ÉVES JELENTÉS Pázmány Péter program. A projekt a Nemzeti Kutatási és Technológiai Hivatal támogatásával valósult meg

ÉVES JELENTÉS•2008

Pázmány Péter program A projekt a Nemzeti Kutatási és Technológiai Hivatal támogatásával valósult meg.

Nemzeti Kutatási és Technológiai Hivatal


„A kutatáshoz négy dolog kell: gondolkozó agy, látó szemek, mérőműszerek, és negyedikként a pénz.” /Szent-Györgyi Albert/


TARTALOMJEGYZÉK

Tartalomjegyzék Küldetésnyilatkozat Vezetői összefoglaló Szervezet és menedzsment Átfogó célok Partnerek DNT kutatóközpont és inkubátorház Szakmai jelentés 1. Alprogram 2. Alprogram 3. Alprogram 4. Alprogram 5. Alprogram Meghatározó munkatársak listája Oktatási kurzusok Technológia transzfer Új források bevonása Együttműködés az ipari partnerekkel Fenntartható fejlődés Publikációk Médiamegjelenések Finanszírozás, összesített pénzügyi mutatók Teljesítményindikátorok Monitoring értékelési rendszer Rövidítések

3 4 5 6 7 7 10 12 12 15 19 23 27 31 32 33 34 35 35 37 44 45 47 47 47

3


KÜLDETÉSNYILATKOZAT: A Dél-Alföldi Neurobiológiai Tudásközpont (DNT) stratégiai célja, hogy magját adja egy, a dél-alföldi régió központtal kiépülő élettudományi klaszternek. A DNT 9-10 éves távon a területen jelentős magyarországi kutatóhelyekkel, gyógyszergyártókkal és csatlakozó, valamint spin-off KKV-kkel összefogásban, egymást kiegészítő funkciót vállalva, nemzetközi jelentőségre tesz szert a neurobiológia kutatás - fejlesztésben (K+F), és jelentős mértékű befektetési aktivitást vonz a dél-alföldi régióba. Alapító tagok

A Konzorciumba belépett új tagok

A Konzorcium által alapított társaság

4


VEZETŐI ÖSSZEFOGLALÓ A Dél-Alföldi Neurobiológiai Tudásközpont (DNT) egységes centrumként működik a kutatás és fejlesztés területén. Céljaink változatlanok: a neurológia betegségek új, hatékony és jól tolerálható diagnosztikai, illetve kezelési módszereinek, gyógyszerjelölt vegyületeinek felfedezése és fejlesztése. A szegedi régió kiemelkedő tudományos eredményeit felhasználva sokat ígérő kutatási és fejlesztési programot valósítunk meg. A DNT részt vesz a leggyakrabban előforduló neurodegenerációs betegségek új gyógyszereinek kifejlesztésében. A gyógyszerkutatás valamennyi fázisában részt veszünk, a célmolekula, illetve vezérvegyület azonosításától a preklinikai, klinikai kísérletekig. Az egyes munkacsoportok nagyon szorosan együttműködnek egymással, valamint más kutatócsoportokkal a világ valamennyi részéből. A DNT projekt utolsó évében igen szoros munkakapcsolat alakult ki az EGIS kutatóival: évenként 4 alkalommal közös munkabeszámolót szerveztünk a projekt előrehaladásának ellenőrzésére. Új K+F pályázatokon is sikeresen szerepeltünk; az EGIS-DNT közös pályázatunk (EGISPSYC) a pszichiátriai betegségek gyógyszerjelölt vegyületeinek fejlesztését tűzte ki célul. A DNT kutatói két TÁMOP pályázatot is nyertek, mindkettőt a neurodegeneratív betegségek kutatására. A TÁMOP pályázatok 2008 július 1-től 40 külföldi kutató bevonását teszik lehetővé a DNT-ben folyó munkába. Az elkövetkező két évben ez számos új kutatási módszer bevezetését, átvételét jelenti, emellett 35-40 fiatal kutatót és doktorandusz hallgatót tudunk foglalkoztatni a DNT K+F témáin. Az Európai Közösség FP-7 projekt pályázatain igen sikeresek voltak a DNT kutatói, így 2008-ban három nyertes projekt indításában vettünk részt (LipidomicNet - FP-7 202272, Memoload - FP-7 201159, illetve LipiDiDiet - FP-7 211696). Ezek a pályázatok 5 évre szólnak. Nagyon jól működik a DNT „Kutatóközpont és Inkubátorház” projektje. A DNT saját alapítású (VITADEL, LipidArt) spin-off cégei erősödnek, új megbízásokat és pályázatokat nyernek, ugyanez érvényes az utólag csatlakozott kisvállalatra is (JSW Hungary). Erősödtek nemzetközi gyógyszeripari kapcsolataink is: egy nagy francia és két középnagyságú német gyógyszeripari vállalattal tartunk közvetlen kapcsolatot a termékeink értékesítése céljából. (Az együttműködés részleteiről a jelentés nyílt jellege miatt itt nem írhatunk, erre csak a szóbeli beszámolón kerülhet sor.) A DNT projekt munkáiban 330 munkatárs vesz részt, többek között 6 az MTA tagja, 34 MTA doktor, 82 PhD vagy ezzel egyenértékű fokozatot szerzett kutató, 62 doktorandusz és 80 egyetemi hallgató. A DNT 2008-ban összesen 120 dolgozót foglalkoztat, ami 75 új álláshely létesítését jelenti a régióban.

Eredmények Hazai szabadalom Külföldi szabadalom Előadás SCI publikáció Könyvrészlet PhD MTA doktora Új alapítású spin-off cég Összesített impakt faktor

Terv 1 1 0 45 0 5 1 1 90

Tény 3 1 192 106 7 8 1 379,035

Dr. Telegdy Gyula PhD, DSc, az MTA tagja A DNT elnöke

5


SZERVEZET ÉS MENEDZSMENT 2009. május 1-jén a DNT IT szavazati joggal rendelkező tagjai: ELNÖK: Prof. Telegdy Gyula akadémikus, egyetemi tanár DNT tudományos vezetõje • DNT 2-es altéma vezetõ SZTE ÁOK Kórélettani Intézete IT Tagok: Prof. Penke Botond akadémikus, egyetemi tanár DNT koordinátor, DNT 1-es altéma vezető SZTE ÁOK Orvosi Vegytan Intézete Prof. Dékány Imre akadémikus, tanszékvezető egyetemi tanár Szegedi Tudományegyetem vezetősége képviseletében SZTE tudományos rektorhelyettese Prof. Vigh László akadémikus MTA Szegedi Biológiai Központ képviseletében MTA SZBK Biokémiai Intézete Prof. Vécsei László akadémikus, tanszékvezető egyetemi tanár DNT 3-as altéma vezető SZTE ÁOK Neurológiai Klinika

OPERATIV SZINT

DÖNTÉSI SZINT I.

DÖNTÉSI SZINT II.

Prof. Janka Zoltán tanszékvezető egyetemi tanár DNT 4-es altéma vezető SZTE ÁOK Pszichiátriai Klinika Dr. Janáky Tamás egyetemi docens DNT 4-es altéma vezető SZTE ÁOK Orvosi Vegytan Intézete Prof. Tóth Gábor tanszékvezető egyetemi tanár DNT 5-ös altéma vezető SZTE ÁOK Orvosi Vegytan Intézete Dr. Lévay György kutatási osztályvezető EGIS NyRt. képviseletében Keresztes Péter ügyvezető igazgató Kromat Kft. Papp Csaba DNT menedzserigazgató IRÁNYÍTÓ TANÁCS

DNT KOORDINÁTOR

1-es alprogram

DNT ELNÖK

DNT MENEDZSERIGAZGATÓ

Központi adminisztráció

2-es alprogram Technológia transzfer 3-as alprogram 4-es alprogram 5-ös alprogram

6

Vállalati kapcsolatok


ÁTFOGÓ CÉLOK: 1.) A DNT multidiszciplináris megközelítésű és nagy szakmai diverzitással jellemzett K+F tevékenységet végez a terápiás célú neurobiológiai alkalmazott kutatások terén. Tevékenységét erősen fókuszált, a gyógyszeriparban alkalmazható eredménnyel kecsegtető, az ipari partnerek érdekkörébe eső területen kívánja folytatni. 2.) Cél, hogy a régióban a DNT által koordinált konzorciumi tagok részvételével egy neurobiológiai K+F övezet alakuljon ki, amely közös stratégiai célok mentén végzi hosszú távon jelentős, részben önfenntartó, piacorientált munkáját. 3.) Kiemelt célunk a szellemi áttörésekre képes kutatók kinevelése, megtartása. Minden szempontból vonzó, itthoni fejlődésre alkalmas környezetet kívánunk teremteni a jövő zálogát jelentő tehetséges tudósnemzedék számára. Karrierlehetőséget kívánunk biztosítani a határainkon túli kutatók számára, és a külföldről visszatérni szándékozó tudósaink vonatkozásában. 4.) Célunk, hogy a projekteket végrehajtó világszínvonalú tudományos potenciálhoz méltó infrastrukturális háttér jöjjön létre a modern funkcionális genomika, proteomika és a terápiás célú orvosi/kémiai fejlesztések területén. 5.) Célunk, hogy a kutatók szemléletét a létrehozott szellemi termékek hasznosítása irányában fejlesszük, megfelelő közgazdasági alapismeretekkel lássuk el őket ahhoz, hogy azok hasznosulhassanak, jól előkészített spinoff vállalkozások jöhessenek létre, a konzorcium kutatásaira - fejlesztéseire alapozva. 6.) Célunk, hogy mind a felsőoktatásban, mind a posztgraduális képzésben neurobiológiai tudásbázisunk hasznosuljon, az elért eredményeinket a dél-alföldi régió és az ország a lehetőségekhez mérten minél hamarabb megismerhesse. PARTNEREK: Konzorciumunk központi költségvetésből gazdálkodó tagjai:

MTA-TKI

1. Szegedi Tudományegyetem (SZTE) Az SZTE keretei között 35 munkacsoport vesz részt a kutató-fejlesztő munkában. Ebből 19 az Általános Orvostudományi Karon, 9 a Természettudományi Karon, 6 a Gyógyszerésztudományi Karon, egy munkacsoport pedig a Tanárképző Főiskolai Karon végzi munkáját. 2. Magyar Tudományos Akadémia Szegedi Biológiai Központ (MTA - SZBK) Az Európai Unió Kiválósági Központja (Center Of Excellence) címet viselő kutatóközpontban 13 munkacsoport kapcsolódott be a konzorcium kutató-fejlesztő munkájába. 3. Magyar Tudományos Akadémia Támogatott Kutatóhelyek (MTA-TKI) Szorosan kapcsolódó neurobiológiai kutatások terén Az MTA-TKI négy munkacsoporttal képviselteti magát munkánkban. Ipari partnerek 4. EGIS Gyógyszergyár NyRt. Az EGIS NyRt. a hazai gyógyszergyártás egyik jelentős képviselője. A DNT konzorcium keretein belül a gyár az elkészült többfunkciós épületünkhöz kutatólaboratóriumok kialakításával is hozzájárult.

7


5. Diagnosztikum ZRt. A cég profilja megalakulásától kezdve orvosi laboratóriumi diagnosztikumok gyártása, beszerzése, forgalmazása, valamint az ezekhez kapcsolódó eszközök, műszerek forgalmazása és szervize. A Word Economic Forum (Svájc) 1997-ben beválasztotta a Global Growth Companies (GGC) közé, mint a Közép- és Kelet-Európa kiemelkedő teljesítményt nyújtó vállalatainak egyikét. 6. Kromat Műszerforgalmazó Kft. A Hewlett Packard vállalatból leváló Agilent Technologies nevében a teljes kémiai analitikai üzletágat a Kromat Kft vette át Magyarországon. A cég kereskedelmi tevékenységét jól kiegészíti a hatékony proteomikai alap- és alkalmazott kutatások támogatása, élő kapcsolatépítés a kutatóbázisokkal. 7. Creative Labor Szolgáltató Kft. A vállalat több éves tapasztalattal rendelkezik a molekuláris biológia területén. Klónozási technikák, real-time és hagyományos PCR-es alkalmazások kidolgozása, fehérje expresszió bakteriális és eukarióta rendszerben, fehérje- és DNS analitikai módszerek gyakorlati alkalmazása szerepel eszköztárában. 8. Rytmion Kutató és Fejlesztő Kft. A cég elsősorban a szív elektrofiziológia és aritmia gyógyszerkutatás területén tevékenykedik, szoros együttműködésben a Szegedi Tudományegyetem Farmakológiai és Farmakoterápiai Intézetével. Tevékenysége a különböző gyógyszerjelölt molekulák kardiovaszkuláris hatásainak GLP körülmények közötti vizsgálata. 9. Kation Európa Bt. A vállalkozás az extracelluláris elektrofiziológia és mikroiontoforézis tárgyköréhez kapcsolódó üveg mikroelektródák, elektronikai eszközök és software-ek fejlesztésével, gyártásával és eladásával foglalkozik. Cégünk részt vesz az élvonalbeli neurobiológiai kutatásokban is, kiválóan felszerelt elektrofiziológiai laboratóriumot tart fent az SZTE Általános Orvosi Kar Orvosi Vegytani Intézetében. 10. QualiCont In Vitro Diagnosztikai Kht. A Kht. tevékenysége a hazai in vitro diagnosztikai laboratóriumok szakszerű külső minőségellenőrzésének biztosítása, az ehhez kapcsolódó kutatás-fejlesztési, informatikai, képzési-, továbbképzési és nemzetközi együttműködési feladatok végrehajtása. 2001 év óta ISO 9001 minőségtanúsítással működik. 11. Dél-Alföldi Bio-Innovációs Centrum Kht. (DABIC) Genomikai Központja A Kht. tagjai a Szegedi Egyetem, a Bay Zoltán Intézet, a Gabonakutató Intézet, a Csongrád megyei és Szeged városi önkormányzata és számos olyan kis- és középvállalat, amely a genomikai kutatásokban érintett. A központ működésének egyik fő célja olyan projektek irányítása és szervezése, mely több társintézet együttes munkáját igényli. Másik fő célja egy bioinformatikai rendszer megteremtése.

8


Csatlakozott ipari partnerek 12. JSW Hungary Kft. A JSW Hungary Kft. 2006. augusztusában csatlakozott a DNT programhoz. A cég gyógyszerjelölt molekulák kutatási szerződésen alapuló analitikai, biokémiai és molekuláris biológiai tesztelését, valamint azok in vitro szövettenyészeten és in vivo transzgenikus egérmodelleken történő preklinikai kipróbálását végzi, szorosan kapcsolódva a DNT program 3. és 5. alprogramjához tartozó csoportok kutatásaihoz. Ezen túlmenően kedvezményesen látja el a konzorcium minden egyes tagját az Alzheimer- és a Parkinson- kór transzgenikus állatmodelljeivel. 13. PharmacoIdea Kft. (volt Musgenex Kft.) Dr. Oláh Zoltán, 2006 januárjában MusGenex Kft névvel, az MTA SZBK Biokémiai Intézetének támogatásával és Dr. Sántha Miklós állatorvos bevonásával, új spin-off céget hozott létre. A cég tevékenységébe többek között beletartozik transzgenikus riporter állatmodellek tervezése, létrehozása és forgalmazása. Elsősorban tudományos kutatással foglalkozó intézményeknek szállítunk, beleértve egyetemeket és gyógyszergyárakat, Európában vagy a világ bármely más kontinensén. 14. LipidArt Kft. A 2007 júniusában megalakult LipidArt Kft célja új típusú gyógyszerek felfedezése innovatív gyógyszerfejlesztési platform segítségével mely a membránok mikrodomén szerkezetének finomhangolása és a stresszválasz szelektív modulációja közötti kapcsolaton alapszik. A LipidArt elsősorban a globálisan egyre növekvő jelentőségű neurodegeneratív betegségekre koncentrál. Konzorciumi alapítású társaságok 15. Vitadel Kft. A vállalat a Szegedi Tudományegyetem első hasznosító (spin-off) cége. Fő feladata a Dél-Alföldi Neurobiológiai Tudásközpont kutatói által kidolgozott és alkalmazott eljárások, módszerek gyakorlati alkalmazása, illetve forgalmazása. A kft szolgáltatásokat kínál üzleti partnereinek szerződéses munkában a gyógyszerkutatás teljes vertikumában, a számítógépes molekulatervezéstől és optimalizálástól a klinikai fázisig.

9


DNT KUTATÓKÖZPONT ÉS INKUBÁTORHÁZ 2006. júniusától működik az Egyetem kampuszának közepén létrehozott új Kutatóközpont és Inkubátorház. Ez a 253 millió Ft-os (mintegy 1 millió eurós) beruházás eddig a legnagyobb a DNT történetében. A Központ 1300 m2 labor- és irodaterületet foglal el. A beruházás legnagyobb részét a DNT projektből fedeztük, de más forrásokat is igénybevettünk. (5,08 millió Ft-ot a KF-IIF/2005 pályázatból az épület informatikai és kommunikációs hálózatának kiépítésére; 165 millió Ft-ot a main-frame komputerek valamint a 600 MHz-es NMR készülék beszerzésére). A Központban a következő laboratóriumok kaptak helyek: 1) Számítóközpont és Molekulamodellezési Laboratórium Két main-frame számítógép (értékük: 57 millió Ft, ~ 220.000 €); van elhelyezve a laboratóriumban, klaszterben kapcsolva. A központ fő feladata a molekula-szimuláció és számítógépes molekula (gyógyszer) tervezés, valamint az NMR mérések adatainak feldolgozása. Ebben a laboratóriumban van az épület informatikai és telekommunikációs központja is. 2) NMR Centrum Az országban egyedülálló teljesítményre képes laboratórium egy 500 és egy 600 MHz-es Bruker gyártmányú NMR-készülékkel van felszerelve. Ezek összértéke kb. 250 millió Ft és más forrásból szereztük be őket, bár a laboratórium berendezését a DNT is támogatta 40 millió Ft-tal. A Centrum fő feladata a fehérjék szerkezetének és kis molekulákkal (pl. gyógyszermolekulák) lejátszódó kölcsönhatásainak tanulmányozása. Az NMR Laboratórium a közeljövőben megszervezendő „Strukturális Biológiai Központ” fontos alkotórésze. 3) DNS-Oligonukleotid Laboratórium A munkahely fő feladata oligonukleotidok, antiszensz oligonukleotidok és peptid nukleinsavak (PNS) szintézise további biológiai vizsgálatok céljából. 4) RNS-Interferencia Laboratórium Magyarországon ez az egyetlen laboratórium, ahol molekulatervezés után kis interferáló RNS-et állítanak elő. Az RNS interferencia a gyógyszertervezés és fejlesztés legmodernebb módszere (Kémiai Nobel-díj, 2006). 5) Peptid és Fehérjelaboratórium A munkahely feladata peptidek szintézise, a peptidek és fehérjék aggregációjának, a neurotoxikus peptid/fehérje szupramolekuláris szerkezeteknek, inklúziós testeknek a tanulmányozása. Új lehetőséget alakítottunk ki fehérjék kristályosítására. A fehérjék Rtg-szerkezetvizsgálatát nemzetközi kooperációban oldjuk meg. 6) Neuroproteomikai Kutatóhely Hazánkban ez is egyedülálló munkákra és teljesítményre létrehozott laboratórium, képes kiszolgálni az egész ország neurobiológiai proteomikai igényét. A kutatóhely feladatai: fehérjék izolálása, 2D gélelektroforézissel vagy nano-HPLC-vel történő elválasztása, a fehérjék azonosítása a tömegspektrometriás peptidszekvenálás és adatbázisok segítségével. A kutatómunkát egy újgenerációs tömegspektrométer segíti, amely a legmodernebb szoftverrel van felszerelve. (A DNT 46 millió Ft-tal támogatta a csúcsteljesítményű műszer beszerzését). A kutatóhely fő feladata azoknak a célfehérjéknek az azonosítása és validálása, amelyek a neurodegenerációs folyamatokban kulcsszerepet játszanak. 7) Elektrofiziológiai Laboratórium A munkahely fő feladata a gyógyszerjelölt vegyületek központi idegrendszerre gyakorolt hatásának tanulmányozása in vivo elektrofiziológiai állatmodelleken.

