Igor Klimíček, 20.5.2016
Inovace a diferenciace portfolia infekční diagnostiky Roche
Pracovní dny Roche pro centralizovanou diagnostiku
Roche cobas® e systémy
Modulární koncepce umožňuje postavit řešení dle potřeb a přání zákazníka
Výkon systémů
cobas® 8000 Až 4 moduly cobas® e 801 Do 1200 výsledků/hod. cobas® 6000 Max. 2 moduly cobas® e 601 Do 340 výsledků/hod. cobas® e 411 Stolní analyzátor Do 85 výsledků/hod.
Červen 2016!
Počet modulů v systémech
cobas e flow Optimální efektivita provozu Opakování reaktivních výsledků
Ředění & Avidita
Dva výsledky, jedno hodnocení
Anti-HCV II
HBsAg II quant II (dil)
HIV Duo*
HBsAg II
Toxo IgG avidita
HCV Duo*
Syphilis
CMV IgG avidita
HTLV I/II Chagas* HIV Duo* HCV Duo*
* Metody ve vývoji
Portfolio ID
Nejvíce se rozvíjející a inovující indikační skupina v současnosti HIV-Ag
anti-HAV-IgM
anti-HCV II HBsAg II
anti-HBs II anti-HBc II – Q3/2016 anti-HBc-IgM
HTLV I/II
HIV combi PT
HIV Duo (2.gen. e 801) – Q.1/2017
anti-HAV
HBsAg II quant. II
Chagas – Q1/2017
CMV IgG Rubella IgG
CMV IgM
Rubella IgM
CMV IgG avidity
Toxo IgG
HSV-1 IgG
Toxo IgM
HBeAg
anti-HBe
HSV-2 IgG
Syphilis Elecsys nebo TPLA
Toxo IgG avidity
(c 501/c 502)
Syphilis - RPR (c 501/c 502)
Syfilis
Diagnostika Přímá diagnostika • Vhodná jen pro manifestní stádia, nelze v latentní fázi – Treponema pallidum přítomna v biologickém materiálu • Mikroskopie v zástinu, přímá imunofluorescence, PCR Nepřímá diagnostika - průkaz protilátek v séru, plazmě a v likvoru • Treponemové testy (TPLA, TPHA, CLIA, ECLIA, konfirmace Western Blot) • Specifická detekce protilátek TPP • Netreponemové testy (RPR, VDRL) • Principem je průkaz nespecifických anti-kardiolipinových protilátek • Většina pacientů asymptomatických!!! http://www.szu.cz/tema/prevence/syfilis-tradicni-choroba-soucasny-problem-ii
Syfilis v ČR
• Vyhláška o lidské krvi č. 143/2008 Sb • klíčový parametr pro skrínink dárců krve: Transfúzní oddělení – povinný treponemový test • Vyhláška č. 306/2012 Sb. § 7 odst. 2 - povinně treponemový a netreponemový • Prenatální screening • Screening novorozenců • Předoperační vyšetření • Hospitalizace
Kompletní plně automatizovaný Roche panel pro testování Syfilis
Treponemové testy • Elecsys Syphilis • TPLA / TPLA 2 (Sekisui)
Netreponemový test • RPR / RPR 2 (Sekisui)
Netreponemový test • RPR / RPR 2 (Sekisui) Treponemové testy • Elecsys Syphilis • TPLA / TPLA 2 (Sekisui)
phase out
TPLA/RPR (generace 1) Nádobky pro použití na Modular P
Pouze u TPLA je možné převést reagencie do kazety „Multipack“ pro použití na c501/502
phase in
TPLA2/RPR2 (generace 2) Kazety výlučně pro cobas c 501/502
→ Již ne pro Modular P !
Mediace RPR / RPR2
26 May 2016
page 9
© 2009 Roche
Netreponemové metody
Automatizace pouze Sekisui/Roche Aglutinační metody
Manual Manuální VDRL VDRL Oxoid Oxoid
RPR RPR cardcard test test RPR Becton Dickinson Omega, BioRad, Biokit LTA
Automatizovaná Mediace RPR, Mediace RPR2 Sekisui/Roche
Mediace RPR – formát metody
Imunoturbidimetrický aglutinační test Mediace RPR
Ｙ Ｙ Ｙ
Latexové částice
＋ Optické měření
Positivní sérum
Lipidové Antigeny (Cardiolipin, Lecithin)
Agregace
RPR card test
Ｙ Ｙ Ｙ Positivní sérum
＋ Karbonový prášek
Visuální odečítání
Netreponemové metody Automatizace pouze Sekisui/Roche Metoda Příprava TAT
Mediace RPR Ready to use 10 min 350 testů/hod.
Výkon
(Roche/Hitachi917) 600 testů/hod.(c50x)
RPR card test
VDRL
Míchání antigenní suspenze 10-12 min
10-12min
60 testů/hod.
100 testů/hod.
