HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20

HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 Ref. 3007 Ref. 3207*

2008/03

HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 - 2008/03

POUŽITÍ KITU

HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 kit je určen ke stanovení profilů lipoproteinů a ke skríningu Lp(a) v lidském séru. Analýza je provedena elektroforézou na agarózových gelech o pH 7.5. Separované lipoproteiny jsou obarveny roztokem Sudanové černi. Přebytek barvičky je odstraněn roztokem alkoholu. Vyhodnocení je buď vizuální nebo denzitometrické (relativní kvantifikace jednotlivých zón). Každý agarózový gel HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 je určen k analýze 7 mi vzorků.

Určeno pro diagnostické použití in vitro.

PRINCIP TESTU

Lipoproteiny jsou cirkulující komplexy sestávající z lipidů a proteinů. Jejich klasifikace je založena na vlastnostech, jež umožňují stanovení následujícími separačními technikami : • utracentrifugace (využívá rozdílných hustot), • zónová elektroforéza (el. náboj), • polyakrylamidová elektroforéza (velikost molekuly).

Klasifikace hyperlipemie je založena na hodnocení zónové elektroforézy. Na agarózových gelech se lipoproteiny dělí na následující frakce : • chylomikrony : velké molekuly s vysokým obsahem triglyceridů, přítomny v plazmě jako malé částice – způsobují opalescenci séra a zůstávají v místě aplikace, • beta-lipoproteiny (LDL-Low Density Lipoproteins) migrují v pozici beta globulinů, • pre-beta lipoproteiny (VLDL-Very Low Density Lipoproteins) - mají vyšší mol. hmotnost, nižší denzitu a jsou rychlejší než LDL - migrují v pozici beta globulinů, • rychlé pre-beta lipoproteiny (pokud jsou přítomny) jsou tvořeny Lp(a), které jsou velikostí a složením LDL. Pokud jsou přítomny v dostatečně vysoké koncentraci, migrují mezi VLDL a HDL, • alfa lipoproteiny - HDL (High Density Lipoproteins) - nejrychlejší frakce. Migrují v pozici alfa-2 globulinů. Elektroforéza lipoproteinů je běžnou technikou rutinně používanou klinickými laboratořemi ke stanovení abnormalit lipoproteinů a rizikových faktorů ICHS v séru. Rozlišení lipoproteinů dle jejich elektroforetické pohyblivosti je základem Fredricksonovy klasifikace, dle níž lze léčit poruchy metabolizmu lipoproteinů dietou a medikamentózně.

Lp(a) je dnes považován za další nezávislý rizikový faktor vzniku aterosklerózy. Ukazuje se i přesun signifikantních rizik na přítomnost dalších rizikových faktorů, zejména zvýšeného LDL. Obě vlastnosti, aterogení i anti-fibrinolytická, jsou atributem Lp(a). Studie ukazují, že populace s aterosklerotickými kardiovaskulárními onemocněními má obvykle jednu nebo více z následujících lipoproteinových abnormalit : (1) zvýšený LDL cholesterol, (2) snížený HDL cholesterol, (3) zvýšený IDL a přítomnost chylomikronů, (4) vysokou hladinu Lp(a). Proto scrínink Lp(a) a stanovení hladiny lipoproteinů jsou základem pro stanovení rizika aterosklerózy. Elekroforéza metodou HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 má své výhody : umožňuje současné stanovení lipoproteinového profilu a detekci rychlé prebeta nebo Lp(a) frakce.

REAGENCIE A MATERIÁL OBSAŽENÝ V KITU HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 POLOŽKA

KAT. Č. 3007

KAT. Č. 3207*

LIPO + Lp(a) pufr (zásobní roztok)

3 lahv. po 75 mL

15 lahv. po 75 mL

Promývací roztok (zásobní roztok)

1 lahv. 80 mL

7 lahv. po 80 mL

Agarózové gely (připraveno k použití)

10 gelů

Sudanová čerň (zásobní roztok)

1 lahv. 20 mL

Aplikátory (7 zubů) (připraveno k použití)

1 bal. 10 ks

Tenké filtrační papíry

1 bal. 10 ks

* MAXI-KIT HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 Objem pufru v soupravě MAXI-KIT odpovídá migracím dvou gelů. Uskladněte pufr pro zpracování dvou gelů.