10

ÉVES JELENTÉS•2008 8) Sejt-és Szövettenyésztő Laboratórium A laboratórium fő feladata olyan in vitro kísérletek véghezvitele sejt- és szövetkultúrákon (pl. organotipikus kultúrák), amelyekkel a neurodegeneratív betegségek sejt- és szövetkultúra modelljein tanulmányozható a gyógyszerjelölt vegyületek hatása. 9) Fluoreszcens Mikroszkópiai Kutatóhely Sejt- és szövetkultúrákban specifikus fluoreszcens festéssel tanulmányozzuk a Ca2+ beáramlást a sejtekbe, a Zn2+ -ionok felszabadulását és a membránpotenciál változásokat a gyógyszerjelölt vegyületek hatására. Egy fluoro-plate-reader hasonló alapelven gyors és kvantitatív méréseket tesz lehetővé. 10) Állatház A központban egymás mellett két állatház található: egy a patkányok és egy az egerek részére, minden felszerelés és berendezés eléri a GLP szintet. 11) Tanulási - Magatartási Laboratóriumok Ezeken a munkahelyeken azt tanulmányozzuk, hogy a gyógyszerjelölt vegyületek milyen hatást gyakorolnak a patkányok és (ritkábban végrehajtott kísérletekben) az egerek tanulására és viselkedésére. A következő kísérleteket használjuk: nyílt porond (open field) teszt; passzív- és aktív elhárító magatartás; emelet plusz labirintus (maze); Morris vízlabirintus; tárgyfelismerés; forgórudas teszt és keresztlabirintus. A fenti laboratóriumok mellett két másik kutatócsoport is helyet kapott a Centrumban: az Alzheimer-kór Kutatócsoport és az Enteriális Idegrendszeri Csoport. Az EGIS gyógyszergyár több laboratóriumot támogat a Centrumban. A DNT központi irodái szintén a Centrum épületében kaptak helyet. A DNT-t alkotó kisvállalatok (JSW Hungary, Rytmion, Vitadel Kft.) mellett más cégek is laboratóriumot és/vagy irodát kaptak a Centrum épületében. Egy 40 m2-es szeminárium-könyvtár helyiséget alakítottunk ki szemináriumok, előadások, munkamegbeszélések és üzleti tárgyalások céljára. Az épület jelenleg teljes mértékben kihasznált. Egyre nagyobb probléma segítséget nyújtani az ide települni szándékozó vállalkozásoknak az egyetem campusához közeli elhelyezésben, ezért újabb ingatlan megvásárlását és felújítását tervezzük a jövőben inkubációs célból. A DNT-tag kisvállalatok nem fizetnek bérleti díjat, csak rezsiköltséget a laboratóriumok és irodák bérletéért, a többi partner bérleti díjat és rezsiköltséget is fizet. Így a Centrumnak van bevétele a további fejlesztések és az induló spin-off vállalkozások támogatására (inkubátor funkció). A Centrum kiváló tudományos és laboratóriumi hátteret ad a gyógyszerkutatás és fejlesztés szinte valamennyi fázisának, a felfedezéstől a preklinikai és klinikai kísérletekig. A Centrumban jelenleg 35 szenior, posztdoktori és doktori ösztöndíjas kutató dolgozik.

11


SZAKMAI JELENTÉS 2007. november 1. - 2009. május 31. A DNT a neurodegenerációs betegségek (elsősorban az Alzheimer- és Parkinson-kór), valamint a szorongásos betegségek és a depresszió kialakulásának mechanizmusát és gyógyszeres kezelési lehetőségeit kutatja. A DNT a projekt lezárása (2009. június) után is folytatni kívánja a kutató-fejlesztő munkát, az ÚMFT GOP 1.1.2 pályázat keretében. Bár az alprogramok munkája szorosan kapcsolódik egymáshoz és sokszálú kooperációs hálózat alakult ki, szervezési okok miatt a munkacsoportok munkáját 13 témacsoportra, klaszterre osztottuk fel. Ez a szervezés jól bevált, így a szakmai beszámolót is a 13 témacsoport szerint tagoltuk. 2004-2009 közötti kutatások Alzheimer-kór

Parkinson-kór

Huntington-kór

2009 utáni kutatások

Anxiety

Depression

Alzheimer-kór

Szorongás

Parkinson-kór

Depresszió

Huntington-kór

Skizofrénia ALS

1. ALPROGRAM Kóros fehérje-aggregációval járó betegségek (Alzheimer-kór, Parkinson-kór) terápiájának kutatása Projektvezető: Dr. Penke Botond Résztvevők: Szegedi Tudományegyetem, MTA-SZBK, MTA-TKI, Kation Bt., Creative Labor Kft., JSW Hungary Kft., Rytmion Kft., Vitadel Kft. Az alprogram célja Fő célunk a kóros fehérje aggregációval járó betegségek (Alzheimer-kór, Parkinson-kór) hatásmechanizmusának kutatása és gyógyszerjelölt vegyületek kifejlesztése. Az Alzheimer-kór elsősorban idős korban fellépő neurodegeneratív betegség, fő jellemzői a kognitív funkció beszűkülése, viselkedés- és memóriazavarok, demencia és gyors leépülés. A Parkinson-kór is elsősorban az időseket érinti, a mozgási funkciók zavara mellett gyakran (az esetek 15 %-ában) igen súlyos demenciával jár. Az Alzheimer-kór egyedül Magyarországon 120.000 (Európában kb. 4 millió) idős embert érint és óriási terhet jelent az érintett családok és a társadalom számára. (A Parkinsonkórban szenvedő betegek száma ennek kb. egytizede). Az Alzheimer-kór az emberi életkor meghosszabbodásával már epidémiai jelleget öltött és gyógyítása, kezelése az Európai Unió kiemelt kutatási programja lett. Az említett két betegség közös sajátsága, hogy az idősődő szervezetben a javító mechanizmusok gyengülésével az idegsejtek nem tudják a rosszul feltekeredett (misfolded) fehérjéket a szokásos módon (HSP-k, ubiquitin-proteoszóma rendszer, lizoszomális proteolízis) eltávolítani. Az öregedés tehát óhatatlanul magával hozza a protein homeosztázis (proteosztázis) zavarát, a rosszul feltekeredett, denaturált fehérjék neurotoxikus aggregátumokká (oligomerek, protofibrillumok, fibrillumok) állnak össze. Ezeknek szinte valamennyi kölcsönhatása a sejt alkotóelemeivel (el-

12

ÉVES JELENTÉS•2008 sősorban a fehérjékkel) nem kívánatos, káros. A gyógyszerfejlesztés célja tehát olyan kis molekulák tervezése, előállítása és biológiai vizsgálata volt, amelyek mind in vitro, mind in vivo megakadályozzák a fehérjeaggregátumok kölcsönhatását a neuronok fehérjéivel, neutralizálva a β-amiloid ill, α-szinuklein anyagokat. Ez a komplex gyógyszerjelölt-kutatási program a β-amiloid témában célul tűzte ki a racionális molekulatervezést, vezérvegyület megtalálását és optimalizálást: az enzimrezisztens, per os felszívódó és a vér-agy gáton átjutó gyógyszerjelölt vegyületek komplex in vivo tesztelését, beleértve a toxicitást is. Másik célunk olyan gyógyszerjelölt vegyületek keresése volt a természetes anyagok körében, amelyek szabadgyökfogó sajátságuk révén meggátolják a toxikus fehérjék által felszabadított reaktív szabad gyökök hatásait. 1. Klaszter: Az Alzheimer-kór új gyógyszerei. Projektvezető: Dr. Penke Botond Munkacsoportvezetők: Dr. Bogár Ferenc, Dr. Dékány Imre, Dr. Kiss Tamás, Dr. Laczkó Ilona, Dr. Martinek Tamás, Dr. Kálmán János, Dr. Datki Zsolt, Dr. Toldi József, Dr. Budai Dénes, Bodóné Sipos Eszter Elvégzett tevékenység (fontosabb eredmények) Az Alzheimer-kór kutatásnak komoly gátló tényezője volt, hogy eddig nem állt rendelkezésre olyan β-amiloid 1-42 peptid, amelynek aggregációja standardizálható és mindig megismételhető módon ugyanazt a konformációjú (térszerkezetű) Aβ1-42 aggergátumot (oligomer, protofibrillum, fibrillum) szolgáltatta volna. A vegyszercégek által forgalmazott szintetikus Aβ peptidek aggregáltsági foka, toxicitása, vízoldékonysága mintáról mintára változott, és a velük végzett kísérletek ritkán voltak megismételhetők. Kutatócsoportunknak sikerült megoldani ezt a problémát: az irodalomban korábban leírt, a Gly25 és Ser26 között észterkötést tartalmazó Aβ1-42 izopeptid („Aβ1-42 prekurzor”) megfelelő kezelésével szinte tetszés szerinti aggregáltsági fokú Aβ1-42 állítható elő. A kezelés időtartamának, a pufferoldat pH-jának és a hőfoknak a változtatásával az aggregáció folyamata standardizálható és tetszés szerinti pufferben a kívánt szerkezetű oligomer, protofibrillum vagy fibrillum állítható elő biológiai kísérletekhez. Az új Aβ142 segítségével sikerült egy régóta vajúdó problémát is megoldani: az Aβ1-42 oligomerek hosszú időn át történő közvetlen bejuttatását nem transzgén állatok agyába (hippocampus, III. agykamra) olyan módon, hogy közben az ozmotikus minipumpában nem csapódik ki az Aβ fibrillum. Módszerünkkel beépített Alzet-pumpa segítségével akár 14 napig is folyamatosan adagolható az Aβ1-42 oligomer keverék. Az Aβ1-42 izopeptidet a DNT spin-off cége, a Vitadel forgalmazza. NMR kísérletekkel sikerült bizonyítani, hogy az Aβ1-42 aggregátumokat közömbösítő gyógyszerjelölt vegyületeink milyen módon hatnak, hogyan védik meg az idegsejteket. Az Alzheimer-kór gyógyszerjelölt vegyületei szabadalom erősítése, a védelmi kör kibővítése céljából további 20 vegyületet terveztünk és állítottunk elő számítógépes molekulatervezés után. Az optimalizálás fő szempontja (a Lipinsky-szabályon túlmenően) a peptidomimetikum-jellegű gyógyszerjelölt vegyületek molekulatömegének csökkentése volt 350-400 Daltonra. Eddigi vizsgálatok szerint az új, kisebb moltömegű vegyületek megtartották az alapvegyületek hatását és kedvező tulajdonságait (felszívódás, vér-agy gát áthaladás, nem toxikus jelleg). Az új szintetikus vegyületek leírását még sikerült beilleszteni az alapszabadalomba. Fizikai-kémiai és spektroszkópiai (CD) vizsgálatokkal bizonyítottuk, hogy az új gyógyszerjelölt vegyületek nem akadályozzák meg az Aβ1-42 aggregációt, de befolyásolják a térszerkezetet (konformáció) és inkább a kevésbé rendezett, kevésbé toxikus térszerkezet kialakulásának kedveznek. A Zn2+-ionok diffúz Aβ-aggregátumok kicsapódását eredményezik, ezek neurotoxicitását még most is vizsgáljuk. Két új peptidtípusú Zn-kelátor alkalmasnak bizonyult a diffúz Aβ-aggregátum kicsapódásának megakadályozására. Tovább folytattuk az Aβ1-42 oligomerek, ill. a gyógyszerjelölt vegyületek hatásának vizsgálatát in vitro elektrofiziológiai kísérletekben (patkány hippocampus szeletek, az LTP vizsgálata multielektród array (MEA) segítségével). Egysejt elvezetéssel in vivo is tanulmányoztuk a hatásokat (altatott patkány). Kimutattuk, hogy az Aβ oligomerek ill. fibrillumok eltérő módon hatnak az NMDA ill. AMPA-receptorokon. Szerencsés módon az új gyógyszerjelölt vegyületeink mind az oligomerek, mind a fibrilláris Aβ1-42 LTP-re gyakorolt hatását kivédik. Patkány tanulási és magatartási kísérleteben is bizonyítottuk a gyógyszerfejlesztésre kiválasztott vegyület (BAM-9) neuroprotektív hatását Aβ1-42 oligomerek mikroinjekciója (III. agykamra) után. A BAM-9 a Morrisvízlabirintusban a 4. és 5. napon szignifikánsan kivédi az Aβ1-42 tanulási folyamatot és memóriarögzítést zavaró ha-

13

ÉVES JELENTÉS•2008 tásait. Transzgenikus egérkísérleteket végeztünk (APPxPS1mutáns) két, a gyógyszerfejlesztésre kiválasztott vegyület neuroprotektív hatásának bizonyítására: a kísérleti csoportba tartozó állatok 3. és 9. hónapos koruk között 6 hónapon át naponta kapták ip injekcióban a gyógyszerjelölt vegyületeket, 10 mg/ttkg dózisban. A kísérlet lezárult, a tanulásimemóriarögzítési funkciók vizsgálata és a hisztológia vizsgálatok most folynak. További lépések Legfontosabb, hogy az alapszabadalom minél nagyobb védettséget nyújtson az általunk szintetizált és rokon vegyületek körére, ill. a gyógyszerjelölt vegyületek újszerű hatásmechanizmusának védelmére. A szabadalmazást, az igénypontok megfogalmazását a gyógyszeriparban igen nagy tapasztalattal rendelkező cég, az Advopatent végzi. (Az Advopatent közvetlen partnere az USA-ban a világszerte ismert Birch&Birch cég). A szabadalom forgalmazásához meg kell várnunk a transzgenikus egérkísérletek eredményét (tanulás-memóriarögzítés, hisztológia). A tárgyaló partnereink világos és egyértelmű bizonyítékot várnak arról, hogy a gyógyszerjelölt vegyületek nemcsak az in vivo tanulás-magatartási kísérletek, hanem a hisztológiai vizsgálatok szerint is szignifikánsan védenek az Aβ1-42 toxikus hatása ellen. (Plakképződés és tau-patológia lassítása, gátlása; mikroglia-aktiválás gátlása; dendrittüskék számának normalizálása; neuronpusztulás megakadályozása). A tárgyalásokat a DNT spin-off cége, a Vitadel végzi. 2. Klaszter:

Neuroprotektív szabadgyökfogó vegyületek tervezése, szintézise, biológiai tesztelése. Kísérleti vér-agy gát modell kidolgozása. Projektvezető: Dr. Zarándi Márta Munkacsoportvezetők: Dr. Farkas Eszter, Dr. Deli Mária

Elvégzett tevékenység (fontosabb eredmények) Mivel a neurotoxikus fehérje-aggregátumok (így a β-amiloid és az α-szinuklein) aktiválják a szabad gyökök képződését, amelyek viszont hosszabb távon az idegsejtek diszfunkcióját és pusztulását okozzák, a szabadgyökfogó anyagok a neurodegenerációs betegségek potenciális gyógyszerei. A kutatások alapvető célja annak eldöntése, hogy melyik szabadgyökfogó vegyület mutatja a legjobb neuroprotektív hatást in vivo körülmények között, illetve bejuttathatók-e ezek a vegyületek az agyba a vér-agy gáton keresztül. Előző kísérleteink szerint az α-tokoferol csak óriási dózisban (100 mg/kg ip) vált ki mérhető neuroprotektív hatást patkányokban, ezt az eredményünket a szakirodalom is alátámasztja. Az α-tokoferol kémia szerkezete miatt (a gyűrűrendszer 5. helyzete egy metilcsoporttal van szubsztituálva) nem alkalmas szabad gyökök, különösen a peroxinitrit befogására, közömbösítésére. Az γ-tokoferol (5-dezmetil-αtokoferol) in vitro kísérletekben alkalmasnak látszott szabad gyökök befogására. In vivo kísérletekkel (patkány arteria carotis communis lekötéses-hipoxia által kiváltott neurodegeneráció) nem sikerült bizonyítanunk kis dózisú γ-tokoferol neuroprotektív hatását. Elsősorban a vér-agy gát átjárhatóságát kellett megvizsgálnunk. Sikerült kifejleszteni és jellemezni egy új vér-agy gát modellt az agyi mikroerek három fő sejttípusának, az erek belhámsejtjeinek, a pericitáknak és asztrocita sejteknek felhasználásával. A modell funkcionális jellemzésére transzendoteliális elektromos ellenállást mértünk, ami átlagosan 400 Ω×cm2 értéket adott, jelezve a sejtközötti kapcsolatok szorosságát. Az endotél egysejtrétegek permeabilitási együtthatója (Pe) fluoreszceinre az 1-3×10-6 cm/s sávban mozgott. A modell validálására 19 jól ismert, idegrendszerbe bejutó, illetve idegrendszeri hatással nem rendelkező gyógyszermolekula permebilitását teszteltük le. Az in vitro modellen kapott Pe értékek jól korreláltak (R2=0.89) az in vivo, egereken mért vér-agy gát permeabilitási adatokkal. Eredményeink alapján az új vér-agy gát modell alkalmas gyógyszeripari célú felhasználásra, hatóanyagok központi idegrendszeri bejutásának becslésére.

agyi endotéjsejt

pericita

asztroglia

Ciklodextrinek jelenlétében javult a γ-tokoferol áthaladása vér-agy-gát modellen.

14


További lépések Komoly kereslet van olyan táplálékkiegészítők, kompozitok, ill. funkcionális élelmiszerek előállítására, amelyek neuroprotektív hatást mutatnak. A hatás egyértelmű bizonyítása után ez azonnal eladható készítményeket jelentene. A szakirodalom és saját eddigi kísérleteink alapján 6 vegyületet tartalmazó kompozit összeállítását és kipróbálását végezzük, mint neurontápláló („neuronutritient”) táplálékkiegészítőt. Kapcsolatban vagyunk a hollandiai multinacionális világcég, a NUMICO jogutódjaként fellépő DANONE cég képviselőivel. Az összeállítandó kompozit neuroprotektív hatásának igazolása további állatkísérleteket, majd klinikai kipróbálást igényel. 3. Klaszter: Az Alzheimer-kór gyógyszerjelölt vegyületeinek in vivo vizsgálata és toxikológiája. Projektvezető: Dr. Falkay György Munkacsoportvezetők: Dr. Nagymajtényi László. Dr. Benedek György, Dr. Erős István Elvégzett tevékenység (fontosabb eredmények) A kutatások célja az előzőleg előállított gyógyszerjelölt vegyületek ADME és toxicitás vizsgálata, valamint a biztonságfarmakológiai kísérletek. Valamennyi vizsgálatot a további gyógyszerfejlesztésre kiválasztott BAM-9 vegyülettel végeztük. Ez az anyag az eddigi vizsgálatoknál kevésbé hidrofil jellegű és proteolízisnek ellenáll. Egereken végzett 28 napos toxicitási vizsgálatok azt bizonyították, hogy a BAM-9 a dózis-hatás alapján 100 mg/kg értékig az állatokban semmiféle elváltozást nem idéz elő. Az 1 g/kg dózis okozott bizonyos mozgási elváltozásokat, de az állatok belső szerveiben toxikus hatást nem tudtunk megállapítani. A BAM-9 biztonságfarmakológiai vizsgálata szintén negatív eredménnyel zárult. Az ADME vizsgálatok patkányokban a BAM-9 esetén érdekes eredményekre vezettek. Bebizonyosodott, hogy a vegyület gyomorszondán át adva is felszívódik, majd egy része (kb. 0,6%) átjut a vér-agy gáton is. Ez megmagyarázza a vegyület eddig észlelt szignifikáns neuroprotektív hatását in vivo kísérletekben. A BAM-9 nagy mennyiségben kerül be a nagy parenchimás szervekbe (máj, vese, tüdő). Előre nem várt módon a vegyület elég gyorsan (kb. 2 óra alatt) kiürül a szervezetből és egy része metabolizálódik is. A metabolitok szerkezetének felderítése most folyik. További lépések A fenti munkákkal gyakorlatilag lezárul a preklinikai vizsgálatok fázisa. ezekkel a vizsgálatokkal egy nagy értéket képviselő, eladható termék jön létre, amelynek értékesítéséről (az Alzheimer-kór potenciális gyógyszere) tárgyalunk két nyugat-európai gyógyszergyárral. Az ADME eredmények alapján szükség lesz további, lassabban kiürülő és metabolizálódó gyógyszerjelölt vegyületek szintézisére és vizsgálatára, a molekulatömeg csökkentése mellett. (Követő szabadalom benyújtása, ld. 1. klaszter eredményei) 2. ALPROGRAM Szorongásos betegségek és kóros neuroendokrin folyamatok (tanulás- és memóriazavarok, stressz, szenvedélybetegségek) gyógyszeres kezelése. Projektvezető: Dr. Telegdy Gyula Résztvevők: Szegedi Tudományegyetem, MTA-SZBK, MTA-TKI, EGIS Nyrt. Az alprogram célja Az alprogram célja egy hosszútávú, népegészségügyi szempontból meghatározó jellegű vizsgálatsorozat kivitelezése az anxietás és depresszió, valamint a szenvedélybetegségek potenciális gyógyszereinek kutatására. A szorongásos zavarok a leggyakrabban előforduló pszichiátriai kórképeknek tekinthetők (pánik anxietás, generalizált szorongásos zavar, kényszerbetegség, fóbiák (agora, szociális, specifikus) és a poszttraumás stressz betegség). Prevalencia adatok szerint minden negyedik személyben valamikor az élete során kifejlődik valamilyen jól definiált szorongásos zavar. Az anxietás betegségek jelentős egyéni és társadalmi terhet is jelentenek, jellegzetesen

15

ÉVES JELENTÉS•2008 krónikus lefolyásúak és a testi betegségekhez hasonló fokú rokkant állapotot eredményezhetnek. A szorongásos zavarok kialakulásában kulcsszerepet játszik a glutamáterg rendszer. Preklinikai vizsgálatok szerint az NMDA, AMPA/kainát és a metabotróp glutamát receptorokon ható anyagok anxiolitikus hatásúak. Kutatásaink egyik fő célja ezen a területen az AMPA-receptorok modulálása új, hatékony anxiolitikumok előállítása. Másik fő célunk az NMDA receptor modulátorainak kutatása. A kutatás másik területe (a korszerű fájdalomcsillapítás, ill. a szenvedélybetegségek kezelése) elsősorban az opioid peptidekhez és receptoraikhoz kapcsolódik. Fő cél az opioid rendszer szignáltranszdukciós útjainak felderítése és egy új elmélet kidolgozása. Terápiás szempontból kiemelt fontosságú a gasztrointesztinális betegségek és a központi idegrendszer ill. az enterális idegrendszer kapcsolatának teljes megismerése. Fő célunk volt a cukorbetegség, az alkoholizmus és a stressz által kiváltott gasztrointesztinális kórképek tanulmányozása, a „brain-gut” tengely vizsgálata, az enterális idegrendszer károsodása következtében kialakuló kóros folyamatok gyógyszeres kezelése. 4. Klaszter:

Anxiolitikumok kutatása; AMPA-receptorok modulációja. Projektvezető: Dr. Telegdy Gyula Munkacsoportvezetők: Dr. Telegdy Gyula, Dr. Lévay György

Elvégzett tevékenység (fontosabb eredmények) Elvégeztük az NMDA receptor modulátorainak, nevezetesen a glicin kötőhelyen modulátor szerepet játszó, a glicin szintet szabályozó glicintranszporter-1 (GlyT-1) gátló hatású vegyületek vizsgálatait. A GlyT-1 inhibitorok az NMDA receptor komplex működésének módosításával hatékony terápiás eszközök lehetnek a depresszió és a skizofrénia gyógyításában. Az elmúlt időszakban a projekt keretében az előbbiekben említett GlyT-1 inhibitorok a részletes farmakológiai karakterizáláshoz szükséges vizsgálatokat végeztük (glicin release mérése, mikrodialízis). Ezt követően a különböző központi idegrendszeri stimulánsok (PCP-fenciklidin, MK-801, amphetamin, stb.) által kiváltott speciális viselkedésformák (hipermotilitás, sztereotipia) gátlásán alapuló méréseket folytattunk. A karakterizálás befejező részében ismert betegségmodellek felhasználásával teszteltük a vegyületek potenciális terápiás aktivitását az adott célterületen (skizofrénia, depresszió) Az elmúlt évben 5 vegyületcsaládban összesen 100 db új vegyület szintézise történt meg. A vegyületek biológiai hatékonyságát a fentiek értelmében a projektben elfogadott screen rend szerint vizsgáltuk. • Spreading depression mérése izolált csirke retinán: a teszten 35 vegyületet vizsgáltunk meg. • Glicinfelvétel gátlás szinaptoszóma preparátumon, + szelektivitás: 100 vegyület mérését végeztük el. • Glicin felszabadulás mérése agyszeletből: 35 vegyület mérését végeztük el. • Glicin és glutamátszintek mérése mikrodialízis technikával éber patkányban: 11 vegyület mérését végeztük el. • PCP és MK-801 hipermotilitás gátlására a referensek mellett 15 vegyületet vizsgáltunk meg, jelentősebb hatást 4 vegyület esetében találtunk. • Potenciális mellékhatás - légzési paraméterek vizsgálata: 3 vegyülettel végeztük el. • Egyéb magatartás-farmakológiai vizsgálatot 13 vegyülettel végeztünk. Kimutattuk, hogy az urocortin 2 (UCN2) és az urocortin 3 (UCN3) antidepresszív hatással rendelkezik, míg az UCN1 hatástalan. Az UCN3 hatásában különböző transzmitterek vesznek részt. Alfa-adrenerg gátlás az UCN3 immobilitásra kifejtett hatását kivédi. A yohimbin kivédte mind az immobilitásra, mind a mászásra és az úszásra kifejtett hatást, míg a methysergid csak az immobilitásra és a mászásra volt hatással. A vizsgálatok arra mutatnak, hogy az UNC3 antidepressziv hatásában alfa-adrenerg és serotonergiás mediáció vesz részt. Az urocortinok antidepresszív hatásában a C-terminális tripeptid a molekula hatáscentruma. Ezen alapon elindult olyan analógok szintézise és tesztelése, amelyek peptidmimmetikumnak tekinthetők, és mint antidepresszivumok terápiásan és érdekesek lehetnek. Az urocortinok (UCN1, 2 és 3) hipertermiát okoznak. Ebben a hatásban az UCN1 hipertermiás hatása a CRF1 receptoron keresztül érvényesül, míg az UCN2 és UCN3 hatásában a CRF2 receptor érintett.

