Isolasi Senyawa dari Fraksi Etil Asetat Daun Pedada (Sonneratia caseolaris L.) dan Uji Aktifitas Antioksidan

P ro sid ing Sem ina r Na sion a l & Wo rkshop “Pe rkemba ngan Te rki ni Sa in s Fa rma si & K l in i k 5” | Padang , 6 -7 No vembe r 2015

Isolasi Senyawa dari Fraksi Etil Asetat Daun Pedada (Sonneratia caseolaris L.) dan Uji Aktifitas Antioksidan (Isolation of Ethyl acetate Fraction Coumpound from Leaves of Pedada (Sonneratia caseolaris L.) and Its Antioxidant Activities) Yulianis1*; Madyawati Latief 2; & M. Redho1 1Program 2Fakultas

Studi Farmasi STIKES Harapan Ibu Jambi Sains dan Teknologi Universitas Jambi

Corresponding email: [email protected] ABSTRAK Telah dilakukan penelitian tentang isolasi senyawa dari fraksi etil asetat daun pedada (Sonneratia caseolaris L.) dan aktifitas antioksidannya. Fraksi diperoleh dengan maserasi bertingkat menggunakan nheksan, etil asetat dan metanol. Fraksi etil asetat diisolasi dengan kromatografi kolom sehingga diperoleh Fraksi 1, 2, 3 dan 4. Fraksi 1 diisolasi kembali dengan kromatografi kolom sehingga diperoleh fraksi 1.1, 1.2, 1.3 dan 1.4. kemudian fraksi 1.2 dilakukan pemurnian dengan KLT preparatif dihasilkan Isolat A dan B, keduanya berbentuk serbuk, berwarna putih dan tidak berbau. Hasil identifikasi dengan spektrofotometer Uv. dan IR terhadap isolat tersebut diduga terpenoid. Uji Aktivitas antioksidan fraksi 1.2 dilakukan dengan metode DPPH diperoleh nilai IC50 Sebesar 39,89 ppm. Kata Kunci: isolasi, DPPH, pedada (Sonneratia caseolaris L.), antioksidan PENDAHULUAN Indonesia

didasarkan pemakaiannya secara tradisional kaya

akan

berbagai

(Fajriah dkk, 2007). Beberapa tumbuhan yang

keanekaragaman hayati yang berpotensi untuk

berkhasiat mengandung senyawa antioksidan

dikembangkan sebagai obat atau bahan baku

misalnya senyawa golongan fenolik, flavonoid,

obat. Survei tentang obat di Amerika Serikat

dan xanton. Senyawa ini dapat digolongkan

yang diakui oleh Food and Drug Administration

sebagai antioksidan alami (Efendi, 2007).

AS pada periode 1983-1994 menunjukkan

Antioksidan adalah senyawa yang mampu

bahwa 157 dari 520 (30%) jenis obat berasal

menghambat laju oksida molekul lain atau

dari bahan alam atau turunannya, dimana 61%

menetralisir radikal bebas (Fajriah dkk, 2007).

senyawa antikanker yang diakui juga berasal

Tubuh kita memerlukan senyawa antioksidan

dari bahan alam atau turunannya (Fajriah dkk,

yang dapat membantu melindungi tubuh dari

2007).

serangan Di dunia terdapat 119 senyawa yang

radikal

bebas

mengingat

begitu

banyaknya radikal bebas yang berasal dari luar

digunakan sebagai bahan obat yang berasal dari

tubuh

90 spesies tumbuhan, dimana 77% ditemukan

mengandung

sebagai

pestisida, polusi, debu dan radikal ultraviolet.

hasil

penelitian

tumbuhan

yang

berupa

makanan

bahan

yang

pengawet,

banyak pewarna,

91


Emisi kendaraan bermotor dan industri, asap

68,97% dan konsentrasi 1000 ppm sebesar

rokok serta pelepasan senyawa kimia reaktif ke

70,39%.

