Homeopátiás szerek daganatsejtekre kifejtett hatásának in vitro vizsgálata Dr. Puskár Zita
Referált szakmai folyóiratokban megjelent közlemények (2009(2009-2015) Sulphur alters NFκB-p300 cross-talk in favour of p53-p300 to induce apoptosis in non-small cell lung carcinoma. Saha S, Bhattacharjee P, Guha D, Kajal K, Khan P, Chakraborty S, Mukherjee S, Paul S,Manchanda R, Khurana A, Nayak D, Chakrabarty R, Sa G, Das T, (2015) Int J Oncol (IF:3,03). Aug;47(2):573-582
Calcarea carbonica induces in apoptosis in cancer cells in p53 dependent manner via an immuno-modulatory circuit S Saha, DS Hossain, S Mukherjee , S Mohanty, M Mazumdar, S Mukherjee, UK Ghosh, C Nayek, C Raveendar, A Khurana, R Chakrabarty, G Sa and T Das, 2013 BMC Complementary and Alternative Medicine (IF: 1, 877), 13:230
Cytotoxic effects of ultra-diluted remedies on brest cancer cells Frenkel M, Mishra BM, Sen S, Yang P, Pawlus A, Vence L, Leblanc A, Cohen L, Banerji P, Banerji P, (2010) Int J Oncol (IF:2,399). Feb;36(2):395-403
Stimulation of lymphocyte anti-melanoma activity by co-cultured macrophages activated by complex homeopathic medication FSF Guimaraes, APR Abud, SO Oliveira, CC Oliveira, B Cesar, LF Andrade, L Donatti, J Gabardo, ES Trindade and DF Buchi ,(2009) BMC Cancer (IF: 2,736), 9: 293
Lympocyták anti-melanoma aktivitásának stimulációja komplex homeopátiás szer által aktivált makrofágokkal
Guimaraes és munkatársai: BMC Cancer 2009, 9:293 IF: 2, 736
Naív (veleszületett) és adaptív (szerzett) immunrendszer Naív Sejtek → sejtes immunválasz Monocyta - makrofág Granulocyták Dendritikus sejt Hízósejt Solubilis molekulák → humorális immunválasz Komplement fehérjék (glikoproteinek, enzimek, receptorok)
Adaptív Sejtek → sejtes immunválasz B lymphocyta T lymphocyta Solubilis molekulák → humorális immunválasz Antitestek
T-sejt receptor (TCR) és T T--sejt aktiváció TCR: Ig szuperfamiliába tartozó gének kódolják. A fehérje természetű antigénekből származó peptidfragmentumok lineáris szekvenciáit csak az APC-k MHC molekuláihoz kötötten ismerik fel !!!
A TCR-MHC-antigén kötődés még nem elég a T-sejt aktiválódásához. Kostimulációs molekulák is szükségesek!
B vagy T?
Elnevezések CD (Clusters of Differentiation) – sejtfelszíni molekulák jelölése, amelyek kimutatásával a sejt típusa, differenciáltsági, aktiváltsági állapota meghatározható -Sejtvonal markerek (pl. hemopoietikus őssejt CD34+, Thelper sejtvonal - CD4+, T-citotoxikus sejtvonal-CD8+ -Érési markerek (Tymociták a thymusban CD1+, érett T lymphocyta ezt nem fejezi ki) -Aktivációs markerek (stimuláció hatására megjelenő molekulák pl. CD25)
Citokinek: sejtek közötti kapcsolatokat kialakító, kis molekulatömegű glikoproteinek, amelyek citokin receptorokhoz kötődve fejtik ki hatásukat. Lymphokin-lymphoid sejt által termelt citokin. Funkció: Az immunválasz szabályozása, a sejtek aktiválása, proliferációjukra és /vagy differenciációjukra kifejtett hatásuk révén. (Pl. Interleukin család tagjai IL)
T-sejt osztályok
Citokin (lymphokin) termelés – makrofágok aktiválása, gyulladási MHC-II-exogén antigén és citotoxikus folyamatok szabályozása, intracelluláris Th1 kórokozók elleni védelem, sejtes immunválasz CD4+
Th2
Treg
CD8+
Tcit
MHC-I-endogén antigén
Citokin (lymphokin) termelés – B sejt aktiválás, plazmasejtté differenciálás, extracelluláris kórokozók ellen, humorális immunválasz Citokin (lymphokin) termelés – immunrendszer gátlása, szabályozás Vírussal, intracelluláris kórokozóval fertőzött, vagy tumorossá fajult sejtek elpusztítása (perforin, granuláris enzimek.)
