Lampiran 1. Sampel Pulna®Forte Tablet
50
Lampiran 2. Komposisi Tablet Pulna®Forte Daftar Spesifikasi Sampel 1. Pulna®Forte No. Reg
: DKL 0319609209A1
ExpireDate
:Agustus 2017
Komposisi
: Ethambutol HCL…………...................... 500 mg Pyridoxin HCL .........................………. ... 10 mg Isoniazid .................................................. 200 mg
51
Lampiran 3. Gambar Alat
Spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu 1800)
Neraca analitik (MettlerToledo)
Sonikator (Branson 1510)
52
Lampiran 4. Perhitungan Pembuatan HCl 0,1N HCl pekat
= 37% setara dengan 12 N
V1 x N1
=
V2 x N2
V1 x 12 N
=
1000 mL x 0,1 N
V1
=
1000 ml x 12 N 0,1 N
=
8,3 mL
53
Lampiran 5. Bagan Alir Prosedur Penelitian 2. Pembuatan Larutan Induk Baku Isonizid
Baku Isoniazid ditimbang sebanyak 50 mg dimasukkan kedalamlabu tentukur 50 mL dilarutkan dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N LIB I Isoniazid 1000 μg/mL m dipipet12,5 dipipet 12,5 mL dimasukkan kedalam labu tentukur 25 mL dilarutkan dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N LIB II Isoniazid 100 μg/mL Dipipet 5,5 mL dimasukkan kedalam labu tentukur 50 mL dilarutkan dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N Isoniazid 11 μg/mL diukur serapan maksimum pada λ 200-400 nm λ Isoniazid= 266 nm
54
Lampiran 5. (Lanjutan) 1. Pembuatan Larutan Induk Baku Vitamin B6
Baku Vitamin B6 ditimbangsebanyak 50 mg dimasukkan kedalam labu tentukur 50mL dilarutkan dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N LIB I Vitamin B6 1000 μg/mL dipipet12,5 mL dimasukkan kedalam labu tentukur 25 mL dilarutkan dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N LIB II Vitamin B6 100 μg/mL dipipet 4 mL dimasukkankedalamlabutentukur 50 mL dilarutkan dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N Vitamin B6 8 μg/mL
diukur serapan maksimum pada λ 200-400 nm λ Vitamin B6 = 290 nm
55
Lampiran 5. (Lanjutan) 3. Pembuatan Larutan StandarIsoniazid dan Vitamin B6 LIB II Isoniazid 100 μg/mL
Standar 5 16 μg/mL
Standar 3 12 μg/mL
Standar 1 8 μg/mL
Dipipet 1,6 mL dimasukkan kedalam labu tentukur 10 mL dicukupkan dengan HCl 0,1 N
Dipipet 1,2 mL dimasukkan kedalam labu tentukur 10 mL dicukupkan dengan HCl 0,1 N
Dipipet 0,8 mL dimasukkan kedalam labu tentukur 10 mL dicukupkan dengan HCl 0,1 N
Dipipet 1 mL dimasukkan kedalam labu tentukur 10 mL dicukupkan dengan HCl 0,1 N
Dipipet 1,4 mL dimasukkan kedalam labu tentukur 10 mL dicukupkan dengan HCl 0,1 N
Standar 4 14 μg/mL
Standar 2 10 μg/mL
LIB II Vitamin B6 100 μg/mL
Standar 5 12μg/mL
Standar 3 8 μg/mL
Standar 1 4 μg/mL
Dipipet 0,6 mL dimasukkan kedalam labu tentukur 10 mL dicukupkan dengan HCl 0,1 N
Standar 2 6 μg/mL
Dipipet 1,2 mL dimasukkan kedalam labu tentukur 10 mL dicukupkan dengan HCl 0,1 N
Dipipet 0,8 mL dimasukkan kedalam labu tentukur 10 mL dicukupkan dengan HCl 0,1 N
dipipet 0,4 mL dimasukkan kedalam labu tentukur 10 mL dicukupkan dengan HCl 0,1 N
Dipipet 10 mL dimasukkan kedalam labu tentukur 10 mL dicukupkan dengan HCl 0,1 N
Standar 4 10 μg/mL
56
Lampiran5. (Lanjutan) 4. Pembuatan dan Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi Isoniazid dan Vitamin B6 Larutan Isoniazid (8; 10; 12; 14; 16 μg/mL) diukur serapan maksimum pada λ 200-400 nm ditransformasikan ke serapan derivat kedua ditentukanzero crossing ditentukan panjang gelombang analisis
λ Isoniazid = 227,40 nm dibuat kurva kalibrasi Persamaan Regresi
Larutan StandarVitamin B6 (4; 6; 8; 10; 12 μg/mL) diukur serapan maksimum pada λ 200-400 nm ditransformasikan ke serapan derivat kedua ditentukanzero crossing ditentukan panjang gelombang analisis λVitamin B6 =222,0 nm dibuat kurva kalibrasi
Persamaan Regresi
57
Lampiran 5. (Lanjutan) 5. Penentuan Kadar Sediaan Tablet 20 tablet ditimbang digerus dalam lumpang sampai halus dan homogen Serbuk ditimbangsetara0,2320 gram isoniazid dihitung kesetaraan isoniazid yang terkandung didalamnya(penimbangan dilakukan sebanyak 6 kali pengulangan) dimasukkan kedalam labu tentukur 50 mL dilarutkan dengan HCl 0,1 N dihomogenkan dengan sonikator selama 15 menit ditcukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda dihomogenkan disaring dibuang± 10 mL filtrat pertama filtrat selanjutnya ditampung dipipet 1,6 mL dimasukkan kedalam labu tentukur 10 mL dicukupkan dengan Hcl 0,1 N sampai garis tanda diukur pada λ 227,40 nm dan 222,0 nm Nilai Absorbansi dihitung Kadar
58
Lampiran 6. Spektrum Serapan Isoniazid Baku dan Vitamin B6 Baku a. Isoniazid 0,76000
0,60000
Abs.
