � :=: � -== =� "' � ---= ===--" -
21
---= � �� � -� �----= ===--- ==== --= "= -o:c::: : - --,----=="' ,.---. � -,..-� ----= -=--==----= ---=-==--- -� �
� �.
Bersifat paliatif. terapi sistemik berupa kemoterapi dan terapi hormonal merupakan terapi primer sedangkan terapi lokal-regional berupa radiasi dan pembedahan hanya dilakukan bila diperlukan. Keberhasilan pengobatan sangat bergantung
pada stadium klinis saat ditemukan, jenis
histopatologis serta status generaUsata penderita. Makin dini stadiun� makin besar kemungkinan keberhasilan pengobatan (Thompson, 1 997). Hasil pengobatan menurut PERABOI
2003 dibagi atas 2 yaitu:
Berhasil: bila bebas ttunor, penderita hidup tanpa keluhan residif lokal ataupun
metastasis. Tidak berhasil: adalah penderita hidup dengan residif lokal, metastasis atau meninggal.
2.2
Mikro Metastasis
2.2.1 Definisi
Metastasis adalah tumbuhnya sel tumor pada organ atau jaringan lain setelah mengalarni perjalanan
melalui
saluran saluran
limfe, darah ataupun rongga tubuh. Mikrometastasis
didefinisikan sebagai keadaan dimana terdapatnya sel tumor didalam kelenjar limfe ataupun organ lain yang tidak terdeteksi dengan pemeriksaan histopatologik rutin dengan mikroskop cahaya (Tavassoli, 2002). Pada karsinoma metastasis umumnya terjadi melalui jalur limfatik menuj u kelenjar limfe •
regional, setelah sel ttunor melakukan invasi ke dalam pembuluh limfe, akan timbul emboli tumor yang akan mengikuti aliran limfe menuju kelenjar limfe, dan selanj utnya sel tumor akan menetap dalam kelenjar limfe dan mernulai kolonisasi sel (Robbins,
22
2007). Pada metastasis yang
dini dimana jumlah sel tumor yang tumbuh didalam kelenjar limfe masih sangat kecil dan ukuran koloni sel tumor kurang dari 0,2mm maim akan sangat sukar mendeteksi keberadaan sel tumor diantara sel nonnaljaringan Iimfoid kelenjar getah bening. Sel tumor tipe ductal invasive yang pleomor.fik dengan inti v_esikuler akan sangat mirip dengan sel histiosit atau sel retikulum dalam sinusoid kelenjar limfe, terutama biJa sel tumbuh satu-satu dan belum mernbentuk koloni yang memberikan gambaran spesifik. Sedangkan sel tumor tipe lobular invasive cenderung kecil dan inti gelap hiperkromatik sehingga jika jumlahnya sangat sedikit maka akan sukar dibedakan dengan limfosit atau limfoblast. Akibat kesuhtan diatas pada jumlah sel yang sangat kecil dapat terjadi kesalahan dan basil negatif palsu (Preston, 2010).
2.2.2 Deteksi Mikro Metastasis
Untuk d�pat mendeteksi keberadaan sel tumor pada mikrometa..'>tasis maka beberapa metode dapat digunakan dengan syarat metode yang dipakai dapat membedakan sel limfoid dengan sel tumor atau sel non limfoid (Soslow, 2006), 1.
Teknik immunohistokimia Dengan teknik pewamaan imrnunohistokimia dapat dipakai antibody yang spesifik terhadap sel twnor namun tidak terdapat pada sel limfoid sehingga sel tumor akan terlihat jelas diantara sel limfoid. Untuk tujuan ini dapat dipakai antibody terhadap cytokeratin yang merupakan antigen umum pada sel epitel
namun tidak terdapat pada sel limfoid, maka akan dapat dengan mudah terlihat adanya sel tumor diantara jaringan limfoid (Preston , 2010; Lindsay , 2003).
23
Gambar 2.2. Foto mikrograf menunjukkan mikrometastasis, A tak tampak sel tumor pada pewarnaan rutin
HE. B jaringan yang sama mikrometastasis terlihat
pada pewarnaan immunohistokimia (Sumber Soslow, 2006 ). 2.
Teknik Reverse Transkriptase Polimerase Chain Reaction ( RT-PCR ) PCR dapat digunakan untuk mendeteksi adanya sel tumor. Dalam hal ini digunakan RT-PCR dengan mendeteksi keberadaan mRNA gen yang mengkode pembentukan protein spesifik sel yang ingin dilacak. Untuk mendeteksi adanya epitel
kelenjar
payudara
dapat
digunakan
mRNA
mammoglobin yang
diekspresikan oleh epitel payudara dan tidak terdapat pacta sel jaringan lirnfoid. Dengan RNA Reverse Transkriptase terlebih dulu mRNA ak.an di kode balik menjadi DNA Lmtuk selanjutnya baru proses PCR berjalan. Metode ini lebih sensitif dalam menemukan adanya mikrometastasis. kekurangan metode ini adalah diperlukannya jaringan segar karena mRNA tidak sestabil DNA atau protein dalam jaringan yang telah difiksasi atau disimpan lama (Prajna, 2007).
