KANDUNGAN FLAVONOID KULIT BATANG DAN DAUN POHON API-API (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) SEBAGAI SENYAWA AKTIF ANTIOKSIDAN SILVIA HANDAYANI

KANDUNGAN FLAVONOID KULIT BATANG DAN DAUN POHON API-API (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) SEBAGAI SENYAWA AKTIF ANTIOKSIDAN

SILVIA HANDAYANI

DEPARTEMEN TEKNOLOGI HASIL PERAIRAN FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2013

RINGKASAN SILVIA HANDAYANI. C34080083. Kandungan Flavonoid Kulit Batang dan Daun Pohon Api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) sebagai Senyawa Aktif Antioksidan. Dibimbing oleh NURJANAH dan RUDDY SUWANDI. Api-api merupakan tumbuhan yang banyak dimanfaatkan oleh masyarakat untuk makanan maupun obat-obatan, tanaman ini diambil dari Pantai Ekowisata Mangrove, Pantai Kapuk, Muara Karang, Jakarta Utara. Tujuan dilakukannya penelitian ini adalah untuk menentukan komponen bioaktif, kadar flavonoid total, dan aktivitas antioksidan daun dan kulit batang pohon api-api. Pengujian yang dilakukan meliputi ekstraksi komponen bioaktif, analisis proksimat, uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH, uji kadar flavonoid total dan uji fitokimia. Bobot kering daun pohon api-api mengandung air 69,2 %, abu 14,91 %, protein 11,04 %, dan lemak 2,21 %. Bobot kering kulit batang pohon api-api mengandung air 55 %, abu 9,6 %, protein 6,4 %, dan lemak 1,55 %. Ekstrak kasar daun mengandung senyawa bioaktif alkaloid, steroid/triterpenoid, flavonoid, dan tanin. Ekstrak kasar kulit batang mengandung steroid/triterpenoid, flavonoid, fenol hidrokuinon, dan tanin. Kadar flavonoid total daun 1,18 % dan kulit batang 0,67 %. Nilai IC50 ekstrak daun pohon api-api sebesar 36,35 ppm dan ekstrak kulit batang pohon api-api sebesar 51,51 ppm. Adanya kandungan flavonoid yang tinggi pada daun api-api serta nilai IC50 yang rendah, menunjukkan bahwa daun api-api memiliki aktivitas antioksidan yang cukup kuat bila dibandingkan dengan kulit batang api-api. Hal tersebut membuktikan bahwa daun api-api dapat digunakan sebagai antioksidan dan menjadi antioksidan pengganti BHT, karena sama-sama memiliki aktivitas antioksidan yang kuat (<50 ppm).

KANDUNGAN FLAVONOID KULIT BATANG DAN DAUN POHON API-API (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) SEBAGAI SENYAWA AKTIF ANTIOKSIDAN

SILVIA HANDAYANI C34080083

Skripsi

sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Perikanan pada Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor

DEPARTEMEN TEKNOLOGI HASIL PERAIRAN FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2013

Judul

: Kandungan Flavonoid Kulit Batang dan Daun Pohon ApiApi (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) sebagai Senyawa Aktif Antioksidan

Nama

: Silvia Handayani

NRP

: C34080083

Program Studi

: Teknologi Hasil Perairan

Menyetujui,

Dosen Pembimbing I

Dosen Pembimbing II

Dr. Ir. Nurjanah, MS NIP.1959 1013 1986 01 2 002

Dr. Ir. Ruddy Suwandi, MS, M.Phil NIP.1958 0511 1985 03 1 002

Mengetahui, Ketua Departemen Teknologi Hasil Perairan

Dr. Ir. Ruddy Suwandi, MS, M.Phil NIP.1958 0511 1985 03 1 002

Tanggal Pengesahan:

PERNYATAAN MENGENAI SKRIPSI DAN SUMBER INFORMASI Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi dengan judul “Kandungan Flavonoid Kulit Batang dan Daun Pohon Api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) sebagai Senyawa Aktif Antioksidan” adalah karya saya sendiri dan belum diajukan dalam bentuk apapun kepada perguruan tinggi negeri manapun. Sumber informasi yang digunakan atau dikutip dari karya yang telah diterbitkan oleh penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka pada bagian akhir skripsi ini.

Bogor, Januari 2013 Silvia Handayani C34080083

KATA PENGANTAR

Syukur Alhamdulillah penulis panjatkan kehadirat Allah SWT, karena berkat rahmat serta hidayah-Nya, penulis dapat menyelesaikan penyusunan skripsi ini dengan baik. Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat untuk mendapatkan Gelar Sarjana di Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor. Skripsi hasil penelitian ini berjudul ”Kandungan Flavonoid Kulit Batang dan Daun Pohon Api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) sebagai Senyawa Aktif Antioksidan”. Penulis mengucapkan terima kasih kepada semua pihak yang telah membantu penulis selama penyusunan skripsi ini, terutama kepada : 1.

Dr. Ir. Nurjanah, MS dan Dr. Ir. Ruddy Suwandi, MS, M.Phil. selaku dosen pembimbing, atas segala bimbingan dan pengarahan yang diberikan kepada penulis.

2.

Dr. Ir. Ruddy Suwandi, MS, M.Phil. selaku Ketua Departemen Teknologi Hasil Perairan.

3.

Dr. Ir. Agoes Mardiono Jacoeb, Dipl.-Biol. selaku Ketua Program Studi S1 Departemen Teknologi Hasil Perairan.

4.

Keluarga penulis yang selalu memberi semangat, materi, doa dan motivasi selama penyusunan skripsi ini.

5.

Asisten mata kuliah Pengetahuan Bahan Baku Industri Hasil Perairan 20112012.

6.

Laboran Laboratorium Pengetahuan Bahan Baku Indurtri Hasil Perairan yang banyak membantu selama penelitian.

7.

Fitri, Fitriany, Hilma, Dwilina, Aulia, Ningrum, Euis, Anggraeni, Iis, Hana, Dwisari, Riviani, Yunisha yang sudah membantu saat penulis melakukan penelitian dan memberi semangat baik dalam suka maupun duka.

8.

Sahabat Teknologi Hasil Perairan 45 terhebat yang selalu menemani penulis selama kuliah sampai pembuatan skripsi ini selesai.

9.

Teman-teman mahasiswa Program Studi Teknologi Hasil Perairan 43, 44, 46 dan 47 yang telah banyak memberikan masukan dan informasi-informasi penting kepada penulis sehingga skripsi ini dapat terselesaikan.

10. Teman-teman penulis dan semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu, yang telah memberikan masukan serta informasi maupun dukungan moril dalam penyusunan skripsi. Penulis menyadari bahwa dalam penulisan skripsi ini masih banyak kekurangannya. Oleh karena itu, penulis mengharapkan saran dan kritik yang bersifat membangun dari berbagai pihak dalam proses penyempurnaan skripsi ini. Semoga tulisan ini bermanfaat bagi semua pihak yang memerlukannya.

Bogor, Januari 2013

Silvia Handayani C34080083

DAFTAR RIWAYAT HIDUP Penulis dilahirkan di Jakarta pada tanggal 22 Februari 1989 sebagai anak kedua dari Ibu Naila dan Bapak Hermansyah. Penulis memulai jenjang pendidikan formal di SDN Kalibata 04 Pagi Jakarta Selatan (tahun 1995-2001), selanjutnya penulis melanjutkan pendidikannya di SMPN 41 Jakarta (tahun 2001-2004), kemudian penulis melanjutkan ke jenjang yang lebih tinggi ke sekolah menengah atas di SMAN 38 Jakarta dan lulus pada tahun 2007. Penulis melanjutkan pendidikannya di Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor. Selama masa perkuliahan, penulis aktif dalam berbagai organisasi dan kepanitiaan, yaitu Himpunan Mahasiswa Teknologi Hasil Perairan, kepanitiaan “HACCP 2010” sebagai anggota divisi acara. Penulis juga aktif sebagai asisten praktikum mata kuliah Pengetahuan Bahan Baku Industri Hasil Perairan 20112012 dan asisten praktikum mata kuliah Teknologi Pengolahan Hasil Perairan 2011-2012. Penulis juga aktif pada kegiatan diluar akademik antara lain menjadi anggota Green TV IPB sebagai presenter tahun 2011-2012. Sebagai salah satu syarat mendapatkan gelar sarjana, penulis melakukan penelitian dan skripsi yang berjudul ”Kandungan Flavonoid Kulit Batang dan Daun Pohon Api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) sebagai Senyawa Aktif Antioksidan” di bawah bimbingan Dr. Ir. Nurjanah, MS. dan Dr. Ir. Ruddy Suwandi, MS, M.Phil

DAFTAR ISI

DAFTAR ISI..............................................................................................................vi DAFTAR TABEL ...................................................................................................viii DAFTAR GAMBAR.................................................................................................ix LAMPIRAN................................................................................................................x 1 PENDAHULUAN...................................................................................................1 1.1 Latar Belakang ..................................................................................................1 1.2 Tujuan ...............................................................................................................2 2 TINJAUAN PUSTAKA .........................................................................................3 2.1 Deskripsi dan Klasifikasi Api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) ..............3 2.2 Antioksidan ........................................................................................................4 2.2.1 Fungsi antioksidan .....................................................................................5 2.2.2 Jenis-jenis antioksidan ...............................................................................6 2.2.2.1 Antioksidan sintetik .......................................................................6 2.2.2.2 Antioksidan alami ..........................................................................7 2.3 Uji Aktivitas Antioksidan..................................................................................8 2.4 Ekstraksi Senyawa Bioaktif...............................................................................9 2.5 Metabolit Sekunder..........................................................................................10 2.6 Komponen Bioaktif .........................................................................................11 2.6.1 Alkaloid ..................................................................................................11 2.6.2 Steroid/triterpenoid.................................................................................12 2.6.3 Flavonoid ................................................................................................12 2.6.4 Saponin ...................................................................................................16 2.6.5 Fenol hidrokuinon...................................................................................17 2.6.6 Tanin.......................................................................................................17 3 METODOLOGI ...................................................................................................18 3.1 Waktu dan Tempat...........................................................................................18 3.2 Bahan dan Alat ................................................................................................18 3.3 Prosedur Penelitian ..........................................................................................19 3.3.1 Pengambilan dan preparasi sampel.........................................................20 3.3.2 Analisis proksimat ..................................................................................20 a) Analisis kadar air (AOAC 2005)........................................................20 b) Analisis kadar abu (AOAC 2005). .....................................................21

c) Analisis kadar protein (AOAC 2005).................................................21 d) Analisis kadar lemak (AOAC 2005) ..................................................22 3.3.3 Ekstraksi dari tumbuhan api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) .....23 3.3.4 Uji komponen fitokimia (Harborne 1987)..............................................23 a) Uji alkaloid .........................................................................................23 b) Uji steroid/triterpenoid .......................................................................24 c) Uji flavonoid.......................................................................................24 d) Uji fenol hidrokuinon .........................................................................24 e) Uji tanin ..............................................................................................24 f) Uji saponin ..........................................................................................24 3.3.5 Uji kadar flavonoid total.........................................................................25 3.3.6 Uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH.....................................25 4 HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................................27 4.1 Karakteristik Api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) ...............................27 4.2 Kandungan Gizi...............................................................................................28 1) Kadar air.....................................................................................................28 2) Kadar abu ...................................................................................................29 3) Kadar protein .............................................................................................29 4) Kadar lemak ...............................................................................................29 4.3 Komponen Bioaktif Ekstrak Kasar..................................................................30 a) Alkaloid......................................................................................................31 b) Steroid/triterpenoid ....................................................................................31 c) Flavonoid....................................................................................................31 d) Tanin ..........................................................................................................32 4.4 Aktivitas Antioksidan ......................................................................................32 4.5 Kandungan Flavonoid Api-api sebagai Antioksidan.......................................35 5 KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................................39 5.1 Kesimpulan......................................................................................................39 5.2 Saran ................................................................................................................39 DAFTAR PUSTAKA ...............................................................................................40 LAMPIRAN..............................................................................................................45

DAFTAR TABEL

Nomor

Halaman

1. Sifat berbagai golongan flavonoid. .............................................................14 2. Hasil uji fitokimia ekstrak kasar api-api (A. marina (Forks.)Vierh.)..........30 3. Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak daun dan kulit batang api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.).............................32 4. Hasil uji aktivitas antioksidan larutan BHT................................................34 5. Kadar flavonoid beberapa tanaman (%)......................................................36

DAFTAR GAMBAR

Nomor

Halaman

1. Pohon api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) ........................................3 2. Struktur kimia butylated hydroxytoluene (BHT) ..........................................7 3. Mekanisme perubahan warna DPPH akibat pengaruh antioksidan ..............8 4. Struktur dasar flavonoid..............................................................................13 5. Struktur dasar senyawa flavonoid dan proses peredaman radikal bebas oleh senyawa flavonoid ........................................................16 6. Proses penelitian secara garis besar ............................................................19 7. Pohon api-api yang diambi dan dijadikan sebagai sampel .........................27 8. Hasil data proksimat tumbuhan api-api (A. marina (Forks.)Vierh.)...........28 9. Grafik perbandingan aktivitas antioksidan antara ekstrak kasar daun dan kulit batang api-api dengan persen inhibisinya ..........................33 10. Grafik hubungan konsentrasi BHT dengan persen inhibisi.........................34 11. Mekanisme pengkhelatan logam radikal bebas oleh flavonoid.............................................................................................37

DAFTAR LAMPIRAN

Nomor

Halaman

1. Gambar sampel pohon api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) ............46 2. Perhitungan analisis proksimat dan rendemen ekstrak ...............................47 3. Gambar hasil uji fitokimia daun dan kulit batang api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.), serta perubahan warna pada reaksi peredaman DDPH ...................................................................48 4. Perhitungan pembuatan larutan stok dan pengencerannya .........................49 5. Gambar-gambar selama proses ekstraksi....................................................50 6. Perhitungan persen inhibisi dan nilai IC50 ..................................................51

