Lampiran 1. Rancangan Penelitian Fermentasi Markisa Ungu selama 72 jam
Pengenceran bertingkat hingga pengenceran 10-9
Plating dengan metode tuang
Pemurnian dengan metode gores
Penyimpanan isolat dalam media agar miring
Identifikasi Makroskopik
Identifikasi Mikroskopik
Gram Positif
Katalase negatif
Identifikasi tingkat genus Identifikasi spesies dengan Microbact 12
Pengujian eksopolisakarida kasar
Isolat BAL penghasil eksopolisakarida
89
Endospora negatif
Lampiran 2. Diagram Alir Penelitian a. Sterilisasi Alat Alat ditutup dengan aluminium foil atau plastik tahan panas. dimasukkan dalam autoklaf pada suhu 121 ºC dan tekanan 15 psi. disterilkan selama 15 menit. Hasil
b. Pembuatan Media MRSA 34,1 gram media Ditambahkan 500 mL aquades Dipanaskan di atas Hot Plate and Stirer hingga mendidih Dimasukkan ke dalam erlenmeyer dan ditutup kapas Dimasukkan ke dalam plastik tahan panas Disterilisasi di dalam autoklaf pada suhu 121 ºC selama 15 menit Hasil
c. Pembuatan Media MRSB 27,5 gram media Ditambahkan 500 mL aquades Dipanaskan di atas Hot Plate and Stirer Dimasukkan ke dalam erlenmeyer dan ditutup kapas Dimasukkan ke dalam plastik tahan panas Disterilisasi di dalam autoklaf pada suhu 121 ºC selama 15 menit Hasil
90
d. Pembuatan Media Pepton Water 2,55 gram media Ditambahkan 100 mL aquades Dipanaskan di atas Hot Plate and Stirer Dimasukkan ke dalam erlenmeyer dan ditutup kapas Dimasukkan ke dalam plastik tahan panas Disterilisasi di dalam autoklaf pada suhu 121 ºC selama 15 menit Hasil
e. Fermentasi Markisa Ungu (Passiflora edulis var. Sims) Isi buah markisa ungu Dibungkus daun pisang Ditempatkan dalam wadah fermentasi, dikondisikan anaerob Difermentasi selama 72 jam pada suhu ruang Hasil
f. Isolasi BAL dari Markisa Ungu Terfermentasi 5 gr isi buah markisa ungu terfermentasi Dimasukkan ke dalam 45 mL MRSB dan dihomogenkan Diinkubasi pada suhu 37 ºC selama 24 jam Diencerkan bertingkat hingga pengenceran 10-9 Pengenceran 10-8 dan 10-9 Plating dengan metode tuang Diinkubasi pada suhu 37 ºC selama 48 jam Koloni dimurnikan dengan metode gores Diinkubasi pada suhu 37 ºC selama 48 jam Isolat murni dibiakkan pada media agar miring, disimpan pada suhu 4 ºC Hasil
91
g. Produksi Eksopolisakarida Kasar Termodifikasi (Dijkhuizen, 1998 dan Halim, 2013) 25 mL inokulum BAL 24 jam Disentrifugasi 5000 rpm pada 4°C selama 30 menit 10 mL Supernatan
Pellet
Ditambahkan 20 mL aseton teknis Disimpan pada suhu 4°C selama semalam Ditimbang 2 tabung sentrifuge 15 mL (kosong) Ditambahkan 15 mL larutan pada masing-masing tabung Disentrifugasi 5000 rpm pada 4°C selama 30 menit Pellet
Supernatan Dilarutkan dalam 10 mL aquades steril Ditambahkan 250 ɥL asam trikloroasetat 80% Disimpan pada suhu 4°C selama semalam Disentrifugasi 5000 rpm pada 4°C selama 30 menit Supernatan
Pellet Dikeringkan pada suhu 100 °C Ditimbang berat kering EPS beserta tabung
Berat EPS dan tabung dikurangi berat tabung kosong Penimbangan diulang hingga didapatkan berat konstan (± 0,02 mg) Hasil