Berdasarkan

alam merupakan penyumbang radikal bebas

tersebut,

kesempatan

yang cukup besar (Zuhra, Taringan, Sihotang,

senyawa aktif antioksidan cukup besar, oleh

2008).

system

karena itu peneliti tertarik untuk melakukan

(Sunarni,

isolasi senyawa aktif antioksidan dari fraksi etil

Tubuh

pertahanan

tidak

mempunyai

antioksidan

eksogen

Pramono, & Asmah, 2007). Antioksidan bentuk

sintetik

kekhawatiran

untuk

terdahulu

mendapatkan

asetat daun pedada.

dapat dan

penelitian

diperoleh

alami.

terhadap

dalam

Akan

efek

tetapi

samping

METODE PENELITIAN Alat dan Bahan

antioksidan sintetik menjadikan antioksidan

Alat yang digunakan pada

alami

terpilih.

meliputi: Rotary evaporator, spektrofotometer

Antioksidan alami mampu melindungi tubuh

UV-Vis, timbangan digital, gelas ukur, tabung

terhadap kerusakan oksigen reaktif, mampu

reaksi,

menghambat

serta

kromatografi, gelas ukur, labu ukur, corong,

menghambat peroksidasi lipid pada makanan.

batang pengaduk, cawan penguap, pipa kapiler,

Tumbuhan merupakan sumber antioksidan

vial, lampu UV dengan panjang gelombang 254

alami dan umumnya merupakan senyawa

nm, chamber.

fenolik yang tersebar pada bagian tumbuhan

Bahan yang digunakan : daun tumbuhan pedada

baik pada kayu, biji, daun, buah, akar, bunga

(Sonneratia

maupun serbuk sari (Sunarni, Pramono, &

Herbarium Universitas Andalas, n-heksan, etil

Asmah, 2007).

asetat, metanol, silika gel, plat KLT, DPPH.

menjadi

alternatif

penyakit

yang

degeneratif,

pipet

ukur,

kertas

caseolaris

L.)

penelitian

saring,

ini

kolom

diidentifikasi

di

Salah satu tumbuhan yang berpotensi sebagai antioksidan adalah tumbuhan pedada

Prosedur Penelitian

merah. Tumbuhan ini mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, glikosida, saponin dan fenol

Ekstraksi

(Avenido, P. and Serrano,A.E. 2012). Secara

Tumbuhan pedada diperoleh dari pesisir

tradisional tumbuhan ini digunakan sebagai

sungai

ramuan

hasil

Kecamatan Tungkal Ilir. Bagian Tumbuhan yang

penelitian Sariful et al, (2012) yang menguji

digunakan adalah daun pedada. Daun pedada

ekstrak etanol dari daun tumbuhan pedada

sebanyak 10 kg di kering-anginkan hingga

dengan

didapat berat konstan 3,5 Kg kemudian dirajang

bedak

dingin.

menggunakan

picrylhydrazyl

(DPPH),

Berdasarkan

1,1-difenil-2ternyata

ekstrak

halus.

Kabupaten

Daun

yang

Tanjung

sudah

Jabung

dirajang

Barat,

halus

tersebut memiliki aktifitas antioksidan, dengan

kemudian dimaserasi bertingkat dengan n-

perolehan nilai IC50 68µg/ml. Selanjutnya

heksan, etil asetat, dan metanol dengan 3 kali

penelitian Madyawati (2014) yang menguji

pengulangan. Masing-masing hasil maserasi

aktifitas antioksidan terhadap berbagai ekstrak

disaring dengan menggunakan kertas saring

daun pedada diperoleh nilai persen inhibisi

Whatman no.1, Filtrat dipekatkan dengan

yang tertinggi terdapat pada fraksi etil asetat

menggunakan rotary

evaporator, sehingga

yaitu pada konsentrasi 500 ppm sebesar 92


diperoleh ekstrak kental n-heksan, etil asetat

Fraksinasi dilakukan kembali hingga diperoleh

dan metanol daun pedada.

isolat murni.

Isolasi Fraksi Etil Asetat

Uji Aktifitas Antioksidan

Ekstrak kental etil asetat diisolasi dengan kromatografi

kolom.

Kolom

Penentuan Panjang Gelombang DPPH:

kromatografi

Dipipet sebanyak 3,8 ml larutan DPPH 400 ppm

disiapkan dengan membuat bubur silika yang

dan ditambahkan 0,2 ml metanol. Setelah

dimasukkan ke dalam kolom kromatografi

dibiarkan selama 30 menit ditempat gelap

secara perlahan-lahan. Ekstrak kental etil asetat

serapan

dilarutkan dengan aseton lalu dihomogenkan

spektrofotometer

dengan silika gel untuk preadsorbsi kemudian

gelombang 400 - 800 nm.

dimasukkan ke dalam kolom.

larutan

diukur

UV-Vis

dengan

pada

panjang

Uji Aktifitas Antioksidan Senyawa Hasil

Kemudian dibuat sistem fase gerak

Isolasi:

Pengujian

aktivitas

antioksidan

dengan komposisi n-heksan, etil asetat dan

dilakukan dengan metoda DPPH (Selvi et al,

metanol dengan berbagai perbandingan secara

2003). Sampel ditimbang sebanyak 10 mg,

bergradien. Langkah pertama dilakukan dengan

dilarutkan dalam 25 ml metanol dalam labu

mengaliri kolom dengan fase gerak n-heksan

ukur

100%. Pelarut yang menetes dari kolom

antioksidan, 0,2 ml larutan sampel dipipet

ditampung dalam vial yang sebelumnya telah

dengan pipet mikro kedalam vial, kemudian

ditimbang dan diberi nomor. Penggantian

ditambahkan 3,8 ml larutan DPPH 400 ppm.

gradient fase gerak dilakukan ketika fase gerak

Campuran larutan dihomogenkan dan dibiarkan

gradien sebelumnya telah habis digunakan

selama 30 menit ditempat gelap. Serapan diukur

untuk mengaliri kolom. Jumlah perbandingan

dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang

pelarut n-heksan dan etil asetat yang digunakan

gelombang 517 nm. Untuk Kontrol positif

selanjutnya adalah (9:1, 8:2, 7:3, 5:5, 2:8), Etil

digunakan asam askorbat perlakuan yang sama

asetat 100% dan Etil asetat : Metanol (4:6, 2:8).

dengan sampel.

25

ml.

untuk

penentuan

aktivitas

Pada tahap akhir kromatografi kolom, kolom dicuci dengan mengaliri pelarut methanol 100% untuk membersihkan silika gel dari sisa ekstrak yang menempel. Fraksi-fraksi ditampung

dan

diperoleh

Identifikasi menggunakan

hasil

pengoloman

kemudian diidentifikasi

senyawa

hasil

kromatografi

isolasi

lapis

tipis,

sampel

yang

Spektrofotometri UV-Vis dan FTIR.

diuapkan

menggunakan rotary evaporator. Seluruh fraksi yang

Identifikasi Senyawa Hasil Isolasi

dengan

HASIL DAN DISKUSI Pada

penelitian

ini

kromatografi lapis tipis (KLT) dengan eluen n-

digunakan adalah daun pedada kering dengan

heksan:etil

berbagai

berat 3,5 kg. Proses ekstraksi dan fraksinasi

perbandingan. Kemiripan bercak yang timbul

menggunakan metode maserasi bertingkat yang

pada lempeng amati baik secara langsung

dimulai dari n-heksan, etil asetat dan metanol.

maupun dibawah sinar UV 254 nm. Fraksi yang

Hal ini bertujuan untuk menyederhanakan

mempunyai kemiripan bercak dijadikan satu.

komponen kimia berdasarkan kepolarannya

asetat

dengan

93


sehingga diperoleh kelompok senyawa non

dengan kromatografi kolom lagi dan diperoleh 4

polar, semi polar dan polar. Kemudian hasil

subfraksi yaitu F1.1, F1.2, F1.3 dan F1.4.

maserasi

dipekatkan

menggunakan

rotary

evaporator sehingga diperoleh ekstrak kental dari masing-masing ekstrak. Dari 3,5 kg daun pedada diperoleh randemen fraksi kental nheksan, etil asetat dan metanol berturut-turut yaitu 0,642;2,564 dan 3,008%.

Gambar 2. Hasil Uji KLT terhadap F1.2 dengan fase gerak yang berbeda {kiri: nheksan : etil asetat (7:3); kanan: diklorometana : etil asetat (1:1)}

Tabel 1. Hasil identifikasi isolate A dan B dengan FTIR

Gambar 1. Hasil Uji KLT terhadap hasil isolasi fraksi etil asetat Isolasi fraksi etil asetat dilakukan dengan menggunakan

kromatografi

kolom.

Kolom

dielusi menggunakan fase gerak mulai dari pelarut nonpolar n-heksan 100%, kemudian ditingatkan kepolaran secara bergradien dengan n-heksan : etil asetat (9:1, 8:2, 7:3, 5:5, 2:8) , Etil asetat 100% dan Etil asetat : Metanol ( 4:6, 2:8),

Pada subfraksi F1.2 terdapat Kristal putih

masing-masing hasil elusi ditampung dalam

dengan berat 10 mg yang diuji aktifitas

vial-vial secara berurut, sehingga diperoleh 39

antioksidannya. Pengujian aktifitas antioksidan

vial. setiap vial dilakukan uji kromatografi lapis

dengan menggunakan metode DPPH, dibuat seri

tipis (KLT) dan dilihat pola noda yang dihasilkan

konsentrasi 8, 16 dan 24 ppm diperoleh nilai

di bawah lampu UV dengan panjang gelombang

IC50 sebesar 39,89 ppm.