1 1 PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang Meningkatnya ilmu dan teknologi pengolahan yang ada, telah mengubah pola komsumsi manusia terhadap kebutuhan sandang dan pangannya. Manusia cenderung lebih memilih sesuatu yang bersifat instan atau langsung dapat dinikmati tanpa waktu yang lama. Pola komsumsi tersebut memaksa produsen untuk mengganti bahan tambahan yang bersifat alami menjadi bahan tambahan yang bersifat sintetik atau buatan. Bahan tambahan sintetik digunakan karena sifatnya yang relatif murah dan tidak membutuhkan jumlah yang banyak, apabila dibandingkan bahan tambahan alami yang sifatnya relatif mahal. Hal tersebut tidak dibenarkan apabila melihat dampak negatif

yang ditimbulkan jika

penambahan bahan tambahan sintetik masuk ke dalam tubuh secara terus menerus. Bahan tambahan antioksidan banyak digunakan oleh produsen untuk menghemat biaya dan waktu produksi. Bahan tambahan antioksidan yang sering digunakan adalah butylated hydroxytoluene atau lebih dikenal dengan BHT. Antioksidan BHT ini banyak digunakan dalam pangan, kesehatan maupun kecantikan. Penggunaan BHT secara terus menerus akan terakumulasi di dalam tubuh dan dapat menyebabkan penyakit karsinogenik. Antioksidan alami flavonoid, alkaloid, steroid/triterpenoid yang berasal dari tumbuhan sangat dibutuhkan untuk menggantikan antioksidan sintetik BHT. Tumbuhan yang dapat dijadikan pengganti antioksidan sintetik adalah apiapi (Avicennia marina (Forks.)Vierh.). Api-api merupakan salah satu tumbuhan yang hidup di wilayah hutan mangrove. Pohon api-api mempunyai bentuk yang khusus dalam penyesuaian diri terhadap lingkungan mangrove dan mempunyai mekanisme fisiologis dalam mengontrol garam (Nybakken 1992). Pohon api-api banyak tumbuh di daerah yang paling dekat dengan laut, dengan substrat agak berpasir, keadaan tanah berlumpur agak lembek, dan biasa berasosiasi dengan Sonneratia sp. yang dominan tumbuh pada lumpur dalam yang kaya bahan organik (Bengen 2001). Api-api mengandung senyawa steroid, saponin, flavonoid dan tanin. Flavonoid merupakan kandungan khas tumbuhan hijau yang terdapat pada bagian

2 tumbuhan termasuk daun, akar, kayu, kulit, bunga, buah dan biji. Flavonoid bersifat polar karena mengandung sejumlah hidroksil yang tak tersulih atau suatu gula (Markham 1988 dalam Silaban 2009). Flavonoid dalam buah-buahan, sayuran, teh, tanaman obat, telah menarik perhatian terbesar dan telah dipelajari secara ekstensif, karena sangat efektif untuk dijadikan antioksidan dengan toksisitas lebih rendah dari antioksidan sintetik misalnya BHA dan BHT (Pekkarinenet et al. 1999 dalam Cai et al. 2010). Penelitian pada daun api-api (Avicennia marina (Forsk.) Vierh) pernah dilakukan oleh Afzal et al. (2011) mengenai manfaat dari ekstrak daun api-api sebagai antifungi dan penyakit alergi kulit. Yusuf (2010) juga melakukan penelitian pada kulit batang api-api (Marina marina Nesh) yang ternyata mengandung senyawa triterpenoid yang efektif dijadikan antimikroba. Begitu pula penelitian yang dilakukan oleh Purnobasuki (2004), api-api (Avicennia officinalis) mengandung senyawa saponin yang berkhasiat sebagai aktivitas sitotoksik, antimikroba, dan antiperadangan. Penelitian tentang kandungan flavonoid sebagai antioksidan pada daun dan kulit batang Avicennia marina (Forks.)Vierh. belum dilakukan, sehingga perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui kandungan flavonoid yang terkandung dalam daun dan kulit batang api-api yang dapat digunakan sebagai pengganti antioksidan sintetik.

1.2 Tujuan Penelitian ini bertujuan untuk menentukan komponen bioaktif, kadar flavonoid total, dan aktivitas antioksidan daun dan kulit batang pohon api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.).

3 2 TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Deskripsi dan Klasifikasi Api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) Api-api merupakan salah satu tumbuhan mangrove yang termasuk kedalam Famili Avicenniaceae/Verbenaceae. Api-api banyak ditemukan di ekosistem mangrove yang terletak paling luar atau dekat dengan lautan. Hidup di tanah berlumpur agak lembek atau dangkal, dengan substrat berpasir, sedikit bahan organik dan kadar garam tinggi (Afzal et al. 2011). Klasifikasi Avicennia marina (Forks.)Vierh. menurut Bengen (2001) adalah sebagai berikut: Kingdom

: Plantae

Filum

: Thacheophyta

Kelas

: Magnoliopsida

Ordo

: Sapindales

Famili

: Avicenniaceae

Genus

: Avicennia

Spesies

: Avicennia marina (Forks.)Vierh. (Gambar 1)

Gambar 1 Pohon api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) Sumber: Wibowo et. al (2009)

Api-api biasa berasosiasi dengan jenis mangrove Rhizophora sp. Tumbuhan Avicennia marina (Forks.)Vierh. ini mempunyai akar napas, tumbuh dengan tegak, serta memiliki banyak cabang. Akar napas api-api tumbuh lurus, berbentuk ramping dan berjumlah banyak, memiliki daun yang tumbuh berhadapan, bertangkai, berbentuk bulat telur terbalik dengan ujung tumpul dan pangkal yang rata. Api-api memiliki batang yang mengeluarkan getah dan memiliki rasa yang pahit. Bunga tumbuhan ini berwarna kuning dengan kelopak

4 bunga yang pendek dan pucat. Buah berbentuk kotak, berkatup, berbiji satu serta berkecambah sebelum rontok (Bandaranayake 1999). Beberapa jenis tumbuhan yang tergolong dalam Genus Avicennia menghasilkan bahan-bahan yang dapat digunakan untuk keperluan pengobatan, pangan, pakan, perumahan dan farmasi. Tumbuhan api-api ini banyak mengandung senyawa aktif, yaitu triterpenoid, steroid, alkaloid, senyawa flavonoid, saponin, dan tanin (Yusuf 2010). Api-api termasuk pepohonan semak hingga medium dengan ketinggian 2 – 5 meter dan banyak ditemukan di ujung aliran sungai atau di area pasang terendah. Cukup toleran dengan salinitas yang cukup tinggi dan pertumbuhan optimal terdapat pada salinitas 0-30 (Afzal et al.2011). Spesies ini ditemukan dari daerah hilir hingga pertengahan perairan payau di semua kawasan pasang surut berlumpur hampir mendekati pantai (Bengen 2000). Api-api biasa dimanfaatkan oleh penduduk sekitar untuk dijadikan obat berbagai penyakit. Batang api-api dijadikan obat rematik dan cacar. Getah kulit batang dijadikan obat sakit gigi, bagian buah dijadikan obat untuk sariawan (Bayu 2009). Mangrove sejati ini banyak mengandung senyawa aktif yang dapat dimanfaatkan secara maksimal. Daun dan kulit batang api-api mengandung senyawa aktif alkaloid, triterpenoid, saponin, tanin, glikosida, dan flavonoid yang sangat potensial digunakan sebagai antioksidan, antimikroba, antifungi, dan antibiotik (Wibowo et al. 2009).

2.2 Antioksidan Antioksidan merupakan senyawa yang mempunyai struktur molekul yang dapat memberikan elektronnya kepada molekul radikal bebas dan dapat memutuskan reaksi berantai dari radikal bebas. Antioksidan berdasarkan fungsinya dikelompokkan menjadi antioksidan primer, antioksidan sekunder, antioksidan tersier, oxygen scavenger, dan chelators (Kumalaningsih 2006). Antioksidan adalah senyawa yang dapat menghambat reaksi radikal bebas dalam tubuh penyebab penyakit karsinogenik, kardiovaskuler dan penuaan dini (Rohman dan Riyanto 2005). Antioksidan diperlukan karena tubuh manusia tidak memiliki sistem pertahanan antioksidan yang berlebihan, sehingga apabila terjadi

5 paparan radikal bebas berlebihan, maka tubuh akan membutuhkan antioksidan eksogen (berasal dari luar) dari asupan makanan maupun vitamin (Waji dan Sugrani 2009). Sumber utama antioksidan dapat dibagi menjadi empat, yaitu enzim misal superoxide dismutase, glutation peroksidase, dan katalase; molekul-molekul besar (albumin, seruloplasmin, dan ferritin); molekul-molekul kecil (asam askorbat, glutation, tokoperol, karotenoid, polifenol); beberapa hormon yang juga berfungsi sebagai sumber antioksidan, yaitu esterogen, angiotensin, melatonin, dan lain-lain (Prior et al. 2005 dalam Rohman et al. 2006). 2.2.1 Fungsi antioksidan Fungsi utama antioksidan adalah untuk memperkecil terjadinya proses oksidasi dari lemak dan minyak, oksidasi radikal bebas, memperkecil terjadinya proses kerusakan dalam makanan, memperpanjang masa pemakaian dalam industri makanan, meningkatkan stabilitas lemak yang terkandung dalam makanan serta mencegah hilangnya kualitas sensori dan nutrisi (Kuncahyo dan Sunardi 2007). Antioksidan dapat menghambat oksidasi dengan cara bereaksi dengan radikal bebas reaktif membentuk radikal bebas tak reaktif yang relatif stabil (Oktariana 2007). Musthafa dan Lawrence (2000) menjelaskan bahwa antioksidan juga berfungsi untuk menetralisir atau menekan dampak negatif yang diakibatkan radikal bebas. Antioksidan pada umumnya mengandung struktur inti yang sama, yaitu mengandung cincin benzena tidak jenuh disertai gugusan hidroksi atau gugusan amino (Cahyadi 2008). Mekanisme antioksidan dalam menghambat oksidasi atau menghentikan reaksi berantai radikal bebas dari lemak yang teroksidasi terdiri atas empat tahap (Rita et al. 2009), yaitu: 1) pelepasan hidrogen dari antioksidan 2) pelepasan elektron dari antioksidan 3) adisi lemak (molekul teroksidasi) ke dalam cincin aromatik antioksidan 4) pembentukan senyawa kompleks antara lemak (molekul teroksidasi) dan cincin aromatik antioksidan. Antioksidan yang sangat umum digunakan adalah senyawa fenol atau amina aromatis. Antioksidan dapat berperan sebagai inhibitor atau pemecah

6 peroksida. Efektivitas antioksidan p-amino-fenol dan fenolat tergantung adanya gugus hidroksil bebas karena ester dan esternya tidak mempunyai pengaruh. Efisiensi fenolat dapat ditingkatkan dengan alkilasi pada posisi 2, 4, dan 6 (Cahyadi 2008). Antioksidan akan kehilangan potensi jika tidak mempunyai kemampuan untuk mengikat hidrogen atau elektron. Beberapa jenis antioksidan, terutama golongan fenolat bersifat menguap pada suhu kamar. Kemampuan antioksidan berkurang akibat degradasi molekul, terutama pada suhu yang semakin meningkat. Antioksidan berdasarkan penggabungan sifat sinergis dikelompokkan menjadi dua kategori, yaitu antioksidan dengan jumlah fenol yang sangat banyak dan antioksidan dengan jumlah asam yang sangat banyak (Ketaren 2008). 2.2.2 Jenis-jenis antioksidan Antioksidan berdasarkan sumbernya dibagi kedalam dua kelompok, yaitu antioksidan sintetik (antioksidan yang diperoleh dari hasil sintesis reaksi kimia) dan antioksidan alami (antioksidan hasil ekstraksi bahan alami tanpa ada penambahan senyawa kimia) (Kuncahyo dan Sunardi 2007). 2.2.2.1 Antioksidan sintetik Antioksidan sintetik sudah banyak digunakan untuk menggantikan antioksidan alami, karena sifatnya yang mudah dicari dan mudah didapatkan. Antioksidan sintetik yang banyak digunakan adalah senyawa-senyawa fenol yang biasanya agak beracun dan memiliki efek samping (Siagian 2002). Penggunaan antioksidan ini harus memenuhi beberapa syarat, yaitu tidak berbahaya bagi kesehatan, tidak menimbulkan warna yang tidak diinginkan, penggunaannya efektif dalam konsentrasi rendah (0,01-0,02 %), dapat terkonsentrasi pada permukaan/lapisan lemak (lipofilik), mudah didapat, ekonomis, serta dapat bertahan dalam kondisi pengolahan pangan pada umumnya (Belitz et al. 2009) Empat macam antioksidan yang sering digunakan dalam produk makanan adalah butylated hydroxyanisole (BHA), butylated hydroxytoluene (BHT), propylgallate (PG), dan nordihidro guaiaretic acid (NDGA) (Siagian 2002), tertbutilated hydroxyquinon (TBHQ) dan tokoferol (Winarno 2008). Antioksidan tersebut merupakan antioksidan alami yang telah diproduksi secara sintetis untuk tujuan komersial.

7 Antioksidan BHT akan memberikan efek sinergis yang baik jika digunakan bersama antioksidan BHA, oleh karena itu BHT banyak ditambahkan pada produk pangan sebagai antioksidan yang berfungsi untuk mencegah ketengikan. Antioksidan BHT berbentuk kristal padat putih, stabil pada kondisi penggunaan serta penyimpanan yang normal, dan digunakan secara luas karena relatif murah (Herawati dan Akhlus 2006). Struktur kimia dari BHT dapat dilihat pada Gambar 2.

Gambar 2 Struktur kimia butylated hydroxytoluene (BHT) (Sumber: Herawati dan Akhlus 2006)

Antioksidan BHT memilki nilai IC50 yang sangat kuat pada konsentrasi 5,85 ppm (Jacoeb et al. 2011). Penggunaan BHT secara terus menerus pada bahan makanan diduga dapat menyebabkan kanker dan mutasi gen pada manusia, oleh karena itu penggunaan BHT sudah mulai dilarang di beberapa negara antara lain Jepang, Rumania, Swedia, dan Australia (Rita et al. 2009).