0,40000
0,20000
0,00000 -0,06000 200,00
250,00
300,00 nm .
Spektrum serapan Isoniazid konsentrasi 8 μg/mL
Spektrum serapan Isoniazid konsentrasi 10 μg/mL
Spektrum serapan Isoniazid konsentrasi 12 μg/mL
59
350,00
400,00
Lampiran 6. (Lanjutan)
Abs.
1,00000
0,50000
0,00000 -0,09000 200,00
250,00
300,00 nm .
Spektrum serapan Isoniazid konsentrasi 14 μg/mL
Spektrum serapan Isoniazid konsentrasi 16 μg/mL
60
350,00
400,00
Lampiran 6. (Lanjutan) b. Vitamin B6 0,70000
0,60000
Abs.
0,40000
0,20000
0,00000 -0,05000 200,00
250,00
300,00 nm .
Spektrum serapan Vitamin B6 konsentrasi 4 μg/mL
Spektrum serapan Vitamin B6 konsentrasi 6 μg/mL
Spektrum serapan Vitamin B6 konsentrasi 8 μg/mL
61
350,00
400,00
Lampiran 6. (Lanjutan) 1,40000
Abs.
1,00000
0,50000
0,00000 -0,10000 200,00
250,00
300,00 nm .
Spektrum serapan Vitamin B6 konsentrasi 10 μg/mL
Spektrum serapan Vitamin B6 konsentrasi 12 μg/mL
62
350,00
400,00
Lampiran 7. Spektrum Serapan Derivat Pertama Isoniazid dan Vitamin B6 a. Isoniazid 0,01600
Abs.
0,00000
-0,05000
-0,09700 200,00
250,00
300,00 nm .
350,00
Spektrum serapan derivat pertama Isoniazid konsentrasi 8 μg/mL
Spektrum serapan derivat pertama Isoniazid konsentrasi 10 μg/mL
Spektrum serapan derivat pertama Isoniazid konsentrasi 12 μg/mL
63
400,00
Lampiran 7. (Lanjutan) 0,02200
Abs.
0,00000
-0,05000
-0,08900 200,00
250,00
300,00 nm .
350,00
Spektrum serapan derivat pertama Isoniazid konsentrasi 14 μg/mL
Spektrum serapan derivat pertama Isoniazid konsentrasi 16 μg/mL
64
400,00
Lampiran 7. (Lanjutan) b. Vitamin B6 0,01500
Abs.
0,00000
-0,02000
-0,04000
-0,04600 200,00
250,00
300,00 nm .
350,00
Spektrum serapan derivat Vitamin B6 konsentrasi 4 μg/mL
Spektrum serapan derivat pertama Vitamin B6 konsentrasi 6 μg/mL
Spektrum serapan derivat pertama Vitamin B6 konsentrasi 8 μg/mL
65
400,00
Lampiran 7. (Lanjutan) 0,03300
Abs.
0,00000
-0,05000
-0,09600 200,00
250,00
300,00 nm .
350,00
Spektrum serapan derivat pertama Vitamin B6 konsentrasi 10 μg/mL
Spektrum serapan derivat pertama Vitamin B6 konsentrasi 12 μg/m
66
400,00
Lampiran 8. Spektrum Serapan Derivat Kedua Isoniazid dan Vitamin B6 a. Isoniazid 0,02400 0,02000
Abs.
0,00000
-0,02000
-0,03200 200,00
250,00
300,00 nm .
350,00
Spektrum serapan derivat kedua Isoniazid konsentrasi 8 μg/mL
Spektrum serapan derivat kedua Isoniazid konsentrasi 10 μg/mL
Spektrum serapan derivat kedua Isoniazid konsentrasi 12 μg/mL
67
400,00
Lampiran 8. (Lanjutan) 0,02000
Abs.
0,01000
0,00000
-0,01000
-0,01700 200,00
250,00
300,00 nm .
350,00
Spektrum serapan derivat kedua Isoniazid konsentrasi 14 μg/mL
Spektrum serapan derivat kedua Isoniazid konsentrasi 16 μg/mL
68
400,00
Lampiran 8. (Lanjutan) b. Vitamin B6 0,00600 0,00500
Abs.
