HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Pengujian Salmonella spp. dengan Metode SNI Lima puluh contoh kotak pengangkutan DOC yang diuji dengan metode SNI menunjukkan hasil: empat contoh positif S. Enteritidis (8%). Hasil uji dapat dilihat pada Tabel 6, Gambar 2 dan Gambar 3.
Tahapan pengujian Salmonella menggunakan metode SNI diawali dengan proses pra-pengayaan, pengayaan, dilanjutkan isolasi pada media selektif pembeda, yaitu HEA, XLD dan BSA. Koloni yang diduga Salmonella pada media HEA akan berwarna hijau kebiruan dengan atau tanpa titik hitam karena terbentuknya H2S. Koloni terlihat merah muda pada media XLD dengan atau tanpa titik mengkilat atau terlihat hampir seluruh koloni hitam Koloni terlihat keabu-abuan atau kehitaman pada media BSA. Kadangkala koloni berwarna metalik dengan media di sekitar koloni berwarna coklat dan berubah hitam dengan bertambahnya waktu inkubasi (Merck 2004). Koloni Salmonella spp. pada media HEA dapat dilihat pada Gambar 2. Keenam contoh yang diduga positif Salmonella dilanjutkan ke uji-uji biokimiawi. Hasil identifikasi dari uji-uji biokimia mengarah kepada S. Enteritidis (Cowan 1981). Menurut Quinn et al. (2002) Salmonella bersifat non motil pada suhu 30 0C, tidak memfermentasi laktosa, tidak menghasilkan indole (tidak terbentuk cincin warna merah pada uji indole), menggunakan glukosa untuk memproduksi asam (uji methyl red positif, ditandai dengan warna merah menyebar), tidak memetabolisme glukosa untuk menghasilkan asetoin dan 2,3-butanadiol (uji voges-proskauer negatif, ditandai dengan tidak adanya perubahan warna), menggunakan sitrat sebagai satu-satunya sumber karbon (ditandai dengan adanya pertumbuhan koloni Salmonella dan media berwarna biru pada uji sitrat), menghasilkan H2S, menghasilkan lysine decarboxylase (ditandai dengan perubahan warna ungu pada uji lysine decarboxylase) dan tidak memetabolisme urea (tidak adanya perubahan warna atau warna tetap kuning pada uji urease). Terhadap enam contoh yang diduga Salmonella spp., dilanjutkan pengujian serologik di Balai Besar Penelitian Veteriner untuk mengetahui spesies Salmonella. Hasil yang didapatkan dari enam contoh tersebut, hanya empat contoh yang positif S. Enteritidis. Sedangkan dua contoh yang diuji menunjukkan hasil bukan Salmonella spp.
Tabel 6 No
Perusahaan
HEA
Gambaran koloni dari media HEA dan uji biokimiawi contoh yang diduga positif Salmonella TSIA
LIA
Dul
Lac
Suc
MR
VP
Indol
Citrat
Urea
Motilitas
1
A5
2
A9
3
B2
4
B5
5
B7
6
B8
Kontrol positif Kontrol negatif
Hijau kebiruan, rata Hijau kebiruan, rata Hijau kebiruan, rata Hijau kebiruan, rata Hijau kebiruan, rata Hijau kebiruan, rata Hijau kebiruan, rata -
-
b/a, +,+
b/b, +,+
+/+
-/-
-/-
positif
negatif
negatif
positif
negatif
non motil
b/a, +,+
b/b, +,+
+/+
-/-
-/-
positif
negatif
negatif
positif
negatif
motil
b/a, +,+
b/b, +,+
+/+
-/-
-/-
positif
negatif
negatif
positif
negatif
motil
b/a, +,+
b/b, +,+
+/+
-/-
-/-
positif
negatif
negatif
positif
negatif
motil
b/a, +,+
b/b, +,+
+/+
-/-
-/-
positif
negatif
negatif
positif
negatif
motil
b/a, +,+
b/b, +,+
+/+
-/-
-/-
positif
negatif
negatif
positif
negatif
non motil
b/a, +,+
b/b, +,+
+/+
-/-
-/-
positif
negatif
negatif
positif
negatif
motil
-
-
-
-
-
-
-
-
-
Gambar 2 Koloni Salmonella pada media HEA dari 6 contoh yang diduga positif
Media TSIA Media LIA Gambar 3 Hasil uji khas Salmonella pada media TSIA dan LIA Hasil Pengujian Salmonella spp. dengan Metode Salmonella Latex Test Pengujian 50 contoh kotak pengangkutan DOC terhadap adanya cemaran Salmonella spp. menggunakan metode Salmonella latex test menunjukkan hasil hanya lima contoh sampel positif Salmonella spp. (10%). Contoh yang bereaksi positif dengan Salmonella latex test ditandai dengan adanya reaksi aglutinasi pada kartu reaksi seperti pada Gambar 4.