16


További lépések Legfontosabb feladatunk az urocortin-3 antidepresszív hatást mutató peptidfragmenseiből új, antidepresszáns hatású gyógyszerjelölt vegyületek kifejlesztése (peptidomimetikumok racionális molekulatervezése, lead optimalizáció, ADME vizsgálatok, előzetes toxicitásvizsgálatok). 5. Klaszter: Opioid agonisták és antagonisták. Projektvezető: Dr. Borsodi Anna Munkacsoportvezetők: Dr. Benyhe Sándor, Dr. Tóth Géza, Dr. Szűcs Mária, Dr. Szabó Gyula Elvégzett tevékenység (fontosabb eredmények) Új, proteolitikus enzimekkel szemben ellenálló hatékony endomorfin analógokat szintetizáltunk. Az endomorfin szekvenciában a prolint helyettesítettük aliciklikus β-aminosavakkal (2-amino-ciklopentán 1- karbonsav (Acpc) és 2-aminociklohexán-1-karbonsav (Achc)). Az említett aminosavak két királis szénatomja miatt a szisztematikus tervezés 16 új peptidet eredményezett. Az új analógok biológiai vizsgálatát patkány agy membrán preparatumban radioreceptor kötési vizsgálatokkal és ligand stimulálta 35S-GTPγS kötési vizsgálatokkal végeztük el. Ezek alapján a leghatékonyabb analógok (1S, 2R) Acpc vagy (1S, 2R) Achc aminosav izomereket tartalmaztak mind az endomorfin-1, mind az endomorfin-2 esetében. Ezek az analógok agonistaként viselkedtek a fukcionális 35S-GTPγS kötési vizsgálatokban és proteolitikus enzimekkel szemben ellenállók (> 12 óra a féléletidő, patkány agy homogenizátumban való inkubálásnál). Molekula dinamikai számítások és 1H NMR vizsgálatok megerősítették, hogy a peptidek kompakt konformációja valószínűbb, mint a nyújtott konformáció. Az (1S,2R)Acpc2-endomorfin-2 és Ahpc21S,2R -endomorfin-2 peptideket tríciummal jelzett formában is előállítottuk. Prekurzorként kettőskötést tartalmazó aliciklusos β-aminosavakat tartalmazó endomorfin-2 származékokat alkalmaztunk és trícium gázzal való telítéssel történt a jelölés. Ezek az aminosavak nem kereskedelmi termékek. A két nagy fajlagos aktivitású radioligandum karakterizálását patkány agy membránpreparátumon végeztük. A direkt radioreceptor kötési vizsgálatok bizonyították a radioligandumok nagy affinitását és szelektivitását μ opioid receptorokon. A két radioligandumot kereskedelmi termékké is fejlesztettük 2008-ban, ezeket az Izotóp Kutató Intézet Kft forgalmazza. Két új nociceptin receptor ligandumot állítottunk elő tríciummal jelzett formában. A Nphe1,4’-3H-Phe4, Arg14Lys15nociceptin-NH2 (3H-UFP-101) az első trícium jelzett nociceptin peptid antagonista. Az Ac-Arg-Tyr-Tyr-Arg-Ile-Lys-ol jelölését a két tirozinban végeztük el. A prekurzort a peptid jódozásával kaptuk, majd dehalogéneztük tricium gázzal Pd katalizátor jelenlétében. Fajlagos aktivitása: 94 Ci/mmol. Az utóbbi radioligandot kereskedelmi termékké is fejlesztettük. Elsőként vizsgáltuk triciált endomorfinok (endomorfin 1 és 2) kötődését patkányok és egerek központi idegrendszerében autoradiográfia segítségével. Megállapítottuk, hogy az endomorfin-1 nemcsak az ismert opioid-receptor területeken kötődik az agyban, hanem számos más egyéb kötőhellyel is rendelkezik. Egy új endomorfin-2 tetrapeptid analógot állítottunk elő (Dmt-Tic-(2R,3S)betaMe-Phe-Phe-OH), ez az analgézia tesztben az endomorfin-2-vel azonos hatású, de a hatás elhúzódó. Egy delta-receptor szelektív opioid agonistáról (UFP-S12) megállapítottuk, hogy in vivo akut kezelésben alkalmazva antidepresszáns hatású. Krónikus adagolásánál sem figyelhető meg tolerancia kialakulása. Biokémiailag jellemeztük a munkacsoport által szintetizált endomorfin peptidomimetikumokat (Aba-Gly és spiroAba-Gly származékok). A konformációsan gátolt szerkezetek egyike, a Tyr-spiro-R-Aba-Gly-Phe-NH2 tetrapeptid a természetes endomorfinokhoz közelítő affinitást és szelektivitást mutatott (hatásmegőrzés), másodlagos szerkezetében a β-turn konformáció dominált. Receptor-receptor kölcsönhatások in vitro vizsgálataival kimutattuk, hogy a vanilloid (TRPV1) receptor agonista kapszaicin indirekt módon gátolja az opioid agonista peptidek kötődését és G-fehérje aktivációját. A kapszaicin gátló hatása a mű-opioid receptorok (MOR) természetes agonistáira, az endomorfinokra volt a legkifejezettebb. Igazoltuk, hogy az endokannabinoid noladin éter, valamint a CB2 kannabisz-receptor agonista SR144528 gátolják a műopioid receptor (MOR) szignál transzdukcióját vad típusú és CB1 receptor-hiányos transzgenikus egértörzsekben.

17

ÉVES JELENTÉS•2008 Receptor-kötési és G-fehérje aktivációs in vitro kísérletekben jellemeztünk két, az emlősökben ismeretlen új enkefalin származékot, az Ile-enkefalint és a Phe-enkefalint. Bioinformatikai adatok alapján az Ile-enkefalin több halfajban és a Xenopus laevis békában, míg a Phe-enkefalin az afrikai tüdőshalban fordul elő. A gerinces neuropeptidek összehasonlító vizsgálata hatástani és evolúciós szempontokból is indokolt. Eredményeink alapján olyan módosított szerkezetű delta-agonista peptideket lehet előállítani, amelyek hatásosan befolyásolják a μ-agonisták farmakológiai hatását és késleltetik a tolerancia kialakulását. További lépések Elméleti alapkutatások az opioid peptidek és receptoraik kölcsönhatásának megértésére. 6. Klaszter: Munkacsoportvezető:

Az enterális idegrendszer, a „brain-gut axis” vizsgálata. Projektvezető: Dr. Lonovics János Dr. Izbéki Ferenc

Elvégzett tevékenység (fontosabb eredmények) Megállapítottuk, hogy asztmás betegekben a nyelőcső savérzékenysége fokozott, és gyakoribb a magasra terjedő kóros savas reflux, amely az esophago-bronchiális reflex révén alapvetően hozzájárul az asztmás tünetekhez. Meghatároztuk asztmás betegeinkben magasra terjedő kóros savas reflux gyakoriságát és a kétcsatornás nyelőcső pHmetria diagnosztikus értékét. Ezek az eredmények hozzájárultak a proton pumpa gátlók légúti szövődménnyel járó reflux-betegségben történő hazai gasztroenterológiai-pulmonológiai terápiás konszenzus megfogalmazásához. A nyelőcsőben igazoltuk azt a diszfunkciót, amelynek következtében a tartós savas és epés regurgitáció hámátalakulást, daganatmegelőző állapotot (Barrett-nyelőcső) okoz. A metapláziás hám malignus transzformációjában COX-2 szerepe ismert. Jelen vizsgálatainkkal a metapláziás hám heterogenitását mutattuk ki és a Barrett-metaplázia COX-2 pozitivitásának mértéke korrelált az éjszakai epés és savas reflux súlyosságával. Jelenleg folynak azok a klinikai kutatásaink, amelyek vizsgálják az aszpirinnel kiegészített intenzív savgátló kezelés preventív hatását a Barrett-nyelőcsöves betegeinkben. Korábbi vizsgálatok a Barrett-nyelőcsöves betegekben súlyosabb nyelőcső diszmotilitást közöltek, mint a refluxbetegség nem szövődményes formáiban. Barrett-metapláziás betegeinkben az epehólyag diszmotilitását, és ennek funkcionális következményeként az epekövesség gyakoribb előfordulását mutattuk ki. Eredményeink alapján az epekövesség megelőzésének és/vagy kezelésének kérdése eddig nem ismert speciális terápiás szempontként merül fel a Barrett-nyelőcsöves betegcsoportban. Korábbi munkánkban az autonóm idegrendszeri szövődménnyel társuló 1-es típusú cukorbetegekben a gasztrointesztinális diszmotilitás jelentős regionális különbségét mutattuk ki. Ebből kiindulva streptozotocin indukált diabéteszes állatmodellben kimutattuk, hogy a diabeteszes motilitás zavarok kialakulásában a nitrerg neuronok károsodása jelentős regionális különbséget mutat, valamint, hogy ez a neuron vesztés korai inzulinkezeléssel csak a vastagbélben védhető ki. Az eredmények arra utalnak, hogy a diabeteszes vékonybél motilitás zavarok patogenezisében nem csak az inzulin hiány játszik szerepet; a mechanizmus és a kezelés lehetőségeinek tisztázása további, jelenleg folyamatban lévő kutatásaink tárgya. A hasmenéssel járó irritábilis bélbetegségben (IBS-D) kimutattuk a luminális PAR-2 aktiváló faktorok patogenetikai szerepét. További izotópos klinikai vizsgálatainkkal korrelációt találtunk az IBS-D betegeink fokozott bélpermeábilitása és a tünetek között. Ezekből az eredményekből kiindulva jelenleg folynak azok a további experimentális és klinikai vizsgálatok, amelyek célja az IBS-D betegek kezelésében a proteáz inhibitorok és probiotikumok terápiás hasznának tisztázása.

18


3. ALPROGRAM Neurodegeneratív kórképek patomechanizmusa: neuroprotektív hatású farmakonok fejlesztése. Projektvezető: Dr. Vécsei László Résztvevők: Szegedi Tudományegyetem, MTA-SZBK, Lipidart Kft. Az alprogram célja Nem minden neurodegeneratív betegség vezethető vissza kóros fehérjeaggregációra. Ilyen pl. a migrén. Magyarországon közel 1 millió migrénes beteg van, ezek egy részében MRI segítségével jól észlelhető az agy neurodegeneratív elváltozása. A neurodegenerációs folyamatok elindításában döntő szerepet játszik az agyi erek állapota, a központi idegrendszer sejtjeinek oxigén- és glükózellátása. Oxigénhiány esetén nagy mennyiségű reaktív oxigén szabad gyök (ROS) és peroxinitrit keletkezik, ez ellen védekezni kell. A sejtet ért stresszhatások és a fehérjék denaturációja ellen hosszú időn át jó védelmet nyújtanak a hősokk-fehérjék v. chaperonok (HSP), ezek szelektív induktorai hatásos gyógyszerek lehetnek a neurodegeneráció ellen. A szervezetben vannak saját termelődésű kismolekulájú neuroprotektív anyagok (pl. kinurénsav) is, amelyek vér-agy gáton áthaladó származékai általánosan elfogadott gyógyszerjelölt vegyületek. Az alprogram fő célja a neurodegeneratív kórképek patomechanizmusának felderítése és új típusú (hősokkfehérje-induktor, ill. kinurénsav-származék) neuroprotektív farmakonok kifejlesztése. 7. Klaszter:

Kinurénsav származékok mint gyógyszerek. Neuroprotekció a reduktív stressz befolyásolásával Projektvezető: Dr. Vécsei László Munkacsoportvezetők: Dr. Fülöp Ferenc, Dr. Toldi József, Dr. Boros Mihály

Elvégzett tevékenység (fontosabb eredmények) Az előző munkaszakaszokban szintetizált kinurénsav molekulába többlépéses szintézissel tercier nitrogén atomot tartalmazó oldalláncot építettünk be. Az így nyert kinurénsav-amidok hidroklorid sói jó vízoldékonyságúak. A kidolgozott szintézisút alkalmazásával több kinurénsav-származékot (SZR/72: SZR/81, SZR/91) szintetizáltunk és küldtünk farmakológiai vizsgálatra, ezeket a vegyületeket szabadalmaztattuk. Bebizonyítottuk, hogy a kinurénsav kis dózisban (200-250 nM) facilitáló, nagyobb dózisban (mikromoláris tartomány) gátló hatású a hippocampus aktivitásra. A kinurenin perifériás adása csökkentette kísérletes ischemiás modellben patkányok hippocampusában a patológiás hisztológiai és elektrofiziológiai eltéréseket. Patkány agykérgében a kinurenin az ischemia kiváltását követően is protektív hatást fejtett ki. Ez az első hisztológiai bizonyíték arra, hogy az L-kinurenin neuroprotektív hatású a globális ischemiás modellben a ischemiát követő adás esetén is. A pentiléntetrazol-indukálta hippocampális aktivitás gátolható az L-kinurenin kinurénsavvá történő metabolizmusával in vitro rendszerben. A kinurénsav analóg SZR-72 gátolta a nitroglicerin-indukálta c-fos immunreaktivitás növekedést (migrén modell). A migrénben hatékony farmakon fejlesztésének irányába kell elindulnunk, ezt az anyagot használva vezérmolekulaként. A kinurénsav kísérletes colon obstrukciós modellben gátolta az intestinális hipermotilitást és xanthin-oxidáz aktivitást. Ez felveti ilyen irányú farmakon fejlesztési program gondolatát. További lépések Három különböző irányú gyógyszerjelölt-vegyület fejlesztést kezdünk el: 1, Folytatjuk a szabadalmilag védett SZR-72 vegyületünk neuroprotektív hatásának vizsgálatát a Huntingtonkór transzgén egérmodelljében és az amiotróf laterális szklerózis két SOD1 mutáns transzgén egérmodelljén. Az említett két neurodegeneratív betegségnek jelenleg egyáltalán nincs gyógyszere és ez nagyon jó gyógyszerfejlesztési lehetőségeket ígér.

19

ÉVES JELENTÉS•2008 2, Mivel a szabadalmazott SZR-72 vegyület gátolja a nitroglicerin-indukálta c-fos immunreaktivitás növekedést, elkezdjük egy új, a migrénben hatékony gyógyszerjelölt vegyület fejlesztését. 3, A kinurénsav gátolja a kísérletes vastagbél obstrukciós modellben a hipermotilitást és a xantin-oxidáz aktivitást. Ez a felismerés is új gyógyszerjelölt-fejlesztést ígér. 8. Klaszter: Munkacsoportvezető:

Szelektív stresszfehérje-indukáló gyógyszerhatású vegyületek. Projektvezető: Dr. Vígh László Dr. Sántha Miklós

Elvégzett tevékenység (fontosabb eredmények) Folytattuk a neurodegeneratív betegségek modellezésére általánosan elfogadott poliQ35 fehérjét expresszáló C. elegans vonalon az előző évben hatékonynak bizonyult vegyület hatásvizsgálatát. Meghatároztuk az aktív vegyület optimális kezelési dózisát és validált HPLC-MS-MS módszerrel bizonyítottuk, hogy a molekula tényleges szöveti koncentrációja az alsó mikromoláris tartományba esik. Ez megfelel egy potenciális gyógyszervegyülettel szemben támasztott követelménynek. A paralízis mértékét jelző motilitási index jelentős javulását tapasztaltuk felnőtt nematódákon még fiatal felnőttkorban megkezdett kezelés esetén is, a fluoreszcens mikroszkópiás mérések pedig a betegség kialakulásáért felelős aggregátumok számának csökkenését mutatták. Hősokkfehérje-indukciós kísérletekben a kiválasztott vegyület - hősokkal együtt alkalmazva - egy olyan kis mólsúlyú hősokkfehérje jelentős koindukcióját eredményezte, amelynek C. elegansban bizonyított szerepe van az élettartam szabályozásában. Ultraszenzitív fluoreszcencia mikroszkópiával kimutattuk, hogy a kiválasztott vegyületek HSP indukciós hatása jól korrelál a molekulák raft stabilizáló hatásával. A nagy áteresztő képességű, legkorszerűbb tömespektrometriára épülő lipidomikai módszer hazai fejlesztése során kidolgoztunk egy nagy érzékenységű szfingolipidomikai eszköztárat, valamint tovább bővítettük hiperszenzitív GCMS módszerünket. A fentiekben ismertetett C. elegans eredményeken túl több új stressz szignál útvonalat azonosítottunk, így a szfingolipid–ceramid rendszer mikrodoméneken kifejtett hatását, valamint egy új foszfolipáz C-ből induló diacilglicerol –monoacilglicerol–arachidonsav kaszkádot. A fenti alapvető eredményeink által lehetővé vált az általunk fejleszett gyógyszerjelölt molekulák specifikus membránhatásainak biokémiai-biofizikai elemzése. 2007-ben megalakult egy új spin-off vállalkozásunk, a LipidArt Kft. A vállalkozás célja olyan új típusú gyógyszerjelölt vegyületek kifejlesztése, amelyek „finomhangolják” a membránok mikrodomén szerkezetét és szelektív módon modulálják a sejtnek a stresszre adott válaszát, elkezdtük egy saját fejlesztésű, elsősorban neuroprotektív hatásúnak tervezett vegyületcsoport első tagjainak (LA 101, LA 1011) preklinikai vizsgálatát. Az említett vegyületek szelektív stresszfehérje-induktorok, már igen kis koncentrációban hatásosak, in vitro tesztben neuroprotektív hatásúak és nem toxikusak. Az LA 1011 vegyületet 6 hónapon át 10 mg/ttkg dózisban adtuk APPxPS1 kettős mutáns transzgén egérnek (Alzheimer-kór modell). A neuroprotektív hatás értékelése (Morris-vízlabirintus kísérletek a tanulás és memóriarögzítés mérésére, hisztológiai vizsgálatok) most folyik. Állatkísérletekkel sikerült bizonyítani, hogy a Hsp27 fehérje neuroprotektív hatású. A humán Hsp27 fehérje neuroprotektív hatását olyan transzgenikus egereken vizsgáltuk, amelyek a Hsp27 fehérjét túltermelték. Elsőként az akut alkohol adagolás káros hatását vizsgáltuk. A transzgenikus, illetve vad típusú egerek 2 g/ttkg etanol injekciót kaptak intraperitoneálisan. Az alkohol neuronokra kifejtett károsító hatását viselkedési tesztekkel vizsgáltuk. Ötféle mozgáskoordinációs tesztet végeztünk (swimming-test, staircase test, inverted screen, footprint analysis and raised-beam task), ezek közül háromban tapasztaltunk szignifikáns különbséget a transzgenikus és vad típusú egerek teljesítménye között. Az inverted screen (fordított rács) tesztben a vad típusú egerek közel 100% nem tudott visszafordulni csüngő helyzetből, a transzgenikus csoportban viszont ez az arány 50% volt (p=0,00029). A beam-walking teszt során a vad típusú egerek mintegy 80%-a leesett a rúdról alkohol adagolás után, a Hsp27 transzgenikus egereknek csak az 50%-a (p=0,03139). A footprint analízisben ugyancsak szignifikáns különbséget találtunk a lépések hosszúságában a transzgenikus és a vad típusú csoportok között (p=0,00224 az elülső lábak távolságában, és p=0,0000056 a hátulsó lábak távolságában). Az etanol hosszú távú idegsejtkárosító hatásának vizsgálatához az egerek 4 napig 10%-os, újabb 4 napig 15%-os, majd 5 héten keresztül 20%-os etanolt kaptak víz helyett. Az elhalt idegsejteket agymetszetek Fluoro-Jade festésével tettük láthatóvá. Azt találtuk, hogy a Hsp27 fehérjét túltermelő transzgenikus egyedek mintáiban szignifikánsan kevesebb idegsejt károsodott az etanol hatására, mint a vad típusú egyedekben.