0,00000
-0,00500
-0,00800 200,00
250,00
300,00 nm .
350,00
Spektrum serapan derivat kedua Vitamin B6 konsentrasi 4 μg/mL
Spektrum serapan derivat kedua Vitamin B6 konsentrasi 6 μg/mL
Spektrum serapan derivat kedua Vitamin B6 konsentrasi 8 μg/mL
69
400,00
Lampiran 8. (Lanjutan) 0,01400
Abs.
0,01000
0,00000
-0,01000
-0,01600 200,00
250,00
300,00 nm .
350,00
Spektrum serapan derivat kedua Vitamin B6 konsentrasi 10 μg/mL
Spektrum serapan derivat kedua Vitamin B6 konsentrasi 12 μg/mL
70
400,00
Lampiran 9. Spektrum Serapan Panjang Gelombang Analisis Isoniazid dan Vitamin B6 0,00400
Abs.
0,00000
-0,00500
-0,01000 200,00
250,00
300,00 nm .
350,00
400,00
Spektrum serapan derivat kedua Isoniazid konsentrasi 11 μg/mL pada λ=227,4nm
Spektrum serapan derivat kedua Vitamin B6 konsentrasi 8 μg/mLpada λ=222,0 nm
Spektrum serapan derivat kedua campuran Isoniazid konsentrasi11 μg/mL dan Vitamin B6 konsentrasi 8 μg/mL
71
Lampiran 10. Data Kalibrasi Isoniazid BPFI, Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi Kalibrasi serapan derivat kedua Isoniazid pada panjang gelombang 227,40 nm Konsentrasi (μg/mL) Absorbansi No. (X) (Y) 1. 0 0,00000 2. 8 0,00193 3. 10 0,00250 4. 12 0,00296 5. 14 0,00356 6 16 0,00413 No 1 2 3 4 5 6 Σn=6
𝑎=
Y (10 -3) 0 1,93 2,50 2,96 3,56 4,13
X 0 6 9 12 15 18
XY (10 -3) 0 7,72 15,00 23,68 35,60 49,56
ΣX =60 ΣX= 15.10-2 ΣXY=13,15.10-2 X=10 Y= 2,5133.10-3
(∑ 𝑋𝑌) − (∑ 𝑋)(∑ 𝑌)/𝑛 (∑ 𝑋 2 ) −
𝑌� = 𝑎𝑋� + 𝑏
(∑ 𝑋)2 𝑛
=
X2 0 16 36 64 100 144
Y2 (10-7) 0 3,7 6,2 8,7 12,6 17,05
ΣX2 =360 ΣY2 = 48.10-5
(0,13156) − (60)(0,01508)/6 = 2,612. 10−4 (360) − (60)²/6
𝑏 = 𝑌� − 𝑎𝑋� = (2,5133. 10−3 ) − (2,612. 10−4 )(10) = 5,12. 10−5
Maka, persamaan garis regresinya adalah 𝑌 = (2,61𝑋 − 5,1). 10−5
72
Perhitungan Koefisien Korelasi (⥾)
⥾= ⥾= ⥾=
(∑ 𝑋𝑌)−(∑ 𝑋)(∑ 𝑌)/𝑛
��(∑ 𝑋 2 )−(∑ 𝑋)2 /𝑛��(∑ 𝑌 2 )−(∑ 𝑌)2 /𝑛� (0,13156)–(60)(0,01508) /6
�[(360)−(60)2 /6][(48,4 .10−5 )−(0,01508)2 /6]
0,129286 0,78016
⥾ = 0,99824
Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua Isoniazid pada panjang gelombang 227,40 nm adalah 0,99824
73
Lampiran 11. Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ) Isoniazid Persamaan garis regresinya adalah𝑌 = (2,6𝑋 − 5,1). 10−5 No. 1 2 3 4 5 6
Y(10-3) 0 19,3 25,0 29,6 35,6 41,3
X
0 8 10 12 14 16
2
∑(𝑌−𝑌𝑖) 𝑆𝐵 = � 𝑛−2
𝐿𝑂𝐷 =
Yi (10-5) -5 20,3 25,5 30,7 36,4 41,1
− 10
= �359𝑥10 6−2
3 × 𝑆𝐵 = 3 × 9,4736−4.10 𝑠𝑙𝑜𝑝𝑒 2,6.10
−5
10 × 𝑆𝐵 𝐿𝑂𝑄 = = 10 × 9,4736.10 −4 𝑠𝑙𝑜𝑝𝑒 2,6.10
Y-Yi (10-5) (Y-Yi)2 (10-10) 5 25 -10 100 -5 25 -11 121 -8 84 2 4 2 Σ (Y-Yi) 359.10-10
= 9,4736 .10-5
−5
= 1,0931 μg/mL
=
74
3,6437 μg/mL
Lampiran 12. Data Kalibrasi Baku Vitamin B6, Persamaan Regresi Dan Koefisien Korelasi Kalibrasi serapan derivat kedua Isoniazid pada panjang gelombang 227,40 nm Konsentrasi (μg/mL) (X) 0 4 6 8 10 12
No. 1. 2. 3. 4. 5. 6
Absorbansi (Y) 0,00000 0,00147 0,00230 0,00279 0,00248 0,00416
No.