24
RABID KERANGKA KONSEPTUAL DAN IDPOTESIS PENELITIAN
Blok paraffin Kelenjar getah bening penderita karsinoma mammae, metastasis (-)
Bagi 2 bagian
Pewarnaan
l
1 lsolasi mRNA
lmmunohistokimia
mammaglobin A
Reverse Traskripsi
RT-PCR mammaglobin
,.
Penilaian Mikrometastasis
25
3.2 Hipotesis Pen elitian
Terdapat perbedaan bennakna antara tingkat positifitas mikrometastasis kelenjar getah bening karsinoma mammae metoda Reverse Transcriptase PCR dengan metoda immunohistokimia dengan mammaglobin pada jaringan yang difiksasi formalin dan ditanam dalam paraffin
..
26
BAB IV METODE PENELITIAN
4.1 Jenis Dan Desain Penelitian
Rancangan Penelitian Penelitian ini merupakan penelitian uji banding diagnostik dengan pendekatan cross sectional study, karena semua variabel penelitian diperiksa pada saat bersamaan. 4.2
Variabel Penelitian Variabel yang diukur pada penelitian ini adalah adanya mikrometastasis pada kelenjar getah bening dengan metoda Reverse Transcriptase PCR dan metoda Immunohistokimia
4.3 Populasi
Populasi dan sampel PoP.ulasi penelitian ini adalah jaringan kelenjar getah bening dengan metastasis negatif secara HE, penderita karsinoma mammae invasif yang didiagnosa pada laboratorium patologi anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Andalas. 4.3 Sampel dan Besar Sampel
2 Besar sampel dihittmg dengan menggunakan rumus: n = Z x.PQ
n = besar sampel Z= 1,96 (nilai Z pada uji dua arab dengan derjad kemaknaan 5%) ,.
P= Proporsi penyakit pada populasi Q= 1-P (proporsi orang sehat pada populasi ) d= toleransi estimasi berdasarkan penelitian sebelumnya diketahui bahwa proporsi mikrometastasis pada karsinoma mammae adalah 24%. Nilai Z pada uji dua arab dengan derjad kemaknaan 5% berdasarkan table adalah 1,96 dan toleransi estimasi ditetapkan 0,1. 27
ll = 1.,9 62 X 0,24
(1-0,24)
X
0' 1 2 :n = 70
Sampel diambil secara consecutive sampling yaitu semua kasus karsinoma mammae dengan metastasis kelenjar limfe (-) yang didiagnosa pada ketiga laboratorium PA diatas 4.4 Teknik Pengambilan SampeJ
Sampel diambil secara simple random sampling dari semua kasus karsinoma mammae invasif dengan metastasis kelenjar limfe (-) yang didiagnosa di laboratorium patologi anatomi fakultas kedokteran univ andalas february sampai oktober 20 1 1
4.5 Variabel Penelitian
Variabel Penelitian Variabel yang diukur pada penelitian ini adalah adanya mikrometastasis pada kelenjar getah bening dengan metoda Reverse Transcriptase PCR dan metoda Irnm unohistokimia
4.6 Definisi Operasional
,.
a. Mikrometastasis adalah terdapatnya sel tumor pada kelenjar getah bening yang tidak terlacak pada pemeriksaan histopatologis rutin dengan hematoksilin eosin. b. Mikrometastasis secara imunohistokimia AE 113 adalah terdapatnya sel tumor yang positif menampilkan pewarnaan coklat pada kelenjar getah bening yang negatif pada pemeriksaan rutin dengan hematoksilin eosin. c. Mikrometastasis secara Reverse transkriptase mammaglobin adalah terdapatnya band DNA mammaglobin pada spesimen kelenjar getah bening yang dinyatakan negatif pada pemeriksaan rutin dengan hematoksilin eosin 4.8 Tempat dan Waktu Penelitian 28
Waktu dan Tempat Penelitian Penelitian dilakukan selama
8
bulan (mulai persiapan, pelaksanaan dan laporan) di
Bagian Patologi Anatomi FK.Unand dan Lab.Biomedik Fak.kedokteran Univ.Andalas.
4.9 Kerangka Operasional Penelitian Karsinoma Mammae dengan metastasjs kelenjar limfe (-)
Blok paraffin kelenjar limfe
Review Slide HE sediaan karsinoma
Pemotongan dan pembuatan preparat
mammae
Pewarnaan immunohistokimia AE 113 Subtyping histopatologik, <Jl·ading histopatologik
I
1
MjJcrometastasis (+)
4.10 Cara Kelja Cara Kerja
Mik::rometastasi s (-)
t
t
Blok paraffin kelenjar getah bening dari penderita dengan karsinoma mammae invasif dengan metastasis negatif dibagi dua bagian, satu bagian akan di periksa adanya mikrometastasis dengan menggunakan metoda irnrnunohistokimia dan satu bagian di peri.ksa dengan metoda reverse transkriptase PCR terhadap mRNA marnmaglobin. ,.
