Interpretace sérologických nálezů v diagnostice herpetických virů K.Roubalová
Specifické vlastnosti herpetických virů ovlivňují protilátkovou odpověď • • • •
Latence a celoživotní nosičství Schopnost reaktivace, rekurentní infekce Ubikvitní rozšíření, vysoká hladina promořenosti Vysoká antigenní komplexita – více než 100 různých proteinů, mnohé jsou buněčného původu • Nízká genetická variabilita, antigenní podobnost • Schopnost modulovat imunitní systém hostitele
Interakce mezi virem a imunitním systémem • Imunitní systém kontroluje infekci: symptomatické infekce: primární inf. nebo reaktivace u imunokompromitovaných pacientů
• Virus moduluje účinnost imunitního systému: infikuje imunokompetentní buňky, blokuje prezentaci antigenů, ovlivňuje chemotaxi a polarizaci imunitní odpovědi, diferenciaci APC ( virokiny, virové receptory pro cytokiny)
Cíle diagnostiky • Je pacient infikován nebo vnímavý k primoinfekci? • Je infekce latentní nebo aktivní? • Jedná se o primární infekci nebo o reaktivaci?
Dynamika protilátkové odpovědi
IgG protilátky Anamnestické, celoživotní Většinou pozitivní již v akutní fázi infekce Maternální protilátky Přenos transfuzí Reaktivace → signifikantní vzestup ( obtížně prokazatelný) Séronegativita = vnímavost k primoinfekci Séropozitivita ≠ protekce
IgM, IgA - protilátky aktivní fáze infekce: • IgM
• IgA
• Primoinfekce: +++ reaktivace: +/ • Nižší specifita:
• Primoinfekce: ++ reaktivace: ++ • Mohou dlouhodobě perzistovat • Mohou se tvořit i při asymptomatických reaktivacích • Pozitivita u 10-20% latentně infikovaných
interference RF, autoprotilátek, přirozených protilátek
Charakteristické vzorce protilátek u EBV Typ protilátek Stádium infekce
Latence
Primoinfekce
reaktivace
Chronická infekce
IgG proti VCA
++
Avidita vysoká
++
Avidita nízká
+++
Avidita vysoká
IgM proti VCA
IgG proti EBNA 1
IgM proti EBNA 1
-
++
-
+/+++
+/-
+
+++
IgG proti EA
IgA proti VCA
IgM proti EA
+/-
+/-
-
++
++
+++
++
+/-
+++
++
+/-
(anti R)
(anti D)
(anti D i R)
Nemá charakteristický vzorec protilátek
Problémy s interpretací sérologických nálezů • Falešné pozitivity: • Křížová reaktivita Ag • Kaskádová reaktivace HV • Polyklonální aktivace • Polyspecifické protilátky • Autoimunita
• Falešné negativity: • Interakce viru s imunitním systémem • Imunodeficience • Atypické vzorce protilátek VCA IgG+ IgM-,EBNAVCA IgG- IgM- EBNA+ VCA IgG- IgM+ EBNA-
Křížová reaktivita herpetických virů • HSV1 x HSV2: typově specifické testy ( rekombinantní antigen) vs. testy s nativním antigenem • HHV6 (A,B) x HHV7 • HSV x VZV ( primoinfekce)
Problémy se stanovením avidity
Kaskádová reaktivace HV
Akutní infekce HV
imunosuprese
CMV, HHV6, EBV
Sekundární reaktivace dalších endogenních HV
Zánětlivé onemocnění (infekce, autoimunita)
Polyklonální aktivace IM, LB, toxoplasmoza,
aktivace imunitního systému
diferenciace paměťových Blymfocytů
autoimunitní onemocnění hemoblastozy
Produkce protilátek proti dalším antigenům
Autoprotilátky • Molekulární mimikry: identické domény na virových a buněčných proteinech • EBNA x kolageny ( RANA u RA, Sjögren. Sy.) • Virové Fc-receptory x Fc IgG ( tvorba RF) • Virové x buněčné DNA-vazebné proteiny
Přirozené polyreaktivní protilátky • Tvořeny nezralými B1-lymfocyty (CD5+) • IgM, nizkoavidní IgG • U pacientů s nezralým imunitním systémem ( malé děti, příjemci HSCT, hematoonkologičtí pacienti) • Stimulace superantigeny
Atypické vzorce protilátek proti EBV • VCA-IgG+,VCA IgM ,EBNA IgG -: U 8-10% vyšetření primoinfekce x dříve prodělaná infekce (imunodeficit, geneticky podmíněná neodpovídavost)
• VCA IgG-,EBNA IgG+, VCA IgM-: dříve prodělaná infekce x séronegativita
VCA IgG- EBNA IgG-, VCA IgM+ : primoinfekce x séronegativita
Interpretace: klinický obraz, děti vs. dospělí, provedení dalších testů ( IgA,IgG proti EA, stanovení avidity NIF),vyšetření dalšího vzorku
Protilátky v mozkomíšním moku příklad Párový vzorek sérum- likvor
IgG anti-HSV v séru
IgG anti-HSV v likvoru
OD
AU/mL
OD
AU/mL
A
0,844
102,3
0,581
1,37
B
2,264
603,9
0,979
2,43
Intrathekální syntéza protilátek ( Výpočet Reiberova indexu protilátek pomocí koncentrací specifických IgG, celkových IgG a albuminu v séru a likvoru): A: IP = 5,24 – pozitivní
B: IP = 0,98 - negativní
Nálezy protilátek v mozkomíšním moku lze hodnotit pouze na základě výpočtu intrathekální syntézy.
Diagnostika Virologické vyšetření
Další laboratorní vyšetření
DIAGNÓZA
Anamneza
Klinický nález
