N:

cobas® HCV Mennyiségi nukleinsavteszt cobas® 4800 rendszeren való használatra

In vitro diagnosztikai célra

cobas® HCV

120 Tests

P/N: 06979602190

cobas® HBV/HCV/HIV-1 Control Kit

10 Sets

P/N: 06979572190

cobas® 4800 System Sample Preparation 240 Tests Kit 2 960 Tests

P/N: 06979513190 P/N: 06979521190

cobas® 4800 System Wash Buffer Kit

240 Tests 960 Tests

P/N: 05235863190 P/N: 05235871190

cobas® 4800 System Specimen Diluent 2

240 Tests

P/N: 06979556190

cobas® 4800 System Lysis Kit 2

240 Tests 960 Tests

P/N 06979530190 P/N 06979548190

®

cobas HCV

TARTALOMJEGYZÉK A felhasználás célja A teszt összegzése és ismertetése Háttér ................................................................................................................................................... 4 A HCV-teszt elméleti alapjai ................................................................................................................ 5 A vizsgálat háttere................................................................................................................................ 5 Az eljárás alapelvei .............................................................................................................................. 5 Anyagok és reagensek Reagensek ........................................................................................................................................... 6 A reagensek tárolási és kezelési feltételei ......................................................................................... 11 További szükséges anyagok .............................................................................................................. 11 Szükséges, de nem biztosított eszközök és szoftverek ..................................................................... 12 Óvintézkedések és kezelési követelmények Figyelmeztetések és óvintézkedések ................................................................................................ 12 Helyes laboratóriumi gyakorlat ........................................................................................................... 13 Reagensek kezelése .......................................................................................................................... 13 Szennyez dés .................................................................................................................................... 13 Felhasználhatóság ............................................................................................................................. 14 Hulladékkezelés ................................................................................................................................. 14 Kiömlés és tisztítás ............................................................................................................................ 14 Minták levétele, szállítása és tárolása ............................................................................................... 15 Mintavétel .................................................................................................................................. 15 Minták szállítása, tárolása és stabilitása ................................................................................... 15 Használati utasítás A teszt futtatása ................................................................................................................................. 16 Mintafeldolgozási térfogat ......................................................................................................... 16 Futtatási mennyiség .................................................................................................................. 17 Munkafolyamat .......................................................................................................................... 17 Eredmények Min ségellen rzés és az eredmények érvényessége ....................................................................... 19 Kontrolljelz k ...................................................................................................................................... 19 Az eredmények értelmezése ............................................................................................................. 20 Az eljárással kapcsolatos korlátozások ............................................................................................. 21 A nem klinikai teljesítmény értékelése A fontosabb teljesítményjellemz k..................................................................................................... 22 WHO Nemzetközi standard ...................................................................................................... 22 07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

2

®

cobas HCV

Lineáris tartomány .................................................................................................................... 24 Pontosság – laboratóriumon belül ............................................................................................ 27 Genotípus szerinti ellen rzés ................................................................................................... 28 Specificitás ................................................................................................................................ 29 Módszerkorreláció ..................................................................................................................... 32 Mátrixekvivalencia – EDTA-s plazma kontra szérum ............................................................... 33 Teljes rendszerhiba ................................................................................................................... 33 Keresztszennyez dés ............................................................................................................... 33 További információk A teszt legfontosabb tulajdonságai .................................................................................................... 34 Szimbólumok...................................................................................................................................... 35 Gyártó és forgalmazók ....................................................................................................................... 36 Védjegyek és szabadalmak ............................................................................................................... 36 Szerz i jog ......................................................................................................................................... 36 Hivatkozások ...................................................................................................................................... 37 Dokumentumverzió ............................................................................................................................ 39

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

3

®

cobas HCV

A felhasználás célja A cobas® HCV egy in vitro nukleinsav-amplifikációs teszt a hepatitis C vírus (HCV) kimutatására és mennyiségi meghatározására HCV-vel fert zött személyek RNS-ének, humán EDTA-s plazmájában vagy szérumában. A HCV 1–6-os genotípusát tartalmazó mintákat validálták a teszttel való kimutatásra és mennyiségi meghatározásra. A teszt a következ populációkban használható a HCV-fert zés diagnózisának támogatására: HCV-antitestre igazoltan pozitív, májbetegséggel diagnosztizált betegek, a gyanú szerint aktív HCV-fert zésben szenved és HCV-antitestre igazoltan pozitív betegek és HCV-fert zésveszélynek kitett egyének HCV-antitestekkel. A HCV RNS kimutatása jelzi a vírusreplikációt, és ekképpen igazolja az aktív fert zést. A vizsgálat célja, hogy segítséget nyújtson antivirális kezelésben résztvev , HCV-fert zésben szenved betegek kezelésében. A vizsgálat a HCV RNS szintjét méri kiinduláskor, majd kezelés közben, és a HCVkezelésre adott tartós és nem tartós virológiai válasz valószín ségének megítélésére használható. Az eredményeket az összes vonatkozó klinikai és laboratóriumi eredménnyel együtt kell értelmezni.

A teszt összegzése és ismertetése Háttér Tudomásunk szerint a HCV a poszttranszfúziós hepatitis esetek 90-95%-áért els sorban felel s kórokozó.1–4 A HCV egyszálú, pozitív RNS-t tartalmazó vírus, amelynek genomja mintegy 3000 aminosavat kódoló megközelít en 9500 nukleotidot tartalmaz. Mint vérrel terjed vírus, a HCV vérrel és vérkészítményekkel átvihet . A vér HCV-sz vizsgálatainak széleskör bevezetése jelent sen csökkentette a transzfúzióval kapcsolatos hepatitis kockázatát. A HCV-fert zés gyakorisága az intravénás kábítószer-használattal kapcsolatosan a legnagyobb, kisebb mértékben pedig egyéb b rön keresztüli kitettséggel kapcsolatosan.4 A HCV RNS mennyiségi meghatározása a kiindulási vírusmennyiségek mérése és a kezelés monitorozása során megfelel módszernek bizonyult a peginterferon és ribavirin kombinációjával (pegIFN/RBV) történ terápiára adott antivirális válasz hatékonyságának demonstrálására.5–9 A HCV-fert zés kezelésére vonatkozó irányelvek10,11 szerint a HCV RNS mennyiségi vizsgálata ajánlott az antivirális kezelés megkezdése el tt, adott id szakonként a kezelés során (válaszvezérelt kezelés) és 12 héttel a kezelés befejezését követ en (vagy kés bb). A kezelés célja, hogy ne legyen érzékeny teszttel kimutatható HCV RNS a kezelés befejezése után 12 héttel. Ez jelzi, hogy tartós virológiai választ (sustained virologic response – SVR) sikerült elérni.10 A víruskinetika kezelés során történ meghatározását az újonnan engedélyezett, közvetlen hatású antivirális szerekkel (direct-acting antiviral agents – DAAs), telaprevir és boceprevir proteázinhibitorokkal végzett kezeléskor a kezelés id tartamának fokozottabb mérték személyre szabásához alkalmazták.12–15

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

4

®

cobas HCV

A HCV-teszt elméleti alapjai A HCV-antitestek jelenléte arra utal, hogy az adott személy HCV-fert zött. Mindamellett magából a HCVantitestre pozitív állapotból nem lehet következtetni a fert zés akut, krónikus vagy lezajlott állapotára. A szérumban vagy plazmában kimutatott HCV RNS folyamatban lév vírusszaporodásra utal, így felhasználható a tartós HCV-fert zéssel érintett betegek kisz résére. Mivel egyfel l egyre több nagy hatékonyságú HCV-specifikus DAA áll rendelkezésre, többek között második generációs proteázinhibitorok, polimerázinhibitorok és NS5A-inhibitorok, másfel l dinamikus és széleskör gyógyszeres HCV-kezeléseket fedeznek fel, a víruskoncentráció monitorozása marad a f laboratóriumi vizsgálat annak meger sítésére, hogy tartós virológiai választ sikerült elérni DAA-alapú kezelésekkel.16-21 Összefoglalva tehát a cobas® HCV egy mennyiségi teszt a HCV RNS kimutatására, a fennálló fert zés diagnosztizálására és a víruskinetika meghatározására mind a klinikai vizsgálatokat végz , mind a HCVbetegek rutin orvosi ellátását támogató laboratóriumokban.

A vizsgálat háttere A cobas® HCV a cobas® 4800 rendszeren végzett mennyiségi nukleinsavteszt. A cobas® HCV lehet vé teszi a HCV RNS kimutatását és mennyiségi meghatározását fert zött betegek EDTA-s plazmájában vagy szérumában. A rendszer kett s jelölés próbákkal végzi a kimutatást és mennyiségi meghatározást, de nem különbözteti meg a HCV 1–6-os genotípusait. A teszt a víruskoncentrációt egy HCV ellen („Armored” technológiával) nem felvértezett RNS mennyiségi standardhoz (RNA QS) képest méri, amelyet az egyes mintákhoz kell adni a minta-el készítés során. Az RNA QS egyben bels kontrollként is m ködik a teljes minta-el készítés és PCR-amplifikálás monitorozására. Ezen felül a teszt három küls kontrollt használ: egy magas titer pozitívot, egy alacsony titer pozitívot és egy negatívot.