A. Teknik reverse transkriptase PCR - Deparafinisasi dengan kit paraffin lysis buffer - Ekstraksi RNA Pertama jaringan digerus sampai halus dan dilakukan langkah-langkah isolasi mRNA menggunakan kit isolasi mRNA (reagen Trizol-Gibco-BRL) sesuat instruksi pabrikan 29
- RTPCR - 1,5 j.l.g RNA + 3 J.tg random hexamers + deionized water sampa1 8,5 J.tg dipanaskan pada 72°C 10 menit - Tambahkan 1 1 ,5 Rtrnixture (terdiri atas 4,5 J,tgfirst strand buffer, l OpmoldNfPs, 0,2 pmol DTT, 20URNAase inhibitor, 200 U reverse transkriptase) - Inkubasi 37°C 1,5 jam, - Inkubasi 95 °C 5 menit - didapat DNA � lanjutkan dengan proses PCR - PCR dalam 50J.tl larutan yang terdiri atas 2,5 J.tl DNA, 5J.tlbuffer PCR, lOpmol dNTPS, l U taqDNA polimerase(Gibco-BRL), 20 pmol primer gen MAM -denaturasi pada 95 °C 3 menit, 58 °C annealing diikuti ekstesnsi 72 °C dan ekstensi final 1 0 menit
B. Teknik imunohistokimia Pulasan imunohistokimia untuk deteksi mikrometastasis dengan antibody mammaglobin) .
"
1 . Jaringan kelenjar getah bening dipotong, masing masing dengan ketebalan 4 mm, dilakukan pembuatan plok parafin dari sediaan 2. Blok parafm dari preparat dipotong dengan microtom dan ditempelkan pad kaca objek berlapis poly-L-lysine 3. Potongan tersebut dimasukkan/dicuci dengan air dan PBS-Tween 20 selama 2x2 menit 4 . Antigen Retrieval: memakai microwafe dalam larutan buffer sitrat. 5. Serum Blocking: inkubasi dalam serum normal - spesies sama dengan antibody sekunder. 6. Antibodi primer : inkubasi dalam antibodi primer AEl/3 dengan larutan buffer phosphat selama 1 jam dalam suhu kamar atau selama J malam. 7. Cuci dengan PBS-Tween 20 selama 3x2 menit. 8. .Peroxidase Blocking: inkubasi dalam larutan peroxidase blocking selamal 0 men it pada suhu kamar. 9. Antibodi sekunder : inkubasi dalam antibodi sekunder Biotiny]ated dalam PBS selama 30 menit pada suhu kamar. 10. Cuci dengan PBS-Tween 20 selama 3x2 menit 1 1 . Deteksi: inkubasi dalam larutan ABC-Peroxidase Solution selama 30 menit pada suhu kamar. 12. Cuci dengan PBS-Tween 20 selama 3x2 menit. 13. Chromagen/Substrat: inkubasi dalam larutan substrat peroxidase. 14. Cuci dengan PBS-Tween 20 selama 3x2 menit. 15. Counterstain dengan larutan counterstain solution bila diperlukan. 30
16. Cuci di air mengalir selama 2�5 menit. 17. Dehidrasi dalam etanol 95% selama 1 menit, etanol 100% selama 2x3 menit. 18. Clearing dalam xylene selama 2x5menit. 19. Coverslip dengan mounting medium. Sediaan diperiksa dibawah mikroskop cahaya, sel tumor akan terwamai coklat diantara jaringan limfoid yang bewarna kebiruan, adanya pewamaan coklat menandakan adanya mikrometastasis.
4.11 Persetujuan Etik Penelitian Penelitian ini menggunakan
sampel berupa sediaan blok parafin kasus karsinoma
payudara yang didiagnosis di laboratorium PA FK Unand, Data sekunder berupa profil penderita dan diagnosis histopatologik dikumpulkan dari formulir pemeriksaan sediaan, sedangkan data primer diambil langsrn1g dari variabel�variabel yang diukur dalam penelitian ini. Penelitian ini telah disetujui oleh Komisi Etik Penelitian Kedokteran di Fakultas Kedokteran Universitas Andalas. 4.12 Analisa Data Perbedaaan tingkat positifitas mikrometastasis kelenjar getah bening pada metoda imunohistokimia_dan RT PCR dianalisa dengan Chi�Square untuk kemaknaan secara statistik
..