terjadi aglutinasi
tidak terjadi aglutinasi
Gambar 4 Gambaran aglutinasi pada contoh positif Salmonella spp. dengan metode Salmonella latex test Proses aglutinasi pada Salmonella latex test disebabkan oleh reaksi antibodi terhadap antigen flagella Salmonella. Salmonella latex test merupakan salah satu uji cepat Salmonella yang lebih menyingkat waktu dibandingkan dengan metode baku pengujian Salmonella. Menurut Anonimus (2007) metode ini dapat mendeteksi spesies Salmonella diantaranya S. Typhimurium, S. Enteritidis, S. Virchow, S. Newport, S. Infantis, S. Anatum, dan berbagai subspesies Salmonella lainnya yang masuk dalam serotipe B, C1, C2, C3, D1 and E1. Evaluasi Pengujian Cemaran Salmonella spp. dengan Metode SNI dan Salmonella Latex Test Perbedaan hasil uji Metode SNI dan Salmonella Latex Test terpapar pada Tabel 7 di bawah ini.
Tabel 7 Hasil uji Salmonella dengan metode SNI dan Salmonella latex test Kotak Kontrol Kontrol DOC (%) Positif (%) Negatif (%) SNI 4/50 (8) 50/50 (100) 50/50 (100) Salmonella latex test 5/50 (10) 50/50 (100) 50/50 (100) Untuk membandingkan antara metode SNI dan Salmonella latex test Metode
diketahui dengan cara menghitung kepekaan dan kekhususan. Pengulangan dan kepekaan dan kekhususan peubah mempengaruhi ketepatan suatu pengujian diagnostik (Budiharta dan Suardana 2007). Analisis statistik kappa digunakan menghitung kepekaan dan kekhususan kedua metode pengujian berdasarkan data yang dihimpun dalam Tabel 8 di bawah ini.