100 gelů

5 lahv. po 20 mL 10 bal. po 10 ks 10 bal. po 10 ks

PRO OPTIMÁLNÍ VÝSLEDKY : Všechny reagenty ze stejné sady musí být vždy používány společně a podle pokynů v příbalovém letáku. PROSÍME, ČTĚTE PEČLIVĚ PŘÍBALOVÝ LETÁK.

1. AGARÓZOVÉ GELY

Příprava

Připraveny k použití, každý gel obsahuje agarózu 0.8 g/dL, pufr - pH 7.5 ± 0.1 a přídavné látky nezbytbě nutné pro optimální provedení, v koncentracích pro člověka neškodných.

Použití

Nosné medium pro elektroforézu lipoproteinů.

- 90 -

SEBIA NÁVOD - Czech


Skladování, stabilita a známky poškození

Skladujte v horizontální poloze v originálních ochranných obalech - šipkou na přední straně krabice směrem nahoru. Lze skladovat při pokojové teplotě (15 - 30 °C) nebo v chladničce (2 - 8 °C). Zamezit prudkým změnám teploty - neskladovat v blízkosti oken nebo tepelného zdroje. Stabilní do doby expirace vyznačené na krabici či štítcích na obalech gelů. NEMRAZIT! Nepoužívejte : (i) v případě nálezu krystalů nebo precipitátů na povrchu gelů a pokud struktura gelu v důsledku zmrazení změkne, (ii) jsou-li přítomny mikroby a plísně, (iii) abnormální množství tekutiny v obalu gelu (výsledek vypocení pufru z gelu v důsledku nesprávného skladování).

2. HYDRAGEL LIPO + Lp(a) PUFR

Příprava

Každá lahvička zásobního roztoku pufru se doplní do 1 litru destilovanou nebo deionizovanou vodou. Pracovní roztok po zředění obsahuje pufr o pH 8.2 ± 0.3 a přídavné látky nezbytně nutné pro optimální provedení, v koncentracích pro člověka neškodných.

Použití

Elektroforetický pufr.

Skladování, stabilita, známky znehodnocení roztoku

Pufr lze skladovat při pokojové teplotě nebo v ledničce. Je stabilní několik let, při nejmenším do data expirace vyznačeného na balení či lahvičkách. Zředěný pufr je stabilní po dobu 1 roku při pokojové teplotě v uzavřené láhvi. Při zjištění zákalu v roztoku, který je obvykle známkou mikrobiální kontaminace, je nutno pufr vylít.

3. SUDANOVÁ ČERŇ

Příprava

Pracovní roztok se připravuje nejméně 30 minut před použitím. Přidávejte přesné objemy jednotlivých složek v následujícím pořadí a šetrně promíchejte : • čistý etanol (96 %) - 80 mL, Sudanová čerň - zásobní roztok (6.6 g/dL v dimetylformamidu), 1 mL ; čekejte na úplné rozpuštění barvičky ; destilovaná nebo deionizovaná voda - 70 mL, nebo, • isopropanol (100 %) - 57 mL, Sudanová čerň - zásobní roztok (6.6 g/dL v dimetylformamidu), 1 mL ; čekejte na úplné rozpuštění barvičky ; destilovaná nebo deionizovaná voda - 93 mL. Nejméně 30 minut míchejte na magnetické míchačce . Nenechávejte v blízkosti tepelného zdroje. Na každé barvení připravujte nový roztok. DŮLEŽITÉ : Použití jiného alkoholu nebo alkoholu denaturovaného může vést k atypickým výsledkům. Při použití čistého alkoholu jiné koncentrace je nutno upravit objemy alkoholu i vody.

UPOZORNĚNÍ : Nevdechovat! Obsahuje dimetylformamid. Při nedostatečném dýchání použijte dýchací přístroj. Nepolykat ! Při polknutí konzultujte ihned s lékařem. Pokud se dostane do očí nebo na kůži, vyplachujte velkým množstvím vody a vyhledejte lékařskou pomoc!

Použití

K barvení gelů s rozdělenými lipoproteiny po elektroforéze.


Zásobní i pracovní roztok se skladuje při pokojové teplotě nebo při 2 - 8 °C v těsně uzavřených nádobách tak, aby nedošlo k odpařování. Zásobní roztok je stabilní do data expirace vyznačeného na obalu či na štítku lahvičky. Pracovní roztok vydrží 12 hodin v uzavřeném zásobníku.