31
BAB V BASIL PENELITIAN Karakteristik Sam pel Penelitian
Penelitian ini menggunakan 70 sampel yang menjadi subjek penelitian. Karakteristik subjek penelitian dapat dilihat pada tabel Tabel Karakteristik Subjek Penelitian
Karakteristik
�·<>
f
Umur (tahun) 31-40
4
5,7
41-50
41
58,6
51-60
22
3 1 ,4
61-70
3
4,3
70
100
Terendah
: 35
Tertinggi
: 65
Total
Usia penderita kanker payudara dengan metastasis kelenjar getah bening negatif terbanyak pada kelompok wnur 41-50 tahun, yaitu 4 1 kasus (58,6%), diikuti kelompok umur 5 1 -60 tahun yakni 22 kasus (31,4%). Kelompok usia dengan frekuensi terendah terdapat pada usia 6 1 -70 tahun, yaitu 3 kasus (4,3%). Terdapat tiga subtipe karsinoma payudara menjadi sampel dalam penelitian ini yakni subtipe karsinoma invasif duktal, karsinoma invas{flobular dan karsinoma medullary. Subtipe karsinoma payudara terbanyak adalah tipe karsinoma invasf( duktal yaitu 62 kasus (88,6%), 32
diikuti oleh subtipe, karsinoma invasif lobular yaitu 6 kasus (8,6%), dan subtipe karsinoma medullary yakni 2 kasus (2,9% ). Ukuran kelenjar getah bening yang menjadi sampel penelitian ini bervariasi dari 0,5em sampai 1,6 em Ukuran kelenjar getah bening yang menjadi sampel penelitian ini bervariasi antara 0,6 em sampai 1,7 em dengan ukman rata-rata 0,95em
Mikrometastasis Karsinoma Payudara Pacta Kelenjar Getah Bening. pada tahap ketiga penelitian diperiksa dengan teknik immunohistokimia menggunakan antibody terhadap mammaglobin. mikrometastasis positif ditandai dengan adanya sel epitel kelenjar payudara dengan pewarnaan coklat dalam kelenjar getah bening .
Mikrometastasis berdasarkan teknik immunohistokimia
Pada gambar dibawah tampak sel tw.nor dengan ekspresi mammaglobin dengan pewamaan eoklat dibawah mikroskop eahaya pacta sinus marginalis dibawah kapsul jaringan limfoid dan diantara sel jaringan limfoid
"
gambar. l . fotomikrograf mikrometastasis kelenjar getah bening secara Immunohistokimia mammaglobin: tampak sel tumor dengan pewarnaan positif eoklat diantara jaringan limfoid. 400x
33
Pada pemeriksaan immunohistokimia yang telah d.ilakukan mikrometastasis sel kanker payudara terlihat pada l 0 kasus dari 70 kasus yang menjadi sampel penelitian atau sebesar 14,3%, sedangkan pada 60 kasus lainnya (85,7) tidak terdeteksi adanya mikrometastasis
El Mifcramet.ast:asis(-) 0 Mikrametastasis (+)
Gambar 2. Distribusi Frekuensi Mikrometastasis Karsinoma Payudara dengan teknik irnmunohistokimia mammaglobin
Mikrometastasis berdasarkan teknik Reverse Transkriptase PCR
Amphhc:allon
10
20 Cycles
..
Gambar.3. visualisasi proses real time teverse transkriptase PCR MGBl kontrol positif, II sampel dengan amplifikasi positif
34
l
l!l �ma·omerastasis (.} Ll '\IU.:mmerasta.sls (+)
Gambar 4. Distribusi Frekuensi Mikrometastasis Karsinoma Payudara dengan teknik RT�PCR Tabel 1 memperlibatkan perbandingan proporsi angkapositivitas mikrometastasis kelenjar getah bening berdasarkan teknik RT-PCR
tabel 1 . positi:fitas mikrometastasis kelenjar getah bening kasus karsinoma payudara dengan metoda lliK mammaglobjn dan RT�PCR MGBl Teknik
pemeriksaan positif
negatif
Total
mikrometastasis
IHK.-Mammaglobin
10 (14,3%)
60 (85,7%)
70
RT-PCR MGBI
3 (4,2%)
67(95,7%)
70
..