Th: helper (segítő) T-sejt Treg: regulátor T-sejt Tcit : citotoxikus T-sejt
Metodika Komplex Homeopátiás Szer (CHM):
Sejtkultúrák:
Calcarea Carbonica Aconitum napellus Arsenicum album Asa foetida Conium maculatum Ipecacuanha Phosphorus Rhus toxicodendron Silicea Sulphur Thuya occidentalis
Makrofágok (hasüregből) Lymphocyták (mesenterialis nyirokcsomókból) B16F10 egér melanoma sejtvonal
Kísérleti összeállítás B16F10 : csak melanoma sejtek B16F10/Ly: melanoma sejtek lymphocytákkal együtt tenyésztve B16F10/Mf: melanoma sejtek makrofágokkal tenyésztve B16F10/Ly-Mf: melanoma sejtek, amelyek olyan lymphocytákkal voltak együtt tenyésztve, melyek előzőleg makrofágokkal voltak egy kultúrában Mf/Ly: makrofág és lymphocyta együtt tenyésztve Mf/Ly*: makrofág és lymphocyta együtt tenyésztve de sejtkapcsolat nélkül Minden csoportból volt egy kezeletlen és egy CHM-mel 24 órán át kezelt tenyészet Vizsgálatok: Fénymikroszkópia, scanning elektron mikroszkópia, Fluoreszcens mikroszkópia, Áramlási cytometria, Apoptózis detekció (TUNEL módszer)
Nem kezelt
CHM kezelt
Eredmények 1A-B: A kezelt és kezeletlen melanoma sejtek között nincs különbség
1C-D:MF/LY: Kezelt makrofágok és lymphocyták interakciója megnő
1E-F: B16F10/Ly: Kisebbek a melanoma sejtek, diszkrét válasz
1G-H: B16F10/Mf :Kisebbek a melanoma sejtek, diszkrét válasz
1I-J:B16F10/Ly-Mf: A melenoma sejtek morfológiája és sűrűsége drasztikusan megváltozott a kezelés hatására
Nem kezelt
CHM kezelt 3A-B: Kezelt és kezeletlen, nagy, nyúlványos melanoma sejtek
3C-D:MF/LY Interakció a két sejttípus között, amelyet a kezelés tovább fokozott
3 E-F B16F10/Ly-Mf: Lecsökken a melanoma sejtek száma. A kezelés hatására fokozódik a lymphocyták aktiválódása és a melanoma sejtek szinte el is tűnnek
3 G-H: Megjelennek az apoptózis és a sejt lysis jellemzői
Lymphocyta populációk százalékos összetétele Markers CD3CD4 – Th lymphocytes CD3CD8 – Tc lymphocytes CD19 – B lymphocytes PanNK – NK lymphocytes Unstained cells
% 44.85 10.65 9.86 3.95 30.69
Lymphocyta aktiváció (CD25) és életképesség (7 AAD) Ly/Mf* Apoptózis vizsgálat TUNEL metodikával
B16F10/Ly-Mf
Összefoglalás Az alkalmazott CHM nem volt sem toxikus, sem mutagén A lymphocyták makrofágok általi aktivációját fokozta a kezelés még akkor is ha nem volt közöttük fizikai kapcsolat. A lymphocyták tumor ellenes hatása részben apoptózist, részben sejt lysist indukált a tumorsejtekben. A terápia jó kiegészítője lehet a hagyományos terápiáknak.
Ultrahíg oldatok mellrák sejtekre kifejtett cytotoxikus hatása
Frenkel és munkatársai: International Journal of Oncology (2010), 36:395-403 IF: 2, 736
Banerji protokoll Carcinosin C30 Phytoacca decandra C200 Conium maculatum C3 Thuya occidentalis C30
US National Cancer Institute (1999) elégséges bizonyítékot talált a protokoll hatékonyságára és további kutatások szükségességére hívta fel a figyelmet
A Banerji Homeopathic Research foundation adatai szerint 21 888 malignus tumorral diagnosztizált betegest kezeltek kizárólagosan a protokoll szterint. 941 betegnek mellrákja volt. A malignus tumorok 19%-ában a tumor teljesen eltűnt, 21% stabilizálódott vagy javult a kezelés hatására és 2-10 éven át követték a történetüket.
Módszerek Sejtvonalak: humán emlő adenocarcinoma sejtvonalak MCF-7 (p53 gén, Ösztrogén R+ és Progeszteron R+) MDA-MB-231 (mutáns p53 gén, Ösztrogén R- és Progeszteron R-) normál humán emlő mirigyhám sejt (HMLE) Sejt életképesség vizsgálata methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromid (MTT) teszt Cytológia és fluorescens in situ hybridizáció (FISH) Flow cytometria sejtciklus eloszlásra és subdiploid populációs teszt Apoptózis detektálás (Annexin jelölés és áramlási cytometria) Western-blot
Eredmények MCF-7
MCF-7+carcinosin
MDA-231
MDA-231 + carcinosin
Telomerikus DNS in situ hybridizációs képe
A szerek citotoxikus hatása leginkább a daganatsejteken érvényesült. A sejtciklust szabályozó fehérjék expressziójának megváltoztatásával a sejtciklus késleltetését, vagy leállítását eredményezték és apoptózist indukáltak.
Kritika Az oldószer 87%-os alkohol ,önmagában is cytotoxikusnak mutatkozott mindhárom sejttípuson! A kísérleteket nem ismételték meg háromszor. Nincs rendes kvantifikáció és statisztika!
„A giant leap in logic from a piece of bad science”
Következtetés: A nem korrekt módon elvégzett tudományos vizsgálatok eredményei sokkal többet ártanak, mint használnak a homeopátiának