X
Y (10-3)
XY (10 -2)
X2
1.
0
0
0
0
0
2.
4
1,47
5,88
49
2,1
3.
6
2,30
13,80
100
4,3
4.
8
2,79
22,32
169
6,8
5.
10
2,48
24,80
256
10,6
6.
12
4,16
49,92
361
15
Σn=6
𝑎=
ΣX= 40 � X = 6,66
ΣY= 1,32.10-2 2 2 �Y =2,2.10-3 ΣX =0,11672 ΣY =360
(∑ 𝑋𝑌) − (∑ 𝑋)(∑ 𝑌)/𝑛 (∑ 𝑋 2 ) −
𝑌� = 𝑎𝑋� + 𝑏
(∑ 𝑋)2 𝑛
=
Y2
ΣXY=38,69.10 -5
(0,11672) − (40)(0,0132)/6 = 34,2. 10−4 (360) − (40)²/6
𝑏 = 𝑌� − 𝑎𝑋� = (0,002211) − (34,2. 10−4 )(6,66) = 8,2. 10−5
Maka, persamaan garis regresinya adalah 𝑌 = (34,2𝑋 + 8,2). 10−5
75
Perhitungan Koefisien Korelasi (⥾)
⥾= ⥾= ⥾=
(∑ 𝑋𝑌)−(∑ 𝑋)(∑ 𝑌)/𝑛
��(∑ 𝑋 2 )−(∑ 𝑋)2 /𝑛��(∑ 𝑌 2 )−(∑ 𝑌)2 /𝑛� (0,11672)–(40)(0,0132) /6
�[(360)−(40)2 /6][(38 .10−5 )−(0,0132)2 /6]
0,02872 0,03001
⥾ = 0,99671
Maka,koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua Isoniazid pada panjang gelombang 270,40 nm adalah 0,99671.
76
Lampiran 13. Perhitungan Batas Deteksi(LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ) Vitamin B6 Persamaangaris regresinya adalah 𝑌 = (34,2𝑋 + 8,2). 10−5 No. 1 2 3 4 5 6
Y(10-3) 0 1,47 2,30 2,79 3,48 4,16
X 0 4 6 8 10 12
2
∑(𝑌−𝑌𝑖) 𝑆𝐵 = � 𝑛−2
𝐿𝑂𝐷 =
Yi (10-3) 8,1 1,44 2,12 2,80 3,48 4,16
− 10
= �398.10 6−2
−5
3 ×𝑆𝐵 .10 = 3 × 9,9749−4 𝑠𝑙𝑜𝑝𝑒 34,2.10
𝐿𝑂𝑄 =
10 ×𝑆𝐵 𝑠𝑙𝑜𝑝𝑒
=
=9,9749 .10-5
10 × 9,9749.10−5 34,2.10−4
Y-Yi (10-5) 8 3 18 -1 0 0 Σ (Y-Yi)2
= 0,8801 μg/mL
= 2,9337 μg/mL
77
(Y-Yi)2 (10-10) 64 9 324 1 0 0 398.10-10
Lampiran 14. Spektrum Serapan Derivat Kedua Pada Sampel 0,01000
Abs.
0,00000
-0,01000
-0,02000
-0,02500 200,00
250,00
300,00 nm .
Spektrum serapan sampel P pengukuran pertama
Spektrum serapan sampel P pengukuran kedua
Spektrum serapan sampel P pengkuran ketiga
78
350,00
400,00
Lampiran 14. (Lanjutan) 0,00700
0,00500
Abs.
0,00000
-0,00500
-0,01000
-0,01200 200,00
250,00
300,00 nm .
Spektrum serapan sampel P pengukuran keempat
Spektrum serapan sampel P pengukuran kelima
Spektrum serapan sampel P pengukuran keenam
79
350,00
400,00
Lampiran 15. Perbandingan Spektrum Serapan Derivat Kedua Campuran Isoniazid Konsentrasi 11 μg/mL Dan Vitamin B6 Konsentrasi 8 μg/mL Dengan Spektrum Serapan Derivat Kedua Sampel 0,01000
0,00500
Abs.
0,00000
-0,00500
-0,01000
-0,01500 200,00
250,00
300,00 nm .