4. PROMÝVACÍ ROZTOK

Příprava

Lahvička zásobního promývacího roztoku může být destilovanou nebo deionizovanou vodou zředěna až na 5 litrů. Je výhodné připravovat jen 1 litr pracovního roztoku doplněním 16 mL zásobního roztoku do 1 litru destilovanou nebo deionizovanou vodou. Po zředění obsahuje pracovní roztok alkalický pufr o pH 8.8 ± 0.3 a azid sodný. UPOZORNĚNÍ : Zásobní roztok obsahuje 0.625 % azid sodný. Při požití ihned konzultujte lékaře. Azid sodný může reagovat s olovem, mědí a kyselinami za vzniku toxických a výbušných směsí. Vždy je nutno při likvidaci roztoku použít na vypláchnutí velké množství vody.

Použití

Roztok slouží k oplachu gelů po odbarvení.


Skladování obou roztoků při pokojové teplotě nebo v chladničce v dobře uzavřených nádobách. Stabilita - do doby expirace vyznačené na obalu soupravy nebo na štítku lahvičky. Nepoužívat při změně vzhledu, vzniku zákalu nebo precipitátu v roztoku, který je obvykle známkou mikrobiální kontaminace.

5. APLIKÁTORY

Použití

Jednorázové aplikátory k nanesení vzorků - připraveny k použití.

Skladování

Skladujte na suchém místě při pokojové teplotě nebo v chladničce.

6. TENKÉ FILTRAČNÍ PAPÍRY

Použití

Proužky tenkého filtračního papíru, na jedno použití. Jsou určeny k odsání přebytečné tekutiny z povrchu gelu před aplikací vzorků.

Skladování

Skladujte na suchém místě při pokojové teplotě nebo v chladničce.

- 91 -


POTŘEBNÉ REAGENTY NEOBSAŽENÉ V BALENÍ 1. ODBARVOVACÍ ROZTOK

Příprava

Nejméně 15 minut před použitím připravte 150 mL roztoku obsahujícího (obj. / obj.) • 45 % čistého etanol a 55 % destilované nebo deionizované vody nebo, • 30 % čistého isopropanolu a 70 % destilované a deionizované vody. DŮLEŽITÉ : Použití jiného alkoholu nebo etanolu denaturovaného může vést k atypickým výsledkům. Při použití čistého alkoholu jiné koncentrace je nutno upravit objemy alkoholu i vody.

Použití

Roztok použijte k odstranění přebytku barvy z pozadí gelů.


Skladovat v dobře utěsněných láhvích při pokojové teplotě, vydrží jeden měsíc.

2. FLUIDIL

Příprava

Fluidil (SEBIA, kat. č. 4587,1 lahv. 5 mL) – připraveno k použití.

Použití

Používá se k ředění velmi viskózních nebo zakalených vzorků sér, t.j. obsahujících kryoglobulin nebo kryogel.

Skladování, stabilita a známky zhoršení kvality

Při teplotě místnosti. Stabilní do doby expirace vyznačené na štítku. Nesmí obsahovat sraženiny.

ZAŘÍZENÍ NEZBYTNÁ K PROVEDENÍ TESTU 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Zdroj proudu : MG 300 SEBIA, PN 1302 or MG 500 SEBIA, kat. č. 1303. HYDRAGEL K20 APPLICATOR SEBIA, kat. č. 1409, včetně nosiče aplikátorů HYDRAGEL K20. Vlhká komůrka kat. č. 1270. Elektroforetická komora, K20 SEBIA, kat. č. 1400. Nádobky a držáky gelů pro manipulaci s nimi – HYDRAGEL Accessory Kit SEBIA, kat. č. 1420. Pipety 10 µL, 200 µL a 1000 µL. Sušička – inkubátor, IS 80 SEBIA, kat. č. 1430. Denzitometr / plošný skener na skenování gelových ploten 82 x 51 mm při 570 nm nebo se žlutým filtrem (HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA nebo PHORESIS softwarem pro plošný skener).