20

ÉVES JELENTÉS•2008 A szorongásos betegségek gyógyszereinek kutatására új transzgenikus egérmodellt dolgoztunk ki. Irodalmi adatok szerint egy extracelluláris mátrix fehérje, a biglycan neurotróf hatással rendelkezik és intracerebrálisan bejuttatva fokozza a tanulási és emlékezési funkciókat. Az elmúlt év során előállitottunk, olyan transzgenikus egereket, amelyek a biglycánt termelik túl. Különböző viselkedésvizsgálatokkal (Morris water-maze, Y-maze, Porsolt forced swim test) megállapitottuk, hogy a túltermelt biglycan fehérje nem befolyásolja a tanulás és emlékezés folyamatát az agyban. Meglepetésünkre azonban a biglycan transzgenikus egereink fokozott szorongást mutattak open-field, dark-light transition és elevated plus-maze viselkedési tesztekben. Hippokampális agymetszeteken végzett elektrofiziológiai vizsgálatokkal megállapítottuk, hogy amíg a hosszútávú emlékezés épen marad a biglycan transzgenikus egerekben, a preszinaptikus ingerületvezetésben viszont zavarok mutatkoznak. Kvantitativ real-time RT-PCR-rel kimutattuk, hogy a transzgenikus egerek agyában a szerotonin receptor 1A és a brain-derived neurotrophic factor (BDNF) mRNS szintje jelentősen lecsökkent, a MAO-A mRNS szintje pedig számottevően megemelkedett. Q-PCR eredményeinket ezen fehérjék immunhisztokémia vizsgálataival is megerősitettük. A szorongás általunk kifejlesztett egérmodellje lehetővé teszi a szorongás létrejöttének beható biokémia, molekuláris biológiai és elektrofiziológiai vizsgálatát. Állatmodellünk legnagyobb jelentőségét az adja, hogy különféle gyógyszermolekulák kipróbálására nyújt lehetőséget, ezáltal hozzájárulván egy új és hatékony terápia kidolgozásához. További lépések Legfontosabb feladatunk az in vitro neuroprotektívnek bizonyult Lipidart LA 1011 Hsp-induktor vegyület további preklinikai vizsgálata, a vegyületcsalád szabadalmaztatása. Egy német gyógyszergyár érdeklődik a vegyületcsalád iránt, velük folyamatosan tartjuk a kapcsolatot. Másik feladatunk a JSW Hungary termékeként a humán biglikántúltermelő transzgén egértörzs alkalmazása a szorongás állatmodelljeként és forgalmazása. Az EGIS érdeklődik az általunk kifejlesztett egértörzs iránt, mert ez lehetővé teszi a szorongást befolyásoló gyógyszerjelölt molekulák újszerű in vivo tesztelését, a szorongás létrejöttének beható biokémiai, molekuláris biológiai és elektrofiziológiai vizsgálatát. 9. Klaszter:

A neurodegeneráció és neuroprotekció alapjai. Projektvezető: Dr. Párducz Árpád Munkacsoportvezetők: Dr. Jancsó Gábor, Dr. Bari Ferenc, Dr. Tamás Gábor

Elvégzett tevékenység (fontosabb eredmények) Tovább folytattuk a neuroszteroidok vizsgálatát új neuroprotekciós mechanizmusok felismerése céljából. Korábbi vizsgálataink szerint a reaktív gliózis egyik modelljében egy természetesen termelődő neuroszteroid, a dehidroepiandroszteron (DHEA) jelentős mértékben csökkenti a gliális savas fehérje (GFAP) expresszióját. Ez a hatás valószínűleg annak köszönhető, hogy a DHEA ösztrogénné alakul át az aromatáz, vagy más néven ösztrogénszintetáz, [P450aro, mikroszómális P450 (EC. 1.14.14.1)] enzim segítségével, ugyanis aromatáz gátló jelenlétében a természetes DHEA nem befolyásolja a fokozott GFAP termelődést. Jelen kísérleteinkben egy új, szintetikus DHEA származék, a 16α-jódmetil-13α-dehidroepiandroszteron (16αjódmetil-13α-DHEA) biológiai hatását vizsgáltuk meg egy reaktív gliózis modellben, valamint összehasonlítottuk a természetes DHEA és az új, szintetikus DHEA származék térszerkezetét. Ami a biológiai hatást illeti, önmagában adva a 16α-jódmetil-13α-DHEA a természetes DHEA hatásától eltérően nem csökkentette a megnövekedett GFAP expressziót. Viszont, figyelemre méltó módon, amennyiben az aromatáz gátló letrazollal együtt adtuk be a szintetikus DHEA származékot, jelentősen csökkent a reaktív gliózis miatt megfigyelhető fokozott GFAP expresszió. Valószínű, hogy a 16α-jódmetil-13α-DHEA alkalmazható a reaktív gliózisban bekövetkező fokozott GFAP termelődés csökkentésére a természetes DHEA helyett abban az esetben, ha aromatáz gátlás miatt a DHEA hatástalan. A térszerkezeti hasonlóság miatt az is feltételezhető, hogy ha a 16α-jódmetil-13α-DHEA-t önmagában, azaz specifikus aromatáz gátló nélkül adjuk, a vegyület biológiai hatása a formesztánéhoz és az exemesztánéhoz hasonló. A glükozil-ceramiddal végzett vizsgálataink eredményei új lehetőségeket nyitnak meg a neurodegenerációs folyamatok befolyásolására. Korábbi munkánk során kimutattuk, hogy a modellként alkalmazott sejtkultúrába vitt elsődleges érző neuronok vanilloid érzékenységét és capsaicin által kiváltott degenerációját a neuronális gangliozid-szint

21

ÉVES JELENTÉS•2008 jelentősen modulálja. Kimutattuk, hogy a gangliozidok szintézisében kulcsszerepet játszó glükozil ceramid-szintáz gátlását követően jelentősen csökken a TRPV1 receptor aktiválhatósága és a neuronok TRPV1 immunreaktivitása. Újabb vizsgálatainkban karakterizáltuk az érintett érző neuronok neurokémiailag különböző populációit, és megállapítottuk, hogy a glükozil ceramid-szintáz gátlása nem befolyásolja a neuronok izolektin IB4 és peptid (calcitonin gén relációs peptid, CGRP) expresszióját. Kimutattuk, hogy a glükozil ceramid-szintáz gátlását követő funkcionális változások reverzibilisek. Az eredmények azt bizonyítják, hogy a glükozil ceramid-szintáz gátlása szelektíven befolyásolja a degeneráció kiváltásáért felelős celluláris mechanizmusokat. Új neuroprotektív stratégiát próbáltunk ki a kálium-csatornákra ható szerek in vitro és in vivo vizsgálatával. A neurodegeneráció tanulmányozására az idegsejt és környezet által alkotott neurovaszkuláris egységben kell gondolkozni. Eddigi kísérleteink igazolták a káliumcsatorna-nyitó molekuláknak a neurovaszkuláris egységre gyakorolt protektív hatását. Az ATP-szenzitív káliumcsatorna-nyitó diazoxid nemcsak az agykérgi neurovaszkuláris funkciót védi meg iszkémia/reperfúziót követően, hanem az excitotoxikus mechanizmussal károsított retina idegsejtekre is protektív hatású. Az Ca2+-szenzitív káliumcsatorna-nyitó NS1619 is neuroprotektív, azonban a hatás független lehet a káliumcsatorna-nyitó hatástól. A korábban vizsgált, hiperkapniával kiváltott vazodilatáció mellett, újabb kísérleti eredményeink szerint az acetazolamiddal kiváltott vazodilatáció is alkalmas az iszkémia/reperfúzió során károsodó endotél-függő érreaktivitás vizsgálatára, a káliumcsatona-nyitók protektív hatásának megfigyelésére. Kísérleti eredményeink szerint azonban az agyi endotél károsodás mechanizmusában excitotoxikus mechanizmusok nem vesznek részt. A szakirodalomban elsőként sikerült megvizsgálnunk az emberi agy azonosított neuronjai közötti kapcsolatokat. Vizsgálatainkhoz felnőtt emberi agykéregből származó agyszeleteket vizsgáltunk szimultán többszörös patch clamp technikával. D. Hebb elmélete szerint a memória megfelelő sorrendben aktiválódó idegsejt láncolatok formájában tárolódik. Bizonyítottuk, hogy az emberi agykéregben a Hebb-féle aktív idegsejt láncok valóban előfordulnak, ráadásul a tárolt memóriaegységek „kiolvasását” egyetlen emberi idegsejt működése is elindíthatja. Érdekes, hogy egyetlen sejt hatására ilyen eseményláncolatokat kísérleti állatokban még nem figyeltek meg. Korábbi eredményeinkhez (Szabadics et al. Science, 2006) is kapcsolódik a kutatás: az emberi kandelábersejtek serkentő működése szükséges a Hebb-féle memóriaegységek felépítésében. Felderítettük az emberi Hebb-féle láncolatok működési mechanizmusát is: a láncolatszerű hálózati aktivitás során a glutamáterg és GABAerg szinapszisok óramű pontossággal, felváltva, oszcillációs ciklus alapján működnek. Eredményeink nyomán nagy időbeli felbontással rendelkező optikai képalkotó eljárásokkal kombinált elektrofiziológiai kísérletekkel elkezdhetjük olvasni az idegi kód „betűit”, amelyek az emberi agykéregben úgy tűnik, tízszer olyan hosszú „szavakká” képesek összeállni, mint amit a kísérleti állatokban eddig megfigyeltek. További lépések Az eddigi elméleti kutatási eredmények (neuroszteroidok alkalmazhatósága a neuroprotekcióban, a glükozil-ceramid szerepe a neurodegenerációban, a kálium-csatornákra ható vegyületek protektív hatása a neurovaszkuláris egységre) alapján új gyógyszerfejlesztési irányokat érdemes elindítani. Az emberi agy, pontosabban a memóriaegységek szerepének megértése alapot adhat a neuroprotektív gyógyszerek racionális tervezésére. 10. Klaszter:

Oxidatív stressz ellenes anyagok. Projektvezető: Dr. Ferdinándy Péter

Elvégzett tevékenység (fontosabb eredmények) Az oxidatív stressz és stressz adaptáció biokémiai hátterének tisztázására megvizsgáltuk a matrix metalloproteinázok oxidatív aktiválódását. Kidolgoztuk az NO és szuperoxid reakciójából keletkező peroxinitrit markereinek és a peroxinitrit scavengerek screen módszereit. A következő konkrét eredményeink születtek: • A szenzoros neuronok szerepét, az oxidatív és nitrozatív stresszre kifejett hatását vizsgáltuk a szívben, melynek kapcsán számos új megfigyelést tettünk. Megállapítottuk, hogy a szívben lévő kapszaicin-érzékeny szenzoros neuronok fiziológiás működése a az alap peroxinitrit képződést fenntartja, és ezáltal a szarkoplazmás retikulum CaATP-áz S-nitrozilációján keresztül szabályozza a szívizom relaxációját. A megfigyelésnek igen nagy jelentősége lehet a számos betegséghez kapcsolódó szenzoros neuropátia kezelésében.

22

ÉVES JELENTÉS•2008 •

Elvégeztük az MTA SZBK kutatócsoportja (Sántha Miklós) által kidolgozott neurodegenratív állatmodell, az ApoB100 transzgén állatok karakterizálását. Az ApoB100 transzgén súlyos neurodegenerációt vált ki egerekben.

További lépések A szenzoros neuropátia kezelésében szerepet kaphat az oxidatív és nitrozatív stresszel kapcsolatos alapkutatási eredményünk. 11. Klaszter:

Őssejtkutatás. Projektvezető: Dr. Gulya Károly

Elvégzett tevékenység (fontosabb eredmények) Célunk egy olyan in vitro rendszer vagy in vivo állatmodell kifejlesztése és tesztelése, amelyben felnőtt patkányok in vitro kezelt őssejtjeit autológ transzplantáció révén terápiás célból juttatjuk az in vitro fenntartott szövetszeletekre, illetve injektáljuk a központi idegrendszer ép vagy kísérletesen károsított részeibe. Eredményeink szerint két olyan protokoll is van, amellyel az őssejtszármazékok 10-15%-a 1 hónappal a lefagyasztás után feléleszthető. Ez az arány (más lefagyasztott sejtek felélesztésénél mérhető arányhoz viszonyítva) jónak mondható (primer hippocampális neuronkultúrában kb. 30%, fibroblaszt-kultúrában kb. 50%). Kísérleteink másik részében a különböző neurotrófokkal ex vivo kezelt őssejtszármazékokat mechanikailag károsított patkány retinákba vagy a saporinnal lézionált nucleus basalis magnocellularisba (nBM) injektáltuk vissza. A neuroektoderma felé differenciálódó sejtek a retina minden rétegébe integrálódtak. Bár a legtöbb sejt a mélyebb rétegekben volt megfigyelhető, sokan a ganglionsejtek rétegébe és a sugártestbe reintegrálódtak. Megállapítottuk, hogy az ex vivo kezelt neuroszféra sejtek a károsított agyba is reintegrálódnak. Az EGF vagy az NGF kezelés nagyszámú őssejtszármazék települését eredményezi a saporinnal lézionált nBM célszövetbe, s e sejtek egy részére a korai posztnatális neuronok fenotípusa a jellemző (Tuc-4 fenotípus). Megállapítottuk, hogy a nBM-ba visszatelepülő neuroszféra eredetü sejtek 12%-a kolinerg fenotípust mutat 2 héttel a reintegráció után. A ChAT pozitív sejtek megjelenése a nBM területén a kérgi kolinerg reinnerváció részleges reaktivációját eredményezheti. A korábban kifejleszett hippocampális szövetszelet-preparátumunk felhasználásával kimutattuk, hogy a szeletek 9 napos tenyésztése során jellegzetes neurodegenerációs folyamatok alakulnak ki, amelyeket az érintett rétegekben mikroglia aktiváció is követ. A Karolinska Intézettel együttműködésben tovább vizsgáltuk az Alzheimer-kóros és öregkori normál agyak jellegzetességeit a teljes agy vagy agyi hemiszfériumok immunohisztoblotjai alapján. A NeuN, a HLA, Iba1 és a GFAP antigének ezzel a módszerrel történő vizsgálatával áttekintő képet kapunk a neuronok, a mikroglia és az asztrociák teljes agyban megfigyelhető eloszlásáról. További lépések További célunk az őssejt terápia gyakorlati célú alkalmazása neurodegeneratív folyamatokban. 4. ALPROGRAM Neuroproteomikai centrum létrehozása, Pszichiátriai betegségek funcionális genomikája, proteomikája, célfehérjék kijelölése Projektvezetők: Dr. Janka Zoltán, Dr. Janáky Tamás Résztvevők: Szegedi Tudományegyetem, ELTE, MTA-SZBK, MTA-TKI, Kromat Kft., DABIC Kht. Az alprogram célja A pszichiátriai betegségek (szorongás, depresszió) az idegrendszeri betegségek jelentős részét teszik ki. Ennek az alprogramnak a célja elsősorban a pszichiátriai, másodsorban a neurodegeneratív betegségek

23

ÉVES JELENTÉS•2008 patomechanizmusának kutatása. Fő kutatási irányunk a sejtek molekuláris áthangolódásának, a proteoma változásainak kvantitatív vizsgálata, a proteom megváltozása emberi beteganyagon (pl. öngyilkosok agyának vizsgálata), ill. a betegségek állatmodelljeiben. A proteomikai vizsgálatokat lehetőség szerint kiegészítjük genomikai vizsgálatokkal is, megpróbálva összehasonlítani a génexpresszió és a proteom változások eredményeit. Az elmúlt évek során kiépítettük a Neuroproteomikai Centrumot, amely 3 laboratórium szoros kooperációjában valósult meg. A Centrum képes valamennyi magyarországi neurobiológiai igény kielégítésére. 12. Klaszter:

Neuroproteomikai centrum létrehozása, Pszichiátriai betegségek funcionális genomikája, proteomikája, célfehérjék kijelölése Projektvezetők: Dr. Janka Zoltán, Dr. Janáky Tamás Munkacsoportvezetők: Dr. Medzihradszky Katalin, Dr. Puskás László, Dr. Juhász Gábor, Dr. Palkovits Miklós, Dr. Telegdy Gyula, Dr. Kovács Kornél

Elvégzett tevékenység (fontosabb eredmények) 1, Módszerbeállítás: Különböző alomból származó egerek agyi proteomjának összehasonlítása Ahhoz, hogy egy kísérletből értékelhető eredményt lehessen kapni, a kísérletet jól meg kell tervezni. Vonatkozik ez a kísérlet minden lépésére, így a farmakológiai és élettani vizsgálatoknál az állatok kiválasztására. Az egyes állatfajok egyedei között nagy fenotípusbeli eltérések lehetnek. (Ez természetesen vonatkozik az emberi faj egyedeire is.) A kísérleti állatokat ezért úgy kell összeválogatni, hogy az egyedek közötti különbség lehetőleg kisebb legyen, mint a várt elváltozás (pl. a normál és kóros állatok közötti eltérés). Hogy ez valóban így van-e az agyi proteom szintjén, összehasonlítottuk 6 azonos alomból és hat különböző alomból származó egér agyi fehérjeösszetételét 2 dimenziós poliakrilamid- gélelektroforézissel. A gélképek statisztikai elemzése szerint 53 fehérje expressziójában volt szignifikáns különbség a két csoport között, de a különbség egyszer sem haladta meg a kétszeres változást (leggyakoribb küszöbérték). A főkomponens analízis azt mutatta, hogy az egy alomból származó egerek agyi fehérjeprofilja nagyon hasonló, míg a különböző alomból származó egereké jelentősen eltérő. Eredményeinkből azt a következtetést lehet levonni, hogy amennyiben lehetséges, a vizsgálati állatokat egy alomból kell kiállítani, ill. a kezelés hatására bekövetkező változás küszöbértékeit úgy kell megválasztani, hogy az tényleg a beavatkozás, s ne az egyedi variancia hatását tükrözze. 2, Membránfehérjék és foszforilált fehérjék elválasztása kétdimenziós gélelektroforézissel Az idegrendszer jelátviteli folyamataiban szerepet játszó receptorok nagy része membrán kötött fehérje, míg a jelátvitel sok esetben a fehérjék foszforilációján keresztül valósul meg. Ebben az évben membrán fehérjék és foszforilált fehérjék elválasztására szolgáló módszereket fejlesztettünk és optimalizáltunk. A membrán fehérjék esetében különböző pozitívan töltött detergenseket teszteltünk az első dimenzióban történő elválasztásukhoz, míg második dimenzióban a régóta használt Na-dodecil-szulfátot alkalmaztuk. Legjobb felbontást a 16-benzildimetil-n-hexadecilammónium klorid nevű detergenssel alkalmazásával tudtunk elérni. A foszforilált fehérjék dúsításához 4 cég foszfoprotein dúsító kittjét teszteltük. A kittek közül messze a legjobb eredményt a Qiagen termékével tudtuk elérni. Az ezzel a kittel feldúsított fehérjéket 2 dimenziós elektroforézis segítségével választottuk el. 3, Fehérjék relatív mennyiségi meghatározása gélelektroforézist követően A proteomikában alkalmazott leggyakoribb fehérjeelválasztási technika az 1, ill. 2 dimenziós poliakrilamid gélelektroforézis. Megfelelő festési eljárást alkalmazva mind az 1D, mind a 2D elektroforézis kvantitatívvá tehető, azaz pl. két minta fehérjeösszetétele összehasonlítható a megfestett sávok, ill. foltok intenzitásainak összevetésével. A sejtek, szövetek több tízezer fehérjét is tartalmazhatnak, azonban egy 20x20 cm gélen csak mintegy 1-3000 foltot lehet vizualizálni, mert „csak” ekkora a gél felbontóképessége, ill. kicsi a festés dinamikatartománya. Az egyes foltok fehérjéinek azonosításakor csaknem mindig azt tapasztaltuk, hogy egy foltban nemcsak