Az eljárás alapelvei A cobas® HCV teljesen automatizált minta-el készítésen (nukleinsav-extrahálás és -tisztítás) alapul, amelyet PCR-amplifikálás és -kimutatás követ. A cobas® 4800 rendszer a cobas x 480 készülékb l és a cobas z 480 analizátorból áll. Az automatizált adatkezelést a cobas® 4800 szoftver végzi, amely az összes teszthez a következ eredmények egyikét rendeli: „target not detected” (nem kimutatható target), „< LLoQ” (alsó mennyiségi meghatározási határ), „> ULoQ” (fels mennyiségi meghatározási határ) vagy „HCV RNA detected” (HCV RNS kimutatható), egy érték a LLoQ × ULoQ lineáris tartományban. Az eredményeket át lehet tekinteni közvetlenül a rendszer képerny jén, de exportálhatók vagy jelentésként nyomtathatók is. A rendszer a betegek mintáiból származó nukleinsavakat, küls kontrollokat és hozzáadott „Armored” RNA QS molekulákat egyszerre extrahálja. Összegezve, a mintába proteináz és lízisreagens kerül, és ennek hatására a vírus nukleinsavai felszabadulnak. A felszabadult nukleinsavak a hozzáadott mágneses üvegpartikulumok szilikonfelületéhez kötnek. A kötetlen anyagokat és szennyez déseket, például a denaturált fehérjéket, sejttörmeléket és lehetséges PCR-inhibitorokat az ezt követ mosópufferes lépések eltávolítják, és egy eluáló puffer magasabb h mérsékleten eluálja a tisztított nukleinsavakat a mágneses üvegpartikulumokról. A teszt a betegt l vett mintában a célnukleinsavak szelektív amplifikálását a célvírusra specifikus forward és reverz primerekkel éri el, amelyeket a HCV nagy fokban konzervált régióiból választ. Az RNA QS szelektív amplifikálását a teszt szekvenciaspecifikus forward és reverz primerekkel éri el, amelyeket úgy választ, hogy ne legyenek homológok a HCV genomjával. A teszt mind a reverz transzkripcióhoz, mind a PCRamplifikáláshoz h stabil DNS-polimerázt használ. A Master Mix munkareagensek dezoxitimidin-trifoszfát (dTTP) helyett dezoxiuridin-trifoszfátot (dUTP) tartalmaznak, amely beépül az újonnan szintetizált DNS-be (amplikon).22–24 A PCR els denaturálási lépése el tt a Master Mix reagensekben lév AmpErase az el PCR-futtatásokból származó minden szennyez amplikont PCR-templátként inaktivál. Az AmpErase 07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

5

®

cobas HCV

katalizátorként szerepel az uracil DNS-b l eltávolításában, de nem hat az RNS-re vagy a természetes DNS-re, amelyek nem tartalmaznak uracilt. A PCR ezt követ ciklusaiban kialakuló amplikon nem inaktiválódik, mert az AmpErase a PCR annealing és denaturálási fázisában inaktív. A cobas® HCV Master Mix a HCV-targetszekvenciákra specifikus kett s jelölés próbákat tartalmaz, valamint egy próbát az RNA QS-hez. A próbákat fluoreszcens targetspecifikus jelz festékek jelölik, ami lehet vé teszi a HCV-target és az RNA QS egyszerre történ kimutatását két különböz kimutatási csatornán.25,26 Amikor az érintetlen próba fluoreszcens jelei nem köt dnek a targetszekvenciához, azokat egy blokkolófesték elnyomja. A PCR-amplifikálás minden egyes lépése során a próbák a specifikus, egyszálú DNS-templáthoz hibridizálnak. Ennek eredményeként a próbát a DNS-polimeráz 5'–3'-nukleázaktivitása hasítja, így a jelz festék és a blokkolófesték elválik, és fluoreszcens jel keletkezik. Minden PCR-ciklus során megn a hasított próbák mennyisége, és így növekszik a jelz festékb l származó összesített jel is. A PCR-termékek valós idej kimutatása és megkülönböztetése a felszabadult, vírustargeteket és RNA QS-t reprezentáló jelz festékek fluoreszcencenciájának mérésével megy végbe.

Anyagok és reagensek Reagensek Minden felbontatlan reagenst és kontrollt A reagensek tárolási és kezelési feltételei táblázat ajánlásai szerint tároljon. Készlet

Összetev k és reagensek

Készletenkénti mennyiség

MMX R1

a

Biztonsági jelzés és figyelmeztetés N/A

®

(cobas Master Mix reagens 1) Mangán-acetát, kálium-hidroxid, < 0,1% nátrium-azid

10 × 1,75 ml

HCV MMX R2

N/A

®

(cobas HCV Master Mix reagens 2) ®

cobas HCV 120 teszt (P/N: 06979602190)

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

Tricin puffer, kálium-acetát, 18% dimetilszulfoxid, glicerin, < 0,1% Tween 20, EDTA, < 0,12% dATP, dCTP, dGTP, dUTP, < 0,01% HCV-primerek, < 0,01% Quantitation Standard (mennyiségi standard) forward és reverz primer, < 0,01% fluoreszcensen jelölt, a HCV-re és a mennyiségi standardra specifikus oligonukleotid-próbák, < 0,01% oligonukleotid aptamer, < 0,01% Z05D DNSpolimeráz (mikrobiális), < 0,01% AmpErase (uracil-N-glikoziláz) enzim (mikrobiális), < 0,1% nátrium-azid

10 × 0,5 ml

6

®

cobas HCV

Készlet



RNA QS

a

Biztonsági jelzés és figyelmeztetés N/A

®

(cobas RNA mennyiségi standard) Trisz puffer, < 0,05% EDTA, < 0,001% nem 10 × 1,75 ml HCV-hez kapcsolódó Armored RNSkonstrukció primer és próbaspecifikus szekvenciarégiókkal (nem fert RNS MS2 bakteriofágban), < 0,1% nátrium-azid HBV/HCV/HIV-1 L(+)C ® (cobas HBV/HCV/HIV-1 alacsony pozitív kontroll) < 0,001% szintetikus (Armored) HIV-1 M csoport RNS MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva, < 0,001% szintetikus (plazmid) HBV DNS Lambda bakteriofág burokfehérjébe csomagolva, < 0,001% szintetikus (Armored) HCV RNS MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva, normál humán plazma, engedélyezett vizsgálatok alapján nem reaktív HIV 1/2, HCV-, HBsAg-, valamint HBc-antitestre; a HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS nem mutatható ki PCR-eljárásokkal. ® 0,1% ProClin 300 tartósítószer

®

cobas HBV/HCV/HIV-1 Control Kit 10 készlet (P/N: 06979572190)

HBV/HCV/HIV-1 H(+)C ® (cobas HBV/HCV/HIV-1 magas pozitív kontroll) < 0,001% szintetikus (Armored) HIV-1 M csoport RNS MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva, < 0,001% szintetikus (plazmid) HBV DNS Lambda bakteriofág burokfehérjébe csomagolva, < 0,001% szintetikus (Armored) HCV RNS MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva, normál humán plazma, engedélyezett vizsgálatok alapján nem reaktív HIV 1/2, HCV-, HBsAg-, valamint HBc-antitestre; a HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS nem mutatható ki PCR-eljárásokkal. ® 0,1% ProClin 300 tartósítószer

10 × 0,75 ml

Figyelem H317 Allergiás b rreakciót válthat ki. P261 Kerülje a por/füst/gáz/köd/g zök/ permet belélegzését. P272 Szennyezett munkaruhát tilos kivinni a munkahely területér l. P280 Véd keszty használata kötelez . P333 + P313 B rirritáció vagy kiütések megjelenése esetén: orvosi ellátást kell kérni. P362 + P364 A szennyezett ruhát le kell vetni és az újbóli használat el tt ki kell mosni. P501 A tartalom/edény elhelyezése hulladékként: jóváhagyott hulladékkezelési üzemben. 55965-84-9 keverék: 5-klór-2-metil4-izotiazolin-3-on [EC 247-500-7] és 2-metil-2H-izotiazol-3-on [EC 220-239-6] (3:1)

10 × 0,75 ml

(–) C ®

(cobas negatív kontroll 2) Normál humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HIV 1/2, HCV-, HBsAg-, valamint HBc-antitestre; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-eljárásokkal nem mutatható ki ® < 0,1% ProClin 300 tartósítószer

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

10 × 0,75 ml

7

®

cobas HCV

Készlet



MGP 2

Biztonsági jelzés és a figyelmeztetés N/A

®

(cobas 4800 MGP reagens 2) ® Mágneses üvegpartikulumok, trisz puffer, cobas 4800 System Sample Preparation Kit 2 0,1% metil-4-hidroxibenzoát, < 0,1% nátrium-azid 240 teszt

(P/N: 06979513190)

10 × 8 ml

EB 2 ®

(cobas 4800 eluáló puffer 2)

10 × 17 ml

Trisz puffer, 0,2% metil-4-hidroxi-benzoát MGP 2

N/A ®

(cobas 4800 MGP reagens 2) ®

Mágneses üvegpartikulumok, trisz puffer, cobas 4800 System Sample Preparation Kit 2 0,1% metil-4-hidroxibenzoát, < 0,1% nátrium-azid 960 teszt (P/N: 06979521190)

10 × 16 ml

EB 2 ®

(cobas 4800 eluáló puffer 2)

10 × 17 ml

Trisz puffer, 0,2% metil-4-hidroxi-benzoát ®

cobas 4800 System Wash Buffer Kit 240 teszt (P/N: 05235863190)

N/A

WB Nátrium-citrát-dihidrát, 0,05% N-metilizotiazolon-HCl

10 × 55 ml

®

cobas 4800 System Wash Buffer Kit 960 teszt (P/N: 05235871190)

N/A

WB Nátrium-citrát-dihidrát, 0,05% N-metilizotiazolon-HCl

10 × 200 ml

®

cobas 4800 System Specimen Diluent 2 240 teszt (P/N: 06979556190)

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

N/A

SD 2 Trisz puffer, 0,1% metil-4-hidroxibenzoát, < 0,1% nátrium-azid

10 × 8 ml

8

®

cobas HCV

Készlet



P2 ® (cobas 4800 proteáz 2) Trisz puffer, < 0,05% EDTA, kalcium-klorid, kalcium-acetát, 8% (m/V) proteináz

10 × 1,0 ml

®

cobas 4800 System Lysis Kit 2 240 teszt (P/N: 06979530190)

LYS 2 ® (cobas 4800 lízispuffer 2) 43% (m/V) guanidin-tiocianát, 5% (m/V) polidokanol, 2% (m/V) ditiotreitol, nátrium-citrát-dihidrát

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

10 × 27 ml

a

Biztonsági jelzés és figyelmeztetés

Veszély H302+H332 Lenyelve vagy belélegezve ártalmas. H315 B rirritáló hatású. H318 Súlyos szemkárosodást okoz. H334 Belélegezve allergiás és asztmás tüneteket, és nehéz légzést okozhat. H412 Ártalmas a vízi él világra, hosszan tartó károsodást okoz. EUH032 Savval érintkezve nagyon mérgez gázok képz dnek. P261 Kerülje a por/füst/gáz/köd/g zök/ permet belélegzését. P280 Véd keszty /szemvéd /arcvéd használata kötelez . P284 Légzésvédelem használata kötelez . P305 + P351 + P338 + P310: SZEMBE KERÜLÉS ESETÉN: Több percig tartó óvatos öblítés vízzel. Adott esetben a kontaktlencsék eltávolítása, ha könnyen megoldható. Az öblítés folytatása. Azonnal forduljon TOXIKOLÓGIAI KÖZPONTHOZ vagy orvoshoz. P342 + P311 Légzési problémák esetén: Forduljon TOXIKOLÓGIAI KÖZPONTHOZ vagy orvoshoz. P362 + P364 A szennyezett ruhát le kell vetni és az újbóli használat el tt ki kell mosni.