Mikrometastasis Kelenjar Getah Bening Berdasarkan Ukuran Kelenjar Getah Bening
35
tabel 2. positifitas mikrometastasis kele11jar getah bening kasus karsinoma payudara dengan metoda IHK mammaglobin dan RT-PCR MGBl
Mikrometastasis
f
Rata-rata ukuran kelejar"(cm)
p
Negatif
60
0,941
0,001
Positif
11
1,318
Negatif
67
0,832
Positif
3
1 ,667
Teknik IHK
Teknik RT-PCR
36
0,00 1
BAB VI PEMBAHASAN
6.1. Karakteristik Subjek Penelitian
Karakteristik Subjek Penelitian Pada penehtian ini didapatkan kelompok usia terbanyak penderita kanker payudara dengan metastasis kelenjar getah bening negatif terbanyak pada kelompok umur 41.-50 tahun. Usia insiden kanker payudara terbanyak pada penelitian ini sesuai dengan literatur dimana insiden kanker payudara mencapai ptmcak pada dekade 40-45 tahun yakni pada usia produktif ( Donegan et al., 2005). Pola
distribusi usia penderita kanker payudara berbeda pada berbagai
negara didunia, pada negara dengan ekonomi maju dan negara industri usia insiden kanker payudara
tertinggi cenderung lebih rendah, dibandingkan dengan negara dengan ekonomi .
berkembang. Perbedaan ini dimungkinkan akibat meningkatnya fak1:or risiko polusi lingkungan, pola hidup dan diet tinggi protein dan lemak pada negara maju, terlebih lagi berkembang
pada negara
penderita cenderung datang ke pusat pengobatan setelah bertahun-tahun saat
penyakit memasuki stadium l�jut, ini meyebabkan penyakit ditemukan pada usia penderita lebih tua (Bray et al., 2008). Pada penelitian ini didapatkan subtipe histopatologik paling banyak adalah subtipe karsinoma
invas(f duktal diikuti subtipe invasif lobular serta ditemukan dua kasus kanker payudara subtipe karsinoma medullary. Pola sebaran subtipe kanker payudara pada penelitian ini sesuai dengan pola sebaran kasus kanker payudara pada literatur dimana subtipe terbanyak kanker payudara adalah subtipe invasif duktal. Berdasarkan data WHO 2003 subtipe invasif duktal meliputi 85%
37
dari seluruh subtipe kanker payudara diikuti dengan subtipe invasif sedangkan. subtipe lain.nya kurang dari
5%
(Fattaneh et al,.
lobular yakni 1 0%,
2007)
1\llikro metastasis
Pada penelitian ini didapatkan angka kejadian mikrometastasis kelenjar getah bening kanker payudara pada teknik
14,3%.
IHK dengan menggunakan mammaglobin sebagai marker sebesar
Angka kejadian mikrometastasis kelenjar payudara dalam penelitian ini lebih rendah
dibandingkan hasil yang dilaporkan oleh Bear dilaporkan oleh Weafer yakni
20%.
2008
yakni
18%,
begitu pula basil yang
Perbedaan hasil ini dapat terjadi karena perbedaan kejadian
mikrometastasis akibat perbedaan sampel penelitian secara epidemiologi, selain itu dapat pula disebabkan oleh perbedaan teknik immunohistokimia yang dipakai kedua penelitan diatas memakai teknik avidin biotin, sedangkan teknik immunohistokimia dalam penelitian ini berbasis polimer. kelebi �an teknik polimer adalah reaksi lebih nyata dengan wama lebih intense serta tidak adanya pengaruh biotin endogen yang akan bisa menyebabkan reaksi positif palsu, selain itu pada penelitian ini kelenjar getah bening dibagi menjadi dua dimana satu bagian di periksa dengan teknik RT-PCR hal ini juga mungkin memberikan hasil lebih rendah akibat distribusi sel metastatik dalam kelenjar yang tidak dapat di duga. namun demikian jika dibandingkan dengan angka yang dilaporkan oleh Trojani yakni sebesar
14, 6%
maka angka kejadian mikrometastasis
dalam penelitian ini tidak jauh berbeda. Proporsi mikrometastasis yang didapat dalam penelitian ini dengan menggunakan teknik RT-PCR adalah sebesar
4,2%.
dilaporkan oleh Prajna yakni yakni
21%.
Hasil ini jauh lebih rendah hila dibandingkan dengan hasil yang
23%, begitu pula hasil
yang dilaporkan oleh Kerry pada tahun 2006
Perbedaan hasil ini dapat tetjadi karena perbedaan kejadian mikrometastasis akibat
38
perbedaan sampel penelitian secara epidemiologi, selain itu dapat pula disebabkan oleh perbedaan metode yang dipakai daJam mendeteksi mikrometastasis. Kedua penelitian diatas juga menggunakan metode RT-PCR mammaglobin didalam j aringan kelenjar Jimfe. namun keduanya menggunakan jaringan kelenjar limfe segar tanpa fiksasi. Kelebi.ha� dari penggunaan jaringan segar tanpa fiksasi adalah RNA masih dalam keadaan intak sedangkan RNA sangat mudah terdegradasi akibat prosesing jaringan. Penelitian ini menggunakan jaringan yang difiksasi dalam formalin dan ditanam dalam parafin. Perlakuan fiksasi danproses ing jaringan dapat mengurangi reaktifitas antigen terhadap antibody. Prosedur rutin bedah di berbagai senter di Indonesia untuk •
pemeriksaan histopatologis adalah pemeriksaan rutin HE dan seluruh jaringan langsung di fiksasi dalam formalin, deteksi mikrometastasis belum menjadi suatu prosedur rutin dan jaringan biasanya disimpan dalam blok parafin yang menyebabkan prosedur pemeriksaan RT-PCR dengan jaringan segar menjadi suatu yang sulit. Penelitian ini bertujuan menentukan angka positivitas mikrometastasis hila dilakukan pada jaringan yang difiksasi dan di benamkan dalam parafin. Proporsi angka mikrometastasis teknik RT-PCR jauh lebih rendah dibandingkan dengan angka yang didapatkan pada metode
IHK.
