Immunfixáció
diagnosztikai lehetőségek
Miklós Kata OGYK
MIT-MLDT 2006
Immunfixáció
immunelektroforézis
Elektroforézis majd reakció monospecifikus antiszérumokkal IgG, IgA, IgM kappa és lambda mosás festés kiértékelés szérum vizelet • Kimutatás érzékenysége: egy nagyságrenddel nagyobb szérum: 120 mg/l paraprotein vizelet: 50 mg/l szabad könnyűlánc, Bence Jones Protein (BJP) 20 mg/l egyéb immunglobulin • Interpretálás:☺monoklonális gammopathia ☺biklonális gammopathia ☺oligoklonális gammopathia ☺könnyűlánc gammopathia ☺nehézlánc gammopathia vizelet:☺BJP ürül/nem ürül
Immunelektroforézis normál kontroll
-
AHS
minta
+
IgG lambda típusú monoklonális gammopathia
Immunfixáció
AHS IgG SebiaIgA hydrasis ĸ λ IgM készülék
☺agaróz membránon a minta elektroforézise 6 sávban ☺afehérjék fixálása mind a 6 sávban anti-humán szérummal (AHS) ez a referencia sáv, valamint anti-γ-, α-, µ- nehézlánc, ill anti-ĸ-, λ –könnyűlánc specifikus antiszérumokkal Tehát minden nehéz- és könnyűláncot más-más sávban vizsgálunk, így a monoclonalis komponens azonosítható
☺mosás: a nem reagáló fehérjék kimosódnak ☺festés: a rögzült fehérjék festése (amidofekete vagy savanyú viola)
4 férőhelyes lemez kevés minta, ritka vagy sürgős kérés
9 minta vizsgálatára alkalmas lemez sok minta, gyors analízise
normál (negatív) immunfixációs kép
Éles, homogén festődési csík egy nehéz és egy könnyűláncban azonos magasságban, (M) komponens
IgG lambda IgG kappa típusú monoklonális gammopathia
Biklonális gammopathia: két homogén csík két különböző nehézláncban vagy két homogén csík ugyanazon nehéz- ill. könnyűláncban
IgA kappa
IgG kappa
IgG lambda
IgM lambda
két klón ? kettős mobilitás ? monomer/dimer ? IgA lambda
IgM kappa
oligoklonális gammopathia: egy vagy több csík egy vagy több nehézláncban rendszerint mindkét könnyűlánccal
IgG kappa, IgG lambda, IgM lambda
IgG kappa/lambda α-, µ- nehézlánc
Könnyűlánc gammopathia: homogén csík csak a könnyűláncban IgG lambda típusú monoklonális gammopathia mellett lambda könnyűlánc nehézlánc nélkül
IgA lambda típusú monoklonális gammopathia mellett lambda könnyűlánc nehézlánc nélkül
lambda könnyűlánc nehézlánc nélkül ritka monoklonális gammopathia
immunfixáció IgD (IgE) antiszérummal
monoclonalis szabad könnyűlánc
Nehézlánc gammopathia: homogén csík csak a nehézláncban
IgA nehézlánc betegség
rejtett M komponens
IgA lambda típusú monoklonális gammopathia
Immunfixáció pentavalens antiszérummal 12 minta párhuzamos vizsgálata agaróz gélen egy minta két sávban fut
anti-humán szérum
pentavalens IgG, IgA, IgM, κ, λ szérum
Nagyszámú minta gyors szűrővizsgálata M komponens irányában költséghatékony, biztonságos, első megjelenéskor elengedhetetlen
bizonytalan monoklonalitás IgG kappában, fél év múlva kontroll javasolt
Cryoglobulinok osztályozása immunfixációval
monoklonális IgM kappa és poliklonális IgG II-es típusú cryoglobulinaemia
Immunotyping Kapilláris elektroforézishez kifejlesztett immunfixáció A mintacső mellett 5 küvettában 5 különböző antiszérum anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-ĸ és anti-λ alap elektroforézis görbe antiszérum nélkül M komponens gammában
Az öt antitestet egymást követve egyenként méri a mintához, specifikus reakció esetén immunkomplex alakul ki, mely csökkenti a mobilitást, eltérés a referencia görbéhez képest M komponens gammában
anti-IgG
anti-IgM
anti-kappa
IgG kappa/lambda gammopathia
anti-IgA
anti-lambda
Vizeletvizsgálat immunfixációval
Vizelet immunfixáció ☺vizelet bekoncentrálás (érzékenység növelés) ☺elektroforetikus fehérje szétválasztás ☺ immunfixáció specifikus ellenanyagokkal: szabad könnyűláncokkal is ☺ festés
ELP GAM K L Kf Lf ELP GAM K L Kf Lf
Bence Jones protein (BJP) nem ürül
szabad könnyűlánc AHS (BJP) ürül
GAM ĸ λ free ĸ free λ
Vizeletfixáció 9 férőhelyes lemezen
Hydragel urine profil(e) I. ¾ ¾ ¾ ¾
Sebia Hydrasys készülékre kifejlesztett rendszer vizeletfehérjék kimutatására és azonosítására futtatás agaróz gélen tubuláris és glomeruláris proteinuria vizsgálata és elkülönítése egy lépésben ¾ az azonosítható vizeletfehérjék köre bővül ¾ a vizelet előzetes bekoncentrálását nem igényli, mert az immunfixáció során nem alkalmaz diluenst ¾ elsősorban nefrológiai centrumoknak ajánljuk, ahol differenciál diagnosztikai szempontból szükség van a glomeruláris és tubuláris proteinuriák elkülönítésére.
4 minta futtatására alkalmas agaróz gél
Hydragel urine profil(e) II. Tub: tubuláris fehérjék: β2-mikroglobulin, retinol kötő fehérje (Retinol Binding Protein, RBP) α1-mikroglobulin Alb,aM: albumin, α2-makroglobulin GAM: IgG, IgA, IgM nehézlánc DE: IgD, IgE nehézlánc K: szabad és kötött kappa L: szabad és kötött lambda K f: szabad kappa könnyűlánc szabad lambda könnyűlánc Lf: ELP: polivalens
Urine profil(e) - alkalmazási példák tubuláris proteinuria
fiziológiás proteinuria: nyomokban albumin ürül
szelektív glomelurális proteinuria: albumin ürül
nem szelektív glomeruláris proteinuria: albumin, kappa és szabad kappa könnyűlánc (monoclonalis is), BJP ürül
kevert proteinuria, BJP ürül
Köszönet: Barta Beáta Lovasi Lászlóné, Edit
Köszönöm a figyelmet!