9

®

cobas HCV Összetev k és reagensek

Készlet

P2 ® (cobas 4800 proteáz 2) Trisz puffer, < 0,05% EDTA, kalcium-klorid, kalcium-acetát, 8% (m/V) proteináz

Tesztenként i mennyiség

10 × 1,0 ml

®

cobas 4800 System Lysis Kit 2 960 teszt (P/N: 06979548190)

LYS 2 ®

(cobas 4800 lízispuffer 2) 10 × 84 ml 43% (m/V) guanidin-tiocianát, 5% (m/V) polidokanol, 2% (m/V) ditiotreitol, nátrium-citrát-dihidrát

a

a

Biztonsági jelzés és figyelmeztetés

Veszély H302+H332 Lenyelve vagy belélegezve ártalmas. H315 B rirritáló hatású. H318 Súlyos szemkárosodást okoz. H334 Belélegezve allergiás és asztmás tüneteket, és nehéz légzést okozhat. H412 Ártalmas a vízi él világra, hosszan tartó károsodást okoz. EUH032 Savval érintkezve nagyon mérgez gázok képz dnek. P261 Kerülje a por/füst/gáz/köd/g zök/ permet belélegzését. P280 Véd keszty /szemvéd /arcvéd használata kötelez . P284 Légzésvédelem használata kötelez . P305 + P351 + P338 + P310: SZEMBE KERÜLÉS ESETÉN: Több percig tartó óvatos öblítés vízzel. Adott esetben a kontaktlencsék eltávolítása, ha könnyen megoldható. Az öblítés folytatása. Azonnal forduljon TOXIKOLÓGIAI KÖZPONTHOZ vagy orvoshoz. P342 + P311 Légzési problémák esetén: Forduljon TOXIKOLÓGIAI KÖZPONTHOZ vagy orvoshoz. P362 + P364 A szennyezett ruhát le kell vetni és az újbóli használat el tt ki kell mosni.

A termék biztonsági címkéi megfelelnek az EU GHS el írásainak.

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

10

®

cobas HCV

A reagensek tárolási és kezelési feltételei Tárolási mérséklet

Reagens

Tárolási id

®

2–8 °C

A jelölt lejárati dátumig stabil

®

2–8 °C


®

2–8 °C


®

15–25 °C


®

2–8 °C


®

2–8 °C


cobas HCV cobas HBV/HCV/HIV-1 Control Kit cobas 4800 System Sample Preparation Kit 2 cobas 4800 System Wash Buffer Kit cobas 4800 System Specimen Diluent 2 cobas 4800 System Lysis Kit 2 Ne fagyassza le a reagenseket.

További szükséges anyagok Anyagok

P/N

®

06884008001

®

cobas 4800 rendszer AD (kislyukú) lemeze, 0,3 ml

05232724001

Zárófólia-felhelyez

04900383001

CORE hegyek, 1000 µl, 96-os állványban

04639642001

200 ml-es reagenstároló

05232759001

50 ml-es reagenstároló

05232732001

24-pozíciós hordozó

04639502001

32-pozíciós hordozó

04639529001

Szilárdhulladék-zacskó

05530873001 (kicsi) vagy 04691989001 (nagy)

Hamilton STAR m anyag csúsztató

04639669001

Egyszer használatos keszty k, púdermentes

Bármely púdermentes egyszer használatos keszty elfogadható.

Vortex kever (egycsöves)

Bármely vortexkever elfogadható.

Centrifuga, kilendül fejes rotorral, minimum 1500 RCF

Bármely megfelel centrifuga elfogadható.

cobas 4800 rendszer kivonási (mély lyukú) lemeze, 2,0 ml

A külön beszerezhet anyagokkal kapcsolatos további információkért forduljon a Roche helyi képvisel jéhez.

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

11

®

cobas HCV

Szükséges, de nem biztosított eszközök és szoftverek Szükséges, de nem biztosított eszközök és szoftverek ®

cobas 4800 rendszer cobas x 480 készülék cobas z 480 analizátor Vezérl egység ®

cobas 4800 System Application Software (Core) 2.1.0-ás vagy újabb verzió ®

®

cobas 4800 System cobas HCV AP 1.0.0-ás vagy újabb verzió A készülékeken használható els dleges és másodlagos mintacsövekkel ® kapcsolatos további információkat a cobas 4800 rendszer kézikönyve – 2.1-es ® ® vagy újabb szoftver, cobas HCV a cobas 4800 rendszerrel való használattal ® ® (innent l röviden: „cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HCV-hez”) cím kiadványban találja. Megjegyzés: A készülékekkel használható mintaállványok, hegyállványok, reagensállványok és lemezhordozók részletes megrendel listájáért forduljon a Roche helyi képvisel jéhez.

Óvintézkedések és kezelési követelmények Figyelmeztetések és óvintézkedések Mint minden teszteljárásnál, a helyes laboratóriumi gyakorlat alapvet a teszt megfelel kivitelezéséhez. A vizsgálat nagy analitikai érzékenysége miatt ügyeljen arra, hogy a reagensek, minták és amplifikálási keverékek szennyez dést l mentesek maradjanak. Csak in vitro diagnosztikai célra. A cobas® HCV tesztet nem értékelték ki HCV sz

tesztként vérben vagy vérkészítményekben.

Minden betegt l származó mintát fert ként, megfelel biztonságos laboratóriumi eljárásokat alkalmazva kell kezelni. Ilyeneket ír le például a Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories és a CLSI Document M29-A4.27,28 Ezt a vizsgálatot csak a fert anyagok kezelésében és a cobas® HCV és cobas® 4800 rendszer használatában jártas személy végezheti. Minden humán eredet anyagot potenciálisan fert szerint kezelni.

nek kell tekinteni, és az általános óvintézkedések

A cobas® HBV/HCV/HIV-1 kontrollkészlet emberi vérb l származó plazmát tartalmaz. A forrásanyagot engedélyezett antitest-vizsgálattal tesztelték, és nem bizonyult reaktívnak HCV-, HIV-1/2, HBsAg- és HBc-antitest jelenlétére. A PCR-eljárásokkal történ tesztelés során HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS vagy HBV DNS nem volt kimutatható. Egyetlen ismert vizsgálati módszer sem nyújthat teljes garanciát arra, hogy a humán vérkészítményekben nincs jelen fert anyag. Ügyeljen rá, hogy a mágneses üvegpartikulumok ne kerüljenek mágneses mez k közelébe. Ne fagyassza a teljes vért és az els dleges csövekben tárolt mintákat. Az optimális vizsgálati feltételek biztosítása érdekében csak a szállított vagy a megadott szükséges fogyóeszközöket alkalmazza. A biztonsági adatlapok (SDS) igény esetén hozzáférhet ek a Roche helyi irodájában. 07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

12

®

cobas HCV

A vizsgálat helyes kivitelezésének biztosítása végett szigorúan tartsa be a megadott eljárásokat és irányelveket. A megadott eljárásoktól és irányelvekt l való bármilyen eltérés befolyásolhatja a vizsgálat teljesítményét. Álpozitív eredmények fordulhatnak el , ha a minták átvitelét a mintakezelés és -feldolgozás során nem kontrollálják megfelel en. A cobas x 480 készülék, illetve cobas z 480 analizátor fert zési kockázatának csökkentésére vonatkozó további figyelmeztetéseket, óvintézkedéseket és eljárásokat a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HCV-hez” cím kiadványban találja. Ha felmerül a szennyez dés gyanúja, végezzen tisztítást és heti karbantartást a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HCV-hez” és a cobas® 4800 rendszer kézikönyve szerint. Megjegyzés: A konkrét utasításokat a „Minták levétele, szállítása és tárolása” cím részben találja.

Helyes laboratóriumi gyakorlat Ne pipettázzon szájjal. Ne egyen, igyon vagy dohányozzon a laboratórium területén. Alaposan mosson kezet a minták és a készlet reagenseinek kezelése és keszty levétel után. Viseljen szemvéd t, véd ruhát és egyszer használatos véd keszty t minden reagens kezelése közben. Ezen anyagok b rrel, szemmel és nyálkahártyával való érintkezése kerülend . Ha mégis érintkezésbe kerülnek, azonnal öblítse le b vízzel. Ellenkez esetben égés jelentkezhet. A reagenseket kiömlés esetén szárazra törlés el tt hígítsa vízzel. Gondosan tisztítson meg, és desztillált vagy ioncserélt vízb l frissen készített 0,5%-os nátriumhipoklorit oldattal (1:10 arányban hígított háztartási fehérít szer) fert tlenítsen minden laboratóriumi munkafelületet. Ezután törölje át 70%-os etanollal a felületet.

Reagensek kezelése A minták és kontrollok átvitelének elkerülése érdekében minden reagenst, kontrollt és mintát a helyes laboratóriumi gyakorlat szerint kezeljen. Felhasználás el tt szemrevételezzen minden reagensüveget és csövet, hogy nem tapasztal-e szivárgásra utaló jeleket. Szivárgás esetén azt az anyagot ne használja fel a vizsgálathoz. A cobas® 4800 lízispuffer 2 guanidin-tiocianátot tartalmaz, ami potenciálisan veszélyes vegyület. Kerülje a reagensek b rrel, szemmel vagy nyálkahártyával való érintkezését. Ha mégis el fordul érintkezés, azonnal mossa le b vízzel, mert ellenkez esetben égés történhet. A cobas® HCV, cobas® 4800 minta-el készít készlet 2 és a cobas® 4800 rendszer mintaoldószer 2 oldata tartósítószerként nátrium-azidot tartalmaz. Kerülje a reagensek b rrel, szemmel vagy nyálkahártyával való érintkezését. Ha mégis el fordul érintkezés, azonnal mossa le b vízzel, mert ellenkez esetben égés történhet. Ha a reagensek kiömlenek, szárazra törlés el tt hígítsa ket vízzel. Ügyeljen rá, hogy a guanidin-tiocianát tartalmú cobas® 4800 lízispuffer 2 ne lépjen érintkezésbe nátrium-hipoklorit-oldattal (fehérít ). Az ilyen keverékb l er sen mérgez gáz fejl dhet.

Szennyez dés Viseljen keszty t, és a minták, valamint a cobas® HCV-reagensek kezelése között váltson keszty t. A minták és kontrollok kezelése során ügyeljen a keszty k szennyezésének elkerülésére. A minták és a készlet reagenseinek kezelése közben viseljen keszty t, köpenyt és szemvéd t. Kerülje a reagensek mikrobiális és ribonukleáz-szennyezését. Álpozitív eredmények fordulhatnak el , ha a mintakezelés során nem ügyel a minták átvitelének elkerülésére. 07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

13

®

cobas HCV

Felhasználhatóság Ne használja a készleteket a lejárati id után. Ne öntse össze a reagenseket. Ne használjon egyszer használatos anyagokat a lejárati id után. Az egyszer használatos anyagokat csak egyszer szabad felhasználni. Ne használja újra azokat. Valamennyi felszerelést a gyártó utasításai szerint megfelel en karban kell tartani.