92
Lampiran 3. Diagram Alir Identifikasi Bakteri Asam Laktat
93
Lampiran 4. Hasil Identifikasi Bakteri Asam Laktat Menggunakan Microbact 12 Jenis Tes Kode Isolat T1 T2 T3 BGP Positif Positif Positif SPORA Negatif Negatif Negatif Fermentasi Gula-Gula Arabinosa Negatif Negatif Negatif Fruktosa Positif Positif Positif Glukosa Positif Positif Positif Laktosa Negatif Positif Positif Maltosa Negatif Negatif Negatif Mannitol Negatif Negatif Negatif Raffinosa Negatif Negatif Negatif Rhamnosa Negatif Negatif Negatif Salicin Negatif Negatif Negatif Sorbitol Negatif Negatif Negatif Sukrosa Negatif Negatif Negatif Xylosa Negatif Negatif Negatif Suhu Pertumbuhan 250 C Positif Positif Positif 0 37 C Positif Positif Positif 400 C Negatif Negatif Negatif 450 C Negatif Negatif Negatif Uji NaCl 3% Positif Positif Positif 4% Positif Positif Positif 6,5% Positif Positif Positif 10% Positif Positif Positif Uji Karakteristik Katalase Negatif Negatif Negatif Motilitas Positif Positif Positif Oksidase Negatif Negatif Negatif Proteolitik Positif Positif Positif Amilolitik Positif Positif Positif Lipolitik Negatif Negatif Negatif Media Pertumbuhan Nutrient Broth Negatif Negatif Negatif MCA Negatif Negatif Negatif TSI A/A, H2S-, GA/A, H2S-, G- A/A, H2S-, GCITRAT Negatif Negatif Negatif INDOL Negatif Negatif Negatif MR Negatif Negatif Negatif VP Negatif Negatif Negatif DX. Laboratorium L. heterohiochii L. bulgaricus L. bulgaricus 94
Lampiran 5. Perhitungan EPS Kasar
Isolat (gr/10 mL) Isolat T1 (Lactobacillus heterohiochii) Isolat T2 (Lactobacillus bulgaricus 1) Isolat T3 (Lactobacillus bulgaricus 2) Isolat Kontrol (Lactobacillus casei)
Ulangan ke (gr/10 mL) Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3
Berat tabung 1 (gr/10 mL) 6,649 6,6345 6,6523 6,692 6,7067 6,6624 6,599 6,6002 6,6457 6,715 6,661 6,6628
Berat Berat EPS tabung 1+ 1 (gr) EPS (gr) 6,6642 0,0152 6,6447 0,0102 6,6542 0,0019 6,7092 0,0172 6,7219 0,0152 6,6711 0,0087 6,605 0,006 6,6152 0,015 6,6589 0,0132 6,718 0,003 6,683 0,022 6,6667 0,0039
Berat tabung 2 (gr) 6,624 6,7033 6,7016 6,799 6,6973 6,6414 6,814 6,8169 6,6647 6,668 6,821 6,8229
Berat Berat EPS tabung 2+ 2 (gr) EPS (gr) 6,6357 0,0117 6,7108 0,0075 6,7088 0,0072 6,8091 0,0101 6,7027 0,0054 6,6471 0,0057 6,8295 0,0155 6,8285 0,0116 6,6689 0,0042 6,672 0,004 6,8301 0,0091 6,825 0,0021
Jumlah EPS (gr) 0,0269 0,0177 0,0091 0,0273 0,0206 0,0144 0,0215 0,0266 0,0174 0,007 0,0311 0,006
Isolat T1 (Lactobacillus heterohiochii) EPS Kasar = 0,0179 gr/10 mL = 1,79 gr/L = 1790 mg/L
Isolat T3 (Lactobacillus bulgaricus 2) EPS Kasar = 0,0218 gr/10 mL = 2,183 gr/L = 2183 mg/L
Isolat T2 (Lactobacillus bulgaricus 1) EPS Kasar = 0,02077 gr/10 mL = 2,077 gr/L = 2077 mg/L
Isolat Kontrol (Lactobacillus casei) EPS Kasar = 0,0147 gr/10 mL = 1,47 gr/L = 1470 mg/L 95
Rata-Rata (gr/10mL) 0,0179 0,02077 0,02183 0,0147
Lampiran 6. Dokumentasi Penelitian
Pembuatan Pepton Water
Autoklaf