80
350,00
400,00
Lampiran 16. Hasil Analisis Kadar Isoniazid dan Vitamin B6 dalam Sampel 1. Kadar Isoniazid dalam Sediaan tablet
Penimban Nama Sediaan gan(g)
Tablet P
Setara (mg)
Absorbans Konsentra Konsent ipada rasi siteoritis λ=227,40 (μg/mL) praktek(μg/ nm mL)
Kadar %
0,2320
49,9892
0,00273
10,9976
10,6923
99,02
0,2322
50,7845
0,00279
11,0071
10,9230
101,07
0,2324
50,0754
0,00278
11,0165
10,8846
100,63
0,2323
50,0538
0,00276
10,8076
99,96
0,2323
50,0538
0,00272
11,0118
10,6538
98,53
0,2320
49,9892
0,00278
10,9976
10,8846
100,80
11,0118
2. Kadar Vitamin B6 dalam sediaan tablet
Penimban Nama Sediaan gan(g)
Tablet P
Setara (mg)
Absorba nsipada λ=249,6nm
Konsentr asi teoritis (μg/mL)
Konsentr asi praktek (μg/mL)
Kadar %
0,2320
2,49943
0,00287
7,9982
8,2058
102,54
0,2322
2,5016
0,00287
8,0051
8,2058
102,45
0,2324
2,5037
0,00290
8,0120
8,2924
103,46
0,2323
2,5026
0,00282
8,0086
8,0588
100,57
0,2323
2,5026
0,00290
8,0086
8,2941
103,51
0,2320
2,4994
0,00283
7,9982
8,0882
101,07
81
Lampiran 17. Contoh Perhitungan Penetapan Kadar Isoniazid dan Vitamin B6 dalam Sampel Berat 20 tablet = 18,5640 gram Ditimbang sampel setara dengan 50 mg Isoniazid, maka jumlah sampel yang ditimbang adalah;
x1 = (20
= 0,2320 g
50 mg
x 200 mg)
x 18,5640 g
Kemudian dihitung kesetaraan Isoniazid yang terkandung dalam 0,2320 g sampel ini.
x2 =
0,2320 g
(18,5640 g)
x (20x 10 mg)
= 2,4995mg
Dilarutkan denganHCl 0,1 N dengan kuantitatif dalam labu tentukur 50 mL sampai garis tanda. Larutan kemudian dihomogenkan dengan pengaduk ultrasonik selama 15 menit. Larutan tersebut kemudian disaring, lebih kurang 10 mL filtrat pertama dibuang. filtrat selanjutnya ditampung. Konsentrasi Isoniazid =
50 mg x1000μg = 1000 μg/mL (50 mL)
Konsentrasi Vitamin B6=
2,4995 mg (50 mL)
x1000μg = 50 μg/mL
Kemudian dari larutan filtrat ini, dipipet 0,11 mL dan dimasukkan kedalam labu tentukur 10 mL dan diencer kandengan HCl 0,1 N hingga garis tanda.
Konsentrasi Isoniazid =
1000 µg/mL x 0,11 mL (10 mL)
82
=11μg/mL
50 µg/mL x 0,11 mL = 0,55μg/mL (10 mL) Konsentrasi Vitamin B6 = 8-0,55 = 7,45 μg/mL (adisi)
Konsentrasi Vitamin B6 =
50µg/mL x 1,49 mL Konsentrasi Isoniazid dari LIB = = 7,45μg/mL (10 mL)
Maka Volume analisis Isoniazid adalah
= (Isoniazid awal + Isoniazid yang ditambahkan) = 0,11 mL + 1,49 mL = 1,6 mL Jadi =
1,6
µg/mL
x 50 mL = 8 μg/mL (10 mL)
83
Misalnya berat yang ditimbang adalah 0,2322g, maka terlebih dahulu dihitung kesetaraan dengan Isoniazid danVitamin B6. Kesetaraan dengan Isoniazid =
Konsentrasi=
50,0323 mg 50 mL
0,2322 g
18,5640 g
x ( 20 x 200 mg ) = 50,0323mg
x 1000 μg = 1000,64 μg/mL
Konsentrasi akhir teoritis Isoniazid =
1000,64 µg/mL 10 mL
x 0,11 mL = 11,0071 μg/mL
Kesetaraan dengan Vitamin B6 = Konsentrasi =
2,5016 mg 50 mL
0,2322 g
18,5640 g
x (20 x 10 mg) = 2,5016 mg
x 1000 μg = 50,032 μg/mL
Konsentrasi teoritis Vitamin B6 =
50,032 µg/mL 10 mL
x 1,6 mL = 8,0051 μg/mL
Absorbansi Isoniazid pada derivat kedua pada panjang gelombang 227,40 nm adalah 0,00279. Kadar dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis Isoniazid Y= (26,1 x 10-4)X - (5,2 x 10-5) Y
=
(26,1 x 10-4)X - (5,2 x 10-5)
0,00279
=
(26,1 x 10-4)X - (5,2 x 10-5)
0,00279 + 0,000052
=
(26,1 x 10-4)X
X
=
284x 10−3
X
=
Konsentrasi praktek:
Kadar Isoniazid =