(expert)
(expert)
Konsistence odečítání výsledků
Velmi dobrá
V závislosti na individuáních schopnostech
Lidská chyba
Minimalizována
Vyšší výskyt
Riziko infekce
Minimální
Vyšší výskyt
Specializovaný trénink
Není nutný
Nutný
automatizovaná
manuální metody
Mediace RPR – klinická sensitivita
Vysoká sensitivita 99.5% - pro spolehlivou diagnostiku
n Syphilis konfirmované positivní vzorky
187
Mediace RPR Positivní
Negativní
186
1
Cekově 187 pozitivně konfirmovaných vzorků pacientů v různých stadiích onemocnění bylo testováno.
Sensitivita v rámci těchto vzorků = 99.5% Osato K et al, Japanese Journal of Sexually Transmitted Diseases 2002; 13(1):124-130 Kawai K et al, The Journal of Clinical Laboratory Instruments and Reagents 2003; 26(4): 301-304
Mediace RPR – klinická specifičnost
Vysoká specifičnost 99.5% - méně retestování
n Syphilis negativní vzorky
2639
Mediace RPR Positivní
Negativní
12
2627
Celkově testováno 2639 syphilis negativních vzorků. Specifičnost s těmito vzorky = 99.5% Kinjo T et al,. Japanese Journal of Clinical Laboratory Automation (JJCLA), 2005; 30(3): 257-262
Netreponemové metody
Obecné rysy
• Screening a zejména posouzení aktivity onemocnění a sledování úspěšnosti léčby (vždy spolu s treponemovými testy) • 2-10% falešně pozitivních výsledků • u pacientů s virovými infekcemi, příušnicemi, infekční mononukleózou, planými neštovicemi, ale také u těhotných, uživatelů drog a po očkování • výskyt falešně negativních reakcí • v počátku onemocnění před sérokonverzí • u pozdní latentní syfilis představuje až 30% případů • zonální fenomén u akutní syfilis (1 až 2% případů) Zákoucká, H. (2007). Syfilis - tradiční choroba, současný problém II. Zprávy CEM (SZÚ, Praha).16(10-11): 493 - 497.
Mediace RPR2 na c 501
Lokální zkušenosti
• Souprava nevyžaduje manuální zásah uživatele • Kalibrace pětibodová na šarži • Kalibrační stabilita > 4 měsíce, QC v deklarovaném rozmezí • Stanovení vzorků z rutinní praxe • 100% shoda s jinými metodami RPR u negativních(61 vzorků) • byly zaznamenány jak neshody mezi různými typy metod, tak u hodnocení NRL u pozitivních vzorků = časná nebo latentní fáze onemocnění
Mediace RPR2 na c 501
Lokální zkušenosti
Organizace EHK v ČR
NRL pro diagnostiku Syfilis, SZÚ Praha, EHK č. 876/2015 Výsledek Elecsys® Syphilis Vzorek A B C D E
COI
180,9 170,3 170 107 0,101
Výsledek Mediace® RPR 2
Hodnocení
Hodnocení NRL
reaktivní
pozitivní
reaktivní
pozitivní
reaktivní
pozitivní
reaktivní
pozitivní
negativní
negativní
Stanovení č.1, R.U. 39,03 2,71 2,53
Stanovení č.2, R.U. 35,6 2,63 2,55
<0,50
<0,50
0,79
0,73
Hodnocení
Hodnocení NRL
reaktivní
pozitivní
reaktivní
pozitivní
reaktivní
pozitivní
negativní
pozitivní
negativní
negativní
® Elecsys
HIV combi PT
Design metody
Elecsys HIV combi PT
Elecsys ® HIV combi PT Pokročilý design metody pro zvýšení bezpečnosti stanovení Pokročilý design metody: 1. Pre-treatment (PT) krok : Lýza viru vedoucí ke zvýšené sensitivitě detekce p24 antigenu 2. Anti-p24 protilátky šité na míru: Včasná detekce infekce, pozdní infekce, a detekce p24 antigenu odvozeného od HIV-1 skupiny M, O a HIV-2 3. Pouze Elecsys HIV combi PT disponuje modulem s antigeny reverzní transkriptázy(RT) 4. „Chaperone antigen“ technologie
Bezpečnost
Vysoká analytická a sérokonverzní sensitivita • Evaluace analytické sensitivity dle p24 WHO referenčního standardu • Sensitivita = průměrná hodnota z měření třech různých šarží
Elecsys HIV combi PT (COI)
Sensitivita 1.05 IU/ml při COI 1.0 10
Příbalový leták zajišťuje anal. sensitivitu ≤2 IU/ml
8 6 4 2 0
0
1
2
3
4 5 6 7 8 WHO hodnoty standardu (IU/ml)
9
Lepší sensitivita = časnější detekce infekce
10
11
