Kapilláris elektroforézis lehetőségei Szabó Zsófia Országos Gyógyintézeti Központ Immundiagnosztikai Osztály
¾ Elektroforetikus elválasztás alapja: az oldott anyagok elektromos térben különböző sebességgel vándorolnak ¾ Kapilláris elektroforézis: az elválasztás puffer oldattal töltött kapillárisban történik
¾ Előnyei: - jó felbontás - rövid mérési idő - automatizálható (Gáspár A.: Kapilláris elektroforézis)
Elméleti áttekintés ¾ Elektromos térben az oldott anyagok különböző sebességgel vándorolnak, töltésüknek és tömegüknek megfelelően: • kis méret, nagy töltés – nagy mozgékonyság/gyors
Elméleti áttekintés ¾ Elektromos térben az oldott anyagok különböző sebességgel vándorolnak, töltésüknek és tömegüknek megfelelően: • kis méret, nagy töltés – nagy mozgékonyság/gyors • nagy méret, kis töltés – kis mozgékonyság/ lassú
¾ elektroozmotikus áramlás (EOF)
a kapilláris belső fala negatív
szolvatált kationok rendeződnek a felület közelébe szolvatált kationok vándorolnak a negatív elektród felé, a többi részecskét is vonszolják magukkal (Gáspár A.: Kapilláris elektroforézis)
Különböző részecskék vándorlása a kapilláris elektroforézis során:
Az áramlás hajtóereje egyenletesen oszlik el, következmény: lapos áramlási profil – éles zónák: (az elekroozmotikus áramlás szabályozható, de a rutin laboratóriumban beállított, standard körülményeket alkalmazunk)
Detektálás: OD, λ = 200 nm - „tükörkép” - β1 és β2 frakció különválik Alfa-2:
- nagy felbontóképesség/ érzékenység - normál tartomány (%): albumin: 55,8-66,1 alfa-1: 2,9-4,9 alfa-2: 7,1-11,8 béta (1+2): 8,4-13,1 gamma: 11,1-18,8
haptoglobin ceruloplasmin α2 macroglobulin α lipoprotein
Albumin Alfa-1:
Béta2
β lipoprotein C3 complement CRP
Béta1
Gamma
α1 antitrypsin transferin- IgG, IgA, IgM, orosomucoid hemopexin (IgD, IgE) α1 antichymotrypsin
Albumin frakció: bisalbuminaemia
Alfa-2: haptoglobin ceruloplasmin α2 macroglobulin α lipoprotein
Albumin Alfa-1:
Béta2
β lipoprotein C3 complement CRP
Béta1
Gamma
α1 antitrypsin transferin- IgG, IgA, IgM, orosomucoid hemopexin (IgD, IgE) α1 antichymotrypsin
albumin
alfa-1
alfa-2
béta
gamma
Alfa-1 és alfa-2 frakció gyulladás
Alfa-2: haptoglobin ceruloplasmin α2 macroglobulin α lipoprotein
Albumin Alfa-1:
Béta2
β lipoprotein C3 complement CRP
Béta1
Gamma
α1 antitrypsin transferin- IgG, IgA, IgM, orosomucoid hemopexin (IgD, IgE) α1 antichymotrypsin
Béta frakció monoclonalis komponens I.
Alfa-2: haptoglobin ceruloplasmin α2 macroglobulin α lipoprotein
Albumin Alfa-1:
Béta2
β lipoprotein C3 complement CRP
Béta1
Gamma
α1 antitrypsin transferin- IgG, IgA, IgM, orosomucoid hemopexin (IgD, IgE) α1 antichymotrypsin
Béta frakció monoclonalis komponens II.
albumin
alfa-1 alfa-2
béta
gamma
albumin
alfa-1 alfa-2
béta
gamma
Béta-gamma híd
Alfa-2: haptoglobin ceruloplasmin α2 macroglobulin α lipoprotein
Albumin Alfa-1:
Béta2
β lipoprotein C3 complement CRP
Béta1
Gamma
α1 antitrypsin transferin- IgG, IgA, IgM, orosomucoid hemopexin (IgD, IgE) α1 antichymotrypsin
Gamma frakció polyclonalis gamma szaporulat
Alfa-2: haptoglobin ceruloplasmin α2 macroglobulin α lipoprotein
Albumin Alfa-1:
Béta2
β lipoprotein C3 complement CRP
Béta1
Gamma
α1 antitrypsin transferin- IgG, IgA, IgM, orosomucoid hemopexin (IgD, IgE) α1 antichymotrypsin
Gamma frakció monoclonalis komponens ?
kapilláris elfo
agaróz gél elfo
Gamma frakció monoclonalis komponens ?
kapilláris elfo
agaróz gél elfo
Gamma frakció: monoclonalis komponens?
követés M (monoklonális) komponens gyanú az elfo görbén, negatív immunfixáció (IF): Negatív elfo, negatív IF:
M komponens gyanú az elfo-n, halvány homogén csík a IF-n:
Homogén csík az elfo-n, homogén csík az IF-n:
Gamma frakció monoclonalis komponens quantitativ meghatározás
Teljes kép!
Követés:
3
6
4
7
5
8
1
2
Gamma frakció monoclonalis komponens: „azonoítás” 1
4
2 5 3
Gamma frakció monoclonalis komponens !!!
Monoclonalis szabad könnyűlánc kimutatásának problémája
Előnyök: ¾ nagy felbontóképesség ¾ M komponens mennyiségi meghatározása ¾ M komponens követése ¾ gyors, automatizált
Kihívások: ¾ monoclonalis szabad könnyűlánc kimutatása ¾ vizelet elektroforézis
Köszönet Lovasi Lászlóné Barta Beáta