10,9230µg/mL
11,0071 µg/mL
26,1 x 10−4
10,9230μg/mL x 101,85 % = 101,07 %
84
Absorbansi Vitamin B6 pada derivat kedua pada panjang gelombang 222 nm adalah 0,00287. Kadar dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis Vitamin B6 Y = (34,1 x 10-4)X + (8,2 x 10-5) =
(34,1 x 10-4)X + (8,2 x 10-5)
0,00287
=
(34,1 x 10-4)X + (8,2 x 10-5)
0,00287- 0,000082
=
(34,1 x 10-5 )X
X
=
279x 10−3
X
=
Konsentrasi praktek:
Kadar Vitamin B6 =
Y
8,2058 µg/mL 8,0051 µg/mL
34,1 x 10−5
8,2058μg/mL
x 99,95 % = 102,45%
Absorbansi Vitamin B6 pada derivate kedua pada panjang gelombang 222 nm adalah 0,00287. Kadar dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis Vitamin B6 Y = (34,1 x 10-4)X + (8,2 x 10-5) =
(34,1 x 10-4)X + (8,2 x 10-5)
0,00287
=
(34,1 x 10-4)X + (8,2 x 10-5)
0,00287- 0,000082
=
(34,1 x 10-5 )X
X
=
279x 10−3
X
=
Konsentrasi praktek:
Kadar Vitamin B6 =
Y
8,2058 µg/mL 8,0051 µg/mL
34,1 x 10−5
8,2058μg/mL
x 99,95 % = 102,45%
85
Lampiran 18. Perhitungan Statistik Isoniazid pada sediaan Tablet P
SD
2
∑�𝑋−𝑋�
=�
𝑛−1
5,2172 =� 6−1 5,2172 =� 5
= 1,0215
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1= 5, maka t(α/2,dk) = 4,0321 Data diterima jika t hitung < t tabel t hitung 1
t hitung 2
t hitung 3
=�
𝑋−𝑋 � 𝑆𝐷⁄√𝑛
=�
𝑋−𝑋 � 𝑆𝐷⁄√𝑛
=�
=� =�
𝑋−𝑋 � 𝑆𝐷⁄√𝑛
−0,99 � = 2,37523 1,0215⁄√6
=�
1,06 � = 2,5431 1,0215⁄√6
0,62 � = 1,4875 1,02150⁄√6
86
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=�
𝑋−𝑋 � 𝑆𝐷⁄√𝑛
=�
−0,05 � = 0,1199 1,0215⁄√6
=�
𝑋−𝑋 � 𝑆𝐷⁄√𝑛
=�
0,79 � = 1,8953 1,0215⁄√6
=�
𝑋−𝑋 � 𝑆𝐷⁄√𝑛
=�
−1,45 � = 3,4788 1,0215⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima. Kadar Isoniazid dalam tablet:
μ
=𝑋 ± (tα/2, dk) x SD/√n) = 100,01 ± (4,0321 x 1,0215/√6) = (100,01 ± 1,6815) %
87
Lampiran 19. Perhitungan Statistik Vitamin B6 pada Tablet P X Kadar (%) 102,54 102,45 103,46 100,57 103,51 101,07 𝑋 = 102,26
No. 1 2 3 4 5 6
SD
(𝑋 − 𝑋)
(𝑋 − 𝑋)2
0,28 0,19 1,2 -1,69 1,25 -1,19
0,0784 0,0361 1,44 2,8561 1,5625 1,4161 Σ(𝑋 − 𝑋)2 = 7,3892
2
∑�𝑋−𝑋� =� 𝑛−1
7,3892 =� 6−1 7,3892 =� 5
= 1,2156
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1= 5, maka t(α/2,dk) = 4,0321 Data diterima jika t hitung < t tabel t hitung 1
t hitung 2
t hitung 3
𝑋−𝑋 � 𝑆𝐷⁄√𝑛
=�
𝑋−𝑋 � 𝑆𝐷⁄√𝑛
=�
=� =� =�
𝑋−𝑋 � 𝑆𝐷⁄√𝑛
=�
0,28 � = 0,5642 1,2156⁄√6
0,19 � = 0,3829 1,2156⁄√6 1,2
�= 2,4183
1,2156⁄√6
88
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=� =� =�
𝑋−𝑋 � 𝑆𝐷⁄√𝑛 𝑋−𝑋 � 𝑆𝐷⁄√𝑛 𝑋−𝑋 � 𝑆𝐷⁄√𝑛
=� =� =�
−1,69 � = 3,4058 1,2156⁄√6 1,25
� = 2,5191
01,2156⁄√6
−1,19 � = 2,3982 1,2156⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima Kadar Vitamin B6 dalam Tablet Pulna® Forte:
μ
=𝑋 ± (tα/2, dk) x SD/√n) = 102,26 ± (4,0321 x 1,2156/√6) = (102,26 ± 2,0010) %
89
Lampiran 20. Spektrum Serapan Tablet P pada Uji Perolehan Kembali
Spektrum serapan perolehan kembali 80% pengkuran pertama pada tablet P
Spektrum serapan perolehan kembali 80% pengukuran kedua pada tablet P
Spektrum serapan perolehan kembali 80% pengukuran ketiga pada tablet P
90
Lampiran 20. (Lanjutan)
Spektrum serapan perolehan kembali 100 % pengukuran pertama pada tablet P
Spektrum serapan perolehan kembali100 % pengukuran kedua pada tablet P
Spektrum serapan perolehan kembali 100 % pengukuran ketiga pada tablet P
91
Lampiran 20. (Lanjutan) 0,01000
Abs.