2.2.2.2 Antioksidan alami Antioksidan alami umumnya mempunyai gugus hidroksi dalam struktur molekulnya. Antioksidan alami mampu melindungi tubuh terhadap kerusakan yang disebabkan spesies oksigen reaktif, mampu menghambat terjadinya penyakit degeneratif serta mampu menghambat peroksidase lipid pada makanan. Meningkatnya minat untuk mendapatkan antioksidan alami terjadi beberapa tahun terakhir ini (Kumalaningsih 2006). Antioksidan alami banyak ditemukan pada tumbuh-tumbuhan, baik dalam buah maupun sayuran. Antioksidan alami dalam buah dan sayuran berfungsi untuk mencegah terbentuknya radikal bebas di dalam tubuh, mengikat logam yang terlibat dalam reaksi radikal bebas, dan memperbaiki sel-sel tubuh yang rusak (Simamora 2011). Kebanyakan senyawa antioksidan yang diisolasi dari sumber

8 alami berasal dari tumbuhan. Senyawa antioksidan alami umumnya adalah senyawa fenolik atau polifenolik yang dapat berupa golongan flavonoid, turunan asam sinamat, kumarin, tokoferol, dan asam-asam organik polifungsional (Pratt dan Hudson 1990).

2.3 Uji Aktivitas Antioksidan Senyawa antioksidan dapat diketahui keberadaanya menggunakan uji aktivitas antioksidan. Salah satu uji aktivitas antioksidan yang paling sering digunakan adalah metode 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH). Metode ini sering digunakan untuk memperkirakan efisiensi kinerja dari substansi yang berperan sebagai antikosidan. Metode pengujian ini berdasarkan pada kemampuan substansi antioksidan tersebut dalam menetralisir radikal bebas DPPH (Molyneux 2004). Kristal DPPH yang sudah dilarutkan akan berperan sebagai radikal bebas dan bereaksi dengan senyawa antioksidan, sehingga 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl akan berubah menjadi diphenilpycrilhydrazine yang bersifat non-radikal dan tidak berbahaya. Reaksi tersebut terjadi apabila radikal bebas bereaksi dengan senyawa antioksidan secara maksimal. Meningkatnya jumlah diphenilpycrilhydrazine ditandai dengan berubahnya warna ungu pada larutan menjadi warna kuning pucat (Molyneux 2004). Mekanisme perubahan warna ungu menjadi kuning pada radikal DPPH dapat dilihat pada Gambar 3.

Gambar 3 Mekanisme perubahan warna DPPH akibat pengaruh anitoksidan (Sumber: Yuhernita dan Juniarti 2011)

Parameter yang biasa digunakan untuk menginterpretasikan hasil uji aktivitas antioksidan dengan peredaman radikal bebas DPPH adalah nilai effective concentration (EC50) atau disebut nilai inhibitory concentration (IC50), yakni

9 konsentrasi yang menyebabkan hilangnya 50% aktivitas DPPH. Data yang diperoleh kemudian diolah ke dalam persamaan regresi linier (Molyneux 2004).

2.4 Ekstraksi Senyawa Bioaktif Ekstraksi merupakan suatu proses penarikan komponen zat aktif dalam bahan menggunakan pelarut tertentu dan paling banyak digunakan. Ekstraksi dapat diartikan sebagai suatu proses penarikan atau pemisahan komponen bioaktif suatu bahan menggunakan pelarut yang sesuai dan dipilih, sehingga komponen yang diinginkan dapat larut (Ansel 1989). Proses ekstraksi bertujuan untuk mendapatkan bagian-bagian tertentu dari bahan yang mengandung komponenkomponen aktif (Harborne 1984). Faktor-faktor yang menentukan hasil ekstraksi adalah waktu ekstraksi, perbandingan antara jumlah sampel dan pelarut, ukuran bahan dan suhu ekstraksi. Semakin lama waktu ekstraksi, maka proses tumbukan atau sentuhan antara bahan dan pelarut semakin besar. Hal ini dapat mengoptimalkan komponen bioaktif yang dipisahkan atau dikeluarkan dari bahan. Perbandingan antara jumlah bahan dan pelarut berpengaruh terhadap efisiensi ekstraksi, jumlah pelarut yang berlebihan tidak akan mengekstrak lebih banyak, namun dalam jumlah tertentu pelarut dapat bekerja secara optimal. Selama proses ekstraksi terjadi perpindahan antara pelarut yang mengalir ke dalam sel bahan dan mengakibatkan zat yang terkandung dalam bahan akan larut sesuai dengan kelarutannya (Voight 1994). Metode ekstraksi yang paling banyak digunakan pada tumbuhan adalah metode maserasi. Maserasi merupakan metode perendaman tanpa adanya pengadukan dan dilakukan pada suhu ruang. Maserasi merupakan cara yang sederhana dengan cara merendam sampel dalam pelarut. Pelarut menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif sehingga zat aktif tersebut larut akibat adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif dengan pelarut (Guenter 1987 dalam Khunaifi 2010). Ekstraksi dapat dikelompokkan menjadi dua, yaitu ekstraksi sederhana dan ekstraksi khusus (Harborne 1987). Ekstraksi sederhana terdiri atas: a) Maserasi, yaitu metode ekstraksi dengan cara merendam sampel dalam pelarut dengan atau tanpa pengadukan;

10 b) Perkolasi, yaitu metode ekstraksi secara berkesinambungan; c) Reperkolasi, yaitu metode perkolasi dimana hasilnya digunakan untuk melarutkan sampel sampai senyawa kimianya terlarut; d) Diakolasi, yaitu perkolasi dengan penambahan udara. Ekstraksi khusus terdiri atas: a) Sokletasi, yaitu metode ekstraksi secara berkesinambungan untuk melarutkan sampel kering menggunakan pelarut bervariasi; b) Arus balik, yaitu metode ekstraksi secara berkesinambungan dimana sampel dan pelarut saling bertemu melalui gerakan aliran yang berlawanan; c) Ultrasonik, yaitu metode ekstraksi menggunakan alat yang menghasilkan frekuensi bunyi atau getaran antara 25-100 KHz.

2.5 Metabolit Sekunder Metabolit sekunder adalah hasil akhir dari suatu proses metabolisme. Metabolit sekunder sangat bervarisai dalam jumlah dan jenisnya dari setiap organisme. Beberapa dari senyawa metabolit sekunder tersebut diantaranya dapat memberikan efek fisiologis dan farmakologis seperti senyawa aktif atau komponen bioaktif. Zat metabolit sekunder dapat diketahui jenisnya antara lain kumarin, salanin, liatriol, nimbin, dan azadirachtin (Copriady et al. 2005). Pemanfaatan dari zat metabolit sekunder sangat banyak. Metabolit sekunder dapat dimanfaatkan sebagai antioksidan, antibiotik, antikanker, antikoagulan darah, menghambat efek karsinogenik (Copriady et al. 2005) Metabolit sekunder yang bersifat antioksidatif diantaranya adalah alkaloid, flavonoid, senyawa fenol, steroid dan terpenoid (Yuhernita dan Juniarti 2011). Sofia (2006) dalam Kuncahyo dan Sunardi (2007) menambahkan bahwa senyawa metabolit sekunder yang memiliki sifat sebagai antioksidan adalah flavonoid. Flavonoid merupakan senyawa polifenol yang terdapat pada teh, buah-buahan, sayuran, anggur, bir dan kecap. Metabolit sekunder juga dapat dimanfaatkan untuk antiagen pengendali hama penyakit pada tanaman yang ramah lingkungan (Samsudin 2008).

11 2.6 Komponen Bioaktif Komponen bioaktif merupakan suatu senyawa fungsional yang terdapat dalam bahan pangan dan dapat memberikan pengaruh biologis maupun fisiologis. Alkohol aromatik, misalnya total fenol, polifenol dan komponen asam, merupakan kelompok besar dari komponen bioaktif (Kannan et al. 2009). Penapisan komponen bioaktif dapat dilakukan dengan cara uji fitokimia yang meliputi komponen alkaloid, steroid/triterpenoid, flavonoid, saponin, fenol hidrokuinon, dan tanin. Uji fitokimia bertujuan untuk menentukan ciri senyawa aktif yang dapat dimanfaatkan maupun senyawa aktif penyebab efek racun dengan cara ekstrak kasar (Harborne 1987). Senyawa fitokimia bukanlah senyawa yang termasuk ke dalam zat gizi, namun dengan mengkonsumsi bahan pangan yang mengandung senyawa ini dapat memberikan pengaruh yang positif bagi kesehatan tubuh (Astawan dan Kasih 2008). 2.6.1 Alkaloid Senyawa alkaloid merupakan senyawa organik yang paling banyak ditemukan di alam. Alkaloid bersifat basa yang mengandung satu atau lebih atom nitrogen dalam bagian siklik (Harborne 1987). Alkaloid biasanya tidak berwarna, bersifat optis aktif, berbentuk kristal, namun terkadang ditemukan dalam bentuk cairan pada suhu ruang, dan terasa pahit di lidah (Harborne 1984). Alkaloid merupakan hasil metabolit sekunder dengan kelompok molekul substansi

organik

yang

tidak

bersifat

penting

bagi

organisme

yang

menghasilkannya atau memanfaatkannya. Senyawa alkaloid dikelompokan menjadi

tiga

bagian,

yaitu

alkaloid

sesungguhnya,

protoalkaloid,

dan

pseudoalkaloid. Alkaloid banyak terdapat pada tanaman maupun buah-buahan. Alkaloid yang diperoleh dari tanaman mangrove pada umumnya bersifat neurotoxin atau racun alami yang tidak terlalu membahayakan manusia (Bayu 2009). Protoalkaloid merupakan amin yang relatif sederhana dimana di dalam nitrogen asam amino tidak terdapat cincin heterosiklik, dan diperoleh berdasarkan biosintesis dari asam amino yang bersifat basa. Pseudoalkaloid tidak diturunkan dari prekursor asam amino, dan biasanya senyawa ini bersifat basa (Sastrohamidjojo 1996).

12 Senyawa alkaloid, yakni indol memiliki kemampuan untuk menghentikan reaksi radikal bebas atau antioksidan secara efisien. Senyawa radikal turunan dari senyawa amina ini memiliki tahap terminasi yang sangat lama (Yuhernita dan Juniarti 2011). Alkaloid kerap kali bersifat racun bagi manusia, namun ada sebagian yang memiliki aktivitas fisiologis pada kesehatan manusia sehingga dapat digunakan secara luas dalam dunia pengobatan dan kesehatan (Harborne 1984). Fungsi alkaloid dari beberapa penelitian misal hasil penelitian Porto et al. (2009), menunjukan adanya aktivitas antioksidan serta perlindungan dari radiasi sinar UV. Penelitian Yuhernita dan Juniarti (2011) juga menunjukkan adanya aktivitas antioksidan yang tinggi dengan adanya alkaloid sebagai hasil dari metabolit sekunder. 2.6.2 Steroid/triterpenoid Triterpenoid merupakan senyawa dengan kerangka karbonilnya berasal dari enam satuan isoprene. Senyawa ini berstruktur siklik, kebanyakan berupa alkohol, aldehida atau asam karboksilat. Triterpenoid tidak berwarna, berbentuk kristal, memiliki titik lebur yang tinggi dan merupakan komponen aktif yang sulit dikarakterisasi. Triterpenoid umumnya terasa pahit apabila terkena lidah. Keberadaan triterpenoid dapat diketahui dengan uji menggunakan pereaksi Liebermann-Burchard, yang ditandai hasil positif dengan memberikan warna biruhijau pada sampel (Harborne 1984). Steroid merupakan turunan dari golongan senyawa triterpenoid. Steroid alami berasal dari berbagai transformasi kimia dari triterpena yaitu lanosterol dan saikloartenol. Senyawa steroid dapat digunakan sebagai bahan dasar pembuatan obat (Harborne 1987). Golongan triterpenoid/steroid ditemukan hampir pada semua jenis tanaman mangrove. Golongan ini memiliki banyak manfaat, yaitu antiradang, antiinflamasi, antikarsinogenik, dan pengontrol diabetes dalam fase uji klinis (Bayu 2009). 2.6.3 Flavonoid Flavonoid adalah sekelompok senyawa polifenol yang terdapat dalam tanaman. Tanaman mangrove banyak mengandung senyawa flavonoid, karena tanaman mangrove merupakan tanaman sejati yang memiliki daun, akar, batang sejati. Flavonoid yang ditemukan pada tanaman mangrove berperan sebagai

13 antioksidan dengan menghambat peroksidasi dari lipid dan berpotensi menginaktifkan oksigen triplet (Bayu 2009). Pada tanaman, flavonoid memiliki beragam fungsi, diantaranya dapat berfungsi sebagai antioksidan, antimikrobial, fotoreseptor, dan skrining cahaya. Flavonoid terutama dalam bentuk turunan glikosilat bertanggung jawab atas pemberian warna pada daun, bunga, dan buah (Simamora 2011). Struktur dasar flavonoid dapat dilihat pada Gambar 4.

C A

B

Gambar 4 Struktur dasar flavonoid (Sumber: Kumar et al. 2011a)

Flavonoid merupakan salah satu golongan fenol alam terbesar, mengandung 15 atom karbon dalam inti dasarnya, yang tersusun dalam konfigurasi C6-C3-C6, yaitu dua cincin aromatis yang dihubungkan oleh satuan tiga karbon yang dapat atau tidak dapat membentuk cincin ketiga. Flavonoid sering terdapat sebagai glikosida. Flavonoid merupakan kandungan khas tumbuhan hijau yang terdapat pada bagian tumbuhan termasuk daun, akar, kayu, kulit, tepung sari, bunga, buah dan biji. Flavonoid bersifat polar karena mengandung sejumlah hidroksil yang tidak terikat bebas atau suatu gula (Markham 1988 dalam Silaban 2010). Flavonoid umumnya terdapat pada tumbuhan, terikat pada gula sebagai glikosida dan aglikon flavonoid yang mana pun, mungkin saja terdapat dalam satu tumbuhan dengan beberapa bentuk kombinasi glikosida. Menurut strukturnya, semua flavonoid merupakan turunan senyawa induk flavon yang terdapat pada tumbuhan berupa tepung putih dan mempunyai sejumlah sifat yang sama. Golongan flavonoid dibagi menjadi 10 kelas, yaitu antosianin, proantosianidin, flavonol, flavon, glikoflavon, biflavonil, khalkon, auron, flavanon, dan isoflavon (Harborne 1987). Sifat berbagai golongan flavonoid dapat dilihat pada Tabel 1.