ANALYZOVANÉ VZORKY

Odběr a skladování vzorků

Pro analýzu se doporučuje používat čerstvé vzorky séra. Doporučuje se odebírat vzorky od pacientů, kteří jsou nejméně 12 hodin nalačno. Odběr musí být v souladu se zavedenými postupy používanými pro testování v klinických laboratořích. Vzorky uložte do chladničky (2 až 8 °C) co nejdříve po odběru maximálně na 3 dny. Vzorky nelze mrazit. Nelze použít vzorky odebrané do heparinu. Skladování je příčinou snížení mobility pre-beta lipoproteinové frakce a tím podhodnocení odpovídající frakce. Rychlé pre-beta (nebo Lp(a)) lipoproteiny nejsou skladováním postiženy.

Příprava vzorků

Používejte neředěná séra. Při skladování v ledničce nebo po zmrazení, se některá séra mohou stát viskózními nebo se vyvine zákal (zvláště séra obsahující kryoglobulin nebo kryogel) - taková séra mohou špatně difundovat zuby aplikátoru. V tomto případě přidejte 25 µL Fluidilu k 75 µL séra a 15 sekund promíchejte na Vortexu. Potom pokračujte standardním postupem.

PRACOVNÍ POSTUP I. MIGRACE 1. 2. 3. 4. 5. 6.

7. 8. 9.

Umístěte HYDRAGEL K20 aplikátorový nosič na rovnou plochu (viz Obr. 1) a zvedněte část s očíslovanými zuby. Naneste 120 µL destilované nebo deionizované vody na dolní třetinu rámečku vyznačené na nosiči aplikátoru. Z obalu opatrně vyjměte agarózovou plotnu. Gelovou plotnu rychle osušte tenkým filtračním papírem tak, že jej z jedné strany narolujete, aby přilnul k celé ploše a rychle odstraňte. UPOZORNĚNÍ : Neponechávejte tento filtrační papír delší dobu na povrchu – hrozí dehydratace gelu! Opřete plotnu okrajem o zarážku v dolní části vyznačeného rámečku - gelem k sobě (viz Obr. 2). Nyní gel ohněte a pokládejte tak, aby se voda rovnoměrně rozprostřela pod celým gelem bez tvorby vzduchových bublin. Gel musí být v rámečku zarovnán (viz Obr. 2). Snižte nosič aplikátoru očíslovanými zoubky dolů do střední polohy se západkou v horní poloze. Umístěte jeden aplikátor na rovnou plochu s čísly jamek v pravé horní pozici (Obr. 3). Do jamek aplikátoru pipetujte 10 µL vzorku. Vzorky je nutno napipetovat do aplikátoru v průběhu 2 minut. - aplikátor použijte okamžitě, - pro delší uchování (až 8 hodin) umístěte aplikátor do vlhké komory zoubky nahoru, uchopte za plastikovou část chránící zoubky a celou komoru umístěte do chladničky. Podrobnosti najdete v návodu pro vlhkou komoru. - 92 -


10. Odlomte ochranný rámeček zoubků aplikátoru. 11. Umístěte aplikátor do pozice č. 4 na nosiči. DŮLEŽITÉ : Čísla natištěná na aplikátoru musí směřovat k obsluze (viz Obr. 4). 12. Nyní snižte nosič tak, aby se aplikátor dostal do kontaktu s povrchem gelu. NESNIŽOVAT PRUDCE! 13. Po 7-mi minutách a 30 sekundách aplikátor uvolněte, vyjměte a vyhoďte. 14. Gelovou plotnu vložte do migrační elektroforetické komory dle polarity vyznačené na gelu - dolní částí gelu na katodickou stranu. Při použití komory SEBIA K20 vložte HYDRAGEL ovou plotnu do zubů můstku gelem dolů a ten pak ponořte do pufru. Okraje plotny budou ponořeny asi 1 cm. Podrobnosti najdete v návodu pro migrační komoru K20. 15. Připojte dělící komoru ke zdroji proudu. PODMÍNKY DĚLENÍ

SEBIA K20

Objem pufru ke každé elektrodě

150 mL

Celkový objem pufru

300 mL

Čas dělení

90 minut

Konstantní napětí

50 V

Počáteční proud (na gel)

11 ± 2 mA

16. Po migraci odpojte komoru a vyjměte gelovou plotnu. POZNÁMKA : Během elektroforézy lze pozorovat na anodě lehké usazeniny solí. Po každé elektroforéze je nutné elektrody očistit. 17. Osušte gel horkým vzduchem o teplotě 80 °C, v IS 80 po dobu nejméně 45 min. DŮLEŽITÉ : Gel musí být úplně suchý.