kejadian ini sesuai dengan teori dimana kemungkinan
besar RNA mengalami degradasi selama proses fiksasi serta prosesing jaringan dimana jaringan telah mengalami berbagai perlakuan serta paparan dengan zat kimia selama proses dehidrasi, clearing dan embedding serta proses fisika dengan paparan terhadap suhu tinggi, walaupun formalin juga memiliki efek inaktivasi terhadap Ribonukease dan efek fiksasi terhadap RNA
Proporsi yang rendah dalam penelitian ini juga sangat mungkin disebabkan oleh prosedur prosesing jaringan yang kurang optimal guna kepentingan isolasi RNA pada blok parafin. pada
39
saat ini telah dikembangkan dan telah tersedia di pasaran kit isolasi
RNA
untuk blok parafin
namun prosedur fiksasi dan prosesing harus optimal dengan berbagai syarat yang hams optimal. Konsentrasi fiksatif serta berbagai zat dalam prosesing, lama waktu masing-masing paparan dengan zat serta suhu prosesing harus optimal. penelitian ini memak�i blok parafin yang telah di periksa secara histopatologik rutin HE sebelumnya dan dinyatakan negatif terhadap metastasis, prosesing jaringan terhadap sampel penelitian ini menggunakan standar pemeriksaan HE rutin yang tidak memiliki aturan yang terlalu ketat, hal ini akan sangat berpengaruh dalam basil positif pada penelitian ini. Ukuran rata-rata kelenjar getah bening dengan mikrometastasis positif pada kedua teknik adalah Jebih tinggi dibandingkan dengan ukuran rata-rata kelenjar getah bening dengan mikrometastasis negatif. Pembesaran kelenjar getah bening pada suatu karsinoma dapat tetjadi akibat beberapa proses yaitu akibat adanya metastasis sel tumor pada kelenjar getah bening, pembesaran kelenjar getah bening reaktiftanpa metastasis sel tumor terutama dalam bentuk sinus
catarh, atau pada keadaan intlamasi akibat infeksi sekunder pada tumor primer (Gergia S. 2007). Pembesaran kelenjar getah bening dengan ukuran sampai 1
em
lebih sering diakibatkan
hiperplasia reaktif kelenjar getah bening akibat respon imun atau karena materi nekrotik pada tumor yang merangsang proliferasi histiosit dalam sinus kelenjar limfe. Pembesaran kelenjar li mfe diatas
2
em
hampir selalu akibat metastasis sel tumor yang proliferatif dalam kelenjar
getah bening. Pada ,.
penelitian
ini terhhat adanya perbedaan bermakna antara kejadian
mikrometastasis kelenjar getah bening berdasarkan ukuran makroskopik kelenjar getah bening pada kedua teknik yang dipakai, hal ini sesuai dengan literatur yang menyatakan terdapat peningkatan angka metastasis sejalan dengan peningkatan ukuran tumor primer.
40
ff'7411I
i-
••
EE=-r &f1
Pembesaran kelenjar getah bening pada suatu metasta,�is karsinoma dapat terjacli akibat salah satu proses berikut yaitu pembesaran akibat proliferasi sel tumor dalam kelenjar getah bening djtandai dengan banyaknya sel tumor yang tumbuh mendesak dan menggantikan sel limfoid normal. Proses lainnya adalah pembesaran kelenjar akibat respon if!Iun kelenjar pada keadaan metastasis, dimana keberadaan sel tumor dalam kelenjar menjadi rangsangan kuat terhadap
sistem imun, hal ini ditandai dengan sel tumor yang sedikit namun dengan proliferasi sel limfosit dengan folikel reaktifyang banyak (Thompson P, 2007)
41
BABVII KESIMPULAN DAN SARAN
7.1 Kesimpulan
Dari basil penelitian ini dapat disimpulkan:
1.
1
Proporsi
angka positifitas
mammaglobin adalah
14,3%
tnikrometastasis
kelenjar getah
bening
secara
IHK
sedangkan proporsi angka positifitas mikrometastasis
kelenjar getah bening secara RT-PCR MGB pada sediaan blok parafin jauh lebih rendah yakni 4,2%. 2.