24

ÉVES JELENTÉS•2008 egy, de több fehérje is van. Így a fehérjefolt intenzitásának meghatározásából nem lehet megmondani, hogy az ott levő fehérjék közül melyik mennyisége változott. Ennek meghatározására új, ún. „jelzésmentes” kvantitatív proteomikai módszert fejlesztettünk ki. Kísérleteink során megállapítottuk, hogy a fehérjék abszolút mennyiségi meghatározása gélből nem lehetséges, mivel különböző fizikai és kémiai tulajdonságuk miatt viszszanyerésük tág határok között változik. Mindazonáltal két minta azonos foltjában lévő fehérjék mennyiségi viszonyait össze tudjuk hasonlítani, így meghatározzuk, hogy mely fehérje mennyiségének változása felelős a folt intenzitásának változásáért. Módszerünk természetesen alkalmas 1D elektroforézissel elválasztott fehérjék relatív mennyiségeinek összehasonlítására is. 4, Normál és szorongó egerek agyi fehérjeösszetételének meghatározása „shotgun” proteomikai módszerrel A „bottom up” proteomikai fehérjeazonosításnak két változata van, ezek egyike a sejt, szövet fehérjéinek elválasztása (elektroforézis, kromatográfia), az eltérő expressziójú fehérjék kiválasztása, azok hidrolízise, a képződött peptidek tömegspektrometriás analízise, majd az eredmények bioinformatikai értékelése. 2008-ban a normál és szorongó egerek agyi proteomját hasonlítottuk össze. A 2D elektroforézis során mintegy 2000 foltot detektáltunk, s ezek közül kiválasztottuk azt a 75 foltot, melynek melyek intenzitásában különbséget találtunk a két csoport között. Ezután 75 hidrolízis és 75 MS analízis következett. Le akartuk rövidíteni ezt a munkafolyamatot, s a másik proteomikai módszerrel, az ún. „shotgun” eljárással is elvégeztük a normál és szorongó egerek agyi proteomjának összehasonlítását. Vizsgálatainkat kiegészítettük az ún. „bátor” egerek agyi proteomjának analízisével. A kvantitatív proteomikai mérésekhez új mintaelőkészítési módszert dolgoztunk ki, s optimalizáltuk az eljárás lépéseit. A fenti három állatcsoport mintáinak tömegspektrometriai, majd bioinformatikai analízise során 544 fehérjét azonosítottunk, s a „label-free” MS módszerrel össze is hasonlítottuk az egyes fehérjék expressziós szintjeit. Ezzel a módszerrel az egéragyban legnagyobb mennyiségben jelenlévő félezer fehérjét tudtunk analizálni. Megállapítottuk, hogy a közülük 48 mennyisége magasabb, 23 mennyisége alacsonyabb a szorongó egerekben, mint a vad típusban. Az előző 2D elektroforetikus módszerrel kiválasztott azon 75 fehérje közül, melyek expressiós szintje változott, 24 megtalálható volt a „shotgun” módszerrel kimutatott fehérjék között is. Bár a „shotgun” módszerrel kevesebb fehérjét lehet kimutatni, a módszer sokkal gyorsabb és olyan fehérjék (pl. membránfehérjék) is analizálhatók, melyek a 2D módszerrel nem vizsgálhatók. A két eljárás így kiegészíti egymást, s célszerű a mintákat mindkét módszerrel megvizsgálni. 5, Hippocampus és prefrontális cortex RNS microarray analízise anxietásos és vad típusú egerekben. Összesen 12 egeret vizsgáltunk az anxietásos (AX) és a vad típusú csoportból. Totál RNS-t izoláltunk az egerek prefrontális cortexéből (PTX) és hippocampusából (HIPPO), és három állatonként pooloztuk az RNSeket. A transzkriptom analízist egy Agilent microarray-vel vizsgáltuk, amely az egér transzkriptom nagy részét, mintegy 15.000 gén expresszióját képes egyszerre mérni. Mindkét agyterületen 2 RNS poolt hasonlítottunk össze az AX csoportból 2 RNS poollal a vad típusú egerekből. A megbízható microarray mérések érdekében szigorú statisztikai analízist alkalmaztunk, amely egy t-teszt cutoff-ból, egy szignál intenzitás cutoff-ból és egy fold change cutoff-ból állt. A microarray adatok validálását kvantitatív real-time PCR-el (QPCR) végeztük mintegy 80 gén esetében. QPCR méréseink validálták az array adatokat: kiemelkedő, mintegy 0,9-es korrelációt mutattunk ki a kétfajta mérés között. A szignifikánsan megváltozott gének száma hasonló volt a két agyrégióban. 41 és 47 gén volt upregulálva csak a PTX-ben illetve a HIPPO-ban, és 64 gén volt upregulálva mindkét agyrégióban. A downregulációs mintázat kissé eltért a két agyrégióban: 60 és 51 gén volt downregulálva csak a PTX-ben illetve a HIPPO-ban, és 97 gén volt downregulálva mindkét AX egér agyrégióban a kontrollhoz viszonyítva. A szignifikánsan megváltozott gének ontológiai analízise azt mutatta, hogy funkcionális csoportok, mint a biogén amin metabolizmus, dopamin metabolizmus, központi idegrendszei fejlődés szignifikánsan felül voltak reprezentálva az upregulált gének között, míg az iontranszport, foszforiláció, szinaptikus transzmisszió funkcionális csoportok szignifikánsan felül voltak reprezentálva a downregulált gének csoportjában. Több általunk azonosított génről és géncsoportról már leírták, hogy részt vesz az anxietás keletkezésésben, míg más géneket, mint pl. transthyretin, vazoaktív intesztinális polypeptid (VIP) még nem kapcsoltak az anxietáshoz. A STRING és Pathway

25

ÉVES JELENTÉS•2008 Stúdió szoftverekkel végzett gén hálózat analízisből egyértelművé vált, hogy a downregulált gének közötti funkcionális kapcsolat kifejezettebb mint az upregulált gének esetében (1 ábra A, B). További érdekes eredményünk, hogy a Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) adatbázis alapján három downregulált gén - PLC, IP3R, CamKIV- részt vesz a long term potentiation (LTP) kialakításában. Néhány, az anxietáshoz még nem kapcsolt gén további fenotípusos karakterizálása folyamatban van.

A, B, Network of genes upregulated (A) and downregulated (B) in AX mice 6, Humán depressziós suicid betegek különböző agyrégióinak génexpressziós és proteomikai elemzése Depressziós öngyilkos egyének mélyhűtve tárolt agyából (8 db) összesen 30 agymintát vettünk ki mikrodisszekcióval. Az agyminták (nucleus accumbens, NA; entorhinális kéreg, EC) post mortem stabilitásának és specificitásának igazolására ellenőrző méréseket végeztünk (urocortin, tirozin-hidroxiláz és a „latent transforming growth factor”) a génexpresszió meghatározásával. Az NA és az EC szerepe kevéssé ismert a depresszióban, ezért ezekre koncentráltunk. Ebben a munkaszakaszban a korábbi egér szorongás és depresszió modellen, illetve humán depressziós szuicid betegek agyrégióin végzett chip kísérletek eredményeinek visszaigazolása történt. A NA esetében a vizsgált 26 gén esetében 93%-s, míg az EC esetében 86%-os egyezést találtunk a korábbi chip kísérletekkel. Számos olyan, eltérő expressziós mintázatot mutató gént sikerül így kiszűrnünk, mint pl. N-ethylmaleimidesensitive factor attachment protein, glutamate decarboxylase 1, neuromedin U, melyek az idegrendszer működésében szerepet játszanak, a normálistól eltérő működésük depresszió kialakulásában fontos lehet. Öngyilkosok agyának prefrontális kérgéből illetve az amygdalából származó agymintáiból elkészült a DIGE proteomika és a különbségek megállapítása után a Centrumban meghatároztuk a leadott protein minták 95%-át. Ennek alapján az irodalmi feldolgozás és modellezés elkezdődött. Az adatok az öngyilkosokban megváltozott gliális funkciókra utaló adatokat találtunk (expresszió változások a GFAP-ban, valamint a szinaptikus vezikula dokkolásban, a dendrittövisek kialakulásában, az endocitózisban szerepet játszó proteinekben). Érdekes megfigyelés, hogy a kéreg és az amygdala protein változásai a GFAP esetében fordítottak. Az adatok Western Blottal való validálása és a fluoreszcens ECL Plex Western Blot technika beállítása most folyik. 7, Az idegsejtek proteom-változásának kvantitatív meghatározása β-amiloid 1-42 kezelés után Neuronokat kezeltünk Aβ1-42 peptid aggregátumokkal (oligomer-protofibrillum keverék) és megvizsgáltuk a fehérjeprofil változását a kezelés hatására. Összesen 11 fehérjénél találtunk szignifikáns mennyiségi változást (peroxiredoxin-1, aldehid-dehidrogén-2, prohibitin-2, ubiquinol-citokróm c reduktáz, stomatin-szerű fehérje-2, transzgelin-2, foszfoglicerinsav-kináz-1, stresszindukálta foszfoprotein-1, heterokromatin protein-1β, nukleáris klorid csatorna és heterogén nukleáris ribonukleoprotein C1/C2). A fehérjeváltozás eredményei azt mutatják, hogy az idegsejtek megpróbáltak védekezni az Aβ1-42 toxikus hatásával szemben: aktivizálódtak a sejtek túlélési mechanizmusai, megváltozott a szignál transzdukciós regulátorok szintje, az mRNS processzálása és a mitokondriumok működése is.

26


8, Együttműködő fehérjék hálózati rendszerének felépítése Elkészült a neuronális szinapszis protein-interakciós hálózata és validáltuk a modellt a SynDB szinapszis adatbázis adataival. Kiegészítettük a modellt az immunszinapszis egyes elemeivel illetve elkészült a két szinapszis összevetéséből készült átfedés és különbség hálózat is. Ezek nagyban segítenek a humán anyag minél jobb megértésében. Olyan hálózat analitikai módszereket (Page rank, personalised page rank) dolgoztunk ki, amikkel ki lehet emelni azokat a proteineket, amelyek fontos szerepet kapnak egy biológiai folyamat fehérjehálózatában. Beszereztünk újabb hálózatépítő programokat és adatbázis eléréseket. További lépések Sikerült kialakítanunk és a legmodernebb műszerekkel felszerelnünk a Neuroproteomikai Centrumot három kutatócsoport szoros együttműködésével. Ugyanabból a biológiai mintából tudunk elvégezni genomikai (génexpresszió meghatározás) és proteomikai vizsgálatokat. Számos esetben (betegségek állatmodelljei, humán agyminták elemzése) bebizonyosodott, hogy a proteoma változásai nagyon lényegesek és szignifikánsak s egy-egy új állatmodell (pl. a 30 nemzedéken át szelektált anxietásos egér) szinte már külön alfajnak tekinthető. Következő feladatunk a nagy gyógyszergyárak meggyőzése a proteomikai eredmények gyakorlati hasznosíthatóságáról. 5. ALPROGRAM Neurobiológiai betegségek diagnosztikája Projektvezető: Dr. Tóth Gábor Résztvevők: Szegedi Tudományegyetem, MTA-SZBK, Qualicont Kht., Diagnosticum Zrt., DABIC Kht. Az alprogram célja A pszichiátriai és a neurodegenerációs betegségek gyógykezelésénél döntő fontosságú a korai diagnózis. Ez még akkor is igaz, ha jelenleg sok esetben nem rendelkezünk a betegség gyógyítására alkalmas módszerekkel és eszközökkel. Az alprogram célja különböző diagnosztikumok fejlesztése volt: részben a képalkotó eljárásokhoz csatlakozva, részben új és korszerű molekuláris diagnosztikai módszerek kidolgozásával. 13. Klaszter: Neurobiológiai betegségek diagnosztikája. Projektvezető: Dr. Tóth Gábor Munkacsoportvezetők: Dr. Pávics László, Dr. Fülöp Ferenc, Dr. Welker Ervin, Dr. Dux László, Dr. Puskás László, Dr. Dombi György Elvégzett tevékenység (fontosabb eredmények) 1, *Tc- ill. 18F-jelzett peptidek tervezése és szintézise az Aβ-aggregátumok kimutatására Két olyan, kurkumint, ill. hisztidint tartalmazó hexapeptid-származékot állítottunk elő, amelyek specifikusan kötődnek a β-szerkezetű Aβ1-42 aggregátumokhoz. Ezek szerkezete a következő: O

O

O CH 2 OCH3

HO OCH 3

O H C N Lys Leu Pro Tyr Phe Asp NH 2

H N N HO O

N H

Leu Pro Tyr Phe Asp NH 2 O

27

ÉVES JELENTÉS•2008 Megpróbálkoztunk az LPYFD-amid 2 ciszteint tartalmazó analógjának (heptapeptid) 99mTc izotópos jelzésével technécium-trikarbonillel való komplex kialakításával. Az egy pozitív töltéssel bíró technécium (I)-trikarbonil komplex [99mTc(CO)3(OH2)3]+ irodalmi adatok alapján igen előnyös prekurzor számos jelzett radiofarmakon, (különösen az érzékeny biomolekulák) preparálásában. Képes enyhe reakciókörülmények között egy-, két-, és három-fogú ligandként in vivo is stabil komplexet létrehozni. A keletkezett komplex néhány óráig vizes oldatban igen jó stabilitással bír, a komplex 6 óra múlva is 95%-ban jelen van. A heptapeptid (0,5 mg) jelzését az így kapott radioaktív prekurzorral (50-300 MBq) különböző hőmérsékleten, inkubációs időben és pH mellett vizsgáltuk az optimális reakció körülmények megállapítása érdekében. A mérések eredményeiből megállapítható, hogy a jelzés jó hatásfokkal (> 95%) végbemegy 30-40 ºC-on, 15 perc alatt, enyhén savanyú pH tartományban (pH < 7). A radio-kromatogramokon ugyanakkor jól látható, hogy a jelzett peptid csúcsa nem homogén (két-három, a radio-TLC-n nem elkülöníthető csúcs is látszik). Eddig homogén radioaktív terméket adó reakció körülményeket nem sikerült kidolgoznunk, ezért egy másik jelzéssel is próbálkoztunk: a F-18 izotópos jelzés lehetővé tenné a PET-vizsgálatokat. A peptid molekulák közvetlen és szelektív fluorozása már ilyen viszonylag kis aminosavszámú struktúra esetén is technikai nehézségekbe ütközik. Ezért a 18F-jelzést úgynevezett kétfunkciós „hídligandon” keresztül valósítjuk meg a peptid általunk kiválasztott alkalmas funkciós csoportján. A választott peptid egyik végén kurkuminnal konjugált, amely a teljes szerkezet lipofil jellegét növeli, ugyanakkor lizin-oldalláncon tartalmaz egy primer aminocsoportot, amely alkalmas a 18F-ral való radioaktív nyomjelzésre. A para-[18F] fluorobenzoesavat alkalmaztuk „hídligandként”, amely egyik oldalról tartalmazza a radioaktív izotópot, másrészt viszont megfelelően aktivált karboxilcsoportján keresztül enyhe reakciókörülmények között kapcsolódható a lizin primer amino-termináljához. A para-[18F] fluorobenzoesav szintézisét ciklotronban előállított 18F-fluorid-ionból kiindulva végeztük:

A 4-[18F] flourbenzoesavval OSU aktív észterrel lehet megjelölni az Aβ-aggregátumokhoz kötődő peptidet. A reakciót az alábbi ábra mutatja:

A reakció végbemenetelét radio-TLC-vel tudtuk nyomon követni. A HPLC tisztítás során öszegyűjtött peptidfrakciók vákuumban történő bepárlása után ezzel a módszerrel 20-30 mCi jelzett peptidhez (< 90 % tisztaságú) jutottunk 3,5 óra teljes szintézisidő alatt. A gyors szintézisidő lehetővé teszi az 18F-jelzett vegyület orvosi-diagnosztikai alkalmazását PET vizsgálatokban. 2, Trodat alapú *Tc jelzett diagnosztikumok fejlesztése A pályázati munka első részében további vizsgálatok céljára megismételtük a közelmúltban sikeresen előállított technécium-99m izotóppal jelzett tropánvázas vegyületet, a [99mTc] TRODAT-1 (2) szintézisét. Grammos menynyiségben előállítottuk a TRODAT-1-gyel analóg vegyületek szintéziséhez szükséges 3 intermediert. Új módszert dolgoztunk ki a radioaktív izotóp befogadására alkalmas ligandum szintézisére.

28


11. ábra áb A 3 jelzésű intermedierből kiindulva Tóth Gábor kutatócsoportja közreműködésével a 4 és 5 izotópfogó ligandumot tartalmazó perkurzorokat állítottuk elő (2. ábra).

22. ábra 3, Prion fehérje átalakulás mechanizmusa, prion diagnosztika Poliklonális antitesteket állítunk elő a PrP fehérje rövid, 7-8 aminosavból álló peptidjeivel immunizálva csirkéket. Az antitesteket mikrotiterpléten, két különböző módon teszteltük. A/ A prion fehérjét immobilizáltuk és a polyklonális antitesteknek a fehérjéhez való kötödését vizsgáltuk. B/ Második módszerként szendvics esszét állítottunk be, amikor is az antitesteket, amelyeket az előbb ismertetett módon választottunk ki, immobilizáltuk a microtiterplaten és egy másik anti PrP antitesttel határoztuk meg a kifogott prion fehérje mennyiségét. Mindegyik peptid esetében azokat az antitesteket választottuk ki, amelyek nagyobb affinitást mutatták a rekombináns fehérjék iránt. A kiválasztott antitesteket egészséges és TSE-ében szenvedő hörcsögökből nyert agy-homogenát segítségével a prion fehérje mindkét formáján teszteltük. Az IgY antitestek felismerték a prion fehérjét mind a normál mind a fertőzött agy-homogenátumokban. Mind emellett a detektált szignál nagyságából a fertőzött agyminták esetében arra a következtetésre jutottunk, hogy az antitestek az abnormális formát csökkent mértékben, vagy egyáltalán nem ismerik fel. A kísérletet megismételtük a normális PrP proteázos emésztéssel való detektálás előtti eltávolításával a mintákból. Kísérleteink megerősítették, hogy bár az IgY antitestek a normális PrP formát felismerték, az abnormál PrP formát nem. Ez egy nagyon szignifikáns eredmény, ha figyelembe vesszük, hogy a kontrol antitest felismerte mindkét formát ugyanazokon a preparátumokon. Így összességében sikerült elérnünk a kitűzött célt és egy módszert állítottunk be a kétféle prion formán különbözőképpen megjelenő epitópok gyors azonosítására. Ez lehetővé teszi olyan antitestek kifejlesztését, amelyek specifikusan nagy érzékenységgel csak az egyik formát ismerik fel, ami nagy segítség hatékonyabb diagnosztikai módszer beállítására. 4, Neuromuszkuláris betegségek diagnosztikája Korábban kimutattuk, hogy az androgének szignifikánsan csökkentik az izomtömeget negatívan szabályozó myostatin (GDF8; growth and differentiation factor 8) protein szintjét patkány levator ani izmában. Az aktív myostatin az éretlen pro-myostatin hasításával képződik, a proteolízis nem csak a Golgi hálózatban, hanem újabb irodalmi adatok alapján extracellulárisan is történhet. Az aktív myostatin a II-es típusú activin receptorokon keresztül fejti ki hatását, gátolja az izom progenitor sejtjeinek, a szatellita sejteknek a proliferációját. A szatellita sejtek felszíni markere (syndecan-4), központi szerepet játszik az izomregenerációban. A syndecan-4 transzmembrán proteoglikán számos növekedési faktorral és extracelluláris mátrixfehérjével hat kölcsön a heparán-szulfát oldalláncain keresztül, koreceptorként funkcionál, míg a citoplazmás doménje köti és szuperaktiválja a PKC-α enzimet.