II. BARVENÍ A ODBARVOVÁNÍ

1. Umístěte plotnu do držáku gelů (součást SEBIA HYDRAGEL K20 Accessory Kitu). 2. Po usušení a ochlazení ponořte usušený gel do barvícího roztoku přesně na 15 minut. 3. Odbarvěte přesně po dobu 5 minut v odbarvovacím roztoku.

III. PROMYTÍ A SUŠENÍ 1. 2. 3. 4.

Umístěte plotnu do držáku gelů (součást SEBIA HYDRAGEL K20 Accessory Kitu). Ponořte gel do promývacího roztoku na 1 minutu. Rychle opláchněte gel destilovanou nebo deionizovanou vodou. Odsajte přebytečnou tekutinu z povrchu gelu tenkým papírem a osušte gel při 80 °C teplého vzduchu. V případě potřeby očistěte zadní stranu gelu buničinou nasáklou roztokem 70 % alkoholu.

IV. SKENOVÁNÍ

Denzitometricky nebo skenerem pomočí při žlutého filtru nebo při 570 nm.

VÝSLEDKY

Kontrola kvality

Doporučuje se zařadit na každou sérii vzorků kontrolní sérum (Control Serum SEBIA, kat. č. 4785).

Hodnoty

Denzitometrické skenování nabarvených polí elektroforeogramů při 570 nm (procentuálních hodnot) jednotlivých frakcí. Rozsahy normálních hodnot (průměr ± 2 SD) hlavních elektroforetických zón, byly stanoveny pro 200 zdravých mužů a žen metodou HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 :

Beta lipoproteiny (LDL) : Pre-beta lipoproteiny (VLDL) : Alfa lipoproteiny (HDL) :

38.6 - 69.4 % 4.4 - 23.1 % 22.3 - 53.3 %

Rychlé pre-beta lipoproteiny Lp(a) lze vidět i na lipidogramech zdravých osob. Je doporučeno, aby si každá laboratoř stanovila své vlastní referenční hodnoty.

Pořadí migrace

Dle složení vzorku lze pozorovat jeden ze dvou základních typů rozdělení : HDL

HDL

Lp(a)

VLDL

VLDL

LDL

LDL

Aplikační bod

Aplikační bod

- 93 -


Interpretace

Vizuální hodnocení srovnáním vyšetřovaného vzorku s normální kontrolou. Denzitometrie - relativní procenta jednotlivých lipoproteinových frakcí. Kvalitativní (přítomnost abnormálních frakcí nebo nepřítomnost normálních frakcí) i semikvantitatívní (relativní zvýšení či snížení frakcí) abnormality vyžadují další analýzu. Další pomocí při interpretaci lipidogramů je Fredricksonova klasifikace.

Fredricksonova klasifikace HYPERLIPEMIA TİPİ

CELKOVÝ CHOLESTEROL g/L mM/L

CHYLOMIKRA LDL VLDL HDL

TYP II a

30 - 70 34 - 79

< 1.6 <2

2-4 5.2 - 10.4

TRIGLYCERIDY g/L mM/L VZHLED SÉRA

TYP I

mléčné

++++ --normal až - - ---

TYP II b

TYP III

TYP IV

TYP V

2-5 2.3 - 5.6

2-9 2.3 - 10.2

2 - 10 2.3 - 11.3

≤ 30 ≤ 34

0 ++ ++ normal až -

0 ++ çiftli ++ -

0 +++ -

3 - 10 7.8 - 26

2.8 - 3.5 7.3 - 9.1

čiré

opal.

0 +++ normal normal až -

3-5 7.8 - 13

opal.

< 2.7 <7

zákal

≤5 ≤ 13

mléčné ++++ -++ -

Lp(a) skríning

Frakce mezi alfa a pre-beta zónami odpovídá Lp(a). Pohyblivost se může lišit v závislosti na fenotypu. Minimální hladina detekce je 0.3 g/L. Pokud se frakce Lp(a) na lipidogramu vyskytne, je vhodná její kvantifikace nefelometricky nebo imunodifuzí na HYDRAGELu Lp(a) SEBIA, kat. č. 4057.