14 Tabel 1 Sifat berbagai golongan flavonoid Golongan Flavonoid

Penyebaran

Ciri khas

Antosianin

pigmen bunga merah, biru larut dalam air, panjang dalam daun dan jaringan lain gelombang 515-545 nm

Proantosianidin

tanwarna, dalam galih, dan daun tumbuhan berkayu

menghasilkan antosianidin

Flavonol

tersebar luas dalam daun

terdapat bercak kuning bila disinari UV (350-386 nm)

Flavon

seperti flavonol

terdapat bercak coklat bila disinari UV (330-350 nm)

Glikoflavon

seperti flavonol

mengandung gula dengan ikatan C-C, tidak seperti flavon biasa

Biflavonil

terbatas hanya pada gimnospermae

bercak redup pada kromatogram BAA

Khalkon dan auron

pigmen bunga kuning

dengan ammonia berwarna merah (370-410 nm)

Flavanon

terdapat dalam daun dan buah

berwarna merah kuat dengan Mg/HCl, pahit

Isoflavon

dalam akar, hanya terdapat dalam satu suku

tidak ada uji warna yang khas

(Sumber: Harborne 1987)

Flavonoid terdapat dalam semua tumbuhan berpembuluh misalnya isoflavon dan biflavonol yang hanya terdapat pada beberapa suku tumbuhan, tetapi beberapa kelas, yakni flavon dan flavonol tersebar di semua tumbuhan. Flavonoid terdapat dalam tumbuhan sebagai campuran, jarang sekali ditemukan dalam bentuk tunggal dalam jaringan. Selain itu, sering pula ditemukan campuran flavonoid dengan berbeda kelas (Harborne 1967). Konsumsi flavonoid dalam makanan berkisar 50-80 mg/hari (Silalahi 2006). Kebutuhan akan flavonol dan flavon sebesar 23 g/hari, disamping itu quersetin flavonol menyumbangkan 16 mg/hari dalam asupan makanan. Flavonoid dalam makanan diantaranya kuercetin, kaemferol, luteolin, morin, dan

15 katekin. Senyawa tersebut memiliki kemampuan mencegah kanker yang diduga melalui

sifatnya

sebagai

antioksidan,

penangkap

radikal

bebas,

dan

kemampuannya menonaktifkan kation polivalen. Sumber-sumber flavonoid lebih banyak dihasilkan oleh sayur, buah-buahan, kacang, bunga, daun teh dan lain-lain (Kumar et al. 2011a). Flavonoid dalam tumbuhan memberikan manfaat yang besar bagi tumbuhan tersebut. Flavonoid pada daun mengatur fungsi fisiologis agar dapat bertahan dari gangguan hewan pemakan tumbuhan, infeksi bakteri, dan melindungi dari sinar UV serta membantu dalam proses fotosintesis, transfer energi, respirasi. Pigmen seperti antosianin juga memberikan warna pada daun (Kumar et al. 2011b). Selain bagi tumbuhan, manusia pun dapat ikut merasakan manfaat adanya flavonoid dalam makanan yang mereka konsumsi. Flavonoid memiliki kemampuan antioksidan yang mampu mentransfer sebuah elektron ke senyawa radikal bebas dan membentuk kompleks dengan logam. Kedua mekanisme itu membuat flavonoid memiliki beberapa efek, diantaranya menghambat peroksidasi lipid, menekan kerusakan jaringan oleh radikal bebas dan menghambat beberapa enzim (Harborne 1987). Hubungan antara total fenol dan senyawa flavonoid dengan aktivitas antioksidan pada tumbuhan terutama buah-buahan adalah semakin meningkatnya konsentrasi total fenol atau senyawa flavonoid, maka semakin tinggi pula tingkat aktivitas antioksidan dari tumbuhan tersebut (Erukainure 2011). Flavonoid melakukan aktivitas antioksidan dengan cara menekan pembentukan spesies oksigen reaktif, baik dengan cara menghambat kerja enzim maupun dengan mengikat logam yang terlibat dalam produksi radikal bebas. Mekanisme kerja flavonoid sebagai antioksidan sebagai berikut: 1) Flavonoid menghambat kerja enzim yang terlibat dalam reaksi produksi anion superoksida, misalnya xanthin oksidase dan protein kinase. Flavonoid juga menghambat kerja siklooksigenase, lipooksigenase, mikrosomal

monooksigenase,

glutation-S-transferase,

suksinoksidase, dan NADH oksidase.

mitokondrial

16 2) Sejumlah senyawa flavonoid efisien dalam mengikat logam, diantaranya logam besi bebas dan tembaga bebas yang dapat meningkatkan pembentukan spesies oksigen reaktif. 3) Flavonoid mempunyai nilai potensial reduksi yang rendah, sehingga mudah mereduksi radikal superoksida, peroksil, alkoksil, dan hidroksil. Peredaman radikal bebas oleh flavonoid dicantumkan dalam Gambar 5.

Gambar 5 Struktur dasar senyawa flavonoid (A), Proses peredaman radikal bebas oleh senyawa flavonoid (B) (Sumber: Kumar et al. 2011a)

2.6.4 Saponin Saponin adalah golongan glikosida dan sterol yang apabila dihidrolisis secara sempurna akan menghasilkan gula dan satu fraksi non-gula yang disebut sapogenin atau genin. Saponin merupakan senyawa aktif permukaan dan bersifat seperti sabun serta dapat dideteksi berdasarkan kemampuannya dalam membentuk busa dan menghemolisis darah (Silaban 2009). Hemolisis darah merah oleh saponin ini merupakan hasil interaksi antara saponin dengan senyawa-senyawa yang terdapat pada permukaan membran sel, seperti kolesterol, protein dan fosfolipid. Saponin larut dalam air, sedikit larut atau tidak sama sekali dalam etanol dan metanol pekat yang dingin (Harborne 1984). Komponen saponin berperan dalam mereduksi kolesterol dan melawan kanker kolon. Saponin juga memiliki aktivitas antimikroba, merangsang sistem imun, dan mengatur tekanan darah (Astawan dan Kasih 2008). Beberapa penilitian menunjukan bahwa ekstrak saponin yang diisolasi mampu digunakan sebagai agen pengendali nyamuk Aedes aegypti dan Culex pipiens, tetapi aman bagi mamalia (Wiesman dan Chapagain 2003). Penelitian Cui et al. (2004)

17 menunjukkan bahwa ekstrak saponin mampu digunakan untuk mengatasi penyakit kardiovaskuler seperti penyakit jantung, tonsillitis, dan hyperlipaemia. 2.6.5 Fenol hidrokuinon Fenol merupakan komponen fenolat dengan struktur aromatik yang berikatan dengan satu atau lebih gugus hidroksil, beberapa mungkin digantikan dengan gugus metil atau glikosil. Komponen fenolat bersifat larut air selama komponen tersebut berikatan dengan gula membentuk glikosida, dan biasanya terdapat dalam vakuola sel. Flavonoid merupakan kelompok yang terbesar di antara komponen fenolat alami yang strukturnya telah diketahui, tetapi fenol monosiklik sederhana, fenilpropanoid dan fenolat quinon terdapat dalam jumlah sedikit (Harborne 1984). Kuinon adalah senyawa bewarna dan mempunyai kromofor dasar, antara lain kromofor pada benzokuinon, yang terdiri atas dua gugus karbonil yang berkonjugasi dengan dua ikatan rangkap karbon-karbon. Tujuan identifikasi, quinon dapat dibagi menjadi empat kelompok, yaitu benzoquinon, naftaquinon, antraquinon, dan isoprenoid quinon. Tiga kelompok pertama umumnya terhidrolisis bersifat fenol, sedangkan isoprenoid quinon terdapat pada respirasi seluler (ubiquinon) dan fotosintesis (plastoquinon) (Harborne 1984). 2.6.6 Tanin Tanin terdapat luas dalam tumbuhan berpembuluh dan memiliki batang sejati. Secara kimia terdapat dua jenis tanin, yaitu tanin terkondensasi dan tanin terhidrolisis. Tanin terkondensasi hampir terdapat disemua tumbuhan pakupakuan dan gymnospermae, serta tersebar luas dalam angiospermae terutama pada tumbuhan berkayu. Tanin terhidrolisis, penyebarannya terbatas hanya pada tumbuhan berkeping dua. Tetapi kedua jenis tanin ini banyak dijumpai bersamaan dalam tumbuhan yang sama. Sebagian besar tumbuhan yang banyak mengandung tanin akan dihindari oleh hewan pemakan tumbuhan karena rasanya yang pahit. Salah satu fungsi tanin pada tumbuhan adalah sebagai penolak hewan pemakan tumbuhan (Harborne 1987).

18 3 METODOLOGI

3.1 Waktu dan Tempat Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Februari sampai April 2012. Pengambilan sampel dilakukan di Pantai Ekowisata Mangrove, Pantai Kapuk, Muara Karang, Jakarta Utara. Proses persiapan sampel, analisis fitokimia, dan analisis aktivitas antikosidan dilakukan di Laboratorium Bahan Baku Teknologi Hasil Perairan. Analisis proksimat (kadar air, abu, protein, dan lemak) dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Hasil Perairan dan Laboratorium Biokimia Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor. Uji kadar flavonoid total dilakukan di Laboratorium Kimia Analitik, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor.

3.2 Bahan dan Alat Bahan baku yang digunakan dalam penelitian ini adalah bagian daun dan kulit batang tumbuhan api-api (Avicennia marina) yang diperoleh dari Pantai Ekowisata Mangrove, Pantai Kapuk, Muara Karang, Jakarta Utara. Sampel daun api-api berasal dari pucuk daun dengan batasan antara ranting kedua dan kelima secara acak, dengan warna daun seragam yang kemudian dihomogenkan, sedangkan sampel kulit batang api-api diambil dengan ketinggian 160 cm di atas permukaan laut dengan batang tumbuhan api-api berdiameter 5-10 cm, warna batang daun putih kehijauan. Satu jenis pelarut yang digunakan dalam ekstraksi adalah metanol sebagai pelarut polar. Bahan kimia yang dipakai dalam uji aktivitas antioksidan adalah metode l,l-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), butylated hydroxytoluena (BHT) sebagai standar, dan methanol pro analisis sebagai pelarut. Bahan untuk uji fitokimia, yaitu H2SO4, akuades, kloroform p.a, anhidra asetat, asam sulfat pekat, HCl 2 N, pereaksi Dregendorff, pereaksi Wagner, pereaksi Meyer, serbuk magnesium, alkohol, HCl 37 %, etanol 95 %, etanol 70 %, FeCl3 5, AlCl3 10 %, natrium asetat 1M. Alat-alat yang digunakan antara lain pisau, talenan, timbangan digital, sudip, gegep, cawan porselen, oven, desikator, tabung reaksi, gelas erlenmeyer,

19 tabung Kjeldahl, buret, mortar, kertas saring Whatman 42, alumunium foil, kompor listrik, corong kaca, pipet mikro, pipet tetes, gelas ukur, gelas piala, rotary vacuum evaporator, vortex, inkubator, penangas air, spektrofotometer UVVIS, orbital shaker, kapas bebas lemak, tabung soxhlet, plastik, homogenizer, botol vial, waterbath, syringe dan alat penguji DPPH.

3.3 Prosedur Penelitian Rangkaian kegiatan penelitian meliputi pengambilan sampel tumbuhan api-api, preparasi sampel, dan analisis kimia yang terdiri atas uji proksimat dan fitokimia. Selanjutnya dilakukan ekstraksi dengan metode maserasi, uji kadar flavonoid total serta uji aktivitas antioksidan dengan DPPH. Proses penelitian secara umum dapat dilihat pada diagram alir Gambar 6. Kulit batang dan daun api-api

Penjemuran alami selama ± 3 hari

Penghalusan sampel

Pengekstraksian (1:3) (b/v)

Pengujian proksimat

Maserasi selama 24 jam sebanyak 16 kali ulangan menggunakan metanol p.a Penyaringan

Filtrat

Residu

Evaporasi

Pengujian kualitatif fitokimia

Pengujian kadar flavonoid total

Pengujian aktivitas antioksidan

Gambar 6 Proses penelitian secara garis besar

20 3.3.1 Pengambilan dan preparasi sampel Penelitian ini diawali dengan pengambilan sampel pohon api-api (Avicennia marina) dari Pantai Ekowisata Mangrove, Pantai Kapuk, Muara Karang, Jakarta Utara. Setelah sampel daun dan

kulit batang pohon api-api

diperoleh lalu dibawa dengan plastik ber-sealer, agar terhindar dari udara luar. Kemudian sampel dikeringkan di bawah sinar matahari selama kurang lebih 3 hari dengan paparan sinar matahari langsung dan diangin-anginkan pada malam hari untuk menjaga komponen aktif tidak ikut menguap saat pengeringan. Selanjutnya dilakukan preparasi untuk memisahkan perbagian kulit batang dan daun pohon api-api (Jacoeb et al. 2011). Setelah proses pengeringan, sampel dihancurkan sampai menjadi bagianbagian kecil atau serbuk agar memudahkan proses penapisan dan proses pengekstraksian. Untuk menjaga stabilitas dari kualitasnya, sampel disimpan dalam lemari pendingin yang dibungkus dengan plastik ber-sealer agar tetap terjaga dan terhindar dari kontaminan.