Hulladékkezelés A cobas® HCV, cobas® 4800 minta-el készít készlet 2 és a cobas® 4800 rendszer mintaoldószer 2 oldata nátrium-azidot tartalmaz (lásd: „Figyelmeztetések és óvintézkedések”). A nátrium-azid az ólom- és rézcsövekkel reakcióba lépve er sen robbanékony fém-azidokat képezhet. Amikor nátriumazid tartalmú oldatot önt ki a laboratóriumi mosogatóba, az azidlerakódás megakadályozása céljából nagy mennyiség hideg vízzel öblítse le a lefolyót. A fel nem használt reagensek és hulladék kezelésének összhangban kell lennie a megfelel országos, szövetségi, állami és helyi szabályozásokkal. Megjegyzés: A folyékony hulladék megfelel hulladékkezelésének leírását a megfelel cobas® 4800 rendszer felhasználói kézikönyvében találja.

Kiömlés és tisztítás A cobas® 4800 lízispuffer 2 guanidin-tiocianátot tartalmaz. Ha guanidin-tiocianátot tartalmazó folyadék ömlik ki, megfelel laboratóriumi tisztítószerrel és vízzel tisztítsa fel. Ha potenciálisan fert anyagot tartalmazó folyadék ömlik ki, EL SZÖR laboratóriumi tisztítószerrel és vízzel, majd 0,5%-os nátriumhipoklorit oldattal tisztítsa meg az érintett területet. Ha a cobas x 480 készülékre folyadék ömlik, a készüléket a megfelel cobas® 4800 rendszer kézikönyvének utasításai alapján tisztítsa meg. Ne használjon nátrium-hipoklorit oldatot (fehérít szert) a cobas x 480 készülék vagy a cobas z 480 analizátor tisztításához. A cobas x 480 készüléket vagy a cobas z 480 analizátort a megfelel cobas® 4800 rendszer kézikönyvének utasításai szerint tisztítsa meg.

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

14

®

cobas HCV

Minták levétele, szállítása és tárolása Megjegyzés: Valamennyi mintát fert

ágensek átvitelére alkalmasként kell kezelni.

Az összes mintát az el írt h mérséklettartományban tárolja. A minták stabilitását a magasabb h mérséklet befolyásolja. Ha a másodlagos csövekben fagyasztott mintákat használ, tartsa ket szobah mérsékleten (15–30 °C), amíg teljesen ki nem olvadnak, majd rövid ideg keverje (pl. 3–5 másodpercig vortexelje) és utána centrifugálja, hogy a minta teljes térfogata a cs aljára kerüljön.

Mintavétel A vért SST™ szérumvételez csövekbe, molekulárdiagnosztikai tesztmódszerekhez való BD Vacutainer® PPT™ plazma-el készít csövekbe vagy EDTA véralvadásgátlót tartalmazó steril csövekbe vegye le. Megjegyzés: A felhasználó a szérum vagy plazma el készítése során mindig kövesse a csövek gyártójának utasításait.

Minták szállítása, tárolása és stabilitása A SST™ szérumvételez csövekbe, molekulárdiagnosztikai tesztmódszerekhez való BD Vacutainer® PPT™ plazma-el készít csövekbe vagy EDTA véralvadásgátlót tartalmazó steril csövekbe vett teljes vért 24 órán belül 2 °C és 25 °C között lehet tárolni és/vagy szállítani a plazma- vagy szérumel készítés és az azt követ vizsgálat el tt. A plazma- vagy szérummintákat a másodlagos csövekben legfeljebb 24 órán át 2 °C és 25 °C között, legfeljebb 72 órán át 2 °C és 8 °C között vagy legfeljebb 6 héten át –18 °C h mérsékleten lehet tárolni. Az elválasztott plazma- vagy szérumminták a másodlagos csövekben –18 °C mérsékleten történ tárolás esetén legfeljebb három fagyasztás–olvasztás ciklusban maradnak stabilak fagyasztva. Ha a mintákat szállítani kell, a minták és kórokozó anyagok szállítására vonatkozó országos és/vagy nemzetközi el írásoknak megfelel en kell csomagolni és címkézni.

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

15

®

cobas HCV

Használati utasítás A teszt futtatása Mintafeldolgozási térfogat A cobas® HCV alapértelmezett mintafeldolgozási térfogata 400 µl. Kis térfogatú minták esetén választható a 200 µl-es mintafeldolgozási térfogat. Csak ebben az esetben a cobas® 4800 rendszer mintaoldószer 2 oldatát további reagensként a rendszerbe kell tölteni. A felhasználót a szoftver varázslója erre felszólítja, ha a munkasorrend létrehozásakor a „Diluted serum or plasma” (oldott szérum vagy plazma) lehet séget választotta. ®

1. ábra:

A cobas HCV munkafolyamat 1

A rendszer indítása

2

A készülék karbantartásának elvégzése

3

A tárolt minták és reagensek el vétele

4

A futtatás indítása

5

A paraméterkártyák olvasása

6

A minták betöltése

7

LIS esetén: a munkasorrend jóváhagyása LIS nélkül: a munkasorrend létrehozása

8

A fogyóeszközök (mély lyukú lemez, mikrolemez, hegyállványok) betöltése

9

A reagensek betöltése

10

A minta-el készítési futtatás indítása

11

A mikrolemez eltávolítása és lezárása

12

A mikrolemez analizátorba helyezése

13

A minták, használt reagensek és mély lyukú lemez eltávolítása

14

Az eredmények áttekintése

15

LIS esetén: az eredmények LIS-be küldése

16

Az eszközök és anyagok kivétele az analizátorból

Megjegyzés: A részletes használati utasításokat a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HCV-hez” cím kiadványban találja.

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

16

®

cobas HCV

Futtatási mennyiség A generikus minta-el készítési reagensek (cobas® 4800 rendszer minta-el készít készlet 2, cobas® 4800 rendszer líziskészlet 2 és cobas® 4800 rendszer mosófolyadék-készlet) kétféle méret készletben érhet k el. Mindkett 10 futtatásra alkalmas, egyszerre legfeljebb 24, illetve 96 mintával, amibe beletartoznak a futtatandó kontrollok és minták. A cobas® HCV egyféle méret készletben érhet el, és legfeljebb 120 (10 × 12) minta tesztelésére alkalmas (beleértve a kontrollokat és mintákat is). A cobas® HBV/HCV/HIV-1 kontrollkészlet egyféle méret készletben érhet el, és támogatja az összes lehetséges futtatási konfigurációt. Minden mintacsoporthoz egy HBV/HCV/HIV-1 alacsony pozitív kontrollt, egy HBV/HCV/HIV-1 magas pozitív kontrollt és egy negatív kontrollt kell használni. Egy tesztfuttatásban legfeljebb 93 minta és 3 kontroll megengedett. A teszteljárást részletes ismertetését a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HCV-hez” tartalmazza. A(z) 1. ábra összefoglalja az eljárást. Megjegyzés: A reagensek optimális felhasználása érdekében a generikus minta-el készítési reagenseket összesen 1–21 mintát tartalmazó futtatáshoz lehet használni (10 × 24-es tesztkészlet-méret) vagy összesen 1–93 mintához (10 × 96-os tesztkészlet-méret). A cobas® 4800 rendszer mosófolyadék-készlet, a cobas® 4800 rendszer minta-el készít készlet 2 és a cobas® 4800 rendszer líziskészlet 2 különböz méretei azonban nem kombinálhatók. Ha például a futtatás kezdetén a 96-tesztes mosópuffer reagensüvegét olvassa be, a többi minta-el készítési reagenskészletb l is 96 teszthez való reagenseket használjon.

Munkafolyamat A cobas® HCV teszt kivitelezése a cobas® 4800 szoftver teljes munkafolyamatának használatával történik. Ez minta-el készítési lépésb l áll a cobas x 480 készüléken, amit amplifikálási/kimutatási lépés követ a cobas z 480 analizátoron. A futtatás lehet csak HCV vagy vegyes mintacsoport olyan tesztekkel, amelyek ugyanazt az automatizált mintaextrahálási eljárást és PCR-profilt igénylik az amplifikáláshoz és kimutatáshoz. A szoftver tesztkiválasztó lépésében megjelennek azok a tesztek, amelyek alkalmasak a cobas® HCV teszttel együtt történ futtatásra. A részleteket a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HCV-hez” cím kiadványban találja. 1. Végezze el a rendszer indítását és karbantartását a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HCVhez” cím kiadvány „A készülék karbantartása” cím részében leírtak szerint. 2. Készítse ki az összes szükséges reagenst és fogyóeszközt. A HCV MMX R2 és MMX R1 kivételével a cobas x 480 készülékbe történ betöltés el tt minden reagensnek szoba-h mérséklet nek kell lennie. A HCV MMX R2 és MMX R1 reagenst a 2–8 °C-os tárolásból közvetlenül is kiveheti, mert a folyamatban való felhasználásuk el tt a cobas x 480 készülékben töltött id alatt felveszik a szobah mérsékletet. Megjegyzés: Minden reagens és reagenstároló vonalkóddal van ellátva, és egyszeri használatra tervezve. A cobas® 4800 szoftver nyomon követi a reagensek és reagenstárolók felhasználását, és nem fogadja el a korábban már használt reagenseket és reagenstárolókat. 3. Indítson új futtatást, és válassza a HCV munkafolyamat-típust. Háromféleképpen hozhat létre munkasorrendet: A mintaszerkeszt használatával, miel tt a mintaállványt a cobas x 480 készülékbe helyezi („Editor” gomb a f menü jobb oldalán). A munkasorrendeket szükség szerint mentheti, szerkesztheti és újratöltheti.