Elecsys ® HIV combi PT Pokročilý design metody zvyšuje bezpečnost stanovení 3. Pouze Elecsys HIV combi PT disponuje modulem s antigeny reverzní transkriptázy(RT): •RT region genomu je nejodolnější vůči různým mutacím, identický u různých variant virů •Detekce všech hlavních skupin genotypů a jejich subtypů, rekombinantních forem, mutantů a HIV-2
Muhlbacher et al. Med Microbiol Immunol 2012
Elecsys ® HIV combi PT Pokročilý design metody zvyšuje bezpečnost stanovení Chaperone molekula
4. „Chaperone antigen“ technologie
Virový antigen
Optimalizovaný design nativních 3-D struktur a vystavění epitopů gp41 a gp36 pro zvýšení sensitivity. Target Chaperone
Target
Chaperone Chaperone
Target
„Chaperone Carrier Concept“ published in Scholz et al., J. Mol. Biol. (2005) 345, 1229-1241 & Scholz et al., Biochemistry (2006) 45, 20-33;
Rekombinantní antigeny HIV v nativní konformační struktuře
26
Spolehlivost a bezpečnost
Detekce všech důležitých skupin a jejich subtypů Elecsys HIV combi PT (reaktivní/positivní) HIV-1 skupina M, subtypy
629/629
A, A1, A2, A/B, A/C, A/E/C, CRF02_AG B, B/A, B/C, CRF14_BG C, C/A, C/B, C/E D E, E/A/C, E/C, E/D, CRF01_AE (=E) F F1 G H J CRF06_cpx CRF11_cpx CRF13_cpx
72/72 262/262 168/168 16/16 59/59 7/7 2/2 16/16 1/1 1/1 1/1 1/1 3/3 8/8
HIV-1 skupina O
472/472
HIV-2 Data z CE evaluační studie Elecsys HIV combi PT
Spolehlivost a efektivita
Vysoká klinická specifičnost u dárců a pacientů Centrum evaluace
Dárci krve
Bangkok Dolo Innsbruck Santiago Lausanne Lisbon Mönchengladbach Munich Sydney
99.93% (n=1500) 99.87% (n=1485) 99.86% (n=2834) 99.87% (n=1524)
Průměrná specifičnost (95% CI)
99.88% (99.77–99.94)
Neselektované rutinní vzorky(dialýza, těhotenství)
100.00% (n=305) 99.78% (n=467) 99.80% (n=1000) 99.42% (n=700) 100.00% (n=249)
Data z CE evaluační studie Elecsys HIV combi PT
99.74% (99.47–99.90)
® Elecsys
Anti-HBc II
Elecsys® Anti-HBc II
Vylepšená klinická specifičnost • Cíl projektu: zvýšit specifičnost Elecsys Anti-HBc(99,7% dárci, pacienti – neuvedeno) • 100 testů / 200 testů v balení • Formát metody: podobný se současnou generací, 27 min. • Uvedení plánováno na Q3 2016 • Předběžné výsledky na dalších slidech
Elecsys® Anti-HBc II
Předběžná data
Klinická sensitivita Celkem 793 vzorků pacientů. Stupně onemocnění Chronická nebo akutní HBV infekce (Anti-HBc positive, HBsAg positive) Prodělaná HBV infekce (Anti-HBc positive, HBsAg negative, Anti-HBs positive, Anti-HBe negative) Prodělaná nebo vyléčená HBV infekce (Anti-HBc positive, HBsAg negative, Anti-HBs negative, Anti-HBe positive) Prodělaná nebo vyléčená HBV infekce (Anti-HBc positive, HBsAg negative, Anti-HBs positive, Anti-HBe positive)
n
reactive
568
568
56
56
9
9
160
160
Klinická sensitivita metody Elecsys Anti-HBc II byla v této studii 100%
Elecsys® Anti-HBc II
Předběžná data
Klinická specifičnost Celkem 20101 vzorků. Kohorta Dárci krve (serum) Dárci krve (EDTA plasma) Rutinní hospitalizovaní pacienti Dialyzovaní pacienti Těhotné ženy
8163
Klinická specifičnost (%) 99.93
95% confidence limit (%) 99.84-99.97
9162
99.88
99.78-99.94
997
100.00
99.60-100.00
779 1000
99.31 100.00
98.25-99.81 99.62-100.00
n
Specifičnost Elecsys Anti-HBc II by mohla být signifikantně vylepšena oproti současné první generaci metody(99,6% - iniciačně reaktivní, 99.7% opakovaně reaktivní u dárců)
Portfolio ID
Nejvíce se rozvíjející a inovující indikační skupina v současnosti HIV-Ag
anti-HAV-IgM
anti-HCV II HBsAg II
anti-HBs II anti-HBc II – Q3/2016 anti-HBc-IgM
HTLV I/II
HIV combi PT
HIV Duo (2.gen. e 801) – Q.1/2017
anti-HAV
HBsAg II quant. II
Chagas – Q1/2017
CMV IgG Rubella IgG
CMV IgM
Rubella IgM
CMV IgG avidity
Toxo IgG
HSV-1 IgG
Toxo IgM
HBeAg
anti-HBe
HSV-2 IgG
Syphilis Elecsys nebo TPLA
Toxo IgG avidity
(c 501/c 502)
Syphilis - RPR (c 501/c 502)
Doing now what patients need next