Pembuatan MRS Broth
Inkubator
Rotary Shaker Incubator
Pembuatan MRS Agar
Timbangan Analitik
Laminar Air Flow (LAF)
96
Oven
Hot Plate & Stirer
Isolasi tahap 1 Pour Plate
Isolasi tahap 2 Streak Plate
Morfologi isolat T1
Morfologi isolat T2
97
Mikropipet dan Blue tip
Isolasi tahap 3 Pemurnian
Morfologi isolat T3
Morfologi sel isolat T1
Morfologi sel isolat T2
Inokulum bakteri untuk peremajaan
Pengujian eksopolisakarida kasar
Morfologi sel isolat T3
Inokulum bakteri untuk perlakuan
Penambahan aseton teknis
98
Eksopolisakarida kasar yang diperoleh
KEMENTERIAN AGAMA RI UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN)MAULANA MALIK IBRAHIM MALANG FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
Jl. Gajayana No. 50 Malang (0341)558933Fax.(0341) 558933
BUKTI KONSULTASI SKRIPSI Nama NIM Fakultas/Jurusan Judul Skripsi Fermentasi Pembimbing I No. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17.
: Fatimatuz Zahro’ : 10620051 : Sains dan Teknologi/Biologi : Isolasi dan Identifikasi Bakteri Asam Laktat Asal Markisa Ungu Sebagai Penghasil Eksopolisakarida : Ir. Liliek Harianie, A.R., M. P.
Tanggal 6 Januari 2014 24 Januari 2014 5 Februari 2014 19 Februari 2014 6 Maret 2014 26 Maret 2014 4 April 2014 27 Agustus 2014 22 September 2014 26 September 2014 2 Oktober 2014 16 Oktober 2014 23 Oktober 2014 30 Oktober 2014 3 November 2014 7 November 2014 10 November 2014
HAL Konsultasi Judul Konsultasi BAB I, II Revisi BAB I, II Revisi BAB I, II Konsultasi BAB I, II, III Revisi BAB I, II, III Revisi BAB I, II, III Konsultasi Data Konsultasi BAB IV Revisi BAB IV Revisi BAB IV Revisi BAB IV Revisi BAB IV Konsultasi BAB IV, V Revisi BAB IV, V Revisi BAB IV, V ACC Skripsi
1.
Tanda Tangan
3. 5. 7. 9. 11. 13. 15. 17.
2. 4. 6. 8. 10. 12. 14. 16.
Malang, 12 November 2014 Mengetahui, Ketua Jurusan Biologi
99
Dr. Evika Sandi Savitri, M.NIP. 19741018 200312 2 002 KEMENTERIAN AGAMA RI UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN)MAULANA MALIK IBRAHIM MALANG FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
Jl. Gajayana No. 50 Malang (0341)558933Fax.(0341) 558933
BUKTI KONSULTASI SKRIPSI Nama NIM Fakultas/Jurusan Judul Skripsi Fermentasi Pembimbing II No. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.
: Fatimatuz Zahro’ : 10620051 : Sains dan Teknologi/Biologi : Isolasi dan Identifikasi Bakteri Asam Laktat Asal Markisa Ungu Sebagai Penghasil Eksopolisakarida : Dr. H. Ahmad Barizi, M. A.
Tanggal 29 Januari 2014 4 Februari 2014 19 februari 2014 12 Maret 2014 21 Maret 2014 17 September 2014 14 Oktober 2014 22 Oktober 2014 6 November 2014 10 November 2014
HAL Konsultasi BAB I, II Agama Revisi BAB I, II, III Agama Revisi BAB I, II, III Agama Revisi BAB I, II, III Agama Revisi BAB I, II, III Agama Konsultasi BAB IV, V Agama Revisi BAB IV, V Agama Revisi BAB IV, V Agama Revisi BAB IV, V Agama ACC Skripsi
1. 3. 5. 7. 9.
Tanda Tangan 2. 4. 6. 8. 10.
Malang, 12 November 2014 Mengetahui, Ketua Jurusan Biologi
100