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

17

®

cobas HCV

A szoftvervarázsló új futtatáshoz történ használatával. Ebben az esetben a mintákat akkor tölti be a cobas x 480 készülékbe, amikor a varázsló erre felszólítja. A rendszer automatikusan beolvassa a minták vonalkódjait, és minden mintához meg kell határozni a kért eredményeket. Az intézmény LIS-rendszerének használatával. A további részleteket a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HCV-hez” cím kiadványban találja. A kért eredmények kiválasztásakor jelölje be a „HCV” lehet séget. 4. Töltse be a mintákat, és határozzon meg vagy válasszon egy munkasorrendet, illetve használja a LIS-t. A minimális mintatérfogat a cs típusától és méretét l függ. A további részleteket a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HCV-hez” cím kiadványban találja. 5. Kövesse a szoftvervarázsló utasításait, és töltse be a fogyóeszközöket. Ne töltsön be vagy távolítson el külön hegyeket részben használt hegyállványra vagy hegyállványról, mivel a szoftver nyomon követi a fennmaradó hegyek számát. Ha nincs elég hegy az adott futtatáshoz, a szoftver figyelmezteti a felhasználót. 6. Töltse be a minta-el készítési reagenseket a vonalkóddal ellátott reagenstárolókba. A reagenstárolók két méretben állnak rendelkezésre: 200 ml és 50 ml. Kövesse a szoftvervarázslót a reagenstárolók megfelel méretének kiválasztásához. A reagenstároló vonalkódja a hordozó jobb oldala felé kell, hogy nézzen. „Beolvas-beolvas-beönt-behelyez” módszerrel töltse be a minta-el készítési reagenseket: Olvassa be a reagensüveg vonalkódját. Olvassa be a reagenstároló vonalkódját. Öntse be a reagenst a tárolóba. Helyezze be a feltöltött reagenstárolót a reagenshordozó megfelel pozíciójába. Megjegyzés: A cobas® 4800 rendszer bels órával méri a reagensek készülékben töltött idejét. A LYS 2 vagy WB reagens beolvasásától számítva 1 óra áll rendelkezésre a betöltési eljárás elvégzésére és a „Start” gomb megnyomására. A „Workplace” lapon visszaszámláló jelenik meg. A rendszer a bels id korlát letelte után nem engedi a futtatás indítását. Megjegyzés: Az MGP pontos átvitelének érdekében közvetlenül a reagenstárolóba mérés el tt vortexelje vagy alaposan rázza fel az MGP-reagenscsövet. 7. Töltse be az amplifikálási/kimutatási reagenscsöveket (HCV MMX R2, MMX R1 és RNA QS), a kontrollcsöveket [HBV/HCV/HIV-1 L(+)C, HBV/HCV/HIV-1 H(+)C és (–) C] és a generikus reagenscsöveket (P2 és SD2, szükség szerint) közvetlenül a reagenshordozóba. A futtatás felesleges megszakítása és a szennyez dés megel zése érdekében pöccintse meg a reagenscsöveket, hogy ne képz djenek buborékok vagy folyadékfilmek, és a pozitív kontrollok kezelése után váltson keszty t. 8. A sikeres minta-el készítési futtatás után m köd képes lesz a „Sample Preparation results” (mintael készítés eredményei) és az „Unload” (eltávolítás) gomb. Ha kívánja, a „Sample Preparation results” gomb kiválasztásával áttekintheti az eredményeket, majd válassza ki az „Unload” gombot a lemezhordozók eltávolításához. Az eredmények áttekintése nélkül is eltávolíthatja a lemezhordozót, ha kiválasztja az „Unload” gombot. További információkat a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HCV-hez” cím kiadványban talál. 9. Kislyukú lemez lezárása és a lemez cobas z 480 analizátorba vitele, valamint az amplifikálási és kimutatási futtatás indítása során kövesse a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HCV-hez” cím kiadvány utasításait.

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

18

®

cobas HCV

Megjegyzés: A cobas® 4800 rendszer bels órával méri az el készített minták aktivált Master Mix reagenshez adása óta eltelt id t. Az amplifikálást és kimutatást minél hamarabb, de nem kés bb mint 40 perccel a cobas x 480 készülék futásának befejezése után meg kell kezdeni. A „Workplace” lapon visszaszámláló jelenik meg. A rendszer a visszaszámláló lejárta után megszakítja a futtatást. 10. Miután egy amplifikálási és detektálási futás befejez dött, távolítsa el a kislyukú lemezt a cobas z 480 analizátorból. 11. Az eredmények áttekintése és elfogadása során kövesse a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HCV-hez” cím kiadvány utasításait.

Eredmények A cobas® 4800 rendszer automatikusan meghatározza a minták és kontrollok HCV RNS koncentrációját. A HCV RNS koncentráció mértékegysége a milliliterenkénti nemzetközi egység (IU/ml).

Min ségellen rzés és az eredmények érvényessége Minden feldolgozott mintacsoportba tartozik egy negatív kontroll (–) C és két pozitív kontroll, egy alacsony pozitív kontroll HBV/HCV/HIV-1 L(+)C és egy magas pozitív kontroll HBV/HCV/HIV-1 H(+)C. A cobas® 4800 szoftverben és/vagy jelentésben ellen rizze, hogy a csoport érvényes-e. A cobas® 4800 automatikusan érvényteleníti az eredményeket a negatív és pozitív kontrollok helytelen jelz i alapján.

Kontrolljelz k 1. táblázat:

A negatív és pozitív kontrollok kontrolljelz i

Negatív kontroll

Jelz azonosítója

Eredmény

Magyarázat

(–) C

R4803, R4804 (A kontrollcsoport sikertelen)

Invalid

Érvénytelen eredmény, vagy a negatív kontroll számított titereredménye nem negatív.

Pozitív kontroll

Jelz azonosítója

Eredmény

Magyarázat

HBV/HCV/HIV-1 L(+)C


Invalid

Érvénytelen eredmény vagy az alacsony pozitív kontroll számított titer eredménye nem esik a megadott tartományba.

HBV/HCV/HIV-1 H(+)C


Invalid

Érvénytelen eredmény vagy a magas pozitív kontroll számított titer eredménye nem esik a megadott tartományba.

Ha a mintacsoport érvénytelen, ismételje meg az egész csoport (mind a minták, mind a kontrollok) tesztelését.

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

19

®

cobas HCV

Az eredmények értelmezése Megjegyzés: Minden vizsgálat és mintacsoport érvényességét a cobas® 4800 szoftver határozza meg. Megjegyzés: Egy érvényes csoport érvényes és érvénytelen mintaeredményeket is tartalmazhat. A szoftver az érvényes csoporthoz a minták eredményeit a 2. táblázat szerint értelmezi. 2. táblázat:

Az egyes céleredmények értelmezése ®

cobas HCV Target Not Detected

< Titer Min

Titer

> Titer Maxa a

Eredményjelentés és -értékelés Nincs kimutatott HCV RNS. Az eredmény a jelentésben „HCV not detected” (nincs kimutatható HCV). A számított titer a vizsgálat alsó mennyiségi meghatározási határa (LLoQ) alatt van. Az eredmény a jelentésben „HCV detected, less than (Titer Min)” (a kimutatott HCV titere nem éri el a minimális értéket). Titer min = 1,50E+01 IU/ml (400 µl) Titer min = 2,50E+01 IU/ml (200 µl) A számított titer a teszt lineáris tartományába esik: legalább Titer Min, és legfeljebb Titer Max. Az eredmény a jelentésben: „(Titer) of HCV detected” (adott titer HCV mutatható ki). A számított titer a vizsgálat fels mennyiségi meghatározási határa (ULoQ) fölött van. Az eredmény a jelentésben „HCV detected, greater than (Titer Max)” (a kimutatott HCV titere meghaladja a maximális értéket). Titer max = 1,00E+08 IU/ml (400 µl és 200 µl)

A „minta eredménye > Titer Max” olyan kimutatott HCV-pozitív titert jelent, ami meghaladja a fels mennyiségi meghatározási határt (ULoQ). Ha mennyiségi eredményekre van szükség, az eredeti mintát hígítsa HCV-negatív EDTA-s plazmával vagy szérummal az eredeti minta típusa szerint, és ismételje meg a tesztet. Szorozza meg a mért eredményt a hígítási faktorral.

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

20

®

cobas HCV

Az eljárással kapcsolatos korlátozások 1. A cobas® HCV tesztet csak a cobas® HBV/HCV/HIV-1 kontrollkészlettel, cobas® 4800 rendszer mintael készít készlet 2, cobas® 4800 rendszer líziskészlet 2, cobas® 4800 rendszer mosófolyadék-készlet és cobas® 4800 rendszer mintaoldószer 2 oldatokkal együtt használva vizsgálták. 2. A megbízható eredmény a megfelel mintalevételen, szállításon, tároláson és feldolgozáson múlik. Kövesse a jelen használati útmutatóban és a „cobas® 4800 rendszer kézikönyve cobas® HCV-hez” cím kiadványban leírt eljárásokat. 3. A tesztet csak EDTA-s plazmával vagy szérummal való használatra validálták. Más típusú minták tesztelése pontatlan eredménnyel járhat. 4. A HCV RNS mennyiségi meghatározása a mintában jelenlév víruspartikulumoktól függ, ezért befolyásolhatják a mintavételi módszerek, betegfaktorok (azaz kor, tünetek megléte) és/vagy a fert zés stádiuma. 5. Ritkán bár, de el fordulhat, hogy a cobas® HCV primerei és/vagy próbái által lefedett virális genom nagy fokban konzervált régióiban lév mutációk következtében a vírusmennyiség kevesebbnek adódik, vagy a vírus kimutatása sikertelen lesz. 6. A vizsgálat prediktív értéke a betegség el fordulási arányától függ az adott populációban. 7. Az AmpErase enzim hozzáadása a cobas® HCV Master Mixhez lehet vé teszi a targetnukleinsav szelektív amplifikálását, ugyanakkor a reagensek és amplifikálási keverékek szennyez désének elkerüléséhez a helyes laboratóriumi gyakorlat és ezen használati utasításban meghatározott eljárások gondos betartása szükséges. 8. A terméket csak a PCR-technikák alkalmazására és a cobas® 4800 rendszer használatára kiképzett dolgozók használhatják. 9. Csak a cobas x 480 készüléket és a cobas z 480 analizátort validálták a termékkel való használatra. A termékkel nem használható más minta-el készít készülék vagy PCR rendszer. 10. A technológiák különböz sége miatt javasolt, hogy az egyik technológiáról a másikra való áttéréskor a felhasználók végezzenek korrelációs laboratóriumi vizsgálatokat, hogy a technológiák közötti különbség min síthet legyen. A felhasználóknak a helyi specifikus irányelveket/eljárásokat kell követniük. 11. A keresztszennyez dés álpozitív eredményeket okozhat. A cobas® HCV tesztnél a minták közötti keresztszennyez dés arányát egy nem klinikai vizsgálatban 0,0%-osnak találták. Nem figyeltek meg futtatások közötti keresztszennyez dést. 12. A cobas® HCV tesztnek nem célja a HCV vérben vagy vértermékekben való sz rése.