0,00000
-0,01000
-0,02000
-0,02800 200,00
250,00
300,00 nm .
350,00
400,00
Spektrum serapan perolehan kembali 120% pengukuran pertama pada tablet P
Spektrum serapan perolehan kembali 120% pengukuran kedua pada tablet P
Spektrum serapan perolehan kembali 120% pengukuran ketiga pada tablet P
92
Lampiran 21. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Isoniazid pada Tablet tersebut dengan Metode Penambahan Baku (Standard Addition Method)
Konsentrasi Setelah Sebelum Absorbansi No Konsentrasi padaλ= penambahan penambahan % 227,40n baku baku m mg mg 1. 0,00226 40,3846 27,9812 2. 0,00225 40,2097 27,9812 80 3. 0,00226 40,3846 27,9812 4. 0,00282 50,1748 34,9784 5. 0,00283 50,3496 34,9784 100 6. 0,00283 50,3496 35,3535 7. 0,00343 60,8391 41,9826 8. 0,00343 60,8391 42,0257 120 9. 0,00345 61,1888 42,0688 Rata-rata (%recovery) Standard Deviation (SD) Relative Standard Deviation (RSD)(%)
93
Baku yang ditambahkan mg 12,222 12,222 12,222 15,2775 15,2775 15,2775 18,333 18,333 18,333
Persen perolehan kembali (%) 101,48 100,05 101,48 99,47 100,61 98,15 102,85 102,62 104,29 101,22 1,88 1,86
Lampiran 22. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Vitamin B6 pada Tablet P dengan Metode Penambahan Baku (Standard AdditionMethod)
No Konsentrasi %
Absorbansi padaλ= 222 nm
Konsentrasi Setelah Sebelum penambahan penambahan baku baku mg mg 2,0221 1,43 2,0312 1,43 2,0221 1,43 2,5184 1,7491 2,5184 1,7491 2,5184 1,7501 3,0055 2,0988 3,0055 2,1020 3,0055 2,1031
1. 0,00228 80 2. 0,00229 3. 0,00228 4. 0,00282 100 5. 0,00282 6. 0,00282 7. 0,00335 120 8. 0,00335 9. 0,00335 Rata-rata (%recover) Standard Deviation (SD) Relative Standard Deviation (RSD) (%)
94
Baku yang ditambahkan mg 0,5997 0,5997 0,5997 0,7638 0,7638 0,7638 0,9160 0,9166 0,9166
Persen perolehan kembali (%) 98,73 100,25 98,73 100,72 100,72 100,58 98,92 98,57 98,45 99,51 1,01 1,02
Lampiran 23.Contoh Perhitungan Persentase Perolehan Kembali (%recovery) Sampel yang digunakan adalah tablet P Berat 20 tablet P = 18,5640g Berat kesetaraan penimbangan sampel pada penetapan kadar = 50 mg Perolehan 80% Isoniazid 80% =
80
100
x 50 mg = 40 mg
Analit Isoniazid 70% =
70 x 40 mg = 28 mg 100
Penimbangan serbuk sampel setara 28 mg Isoniazid Sampel yang ditimbang
Baku Isoniazid 30% =
=
30
100
28 mg
20 x 200 mg
x 18,5640 g = 0,1299 g
x 40 mg = 12 mg
Jumlah Vitamin B6 dalam serbuk analit yang ditimbang : =
0,1299 g
18,5640 g
x (20x 10 mg)= 1,3995 mg
Baku Vitamin B6 yang ditambahkan : =
30 40mg 10mgx = 0,6 mg 100 200mg
Perolehan100% Vitamin B6 100% =
100 100
x 50 mg = 50 mg
sampel Vitamin B6 70% =
70
100
x 50 mg = 35 mg
Penimbangan serbuk sampel setara 35 mg Isoniazid
95
35 mg
Sampel yang ditimbang =
Baku Isoniazid 30% =
30
x 18,5640 g = 0,1624 g
20 x 200 mg
100
x 50 mg = 15 mg
Vitamin B6 dalam serbuk sampel yang ditimbang : 0,1624 g
=
18,5640 g
x (20x 10 mg)= 1,75 mg
Baku Vitamin B6 yang ditambahkan : =
30 50mg 10mgx 100 200mg = 0,75 mg
Perolehan 120% Isoniazid 120% =
120
100
x 50 mg = 60 mg
sampel Isoniazid 70% =
70
100
x 60 mg =42 mg
Penimbangan serbuk analit setara 42 mg Isoniazid Sampel yang ditimbang =
Baku Isoniazid 30% =
42 mg
20 x 200 mg
30
100
x 18,5640 g = 0,1949 g
x 60 mg = 18 mg
Jumlah Vitamin B6 dalam serbuk sampel yang ditimbang :
=
0,1949 g
18,5640 g
x (20x 10 mg) = 2,0997 mg
Baku Vitamin B6 yang ditambahkan : =
30 60mg 10mgx = 0,9 mg 100 200mg
96
Misalnya absorbansi analisis (Y) pada perolehan 80% Isoniazid (227,40 nm)