29

ÉVES JELENTÉS•2008 Kísérleteinkben patkány soleus izmának notexinnel kiváltott roncsolását követő regenerációja során a syndecan-4 expressziója és foszforilációja fokozódott a regeneráció korai szakaszában, a domináns myostatin forma pedig az éretlen pro-myostatin volt, mely a regeneráció 4-5. napján mutatta a legerősebb expressziót. A myostatin ko-immunprecipitálta a syndecan-4-et és a PKC-alfát patkány M. levator aniban, normál M. soleusban és regenerálódó M. soleus izomban. Bebizonyítottuk egy immunkomplex jelenlétét, melynek tagja a syndecan-4, a myostatin és a PKC-alfa. A syndecan-4 főként az éretlen pro-myostatinnal hat kölcsön, így szerepet játszhat az extracelluláris pro-myostatin készlet fenntartásában. A syndecan-4 immunprecipitátum heparináz emésztésével igazoltuk, hogy a syndecan-4 és a myostatin kölcsönhatása heparán–szulfát dependens. Ismert, hogy a syndecan-4 és PKC-alfa kölcsönhatását a syndecan-4 Ser183 foszforiláltsági állapota szabályozza, a foszforilálatlan forma PIP2 jelenlétében köti a PKC-alfát. Vizsgálataink során kimutattuk, hogy a syndecan-4 Ser183 foszforiláltsága nem interferál a syndecan-4 és a myostatin kölcsönhatásával. Bizonyítottuk, hogy a transzmembrán syndecan-4 köré szerveződött immunkomplexnek a myostatint kötő II-es típusú activin receptor is része. A jelenlegi kísérleteinkben immunhisztokémiai vizsgálatokkal erősítjük meg a kimutatott kölcsönhatásokat, továbbá újszülött patkányok végtagizmaiból készített primer myoblast kultúrát állítottunk be a heparán-szulfát láncoknak a myostatin jelátvitelében betöltött szerepének vizsgálatához. 5, Pszichiátriai betegségek génexpresszióra alapuló diagnosztikája A projekt fő feladata az volt, hogy egy olyan génpanelt állítsunk össze, amelyik a különböző pszichiátriai betegségekben eltérő génexpressziót mutat. Ehhez olyan módszert alkalmaztunk, amely alkalmas teljes vérből történő fehérvérsejt izolálásra, RNS kivonására. A mintákból egy ún. nanokapilláris elven működő (QRT-PCR microarray) technológiával nagyáteresztőképességű genomi, ill. génexpressziós analízist hajtottunk végre. A készülék alkalmas nagyszámú genomi DNS mintán (több alcsoportra bontva) SNP-ék analízisére TaqMan (ABI) protokollal. A SYBRGreen eljárással nagyszámú cDNS mintán egyszerre több gén kifejeződését is meg lehet vele határozni. A Transmentix és az Avidin Kft-kel együttműködésben 140 humán minta genomikai elemzését végeztük el. A minták között egészséges kontrollok, illetve különböző antipszichotikumokkal és egyéb, a pszichiátriai betegeknél használt gyógyszerekkel kezelt skizofrének, bipoláris betegek, depressziósok és személyiségzavarosok mintái szerepeltek. A kísérletbe a DNT konzorciumon belül a DABIC Kht-vel együttműködésben terveztük meg a diagnosztikai nanokapilláris chipet. Az volt a célunk, hogy az eddigi irodalmi és saját génexpressziós (elsősorban DNS-chip) eredményeink alapján olyan génpanelt állítsunk össze, amely a különböző pszichiátriai betegségben szenvedők limfocitáiban kifejeződés szinten különbségeket mutat az egészséges kontrollhoz viszonyítva. A vizsgált 48 génmarker közül 8 esetben találtunk korrelációt a pszichiátriai betegek mintáiban, de ezek közül egyetlen egy esetben sem találtunk specifikus szkizofrénia megnyilvánulást. A markerként szóbajöhető gének közül kiemelkedő az immunválasszal kapcsolatba hozható CLC, IL4, S100B és CXCL2 gének. Ez arra utal, hogy a vizsgált pszichiátriai betegségekben az immunrendszer az egészségestől eltérő működést mutat, ami génkifejeződés szintjén is jelentkezik és markerként használható. Érdekes a DNMT1 gén érintettsége (alacsonyabb génaktivitás) a pszichiátriai beteg populációban. Sikerült kimutatnunk egy előzetesen publikált gén nagyfokú korrelációját: a SELENBP1 gén erősebb kifejeződést mutat a pszichiátriai betegeknél, mint a kontroll csoportban. Ez a gén a pszichiátriai megbetegedések általános markereként fogható fel. Módszerünk nem csak a fentiekben említett betegségek, hanem más központi idegrendszeri elváltozások, gyógyszeres kezelések hatásainak predikciós markerkeresésére is alkalmas. 6, Sclerosis multiplex altípusok jellemzése a liquor NMR felvételek segítségével Sclerosis multiplex betegek liquormintáinak komplex NMR spektroszkópiai elemzését végeztük el. A 1H spektrumokban található 100-150 vonal kémiai eltolódását és intenzitását vizsgáltuk az orvosi diagnózis függvényében. Eddig 24 mintát elemeztünk. A rendelkezésre álló liquorminták kis száma nem tette lehetővé a teljes spektrum statisztikai értékelését, de lehetőség nyílt spektrumtartományok kijelölésére, melyeknél matematikai, logikai műveletekkel korrelációt lehetett megállapítani a diagnózissal. A 1H spektrumtartományokból jellegzetes metabolitok megjelenése, ill. hiánya értékelhető diagnosztikai eredményt ad. A pontosabb statisztikai elemzéshez százas mintaszám NMRspektrumának értékelése szükséges. A minták 31P spektruma nem mutatott korrelációt. A sokkal érzéketlenebb 13C spektrumok analízise folyamatban van.

30


MEGHATÁROZÓ MUNKATÁRSAK LISTÁJA Meghatározó személy Prof. Dr. Telegdy Gyula Prof. Dr. Penke Botond Prof. Dr. Benedek, György Borbély, Emõke Prof. Dr. Boros, Mihály Dr. Datki, Zsolt László Prof. Dr. Dékány, Imre Prof. Dux, László Prof. Dr. Erõs, István Prof. Dr. Falkay, György Dr. Farkas, Eszter Dr. Farkas, Tamás Prof. Dr. Ferdinándy, Péter Prof. Dr. Fülöp, Ferenc Dr. Fülöp, Lívia Prof. Dr. Gulya, Károly Dr. Horváth, Gyöngyi Hunya, Ákos Gábor Dr. Izbéki, Ferenc Dr. Janáky, Tamás Prof. Dr. Janka, Zoltán Dr. Kálmán, János Papp, Csaba Kardos, József Széll Zoltán Prof. Dr. Kiss, Tamás Prof. Dr. Kovács, Kornél Prof. Dr. Lonovics, János Dr. Martinek, Tamás Dr. Pákáski, Magdolna Prof. Dr. Szabó, Gyula Dr. Tamás, Gábor Prof. Dr. Toldi, József Dr. Deli, Mária Dr. Medzihradszky-Fölkl, Katalin Dr. Tóth, Géza Prof. Dr. Vígh, László Dr. Bogár, Ferenc Dr. Juhász, Gábor Prof. Dr. Palkovits, Miklós Péterffy, Ferencné Kiss, Orsolya Nyilas, Anita Csorba, Attila Szeliné Szomor, Judit Tubak, Vilmos Dr. Tóth-Molnár, Edit Miklósné Bódi, Edina Molnár, Imréné Tisza, Andrásné Prokes Jóvér, Anikó Dr. Sárkány, Erika

Konzorciumi tag SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE SZTE MTA SZBK MTA SZBK MTA SZBK MTA SZBK MTA TKI MTA TKI MTA TKI Diagnosticum Zrt. Diagnosticum Zrt. Diagnosticum Zrt. Kromat Kft. Kromat Kft. Creative Labor Kft. Rytmion Kft. Rytmion Kft. Rytmion Kft. Kation Európa Bt. Kation Európa Bt. QualiCont Kht.

Feladatok Konzorciumvezető Koordinátor 1-es alprogram, 3-as klaszter 1-es alprogram, 1-es klaszter 3-as alprogram, 7-es klaszter 1-es alprogram, 1-es klaszter 1-es alprogram, 1-es klaszter 5-ös alprogram, 13-as klaszter 1-es alprogram, 3-as klaszter 1-es alprogram, 3-as klaszter 1-es alprogram, 2-es klaszter 1-es alprogram, 1-es klaszter 3-as alprogram, 10-es klaszter 3-as alprogram, 7-es klaszter 1-es alprogram, 1-es klaszter 3-as alprogram, 11-es klaszter 1-es alprogram, 3-as klaszter 1-es alprogram, 1-es klaszter 2-es alprogram, 6-os klaszter 4-es alprogram, 12-es klaszter 4-es alprogram, 12-es klaszter 4-es alprogram, 12-es klaszter DNT központi adminisztráció DNT központi adminisztráció DNT központi adminisztráció 1-es alprogram, 1-es klaszter 4-es alprogram, 12-es klaszter 2-es alprogram, 6-os klaszter 1-es alprogram, 1-es klaszter 4-es alprogram, 12-es klaszter 2-es alprogram, 5-ös klaszter 3-as alprogram, 9-es klaszter 3-as alprogram, 7-es klaszter 1-es alprogram, 2-es klaszter 2-es alprogram, 5-ös klaszter 2-es alprogram, 5-ös klaszter 3-as alprogram, 8-as klaszter 1-es alprogram, 1-es klaszter 4-es alprogram, 12-es klaszter 4-es alprogram, 12-es klaszter 5-ös alprogram, 13-as klaszter 5-ös alprogram, 13-as klaszter 5-ös alprogram, 13-as klaszter 4-es alprogram, 12-es klaszter 4-es alprogram, 12-es klaszter 1-es alprogram, 1-es klaszter 3-as alprogram, 7-es klaszter 3-as alprogram, 7-es klaszter 3-as alprogram, 7-es klaszter 1-es alprogram, 1-es klaszter 1-es alprogram, 1-es klaszter 5-ös alprogram, 13-as klaszter

Ráfordított nap 100 100 30 210 120 62 11 97 56 16 172 140 32 30 180 100 82 172 31 25 10 31 320 230 230 25 40 5 90 17 25 20 84 56 10 90 56 56 42 20 80 100 100 160 225 30 125 200 60 200 200 80

31


OKTATÁSI KURZUS 2007.01.01.-2009.05.31. ITC Nemzetközti Továbbképző Tanfolyam Szegedi Biológiai Kutatóközpont, 2008. szeptember – 2009. május Speciálkollégiumok egyetemi doktoroknak és halgatók részére Pszichofiziolóia – Dr. Farkas Tamás, 2008. Molekuláris Neurobiológia – Dr. Gulya Károly Molekuláris Medicina – Dr. Gulya Károly A fájdalomérzés magatartásfarmakológiája – Dr. Horváth Gyöngyi Biológiai méréstechnikák – Dr. Juhász Gábor Bioinformatika a molekuláris biológiában – Dr. Kovács Kornél Válogatott fejezetek molekuláris biotechnológiából – Dr. Kovács Kornél Az Alzheimer-kór és sejtélettani alapjai – Dr. Penke Botond, Dr. Datki Zsolt L. Pasteur és Szent-Györgyi Albert élete és munkássága – Dr. Penke Botond, Dr. Datki Zsolt Nyomjelzéstechnika – Dr. Tóth Géza SZTE-SZAB Neurológiai Kerekasztal 2008-ban 8 alkalommal megrendezett orvostovábbképző kurzus, a legújabb kutatási eredmények bemutatásával. Szervezője Dr. Vécsei László. XL. Kromatográfiás Továbbképző Tanfolyam A tanfolyamot az évtizedes hagyományoknak megfelelően Szegeden szerveztük. A 100 résztvevő az ország valamennyi fontos egyetemi vagy ipari kutatóhelyét képviselte. A tanfolyamot Janáky Tamás (4. alprogram) és a Kromat Kft. szervezte 2008. január 26-28. között. Semmelweis Genomikai Hálózat 8/1 A proteomika modern irányzatai; fehérjehálózatok. 2008. február 6. Budapest. Dr. Penke Botond, Dr. Janáky Tamás, Dr. Juhász Gábor Oktatás, továbbképzés eredményei Programba bevont PhD hallgvatók száma: 59 TDK dolgozat 15 Szakdolgozat: 18 Tartott PhD kurzusok: 16 Megszerzett PhD fokozat: 8

32


TECHNOLÓGIA TRANSZFER Új spin-off cégek alapítása 2008. évben a DNT új spin-off céget nem alapított. Szabadalmak: Megadott szabadalmak: 1. A tápcsatorna hipermotilitással és gyulladással járó megbetegedéseinek gyógyítása kinurénsav kezeléssel P0700051-es számon – Vécsei László 2. Izatin és származékai gyógyszerként történő alkalmazása PCT/HU07/000042 – Dr. Telegdy Gyula 3. Vér-agy gát in vitro modell WO2007072953-as számon – Deli Mária Beadott szabadalmak 1. Egér szeterotaxikus készülék P0900150-es számon – Juhász Gábor 2. Mikroelektróda, dialízis mintavevő mikromozgató P0900167-es számon – Juhász Gábor 3. A kinurénsav és származékai alkalmazása fejfájás modellben P104448-as számon – Vécsei László, Boros Mihály 4. Urocortin 3 fragmensek és analógok, előállításuk és alkalmazásuk depresszió és szorongás kezelésére P0800527-as számon – Telegdy Gyula Beadott PCT szabadalom • Use of kynurenic acid and derivatives thereof in the treatment of conditions of the gastrointestinal tract accompanied by hypermotility and inflammation or gout or multiple sclerosis. (PCT/HU08/00005) – Vécsei László Termékek: • Nioszóma sorozat – Erős István • Felnőtt patkány csontvelői sejtjeinek és az azokból kialakított őssejtszármazékok lefagyasztott populációinak kereskedelmi forgalmazásra történő előállítása – Gulya Károly • Egér szeterotaxikus készülék – Juhász Gábor • Mikroelektróda, dialízis mintavevő mikromozgató – Juhász Gábor • Új szénszálas mikroelektróda kifejlesztése - Kation Bt. • Transzgenikus egértörzs (HSP27) – Sántha Miklós • Kinurénsav analógok (SZR-72, SZR-81) • Két triciált endomorfin analóg és egy tríciált nociceptin receptor ligand termékké fejlesztése (Izotóp Intézet Kft-vel való együttmüködés) Benyhe Sándor és Tóth Géza Szolgáltatások • A felnőtt patkány csontvelői sejtek tenyésztésének bemutatása, illetve betanítása (JSW Research, Graz, Austria; SZTE Biokémiai Intézet) – Gulya Károly • AD immunoblot kifejlesztése a Schering Europe számára (késöbb bilaterális kooperáció kialakítása a Karolinska Institutet-tel) – Gulya Károly • Acetilkolin receptor elleni antitestek vizsgálata (acetilkolin receptor, haráncsíkolt izom, és titin elleni antitestek vizsgálata). - QualiCont Kft • Neurológiai autoantitestek vizsgálata I., (az onkoneuronális autoantitestek vizsgálata.: Hu-D (ANNA1), Ri/ Nova (ANNA2), Purkinje testek (CDR62/Yo), Amphiphysine alleni antitestek vizsgálata.) - QualiCont Kft • Neurológiai autoantitestek vizsgálata II., (a ganglizoidok és MAG elleni antitestek vizsgálata. - QualiCont Kft. • DIGE mérések – Juhász Gábor • 600 MHz mérések – Dombi György • Radioaktiv neuropeptid jelölések, radioaktivitás mérések LSC módszerekkel (3 db)– Tóth Géza

33


Új Források bevonása: Folyamatban lévő új források bevonása: 2008. év folyamán megpályáztuk az ÚMFT keretében kiírt TÁMOP 4.2.2-es prioritást, és 2009-ben két pályázatban 652 millió forintot nyertünk magyar és külföldi kutatócserére, valamint doktoranduszok és fiatal posztdokok alkalmazására. Így tudjuk más forrásból biztosítani, hogy a DNT keretében létrejött kritikus mennyiségű tudás, illetve kutatói kapacitás cseréje folyamatos és magas színvonalú legyen. 2009. februárjában az argentin székhelyű Osmotica cég alelnöke, Joaquina Faour látogatott el a DNT Inkubátorházába. Az ITD Hungary által közvetített társaság az egyesült állomokbeli és spanyol telephelyei után Magyarországon kíván képviseleti irodát nyitni. A tárgyalások kezdeti szakaszban vannak. Az EGIS Gyógyszergyárral a – köszönhetően az eddigi kiváló együttműködésnek – a DNT keretein túl is további együttműködést folytatunk. Az NKTH innovációs pályázatán 200 MFt-os támogatást nyertünk a „Pszichiátriai kórképekben és az azokat kísérő kognitív deficit terápiájában használható gyógyszerjelöltek fejlesztése” (EGISPSYC) c. projekt megvalósítására. Egy francia gyógyszergyárral pedig kutatási igazgatói szinten vettük fel a kapcsolatot, további nemzetközi együttműködés reményében. Több FP-7-es pályázatot nyertünk 2008-ban LipidomicNet (FP-7 202272), Memoload (FP-7 201159), illetve LipiDiDiet (FP-7 211696) névvel, így jelenleg 3 db futó FP-7-es pályázatunk van. A jövőben tervezett új források bevonása: A Regionális Egyetemi Tudásközpontok folytatására a DNT kiemelt szinten készül. A 2008. februárjában beadott üzleti tervünknek megfelelően a DNT többféle pályázati forrás kombinálásával (a RET pályázatot követő Nemzeti Egyetemi Tudásközpont, a Nemzeti Technológia Platform pályázat, Innocsekk Plusz, Mecenatúra, TÁMOP) kívánja fenntartani a kutatási programokat és működtetni a kialakult infrastruktúrát.

34


EGYÜTTMŰKÖDÉS AZ IPARI PARTNEREKKEL EGIS Gyógyszergyár NyRt. A vállalat kulcsszerepet játszik a második alprogram kutatási-fejlesztési munkáiban. A DNT Kutatóközpont és Inkubátorházban a következő laboratóriumok működnek az EGIS támogatásával: DNS- és Oligonukleotid Laboratórium, RNS-Interferencia Laboratórium, Számítóközpont és a Peptid-Protein Laboratórium. Kromat Kft. A vállalat a 4. alprogram munkáiban kulcsszerepet tölt be. A Kromat Kft. segítségével indult be a Neuroproteomikai Laboratórium működése és a vállalat részt vesz a Provit Kft. spin-off cég alapításában is. JSW Hungary Kft. A JSW Hungary Kft. 2006. augusztusában csatlakozott a DNT programhoz. A cég gyógyszerjelölt molekulák kutatási szerződésen alapuló analitikai, biokémiai és molekuláris biológiai tesztelését, valamint azok in vitro szövettenyészeten és in vivo transzgenikus egérmodelleken történő preklinikai tesztelését végzi, szorosan kapcsolódva a DNT program 3. és 5. alprogramjához tartozó csoportok kutatásaihoz. Ezen túlmenően kedvezményesen látja el a konzorcium minden egyes tagját az Alzheimer- és a Parkinson- kór transzgenikus állatmodelljeivel. Vitadel Kft. A DNT saját alapítású cége, melynek elsődleges feladata a konzorciumi partnerek által nyújtott szolgáltatások kiközvetítése, kapcsolatépítés. A projekt befejeztével az egyetemi konzorciumi partner részére kíván projektmenedzsment szolgáltatásokat végezni. Fenntartható fejlődés A DNT egyik pályázatban is megfogalmazott célja, hogy a pályázati időszak leteltével olyan szervezet alakuljon ki, amely képes saját bevételei és egyéb források alapján önfenntartó működésre. A kapcsolatok komplex rendszerét kidolgozva feladati szintek szerint a következő bevételi forrásokra számítunk. Nemzetközi kapcsolatrendszer A Szegedi Tudományegyetem részt vesz a magyar, cseh, szlovák, horvát, román, ukrán egyetemek és a Cedars Sinai Medical Health Care részvételével alakított konzorciumban. A DNT által alapított Vitadel spinoff cég mint ernyőcég a konzorciumi szerződés keretein belül olyan nemzetközi kapcsolatokkal rendelkező társasághoz tud kapcsolódni, mely a szabadalmi jogok értékesítésében jelentős potenciállal és nagy tapasztalatokkal rendelkezik. A DNT felvette a kapcsolatot a DANONE multinacionális vállalattal egy funkcionális élelmiszer eladása és egy gyógyszercég bécsi irodájával egy potenciális gyógyszer továbbfejlesztése céljából. 2009. februárjában az Osmotica nevű argentin társaság keresett meg bennünket, mivel magyarországi képviseleti irodájához megfelelő helyszínt keres. Érdeklődött továbbá a DNT szolgáltatásai iránt. Az Alzheimer-kór kezelésére tervezett gyógyszerjelölt vegyület preklinikai dossziéjának értékesítéséről egy nagy francia és egy német gyógyszergyárral tárgyalunk. Hazai kapcsolatrendszer A DNT a Nemzeti Fejlesztési Terv TÁMOP 4.2.2-es prioritásáraadott be és nyert pályázatot. A pályázat célja, hogy forrást találjunk azon K+F munkákhoz, melyek csak részben kapcsolódnak a jelenlegi RET pályázathoz, vagy az eredeti munkatervben nem szerepelnek a kutatási eredmények fejlődése miatt. A nyertes pályázattal szélesítjük a DNT kutatási spektrumát, s növelve a kutatók számának kritikus tömegét. Regionális kapcsolatrendszer A DNT felvette a kapcsolatot egy magyarországi technológia transzfer cég igazgatójával. Együttműködési megállapodást szeretnénk kötni a céggel projektjeink esetleges továbbfinanszírozását, illetve újabb projektek létrehozását célozva.

35

ÉVES JELENTÉS•2008 A DNT integrálódni kíván a szegedi és a dél-alföldi technológiai egészségügyi koncepcióba is a Szeged Pólus Kht-n, illetve a Szegedi Egészségügyi Központon keresztül. Helyi kapcsolatrendszer A DNT pályázati súlyánál fogva, s mert karok fölötti és közötti helyet foglal el, integráló szerepet kíván betölteni; a pályázati központ projektmenedzselési szolgáltatások nyújtásával tudja majd fenntartani létszámát. Részt vesz a GOP 1.1.2-es prioritás végrehajtásában. 2008. februárjában üzleti tervet nyújtottunk be a Támogatónak, melyben részletesen leírtuk, milyen kutatási programokkal és tevékenységekkel kívánjuk a projektet továbbvinni. Kapcsolódás a gazdasági vérkeringésbe A DNT kutatói által alapított VITADEL Kft., a DNT RET pályázat lezárását követően gazdasági környezetben működve segíti a kutatócsoportok munkáját; ún. shared service központként látja el a technológia transzfer, marketing, valamint az üzletfejlesztési feladatokat. A társaság konkrét működését a 2008. februárjában elkészült üzleti tervünkben részleteztük. Részletes kapcsolatrendszer a 2008-ban elkészült DNT üzleti tervében található.