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

21

®

cobas HCV

A nem klinikai teljesítmény értékelése A fontosabb teljesítményjellemz k Kimutatási határ (LoD) WHO Nemzetközi standard A cobas® HCV kimutatási határát a NIBSC-t l származó WHO HCV RNS nemzetközi standard szerinti (WHO International Standard for HCV RNA for Nucleic Acid Amplification Technology Assays – 4. WHO nemzetközi standard) 1a genotípus sorozathígításának elemzésével állapították meg, amelyet HCV-negatív EDTA-s plazmában vagy szérumban vizsgáltak 400 µl-es és 200 µl-es mintafeldolgozási térfogattal. Hat koncentrációszintb l és egy negatív kontrollból álló paneleket teszteltek a cobas® HCV reagensek három gyártási tételével, több futtatásban, napon, kezel vel és készüléken. A 3. táblázat – 6. táblázat a két mintafeldolgozási térfogat EDTA-s plazma- és szérumeredményeit tartalmazzák. A vizsgálat eredménye szerint a cobas® HCV a HCV RNS-t 400 µl-es mintafeldolgozási térfogatnál 9,2 IU/ml koncentrációban mutatta ki EDTA-s plazmában és 7,6 IU/ml koncentrációban szérumban, 95%-os PROBIT találati aránnyal. 200 µl-es mintafeldolgozási térfogatnál a koncentráció 15,2 IU/ml volt EDTA-s plazmában és 15,3 IU/ml szérumban, 95% PROBIT találati aránnyal. 3. táblázat:

Kimutatási határ EDTA-s plazmában (400 µl)

Bemen titerkoncentráció (HCV RNS IU/ml)

Érvényes ismétlések száma

Pozitívok száma

Találati arány

42,0

125

125

100,0%

21,0

124

124

100,0%

15,0

125

123

98,4%

9,0

124

117

94,4%

5,0

126

103

81,8%

3,0

125

80

64,0%

0,0

36

0

0,0%

LoD PROBIT szerinti 95% találati arány mellett

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

9,2 IU/ml 95% konfidenciaintervallum: 7,8–11,5 IU/ml

22

®

cobas HCV

4. táblázat:

Kimutatási határ szérumban (400 µl)



Pozitívok száma

Találati arány

42,0

125

125

100,0%

21,0

126

126

100,0%

15,0

126

126

100,0%

9,0

126

120

95,2%

5,0

126

110

87,3%

3,0

126

86

68,3%

0,0

36

0

0,0%

7,6 IU/ml 95% konfidenciaintervallum: 6,5-9,5 IU/ml

LoD PROBIT szerinti 95% találati arány mellett 5. táblázat:

Kimutatási határ EDTA-s plazmában (200 µl)



Pozitívok száma

Találati arány

60,0

126

126

100,0%

45,0

125

125

100,0%

25,0

125

125

100,0%

18,0

124

119

96,0%

10,0

126

106

84,1%

5,0

124

69

55,7%

0,0

36

0

0,0%


07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0


23

®

cobas HCV

6. táblázat:

Kimutatási határ szérumban (200 µl)



Pozitívok száma

Találati arány

60,0

126

126

100,0%

45,0

126

126

100,0%

25,0

126

123

97,6%

18,0

126

125

99,2%

10,0

126

106

84,1%

5,0

125

73

58,4%

0,0

36

0

0,0%



Lineáris tartomány A cobas® HCV teszt linearitását 13 paneltagból álló hígítási sorozat elemzésével végezték, ahol a predomináns HCV-genotípus (GT 1a) lefedte a teszt lineáris tartományát. A magas titer paneltagokat magas titer Armored RNS-törzsb l (arRNS) készítették, az alacsony titer paneltagokat pedig klinikai mintából (CS). A linearitási panelt úgy tervezték, hogy körülbelül 2 log10 titerátfedés legyen a két anyagforrás között. 400 µl-es mintafeldolgozási térfogatnál a cobas® HCV lineáris az EDTA-val kezelt plazma és szérum esetén a 15,0 IU/ml–1,0E+08 IU/ml tartományban, és a maximális eltérés a jobban illeszked nemlineáris regressziótól kisebb, mint ± 0,08 log10. A teszt pontossága a lineáris tartományban ± 0,20 log10 értéken belül volt EDTA-s plazma esetén, és ± 0,23 log10 értéken belül szérum vizsgálatakor. 200 µl-es mintafeldolgozási térfogatnál a cobas® HCV lineáris az EDTA-val kezelt plazma és szérum esetén a 25 IU/ml–1,0E+08 IU/ml tartományban, és a maximális eltérés a jobban illeszked nemlineáris regressziótól kisebb, mint ± 0,09 log10. A teszt pontossága a lineáris tartományban ± 0,20 log10 értéken belül volt EDTA-s plazma esetén, és ± 0,25 log10 értéken belül szérum vizsgálatakor. A reprezentatív eredményeket itt találja: 2. ábra – 5. ábra.

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

24

®

cobas HCV

Megfigyelt logaritmikus titer [koncentrációegység]

2. ábra:

Linearitás EDTA-s plazmában (400 µl) Megfigyelések Az adott tartományban Regressziós egyenes Négyzetes modell Az eltérés fels határa Az eltérés alsó határa

Megadott logaritmikus titer [koncentrációegység]


3. ábra:

Linearitás szérumban (400 µl) Megfigyelések Az adott tartományban Regressziós egyenes Négyzetes modell Az eltérés fels határa Az eltérés alsó határa


07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

25

®

cobas HCV


4. ábra:

Linearitás EDTA-s plazmában (200 µl) Megfigyelések Az adott tartományban Regressziós egyenes Köbös modell Az eltérés fels határa Az eltérés alsó határa



5. ábra:

Linearitás szérumban (200 µl) Megfigyelések Az adott tartományban Regressziós egyenes Köbös modell Az eltérés fels határa Az eltérés alsó határa


07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

26

®

cobas HCV

Pontosság – laboratóriumon belül A cobas® HCV pontosságát klinikai HCV (1a genotípusú) minták (CS) és Armored RNS HCV (arRNS) hígítási sorainak elemzésével határozták meg HCV-negatív EDTA-s plazmában és szérumban. Öt hígítási szintet vizsgáltak szintenként, mátrixonként és mintafeldolgozási térfogatonként 72 ismétléssel a cobas® HCV reagensek három gyártási tételével, két készüléken és három kezel vel, 12 napon keresztül. Minden mintát végigvittek a teljes cobas® HCV eljáráson a cobas® 4800 rendszeren. Ezért az itt közölt pontosság a vizsgálati eljárás valamennyi aspektusát reprezentálja. Az eredményeket itt találja: 7. táblázat – 10. táblázat. A cobas® HCV nagy pontosságot mutatott a reagensek három gyártási tételén, amelyeket az 1,0E+02 IU/ml – 1,0E+08 IU/ml koncentrációtartományban vizsgáltak mind 200 µl-es, mind 400 µl-es mintafeldolgozási térfogattal. 7. táblázat:

®

A cobas HCV laboratóriumi pontosságán belül (EDTA-s plazmaminták – 400 µl-es mintafeldolgozási térfogat)* EDTA-s plazma

Névleges koncentráció (IU/ml)

Megadott koncentráció (IU/ml)

1,0E+08 1,0E+07 4,0E+05 1,0E+04 1,0E+03

8,5E+07 8,5E+06 3,4E+05 9,9E+03 9,9E+02

1. tétel

2. tétel

3. tétel

Minden gyártási tétel

Forrásanyag

SD

SD

SD

Poolozott SD

arRNS arRNS arRNS CS CS

0,05 0,06 0,06 0,10 0,09

0,06 0,06 0,05 0,10 0,08

0,05 0,06 0,06 0,10 0,07

0,06 0,06 0,06 0,10 0,08

* A titeradatokat logaritmikusan normál eloszlásúnak tekintették, és log10 transzformáció után elemezték. A szórás (standard deviation – SD) oszlopok a logaritmikusan transzformált titerek összesítését tartalmazzák mind a három reagenstételre. 8. táblázat:

®

A cobas HCV laboratóriumon belüli pontossága (szérumminták – 400 µl-es mintafeldolgozási térfogat)* Szérum



1,0E+08 1,0E+07 4,0E+05 1,0E+04 1,0E+03

6,5E+07 6,5E+06 2,6E+05 7,9E+03 7,9E+02

1. tétel

2. tétel

3. tétel


Forrásanyag

SD

SD

SD

Poolozott SD


0,07 0,07 0,07 0,07 0,07

0,12 0,07 0,06 0,05 0,05

0,14 0,09 0,07 0,08 0,06

0,12 0,08 0,07 0,07 0,06

* A titeradatokat logaritmikusan normál eloszlásúnak tekintették, és log10 transzformáció után elemezték. A szórás (standard deviation – SD) oszlopok a logaritmikusan transzformált titerek összesítését tartalmazzák mind a három reagenstételre.

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

27

®

cobas HCV

9. táblázat:

®

A cobas HCV laboratóriumon belüli pontossága (EDTA-s plazma – 200 µl-es mintafeldolgozási térfogat)* EDTA-s plazma



1,0E+08 1,0E+07 4,0E+05 1,0E+04 1,0E+03

8,5E+07 8,5E+06 3,4E+05 9,9E+03 9,9E+02

1. tétel

2. tétel

3. tétel


Forrásanyag

SD

SD

SD

Poolozott SD


0,07 0,05 0,04 0,06 0,06

0,09 0,05 0,05 0,06 0,07

0,06 0,05 0,07 0,07 0,05

0,07 0,05 0,05 0,06 0,06

* A titeradatokat logaritmikusan normál eloszlásúnak tekintették, és log10 transzformáció után elemezték. A szórás (standard deviation – SD) oszlopok a logaritmikusan transzformált titerek összesítését tartalmazzák mind a három reagenstételre. ®

10. táblázat: A cobas HCV laboratóriumon belüli pontossága (szérum – 200 µl-es mintafeldolgozási térfogat)* Szérum Névleges koncentráció (IU/ml)


1,0E+08 1,0E+07 4,0E+05 1,0E+04 1,0E+03

6,5E+07 6,5E+06 2,6E+05 7,9E+03 7,9E+02

1. tétel

2. tétel

3. tétel


Forrásanyag

SD

SD

SD

Poolozott SD


0,05 0,07 0,08 0,04 0,04

0,06 0,07 0,05 0,04 0,06

0,06 0,05 0,07 0,04 0,05

0,06 0,06 0,07 0,04 0,05

* A titeradatokat logaritmikusan normál eloszlásúnak tekintették, és log10 transzformáció után elemezték. A szórás (standard deviation – SD) oszlopok a logaritmikusan transzformált titerek összesítését tartalmazzák mind a három reagenstételre.