Tabel 8 Proporsi populasi yang diklasifikasi-silangkan berdasarkan hasil uji dengan metode yang berbeda Metode Salmonella latex test Jumlah
Positif Negatif
Metode SNI Positif Negatif 4 1 0 45 4 46
Jumlah 5 45 50
Kepekaan dan kekhususan Salmonella latex test mencapai 100% dan 97,8% dengan tingkat kepercayaan 95%. Kepekaan adalah proporsi kotak pengangkutan DOC yang tercemar Salmonella spp. yang memberikan hasil uji positif, sedangkan kekhususan adalah proporsi kotak pengangkutan DOC yang tidak tercemar Salmonella spp. yang memberikan hasil uji negatif. Dengan menggunakan data Tabel 8 Salmonella latex test memberikan nilai pendugaan (prediktif) positif sebesar 80% dan nilai prediktif negatif sebesar 100%. Nilai prediktif positif adalah proporsi kotak pengangkutan DOC yang yang tercemar Salmonella spp. diantara contoh yang bereaksi positif dengan metode Salmonella latex test, sedangkan nilai prediktif negatif adalah proporsi kotak pengangkutan DOC yang tidak tercemar Salmonella spp. diantara contoh yang memberikan reaksi negatif dengan menggunakan metode Salmonella latex test. Nilai prediksi pengujian telah digunakan sebagai cara untuk memilih pengujian yang dilakukan, namun nilai prediksi tidak hanya dipengaruhi oleh kepekaan dan kekhususannya, tetapi dipengaruhi juga oleh prevalensi yang sebenarnya. Prevalensi sebenarnya biasanya sulit diketahui, maka tidak dapat secara langsung dianggap bahwa suatu pengujian yang memiliki nilai prediksi tertinggi selalu paling peka dan khas. Untuk menentukan kesesuaian antara pengujian baku dan pengujian baru dilakukan analisis statitstik kappa (Thrusfield 2005). Metode SNI memberikan prevalensi yang nampak sebesar 0,08, sedangkan dengan Salmonella latex test memberikan prevalensi sebesar 0,1 dan kedua metode tersebut sama-sama memberikan reaksi positif terhadap 8% dari keseluruhan contoh yang diperiksa. Data ini tidak memberikan petunjuk bahwa reaksi positif berarti status hewan di lapangan terinfeksi oleh Salmonella spp. dan reaksi negatif berarti status hewan di lapangan tidak terinfeksi Salmonella spp., tetapi hanya memberikan indikasi
pengujian yang memberikan proporsi positif yang lebih besar daripada yang lain dan arahan untuk menghitung kesesuaian diantara kedua metode yang digunakan. Dari Tabel 8 diperoleh nilai kappa sebesar 0,878. Berdasarkan Budiharta dan Suardana (2007) nilai kappa ≥0,7-1,0 dinilai bagus sekali, 0,5≤kappa<0,7 dinilai bagus, 0,4≤kappa<0,5 dinilai cukup dan <0,4 dinilai jelek. Dari hasil analisis pengujian dengan metode SNI dan Salmonella latex test diperoleh kesesuaian bagus sekali. Maka metode Salmonella latex test dapat digunakan sebagai uji tapis untuk mengetahui adanya cemaran Salmonella spp. baik dari contoh klinis maupun dari contoh produk-produk pertanian. Ada beberapa keuntungan dan kerugian terhadap penggunaan metode Salmonella latex test. Keuntungan yang diperoleh dengan metode tersebut adalah: dapat menyingkat waktu kurang lebih 24 jam dibandingkan dengan metode SNI yang memakan waktu lebih lama untuk mengetahui adanya cemaran Salmonella dalam kotak pengangkutan DOC. Studi yang dilakukan oleh Metzler dan Nachamkin (1988) menjelaskan bahwa penggunaan metode Salmonella latex test dapat menyingkat waktu kurang lebih 21 jam per 100 contoh karena tidak dilakukan uji biokimiawi untuk menduga adanya cemaran Salmonella. Keuntungan lain dari penggunaan metode Salmonella latex test yaitu adanya pengurangan media yang digunakan dalam uji biokimiawi, menyingkat prosedur yang digunakan untuk membiakkan bakteri dari feses, membaca dan menginterpretasikan hasil biakan pada lempengan agar dan uji tapis terhadap cemaran Salmonella spp. (Hinrichs et al. 1985). Salmonella latex test terbukti cukup efisien dilihat dari segi pembiayaan. Untuk memeriksa 50 contoh yang diuji menggunakan Salmonella latex test membutuhkan biaya kurang lebih Rp 1.750.000,-. Dengan metode SNI menghabiskan biaya sekitar Rp 3.750.000,Jadi dengan menggunakan metode Salmonella latex test dapat menghemat biaya sekitar Rp 2.000.000,- per 50 contoh. Dalam penelitiannya dengan menggunakan Salmonella latex test terhadap 100 contoh yang diuji, Metzler dan Nachamkin (1988) menyatakan dapat dilakukan penghemat biaya sekitar USD 251.2. Dengan demikian, pengguna jasa laboratorium, dalam hal ini adalah pemilik produk, tidak perlu mengeluarkan biaya yang besar untuk memeriksakan produk yang dikirim olehnya.