3.3.2 Analisis proksimat Analisis proksimat dilakukan untuk mengetahui kandungan gizi secara kasar (crude) yang meliputi kadar air menggunakan metode oven, abu menggunakan tanur, protein menggunakan metode Kjeldahl dan lemak menggunakan metode sokhlet.

a) Analisis kadar air (AOAC 2005) Analisis kadar air yaitu untuk mengetahui kandungan atau jumlah air yang terdapat pada suatu bahan. Tahap pertama adalah mengeringkan cawan porselen dalam oven pada suhu 105 0C selama 1 jam. Cawan tersebut diletakkan ke dalam desikator (kurang lebih 15 menit) dan dibiarkan sampai dingin kemudian ditimbang. Sampel seberat 5 gram ditimbang dalam cawan, setelah terlebih dahulu dihaluskan. Selanjutnya cawan yang telah diisi sampel tersebut dimasukkan ke dalam oven dengan suhu 102-105 0C selama 5-6 jam. Cawan tersebut dimasukkan ke dalam desikator dan dibiarkan sampai dingin (30 menit) kemudian ditimbang.

21 Perhitungan kadar air : % Kadar air = B - C x 100% B-A Keterangan : A = Berat cawan kosong (gram) B = Berat cawan yang diisi dengan sampel (gram) C = Berat cawan dengan sampel yang sudah dikeringkan (gram)

b) Analisis kadar abu (AOAC 2005) Analisis kadar abu yaitu untuk mengetahui jumlah abu yang terdapat pada suatu bahan terkait dengan mineral dari bahan yang dianalisis. Cawan abu porselen dibersihkan dan dikeringkan di dalam oven bersuhu sekitar 105 0C selama 30 menit. Cawan abu porselen tersebut dimasukkan ke dalam desikator (30 menit) dan kemudian ditimbang. Sampel sebanyak 5 gram ditimbang dalam cawan porselen. Selanjutnya dibakar di atas kompor listrik sampai tidak berasap dan dimasukkan ke dalam tanur pengabuan dengan suhu 600 o

C selama 7 jam. Cawan dimasukkan di dalam desikator dan dibiarkan sampai

dingin dan kemudian ditimbang. % Kadar abu = C - A x 100% B-A Keterangan : A = Berat cawan abu porselen kosong (gram) B = Berat cawan abu porselen dengan sampel (gram) C = Berat cawan abu porselen + sampel setelah dikeringkan (gram) c) Analisis kadar protein (AOAC 2005) Analisis protein, yaitu untuk mengetahui kandungan dari protein kasar (crude protein) pada suatu bahan. Tahapan yang dilakukan dalam analisis protein terdiri dari tiga tahap, yaitu destruksi, destilasi, dan titrasi. 1) Tahap destruksi Sampel ditimbang seberat 1 gram. Kemudian sampel dimasukkan ke dalam labu kjeldahl. Setengah butir katalis selenium dimasukkan ke dalam tabung tersebut dan ditambahkan 10 ml H2SO4. Tabung yang berisi larutan tersebut dimasukkan ke dalam alat pemanas dengan suhu 410 oC ditambah 10 ml air. Proses destruksi dilakukan sampai larutan menjadi jernih.

22 2) Tahap destilasi Larutan yang telah jernih didinginkan kemudian ditambah 50 ml akuades dan 20 ml NaOH 40 %, lalu didestilasi.

Hasil destilasi ditampung dalam

erlenmeyer 125 ml yang berisi 25 ml asam borat (H3BO3) 2 % yang mengandung indikator bromcherosol green 0,1 % dan methyl red 0,1% dengan perbandingan 2:1. Destilasi dilakukan dengan menambahkan 50 ml larutan NaOH-Na2S2O3 ke dalam alat destilasi hingga tertampung 40 ml destilat di dalam erlenmeyer dengan hasil destilat berwarna hijau kebiruan. 3) Tahap titrasi Titrasi dilakukan dengan menggunakan HCl 0,09 N sampai warna larutan pada erlenmeyer berubah warna menjadi merah muda. Volume titran dibaca dan dicatat. Perhitungan kadar protein api-api adalah sebagai berikut:

% Nitrogen = (ml HCl sampel – ml HCl blanko) x N HCl x 14 x 100% mg berat awal % Kadar Protein = % nitrogen x faktor konversi (6,25)

d) Analisis kadar lemak (AOAC 2005) Sampel seberat 5 gram (W1) dimasukkan ke dalam kertas saring dan dimasukkan ke dalam selongsong lemak, kemudian dimasukkan ke dalam labu lemak yang sudah ditimbang berat tetapnya (W2) dan disambungkan dengan tabung soxhlet. Selongsong lemak dimasukkan ke dalam ruang ekstraktor tabung soxhlet dan disiram dengan pelarut lemak. Tabung ekstraksi dipasang pada alat destilasi soxhlet lalu dipanaskan pada suhu 40 0C dengan menggunakan pemanas listrik selama 16 jam. Pelarut lemak yang ada dalam labu lemak didestilasi hingga semua pelarut lemak menguap. Pada saat destilasi pelarut akan tertampung di ruang ekstraktor, pelarut dikeluarkan sehingga tidak kembali ke dalam labu lemak, selanjutnya labu lemak dikeringkan dalam oven pada suhu 105 0C, setelah itu labu didinginkan dalam desikator sampai beratnya konstan (W3).

23 Kadar lemak ditentukan dengan rumus sebagai beikut. % Kadar lemak = W3 - W2 x100% W1 Keterangan : W1 = Berat sampel (gram) W2 = Berat labu lemak tanpa lemak (gram) W3 = Berat labu lemak dengan lemak (gram) 3.3.3 Ekstraksi dari tumbuhan api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) Tahap ekstraksi dilakukan secara tunggal dengan teknik maserasi menggunakan pelarut metanol pro analisis. Sampel tumbuhan api-api ditimbang sebanyak 25 gram masing-masing untuk daun dan kulit batang dari hasil pengeringan dan dimasukkan dalam erlenmeyer. Pelarut metanol ditambahkan sampai sampel terendam dengan perbandingan bahan dan pelarut adalah 1:3 (b/v), lalu Erlenmeyer ditutup dengan kapas dan alumunium foil. Sampel dimaserasi menggunakan orbital shaker selama 24 jam. Setelah 24 jam, larutan ekstrak yang diperoleh disaring dengan kertas saring Whatman 42 untuk memisahkan filtrat dan residu yang dihasilkan. Maserasi dilakukan berulang sebanyak 16 kali. Hasil penggabungan filtrat yang didapat dievaporasi pada suhu 37 oC. Filtrat yang diperoleh hasil evaporasi disimpan dalam botol ekstrak untuk dianalisis, yaitu uji fitokimia kualitatif, uji kadar flavonoid total dan uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH. Sebelum dilakukan pengujian aktivitas antioksidan ekstrak kasar yang diperoleh dilakukan perhitungan untuk nilai rendemen hasil ekstrakan. 3.3.4 Uji komponen fitokimia (Harborne 1987) Uji fitokimia dilakukan untuk menentukan komponen bioaktif yang terdapat pada ekstrak kasar pohon api-api untuk masing-masing perlakuan. Uji fitokimia yang dilakukan terdiri dari uji alkaloid, steroid/triterpenoid, flavonoid, saponin, fenol hidrokuinon, dan tanin.

Metode uji ini berdasarkan Harborne

(1987). a) Uji alkaloid Sejumlah sampel dilarutkan dalam beberapa tetes asam sulfat 2 N kemudian diuji dengan tiga pereaksi alkaloid yaitu, pereaksi Dragendorff, pereaksi

24 Meyer, dan pereaksi Wagner. Hasil uji dinyatakan positif bila dengan pereaksi Meyer terbentuk endapan putih kekuningan, endapan coklat dengan pereaksi Wagner dan endapan merah hingga jingga dengan pereaksi Dragendorff. b) Uji steroid/triterpenoid Sejumlah sampel dilarutkan dalam 2 ml kloroform 99,98 % dalam tabung reaksi. Asetat pekat diencerkan menggunakan air dan alkohol ditambahkan sebanyak 10 tetes kemudian ditambahkan asam sulfat pekat 3 tetes ke dalam campuran tersebut. Hasil uji positif mengandung steroid dan triterpenoid yaitu dengan terbentuknya larutan berwarna merah untuk pertama kali kemudian berubah menjadi biru dan hijau. c) Uji flavonoid Sejumlah sampel ditambah serbuk magnesium 0,1 mg dan 0,4 ml amil alkohol (campuran asam klorida 37 % dan etanol 95 % dengan volume yang sama) dan 4 ml alkohol kemudian campuran dikocok. Hasil uji positif sampel mengandung flavonoid ditunjukkan dengan terbentuknya warna merah, kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol. d) Uji fenol hidrokuinon (pereaksi FeCl3) Sejumlah sampel diekstrak dengan 20 ml etanol 70 %. Larutan yang dihasilkan diambil sebanyak 1 ml kemudian ditambah 2 tetes larutan FeCl3 5 %. Hasil uji positif sampel mengandung fenol hidrokuinon ditunjukkan dengan terbentuknya warna hijau atau hijau biru. e) Tanin Sejumlah sampel ditambahkan FeCl3 kemudian campuran dihomogenkan. Reaksi positif ditunjukkan dengan terbentuknya warna merah pada campuran. f) Uji Saponin Saponin dapat dideteksi dengan uji busa dalam air panas. Busa yang stabil selama 30 menit dan tidak hilang pada penambahan 1 tetes HCl 2 N menunjukkan adanya saponin.

25 3.3.5 Uji kadar flavonoid total Sebanyak 0,5 ml ekstrak yang telah diencerkan dengan etanol p.a (1:10 g/ml) ditambah 1,5 ml etanol p.a; 0,1 ml AlCl3 10 %; 0,1 ml natrium asetat 1 M; dan 2,8 ml akuades. Campuran larutan tersebut dibiarkan selama 30 menit dan diukur absorbansinya pada 417 nm. Kuersetin digunakan untuk membuat kurva kalibrasi. Kandungan total flavonoid dalam ekstrak etanol diekspresikan sebagai mg kuersetin/gram serbuk kering.

3.3.6 Uji aktivitas antioksidan Uji aktivitas antioksidan yang dilakukan menggunakan metode DPPH berdasarkan kemampuan sampel yang digunakan dalam mereduksi radikal bebas stabil l,l-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH). Blanko dibuat dari larutan methanol dengan konsentrasi 200, 400, 600, dan 800 ppm. Sebanyak 0,01 mg ekstrak apiapi dibutuhkan untuk membuat larutan stok dengan konsentrasi 200, 400, 600, dan 800 ppm. Sebanyak 0,0004 mg butylated hydroxytoluena (BHT) sebagai standar ditimbang lalu ditambah 50 ml metanol dengan konsentrasi 2, 4, 6, dan 8 ppm. Selanjutnya 0,0098 mg DPPH diencerkan dengan 25 ml metanol. Selanjutnya pemberian DPPH pada larutan stok dan BHT untuk masing-masing konsentrasi. Campuran dihomogenkan dan diinkubasi pada suhu 37 oC selama 30 menit. Serapan yang dihasilkan diukur dengan spektrofotometer UV-Visible pada panjang gelombang 517 nm. Persentase penghambatan aktivitas radikal bebas diperoleh dari nilai absorbansi sampel. Persamaan regresi diperoleh dari hubungan antara konsentrasi sampel dan presentase penghambatan aktivitas radikal bebas. Aktivitas antioksidan dari masing-masing sampel dan antioksidan pembanding BHT dinyatakan dengan persen inhibisi, yang dihitung dengan formulasi sebagai berikut: % inhibisi =

absorbansi blanko – absorbansi sampel

x 100 %

absorbansi blanko Nilai konsentrasi penghambatan aktivitas radikal bebas sebanyak 50 % (IC50) dihitung dengan menggunakan persamaan regresi linier. Nilai IC50

26 diperoleh dengan memasukkan y=50 serta nilai A dan B yang telah diketahui. Nilai x sebagai IC50 dapat dihitung dengan persamaan : y = A + B Ln (x) Y X A

= persen inhibisi = konsentrasi sampel (ppm) = slope, B = intercept

27 4 HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Karakteristik Api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) Pohon api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.) merupakan tumbuhan sejati yang hidup di kawasan mangrove. Morfologi tumbuhan api-api yang diambil dari Pantai Ekowisata Mangrove, Pantai Kapuk, Muara Karang, Jakarta Utara dapat dilihat pada Gambar 7.

Gambar 7 Daun pohon api-api yang diambil dan dijadikan sebagai sampel Daun api-api yang didapat pada bagian atas berwarna hijau muda dan bagian bawah berwarna abu-abu keperakan. Bentuknya elips dengan panjang ratarata daun yang didapat berkisar 5-10 cm. Daun api-api memiliki ruas atau tulang daun yang sejajar dan teratur. Teksurnya tidak lunak apabila disentuh dengan tangan. Kulit batang api-api yang digunakan berwarna cokelat muda, tipis dan berserat. Pada bagian dalam terlihat warna yang lebih cerah, yaitu putih kehijauan dan sedikit berair (Lampiran 1). Proses karakterisasi dilakukan untuk mengetahui sifat dari bahan baku yang digunakan. Karakterisasi bahan baku ini tidak terbatas pada sifat fisik saja, tetapi juga pada sifat kimia, karena sifat fisik maupun kimia dari bahan baku yang digunakan berbeda antara yang satu dengan yang lain. Karakterisasi sifat kimia dilakukan untuk mengetahui zat yang terkandung di dalam bahan, misalnya kandungan nilai gizi yang dapat dimanfaatkan secara optimal untuk kebutuhan manusia.

28 4.2 Kandungan Gizi Kandungan gizi pada daun dan kulit batang api-api dapat diketahui melalui uji proksimat. Analisis proksimat merupakan suatu analisis yang dilakukan untuk memprediksi komposisi kimia suatu bahan, termasuk di dalamnya kandungan air, abu, lemak, dan protein. Tumbuhan api-api banyak dimanfaatkan oleh masyarakat sekitar baik sebagai sumber makanan maupun untuk kesehatan. Tumbuhan berdaun sejati ini memiliki nilai gizi yang cukup tinggi untuk dijadikan sumber makanan. Berikut hasil data proksimat dari tumbuhan api-api dapat dilihat pada Gambar 8.