Genotípus szerinti ellen rzés A cobas® HCV teljesítményét a HCV genotípusokon a következ kkel értékelték ki: • A kimutatási határ ellen rzése 1b–6-os genotípusok esetén • A linearitás ellen rzése 1b–6-os genotípusok esetén • A titermeghatározást a cobas® HCV teszttel végezték. A kimutatási határ ellen rzése 1b–6-os genotípusok esetén

Hat különböz genotípusú (1b, 2, 3, 4, 5, 6) HCV RNS klinikai mintát hígítottak EDTA-s plazmában és szérumban a predomináns genotípus (HCV GT 1a) EDTA-s plazma kimutatási határ szerinti koncentrációjára a 95%-os találati arányú kimutatásihatár-elemzés szerint (15,0 IU/ml). A találati arány elemzését minden genotípusra és mintamátrixra 42 ismétléssel végezték. Az eredmények alátámasztják, hogy a cobas® HCV teszt HCV-t mutatott ki az 1b, 2, 3, 4, 5 és 6 HCV-genotípusoknál 15 IU/ml koncentráció esetén, és a fels egyoldali 95%-os konfidenciaintervallum nagyobb volt a várt 95%-os találati aránynál.

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

28

®

cobas HCV 11. táblázat: A HCV 1b–6-os genotípusok kimutatási határának ellen rzése 400 µl EDTA-s plazmában

Genotípus

Találati arány

Fels egyoldali 95%-os konfidenciaintervallum

GT 1b

95,2%

99,1%

GT 2

100,0%

100,0%

GT 3

100,0%

100,0%

GT 4

100,0%

100,0%

GT 5

100,0%

100,0%

GT 6

97,6%

99,9%

12. táblázat: A HCV 1b–6-os genotípusok kimutatási határának ellen rzése 400 µl szérumban

Genotípus

Találati arány

Fels egyoldali 95%-os konfidenciaintervallum

GT 1b

100,0%

100,0%

GT 2

100,0%

100,0%

GT 3

100,0%

100,0%

GT 4

100,0%

100,0%

GT 5

100,0%

100,0%

GT 6

100,0%

100,0%

A linearitási tartomány ellen rzése 1b–6-os genotípusok esetén

A cobas® HCV genotípusok linearitási vizsgálatában használt hígítási sorozat kilenc paneltagból áll, amelyek lefedik a célzott lineáris tartományt. A magas titer paneltagokat magas titer arRNS-törzsb l készítették, az alacsony titer paneltagokat pedig magas titer klinikai mintából (CS). A linearitási panelt úgy tervezték, hogy legalább 2 log10 titerátfedés legyen a két anyagforrás között. A cobas® HCV lineáris tartománya az alsó mennyiségi meghatározási határtól (LLoQ, 15,0 IU/ml 400 µl-es mintafeldolgozási térfogatnál) a fels mennyiségi meghatározási határig (ULoQ, 1,0E+08 IU/ml) tartott, és legalább két orvosi döntési pontot tartalmazott. Szintenként tizenkét ismétlést teszteltek EDTA-s plazmában. A cobas® HCV lineáris tartományát mind a hat genotípusra (1b, 2, 3, 4, 5, és 6) ellen rizték. A lineáris regresszió és a jobban illeszked nemlineáris regresszió közötti maximális eltérés legfeljebb 0,14 log10 volt.

Specificitás A cobas® HCV specificitását különböz donoroktól származó HCV-negatív EDTA-s plazma- és szérumminták elemzésével határozták meg. 612 különböz EDTA-s plazmát és 613 különböz szérummintát teszteltek (összesen 1225 eredmény született) a cobas® HCV reagensek három gyártási tételével. Az EDTA-s plazmában 609, a szérumban 613 minta teszteredménye lett negatív HCV RNS-re. A tesztpanelben a cobas® HCV specificitása 99,5% volt a plazmában (95%-os konfidenciahatár: 98,7%) és 100,0% a szérumban (95%-os konfidenciahatár: 99,5%).

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

29

®

cobas HCV

Analitikai specificitás

A cobas® HCV analitikai specificitását egy kórokozópanel (13. táblázat) hígításával vizsgálták HCV RNSpozitív és HCV RNS-negatív EDTA-s plazmával. A kórokozókat negatív EDTA-s plazmához adták, és HCV RNS-sel, illetve nélküle tesztelték. Minden HCV-target nélküli kórokozómintára negatív eredményt kaptak a cobas® HCV teszttel, és minden HCV-targetet tartalmazó mintára pozitív lett az eredmény. Ezen felül a potenciálisan keresztreagáló organizmusokat tartalmazó pozitív HCV-minták mindegyikének az átlagos log10 titer értéke ± 0,09 log10 eltérésen belül volt az adott pozitívre oltott minta átlagos log10 titeréhez képest. 13. táblázat: Keresztreaktivitásra vizsgált kórokozók Vírusok Adenovírus 5-ös típus

1-es és 2-es típusú herpes

Baktériumok

Sarjadzógomba

Propionibacterium acnes

Candida albicans

simplex vírus Cytomegalovírus

Humán papillomavírus

1-es, 2-es, 3-as, 4-es típusú dengue vírus

Influenzavírus A

Epstein-Barr vírus

Murray Valley encephalitis vírus

FSME vírus (HYPR törzs)

St. Louis encephalitis vírus

Hepatitis A vírus

Varicella-zoster vírus

Hepatitis B vírus

West Nile vírus

Humán immundeficiencia vírus 1

Sárgalázvírus

1-es és 2-es típusú humán T-sejtes

Zika vírus

Staphylococcus aureus

lymphotrop vírus 6-os típusú humán herpeszvírus

Analitikai specificitás – zavaró anyagok

Magas triglicerid (27,9–29,0 g/l), konjugált bilirubin (0,18–0,22 g/l), nem konjugált bilirubin (0,19–0.2 g/l), albumin (57,8–60,6 g/l), hemoglobin (1,8–2,3 g/l) és humán DNS (2 mg/l) tartalmú mintákat teszteltek HCV RNS jelenlétében, illetve hiányában. A vizsgált anyagok nem mutattak zavaró hatást a cobas® HCV teszt teljesítményével. Ezen felül a szisztémás lupus erythematosus (SLE) és rheumatoid arthritis (RA) autoimmun betegségek markerei, illetve az antinukleáris antitest (ANA) jelenlétét is vizsgálták. A 14. táblázatban felsorolt gyógyszervegyületeket is vizsgálták a Cmax háromszorosánál, HCV RNS jelenlétében, illetve hiányában. A vizsgálat minden potenciálisan zavaró anyagról kimutatta, hogy nincs hatással a teszt teljesítményére. A cobas® HCV teszttel minden HCV-target nélküli mintára negatív eredményt kaptak, és minden HCV-targetet tartalmazó mintára pozitív lett az eredmény. Ezen felül a potenciálisan zavaró anyagokat tartalmazó pozitív HCV-minták mindegyikének az átlagos log10 titer értéke ± 0,04 log10 eltérésen belül volt az adott pozitívre oltott minta átlagos log10 titeréhez képest.

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

30

®

cobas HCV 14. táblázat: A cobas® HCV teszt HCV RNS mennyiségi meghatározását esetlegesen zavaró gyógyszervegyületek vizsgálata Gyógyszerosztály

Gyógyszer generikus neve

Immunmodulátorok

Peginterferon -2a

HIV entry inhibitor

Peginterferon -2b Maraviroc

HIV-integráz inhibitorok

Elvitegravir/kobicisztát

Raltegravir

Non-nukleozid HIV reverz transzkriptáz inhibitorok

Efavirenz

Nevirapin

Etravirin

Rilpivirin

HIV-proteáz inhibitorok

Atazanavir

Nelfinavir

Darunavir

Ritonavir

Fosamprenavir

Saquinavir

Lopinavir

Tipranavir

HCV-proteáz inhibitorok

Boceprevir Simeprevir

Telaprevir

Reverz transzkriptáz vagy DNSpolimeráz inhibitorok

Abacavir

Ganciclovir

Aciclovir

Lamivudin

Adefovir dipivoxil

Sofosbuvir

Cidofovir

Telbivudin

Emtricitabin

Tenofovir

Entecavir

Valganciclovir

Foscarnet

Zidovudin

Azitromicin

Pyrazinamid

Klaritromicin

Rifabutin

Etambutol

Rifampicin

Flukonazol

Sulfamethoxazol

Isoniazid

Trimethoprim

Opportunista fert zések kezelésére szolgáló vegyületek

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

Ribavirin

31

®

cobas HCV

Módszerkorreláció ®

®

®

®

A cobas HCV teljesítményének értékelése a COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV mennyiségi teszt 2.0-ás változatával összevetve

A cobas® HCV tesztet és a COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HCV mennyiségi teszt 2.0-ás változatát (TaqMan® HCV teszt, v2.0) HCV-fert zött betegek szérum- és EDTA-s plazmamintáinak összehasonlításával végezték. Összesen 176, valamennyi HCV-genotípust reprezentáló EDTA-s plazma- és szérummintát vizsgáltak párhuzamos elemzéssel. Az eredmény érvényes volt és mindkét vizsgálat mennyiségi meghatározási tartományán belül esett. Elvégezték a Deming-regressziós analízist. A két teszttel vizsgált minták átlagos titereltérése 0,0 log10 volt (95% konfidenciaintervallum: –0,01; 0,01). A Deming-regressziós analízis eredményeit a 6.ábra tartalmazza. Az ábrákon a * jel az egyéni meghatározást jelenti. A szín a genotípust jelöli. 6. ábra:

®

®

A cobas HCV teszt és a TaqMan HCV teszt 2.0-ás verziójának regressziós analízise EDTA-s plazma- és szérummintákban Genotípus

y = 1,02x – 0,08 2 R = 0,99

1 2 3 4 5 6

Átlagos log10 titer cobas® 4800 HCV teszt

Egyenesek Deming-regresszió egyenese

Átlagos log10 titer (COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HCV teszt, 2.0 verzió)

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

32

®

cobas HCV

Mátrixekvivalencia – EDTA-s plazma kontra szérum 114 EDTA-s plazma- és szérumminta-párt elemeztek mátrixekvivalencia szempontjából. A párok közül 59 volt HCV-pozitív minta. A HCV-pozitív minták a lineáris tartomány 1–5-ös genotípusait fedték le. Az EDTA-s plazma- és szérumminta-párok átlagos titereltérése 0,04 log10 volt (95% konfidenciaintervallum: 0,00; 0,08) (7. ábra). 7. ábra:

A mátrixekvivalencia teljesítménye az EDTA-s plazma és szérum között Genotípus

y = 0,98x + 0,11 2 R = 0,99

1 2 3 4 5

Log10 titer cobas® 4800 HCV teszt, szérum

Egyenesek Deming-regresszió egyenese

Log10 titer cobas® 4800 HCV teszt, hozzátartozó plazma

Teljes rendszerhiba A cobas® HCV teljes rendszerhiba-arányát HCV-targettel oltott EDTA-s plazma 100 ismétlésével határozták meg. Ezeket a mintákat körülbelül 3 × LLoQ (45,0 IU/ml) célkoncentrációnál vizsgálták. A vizsgálat eredményei szerint az összes ismétlés érvényes és HCV-pozitív volt, vagyis a teljes rendszerhiba aránya 0,0% volt. A kétoldalú 95%-os pontos konfidenciaintervallum 0,0% volt az alsó határra, és 3,6% a fels határra [0,0%: 3,6%].