36


PUBLIKÁCIÓK 1. Alprogram 1,

Hetényi A., Fülöp L., Martinek A.T., Wéber E., Soós K., Penke B.: Ligand-induced flocculation of neurotoxic fibrillar Aβ(1-42) by noncovalent crosslinking. ChemBioChem, 9, 1-11, 2008. IF: 3.446 2, Verdier Y., Földi I., Sergeant N., Fülöp L., Penke Zs., Janáky T., Szücs M., Penke B.: Characterisation of the interaction between amyloid beta 1-42 and glyceraldehyde phosphodehydrogenase. J. Peptide Sci., 10, 229-248, 2008. IF: 1,801 3, Hunya Á.G, Liu A., Verdier Y., Soós K., Zarándi M., Szabó A., Zádori D., Penke B., Datki Zs.L.: Differences between normal and alpha-synuclein overexpressing SH-SY5Y neuroblastoma Cells after Aβ(1-42) and NAC treatment. Brain Research Bull., 75, 648-654, 2008. IF: 2,481 4, Kellermayer M.S.Z., Karsai Á., Benke M., Soós K., Penke B.: Stepwise dynamics of epitaxially growing single amyloid fibrils. PNAS, 105, 141-144, 2008. IF: 9,598 5, Karsai Á., Murvai Ü., Soós K., Penke B., Kellermayer M. Z. S.: Oriented epitaxial growth of amyloid fibrils of the N27C mutant β25-35 peptide Eur. Biophys. J., 377, 307-310, 2008. IF: 2,238 6, Szegedi V., Juhász G., Vass G., Bozsó Zs., Budai D., Penke B.: Integrin activation modulates NMDA and AMPA receptor function of CA1 cells in a doserelated fashion in vivo. Brain Research, 1223, 20-26, 2008. IF: 2,811 7, Laczkó I., Vass E., Soós K., Fülöp L., Zarándi M., Penke B.: Aggregation of Aβ(1-42) in the presence of short peptides: conformational studies. Journal of Peptide Science, 14, 731-741, 2008. IF: 1,768 8, Kolsofszki M., Karsai Á., Soós K., Penke B., Kellermayer M.S.Z.: Thermally-induced effects in oriented network of amyloid β25-35 fibrils Progr Colloid Polym Sci, 135, 169-173, 2008. IF: 1,62 9, Minkeviciene R., Dobszay M. B., Rheims S., Zilberter M., Hartikainen J., Fülöp L., Penke B., Harkány T., Zilberter Y., Pitkänen A., Tanila H.: Fibrillar Aβ-induced hyperexcitability of cortical and hippocampal pyramidal cells triggers. Progressive epilepsy. J.Neuroscience, 29, 3453-62, 2009. IF: 3,352 10, Juhász G., Márki A., Vass G., Fülöp L., Budai D., Penke B., Falkay G., Szegedi V.: An intraperitoneally administered pentapeptide protects against Abeta (1-42) induced neuronal excitation in vivo. J. Alzheimer Dis.,16, 189-96., 2009. IF: 4,081 11, Bozsó, Z.; Fülöp, L.; Simon, D.; Laczkó, I.; Juhász, G.; Szegedi, V.; Soós, K.; Hetényi, A.; Wéber, E.; Tószegi, H.; Csete, M.; Zarándi, M.; Penke, B.: The synthesis of iso-Aβ(1-42) with Boc-chemistry and its structural evaluation for further studies J. Pept. Sci., 2009, submission IF: 1.768 12, Soos, K; Fulop, L; Bozso, Z; Szegedi, V; Martinek, T A; Zarandi, M; Penke, B.: The effect of the so called „beta-sheet breakers” (BSBs) on A beta 1-42 aggregates J. Pept. Sci., 14, 109-110., 2008. IF: 1.768 13, Bozsó, Zs., Fülöp, L., Laczkó, I., Soós, K., Penke, B.: The synthesis and structural studies of iso-Aß(1-42). J. Peptide. Sci. 14, 89-90., 2008. IF: 1,768

37

ÉVES JELENTÉS•2008 14, Bertrand, J-R., Malvy, C., Auguste, T., Tóth, K.G., Kiss-Ivánkovits, O., Illyés, E., Hollósi, M., Bottka, S., Laczkó, I.: Synthesis and studies on the cell-penetrating ability of fusogenic peptides Bioconjugate Chemistry 2008. (in press) IF: 4.38 15, Pákáski, M., Kálmán, J.: Interactions between the amyloid and cholinergic mechanisms of Alzheimer’s Disease. Neurochem. Int. 53, 103-111., 2008. IF: 2.904 16, Kovács, Z.A., Puskás, L.G., Juhász, A., Rimanóczy, A., Hackler, L. Jr, Kátay, L., Gali, Z., Vetró, A., Janka, Z., Kálmán, J.: Hypnosis upregulates the expression of immune-related genes in lymphocytes. Psychoter. Psychosom. 77, 257-259., 2008. IF: 4.333 17, Pákáski, M. Hugyecz, M., Sántha, P., Jancsó, G., Bjelik, A., Domokos, Á., Janka, Z., Kálmán, J.: Capsaicin promotes the amyloidogenic route of brain amyloid precursor protein processing. Neurochem. Int. 54, 426-30, 2009. IF: 2.904 18, Deli MA.: Potential use of tight junction modulators to reversibly open membranous barriers and improve drug delivery. BBA Biomembranes, 1788, 892-910, 2009. IF: 3.587 19, Horvát S, Fehér A, Wolburg H, Veszelka S, Tóth A, Kis L, Kurunczi A, Balogh G, Sipos P, Kürti L, Erős I, Szabó-Révész P, Deli MA.: Sodium hyaluronate as a mucoadhesive component in nasal formulation enhances delivery of molecules to brain tissue. Eur. J. Pharm. Biopharm., 72, 252-259, 2009. IF: 2.611 20, Nakagawa S, Deli MA, Kawaguchi H, Shimizudani T, Shimono T, Kittel A, Tanaka K, Niwa M.: A new blood-brain barrier model using brain endothelial cells, pericytes and astrocytes. Neurochemistry International, 54, 253-263, 2009 IF 2.975 21, Horvath G., Kekesi G., Nagy E., Benedek G.: The role of TRPV1 receptors in the antinociceptive effect of anandamide at spinal level. Pain 134, 277-284., 2008. IF: 5.249 22, Tuboly G, Mecs L, Benedek G, Horvath G.: Antinociceptive interactions between anandamide and endomorphin-1 at the spinal level. Clin. Exp. Pharmacol. Physiol 2008. In Press IF: 2.038 23, Tuboly G, Benedek G, Horvath G.: Selective disturbance of pain sensitivity after social isolation. Physiol. Behav., 96, 18-22, 2009. IF: 2.561 24, Tuboly G, Kekesi G, Nagy E, Benedek G, Horvath G.: The antinociceptive interaction of anandamide and adenosine at the spinal level. Pharmacol. Biochem. Behav. 91, 374-379, 2009. IF: 2.355 25, Süle, Z., Mracskó, É., Bereczki, E., Sántha, M., Csont, T., Ferdinandy, P., Bari, F., Farkas, E.: Capillary injury in the ischemic brain of hyperlipidemic, apolipoprotein B-100 transgenic mice. Life Sci, under review, 2009 IF.: 2.257 26, Süle, Z., Bari, F., Sántha, M., Bereczki, E., Farkas, E.: Capillary injury in the ischemic brain of hyperlipidemic, apolipoprotein b-100 transgenic mice. J. Vasc. Res., 45 (Suppl. 2), 122, 2008. IF.: 2.463 27, Mracskó, É., Hugyecz, M., Farkas, E., Bari., F.: Changes in nitric oxide synthase (NOS), cyclooxygenase-2 (COX-2), superoxide dismutase (SOD) protein levels in the early phase of chronic cerebral hypoperfusion in rats. J. Vasc. Res., 45 (Suppl. 2), 122, 2008. IF.: 2.463 2. Alprogram 28, Bagosi Z., Jászberényi M., Szabó Gy., Telegdy G.: The effects of CRF and urocortins on H3-GABA release from the rat amygdala - an in vitro superfusion study. Brain Res. Bull. 75,15-17., 2008. IF: 2,481 29, Csányi G., Kis B., Gecse,Á., Telegdy G., Szupera,Z., Vécsei, L., Szente, M., Leprán I., Mezei, Zs.: Effects of 3-aminoyridine-seizures on platelet eicosanoid synthesis. Pharmacol. Reports 60, 345-352, 2008. IF.: 2.29 30, Tanaka M., Telegdy G.: Antidepressant-like effects of the CRH family peptides urocortin 1, urocortin 2 and urocortin 3 in a modified forced swimming test in mice, Brain Res. Bull, 75, 509-512, 2008. IF: 2,481 31, Tanaka, M., Telegdy, G.: Involvement of adrenergic and serotonin (5-HT) receptors in urocortin 3 antidepressantlike effect in a modified forced swimming test in mice. Brain Res. Bull. 77, 301-305, 2008. IF: 2,481

38


32, Telegdy G., Adamik, A.: Involvement of CRH receptors in urocortin-induced hyperthermia. Peptides 29, 1937-1942, 2008. IF: 2,368 33, Telegdy G., Tanaka, M., Schally A.V.: Effects of the LHRH antagonist Cetrorelix on the brain function in mice. Neuropeptides (in print), 2009. IF: 2.492 34, Jászberényi M, Bagosi Zs.,Turzó B., Földesi I., Szabó Gy., Telegdy G.: Endocrine, behavioral and autonomic effects of neuropeptide AF Hormones and Behavior. 56, 24-34, 2009. IF: 3,401 35, Kapus, G., Gacsályi, I., Végh, M. Kompagne, H., Leveleki, Cs. Harsing, L.G., Bilkei-Gorzó, A., and Lévay, G.: Antagonism of AMPA receptors produces anxiolytic-like behavior in rodents: effects of GKI-52406 and its novel analogues. Psychopharmacol. 198, 231-241, 2008. IF: 3.032 36, Kompagne, H., Bárdos, G., Szénási, G., Gacsályi, I., Hársing, LG. and Lévay, G.: Chronic mild stress generates clear depressive but ambigous anxiety-like behaviour in rats. Behavioural Brain Research, 193, 311-314, 2008. IF: 2,626 37, A. Papp, Z. Jurányi, L. Nagymajtényi, P. Mátyus, L.G. Hársing Jr.: The synaptic and nonsynaptic glycine transporter type-1 inhibitors Org-24461 and NFPS alter single neuron firing rate in the rat dorsal raphe nucleus Further evidence for a glutamatergic-serotonergic interaction and its role in antipsychoticaction Neurochem. Int., 52, 130-134, 2008. IF: 2,994 38, I. Kalló, C. Jekkel, E. Hrabovszky, Z. Jurányi, B. Vida, A. Járási, T. Wilheim, L.G. Hársing Jr.,Z. Liposit of Immunohistochemical and in situ hybridization studies on glycine transporter 1 after transient ischemia in the rat forebrain Neurochem. Int., 52, 799-808, 2008. IF: 2,994 39, G. Szénási, M.G. Végh, G. Szabó, S. Kertész, G.L. Kapus, M. Albert, Z. Greff, I. Ling, J. Barkóczy, G. Simig, M. Spedding, L.G. Hársing Jr.: 2,3-Benzodiazepine-type AMPA receptor antagonists and their neuroprotective effects Neurochem. Int., 52, 166-183, 2008. IF: 2,994 40, Páldyová, E., Bereczki, E., Sántha, M., Wenger, T., Borsodi, A., Benyhe, S.: Noladin ether, a putative endocannabinoid, inhibits μ-opioid receptor activation via CB2 cannabinoid receptors., Neurochemistry International 52, 321-328, 2008. IF: 2,994 41, Páldyová, E., Bereczki, E., Sántha, M., Wenger, T., Borsodi, A., Benyhe, S.: Altered gene expression and functional activity of opioid receptors in the cerebellum of CB1 cannabis receptor knockout mice after acute treatments with cannabinoids. Acta Biol. Hung., 58, 113-130, 2008. IF: 0, 636 42, Páldy, E., Bereczki, E., Sántha, M., Wenger, T., Borsodi, A., Benyhe, S.: CB2 cannabinoid receptor antagonist SR144528 decreases mu-opioid receptor expression and activation in mouse brainstem: Role of CB2 receptor in pain Neurochemistry International, 53, 309-316, 2008. IF 2,994 43, Aguila B., Coulbault L., Boulouard M., Liotaveilliota F., Davis A., Toth G., Borsodi, A., Balboni G., Salvadori S., Jauzac P., Allouche S.: In vitro and in vivo pharmacological profile of UFP-512, a novel selective deltaopioid receptor agonist; correlations between desensitization and tolerance. British. J. Pharmacol. 152, 1312–1324, 2007. IF: 3,41 44, Carmona-Aparicio L., Pena F., Borsodi, A.., Rocha L.: Effects of nociceptin on the spread and seizure activity in the rat amygdala kindling model: Their correlations with (3)H-leucyl-nociceptin binding. Epilepsy Res. 77, 75-84, 2007. IF: 2,337 45, Tömböly, C., S. Ballet, D. Feytens, K. E. Kövér, A. Borics, S. Lovas, M. Al Khrasani, Z. Fürst, G. Tóth, S. Benyhe, and D. Tourwe.: Endomorphin-2 with a beta-turn backbone constraint retains the potent mu-opioid receptor agonist properties. J. Med. Chem., 51, 173-177, 2008. IF: 4,926 46, Wollemann, M., E. Ioja, and S. Benyhe.: Capsaicin inhibits the in vitro binding of peptides selective for muand kappa-opioid, and nociceptin-receptors. Brain Res.Bul., 77, 136-142, 2008. IF: 2,481 47, Bojnik, E., A. Magyar, G. Tóth, S. Bajusz, A. Borsodi, and S. Benyhe.: Binding studies of novel, nonmammalian enkephalins, structures predicted from frog and lungfish brain cDNA sequences. Neuroscience, 158, 867-874, 2009. IF: 3,41

39


48, E. Birkas, I. Kertesz, G. Toth, L. Bakota, K. Gulya, M. Szucs: Synthesis and pharmacological characterization of a novel, highly potent, peptidomimetic δ- opioid radioantagonist , [³H]Tyr-Tic-(2S,3R)-β-MePhe-Phe-OH Neuropeptides 42, 57-67 2008. IF: 2.492 49, E. Szemenyei, I. Barna, Zs. Mergl, A. Keresztes, Zs. Darula, E. Kató, G. Tóth, A. Rónai: Detection of a novel immonoreactive endomorphin 2-like peptide in rat brain extracts Regulatory Peptides 148, 54-61, 2008. IF: 2. 422 50, M. Ibba, M. Kiaayama, J. Mcdonald, G. Calo, R. Guerrino, J. Farkas, G. Toth, D. G. Lambert: Binding of novel radioligand [3H]UFP-101 to recombinant human and native rat nociceptin/orphanine FQ receptors Naunyn- Schmiedebeerg’s Arc.Pharmacol. 378.,553-561, 2008. IF: 2.161 51, R. Cinar, T. F. Freund, I. Katona, K. Mackie, M. Szucs.: Reciprocal inhibition of G-protein signaling is induced by CB1 cannabinoid and GABAB receptor interactions in rat hippocampal membranes. Neurochem. Int. 52, 1402-1409, 2008. IF: 2,975 52, A. Keresztes, M. Szűcs, A. Borics, K. Kövér, E. Forró, F. Fülöp, C. Tömböly, P. Antal, A. Pahi, G. Fábián, M. Murányi, G. Tóth.: New Endomorphin Analogs Containing Alicyclic β-Amino Acids: Influence on bioactive conformation and pharmacological profile. J. Med. Chem. 51, 4270-4279, 2008. IF: 4, 895 53, G. Csányi, B. Kis, Á. Gecse, G. Telegdy, Z. Szupera, L. Vécsei, M. Szente, Zs. Mezei: Effects of 3-aminopyridineinduced seizure on platelet eicosanoid synthesis. Pharmacol. Reports, 60, 345-352, 2008. IF: 2,29 54, Z. Bagosi, M. Jászberényi, G. Szabó and G. Telegdy: The effects of CRF and the urocortins on [3H]GABA release from the rat amygdala—An in vitro superfusion study Brain Research Bull. 75, 15-17, 2008. IF: 1,684 55, Rosztóczy A., Makk L., Izbéki F., Róka R, Somfay A, Wittmann T.: Asthma and gastroesophageal reflux: clinical evaluation of esophago-bronchial reflex and proximal reflux. Digestion. 77, 218-224. 2008. IF:2.097 56, Izbéki F., Rosztóczy A., Yobuta YS., Róka R., Lonovics J., Wittmann T.: Increased prevalence of gallstone disease and impaired gallbladder motility in patients with Barrett’s esophagus. Dig Dis Sci. 8, 2268-2275, 2008. IF:1.319 57, Izbéki F, Wittman T, Rosztóczy A, Linke N, Bódi N, Fekete É, Bagyánszki M. Immediate insulin treatment prevents gut motility alterations and loss of nitrergic neurons in the ileum and colon of rats with streptozotocininduced diabetes. Diabetes Res Clin Pract. 80, 192-8. 2008. IF:1.823 58, Gecse K., Róka R., Ferrier L., Leveque M., Eutamene H., Cartier C., Rosztóczy A., Izbéki F., Fioramonti J., Wittmann T.: Bueno L. Serine-protease activity: a colonic lumenal factor responsible for symptoms in diarrheic ibs patients. Gut. 57, 591-599, 2008. IF:10.015 59, Róka R, Wittmann T, Bueno L. Altered protease signalling in the gut: a novel pathophysiological factor in irritable bowel syndrome. Neurogastroenterol Motil. 20, 853-856, 2008. IF:3.364 3. Alprogram 60, Kaszaki, J., Palásthy, Zs., Érczes, D., Rácz, A., Varga, G., Vécsei, L., Boros, M.: Effects of kynurenic acid on motility changes during acute colon obstruction. Neurogastroenterol. Motil. 20, 53-62, 2008. IF 3,364 61, Knyihár-Csillik, E., Mihály, A., Krisztin-Péva, B., Robotka, H., Szatmári, I., Fülöp, F., Toldi, J., Csillik, B., Vécsei, L.: The kynurenate analog SZR-72 prevents the nitroglycerol-induced increase of c-fos immunoreactivity in the rat caudal trigeminal nucleus: Comparative studies of the effects of SZR-72 and kynurenic acid. Neurosci. Res. 61, 429-432, 2008. IF: 2,121 62, Oláh, J., Klivényi, P., Gárdián, G., Vécsei, L., Orosz, F., Kovács, G., Westerhoff, H., Óvádi, J.: Increased glucose metabolism and ATP level in brain tissue of Huntington’s disease transgenic mice. FEBS Journal 275, 4740-4755, 2008. IF: 3,396

40

ÉVES JELENTÉS•2008 63, Robotka, H., Sas, K., Ágoston, M., Rózsa, É., Szénási, G., Gigler, G., Vécsei, L., Toldi, J.: Neuroprotection achieved in the ischemic rat cortex with L-kynurenine sulphate. Life Sciences 82, 915-919, 2008. IF: 2,257 64, Rózsa, É., Robotka, H., Nagy, D., Farkas, T., Sas, K., Vécsei, L., Toldi, J.: The pentylenetetrazol-induced activity in the hippocampus can be inhibited by the conversion of L-kynurenine to kynurenic acid: An in vitro study. Brain Res. Bull. 76, 474-479, 2008. IF: 1,943 65, Rózsa, É., Robotka, H., Vécsei, L., Toldi, J.: The Janus-face kynurenic acid. J. Neural. Transm. 115, 1087-1091, 2008. IF: 2,672 66, Sas , K., Robotka, H., Rózsa, É., Ágoston, M., Szénási, G., Gigler, G., Marosi, M., Kis, Zs., Farkas, T., Vécsei, L., Toldi, J.: Kynurenine diminishes the ischemia-induced histological and electrophysiological deficits in the rat hippocampus. Neurobiol. Disease 32, 302-308, 2008. IF: 4,377 67, Vámos, E., Csati, A., Vécsei, L., Klivényi, P.: Effects of valproate on the dopaminergic system in mice. Neurol. Res., 31, 217-219, 2009. IF: 1,634 68, Toldi J.: Representational plasticity in the mammalian brain cortex. Acta Physiol. Hung., 95(3): 229-245, 2008. IF: 0.453 69, Robotka H., Toldi J. and Vecsei L. L-kynurenine: metabolism and mechanism of neuroprotection. Future Medicine: Future Neurology, 3, 169-188, 2008. 70, Erős G., Varga G., Váradi R., Czóbel M., Kaszaki J., Ghyczy M., Boros M.: Anti-inflammatory action of a phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine and N-acyl phosphatidylethanolamine-enriched diet in carrageenan-induced pleurisy. Eur Surg Res 42, 40-48, 2008. IF: 0,92 71, Ghyczy M., Torday C., Kaszaki J., Szabó A., Czóbel M., Boros M.: Oral phosphatidylcholine pretreatment decreases ischemia-reperfusion-induced methane generation and the inflammatory response in the small intestine. Shock 30, 596-602, 2008. IF: 3,318 72, Ghyczy M, Torday Cs, Kaszaki J, Szabó A, Czóbel M, Boros M: Hypoxia-induced generation of methane in mitochondria and eukaryotic cells - An alternative approach to methanogenesis. Cell Physiol. Biochem 21, 251-258, 2008. IF: 3,558 73, Varga G., Érces D., Fazekas B., Fülöp M., Kovács T., Kaszaki J., Fülöp F., Vécsei R., Boros M.: N-methylD-aspartate receptor antagonism decreases motility and inflammatory activation in experimental colitis in the rat. Neurogastroenterology and Motility 2008. IF: 3,364 74, Chung J, Nguyen AK, Henstridge DC, Holmes AG, Chan MHS, Mesa JL, Lancaster GI, Southgate RJ, Bruce CR, Duffy SJ, Horvath I, Mestril R, Watt MJ, Hooper PL, Kingwell BA, Vigh L, Hevener A, Febbraio MA.: HSP72 protects against obesity-induced insulin resistance. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105, 1739-174, 2008. (submitted) IF: 9.598 75, Escriba PV, Gonzalez-Ros JM, Goni FM, Kinnunen PKJ, Vigh L.: Sanchez-Magraner L, Fernandez AM, Busquets X, Horvath I, Barcelo-Coblijn G.: Membranes: a meeting point for lipids, proteins and therapies., J Cell Mol Med 12, 829-875, 2008. IF: 6.807 76, Horvath I, Multhoff G, Sonnleitner A, Vigh L.: Membrane-associated stress proteins: More than simply chaperones, BBA-Biomembranes 1778, 1653-1664, 2008. IF: 3.640 77, Bereczki, E., Bernát,G., Csont, T., Ferdinandy, P. , Scheich, H. and Sántha, M.: Overexpression of human apolipoprotein B-100 induces severe neurodegeneration in transgenic mice. J. Proteome Res. 7, 2246-52, 2008. IF: 5.67 78, Csakvari E, Kurunczi A, Hoyk Z, Gyenes A, Naftolin F, Parducz A.: Estradiol-induced synaptic remodeling of tyrosine hydroxylase immunopositive neurons in the rat arcuate nucleus Endocrinology. 149, 4137-41, 2008. IF: 5.045 79, Kurunczi A, Hoyk Z, Csakvari E, Gyenes A, Párducz A.: 17beta-Estradiol-induced remodeling of GABAergic axo-somatic synapses on estrogen receptor expressing neurons in the anteroventral periventricular nucleus of adult female rats. Neuroscience. 158, 553-557, 2009. IF:3.352