Gambar 8 Hasil data proksimat tumbuhan api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.); Daun; Kulit batang 1) Kadar air Daun api-api memiliki kadar air yang cukup tinggi, yaitu sebesar 69,2 % dan kulit batang api-api sebesar 55 % (Lampiran 2). Nilai tersebut tidak jauh berbeda dengan hasil analisis kadar air yang telah diuji sebelumnya oleh Jacoeb et al. (2011), yakni kadar air daun api-api sebesar 68,16 %. Hasil tersebut sedikit berbeda dengan penelitian yang telah dilakukan oleh Wibowo et al. (2009), yaitu sebesar 70,59 %. Perbedaan tersebut dimungkinkan karena adanya faktor internal dan eksternal. Faktor internal sangat mempengaruhi perbedaan yang terjadi, yakni sifat tumbuhan yang berada di wilayah Jakarta dengan wilayah Subang. Faktor eksternal seperti habitat dan kondisi lingkungan juga dapat mempengaruhi perbedaan komposisi kimia api-api.

29 2) Kadar abu Hasil pengukuran kadar abu menggunakan bobot kering pada daun dan kulit batang api-api menunjukkan bahwa daun api-api mengandung mineral atau zat anorganik sebesar 14,91 % dan kulit batang api-api memiliki kadar abu sebesar 9,6 % (Lampiran 2). Hasil tersebut tidak jauh berbeda dengan hasil penelitian Wibowo et al.(2009) bahwa kadar abu pada daun api-api sebesar 15,61 %. Hasil serupa dikemukakan oleh Jacoeb et al. (2011), yaitu sebesar 13,97 %. Tinggi dan rendahnya kadar abu pada tumbuhan dapat disebabkan oleh perbedaan habitat dan lingkungan yang berbeda satu sama lainnya. Setiap lingkungan perairan dapat menyediakan sumber mineral yang berbeda-beda bagi organisme akuatik yang hidup didalamnya. Tumbuhan api-api merupakan tumbuhan sejati yang hidupnya hanya mampu di wilayah mangrove atau estuari. Bengen (2000) menjelaskan bahwa wilayah estuari merupakan wilayah perairan dimana terjadi peralihan atau pencampuran antara air tawar dan air laut yang menyebabkan banyaknya mineral yang terkandung di dalamnya.

3) Kadar protein Hasil pengukuran bobot kering kadar protein menunjukkan bahwa daun api-api dan kulit batangnya memiliki kadar protein sebesar 11,04 % dan 6,4 % (Lampiran 2). Hasil tersebut sedikit berbeda menurut Wibowo et al. (2009) bahwa protein api-api sebesar 17,31 %. Berbeda halnya dengan hasil penelitian Jacoeb et al. (2011) yang menyatakan bahwa daun api-api memiliki kandungan protein sebesar 11,53 %. Perbedaan tersebut dapat dipengaruhi adanya beberapa faktor, yaitu habitat, umur, dan laju metabolisme. Daun memiliki kadar protein yang tinggi karena di daun terjadi proses fotosintesis yang membutuhkan banyak jaringan serta organ yang bekerja. Kulit batang cenderung memiliki kadar protein yang rendah dari daun dikarenakan kulit batang hanya terdapat jaringan sistem pembuluh yang bertitik beratkan pada kerja sistem angkut mineral, unsur hara dan menjaga kesetimbangan akibat adanya garam. 4) Kadar lemak Kadar lemak daun api-api 2,21 % dan kulit batang api-api sebesar 1,55 % (Lampiran 2). Hasil tersebut tidak jauh berbeda dengan hasil penelitian Jacoeb et

30 al. (2011), yaitu kadar lemak daun api-api sebesar 2,45 %. Berbeda halnya dengan penelitian Wibowo et al. (2009), yaitu sebesar 1,16 %. Perbedaan tersebut dibenarkan oleh Yunizal et al. (1998) bahwa kadar lemak yang rendah dapat disebabkan karena kandungan air dalam daun dan kulit batang pohon api-api sangat tinggi, sehingga secara proporsional persentase kadar lemak akan turun drastis. Faktor lain seperti umur, habitat, dan perbedaan lokasi pengambilan sampel juga menjadi faktor penting yang dapat mempengaruhi kadar lemak suatu bahan.

4.3 Komponen Bioaktif Ekstrak Kasar Hasil ekstraksi komponen bioaktif api-api menunjukkan bahwa ekstrak kasar menggunakan pelarut metanol berwarna coklat kehijauan dan berbau khas ekstrak tumbuhan. Rendemen ekstrak kasar yang dihasilkan cukup tinggi untuk daun 17,53 % dan kulit batang api-api 12,07 % (Lampiran 2). Uji fitokimia yang dilakukan dalam penelitian ini meliputi uji alkaloid, steroid, flavonoid, saponin, fenol hidrokuinon, dan tanin. Hasil uji fitokimia pada masing-masing ekstrak kasar api-api dapat dilihat pada Tabel 2. Tabel 2 Hasil uji fitokimia ekstrak kasar api-api ( Avicennia marina) Uji Fitokimia

Ekstrak Daun

Kulit Batang

Standar (warna)

Alkaloid: -Dragendorff -Meyer -Wagner

+ + -

-

Endapan merah atau jingga Endapan putih kekuningan Endapat coklat

Steroid/triterpenoid

++

++

Perubahan dari merah menjadi biru/hijau

Flavonoid

++

++

Lapisan amil alkohol berwarna merah/kuning/hijau

Saponin

-

-

Terbentuk busa

Fenol hidrokuinon

-

+

Warna hijau atau hijau biru

Tanin

+

++

Terbentuk warna merah

Keterangan: (-) hasil negatif; (+) hasil ada namun tidak pekat; (++) hasil ada dan pekat

31 a) Alkaloid Komponen alkaloid didefinisikan sebagai substansi dasar yang memiliki satu atau lebih atom nitrogen yang bersifat basa dan tergabung dalam suatu sistem siklis, yaitu cincin heterosiklik (Harborne 1984). Alkaloid ditemukan pada daun api-api, namun tidak ditemukan pada kulit batang api-api. Alkaloid umumnya larut pada pelarut organik (non polar), sedangkan beberapa kelompok pseudoalkaloid dan protoalkaloid larut dalam air (polar) (Lenny 2006). Penelitian ini dilakukan dengan pelarut metanol (polar) yang justru menunjukkan adanya kandungan alkaloid pada daun api-api walaupun hasil yang ditunjukkan (Tabel 2) tidak terlalu pekat, hal ini menunjukkan bahwa daun api-api tidak mengandung alkaloid (sesungguhnya) yang bersifat racun, tetapi hanya mengandung protoalkaloid dan pseudoalkaloid saja. Alkaloid tidak dihasilkan pada kulit batang api-api dengan ditandai hasil negatif pada Tabel 2. b) Steroid/triterpenoid Hasil uji fitokimia untuk daun dan kulit batang api-api menunjukkan adanya senyawa steroid/triterpenoid, ditunjukkan oleh hasil yang cukup pekat (Tabel 2). Steroid/triterpenoid dapat diketahui keberadaanya dengan perkursor kolesterol yang bersifat non polar (Harborne 1984). Hasil pada Tabel 2 menunjukkan adanya senyawa steroid/triterpenoid walaupun menggunakan pelarut metanol yang bersifat polar, hal ini dapat terjadi mengingat metanol merupakan pelarut polar yang dapat mengekstrak komponen lainnya, meskipun bersifat non polar ataupun semipolar. Schmidt dan Steinhart (2001) menyatakan bahwa kandungan steroid pada ekstrak polar dan non polar tidak menunjukkan hasil yang berbeda nyata. c)

Flavonoid Hasil pengujian flavonoid terhadap daun dan kulit batang api-api (Tabel 2)

menunjukkan bahwa bagian tersebut sama-sama memiliki kandungan flavonoid, hal itu ditunjukkan dengan terbentuknya warna kuning pekat pada lapisan amil alkohol yang telah diuji (Lampiran 3). Flavonoid merupakan senyawa polar yang dapat larut pada pelarut polar, hal ini dibuktikan dengan terlarutnya senyawa flavonoid menggunakan pelarut metanol. Flavonoid umumnya merupakan komponen larut air, sehingga dapat diekstrak dengan pelarut polar dan tertinggal

32 pada lapisan aqueous (Harborne 1984). Flavonoid merupakan senyawa aktif yang potensial dan sangat efektif untuk digunakan sebagai antioksidan (Astawan dan Kasih 2008), dan hal ini pun terbukti dari hasil penelitian Simamora (2011) yang menunjukkan bahwa seluruh komponen flavonoid yang diisolasi dari buah apel memiliki aktivitas antioksidan yang cukup kuat. d) Tanin Hasil pengujian fitokimia untuk uji tanin menunjukkan bahwa daun dan kulit batang api-api sama-sama mengandung tanin. Hasil uji tanin untuk daun terlihat ada, namun tidak pekat apabila dibandingkan dengan hasil yang ditunjukkan oleh kulit batang api-api (Tabel 2). Tanin di dalam tumbuhan dapat berfungsi sebagai penyamak apabila jaringan rusak, karena sifat tanin yang mampu menyambung silangkan protein. Sebagian besar tumbuhan yang banyak bertanin dihindari oleh hewan pemakan tumbuhan, karena rasanya yang pahit. Fungsi utama tanin di dalam tumbuhan adalah penolak hewan pemakan tumbuhan (Harborne 1987). Tumbuhan api-api termasuk tumbuhan mangrove yang memiliki rasa pahit dan banyak digunakan penduduk sekitar untuk obat nyamuk.

4.4 Aktivitas Antioksidan Hasil

uji

aktivitas

antioksidan

dengan

DPPH

menggunakan

spektrofotometer pada panjang gelombang 517 nm menunjukkan bahwa daun dan kulit batang api-api memiliki aktivitas antioksidan. Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak daun dan ekstrak kulit batang api-api dapat dilihat pada Tabel 3.

Tabel 3 Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak daun dan ekstrak kulit batang api-api (Avicennia marina) % Inhibisi Sampel

Ekstrak Daun Ekstrak Kulit Batang

600 (ppm)

800

IC50 (ppm)

200

400

18,75

19,55

20,23

21,48

36,35

7,84

9,25

10,00

10,34

51,51

33 Tabel 3 menunjukkan bahwa persen inhibisi tertinggi, baik daun maupun kulit batang api-api dimiliki oleh konsentrasi tertinggi, yaitu 800 ppm dan nilai terendah untuk persen inhibisi dimiliki oleh konsentrasi terendah, yaitu 200 ppm. Hal ini menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi yang digunakan, semakin tinggi pula daya hambat yang dilakukan sebagai aktivitas antioksidan. Nilai IC 50 yang dihasilkan oleh ekstrak daun lebih rendah dari ekstrak kulit batang, yaitu 36,35 ppm untuk daun dan 51,51 ppm untuk kulit batang. Ekstrak daun lebih banyak menghilangkan 50 % aktivitas DPPH apabila dibandingkan dengan ekstrak kulit batang. Molyneux (2004) menyatakan bahwa nilai IC50 adalah konsentrasi yang menyebabkan hilangnya 50 % aktivitas DPPH. Kedua ekstrak kasar daun dan kulit batang pohon api-api memiliki kekuatan penghambat yang berbeda-beda satu sama lainnya. Hubungan aktivitas antioksidan antara ekstrak kasar daun dan ekstrak kasar kulit batang api-api dengan persen inhibisinya dapat dilihat pada Gambar 9.

Gambar 9 Grafik perbandingan aktivitas antioksidan antara ekstrak kasar daun dan kulit batang api-api dengan persen inhibisinya; Daun; Kulit Batang Gambar 9 menunjukkan daun api-api memiliki aktivitas yang cukup baik bila dibandingkan kulit batang. Hal ini diduga karena adanya kandungan senyawa aktif

yang

cukup

banyak

terdapat

dalam

daun,

seperti

alkaloid,

steroid/triterpenoid, dan flavonoid (Tabel 2). Penelitian ini menggunakan larutan BHT sebagai pembanding dalam uji aktivitas antioksidan. Jacoeb et al. (2011) mengemukakan bahwa nilai IC50 BHT sebesar 5,85 ppm, dimana hasil tersebut merupakan hasil terbaik untuk aktivitas

34 antioksidan. Larutan BHT yang digunakan dalam penelitian ini menghasilkan nilai IC50 sebesar 3,17 ppm. Nilai IC50 BHT ini tidak jauh berbeda dengan nilai yang diperoleh Jacoeb et al. (2011) dalam penelitiannya, dan tetap menunjukkan bahwa antioksidan BHT merupakan antioksidan dengan aktivitas yang sangat kuat (<50 ppm). Hasil uji aktivitas antioksidan larutan BHT dapat dilihat pada Tabel 4. Tabel 4 Hasil uji aktivitas antioksidan larutan BHT % Inhibisi Sampel

Larutan BHT

2

4

22,05

37,73

6 (ppm) 49,66

8

58,30

IC50 (ppm)

3,17

Tabel 4 menunjukkan hasil larutan BHT memiliki persen inhibisi tertinggi pada konsentrasi tertinggi, yaitu 8 ppm dan persen inhibisi terendah pada konsentrasi terendah, yaitu 2 ppm. Hal ini menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi yang digunakan, semakin tinggi pula daya hambat yang dilakukan sebagai aktivitas antioksidan. Nilai IC50 BHT sebesar 3,17 ppm, merupakan nilai terbaik apabila dibandingkan dengan nilai IC50 ekstrak daun dan kulit batang apiapi (Tabel 3). Pengujian aktivitas antioksidan BHT ini menghasilkan hubungan antara konsentrasi BHT dengan persen inhibisinya, yang dapat dilihat pada Gambar 10.