Keresztszennyez dés A cobas® HCV keresztszennyez dési arányát HCV-negatív EDTA-s plazmaminták 230 ismétlésével és egy magas titer (1,8E+08 IU/ml) HCV-minta 235 ismétlésével határozták meg. Összesen öt futtatást végeztek pozitív és negatív mintákkal, sakktáblaszer konfigurációban. A negatív minták 230 ismétlése közül 229 volt érvényes és adott negatív eredményt, vagyis a keresztszennyez dési arány 0,0% volt egyoldali, 1,3%-os 95%-os konfidenciaintervallummal.

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

33

®

cobas HCV

További információk A teszt legfontosabb tulajdonságai Minta típusa

EDTA-s plazma, szérum

Minimálisan szükséges mintamennyiség

További információkat a „cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HCV-hez”

®

®

cím kiadványban talál. Mintafeldolgozási térfogat

400 µl vagy 200 µl

Analitikai érzékenység

9,2 IU/ml (400 µl) 15,3 IU/ml (200 µl)

Lineáris tartomány

400 µl: 15,0 IU/ml – 1,0E+08 IU/ml

Specificitás

200 µl: 25,0 IU/ml – 1,0E+08 IU/ml 99,5% (egyoldalú 95%-os konfidenciaintervallum: 98,7%)

Kimutatott genotípusok

1–6-os HCV-genotípusok

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

34

®

cobas HCV

Szimbólumok A következ szimbólumok használatosak a Roche PCR diagnosztikai termékek jelölésére. 15. táblázat:

A Roche PCR diagnosztikai termékek címkéjén használt szimbólumok

Segédszoftver

In vitro diagnosztikai felhasználásra

Meghatalmazott képvisel az Európai Közösségben

Megadott tartomány alsó határa

Vonalkód adatlap

Gyártó

Lotszám

Sötétben tárolandó

Biológiai veszély

Tartalma vizsgálathoz elegend

Katalógusszám

Tárolási h mérséklet

Olvassa el a használati útmutatót

Vizsgálatdefiníciós fájl

A csomag tartalma

Megadott tartomány fels határa

Forgalmazó

Lejárat dátuma

Csak IVD teljesítmény értékelésre

Globális kereskedelmi cikkszám

Ez a termék eleget tesz az in vitro diagnosztikai orvostechnikai eszközökr l szóló 98/79 EK irányelv el írásainak.

Felhasználói technikai segítségnyújtás az Egyesült Államokban 1-800-526-1247

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

35

®

cobas HCV

Gyártó és forgalmazók 16. táblázat:

Gyártó és forgalmazók

Készült az Amerikai Egyesült Államokban Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 68305 Mannheim, Germany www.roche.com Roche Diagnostics (Schweiz) AG Industriestrasse 7 6343 Rotkreuz, Switzerland Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 68305 Mannheim, Germany Roche Diagnostics, SL Avda. Generalitat, 171-173 E-08174 Sant Cugat del Vallès Barcelona, Spain Roche Diagnostica Brasil Ltda. Av. Engenheiro Billings, 1729 Jaguaré, Building 10 05321-010 São Paulo, SP Brazil

Roche Diagnostics 201, Boulevard Armand-Frappier H7V 4A2 Laval, Québec, Canada (For Technical Assistance call: Pour toute assistance technique, appeler le: 1-877-273-3433) Roche Diagnostics 2, Avenue du Vercors 38240 Meylan, France Distributore in Italia: Roche Diagnostics S.p.A. Viale G. B. Stucchi 110 20052 Monza, Milano, Italy Distribuidor em Portugal: Roche Sistemas de Diagnósticos Lda. Estrada Nacional, 249-1 2720-413 Amadora, Portugal

Védjegyek és szabadalmak Lásd: http://www.roche-diagnostics.us/patents

Szerz i jog ©2016 Roche Molecular Systems, Inc.

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

36

®

cobas HCV

Hivatkozások 1. Choo QL, Kuo G, Weiner AJ, Overby LR, Bradley DW, Houghton M. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome. Science. 1989;244(4902):359-362. 2. Armstrong GL, Wasley A, Simard EP, McQuillan GM, Kuhnert WL, Alter MJ. The prevalence of hepatitis C virus infection in the United States, 1999 through 2002. Ann Intern Med. 2006;144(10):705-714. 3. Rustgi VK. The epidemiology of hepatitis C infection in the United States. J Gastroenterol. 2007;42(7):513-521. 4. Lauer GM, Walker BD. Hepatitis C virus infection. N Engl J Med 2001;345(1):41-52. 5. McHutchison JG, Gordon SC, Schiff ER, et al. Interferon alfa-2b alone or in combination with ribavirin as initial treatment for chronic hepatitis C. Hepatitis Interventional Therapy Group. N Engl J Med. 1998;339(21):1485-1492. 6. Davis GL, Esteban-Mur R, Rustgi V, et al. Interferon alfa-2b alone or in combination with ribavirin for the treatment of relapse of chronic hepatitis C. International Hepatitis Interventional Therapy Group. N Engl J Med. 1998;339(21):1493-1499. 7. Manns MP, McHutchison JG, Gordon SC, et al. Peginterferon alfa-2b plus ribavirin compared with interferon alfa-2b plus ribavirin for initial treatment of chronic hepatitis C: a randomised trial. Lancet. 2001;358(9286):958-965. 8. Fried MW, Shiffman ML, Reddy KR, al. Peginterferon alfa-2a plus ribavirin for chronic hepatitis C virus infection. N Engl J Med. 2002;347(13):975-982. 9. Hadziyannis SJ, Sette H, Jr, Morgan TR, et al. Peginterferon-alpha2a and ribavirin combination therapy in chronic hepatitis C: a randomized study of treatment duration and ribavirin dose. Ann Intern Med. 2004;140(5):346-355. 10. Ghany MG, Strader DB, Thomas DL, Seeff LB. American Association for the Study of Liver Disease (AASLD) Practice Guidelines. Diagnosis, Management, and Treatment of Hepatitis C: An Update Hepatology. 2009;49(4):1335-1374. 11. Ghany MG, Nelson DR, Strader DB, Thomas DL, Seeff LB; American Association for Study of Liver Diseases. An update on treatment of genotype 1 chronic hepatitis C virus infection: 2011 practice guideline by the American Association for the Study of Liver Diseases. Hepatology. 2011;54(4):14331444. 12. Poordad F, McCone J, Jr, Bacon BR, et al. Boceprevir for untreated chronic HCV genotype 1 infection. N Engl J Med. 2011;364(13):1195-1206. 13. Jacobson IM, McHutchison JG, Dusheiko G, et al. Telaprevir for previously untreated chronic hepatitis C virus infection. N Engl J Med. 2011;364(25):2405-2416. 14. Bacon BR, Gordon SC, Lawitz E, et al. Boceprevir for previously treated chronic HCV genotype 1 infection. N Engl J Med. 2011;364(13):1207-1217. 15. Zeuzem S, Andreone P, Pol S, et al. Telaprevir for retreatment of HCV infection. N Engl J Med. 2011;364(25):2417-2428. 16. Lawitz E, Mangia A, Wyles D, t al. Sofosbuvir for previously untreated chronic hepatitis C infection. N Engl J Med. 2013;368(20):1878-1887. 17. Jacobson IM, Gordon SC, Kowdley KV, et al. Sofosbuvir for hepatitis C genotype 2 or 3 in patients without treatment options. N Engl J Med. 2013;368(20):1867-1877. 07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

37

®

cobas HCV

18. Liang TJ, Ghany MG. Current and future therapies for hepatitis C virus infection. N Engl J Med. 2013;368(20):1907-1917. 19. Rutter K, Hofer H, Beinhardt S, et al. Durability of SVR in chronic hepatitis C patients treated with peginterferon-alpha2a/ribavirin in combination with a direct-acting anti-viral. Aliment Pharmacol Ther. 2013;38(2):118-123. 20. European Association for the Study of the Liver (EASL) Recommendations on Treatment of Hepatitis C 2014. Available at: http://www.easl.eu/_newsroom/latest-news/easl-recommendations-on-treatment-ofhepatitis-c-2014. 21. Pawlotsky JM. Use and interpretation of hepatitis C virus diagnostic assays. Clin Liver Dis. 2003; 7:127– 7137. 22. Longo MC, Berninger MS, Hartley JL. Use of uracil DNA glycosylase to control carry-over contamination in polymerase chain reactions. Gene. 1990;93:125-128. 23. Savva R, McAuley-Hecht K, Brown T, Pearl L. The structural basis of specific base-excision repair by uracil-DNA glycosylase. Nature. 1995;373:487-493. 24. Mol CD, Arvai AS, Slupphaug G, et al. Crystal structure and mutational analysis of human uracil-DNA glycosylase: structural basis for specificity and catalysis. Cell. 1995;80:869-878. 25. Higuchi R, Dollinger G, Walsh PS, Griffith R. Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences. Biotechnology (NY). 1992;10:413-417. 26. Heid CA, Stevens J, Livak JK, Williams PM. Real time quantitative PCR. Genome Res. 1996;6:986-994. 27. Center for Disease Control and Prevention. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 5th ed. U.S. Department of Health and Human Services, Public Health Service, Centers for Disease Control and Prevention, National Institutes of Health HHS Publication No. (CDC) 21-1112, revised December 2009. 28. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections. Approved Guideline-Fourth Edition. CLSI Document M29-A4:Wayne, PA;CLSI, 2014.

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

38

®

cobas HCV

Dokumentumverzió Dokumentum verzióinformációi Doc Rev. 2.0 11/2016

07529716001-02HU Doc. Rev. 2.0

Frisstett megjegyzés a Szükséges, de nem biztosított eszközök és szoftverek táblázathoz. Új keverési lépés a Minták levétele, szállítása és tárolása részben. Javítottuk a Pontosság – laboratóriumon belül részben a hígítási szintek számát. A Roche www.roche.com webcímének hozzáadása. Módosult a 12. utasítás az Az eljárással kapcsolatos korlátozások részben. Esetleges kérdésével forduljon a Roche helyi képvisel jéhez.

39

N:

Recommend Documents