Terdapat perbedaan bermakna angka positifitas mikrometastasis kelenjar getah bening karsinoma mammae secara lliK mammaglobin dan
RT-PCR MGB pada sediaan blok
parafin. 3.
Terdapat perbedaan bermakna antara kejadian mikrometastasis berdasarkan ukuran kelenjar getah bening baik secara teknik lliK mammaglobin maupun RT-PCR MGB
pada sediaan blok parafm.
7.2 Saran 1 . . Penderita karsinoma payudara dengan metastasis kelenjar getah bening Hematoksilin Eosin
negatif
sebaiknya
dilakukan
pemeriksaan
mikrometasatasis
secara
imunohistokimia terutama penderita dengan ukuran ukuran kelenjar getah bening besar dari 1,3 em. 2. Penderita karsinoma payudara dengan metastasis kelenjar getah bening Hematoksilin Eosin
negatif
sebaiknya
dilakukan
pemeriksaan
mikrometasatasis
secara
RT
PCR.mammaglobin terutama penderita dengan ukuran kelenjar getah bening besar dari 1,6 em. 3. Perlu dilakukan penelitian lanjutan tentang
pengaruh prosesing terhadap positifitas
mikrometastasis secara RT-PCR guna menentukan prosesing paling optimal agar bila kelak dilakukan pemeriksaan mikrometastasis dapat memberikan hasil maksimal.
42
DAFTAR PUSTAKA Daftar Pustaka
Badan
Registrasi
Kanker Ikatan Ahli Patologi Indonesia,
Data
histopatologik kanker
di
Indonesia tahun 2007. Direktorat Jendral Pelayanan Medik Departemen kesehatan R.I, Badan Registrasi Kanker Perhimpunan Dokter Spesialis Patologi Indonesia, Yayasan Kanker Indonesia. Bancroft J , Enzyme histochemistry and its diagnostic application. In: Bancroft J, Gamble M, editors. theory and practice of histological techniques 7ed Elsevier. Amsterdam, 2008;
7 1 8-32. Baum M, Adelaide T et al The breast. ln: Bailey & love's. Short Practice of surgery 22n
d
edition. Champman & Hall Medical. London, 2008; 553-62 Bear, D. Harry. Sentinel Node Micrometastases and Non-Sentinel Node Micrometastases. journal of clinical oncology, Vol 24, No 12 (April 20), 2008: pp 1788-1 790 nodes in breast cancer Bray F, Haugen M, Moger TM, Grtmol T, Age-incidence curve of breast carcinoma: Cancer Epidemiological Biomarkers Prev 1 7(9) 2008; 235-239 Brennan B, Brunn
F.
Cellular marker of micrometastatic breast carcinoma. Turkish J med sci
2006. 1 :23 Ellis 0. Immunohistochemistry in Breast pathology. In: Bancroft J,
Gamble
M, editors.
theory and practice of histological techniques Sed Elsevier. Amsterdam, 2005; 499-5 17. Fattaneh A et al., tumour of the breast. In: Fattaneh A, Tavassoli, editors WHO: Pathology and genetics tumours of the breast and female genitical organs.: IARC Press, Lyon 2003 Donegan WL,. Staging and primary Treatment. In breast Cancer: Donegan and Spratt. Cancer of the Breast 41h edition WB Saunders Co. philladelphia, 2005; 375-442 Fraumeni Jr.JF, Hoover RN, Devesa SS, et al., Epidemiologi of Cancer. In: De Vta Jr. VT, Helman S, Rosenberg SA. Cancer Principles and Practice of oncology. 5
lh edition. JB
Lippincot Co. Philladelphia, 1997; 196-235 Hortobagyi GN, et al., Epidemiology. of breast cancer in :Silva OE, Zurrida S. Breast Cancer: a guide tor fellows. Elsevier. Amsterdam, 2003; 16-7 Lydyard PM, et at, Pathology integrated In Donard .R editor. Philadelphia: Elsevier, 2005;
39-47 Lindsay
H, Pratt 0.