= 0,00226
Vitamin B6 (222 nm)
= 0,00228 Persamaan regresi pada panjang gelombang
analisis Isoniazid (λ=227,40 nm): Y = (26,1 x 10-4)X - (5,2 x 10-5) Konsentrasi Isoniazid: Y
= (26,1 x 10-4)X - (5,2 x 10-5)
0,00226
= (26,1 x 10-4)X - (5,2 x 10-5) = (26,1 x 10-5 )X
0,00226+ 0,00005 X X
=
23,1 x 10−3 26,1 x 10−4
= 8,8846 μg/mL
Konsentrasi awal setelah penambahan bahan baku (CF): =
Konsentrasi Isoniazid (µg/mL)
=
8,8846 µg/mL
1000
1000
x faktor pengenceran
x 4545,4545 mL
= 40,3846 mg Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (CA): = sampel Isoniazid 70% x kadar rata-rata sampel =27,9784 mg x 100,01 % = 27,98 mg Jumlah baku yang ditambahkan (C*A): = Baku Isoniazid 30% (yang ditambahkan) x% kadar baku Isoniazid = 12mg x 101,85% = 12,222
97
Maka % perolehan kembali Isoniazid:
% perolehan kembali =
CF −CA C∗ A
Keterangan:
x 100 %
CF = Konsentrasi awal setelah penambahan bahan baku CA= Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku C*A = Jumlah baku yang ditambahkan % perolehan kembali =
40,3846 mg – 27,9812 mg 12,222 mg
x 100%
= 101,48%
Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis Vitamin B6 (λ= 222 nm): Y =(34,1 x 10-4)X +(8,2 x 10-5) =
(34,1 x 10-4)X +(8,2x 10-5)
0,00228
=
(34,1 x 10-4)X +(8,2 x 10-5)
0,00228 - 0,00008
=
(34,1 x 10-4)X
Konsentrasi betametason :
Y
X = X =
22 x 10−3
34,1 x 10−4
6,4706 μg/mL
Konsentrasi awal setelah penambahan bahan baku (CF): =
Konsentrasi Vitamin B6 (µg/mL)
=
6,4706 µg/mL 1000
1000
x 312,5 mL
= 2,0221 mg
98
x faktor pengenceran
Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (CA): = Jumlah Vitamin B6 dalam serbuk analit yang ditimbang x % kadar rata-rata sampel = 0,3991 mg x102,26% = 1,43mg Jumlah baku yang ditambahkan (C*A): = Baku vitamin B6 yang ditambahkan x % kadar bakuVitamin B6 = 0,6 mg x 99,95% = 0,5997 mg Maka % perolehan kembali Vitamin B6
% perolehan kembali =
CF −CA
Dimana :
C∗ A
x 100 %
CF = Konsentrasi awal setelah penambahan bahan baku CA = Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku C*A= Jumlah baku yang ditambahkan % perolehan kembali =
2,0221 mg – 1,43 mg 0,5997mg
= 98,73%
99
x 100%
Lampiran 24.
No
Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar deviasi Perolehan Kembali Isoniazid pada Tablet P
Kadar Perolehan Kembali [X] (%)
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.
101,48 100,05 101,48 99,47 100,61 98,15 102,85 102,62 104,29 X= 101,22
Xi-X
(Xi–X)2
-0,26 1,17 -0,26 1,75 0,61 3,07 -1,63 -1,4 -3,67
0,0676 1,3689 0,0676 3,0625 0,3721 9,4249 2,6569 1,9600 9,4249 Ʃ=28,4054
� )2 ∑(Xi−X SD = � n−1 28,4045 =� 8
= 1,88
SD RSD= � x 100% X
=
1,88
x 100% 101,22
=1,86%
100
Lampiran 25.
Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar deviasi perolehan kembali Vitamin B6 pada Tablet P
Kadar Perolehan Kembali [X] (%)
No 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.
Xi-X
(Xi–X)2
98,73 100,25 98,73 100,72 100,72 100,58 98,92
0,78 -0,74 0,78 -1,21 -1,21 -1,07 0,59
0,6084 0,5476 0,6084 1,4641 1,4641 1,1449 0,3481
98,57 98,45 X =99,51
0,94 1,06
0,8836 1,1236 Ʃ=8,1928
� )2 ∑(Xi−X SD = � n−1 8,1928
=�
= 1,01
RSD
= =
8
SD x 100% � X 1,01
x 100% 99,51
= 1,02 %
101
Lampiran 26. Data hasil pengukuran derivat kedua Isoniazid 11 μg/mL, Vitamin B6 8 μg/mL dan Campuran Isoniazid 11 μg/mL dan Vitamin B6 8 μg/mL.
102
Lampiran 27. Daftar Nilai Distribusi t
103
Lampiran 28. Sertifikat Pengujian Isoniazid
104
Lampiran 29. Sertifikat Pengujian Vitamin B6
105