Selain beberapa keuntungan tersebut penggunaan metode Salmonella latex test efektif digunakan untuk uji dugaan adanya cemaran Salmonella pada produkproduk peternakan, khususnya pangan asal hewan. Juga, dengan teknik ini dapat dibedakan antara Salmonella dengan spesies lainnya. Dari beberapa pertimbangan tersebut, terlihat bahwa metode ini dapat dipergunakan untuk uji penapisan pada instansi-instansi yang membutuhkan hasil uji yang cepat, tepat dan akurat, seperti halnya karantina. Kerugian menggunakan Salmonella latex test adalah tidak semua spesies Salmonella dapat terlacak dengan uji tersebut. Hal ini dikarenakan antigen yang digunakan adalah antigen flagella yang khusus terdapat pada spesies Salmonella yang motil, seperti S. Enteritidis, S. Pomona, S. Hadar, S. Heidelberg, S. Infantis, S. Agona, S. Typhimurium, S. Newport, S. Java dan S. Virchow (Anonimus 2007).
Pencemaran S. Enteritidis pada Kotak Pengangkutan DOC Dengan adanya cemaran S. Enteritidis pada kotak pengangkutan DOC menjadikan kotak pengangkutan sebagai sumber penularan bagi orang-orang yang bersentuhan langsung dengan kotak pengangkutan DOC tersebut, misalnya pekerja kandang, penjual DOC dan anak-anak yang membeli DOC yang diperjualbelikan secara bebas. Tindakan yang dapat dilakukan untuk mencegah terjadinya penularan salmonellosis yang berasal dari kotak pengangkutan DOC adalah dengan cara membakar kotak tersebut setelah DOC dibongkar di tempat tujuan dan mengkampanyekan anjuran cuci tangan setelah menangani atau memegang hewan piara terutama DOC. CDC melaporkan adanya tiga kejadian wabah salmonellosis pada anak-anak di Amerika Serikat yang terinfeksi dari anak ayam yang dibeli di toko peternakan selama tahun 2006 (Bidol et al. 2007). Wabah tersebut menjelaskan bahwa salmonellosis yang berkaitan dengan anak ayam dan anak unggas memerlukan penanganan yang serius, khususnya penanggulangan sumber penularan dari perusahaan pembibitan ayam. Kejadian tersebut terjadi dimungkinkan karena higienitas yang tidak terjaga setelah kontak langsung dengan anak ayam yang
diperjualbelikan secara bebas dan menjadi hewan piara atau mainan bagi konsumen khususnya anak-anak. Pencegahan terhadap pentingnya menjaga higienitas diri dilakukan pada semua kelompok umur baik anak-anak maupun orang dewasa terutama bagi mereka yang rentan terpapar oleh cemaran Salmonella spp.. Bagi petugas karantina tindakan pencegahan seperti tersebut di atas harus dilakukan dan menjadi standar operasional prosedur dalam menangani hewan maupun produk hewan khususnya kotak pengangkutan DOC sebagai salah satu upaya untuk memutus mata rantai penularan salmonellosis dan demi terwujudnya tugas pokok dan fungsi karantina yaitu mencegah masuk dan tersebarnya hama dan penyakit hewan karantina baik dari luar negeri maupun antar pulau atau antar area di dalam wilayah Negara Republik Indonesia.
KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan Pemeriksaan terhadap 50 contoh kotak pengangkutan DOC dengan metode SNI diperoleh hasil adanya pencemaran S. Enteritidis pada empat contoh kotak (8%) dan dengan Salmonella latex test diperoleh hasil lima contoh kotak positif Salmonella spp. (10%).