Gambar 10 Grafik hubungan konsentrasi BHT dengan persen inhibisi Gambar 10 menunjukkan hubungan antara konsentrasi BHT dengan persen inhibisinya. Semakin tinggi konsentrasi yang digunakan maka semakin

35 tinggi pula persen inhibisi atau daya hambatnya. Ekstrak daun dan kulit batang pohon api-api pada Gambar 9 sama-sama menunjukkan hasil yang serupa dengan larutan BHT pada Gambar 10, grafik akan bergerak naik ke atas dengan naiknya konsentrasi yang digunakan. Nilai IC50 yang ditunjukkan pada Tabel 3 untuk daun dan kulit batang api-api, serta larutan BHT pada Tabel 4 sama-sama menunjukkan bahwa ketiga ekstrak tersebut memiliki aktivitas antioksidan yang cukup kuat (<50 ppm), sehingga dapat disimpulkan bahwa ekstrak daun dan kulit batang apiapi dapat digunakan sebagai antioksidan alami pengganti antioksidan sintetik seperti antioksidan BHT.

4.5 Kandungan Flavonoid Api-api sebagai Antioksidan Hasil penelitian menunjukkan daun dan kulit batang pohon api-api mengandung senyawa aktif flavonoid (Tabel 2) yang efektif digunakan sebagai antioksidan. Hal ini terlihat jelas dengan adanya aktivitas antioksidan yang ditunjukkan oleh ekstrak kasar pada Gambar 9 dan Tabel 3, ekstrak kasar daun dan kulit batang api-api memiliki nilai IC50 yang cukup tinggi. Wibowo et al. (2009) menyatakan bahwa Avicennia marina terutama bagian daun dan kulit batang mengandung senyawa flavonoid, hal ini dibuktikan dengan adanya perubahan warna yang cukup pekat pada uji fitokimia. Hasil pengukuran kadar flavonoid yang terkandung di dalam daun api-api sebesar 1,18 % dan kulit batang api-api sebesar 0,67 %. Menurut Erukainure (2011), semakin tinggi kandungan flavonoid total suatu bahan, maka semakin tinggi aktivitas antioksidannya. Adanya kandungan flavonoid yang tinggi pada daun api-api serta nilai IC50 yang rendah (36,35 ppm), menunjukkan bahwa daun api-api memiliki aktivitas antioksidan yang cukup kuat bila dibandingkan dengan kulit batang api-api yang memiliki nilai IC50 sebesar 51,51 ppm. Molyneux (2004) menyatakan bahwa aktivitas antioksidan dikategegorikan kuat apabila memiliki nilai IC50 dibawah 50 ppm (<50 ppm). Beberapa penelitian menunjukkan adanya hubungan antara kadar total flavonoid yang terkandung dengan aktivitas antioksidannya. Penelitian tersebut dilakukan terhadap beberapa tanaman yang diduga memiliki aktivitas antioksidan seperti Aegle marmelos dan daun seledri

36 dengan melihat kadar total flavonoid yang terkandung di dalamnya. Kadar total flavonoid yang terkandung di beberapa tanaman ditunjukkan pada Tabel 5. Tabel 5 menunjukkan bahwa kandungan flavonoid yang terkandung dalam daun api-api lebih tinggi bila dibandingkan tanaman Aegle marmelos, seledri dan tempuyung, namun lebih rendah dari tanaman jati belanda. Kadar total flavonoid kulit batang api-api juga lebih tinggi dari kulit batang Aegle marmelos. Perbedaan hasil tersebut dikarenakan adanya perbedaan jenis tanaman, habitat, umur tanaman, jumlah sampel yang diekstrak, dan lamanya pengekstraksian. Tabel 5 Kadar total flavonoid beberapa tanaman (%) Bagian tanaman Daun Kulit Batang

Jenis tanaman Api-api

Aegle marmelosa

1,18 0,67

0,824 0,140

Seledrib

0,51 -

Jati Belandac

3,0480 -

Tempuyungc

0,7537 -

Keterangan: a Mujeeb et al. (2010) b Rafi et al. (2006) c Widyastuti (2010)

Hasil beberapa penelitian tersebut sama-sama menunjukkan bahwa kadar total flavonoid yang terkandung dalam bahan memiliki korelasi terhadap aktivitas antioksidannya. Tanaman jati belanda memiliki aktivitas antioksidan tertinggi bila dibandingkan api-api, Aegle marmelos, seledri dan tempuyung. Hal ini sesuai dengan kadar total flavonoid yang terkandung di dalam tanaman jati belanda yang lebih tinggi dari tanaman lainnya. Adanya senyawa flavonoid yang mempunyai gugus hidroksi tersubstitusi terhadap gugus –OH dan –OR, maka flavonoid cocok dijadikan sebagai antioksidan (Waji dan Sugrani 2009). Golongan flavonoid terbesar di dalam daun api-api adalah antosianin, flavonol, flavon, dan glikoflafon. Antosianin merupakan pigmen pewarna daun yang paling penting dan larut dalam air (polar) (Harborne 1987). Hal ini terlihat jelas pada saat dilakukan proses ekstraksi, daun api-api mengeluarkan warna hijau tua yang cukup pekat (Lampiran 5), warna hijau tersebut diduga karena terdapat banyak pigmen antosianin yang ikut larut pada saat ekstraksi berlangsung. Golongan flavonoid lainnya tersebar luas dan membantu penyerapan sinar matahari dalam proses fotosintesis.

37 Flavonol yang terkandung dalam daun dan kulit batang api-api mengandung kuersetin dan glikosida. Kuersetin berperan dalam menangkap radikal bebas dan mengkhelat ion logam transisi, hal ini ditunjukkan dari aktivitas antikosidan yang dilakukannya. Daun dan kulit batang pohon api-api menunjukkan aktivitas antioksidan yang sangat baik, terlihat adanya perubahan warna yang dapat dilihat secara kasat mata. Warna yang ditunjukkan adalah warna kuning setelah diberi radikal bebas DPPH (Lampiran 3). Warna kuning menunjukkan reaksi antara radikal bebas yang terikat dengan senyawa antioksidan (Molyneux 2004). Mekanisme perubahan warna DPPH yang terjadi akibat adanya reaksi penangkapan radikal bebas oleh senyawa antioksidan dapat dilihat pada Gambar 3. Senyawa polifenol misalnya flavonoid memiliki aktivitas antioksidan yang berkaitan erat dengan struktur rantai samping dan juga substitusi pada cincin aromatiknya. Kemampuannya untuk bereaksi dengan radikal bebas DPPH dapat mempengaruhi kekuatan antioksidannya. Aktivitas peredaman radikal bebas senyawa flavonoid yang terkandung dalam daun dan kulit batang pohon api-api diduga akibat pengaruh jumlah dan posisi hidrogen fenolik dalam molekul inti flavonoidnya. Akibat pengaruh jumlah dan posisi hidrogen fenolik itulah yang mengakibatkan daun dan kulit batang api-api memiliki aktivitas antioksidan yang sangat tinggi. Flavonoid dalam daun dan kulit batang pohon api-api mengandung banyak atom hidrogen yang mampu menggantikan atau mengkhelat logam radikal bebas pemicu spesies pembentuk kanker. Pengkhelatan logam radikal bebas oleh flavonoid dapat dilihat pada Gambar 12.

F-OH + R

F-O + RH

Gambar 11 Mekanisme pengkhelatan logam radikal bebas oleh flavonoid (Sumber: Kumar et al. 2011a)

Penelitian ini menggunakan radikal bebas DPPH yang mampu ditangkap dan disubstitusikan dengan gugus hidrogen oleh senyawa antioksidan seperti flavonoid. Senyawa flavonoid (F) melepaskan gugus hidrogen (H) dan mengikat serta menggantikan radikal bebas (R). Radikal bebas DPPH menjadi nonaktif dan

38 terhindar dari pemicu penyakit degeneratif seperti kanker. Tingginya aktivitas antioksidan yang dimiliki terbukti dengan adanya perubahan warna dari ungu menjadi kuning, hal itu menandakan banyaknya gugus hidroksil yang mampu mengikat logam radikal bebas. Penelitian pada daun surian yang dilakukan oleh Yuhernita dan Juniarti (2011) menggunakan metode DPPH dan pelarut metanol menujukkan bahwa daun surian memiliki aktivitas antioksidan yang sangat baik. Hal ini diduga karena adanya kandungan flavonoid di dalamnya. Jacoeb et al. (2011) menguji aktivitas antioksidan pada daun api-api yang diambil dari Desa Belanakan, Kota Subang, menunjukkan hasil yang cukup memuaskan, yaitu daun api-api memiliki aktivitas antioksidan yang cukup kuat akibat pengaruh kandungan flavonoid di dalamnya. Begitu pula hasil penelitian yang dilakukan oleh Afzal et al. (2011) yang mendeteksi adanya kandungan flavonoid dalam daun Avicennia marina (Forks.)Vierh. yang menjadi salah satu komponen penyusun utama senyawa antioksidan dan antifungial serta mengobati penyakit kulit.

39 5 KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan Penghitungan bobot kering didapatkan daun pohon api-api mengandung air 69,2 %, abu 14,91 %, protein 11,04 %, dan lemak 2,21 %. Sedangkan kulit batang pohon api-api mengandung air 55 %, abu 9,6 %, protein 6,4 %, dan lemak 1,55 %. Ekstrak kasar daun mengandung senyawa bioaktif alkaloid, steroid/triterpenoid, flavonoid, dan tanin. Ekstrak kasar kulit batang mengandung steroid/triterpenoid, flavonoid, fenol hidrokuinon, dan tanin. Kadar flavonoid total daun 1,18 % dan kulit batang 0,67 %. Nilai IC50 ekstrak daun pohon api-api sebesar 36,35 ppm dan ekstrak kulit batang pohon apiapi sebesar 51,51 ppm. Adanya kandungan flavonoid yang tinggi pada daun apiapi serta nilai IC50 yang rendah, menunjukkan bahwa daun api-api memiliki aktivitas antioksidan yang cukup kuat bila dibandingkan dengan kulit batang apiapi. Hal tersebut membuktikan bahwa daun api-api dapat digunakan sebagai antioksidan dan menjadi antioksidan pengganti BHT, karena sama-sama memiliki aktivitas antioksidan yang kuat (<50 ppm). Selain sebagai antioksidan, flavonoid dalam daun dan kulit batang api-api dapat digunakan sebagai antimikrobial, antifungial, antiinflamasi dan obat-obatan yang dapat dimanfaatkan dalam bidang kesehatan, farmasi serta kecantikan seperti kosmetika.

5.2 Saran Saran yang dapat diberikan dari hasil penelitian ini adalah perlu dilakukan penelitian lanjutan berupa fraksinasi senyawa aktif lainnya, yaitu alkaloid dan triterpenoid yang dapat digunakan sebagai antimikroba. Pengujian senyawa flavonoid pada daun dan kulit batang pohon api-api terhadap anti-inflamasi juga perlu dilakukan mengingat daun dan kulit batang tersebut biasa digunakan penduduk setempat sebagai obat luka dan obat cacar.

40 DAFTAR PUSTAKA Afzal M, Masood R, Jan G, Majid A, Fiaz M, Shah AH, Alam J, Mehdi FS, Abbasi FM, Ahmad H, Islam M, Inamullah, Amin NU. 2011. Efficacy of Avicennia marina (Forsk.) Vierh. leaves extracts againts some atmospheric fungi. African Journal of Biotechnology 10(52): 1079010794. [AOAC] Association of Official Analytical Chemist. 2005. Official Method of Analysis of The Association of Official Analytical of Chemist. Arlington: The Association of Official Analytical Chemist, Inc. Ansel. 1989. Pengatur Bentuk Sediaan Farmasi. Jakarta: UI Press. Astawan M, Kasih AL. 2008. Khasiat Warna-warni Makanan. Jakarta: PT Gramedia Bandaranayake WM. 1999. Economic, traditional and medicinal uses of mangroves. Australian Institut of Marine Science (28). Bayu A. 2009. Hutan mangrove sebagai salah satu sumber produk alam laut. Oseana.Vol XXXIV No.2 (15-23). Belitz HD, Grosch W, Schieberle P. 2009. Food Chemistry. Ed rev ke-4. Verlag: Springer. Bengen DG. 2000. Sinopsis Ekosistem dan Sumberdaya Alam Pesisir. Bogor: Pusat Kajian Sumberdaya Pesisir dan Lautan –IPB. Bengen DG. 2001. Pedoman Teknis Pengenalan dan Pengelolaan Ekosistem Mangrove. Bogor: Pusat Kajian Sumberdaya Pesisir dan Lautan –IPB. Cahyadi W. 2008. Bahan Tambahan Pangan. Jakarta: Bumi Aksara. Cai W, Gu X, Tang J. 2010. Extraction, purification, and characterisation of the flavonoids from Opuntia milpa alta skin. Journal of Czech Food Science. 28(2):108-116. Copriady J, Yasmi E, Hidayati . 2005. Isolasi dan karakterisasi senyawa kumarin dari kulit buah jeruk nipis (Citrus hystrix DC). Jurnal Biogenesis 2:1315. Cui CB, Xu C, Gu QQ, Chu SD, Ji HH, Jing G. 2004. A new furostanol saponin from the water-extract of Dioscorea nipponica Mak., the raw material of the traditional Chinese herbal medicine wei ao xin. Chinese Chemical Letters 15(10):1191-1194.

41 Erukainure OL, Oke OV, Ajiboye AJ, Okafor OY. 2011. Nutritional qualities and phytochemical constituents of Clerodendrum volubile, a tropical nonconventional vegetable. International Food Research Journal 18(4):1393-1399. Harborne JB. 1967. Comparative Biochemistry of The Flavonoids. Academic Press Inc.