Overexpression antigenic molecules on carcinoma cells. Southeast
Asian Journal Trop Med Public Health 38( 1 ) 2007; 136-140 Nixon AJ, Ghulm H, Ritz F et al., Metastatic cancer disease in :Silva OE, Zurrida S. Breast Cancer: a guide for fellows. Elsevier. Amsterdam, 2003; 16-7
43
Prajna
G, Arashi M., Bull D., et al
Micro metastasis of Breast Carcinoma mammae:
retrospective review. Annals of Oncology 2007; 10:1456-1460 Preston Y, Mohan K, Timm N., et al. molecular metastatic pathways in breast carcinoma Molecular Cancer Res. 2004; 1 1 09-14 Pritchard K, Nicholas I. Prognostic and PredictifFaktor for breast cancer, j clin pathol 2003; 52:233-41 Grover F, Kayako B .. micrometastasis and isolated cell tumour as a new prognostic measure N England J Med. 2004; 1 1 13-9. Kerry M, Sierra H, Dondell T et al., 2006. Micrometastasis of breast cancer mammoglobin versus cytokeratin as a novel diagnostic tool. Asian Pasific Journal of Cancerprevention 5 : 68-74 Kumar V, Cortran RS, Robbins SL the Breast In Kumar A, Fausto N. editors Pathologi Basis d of Disease. 7c Philadelphia: Elsevier, 2005; p1 1 19-55. Soslow RA, Isacson C, Zaloudec C, et al., 2006. In Dabbs D editor. Diagnostic Immunohistochemistry. 2ed. China: Elsevier,pp 638 Gergia S, Herrington S. Breast cancer. In: Alison M, editor. . Human cancer. Mosby Co Saint Louis, 2007
t Tavasolli A,. Breast carcinoma. In Thompson L D.R editor Breast Pathology. 6 h ed Philadelphia: Elsevier; 2007. p. 170-6 Thompson P, 2007 Diagnostic chalenge of metastatic breast carcinoma J Insur Med 3 3 : 23538 Weafer DL, Krag D, et a l 2009 Detection of occult sentinel lymph node micrometastases by immunohistochemistry in breast cancer. An NSABP protocol B-32 quality assurance study, 2007. Cancer. 2009 Aug 1 5 ; 1 07(4):661-7
44
LAMPIRAN DATA PENELITI RISET PEMBINAAN IPTEK 1.
I
KEDOKTERAN 2011
Nama Peneliti
Nama
?r Tofnzal Nama
Dessi Arisanty, SSi.MSc
2.
Gelar
SSi. MSc
Judul Penelitian
Uji Positifitas Mikrometastasis Kelenjar Getah Bening Karsinoma Mammae dengan Metode Reverse Transkriptase PCR dan Metode Imunohistokimia Mammaglobin pada Parafm Embedded Formalin Fixed Tissue
3. 0
.V
0
Kategori Umu Pengetahuan Dasar Ilmu Pengetahuan Terapan Teknologi Generik
4. Kata Kunci Mik:rometastasis
lmunohistokimia
RTPCR
Marrunaglobin
5. Jangka Waktu Penelitian dan Anggaran Biaya
--/
l (satu)tahun
Tahun-1
0
2 (dua) tahun
Tahun-2
6. lmplikasi Etik .Y
Eksperimentasi dengan subyek manusia
o
Eksperimentasi dengan hewan
7A. lnstitusi Penanggung Jawab Fakultas Kedokteran Universitas Andalas, Jl. Perintis Kemerdekaan Padang 25127.
Fax.: 0751-32838
[email protected]
Telp.: 0751-31746.
e-mail
:
7B. Fakultas Kedokteran/Kedokteran Gigi Negeri Terkait
(hanya diisi apabila 7A bukan fakultas kedokteran/kedokteran gigi negeri) Nama/ Alamat Lengkap/Kode Pos/Telepon/Faksimile/Email
C. LEMBAR DATA PERSONIL PENELITI 8. Penetiti Nama Dr Tofrizal Tempat lahir Pasar Rebo ..
J
Gelar Dr Tanggal lahir 16 September 1978
Jabatan Staf pengajar Patologi Anatomi Bag ian I Divisi Patologi Anatomi
Kelamin Laki-laki Golongan I l l /a
lnstitusi asal Fakultas Kedokteran Univ.Andalas Telepon
0751 21176 (Pat.Anatomi); 0752 84090 Alamat Korespondensi Pos
Faksimile
0751 21176; 0751 32838
Bagian Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Univ Andalas. Jl Perintis Kemerdekaan, Jati. Padang 2 5 1 58 Alamat E-mail dr.
[email protected]
I
Telepon Rumah
0752 84090
I
Kualifikasi Akademik Tahun
2003
Nama
Dessi Arisanty, SSi.MSc Tempat Lahir Padang
I /
Telepon Genggam (HP)
085263995547
lnstitusi FK.Unand
Gelar Dr, MS Tanggal Lahir
12 January 1978
Jabatan
Kelamin Perempuan Golongan
Staf laboratorium Biomedik FK-Unand Bagian / Divisi
Biokimia I Biomolekuler I nstitusi asal Fakultas Kedokteran Univ.Andalas Faksimile
Telepon
075 1 . 2 1 233
.
Alamat Korespondensi Pos
Lab. Biomedik Fak. Kedokteran Unand. Jl.Perintis Kemerdekaan Padang
Alamat E-mail Desi .arisanty@ya hoo . co. id Telepon Rumah
Telepon Genggam (HP)
(075 1 ) 73948
081363787861
Kualifikasi Akademik lnstitusi
Gelar S,Si
Tahun
lnstitusi
2006
Universiti Putra Malaysia
Gelar MSc
Tahun 2001
Universitas Andalas
