Dvojitě negativní CD3+T lymfocyty v rutinní praxi imunologické laboratoře Tinavská P.1, Koldová K.1, Sonnbergerová M.1, Mallátová N.3, Filipová P. 2, Chrdle A.2, Žampach P.1
imunologie Nemocnice Č. Budějovice a. s. oddělení Nemocnice Č. Budějovice a. s. 3 Laboratoř parazitologie Nemocnice Č. Budějovice a. s. 1 Laboratoř
2 Infekční
CD3+CD4-CD8- T lymfocyty
82 % CD3+ T lymf 40 % CD4+ T lymf 21 % CD8+ T lymf 61 % CD4+ a CD8+ 21 % DN CD3+ T lymf 26 % T lymfocyty
CD3+ T lymfocyty malá populace T lymfocytů s odlišným typem buněčného antigenně specifického T receptoru tvořeného glykoproteinovými řetězci tvoří 1 – 10 % CD3+ T lymfocytů cirkulujících v lidské krvi (tzv. V9V2 T lymfocyty) hojně (10 – 40 %) se nachází ve střevní sliznici, kde tvoří populaci tzv. intraepiteliálních lymfocytů (V1 IEL) a hrají významnou roli při patogenezi zánětlivých onemocnění (↑ celiakie)
T lymfocyty na pomezí vrozené a adaptivní imunity Znaky vrozené imunity
Znaky adaptivní imunity Antigenně
specifický
TCR,
který
Rozpoznávají svým TCR jiný typ antigenů než
vzniká přestavbou jeho genů za
T buňky – konzervované struktury malých
vzniku odlišných klonů těchto buněk.
organických látek obsahující pyrofosfátovou skupinu
Imunologická paměť u T lymfocytů
(IsoPentenylPyrofosfát – běžný metabolit buněk obratlovců
(exprese CD45RO molekuly u buněk s V2 genovým segmentem).
HydroxyMethylButenylPyrofosfát - metabolit typický pro bakterie a nižší eukaryonty)
Cytotoxická aktivace a produkce prozánětlivých cytokinů (IFN-, IL-2, IL-4, TNF- ) podobná jako u T buněk.
→ ve vazbě s butyrofilinem 3A1 (CD277). Exprimují PRR (TLR, NLR) a aktivované T lymfocyty získávají vlastnosti profesionálních APC.
T lymfocyty jako most mezi vrozenou a specifickou imunitou Rychlé rozpoznání „signálu nebezpečí“ – HMBPP, prozrazující přítomnost potencionálně škodlivých mikroorganismů:
bakterie (Brucella melitensis, Mycobacterium tuberculosis, Listeria monocytogenes, Francisella tularensis) Intracelulární patogeny
viry (HIV, EBV, HSV)
paraziti (Plasmodium falciparum, Leishmania donovani, Toxoplasma gondii)
Rozpoznávají molekuly IPP na vlastních abnormálních buňkách (poškozených, stresovaných, nádorových). Stimulované T lymfocyty zahajují komplexní obranné reakce – lokalizace a postupná eliminace infikovaných či abnormálních buněk – vlastní cytotoxické mechanismy či aktivace dalších efektorových T buněk.
CD3+CD4-CD8- T lymfocyty v rutinní praxi naší cytometrické laboratoře běžně u dětských pacientů (10 – 15 % DNT) skupina imunologických pacientů s vysokým % DNT lymfocytů bez jasné klinické asociace v BAL pacienta s nejasnou diagnózou plicního onemocnění (40 % DNT) v hypocelulární KD pacientky s trombocytopenií (lymfocytóza, vysoký podíl NK buněk, 13 % DNT) u pacientů s tularémií ( 10%)
Imunofenotypová analýza těchto buněk prokázala přítomnost CD T lymfocytů.
T lymfocyty v periferní krvi pacientů intracelulární infekcí Mykobakteriální
Toxoplazmóza
infekce
T. gondii
M. tuberculosis M. bovis M. avium M. kansasii
Tularémie
M. xenopi
F. tularensis
Toxoplazmóza titr protilátek v KFR > 32 a /nebo pozitivní specifické IgM
Mykobakteriální infekce mikroskopické a kultivační potvrzení infekce
Tularémie sérologické potvrzení specifických protilátek
Srovnání DNT lymfocytů u pacientů s intracelulární infekcí
Závěr U pacientů s intracelulární infekcí T. gondii se DNT lymfocyty pohybovaly v relativních počtech do 10%. Stejně tak u pacientů s mykobakteriálními infekcemi nebyly zjištěny v periferní krvi zvýšené počty DNT lymfocytů. Pacienti s tularemií měli již na počátku infekce vyšší až vysoké zastoupení DNT lymfocytů.
Zvýšený počet DNT = CD3+CD4-CD8- T lymfocyty při hodnocení stavu buněčné imunity se jeví jako vhodný pomocný ukazatel pro včasnou diagnostiku a účinné nasměrování léčby tularémie zejména s nejasným klinickým obrazem a opožděnou sérologickou odpovědí.
Kazuistika, V. T., žena 48 let I. Nevýznamná epidemiologická anamnéza (ve stabilním partnerském svazku, cestovní anamnéza negativní – před 2 lety v Egyptě, pracuje jako servírka, do lesa nechodí, poštípání hmyzem ani klíštěte si nevšimla, se zvěřinou do kontaktu nepřichází). Začátkem září 2013 byla hospitalizována na infekčním oddělení pro náhle vzniklé febrilní onemocnění s teplotami okolo 39°C, s nočním pocením, bolestmi svalů, pocitem schvácenosti a výraznou lymfadenopatií v pravém třísle bez odezvy na běžná ATB (Klacid, Augmentin) k podrobnějšímu vyšetření včetně odběru uzliny.
Kazuistika, V. T., žena 48 let II. Dif. diagnostická rozvaha – hluboko uložená bakteriální či atypická infekce typu tularémie nebo lymfoproliferativní onemocnění. V laboratoři byly zjištěny zvýšené markery zánětu – leukocytóza (20.109 leu/l) s normálním krevním diferenciálním obrazem, vysoký CRP (61 mg/l), zvýšený -2-mikroglobulin (3,37 mg/l), pozitivní CD64 marker na granulocytech (99 %), jaterní testy v normě, hemokultury negativní, sérologie na tularémii negativní. Vyšetření buněčné imunity na počátku onemocnění prokázalo 14 % DNT lymfocytů a bylo vysloveno podezření na suspektní tularémii.
Kazuistika, V. T., žena 48 let III. Na pravém lýtku byla shledána drobná ranka o velikosti do 4 mm s drobnou expresí hnisu bez okolní reakce. UZ vyšetření prokázalo přítomnost uzlin na stehně a v třísle s výraznými změnami s tendencí ke kolikvaci.
Kazuistika, V. T., žena 48 let IV. Po upravení ATB léčby (chinolon - ciprofloxacin) pomalé subjektivní zlepšování. Histologické vyšetření uzliny prokázalo zánětlivý infiltrát bez malignity. Opakovanými sérologickými testy s odstupem 14 dnů byla doložena pozitivita specifických protilátek proti F. tularensis.
Potvrzena glandulární forma tularémie.
Děkuji za pozornost
F. tularensis: snímek z elektronového mikroskopu.
Kolonie F. tularensis na různých kultivačních půdách:
Zvětšení 15549x. NIAID, Laboratoř intracelulárního
(A (McCoyova půda), (B) čokoládový agar,
parazitismu.
(C) krevní agar, (D) agar bohatý na cystein