London:

Harborne JB. 1984. Phytochemical methods. Ed ke-2. New York: Chapman and Hall. Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia. Padmawinata K, Soediro I, penerjemah. Bandung: ITB. Terjemahan dari: Phytochemical Methods. Herawati, Akhlus S. 2006. Kinerja BHT sebagai antioksidan minyak sawit pada perlindungan terhadap oksidasi oksigen singlet. Akta Kimindo 2(1):1-8. Jacoeb AM, Purwaningsih S, Rinto. 2011. Anatomi komponen bioaktif dan aktivitas antioksidan daun mangrove Api-api (Avicennia marina). Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia 14(2): 143-152. Kannan A, Hettiarachchy N, Narayan S. 2009. Colon and breast anti-cancer effects of peptide hydrolysates derived from rice bran. The Open Bioactive Coumpounds Journal 2:17-20. Ketaren S. 2008. Pengantar Teknologi Minyak dan Lemak Pangan. Jakarta: UIPress. Khunaifi M. 2010. Uji aktivitas antibakteri ekstral daun binahong (Anredera cordifolia (Ten.)Steenis) terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa.[skripsi]. Malang: Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim. Kumalaningsih S. 2006. Antioksidan Alami. Surabaya: Trubus Agrisarana. Kumar B, Sandhar HK, Tiwari P, Salhan M, Sharma P. 2011a. A review of phytochemistry and pharmacology of flavonoids. International Pharmaceutica Sciencia (IPS) 1(1):26-29. Kumar JIN, Sajish PR, George B, Viyol S, Kumar RN. 2011b. Nutrient dynamic in an Avicennia marina (Forsk.) Vierh. mangrove forest in Vamleshwar, Near Narmada Estuary, West Coast of Gujarat, India. Global Journal of Enviromental Research Vol 5(1): 32-38. Kuncahyo I, Sunardi. 2007. Uji aktivitas antioksidan ekstrak belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi, L.) terhadap 1,1 diphenyl-2- pycrylhidrazil (DPPH). Makalah Seminar Nasional Teknologi.

42 Lenny S. 2006. Senyawa flavonoida, fenilpropanoida dan alkaloida. [makalah]. Medan: Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sumatera Utara. Molyneux P. 2004. The use of stable free radical diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for estimating antioksidan activity. Songklanakarin Journal Science Technology 26(2):211-219. Mujeeb M, Siddique NA, Najmi AK, Akram M. 2010. Evaluation of antioxidant activity, quantitative estimation of phenols and flavonoids in different parts of Aegle marmelos. African Journal of Plant Science 4(1): 001005 Musthafa Z, Lawrence GS. 2000. Peran antioksidan dalam penghambatan aterosklerosis pada tikus wistar diabetes mellitus. Cermin Dunia Kedokteran 127:32-33. Nybakken JW. 1992. Biologi Laut Suatu Pendekatan Ekologis. Alih bahasa oleh M. Eidman, Koesoebiono, D.G. Bengen, M. Hutomo, S. Sukardjo. Jakarta: PT. Gramedia Pustaka Utama. Oktariana EW. 2007. Uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol rimpang lengkuas merah (Alpinia galanga) dengan metode DPPH (1,1-difenil-2pikrilhidrazil). [skripsi]. Semarang: Universitas Diponegoro. Porto DD, Henriques AT, Fett-Neto AG. 2009. Bioactive alkaloids from South American Psychotria and related species. The Open Bioactive Compounds Journal 2:29-36. Pratt DE, Hudson BJF. 1990. Natural antioxidants not exploited comercially. Di dalam : B.J.F.Hudson, editor. Food Antioxidants. London: Elsevier Applied Science. Purnobasuki H. 2004. Potensi Mangrove sebagai Tanaman Obat. Surabaya: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Airlangga Rafi M, Arief Z. 2006. Metode cepat penentuan kadar flavonoid total dalam obat herbal secara spektrofotometri derivative ultraviolet. Ringkasan Hasil Penelitian Dosen Muda, Institut Pertanian Bogor. Rita A, Tania SU, Heri H, Albana AM, Rini R. 2009. Produksi antioksidan dari daun simpur (Dillenia indica) menggunakan metode ekstraksi tekanan tinggi dengan sirkulasi pelarut. Di dalam: SNTKI2009. Prosiding Seminar Nasional Teknik Kimia Indonesia; Bandung, 19-20 Oktober 2009. Bandung: Perhimpunan Teknik Kimia Indonesia. hlm 1-8.

43 Rohman A, Riyanto S. 2005. Daya antioksidan ekstrak etanol daun kemuning (Murraya paniculata (L) Jack) secara in-vitro. Majalah Farmasi Indonesia 16(3):136-140. Rohman A, Riyanto S, Utari D. 2006. Aktivitas antioksidan, kandungan fenolik total dan kandungan flavonoid total ekstrak etil asetat buah mengkudu serta fraksi-fraksinya. Majalah Farmasi Indonesia 17(3):136-142. Samsudin. 2008. Azadirachtin Metabolit Sekunder dari Tanaman Mimba sebagai Bahan Insektisida Botani. Lembaga Pertanian Sehat. Sastrohamidjojo H. 1996. Sintesis Bahan Alam. Yogyakarta: Gadjah mada Schmidt G, Steinhart H. 2001. Impact of extraction solvents on steroid contents determined in beef. Journal of Food Chemistry 76:83-88. Siagian A. 2002. Bahan Tambahan Makanan. Medan: Universitas Sumatera Utara. Silaban LW. 2009. Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas Antibakteri dari Kulit Buah Sentul (Sandoricum Koetjape (Burm. F.) Merr) Terhadap Beberapa Bakteri Secara In Vitro. [skripsi]. Medan: Fakultas Farmasi, Universitas Sumatera Utara Silalahi J. 2006. Makanan Fungsional. Yogyakarta : Kanisius. Simamora A. 2011. Flavonoid dalam apel dan aktivitas antioksidannya. [thesis]. Universitas Kristen Krida Wacana. Voight R. 1994. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi. Yogyakarta: Gajah Mada Universitas press. Waji RA, Sugrani A. 2009. Makalah kimia organik bahan alam: flavonoid (quercetin). [makalah]. Makasar: Program S2 Kimia, FMIPA, Universitas Hasanuddin. Wibowo C, Kusmana C, Suryani A, Hartati Y, Oktadiyani P. 2009. Pemanfaatan pohon mangrove api-api (Avicennia spp.) sebagai bahan pangan dan obat. Prosiding Seminar Hasil-hasil Penelitian IPB. Widyastuti N. 2010. Pengukuran aktivitas antioksidan dengan metode CUPRAC, DPPH, dan FRAP serta korelasinya dengan fenol dan flavonoid pada enam tanaman. [skripsi]. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. Wiesman Z, Chapagain BP. 2003. Laboratory evaluation of natural saponin as a bioactive agent against Aedes aegypti and Culex pipiens. Dengue Bulletin 27:168-173.

44

Winarno FG. 2008. Kimia Pangan dan Gizi. Bogor: M-BRIO Press. Yuhernita, Juniarti. 2011. Analisis senyawa metabolit sekunder dari ekstrak methanol daun surian yang berpotensi sebagai antioksidan. Makara Sains 15(1). Yunizal, Murtini JT, Dolaria N, Purdiwoto B, Abdulrokhim, Carkipan. 1998. Prosedur Analisis Kimiawi Ikan dan Produk Olahan Hasil-Hasil Perikanan. Jakarta: Pusat Penelitian dan Pengembangan Perikanan. Yusuf S. 2010. Isolasi dan penentuan struktur molekul senyawa triterpenoid dari kulit batang kayu api-api betina (Avicennia Marina Nessh). Jurnal Penelitian Sains,13(2) (C) 13205.

45

LAMPIRAN

46 Lampiran 1 Gambar sampel pohon api-api (Avicennia marina (Forks.)Vierh.)

(Sampel daun)

(Sampel Kulit Batang)

47 Lampiran 2 Perhitungan analisis proksimat dan rendemen ekstrak a) Kadar air (berat basah) Daun :

% Kadar air U1 = 3,47 gram x 100 % = 69,4 % 5 gram 3,45 gram % Kadar air U2 = x 100 % = 69,0 % 5 gram % Kadar air total = U1+U2 = 69,2 %

Kulit Batang:

2,77 gram 5 gram

x 100 % = 55,4 %

% Kadar air U2 = 2,73 gram 5 gram

x 100 % = 54,6 %

% Kadar air U1 =

% Kadar air total = U1+U2 = 55,0 % b) Kadar abu (berat kering) Daun :

4,59 % Kadar abu = (100-69,2)

Kulit Batang: % Kadar abu =

4,32 (100-55)

x 100 % = 14,91 % x 100 % = 9,6 %

c) Kadar protein (berat kering) 3,4 (100-69,2) 2,9 Kulit Batang : % Kadar protein = (100-55) Daun :

% Kadar protein =

x 100 % = 11,04 % x 100 % = 6,4 %

d) Kadar lemak (berat kering) Daun :

% Kadar lemak =

0,68 (100-69,2)

x 100 % = 2,21 %

Kulit batang :

% Kadar lemak =

0,7 (100-55)

x 100 % = 1,55 %



Perhitungan rendemen ekstrak

% Rendemen ekstrak =

Hasil ekstrak x 100 % Berat awal sampel

% Rendemen ekstrak daun =

4,3812 gram x 100 % = 17,525 % 25 gram

% Rendemen ekstrak kulit batang = 3,0163 gram 25 gram

x 100 % = 12,065 %

48 Lampiran 3 Gambar hasil uji fitokimia daun dan kulit batang pohon api-api (Avicennia marina), serta perubahan warna pada reaksi peredeman DPPH

(Sampel Daun api-api)

(Ekstrak daun + DPPH)

(Ekstrak daun + DPPH)

(BHT + DPPH)

(Sampel Kulit batang api-api)

(Ekstrak kulit batang + DPPH)

(Ekstrak kulit batang + DPPH)

(Blanko + DPPH)

49 Lampiran 4 Perhitungan pembuatan larutan stok dan pengencerannya a. DPPH 0,001 M dalam 20 ml (Mr = 493,32 g/mol) Konsentrasi = 0,001 M

=

Berat DPPH BeratMr DPPH 394,32

1000 ml 1000 volume 20

Berat DPPH = 0,0079 gram Sebanyak 0,0079 mg kristal DPPH dilarutkan dalam metanol p.a hingga 20 ml. b. Standar BHT 8 ppm sebanyak 50 ml Stok BHT 8 ppm = (8 mg/L) x (1 L/1000 ml) = 0,008/20 = 0,0004 mg Sebanyak 0,4 gram kristal BHT dilarutkan dalam metanol p.a hingga 50 ml. 







BHT 2 ppm = V1 x M1 = V2 x M2 = 20 ml x 2 ppm = V2 x 8 ppm = 5 ml dilarutkan dalam metanol p.a hingga 20 ml BHT 4 ppm = V1 x M1 = V2 x M2 = 20 ml x 4 ppm = V2 x 8 ppm = 10 ml dilarutkan dalam metanol p.a hingga 20 ml BHT 6 ppm = V1 x M1 = V2 x M2 = 20 ml x 6 ppm = V2 x 8 ppm = 15 ml dilarutkan dalam metanol p.a hingga 20 ml BHT 8 ppm = V1 x M1 = V2 x M2 = 20 ml x 8 ppm = V2 x 8 ppm = 20 ml dilarutkan dalam metanol p.a hingga 20 ml

c. Larutan ekstrak 800 ppm sebanyak 50 ml Stok ekstrak 800 ppm = (800 mg/L) = (0,8 gram/1000 ml) = 0,004 gram/50 ml Ekstrak sebanyak 0,004 gram dilarutkan dalam metanol p.a hingga 50 ml. 







Ekstrak 200 ppm = V1 x M1 = V2 x M2 = 20 ml x 200 ppm = V2 x 800 ppm = 5 ml dilarutkan dalam metanol p.a hingga 20 ml Ekstrak 400 ppm = V1 x M1 = V2 x M2 = 20 ml x 400 ppm = V2 x 800 ppm = 10 ml dilarutkan dalam metanol p.a hingga 20 ml Ekstrak 600 ppm = V1 x M1 = V2 x M2 = 20 ml x 600 ppm = V2 x 800 ppm = 15 ml dilarutkan dalam metanol p.a hingga 20 ml Ekstrak 800 ppm = V1 x M1 = V2 x M2 = 20 ml x 800 ppm = V2 x 800 ppm = 20 ml dilarutkan dalam metanol p.a hingga 20 ml

50 Lampiran 5 Gambar-gambar selama proses ekstraksi

Proses maserasi dengan orbital shaker

Proses penyaringan hasil maserasi

Hasil akhir maserasi

51 Lampiran 6 Perhitungan persen inhibisi dan nilai IC50 (Absorbansi blanko-absorbansi sampel) Absorbansi blanko  Persen inhibisi BHT: BHT 2 ppm = (0,686-0,88)/0,88 x 100 % = 22,045 % BHT 4 ppm = (0,548-0,88)/0,88 x 100 % = 37,727 % BHT 6 ppm = (0,443-0,88)/0,88 x 100 % = 49,659 % BHT 8 ppm = (0,367-0,88)/0,88 x 100 % = 58,295 % 

IC50 BHT y = 12,068x + 11,761 50 = 12,068x + 11,761 38,329 = 12,068x x = 3,17 ppm IC50 untuk BHT adalah 3,17 ppm



Persen inhibisi ekstrak daun Ekstrak 2 ppm = (0,715-0,88)/0,88 x 100 % = 18,75 % Ekstrak 4 ppm = (0,708-0,88)/0,88 x 100 % = 19,5455 % Ekstrak 6 ppm = (0,702-0,88)/0,88 x 100 % = 20,2273 % Ekstrak 8 ppm = (0,691-0,88)/0,88 x 100 % = 21,4773 %



IC50 Ekstrak daun y = 0,8864x + 17,784 50 = 0,8864x + 17,784 67,784 = 0,8864x x = 36,35 ppm IC50 untuk daun adalah 36,35 ppm



Persen inhibisi ekstrak kulit batang Ekstrak 2 ppm = (0,811-0,88)/0,88 x 100 % = 7,8409 % Ekstrak 4 ppm = (0,799-0,88)/0,88 x 100 % = 9,2045 % Ekstrak 6 ppm = (0,792-0,88)/0,88 x 100 % = 10 % Ekstrak 8 ppm = (0,789-0,88)/0,88 x 100 % = 10,3409 %



IC50 Ekstrak kulit batang y = 0,8295x + 7,2727 50 = 0,8295x + 7,2727 42,73 = 0,8295x x = 51,51 ppm IC50 untuk kulit batang adalah 51,51 ppm

x 100 %