Zvláštní případy

• U typů IV a V dle Fredricksona, kde pre-beta frakce (VLDL) je vysoká a posunutá anodicky, může skrývat Lp(a). Doporučuje se nechat sérum odstát 24 - 48 hod. při pokojové teplotě (což sníží mobilitu VLDL) a opakovat elektroforézu, příp. vyšetřit Lp(a) kvantitativně. • LP X - zůstává na katodické straně, chylomikra nejsou přítomna - nachází se v ikterických sérech v případě cholestázy nebo biliárního onemocnění.

Interference a omezení

• • • • •

Nepoužívat vzorky odebrané do heparinu a mražené vzorky. Skladování snižuje mobilitu VLDL, může dojít k podhodnocení. Lp(a) není skladováním ovlivněno. 4 mm před zónou alfa migruje albumin, který se barví Sudanovou černí - nesmí být zahrnut do vyhodnocení. Difúzní stopa před alfa-liproteinovou frakcí, vyskytující se u některých sér, se do vyhodnocení musí zahrnout. Metoda je semikvantitativní, zjištěné změny vyžadují další analýzu.

Problémy

Pokud testy nevycházejí při dodržení veškerých instrukcí pro přípravu, skladování a provedení testu uvedených v příbalovém letáku, volejte TechnickoServisní středisko vašeho dodavatele. Soupravy, reagencie, bezpečnostní listy a informace o likvidaci odpadu jsou dostupné na Technicko-Servisním středisku vašeho dodavatele.

HODNOTY

Denzitometr HYRYS fy SEBIA byl použit pro denzitometrická hodnocení. Všechny elektroforeograby byly interpretovány taktéž vituálně.

Reprodukovatelnost

Ve všech studiích reprodukovatelnosti, byly nejdříve naskenované elektroforeogramy a poté zapsána procentuální hodnota relativní koncentrace každé lipoproteinové frakce. Průměry, SD a CV byly kalkulovány s ohledem na analyzované parametery. Po vizuální analýze elektroforeogramů nebyly pozorované žádné rozdíly mezi opakováními. Výsledky testů indikují velice dobrou reprodukovatelnost. V tabulkách níže jsou uvedeny reprezentativní příklady.

Reprodukovatelnost na gelu

Každý ze tři patologických vzorků s Lp(a) frakcí byl podroben analýze metodou HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20. Každý vzorek byl testován na všech 7-mi drahách gelu dvou různých šarží. Tabulka ukazuje výsledky na gelu (jeden gel / šarže) pro všechny tři vzorky. FRAKCE

PRŮMĚR SD

CV %

HDL (%)

Lp(a) (%)

VLDL (%)

LDL (%)

22.6 - 24.2 - 28.3

2.2 - 4.7 - 8.6

17.8 - 22.1 - 6.5

57.4 - 49.0 - 56.6

2.4 - 3.5 - 1.3

6.1 - 4.1 - 2.2

3.3 - 2.5 - 2.0

1.8 - 2.3 - 1.0

0.5 - 0.8 - 0.4

0.1 - 0.2 - 0.2

- 94 -

0.6 - 0.5 - 0.1

1.0 - 1.1 - 0.6


Reprodukovatelnost mezi gely

Sedm (7) různých vzorků bylo podrobeno testům na gelech soupravy HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 dvou šarží. Každý vzorek byl testován na jedné dráze každého z 10-ti gelů pro obě šarže. Tabulka ukazuje výsledky reprezentativních vzorků. FRAKCE

PRŮMĚR

HDL (%)

Lp(a) (%)

VLDL (%)

LDL (%)

0.6

0.2

0.4

0.4

32.1

SD

CV %

Linearita a citlivost

4.1

1.8

11.8

4.0

3.7

52.0 0.9

Relativní koncentrace lipoproteinových frakcí byly stanoveny následnými ředěními sérového vzorku. Denzitometricky stanovené koncentrace nebyly závislé na ředícím faktoru. Nejvyšší ředění (1 : 4) za předpokladu, že elektroforeogram bylo možné skenovat (obecně stejné jako s nativním vzorkem séra). Koncentrace Lp(a) byla stanovena v sérových vzorcích elektroimunodifuzí. Detekční limit byl okolo 30 mg/dL.