254 nm. Fraksi yang memperlihatkan pola noda yang sama digabungkan diperoleh 4 fraksi yaitu F1(Vial 1-6), F2 (vial 7-8), F3(vial 9-16) dan F4 (vial 17-39) (gambar 1). Dari F1 diisolasi

94


Gambar 3. Spektrum IR isolat A

Gambar 4. Spektrum IR isolat B Pada subfraksi F1.2 dilakukan pemisahan

gelombang maksimal isolat A 417 nm dan Isolat

dan melihat kemurnian senyawa dengan KLT

B 528 nm, hal ini kemungkinan dikarenakan

menggunakan fase gerak Heksan:Etil asetat

kadar isolat yang terlalu sedikit sehingga

(7:3) memperlihatkan 1 noda, kemudian dielusi

mempengaruhi

kembali

identifikasi terhadap Isolat A dan B dengan FTIR

menggunakan

diklorometana, ternyata

fase

gerak

lain

memperlihatkan 2

intensitas

absorban.

Hasil

terlihat pada tabel 1.

noda (gambar 2). Untuk pemisahan dilakukan kromatografi Lapis tipis preparatif sehingga

KESIMPULAN

diperoleh 2 isolat , Isolat A dengan Rf 0,92 dan

Berdasarkan hasil penelitian F1.2 aktif

Isolat B dengan Rf 0,64. Pada Kromatografi lapis

sebagai antioksidan dengan nilai IC50 sebesar

tipis disemprotkan dengan reagen Liebermann

39,89 ppm. Dari hasil isolasi F1.2 diperoleh 2

Burchard memberikan noda berwarna merah

isolat yaitu isolat A dan isolat B diidentifikasi

muda reaksi ini positif untuk senyawa golongan

senyawa ini merupakan golongan terpenoid.

terpenoid. Isolat A dan isolat B yang dihasilkan berbentuk serbuk, berwarna putih dan tidak

UCAPAN TERIMA KASIH

berbau.

1.

Hasil spektrofotometri

identifikasi Uv-Vis

diperoleh

dengan

Bapak Aguspairi, S.Kp, M.Kep. sebagai Ketua STIKES Harapan Ibu.

panjang

95


2.

Ibu Dr. Madyawati Latief, S.P, M.Si. atas kerjasama

dan

sumbangsihnya

dalam

3.

M. Redho Okta Kurniawan atas semangat dan kerjanya dalam penelitian ini.

penelitian ini. DAFTAR PUSTAKA Efendi Hastrian. 2007. Isolasi Senyawa Antioksidan dari Fraki Butanol Akar Tapak Liman (Elephanthopus scabeer L). Padang. Fajriah, dkk. 2007. Isolasi Senyawa Antioksidan dari Ekstrak Etil Asetat Daun Benalu Dendrophtoe pentandra L yang Tumbuh pada Inang Lobo-lobi. Jurnal Kimia Indonesia. Madyawati, Nazaradin, Nelson. 2014. Skrining Bioaktivitas Beberapa Tumbuhan Mangrove Asal Kabupaten Tanjung Jabung Timur Provinsi Jambi. Laporan Penelitan Fundamental Pedada. Avenido, P. and Serrano,A.E. 2012. Effects of the apple mangrove (Sonneratia caseolaris) on growth, nutrient utilization and digestive enzyme activities of theblack tiger shrimp Penaeus monodon postlarvae. European Journal of Experimental Biology.

Sariful et al. 2012. Evaluation of antinociceptive and antioxidant properties of the ethanolic extract of Sonneratia caseolaris leaves. Pelagia Research Library. Selvi, A.T., Joseph, G.S., and Jayaprakarsa, G.K., 2003. Inhibition of growth and flatoxin production in Aspergillus flavus by Garcinia indica extract and its antioxidant activity. J. Food Microbiology 20 : 455460 Sunarni, T., Pramono, S. & Asmah, R. 2007. Flavonoid antioksidan penangkap radikal dari daun Kepel (Stelechocarpus burahol (Bl.) Hook f. & Th.). Majalah Farmasi Indonesia. 18(3): 111-116. Zuhra, C.F, Tarigan, J. & Sihotang, H. 2008. Aktivitas Antioksidan Senyawa Flavonoid dari Daun Katuk (Sauropus androgunus(L) Merr.). Jurnal Biologi Sumatera. ISSN : 1907-5537-3(1) : 7-10

96

Isolasi Senyawa dari Fraksi Etil Asetat Daun Pedada (Sonneratia caseolaris L.) dan Uji Aktifitas Antioksidan

Recommend Documents