41


80, Hajszan T, Dow A, Warner-Schmidt JL, Szigeti-Buck K, Sallam NL, Parducz A.: Leranth C, Duman RS.: Remodeling of hippocampal spine synapses in the rat learned helplessness model of depression Biol Psychiatry. 65, 392-400, 2009. IF:8.456 81, Paizs M, Engelhardt JI, Siklós L.: Quantitative assessment of relative changes of immunohistochemical staining by light microscopy in specified anatomical regions. J. Microscopy, in press. 234, 103-112, 2009. IF: 2,095 82, Dux M., Rosta J., Pintér S., Sántha P., Jancsó G. Loss of capsaicin-induced meningeal neurogenic sensory vasodilatation in diabetic rats. Neuroscience. 150, 194-201, 2007. IF: 3,352 83, Domoki F, Zimmermann A, Tóth-Szűki V, Busija DW, Bari F Acetazolamide induces indomethacin and ischemia-sensitive pial arteriolar vasodilation in the piglet Acta Paediatrica 97, 280-284, 2008. IF: 1,297 84, Zimmermann A, Domoki F, Bari F Seizure-induced alterations in cerebrovascular function in the neonate Developmental Neurosci 30, 293-305, 2008. IF: 2,691 85, Domoki F, Kis B, Gaspar T, Bari F, Busija DW.: Cerebromicrovascular endothelial cells are resistant to L-glutamate. Am J. Physiol Regul Integr Comp Physiol. 295, R1099-1108 2008. IF:3,685 86, Domoki F, Kis B, Gaspar T, Snipes JA, Parks J, Bari F.: Busija DW Rosuvastatin induces delayed preconditioning against oxygen-glucose deprivation in cultured cortical neurons. Am J Physiol Cell Physiol. 296, C97-C105, 2009. IF: 4.23 87, Varga H, Pardutz A, Vamos E, Bohar Z, Bago F, Tajti J, Bari F.: Vecsei L Selective inhibition of cyclooxygenase-2 attenuates nitroglycerin-induced calmodulin-dependent protein kinase II alpha in rat trigeminal nucleus caudalis. Neurosci Lett. 451, 170–173, 2009. IF:2.085 88, Zimmermann A, Lenti L, Kis D, Tóth G, Domoki F, Bari F.: Peptidergic regulation of diameters of cerebral resistance vessels int he newborn piglet. J. Vasc. Res., 45, 123, 2008. IF.: 2.463 89, Molnar, G., Olah, S., Komlosi, G., Fule, M., Szabadics, J., Varga, C., Barzo, P., & Tamas, G.: Complex Events Initiated by Individual Spikes in the Human Cerebral Cortex. PLoS Biology 6, e222, 2008. IF: 14,1. 90, Ascoli G. A., Alonso-Nanclares L., Anderson S. A., Barrionuevo G., Benavides-Piccione R., Burkhalter A., Buzsaki G., Cauli B., Defelipe J., Fairen A., Feldmeyer D., Fishell G., Fregnac Y., Freund T. F., Gardner D., Gardner E. P., Goldberg J. H., Helmstaedter M., Hestrin S., Karube F., Kisvarday Z. F., Lambolez B., Lewis D. A., Marin O., Markram H., Munoz A., Packer A., Petersen C. C., Rockland K. S., Rossier J., Rudy B., Somogyi P., Staiger J. F., Tamas G., Thomson A. M., Toledo-Rodriguez M., Wang Y., West D. C., and Yuste R. Petilla terminology: nomenclature of features of GABAergic interneurons of the cerebral cortex. Nature Reviews Neuroscience 9, 557-568, 2008. IF: 24,52 91, Bencsik P, Kupai K, Giricz Z, Görbe A, Huliák I, Fürst S, Dux L, Csont T,, Jancsó G, Ferdinandy P.: Cardiac capsaicin-sensitive sensory nerves regulate myocardial relaxation via S-nitrosylation of SERCA: role of IF: 3.8 peroxynitrite. Br J Pharmacol. 153, 488-96, 2008. 92, Orojan I, Bakota L, Gulya K Trans-synaptic regulation of calmodulin gene expression after experimentally induced orofacial inflammation and subsequent corticosteroid treatment in the principal sensory and motor trigeminal nuclei of the rat. Neurochem Int. 52, 265-271, 2008. IF: 3.159 93, Beliczai Z, Varszegi S, Gulyas B, Halldin C, Kasa P, Gulya K) Immunohistoblot analysis on whole human hemispheres from normal and Alzheimer diseased brains. Neurochem Int. 53, 181-183, 2008. IF: 2.975 94, Gulyas B, Makkai B, Kasa P, Gulya K, Bakota L, Varszegi S, Beliczai Z, Andersson J, Csiba L, Thiele A, Dyrks T, Suhara T, Suzuki K, Higuchi M, Halldin C.: A comparative autoradiography study in post mortem whole hemisphere human brain slices taken from Alzheimer patients and age matched controls using two radiolabelled DAA116 analogues with high affinity to the peripheral benzodiazepine receptor. Neurochem Int. (in press) 54, 28-36, 2009 IF: 2.975

42


95, Gulyas B, Makkai B, Nagy K, Vas A, Kasa P, Andersson J, Suhara T, Suzuki M, Higuchi M, Beliczai Z, Gulya K, Csiba L, Halldin C.: In vitro evidence for competitive TSPO binding of the imaging biomarker candidates vinpocetine and two iodinated DAA1106 analogues in post mortem autoradiography experiments on whole hemisphere human brain slices. Current Radiopharmaceuticals (in press) 4. Alprogram 96, Baracskay P, Szepesi Z, Orbán G, Juhász G, Czurkó A.Generalization of seizures parallels the formation of „dark” neurons in the hippocampus and pontine reticular formation after focal-cortical application of 4-aminopyridine (4-AP) in the rat. Brain Res. 1228, 217-28, 2008. IF.2.8 97, Lörincz ML, Oláh M, Juhász G. Functional consequences of retinopetal fibers originating in the dorsal raphe nucleus. Int J Neurosci. 118, 1374-83, 2008. IF: 2 98, Tóth A, Máthé K, Petykó Z, Szabó I, Czurkó A. Implementation of a galvanically isolated low-noise power supply board for multi-channel headstage preamplifiers. J Neurosci Methods. 171, 13-8. 2008. IF.: 1.8 99, Dobolyi Á & Palkovits M (2008) Epression of latent transforming growth factor beta binding proteins in the rat brain, J Comp Neurol 507:1393-1408 IF.:3.915 100, Kozicz T, Tilburg-Ouwens D, Faludi G, Palkovits M & Roubos E Gender-related uroicortin-1 and brainderived neurotropic factor expression in the adult human midbrain of suicide victims with major depression, Neuroscience 152, 1015-1023, 2008. IF 3.352 101, Kiss A, Mravec B, Palkovits M & Kvetnansky R Stress-induced changes in tyrosine hydroxylase gene expression in rat hypothalamic paraventricular, periventricular, and dorsomedial nuclei, Ann NY Acad Sci 1148:74-85, 2008. IF 1.731 102, Faragó N, Kocsis GF, Fehér LZ, Csont T, Hackler L Jr, Varga-Orvos Z, Csonka C, Kelemen JZ, Ferdinandy P, Puskás LG. Gene and protein expression changes in response to normoxic perfusion in mouse hearts. J. Pharmacol Toxicol Methods. 57, 145-54, 2008. IF: 1.12 103, Lepagnol-Bestel AM, Zvara A, Maussion G, Quignon F, Ngimbous B, Ramoz N, Imbeaud S, Loe-Mie Y, Benihoud K, Agier N, Salin PA, Cardona A, Khung-Savatovsky S, Kallunki P, Delabar JM, Puskas LG, Delacroix H, Aggerbeck L, Delezoide AL, Delattre O, Gorwood P, Moalic JM, Simonneau M.: DYRK1A interacts with the REST/NRSF-SWI/SNF chromatin remodelling complex to deregulate gene clusters involved in the neuronal phenotypic traits of Down syndrome. Hum Mol Genet. 18, 1405-1414, 2009 IF: 7.76 104, Kovács ZA, Puskás LG, Juhász A, Rimanóczy A, Hackler L Jr, Kátay L, Gali Z, Vetró A, Janka Z, Kálmán J.: Hypnosis upregulates the expression of immune-related genes in lymphocytes. Psychother Psychosom. 77, 257-259, 2008. IF: 4.966 5. Alprogram 105, Narayan*, M., Welker*, E., Zhai, H., Han, X., Xu, G., McLafferty, F. W., Scheraga, H. A. Detecting native-folds in mixtures of disulfide-bond-containing proteins. Nature Biotechnology 26: 427-429. 2008. IF: 22.83 * Equal contribution 106, Mendler L, Pintér S, Kiricsi M, Baka Zs, Dux L: The regeneration of reinnervated rat soleus muscle is accompanied by fiber transitions toward a faster phenotype. J Histochem Cytochem. 56, 111-23, 2008. IF: 2.45

43


Könyv, könyvfejezet 1, 2, 3,

4,

5, 6, 7,

Gárdián, G., Sas, K., Toldi, J. and Vécsei, L.: Protein misfolding, mitochondrial disturbances, and kynurenines in the pathogenesis of neurodegenerative disorders. In: Neurovascular Medicine (Ed.: Kenneth Maiesse),Chapter 18., pp: 452-472. Oxford University Press, 2009. Deli MA., Kálmán M. Vér-agy gát: kölcsönhatás gliasejtek és az agyi endothelsejtek között. In: Glia, Huszti Zs, Kálmán M (Eds.), Akadémiai Kiadó, Budapest, Hungary, pp. 345-368, 2008. Jancsó G., Katona M., Horváth V., Sántha P., Nagy J. Sensory nerves as modulators of cutaneous inflammatory reactions. in health and disease. In: Jancso G.(Vol. ed), NeuroImmune Biology, Vol. 8: Neurogenic Inflammation in Health and Disease, Elseveir, Amsterdam, (ISBN 978-0-444-53229-9) pp.3-36, 2009. Dux M., Messlinger K.: Neurogenic vascular responses in the dura mater and their relevance for the pathophysiology of headaches Jancso G.(Vol. ed), NeuroImmune Biology, Vol. 8: Neurogenic Inflammation in Health and Disease, Elsevier, Amsterdam, (ISBN 978-0-444-53229-9) 4 pp.193-209, 2009. Institóris A, Domoki F, Busija DW, Bari F: The role of cyclooxygenase (COX)-2 in ischemic brain injury. In: Recent advances and New strategies in stroke research. Ed: F. Erdő, Transworld Research Network, Kerala, India pp 135-151, 2009. Penke B.: Lipidek. In: Élelmiszer-kémia (Szerk.: Hajós Gyöngyi), Akadémiai Kiadó, Budapest 2008. pp. 76104, 2008. Fülöp L., Penke B., Zarándi M.: Break up or wrap? Therapeutic possibilities for the treatment of Alzheimer’s disease by altering the aggregation of β-amyloid peptide. In: Neuropeptides and Peptide. Analogs (Eds. Kovács M. and Merchenthaler I.), Research Signpost, Trivandrum, pp. 161-168, 2009. MÉDIAMEGJELENÉSEK 2008-BAN

• • • • • • • • • • •

44

2008. 02. 07. Neurodegenerációs betegségek megelőzése és kezelése – Penke Botond előadása, Mindentudás Egyeteme. 2008. 09. 12. Délmagyarország, Szegedi szenzáció a memória kutatásában 2008. 09. 21. Napi.hu – Egymilliárd forintból kutathat a DEAK 2008. 09. 24. Szabadegyetem sorozat – Az agy vérellátásanak szabályozása, a neurovaszkuláris egység szerepe – Bari Ferenc. Magyar Televízió, Híradó, 2008 november – Interjú Tamás Gáborral 2009. 01. Gazdasági Tükörkép Magazin - Szellemi termékek - gyümölcsöző kapcsolatok 2009. 02. Inter Press Magazin: Megyünk az anyag után (76-79. old) 2009. 02.13. Magyar Televízió: A tudás hazája 4. rész, Gyógyszeripar. 2009. 03. 16. Delmagyarország: Széchenyi-díjasok: Csirik János és Penke Botond 2009. 04. 20, Napi Online: DNT, KNRET: biztató eredmények, kristályosodó elképzelések 2009. 04. 22, Szegedpolus.hu: DNT, KNRET: biztató eredmények, kristályosodó elképzelések


FINANSZÍROZÁS, ÖSSZESÍTETT PÉNZÜGYI MUTATÓK ÖSSZEFOGLALÓ A 2008-2009-ES GAZDÁLKODÁSRÓL

2005 (Ft)

2006 (Ft)

2007 (Ft)

2008 (Ft)

Összesen

NKTH Támogatás

264 007 000 Ft

385 914 000 Ft

272 463 000 Ft

244 000 000 Ft

1 166 384 000 Ft

Önerő

0 Ft

0 Ft

0 Ft

0 Ft

0 Ft

NKTH Támogatás

42 893 000 Ft

60 562 000 Ft

77 500 000 Ft

78 284 000 Ft

259 239 000 Ft

Önerő

0 Ft

0 Ft

0 Ft

0 Ft

0 Ft

NKTH Támogatás

15 942 000 Ft

24 363 000 Ft

12 429 000 Ft

52 299 000 Ft

105 033 000 Ft

Önerő

0 Ft

0 Ft

0 Ft

0 Ft

0 Ft

NKTH Támogatás

0 Ft

0 Ft

0 Ft

0 Ft

0 Ft

Önerő

49 000 000 Ft

53 000 000 Ft

59 000 000 Ft

61 000 000 Ft

222 000 000 Ft

NKTH Támogatás

2 160 000 Ft

4 000 000 Ft

2 158 000 Ft

0 Ft

8 318 000 Ft

Önerő

2 000 000 Ft

4 000 000 Ft

1 856 000 Ft

0 Ft

7 856 000 Ft

NKTH Támogatás

4 000 000 Ft

8 000 000 Ft

6 000 000 Ft

6 000 000 Ft

24 000 000 Ft

Önerő

4 000 000 Ft

8 000 000 Ft

6 000 000 Ft

6 000 000 Ft

24 000 000 Ft

NKTH Támogatás

6 500 000 Ft

14 500 000 Ft

14 500 000 Ft

14 500 000 Ft

50 000 000 Ft

Önerő

54 704 000 Ft

5 204 000 Ft

5 704 000 Ft

6 630 000 Ft

72 242 000 Ft

NKTH Támogatás

1 000 000 Ft

3 000 000 Ft

2 000 000 Ft

2 000 000 Ft

8 000 000 Ft

Önerő

1 000 000 Ft

3 000 000 Ft

2 000 000 Ft

2 000 000 Ft

8 000 000 Ft

NKTH Támogatás

2 000 000 Ft

3 000 000 Ft

3 500 000 Ft

3 500 000 Ft

12 000 000 Ft

Önerő

2 000 000 Ft

3 000 000 Ft

3 500 000 Ft

3 500 000 Ft

12 000 000 Ft

NKTH Támogatás

1 500 000 Ft

2 294 000 Ft

2 512 000 Ft

3 694 000 Ft

10 000 000 Ft

Önerő

1 500 000 Ft

2 294 000 Ft

2 512 000 Ft

3 694 000 Ft

10 000 000 Ft

NKTH Támogatás

1 000 000 Ft

2 000 000 Ft

2 000 000 Ft

3 000 000 Ft

8 000 000 Ft

Önerő

2 000 000 Ft

2 000 000 Ft

2 000 000 Ft

2 000 000 Ft

8 000 000 Ft

NKTH Támogatás

1 000 000 Ft

1 667 000 Ft

1 667 000 Ft

2 500 000 Ft

6 834 000 Ft

Önerő

1 000 000 Ft

1 667 000 Ft

1 667 000 Ft

2 500 000 Ft

6 834 000 Ft

460 206 000 Ft

597 866 000 Ft

491 678 000 Ft

506 358 000 Ft

2 028 740 000 Ft

Szegedi Tudományegyetem

MTA Szegedi Biológiai Kutatóközpont

MTA Támogatott Kutatóhelyek Irodája

Egis Gyógyszergyár Nyrt

Solvo Zrt

Diagnosticum Zrt

Kromat Kft

Creativ Labor Kft

Rytmion Kft

Kation Europa Bt

Qualicon Kht

DABIC Kht

Összesen

45


Költségek megoszlása alprogramonként 2008-ban

Központi költség 12% 5. Alprogram 9%

4. Alprogram 14%

1. Alprogram 25%

1. Alprogram 2. Alprogram 3. Alprogram 4. Alprogram 5. Alprogram Központi költség 3. Alprogram 19%

2. Alprogram 21%

Nagyobb műszerberuházások listája időrendben 2008-2009-ben: Gyártó Auro-Science Consulting Ltd. Gerstel Gmbh Auro-Science Consulting Ltd. Horiba Jobin Yvon Exicom Systemhouse Ltd. Acéllabor Kft. Colombus Instruments RK Tech Ltd. Bio-Rad Ltd. Proteome software Bio-Rad Hungary Ltd. Experimetria Ltd. Experimetria Ltd. Ariadne Software for Systems Biology

46

Megnevezés Bruttó érték sokoldalú, nagy érz.lézer forrású képalk. berendezés 16 384 000.MultiPurpose mintaadagoló 4 598 593.fluoreszcencia intenzitásmérő berendezés 2 400 000.imaging spektrométer 2 200 000.Számítógép klaszter (12db gép) 1 987 956.IVC állvány, ventillátorral 1 963 200.mozgásregisztráló készülék 1 700 203.HBO 100 lámpaház 1 632 820.mérőkészülék DNS vizsgálathoz 1 560 000.szoftver 1 210 202.kromatográf 949 680.stimulátor, szervkádrendszer szoftverrel 874 600.stimulátor, szervkádrendszer szoftverrel 792 300.licensz 103 897.-


TELJESÍTMÉNYINDIKÁTOROK Terv 3 1 1 4 4 4 1

Termék: Beküldött hazai szabadalom: Beküldött nemzetközi szabadalom PCT: Új szolgáltatás: Új technológia: Alkalmazás: Prototípus:

Tény 12 3 1 11 13 10 1

MONITORING ÉRTÉKELÉSI RENDSZER Munkacsoportok értékelési rendszere Háromhavonta minden munkacsoport beszámol az operatív vezetőknek az elvégzett munkáról. Nem megfelelő beszámoló esetén a DNT vezetése jogosult először utófinanszírozottá tenni a csoportot, újabb nem teljesítés esetén pedig kizárhatja a munkacsoportot. Altémák értékelési rendszere Minden altémavezető félévente beszámol az altémához tartozó munkacsoportok munkájáról. Az értékeléshez a következő szempontrendszert alkalmazzuk: 1. Tudományos eredmények: A kutatócsoport annyi pontot kap, amennyi a DNT kutatási/fejlesztési témáiból írt cikkek impakt faktora. Kongresszusi előadásokat, összefoglalókat nem számítjuk be. 2. Benyújtott szabadalmak: Minden egyes benyújtott szabadalomért 20 pontot kap a munkacsoport. 3. Spin-off cégek alapítása: A kockázatvállalást jutalmazva minden spin-off cégbe való belépésért, amelyet a munkacsoport vagy valamelyik tagja alapít, 30 pont jár. 4. Részvétel EU-6 vagy EU-7 keretprogramban: Minden egyes sikeres EU-network pályázatért 30 pont jár. Ha a nyertes pályázat benyújtója és koordinátora a DNT adott munkacsoportja, akkor ezt 40 ponttal jutalmazzuk. RÖVIDÍTÉSEK: ABC AL50 ÁOK DABIC DNT GGC GLP GYTK IT JGYTFK K+F KKV

„ATP-Binding Casette” transzportfehérjék „Abszolut Letális 50%” dózis Általános Orvostudományi Kar Dél-Alföldi Bio-Innovációs Centrum Kht. Délalföldi Neurobiológiai Tudásközpont Global Growth Companies Good Laboratory Practice Gyógyszerésztudományi Kar Igazgató Tanács Juhász Gyula Tanárképző Főiskolai Kar Kutatás és Fejlesztés Kis- és Középnagy Vállalat

MTA MTA-SZBK MTA-TKI NKTH NO PCR SZBK SZTE TTK

Magyar Tudományos Akadémia Magyar Tudományos Akadémia Szegedi Biológiai Központ Magyar Tudományos Akadémia Támogatott Kutatóhelyek Irodája Nemzeti Kutatási és Technológiai Hivatal Nitrogén monoxid Polynucleotid Chain Reaction Szegedi Biológiai Központ Szegedi Tudományegyetem Természettudományi Kar

47


H-6725 Szeged, Szikra u. 2. Tel.: +36-62/546-825 • Fax: +36-62/546-826 E-mail: [email protected] Typográfia: Csécsei Károly, E-press Nyomda Kft.

ÉVES JELENTÉS Pázmány Péter program. A projekt a Nemzeti Kutatási és Technológiai Hivatal támogatásával valósult meg

Recommend Documents