Přesnost

Denzitometricky stanovené relativní koncentrace jednotlivých lipoproteinových frakcí byly měřeny pomocí normálních a patologických vzorků séra (n = 56) ; 16 vzorků bylo s Lp(a). Všechny vzorky byly podrobeny analýze metodou HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 a ekvivalentnímu elektroforetickému testu. Po vizuální analýze elektroforeogramů nebyly pozorované žádné rozdíly. Denzitometrické hodnoty byly analyzovány za použití lineární regrese : FRAKCE

KORELAČNÍ KOEF.

Y - USEK

SKLON

Lp(a)

0.976

-0.269

0.939

0.984

2.804

HDL

VLDL LDL

0.982

0.255

0.994

-0.477

Identifikace rychlé pre-beta frakce jako Lp(a)

0.979 0.997 0.966

Imunofixační a imunosubstrakční techniky byly použité pro demonstraci toho, že Lp(a) migruje jako rychlá "pre-beta frakce" a jako jediná detekovatelná komponenta v tomto případě chybí v LDL, VLDL a HDL frakcích.

- 95 -


BIBLIOGRAPHIE / BIBLIOGRAPHY 1. 2. 3. 4.

5.

6. 7. 8. 9.

10. 11.

12.

13.

14.

15.

Berg K. A new serum type system in man : the Lp(a) system. Acta Pathol. Microbiol. Scand., 1963, 59, 369-382. Buxtorf JC, Dachet C, Jacotot C. Dosage de la lipoprotéine Lp(a). Pathologie Biologie, Vol 39, 4, 328-331. Campos E., Fievet P., Caces E., Fruchart J-C and Fievet C.: A screening method for abnormally high lipoprotein (a) concentrations by agarose lipoprotein electrophoresis. Clin. Chim. Acta., 1994, 230, 43-50. Carlson LA, Ericsson M. Quantitative and qualitative serum lipoprotein analysis. Part 1 : Studies in healthy men and women. Atherosclerosis, 1975, 21, 417-433. Dahlen GH, Guyton JR, Arrar M, Farmer JA, Kautz JA, Gotto AM. Association of level of lipoprotein Lp(a), plasma lipids, and other lipoproteins with coronary artery disease documented by angiography. Circulation, 1986, 74, 758-65. Fredrickson DS and Lees RS. A system for phenotyping hyperlipemias. Circulation, 1965, 31, 321-327. Fruchart JC, Clavey V, Vanhoutte G. Méthodes d’exploration biochimique des hyperlipoprotéinémies. Path. Biol., 1983, 31, 4, 235-245. Fruchart JC, Puchois P. Méthodes d’analyses des lipoprotéines. Ann. Biol. Clin., 1986, 44, 551-555. Kostner GM, Avogaro P, Cazzolato G, Marth E, Bittolo-Bon G, Quinci GB. Lipoprotein Lp(a) and the risk for myocardial infarction. Atherosclerosis, 1981, 38, 51-61. Morisett JD, Guyton JR, Gaubatz JW, Gotto AM Jr. Lipoprotein Lp(a) : Structure, metabolism and epidemiology. In: Gotto AM Jr, ed. Plasma lipoproteins. Amsterdam: Elsevier Science Publishers, 1987, 129-52. Naito H. The association of serum lipids, lipoproteins, and apolipoproteins with coronary disease, assessed by coronary arteriography. Ann. Ny. Ac. Sc., 1984, 454, 230-238. Papadopoulos NM. Detection of lipoprotein abnormalities by a sensitive electrophoretic test system for the prevention of cardiovascular disease. International Angiology, 1985, vol 4, 2, 249-253. Schreiner PJ, Morrisett JD, Sharett AP, Patsh W, Tyroler HA, Wu K, Heiss G. Lipoprotein (a) as a risk factor for preclinical atherosclerosis. Arterioscler. Thromb., 1993, 13, 826-33. Schreiver H, Assmann G, Sandkamp M, Schulte H. The relationship of lipoprotein (a) (Lp(a) ) to risk factors for coronary disease. J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 1984, 22, 591-6. Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité. Impact-Internat, 1986 ; Sept : 93-97.

- 104 -


SCHÉMAS / FIGURES

Figure 1

Figure 2

1 2 3 4 5 6 7

Figure 3

Figure 4

1 2 3 4 5 6 7

1 2 3 4 5 6 7 7 5 6 3 4 1 2

- 105 -

HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20

Recommend Documents